JPH1146779A - 哺乳類Ｔ細胞抗原特異的レセプターβサブユニットをコードする核酸 - Google Patents
哺乳類Ｔ細胞抗原特異的レセプターβサブユニットをコードする核酸Info
- Publication number
- JPH1146779A JPH1146779A JP10053440A JP5344098A JPH1146779A JP H1146779 A JPH1146779 A JP H1146779A JP 10053440 A JP10053440 A JP 10053440A JP 5344098 A JP5344098 A JP 5344098A JP H1146779 A JPH1146779 A JP H1146779A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- cell
- subunit
- sequence
- antigen receptor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/82—Translation products from oncogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ネズミ以外の哺乳類Ｔ細胞βサブユニットを
コードする核酸を提供する。 【解決手段】 Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットを
コードする核酸を単離し、クローニングして配列を決定
する。
コードする核酸を提供する。 【解決手段】 Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットを
コードする核酸を単離し、クローニングして配列を決定
する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】造血系は非常に複雑であり、この
ことは宿主の維持及び生存において血液細胞が演ずる中
枢的役割の観点から驚くべきことではない。非常に重要
な１つの観点は、宿主が種々の病原体に対して自らを保
護する態様である。２群の細胞すなわちＢ−細胞及びＴ
−細胞が、宿主の保護において顕著な役割を演ずる。
ことは宿主の維持及び生存において血液細胞が演ずる中
枢的役割の観点から驚くべきことではない。非常に重要
な１つの観点は、宿主が種々の病原体に対して自らを保
護する態様である。２群の細胞すなわちＢ−細胞及びＴ
−細胞が、宿主の保護において顕著な役割を演ずる。
【０００２】Ｂ−細胞がいかにして非常に多様な免疫グ
ロブリンを生産することができるかというミステリーは
実質的な程度に説明されている。Ｂ−細胞が成熟するに
従って、ジャームライン（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）ＤＮＡが
組み替え（ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）られて種々の
エクソンが連結され、これによって可変領域が形成さ
れ、そしてこの領域が異る不変領域に連結されることが
今や知られている。ＤＮＡが組み替えられそしてこれに
続いて転写物がスプライスされて特異的な免疫グロブリ
ンをコードするメッセンジャーＲＮＡを生成する機構
は、分子生物学の発達によってもたらされる手段の可能
性を示す刺激的な冒険であった。
ロブリンを生産することができるかというミステリーは
実質的な程度に説明されている。Ｂ−細胞が成熟するに
従って、ジャームライン（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）ＤＮＡが
組み替え（ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）られて種々の
エクソンが連結され、これによって可変領域が形成さ
れ、そしてこの領域が異る不変領域に連結されることが
今や知られている。ＤＮＡが組み替えられそしてこれに
続いて転写物がスプライスされて特異的な免疫グロブリ
ンをコードするメッセンジャーＲＮＡを生成する機構
は、分子生物学の発達によってもたらされる手段の可能
性を示す刺激的な冒険であった。
【０００３】宿主の免疫系にとって重要な他の群はＴ−
細胞である。この細胞は、類似する範囲の抗原特異性を
有するが免疫グロブリンを分泌しない点においてＢ−細
胞と異る。特に、Ｂ−細胞の増殖を刺激することに関与
するヘルパーＴ−細胞は、自己−主要組織適合性決定基
をも同時に認識しなければならないと言う追加の要求を
伴って、Ｂ−細胞の特異性に類似する特異性を有する。
細胞である。この細胞は、類似する範囲の抗原特異性を
有するが免疫グロブリンを分泌しない点においてＢ−細
胞と異る。特に、Ｂ−細胞の増殖を刺激することに関与
するヘルパーＴ−細胞は、自己−主要組織適合性決定基
をも同時に認識しなければならないと言う追加の要求を
伴って、Ｂ−細胞の特異性に類似する特異性を有する。
【０００４】Ｔ−細胞の特異性は、広範囲の状況におい
て適用を見ることができる。外来性レセプター（受容
体）部位を導入することによってヘルパーＴ−細胞を改
変することができれば、外来性抗原に対する宿主の応答
を変化せしめることができるであろう。さらに、多くの
状況において、細胞がヘルパーＴ−細胞であるか他のタ
イプの細胞であるかを決定することに興味あることであ
る。さらに、宿主におけるモノクローン性を決定する機
会を有することは、Ｔ−細胞白血病の診断に有用であ
る。
て適用を見ることができる。外来性レセプター（受容
体）部位を導入することによってヘルパーＴ−細胞を改
変することができれば、外来性抗原に対する宿主の応答
を変化せしめることができるであろう。さらに、多くの
状況において、細胞がヘルパーＴ−細胞であるか他のタ
イプの細胞であるかを決定することに興味あることであ
る。さらに、宿主におけるモノクローン性を決定する機
会を有することは、Ｔ−細胞白血病の診断に有用であ
る。
【０００５】さらに、Ｔ−細胞抗原特異的レセプターの
部分をコードするＤＮＡ配列を有することは、レセプタ
ーとして機能することができる新規な蛋白質を生産する
ために天然Ｔ−細胞配列と外来性配列との組合せを含む
造成を可能にするであろう。さらに、合成ペプチドを使
用することにより、又は発現ベクターにおいて蛋白質を
生産することによって、蛋白質の特異的部分に対する抗
血清又はモノクローナル抗体を生成せしめることができ
るであろう。ＤＮＡ配列とのハイブリダイゼーションを
用いることにより、Ｔ−細胞のサブセットを、遺伝的差
異及び欠陥と共に決定することができよう。
部分をコードするＤＮＡ配列を有することは、レセプタ
ーとして機能することができる新規な蛋白質を生産する
ために天然Ｔ−細胞配列と外来性配列との組合せを含む
造成を可能にするであろう。さらに、合成ペプチドを使
用することにより、又は発現ベクターにおいて蛋白質を
生産することによって、蛋白質の特異的部分に対する抗
血清又はモノクローナル抗体を生成せしめることができ
るであろう。ＤＮＡ配列とのハイブリダイゼーションを
用いることにより、Ｔ−細胞のサブセットを、遺伝的差
異及び欠陥と共に決定することができよう。
【０００６】
【従来の技術】ＨＬＡ−ＤＣの第２ドメインが免疫グロ
ブリンと相同であることが示されている。アウフライ
等、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ス
テイツ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（１９８２）７９，６３３７−６３４１。免疫グロ
ブリン可変領域中の鎖内ジスルフィド結合の近傍の配列
がカバット等、シーケンシス・オブ・イムノロジカル・
インテレスト（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）、米国、ヘルス
・アンド・ヒューマン・サービシス（Ｈｅａｌｔｈ ａ
ｎｄ ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ワシントン
Ｄ．Ｃ．（１９８３）に検討されている。
ブリンと相同であることが示されている。アウフライ
等、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ス
テイツ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（１９８２）７９，６３３７−６３４１。免疫グロ
ブリン可変領域中の鎖内ジスルフィド結合の近傍の配列
がカバット等、シーケンシス・オブ・イムノロジカル・
インテレスト（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）、米国、ヘルス
・アンド・ヒューマン・サービシス（Ｈｅａｌｔｈ ａ
ｎｄ ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ワシントン
Ｄ．Ｃ．（１９８３）に検討されている。
【０００７】Ｂ−細胞抗−イデオタイプ抗血清とＴ−細
胞との間の交差反応性が、アイヒマン及びラゼウスキ
ー、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー
（Ｅｕｒ．ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）（１９７５）５：６
６１−６６６；ビンツ及びウイグツエル、ジャーナル・
オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．）１４２：１９７−２１１；及びアウグスチン
等、レギュラートリー・Ｔリンポサイト（Ｒｅｇｕｌａ
ｔｏｒｙ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、ペルニス及び
フォゲル編、１７１−１８４、アカデミック・プレス、
ニューヨーク、１９．８０に報告されている。Ｔ−細胞
特異的遺伝子と免疫グロブリンコード遺伝子との間のヌ
クレオチド配列の類似性の欠落がクロネンベルグ等、ジ
ャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）、前掲、（１９８３）１５
８：２１０−２２７により報告されている。
胞との間の交差反応性が、アイヒマン及びラゼウスキ
ー、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー
（Ｅｕｒ．ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）（１９７５）５：６
６１−６６６；ビンツ及びウイグツエル、ジャーナル・
オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．
Ｍｅｄ．）１４２：１９７−２１１；及びアウグスチン
等、レギュラートリー・Ｔリンポサイト（Ｒｅｇｕｌａ
ｔｏｒｙ Ｔ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、ペルニス及び
フォゲル編、１７１−１８４、アカデミック・プレス、
ニューヨーク、１９．８０に報告されている。Ｔ−細胞
特異的遺伝子と免疫グロブリンコード遺伝子との間のヌ
クレオチド配列の類似性の欠落がクロネンベルグ等、ジ
ャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）、前掲、（１９８３）１５
８：２１０−２２７により報告されている。
【０００８】ネズミＴ−細胞特異的蛋白質がカプラー
等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）３４，７２７−７３
７、及びマクインタイレ及びアリソン、前掲（１９８
３）３４，７３９−７４６に報告されている。アリソン
等、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．）（１９８２）１２９：２２９３−２３００；ハ
スキンス等、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）（１９８３）１５
７：１１４９−１１６９；ミュール等、ネイチュアー
（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８３）３０３：８０８−８１
０；及びサムエルソン等、プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・
ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９８
３）８０１：６９７２−６９７６は、３７〜５０ｋｄの
サイズの２つの異る糖蛋白質から成るジスルフィド結合
したヘテロダイマーのＴ−細胞からの免疫沈澱を報告し
ている。
等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）３４，７２７−７３
７、及びマクインタイレ及びアリソン、前掲（１９８
３）３４，７３９−７４６に報告されている。アリソン
等、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．）（１９８２）１２９：２２９３−２３００；ハ
スキンス等、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・
メディシン（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．）（１９８３）１５
７：１１４９−１１６９；ミュール等、ネイチュアー
（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８３）３０３：８０８−８１
０；及びサムエルソン等、プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・
ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９８
３）８０１：６９７２−６９７６は、３７〜５０ｋｄの
サイズの２つの異る糖蛋白質から成るジスルフィド結合
したヘテロダイマーのＴ−細胞からの免疫沈澱を報告し
ている。
【０００９】マクインタイル及びアリソン、前掲（１９
８３）；及びアクト等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）
３４：７１７−７２６は、ペプチドマップ分析により、
前記ヘテロダイマーが可変部分及び不変部分を有するら
しいことを報告している。ヘーベルーカッツ等、ジャー
ナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．）（１９８２）１５５：１０８６−１０
９９；及びヘドリック等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８
２）３０：１４１−１５２は、ＭＨＣ−制限Ｔ−ヘルパ
ーハイブリドーマの生成を報告している。この開示を引
用によりこの明細書に組み入れる。
８３）；及びアクト等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）
３４：７１７−７２６は、ペプチドマップ分析により、
前記ヘテロダイマーが可変部分及び不変部分を有するら
しいことを報告している。ヘーベルーカッツ等、ジャー
ナル・オブ・エクスペリメンタル・メディシン（Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．）（１９８２）１５５：１０８６−１０
９９；及びヘドリック等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８
２）３０：１４１−１５２は、ＭＨＣ−制限Ｔ−ヘルパ
ーハイブリドーマの生成を報告している。この開示を引
用によりこの明細書に組み入れる。
【００１０】デービス等、ＢアンドＴセル・チュモアス
（Ｂ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｕｍｏｒｓ）、ＵＣＬ
ＡシンポジウムＶｏｌ ２４（ビッテラ及びフオックス
編）２１５−２２０、アカデミックプレス、ニューヨー
ク、１９８２は、Ｔ及びＢリンパ球が、それらの遺伝子
発現の非常に小部分により異ることを報告している。サ
イトー、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８４）３
０９：７５７−７６２は、細胞毒性Ｔ−細胞ＤＮＡ中に
組み替えられておりそして可変、不変及び連結領域に相
同な要素を有するＴ−細胞特異的ｃＤＮＡクローンを報
告している。シゥ等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８４）３
７：３９３−４０１及びカバラー（Ｋａｖａｌｅｒ）
等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８４）３１
０：４２１−４２３は、β鎖中の多様な要素の存在を報
告している。Ｔ−細胞レセプター分子のα−鎖はβ−鎖
と同様に多様であることが報告されている。〔カプラー
等セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）３５：２９５−３０
２〕。
（Ｂ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｕｍｏｒｓ）、ＵＣＬ
ＡシンポジウムＶｏｌ ２４（ビッテラ及びフオックス
編）２１５−２２０、アカデミックプレス、ニューヨー
ク、１９８２は、Ｔ及びＢリンパ球が、それらの遺伝子
発現の非常に小部分により異ることを報告している。サ
イトー、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８４）３
０９：７５７−７６２は、細胞毒性Ｔ−細胞ＤＮＡ中に
組み替えられておりそして可変、不変及び連結領域に相
同な要素を有するＴ−細胞特異的ｃＤＮＡクローンを報
告している。シゥ等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９８４）３
７：３９３−４０１及びカバラー（Ｋａｖａｌｅｒ）
等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９８４）３１
０：４２１−４２３は、β鎖中の多様な要素の存在を報
告している。Ｔ−細胞レセプター分子のα−鎖はβ−鎖
と同様に多様であることが報告されている。〔カプラー
等セル（Ｃｅｌｌ）（１９８３）３５：２９５−３０
２〕。
【００１１】
【発明の概要】希少なメッセンジャーＲＮＡを単離する
方法が提供される。この方法により、Ｔ細胞中の抗原特
異的レセプターをコードするＤＮＡ配列、及び他のＴ細
胞特異的遺伝子生成物が得られる。このＤＮＡは色々な
やり方で用いることができる。例えば、ヌクレオチドプ
ローブとして用いる、外来性ＤＮＡ配列と組合わせて抗
体と同様に使用することができる新規なＴ細胞レセプタ
ーを形成する、あるいは、ハイブリド蛋白質が発現され
膜に輸送されることができるように染色体外エレメント
または宿主ゲノム内組込を与える造成物を供給すること
ができる。
方法が提供される。この方法により、Ｔ細胞中の抗原特
異的レセプターをコードするＤＮＡ配列、及び他のＴ細
胞特異的遺伝子生成物が得られる。このＤＮＡは色々な
やり方で用いることができる。例えば、ヌクレオチドプ
ローブとして用いる、外来性ＤＮＡ配列と組合わせて抗
体と同様に使用することができる新規なＴ細胞レセプタ
ーを形成する、あるいは、ハイブリド蛋白質が発現され
膜に輸送されることができるように染色体外エレメント
または宿主ゲノム内組込を与える造成物を供給すること
ができる。
【００１２】
【具体的な態様の記載】この発明に例えば、抗原特異的
Ｔ−細胞レセプターもしくはその断片のための全体的も
しくは部分的コード配列、特にジャームライン及び組み
替えられたＤＮＡ中の１又は複数のエクソン上に見出さ
れる機能的領域を含む新規なＤＮＡ配列、又は成熟メッ
センジャーＲＮＡからの全体的もしくは部分的ｃＤＮＡ
が提供される。
Ｔ−細胞レセプターもしくはその断片のための全体的も
しくは部分的コード配列、特にジャームライン及び組み
替えられたＤＮＡ中の１又は複数のエクソン上に見出さ
れる機能的領域を含む新規なＤＮＡ配列、又は成熟メッ
センジャーＲＮＡからの全体的もしくは部分的ｃＤＮＡ
が提供される。
【００１３】哺乳動物Ｔ細胞レセプターは、α−及びβ
−サブユニットと称する約４０〜５０ｋｄ（キロダルト
ン）の２つの異る糖蛋白質から成りそしてジスルフィド
連結されている８０〜９０ｋｄのヘテロダイマーのよう
である。これらの２つの糖蛋白質は、ペプチドマップ分
析により、可変及び不変領域即ちドメインを有する。こ
のヘテロダイマーの糖蛋白質をコードするＤＮＡ配列
は、免疫グロブリン配列と有意な相同性を有する配列、
及び独立したＪ−様要素の一揃い（ａｓｓｏｒｔｍｅｎ
ｔ）により立証されるように免疫グロブリンと同様に可
変（variable）、連結（joining）及び不変（constan
t）領域に分けられる。各サブユニットは免疫グロブリ
ンのヘビー鎖に匹敵する多様性（diversity）（Ｄ）領
域を有する様である。
−サブユニットと称する約４０〜５０ｋｄ（キロダルト
ン）の２つの異る糖蛋白質から成りそしてジスルフィド
連結されている８０〜９０ｋｄのヘテロダイマーのよう
である。これらの２つの糖蛋白質は、ペプチドマップ分
析により、可変及び不変領域即ちドメインを有する。こ
のヘテロダイマーの糖蛋白質をコードするＤＮＡ配列
は、免疫グロブリン配列と有意な相同性を有する配列、
及び独立したＪ−様要素の一揃い（ａｓｓｏｒｔｍｅｎ
ｔ）により立証されるように免疫グロブリンと同様に可
変（variable）、連結（joining）及び不変（constan
t）領域に分けられる。各サブユニットは免疫グロブリ
ンのヘビー鎖に匹敵する多様性（diversity）（Ｄ）領
域を有する様である。
【００１４】α−及びβ−サブユニットは、それら自身
の間で、また他のＴ細胞膜蛋白質及び免疫グロブリン又
はＢ細胞レセプター蛋白質との間で多くの類似性を有す
る。ほとんどの場合、全体としての相同性は低く、不変
領域においてはアミノ酸配列又はヌクレオチド配列の類
似性はほとんど存在しない。（リーダー配列のメチオニ
ンをアミノ酸配列の１位とする。）可変領域中のシステ
イン間隔はおよそ６５〜７０アミノ酸（αでは６５；β
では６９；Ｉｇλ又はκでは６５）である。
の間で、また他のＴ細胞膜蛋白質及び免疫グロブリン又
はＢ細胞レセプター蛋白質との間で多くの類似性を有す
る。ほとんどの場合、全体としての相同性は低く、不変
領域においてはアミノ酸配列又はヌクレオチド配列の類
似性はほとんど存在しない。（リーダー配列のメチオニ
ンをアミノ酸配列の１位とする。）可変領域中のシステ
イン間隔はおよそ６５〜７０アミノ酸（αでは６５；β
では６９；Ｉｇλ又はκでは６５）である。
【００１５】さらに、α−鎖の可変領域中残基５５位付
近における配列“ＷＹＲＱ”については、β−鎖中に相
同の“ＷＹＫＱ”、及び免疫グロブリン中の匹敵する位
置に類似の配列が見出される。可変領域において、およ
そ１００位−１１５位の残基の領域中に１又は２個のア
ミノ酸の相違を伴って配列“ＤＳＡ−Ｙ−ＣＡＶ”が見
出される。α−鎖のＪ領域は１６残基中７残基がβ−鎖
と同一であり、そしてネズミのヘビー及びライト鎖の共
通配列との有意な相同性を有し、最も高度に保存されて
いる。
近における配列“ＷＹＲＱ”については、β−鎖中に相
同の“ＷＹＫＱ”、及び免疫グロブリン中の匹敵する位
置に類似の配列が見出される。可変領域において、およ
そ１００位−１１５位の残基の領域中に１又は２個のア
ミノ酸の相違を伴って配列“ＤＳＡ−Ｙ−ＣＡＶ”が見
出される。α−鎖のＪ領域は１６残基中７残基がβ−鎖
と同一であり、そしてネズミのヘビー及びライト鎖の共
通配列との有意な相同性を有し、最も高度に保存されて
いる。
【００１６】さらに、Ｔ細胞レセプター配列に特徴的な
のは、トランスメンブラン領域中に塩基性アミノ酸を有
する配列“ＩＬＬＸＫ”（ここでＸはＬ又はＧである）
である。Ｄ即ち多様性領域を裏付けるのは、残基１１５
位−１２０位付近の“ＳＧＮ”配列の５′側に存在する
ヌクレオチド配列“Ｇ5 ”である。β−鎖推定上のＤ領
域１４中の７において、３′−側に“Ｇ3-7 ”の列が見
出され、これは免疫グロブリンヘビー鎖Ｄ領域中に相同
性を見出す。
のは、トランスメンブラン領域中に塩基性アミノ酸を有
する配列“ＩＬＬＸＫ”（ここでＸはＬ又はＧである）
である。Ｄ即ち多様性領域を裏付けるのは、残基１１５
位−１２０位付近の“ＳＧＮ”配列の５′側に存在する
ヌクレオチド配列“Ｇ5 ”である。β−鎖推定上のＤ領
域１４中の７において、３′−側に“Ｇ3-7 ”の列が見
出され、これは免疫グロブリンヘビー鎖Ｄ領域中に相同
性を見出す。
【００１７】α−及びβ−鎖はジャームラインＤＮＡ中
でコードされ、これは組み替えにかけられて転写物がも
たらされ、これがさらにプロセスされる。後記の目的の
ためにゲノム性ＤＮＡ又は成熟転写物からのｃＤＮＡを
使用することができる。各鎖は３〜５個の、通常４〜５
個のＮ−グリコシル化部位を有し、それらの幾つか又は
すべてが用いられ得る。
でコードされ、これは組み替えにかけられて転写物がも
たらされ、これがさらにプロセスされる。後記の目的の
ためにゲノム性ＤＮＡ又は成熟転写物からのｃＤＮＡを
使用することができる。各鎖は３〜５個の、通常４〜５
個のＮ−グリコシル化部位を有し、それらの幾つか又は
すべてが用いられ得る。
【００１８】ヘテロダイマーの２本の鎖は異り、そして
異る遺伝子座に由来すると考えられる。β−鎖及びα−
鎖の配列がそれぞれ図２及び３、並びに図４及び５に示
される。これらの鎖は、免疫グロブリンと同様に特定の
エクソンと関連する領域に分けられる。一次領域はリー
ダー領域、可変領域（Ｖ）、多様領域（Ｄ）（これはＶ
の部分であることができる）、連結領域（Ｊ）、不変領
域（Ｃ）、トランスメンブラン領域（ＴＭ）、及び細胞
質領域（Ｃｙ）である。
異る遺伝子座に由来すると考えられる。β−鎖及びα−
鎖の配列がそれぞれ図２及び３、並びに図４及び５に示
される。これらの鎖は、免疫グロブリンと同様に特定の
エクソンと関連する領域に分けられる。一次領域はリー
ダー領域、可変領域（Ｖ）、多様領域（Ｄ）（これはＶ
の部分であることができる）、連結領域（Ｊ）、不変領
域（Ｃ）、トランスメンブラン領域（ＴＭ）、及び細胞
質領域（Ｃｙ）である。
【００１９】グリコシル化を伴わないα−鎖は約２５〜
３０ｋｄ（キロダルトン）であり、他方β−鎖はおよそ
同じか又はこれより大きく、約２５〜３５ｋｄであろ
う。グリコシル化を伴えば、サブユニットはそれぞれ約
３５〜５０ｋｄであり、８０〜９０ｋｄのスルヒドリン
連結されたヘテロダイマーをもたらすであろう。各サブ
ユニットについて、イントロンを含むヘルパーＴ−細胞
中組み替えられたＤＮＡは一般に約６〜８ｋｂｐであ
り、個々のエクソンは実質的に一層小さく、そしてドメ
イン＋含まれるなんらかのフランキング配列のためのｃ
ＤＮＡ配列のサイズにおよそ等しいであろう。
３０ｋｄ（キロダルトン）であり、他方β−鎖はおよそ
同じか又はこれより大きく、約２５〜３５ｋｄであろ
う。グリコシル化を伴えば、サブユニットはそれぞれ約
３５〜５０ｋｄであり、８０〜９０ｋｄのスルヒドリン
連結されたヘテロダイマーをもたらすであろう。各サブ
ユニットについて、イントロンを含むヘルパーＴ−細胞
中組み替えられたＤＮＡは一般に約６〜８ｋｂｐであ
り、個々のエクソンは実質的に一層小さく、そしてドメ
イン＋含まれるなんらかのフランキング配列のためのｃ
ＤＮＡ配列のサイズにおよそ等しいであろう。
【００２０】不変領域（トランスメンブラン及び細胞質
領域を含む）をコードするＤＮＡ配列は一般に約４００
〜６００ｎｔ（ヌクレオチド）＋約３００ｎｔの３′非
翻訳領域である。これらの配列は、約１００〜２００ｎ
ｔ、通常約１００〜１５０ｎｔ離れて配置されるシステ
イン間の分子内ジスルフィド連結をコードするコドンに
より特徴付けられる。
領域を含む）をコードするＤＮＡ配列は一般に約４００
〜６００ｎｔ（ヌクレオチド）＋約３００ｎｔの３′非
翻訳領域である。これらの配列は、約１００〜２００ｎ
ｔ、通常約１００〜１５０ｎｔ離れて配置されるシステ
イン間の分子内ジスルフィド連結をコードするコドンに
より特徴付けられる。
【００２１】主として疎水性アミノ酸を含みそして約４
５〜１０５ｎｔを有する可能性あるトランスメンブラン
配列が不変領域と関連する。この配列は不変領域の３′
−端を定義し、そして細胞の細胞質に伸びるアミノ酸を
コードする約５〜１５コドン（１５〜４５ｎｔ）を含有
するであろう。機能的意義を有すると考えられる次の領
域又はドメインは免疫グロブリンのＪ領域に類似する領
域である。免疫グロブリンについて知られているよう
に、与えられた１個のＣ領域に隣接して約１〜６個、一
層一般的には４〜５個にわたる複数のＪ領域が存在す
る。Ｊ領域は約１５〜２０アミノ酸をコードし、ヘビー
鎖Ｊ領域が典型的には１７アミノ酸であり、他方ライト
鎖Ｊ領域が典型的には１３アミノ酸である点において、
１６アミノ酸を有するβ−鎖は免疫グロブリンヘビー鎖
Ｊ領域と一層大きな類似性を有する。
５〜１０５ｎｔを有する可能性あるトランスメンブラン
配列が不変領域と関連する。この配列は不変領域の３′
−端を定義し、そして細胞の細胞質に伸びるアミノ酸を
コードする約５〜１５コドン（１５〜４５ｎｔ）を含有
するであろう。機能的意義を有すると考えられる次の領
域又はドメインは免疫グロブリンのＪ領域に類似する領
域である。免疫グロブリンについて知られているよう
に、与えられた１個のＣ領域に隣接して約１〜６個、一
層一般的には４〜５個にわたる複数のＪ領域が存在す
る。Ｊ領域は約１５〜２０アミノ酸をコードし、ヘビー
鎖Ｊ領域が典型的には１７アミノ酸であり、他方ライト
鎖Ｊ領域が典型的には１３アミノ酸である点において、
１６アミノ酸を有するβ−鎖は免疫グロブリンヘビー鎖
Ｊ領域と一層大きな類似性を有する。
【００２２】Ｊ領域は、他のＤＮＡ配列、例えば非−野
性配列に連結されるトランスメンブラン配列及び細胞質
配列を含む又は含まない不変領域と組み合わせて、Ｔ細
胞上の新規なハイブリド蛋白質を可能にするハイブリド
配列を形成するために使用することができる。（“非野
性”なる語は、野性タイプ又は天然配列以外の配列を意
図し、他方“外来性”なる語は、Ｔ細胞抗原レセプター
ＤＮＡ配列源と遺伝子情報を通常交換しない源からのも
のを意図する。） 表面に輸送されるハイブリド蛋白質を得るため、Ｔ細胞
抗原レセプターと共に存在する分泌リーダー配列が５′
−端として使用される。この配列は約１５〜２０アミノ
酸、一層普通には１８〜２４アミノ酸から成る。非−コ
ードフランキング領域を含むことができるＴ細胞抗原レ
セプターＤＮＡ配列の種々のドメインが非−野性タイプ
ＤＮＡにより分離される場合に前記の造成物を製造する
ことができる。
性配列に連結されるトランスメンブラン配列及び細胞質
配列を含む又は含まない不変領域と組み合わせて、Ｔ細
胞上の新規なハイブリド蛋白質を可能にするハイブリド
配列を形成するために使用することができる。（“非野
性”なる語は、野性タイプ又は天然配列以外の配列を意
図し、他方“外来性”なる語は、Ｔ細胞抗原レセプター
ＤＮＡ配列源と遺伝子情報を通常交換しない源からのも
のを意図する。） 表面に輸送されるハイブリド蛋白質を得るため、Ｔ細胞
抗原レセプターと共に存在する分泌リーダー配列が５′
−端として使用される。この配列は約１５〜２０アミノ
酸、一層普通には１８〜２４アミノ酸から成る。非−コ
ードフランキング領域を含むことができるＴ細胞抗原レ
セプターＤＮＡ配列の種々のドメインが非−野性タイプ
ＤＮＡにより分離される場合に前記の造成物を製造する
ことができる。
【００２３】Ｔ−細胞抗原レセプター、個々のサブユニ
ット、その断片、又は断片と非−野性ＤＮＡ（外来性Ｄ
ＮＡを含む）との組み合わせをクローン化しそして／又
は発現せしめるために新規なＤＮＡ造成物を使用してハ
イブリド蛋白質を製造することができる。これらの断片
は少なくとも約１５ｎｔ、一般に少なくとも約５０ｎｔ
である。これらの造成物はほとんどの場合、次の式： (RS)a - (M)b - (tis) - (eis) - (T-AqR) - (ets) -
(tts) を有するであろう。
ット、その断片、又は断片と非−野性ＤＮＡ（外来性Ｄ
ＮＡを含む）との組み合わせをクローン化しそして／又
は発現せしめるために新規なＤＮＡ造成物を使用してハ
イブリド蛋白質を製造することができる。これらの断片
は少なくとも約１５ｎｔ、一般に少なくとも約５０ｎｔ
である。これらの造成物はほとんどの場合、次の式： (RS)a - (M)b - (tis) - (eis) - (T-AqR) - (ets) -
(tts) を有するであろう。
【００２４】この式において、“ＲＳ”は、原核生物も
しくは真核生物、プラスミド、ファージ、又はウイルス
に由来することができる複製系を意図し、ここで、異る
宿主、例えば、単細胞微生物中での複製及び染色体外要
素としての維持を可能にする１又は複数の複製系が含ま
れることができ；複製系又はベクターの例にはラムダ、
シミアンウイルス、パピローマウイルス、アデノウイル
ス、酵母２ｍμプラスミド、ＣｏｌＥＩ，ｐＲＫ２９
０，ｐＢＲ３２２，ｐＵＣ６又はこれらに類似するもの
が含まれ、ここで複製系は完全であってもよく、又はヘ
ルパープラスミドともしくはゲノム中に存在する１もし
くは複数の遺伝子（例えばＣＯＳ細胞）と相互作用する
部分的複製系であってもよく；クローニングのために
は、単細胞宿主、例えば細菌、酵母等、特にＥ．コリ
（Ｅ．ｃｏｌｉ）により認識されるプラスミド又はウイ
ルス複製系のごとき複製系が使用され；“ａ”は０〜
３、普通１〜３の整数であり、染色体への組込みが望ま
しい場合には０であり（但し、組込みは天然の又は外来
性複製系が存在しても達成され得る）；“Ｍ”は、造成
物を含有する宿主細胞を選択するための手段を提供する
その転写及び翻訳制御シグナルと共にマーカーと称され
る構造遺伝子又はシストロンを意図し；マーカーは殺生
物耐性、例えば、抗生物質、例えばアンピシリン・クロ
ラムフェニコール、ネオマイシン、Ｇ４１８、又はこれ
らに類似するもの、毒素、重金属等に対する耐性；免疫
性；栄養要求性宿主に原栄養性を付与する補完、又はこ
れらに類似するものを包含し；“ｂ”は０〜３、一層普
通には０〜２、好ましくは１〜２の整数であり；“ｔｉ
ｓ”は転写開始を制御するための転写開始配列を意図
し、そして１又は複数のプロモーター（これには、それ
自体による又は他のプロモーター、例えばウイルスプロ
モーターもしくは外来性プロモーターと組み合わされた
天然プロモーターが含まれる）、該プロモーターに影響
を与える配列、例えばオペレーター、アクチベーター、
エンハンサー、キャッピング配列、ＴＡＴＡ及びＣＡＡ
Ｔ配列、あるいはこれらに類似するものを含み、ここ
で、これらの配列はそれらの機能を満たすことができる
ように造成物中に組織化されており；“ｅｉｓ”は、発
現を制御するための発現開始配列を意図し、そしてリボ
ゾーム結合部位、適当であれば、開始コドン、リボゾー
ム結合部位と開始コドンを分離するオリゴヌクレオチド
（ここで、これらの配列は発現に影響を与える）、及び
これらに類似するものを含み；“ＴＡｇＲ”は、抗原レ
セプター又はハイブリド蛋白質をコードするオープンリ
ーディングフレームをもたらすＴ細胞抗原レセプター配
列、又はＴ細胞抗原レセプターの断片を含むハイブリド
ＤＮＡ配列を意図し；“ｅｔｓ”は、１又は複数の終止
コドン及び適当であれば他の配列を含むことができる発
現停止配列を意図し；そして“ｔｔｓ”は、転写停止配
列を意図し、この配列は、通常は転写プロモーターと均
衡しておりそして１又は複数の終止コドンと組み合わさ
れた１又は複数のターミネーターであることができる転
写ターミネーター、ポリアデニル化シグナル配列、又は
これらに類似するものを含むことができる。
しくは真核生物、プラスミド、ファージ、又はウイルス
に由来することができる複製系を意図し、ここで、異る
宿主、例えば、単細胞微生物中での複製及び染色体外要
素としての維持を可能にする１又は複数の複製系が含ま
れることができ；複製系又はベクターの例にはラムダ、
シミアンウイルス、パピローマウイルス、アデノウイル
ス、酵母２ｍμプラスミド、ＣｏｌＥＩ，ｐＲＫ２９
０，ｐＢＲ３２２，ｐＵＣ６又はこれらに類似するもの
が含まれ、ここで複製系は完全であってもよく、又はヘ
ルパープラスミドともしくはゲノム中に存在する１もし
くは複数の遺伝子（例えばＣＯＳ細胞）と相互作用する
部分的複製系であってもよく；クローニングのために
は、単細胞宿主、例えば細菌、酵母等、特にＥ．コリ
（Ｅ．ｃｏｌｉ）により認識されるプラスミド又はウイ
ルス複製系のごとき複製系が使用され；“ａ”は０〜
３、普通１〜３の整数であり、染色体への組込みが望ま
しい場合には０であり（但し、組込みは天然の又は外来
性複製系が存在しても達成され得る）；“Ｍ”は、造成
物を含有する宿主細胞を選択するための手段を提供する
その転写及び翻訳制御シグナルと共にマーカーと称され
る構造遺伝子又はシストロンを意図し；マーカーは殺生
物耐性、例えば、抗生物質、例えばアンピシリン・クロ
ラムフェニコール、ネオマイシン、Ｇ４１８、又はこれ
らに類似するもの、毒素、重金属等に対する耐性；免疫
性；栄養要求性宿主に原栄養性を付与する補完、又はこ
れらに類似するものを包含し；“ｂ”は０〜３、一層普
通には０〜２、好ましくは１〜２の整数であり；“ｔｉ
ｓ”は転写開始を制御するための転写開始配列を意図
し、そして１又は複数のプロモーター（これには、それ
自体による又は他のプロモーター、例えばウイルスプロ
モーターもしくは外来性プロモーターと組み合わされた
天然プロモーターが含まれる）、該プロモーターに影響
を与える配列、例えばオペレーター、アクチベーター、
エンハンサー、キャッピング配列、ＴＡＴＡ及びＣＡＡ
Ｔ配列、あるいはこれらに類似するものを含み、ここ
で、これらの配列はそれらの機能を満たすことができる
ように造成物中に組織化されており；“ｅｉｓ”は、発
現を制御するための発現開始配列を意図し、そしてリボ
ゾーム結合部位、適当であれば、開始コドン、リボゾー
ム結合部位と開始コドンを分離するオリゴヌクレオチド
（ここで、これらの配列は発現に影響を与える）、及び
これらに類似するものを含み；“ＴＡｇＲ”は、抗原レ
セプター又はハイブリド蛋白質をコードするオープンリ
ーディングフレームをもたらすＴ細胞抗原レセプター配
列、又はＴ細胞抗原レセプターの断片を含むハイブリド
ＤＮＡ配列を意図し；“ｅｔｓ”は、１又は複数の終止
コドン及び適当であれば他の配列を含むことができる発
現停止配列を意図し；そして“ｔｔｓ”は、転写停止配
列を意図し、この配列は、通常は転写プロモーターと均
衡しておりそして１又は複数の終止コドンと組み合わさ
れた１又は複数のターミネーターであることができる転
写ターミネーター、ポリアデニル化シグナル配列、又は
これらに類似するものを含むことができる。
【００２５】Ｔ細胞抗原レセプターサブユニット又はハ
イブリドＴ細胞抗原レセプターは、ほとんどの場合次の
式： （Ｓ．Ｌ．）ｃ − （Ｖ−ｓｅｑ） − Ｊ − Ｃ
− （ＴＭ）ｄ − （Ｃｙ）ｅ を有する。式中、“Ｓ．Ｌ．”は分泌リーダー配列を意
図し、このものは約１５〜２５アミノ酸、さらに一般的
には１７〜２４アミノ酸、そして好ましくは約１９〜２
３アミノ酸をコードし、４５〜７５ｎｔ、一般に５１〜
７２ｎｔ、好ましくは５７〜６９ｎｔを有し；“ｃ”は
０又は１であり；“Ｖ−ｓｅｑ”は、Ｔ細胞抗原レセプ
ターサブユニットの可変領域をコードするか又は異るポ
リペプチドをコードする配列に置き換えられることがで
き、このＤＮＡ配列は分泌リーダー配列（Ｓ．Ｌ．）と
リーディングフレームが適切に合っているか又は分泌リ
ーダー配列が存在しない場合は自体の開始コドンを有す
ることができ；この可変配列は一般に少なくとも約６０
ｎｔでありそして約６００ｎｔ以下であり、一層通常に
は約４００ｎｔ以下であり；この配列がＴ細胞レセプタ
ー可変領域をコードする場合、この配列は一般に約２７
０〜３３０ｎｔ、一層普通には約２８５〜３１２ｎｔの
範囲であり；“Ｊ”は連結領域であり、そして一般に約
４２ｎｔ〜約６０ｎｔであり、一層普通には約４５ｎｔ
〜５７ｎｔであり、そしてしばしば約４８〜５４ｎｔで
あり、ここでＪ領域は、Ｔ細胞抗原レセプターサブユニ
ットの連結領域エクソンである限定された数の配列から
選択され；”Ｃ”は定常領域であり；“ＴＭ”は、約５
１〜９０ｎｔ、一層普通には約８４〜９６ｎｔの疎水性
配列であるトランスメンブランインテグレーター配列を
意図し；“ｄ”は０又は１であり；“Ｃｙ”は膜から細
胞質内に延びる配列を意図し、これは一般に約１２〜２
０ｎｔであり、一層普通には約１５〜２４ｎｔであり、
特に約１５〜１８ｎｔであり；そして“ｅ”は０〜１の
整数である。
イブリドＴ細胞抗原レセプターは、ほとんどの場合次の
式： （Ｓ．Ｌ．）ｃ − （Ｖ−ｓｅｑ） − Ｊ − Ｃ
− （ＴＭ）ｄ − （Ｃｙ）ｅ を有する。式中、“Ｓ．Ｌ．”は分泌リーダー配列を意
図し、このものは約１５〜２５アミノ酸、さらに一般的
には１７〜２４アミノ酸、そして好ましくは約１９〜２
３アミノ酸をコードし、４５〜７５ｎｔ、一般に５１〜
７２ｎｔ、好ましくは５７〜６９ｎｔを有し；“ｃ”は
０又は１であり；“Ｖ−ｓｅｑ”は、Ｔ細胞抗原レセプ
ターサブユニットの可変領域をコードするか又は異るポ
リペプチドをコードする配列に置き換えられることがで
き、このＤＮＡ配列は分泌リーダー配列（Ｓ．Ｌ．）と
リーディングフレームが適切に合っているか又は分泌リ
ーダー配列が存在しない場合は自体の開始コドンを有す
ることができ；この可変配列は一般に少なくとも約６０
ｎｔでありそして約６００ｎｔ以下であり、一層通常に
は約４００ｎｔ以下であり；この配列がＴ細胞レセプタ
ー可変領域をコードする場合、この配列は一般に約２７
０〜３３０ｎｔ、一層普通には約２８５〜３１２ｎｔの
範囲であり；“Ｊ”は連結領域であり、そして一般に約
４２ｎｔ〜約６０ｎｔであり、一層普通には約４５ｎｔ
〜５７ｎｔであり、そしてしばしば約４８〜５４ｎｔで
あり、ここでＪ領域は、Ｔ細胞抗原レセプターサブユニ
ットの連結領域エクソンである限定された数の配列から
選択され；”Ｃ”は定常領域であり；“ＴＭ”は、約５
１〜９０ｎｔ、一層普通には約８４〜９６ｎｔの疎水性
配列であるトランスメンブランインテグレーター配列を
意図し；“ｄ”は０又は１であり；“Ｃｙ”は膜から細
胞質内に延びる配列を意図し、これは一般に約１２〜２
０ｎｔであり、一層普通には約１５〜２４ｎｔであり、
特に約１５〜１８ｎｔであり；そして“ｅ”は０〜１の
整数である。
【００２６】２つのサブユニットα−及びβ−のそれぞ
れは異る宿主中で又は同じ宿主中で独立して発現するこ
とができる。２つのサブユニットが同一宿主で発現され
る場合は、微生物宿主が使用されるから哺乳動物細胞が
使用されるかによって、サブユニットのプロセシング及
びサブユニットのＴ−細胞レセプターの集成に影響を与
えるであろう。
れは異る宿主中で又は同じ宿主中で独立して発現するこ
とができる。２つのサブユニットが同一宿主で発現され
る場合は、微生物宿主が使用されるから哺乳動物細胞が
使用されるかによって、サブユニットのプロセシング及
びサブユニットのＴ−細胞レセプターの集成に影響を与
えるであろう。
【００２７】プロセシングには折りたたみ、グリコシル
化、小胞体及びゴルジ体を介する輸送、分泌リーダー配
列の除去を伴う開裂、及びアセチル化によるＮ−末端の
キャッピング又はブロッキングが含まれる。プロセシン
グの部分として又はプロセシングとは独立に、サブユニ
ットの折りたたみ及びサブユニットのＴ細胞レセプター
への集成が生じなければならない。哺乳動物細胞につい
ては、生じた蛋白質はその化学的、物理的及び生物学的
性質において天然Ｔ細胞レセプターと実質的に一致する
ことが予想される。
化、小胞体及びゴルジ体を介する輸送、分泌リーダー配
列の除去を伴う開裂、及びアセチル化によるＮ−末端の
キャッピング又はブロッキングが含まれる。プロセシン
グの部分として又はプロセシングとは独立に、サブユニ
ットの折りたたみ及びサブユニットのＴ細胞レセプター
への集成が生じなければならない。哺乳動物細胞につい
ては、生じた蛋白質はその化学的、物理的及び生物学的
性質において天然Ｔ細胞レセプターと実質的に一致する
ことが予想される。
【００２８】しかしながら、下等真核生物及び原核生物
については、種々のプロセス段階が全体的に又は部分的
に異って生じ、あるいは全く生じない。従って、これら
の配列は野性タイプ第２リーダー配列を発現宿主により
認識される分泌リーダー配列で置き換えることにより、
又は可変領域の始めに開始コドンを設けることにより変
形することができる。次に、サブユニットは細胞質中で
単離され、そして再生条件下でα−及びβ−サブユニッ
トを一緒に連結することにより受容体が形成される。
については、種々のプロセス段階が全体的に又は部分的
に異って生じ、あるいは全く生じない。従って、これら
の配列は野性タイプ第２リーダー配列を発現宿主により
認識される分泌リーダー配列で置き換えることにより、
又は可変領域の始めに開始コドンを設けることにより変
形することができる。次に、サブユニットは細胞質中で
単離され、そして再生条件下でα−及びβ−サブユニッ
トを一緒に連結することにより受容体が形成される。
【００２９】生物学的活性を有する、例えば免疫的活性
を有するポリペプチドをもたらすために、レセプターサ
ブユニット断片をコードするＤＮＡは少なくとも８アミ
ノ酸、普通は少なくとも１５アミノ酸（それぞれ２４ｎ
ｔ及び４５ｎｔ）のポリペプチドをコードすべきであ
る。示されるように、造成物は、Ｔ−細胞レセプターサ
ブユニットの一部分のみをコードするＤＮＡを挿入する
ことによって調製することができ（ここで、ベクターは
１又は複数の適切な制限部位を有する）、あるいは例え
ばアダプターにより変形することにより、プロモーター
及び関連制御配列、例えば転写のためのＲＮＡポリメラ
ーゼ結合部位及び適当な翻訳制御配列、例えばリボゾー
ム結合部位に対して適切な部位に挿入を行うことがで
き、又はリーダー配列にリーディングフレームを合わせ
ることができる。
を有するポリペプチドをもたらすために、レセプターサ
ブユニット断片をコードするＤＮＡは少なくとも８アミ
ノ酸、普通は少なくとも１５アミノ酸（それぞれ２４ｎ
ｔ及び４５ｎｔ）のポリペプチドをコードすべきであ
る。示されるように、造成物は、Ｔ−細胞レセプターサ
ブユニットの一部分のみをコードするＤＮＡを挿入する
ことによって調製することができ（ここで、ベクターは
１又は複数の適切な制限部位を有する）、あるいは例え
ばアダプターにより変形することにより、プロモーター
及び関連制御配列、例えば転写のためのＲＮＡポリメラ
ーゼ結合部位及び適当な翻訳制御配列、例えばリボゾー
ム結合部位に対して適切な部位に挿入を行うことがで
き、又はリーダー配列にリーディングフレームを合わせ
ることができる。
【００３０】Ｔ細胞抗原レセプターのドメイン又は領域
は、個別的に又は組み合わせて使用することができる。
ｃＤＮＡを用いることにより、プロセシング、例えば分
泌リーダーの除去、グリコシル化等、を受ける前のタン
パク質であるプレ蛋白質をコードする遺伝子をオープン
リーディングフレーム内に得ることができる。ｃＤＮＡ
の制限地図を作成することにより、上記の式中に示され
ている個々のドメイン間の境界に隣接する便利な制限部
位の存在を決定することができる。
は、個別的に又は組み合わせて使用することができる。
ｃＤＮＡを用いることにより、プロセシング、例えば分
泌リーダーの除去、グリコシル化等、を受ける前のタン
パク質であるプレ蛋白質をコードする遺伝子をオープン
リーディングフレーム内に得ることができる。ｃＤＮＡ
の制限地図を作成することにより、上記の式中に示され
ている個々のドメイン間の境界に隣接する便利な制限部
位の存在を決定することができる。
【００３１】制限部位が境界に存在しない場合、適当な
場合には適切な制限酵素を用いて、境界の近傍において
さらに開裂せしめることができる。切除された配列を有
するようにヌクレオチドが除去されている場合、注目の
ドメインを適切なリーディングフレーム内に他のヌクレ
オチド配列と連結することを可能にする適当なアダプタ
ーを用いて、そのヌクレオチドを置き換えることができ
る。余分のヌクレオチドが存在する場合、例えばＢａｌ
３１を用いる制限処理、プライマー修復等によりそれら
を除去することができる。
場合には適切な制限酵素を用いて、境界の近傍において
さらに開裂せしめることができる。切除された配列を有
するようにヌクレオチドが除去されている場合、注目の
ドメインを適切なリーディングフレーム内に他のヌクレ
オチド配列と連結することを可能にする適当なアダプタ
ーを用いて、そのヌクレオチドを置き換えることができ
る。余分のヌクレオチドが存在する場合、例えばＢａｌ
３１を用いる制限処理、プライマー修復等によりそれら
を除去することができる。
【００３２】他の方法として、特定のアミノ酸のコドン
内に縮重が存在する場合、イン−ビトロ変異誘発を用い
て１又は複数個のヌクレオチドを変更し、こうして制限
酵素のための適切な認識配列を設けることができる。こ
れらの技法は広範囲に文献に記載されており、そしてこ
こで例示することを必要としない。使用されるＤＮＡ配
列は、この発明に従って単離される配列と同一でも異っ
ていてもよい。Ｊ又はＣドメイン配列をそれ自体として
又は他の配列例えばトランスメンブラン配列と組合わせ
て使用することにより、これらの配列を、同一の又は異
る種中の相同配列の存在を決定するための、及び、同等
な機能を有する配列を単離するためのプローブとして使
用することができる。こうして、Ｔ−細胞抗原レセプタ
ーからの断片の種々の組合わせを用いて、一緒に連結し
てＴ−細胞抗原レセプター又はハイブリド蛋白質をコー
ドする種々のシストロンをもたらすことができる配列の
集積を得ることができる。
内に縮重が存在する場合、イン−ビトロ変異誘発を用い
て１又は複数個のヌクレオチドを変更し、こうして制限
酵素のための適切な認識配列を設けることができる。こ
れらの技法は広範囲に文献に記載されており、そしてこ
こで例示することを必要としない。使用されるＤＮＡ配
列は、この発明に従って単離される配列と同一でも異っ
ていてもよい。Ｊ又はＣドメイン配列をそれ自体として
又は他の配列例えばトランスメンブラン配列と組合わせ
て使用することにより、これらの配列を、同一の又は異
る種中の相同配列の存在を決定するための、及び、同等
な機能を有する配列を単離するためのプローブとして使
用することができる。こうして、Ｔ−細胞抗原レセプタ
ーからの断片の種々の組合わせを用いて、一緒に連結し
てＴ−細胞抗原レセプター又はハイブリド蛋白質をコー
ドする種々のシストロンをもたらすことができる配列の
集積を得ることができる。
【００３３】Ｔ細胞抗原レセプターの分泌リーダー配列
を非−野性ＤＮＡ配列に連結することにより、ハイブリ
ド蛋白質の培地への分泌及びプロセシングを与えて哺乳
動物宿主からの成熟蛋白質生成物を得ることができる。
蛋白質が真核生物蛋白質である場合、それを適切にプロ
セスして天然真核生物蛋白質と同一か又は実質的に同一
な生成物を与えることができる。
を非−野性ＤＮＡ配列に連結することにより、ハイブリ
ド蛋白質の培地への分泌及びプロセシングを与えて哺乳
動物宿主からの成熟蛋白質生成物を得ることができる。
蛋白質が真核生物蛋白質である場合、それを適切にプロ
セスして天然真核生物蛋白質と同一か又は実質的に同一
な生成物を与えることができる。
【００３４】上記の方法に代えて、Ｔ細胞表面又は異る
哺乳動物細胞の表面に特定の蛋白質をもたらすことを望
む場合には、分泌リーダー配列とトランスメンブラン配
列との間に、Ｔ細胞抗原レセプターサブユニットの可
変、Ｊ及び不変領域の代りに外来性蛋白質をコードする
外来性配列を挿入することができる。こうして、細胞表
面に全体として異る表面膜蛋白質を与えて細胞の表面特
性を変化させることができる。
哺乳動物細胞の表面に特定の蛋白質をもたらすことを望
む場合には、分泌リーダー配列とトランスメンブラン配
列との間に、Ｔ細胞抗原レセプターサブユニットの可
変、Ｊ及び不変領域の代りに外来性蛋白質をコードする
外来性配列を挿入することができる。こうして、細胞表
面に全体として異る表面膜蛋白質を与えて細胞の表面特
性を変化させることができる。
【００３５】この造成物の発現生成物を用いて発現生成
物に対する抗体を得ることができ、次にこれを用いて、
Ｊ又はＣ領域に対するイデオタイプ決定基又は共通決定
基の共有に基いて、Ｔ−細胞抗原レセプター又は個々の
サブユニットの存在を検出することができる。特にＣ領
域の５′−末端から細胞質領域の３′−末端に延びる配
列のクローン化ＤＮＡ配列をプローブとして用いること
ができる。通常、プローブは相同配列の少なくとも約１
５ｎｔ、一層普通には少なくとも約３０ｎｔであり、そ
して一般に約１０００ｎｔを超えず、好ましくは約５０
０ｎｔを超えない。さらに、５ｋｎｔ又はそれより大で
ある非−相同フランキング配列が存在することができ
る。
物に対する抗体を得ることができ、次にこれを用いて、
Ｊ又はＣ領域に対するイデオタイプ決定基又は共通決定
基の共有に基いて、Ｔ−細胞抗原レセプター又は個々の
サブユニットの存在を検出することができる。特にＣ領
域の５′−末端から細胞質領域の３′−末端に延びる配
列のクローン化ＤＮＡ配列をプローブとして用いること
ができる。通常、プローブは相同配列の少なくとも約１
５ｎｔ、一層普通には少なくとも約３０ｎｔであり、そ
して一般に約１０００ｎｔを超えず、好ましくは約５０
０ｎｔを超えない。さらに、５ｋｎｔ又はそれより大で
ある非−相同フランキング配列が存在することができ
る。
【００３６】プローブとして使用されるヌクレオチド配
列はＲＮＡ又はＤＮＡであってよく、そして種々の方法
でラベルされていてもよい。一般に、プローブは３２Ｐ
によりラベルされ、そしてオートラジオグラフィーによ
り検出することができる。別法として、ビオチン、新規
な糖類、又は他の任意の分子を、オリゴヌクレオチドを
調製するための合成技法を用いて含めることができる。
列はＲＮＡ又はＤＮＡであってよく、そして種々の方法
でラベルされていてもよい。一般に、プローブは３２Ｐ
によりラベルされ、そしてオートラジオグラフィーによ
り検出することができる。別法として、ビオチン、新規
な糖類、又は他の任意の分子を、オリゴヌクレオチドを
調製するための合成技法を用いて含めることができる。
【００３７】こうして、任意の末端基を導入して、検出
可能なシグナル源として機能せしめることができる。こ
れらの基は直接的に又は間接的に、すなわち共有結合、
リガンド−受容体結合、例えばハプテン及び抗体、又は
これらに類似するものにより導入することができる。検
出可能なシグナルをもたらすラベルの例には、蛍光物
質、化学発光物質、酵素、放射性ラベル、磁性粒子、及
びこれらに類似するものが含まれる。
可能なシグナル源として機能せしめることができる。こ
れらの基は直接的に又は間接的に、すなわち共有結合、
リガンド−受容体結合、例えばハプテン及び抗体、又は
これらに類似するものにより導入することができる。検
出可能なシグナルをもたらすラベルの例には、蛍光物
質、化学発光物質、酵素、放射性ラベル、磁性粒子、及
びこれらに類似するものが含まれる。
【００３８】Ｔ細胞抗原レセプターサブユニットと関連
する希少なメッセンジャーＲＮＡを単離するために、２
種の異なる希少メッセンジャーＲＮＡ単離方法が用いら
れた。β−サブユニットのために用いられた方法は、膜
結合ポリゾーム性ＲＮＡを非−膜結合ＲＮＡから単離す
ることを含む。次に、ＲＮＡの膜結合ポリゾーム画分を
逆転写して単鎖（ｓｓ）ｃＤＮＡを生成させた。
する希少なメッセンジャーＲＮＡを単離するために、２
種の異なる希少メッセンジャーＲＮＡ単離方法が用いら
れた。β−サブユニットのために用いられた方法は、膜
結合ポリゾーム性ＲＮＡを非−膜結合ＲＮＡから単離す
ることを含む。次に、ＲＮＡの膜結合ポリゾーム画分を
逆転写して単鎖（ｓｓ）ｃＤＮＡを生成させた。
【００３９】次にこのｃＤＮＡを32Ｐによりラベルし、
そしＢ細胞ｍＲＮＡとハイブリダイズさせてからヒドロ
キシアパタイト上で分画する事を繰り返した。カラムを
通過するｓｓｃＤＮＡのままのものを単離した。次に、
第２のＴヘルパーハイブリドーマを用いてｃＤＮＡライ
ブラリーを調製し、そして第１Ｔヘルパーハイブリドー
マから調製されたｃＤＮＡプローブを用いてスクリーニ
ングした。これが、Ｔ細胞特異的膜関連配列の実質的な
濃縮（約２００倍）をもたらした。
そしＢ細胞ｍＲＮＡとハイブリダイズさせてからヒドロ
キシアパタイト上で分画する事を繰り返した。カラムを
通過するｓｓｃＤＮＡのままのものを単離した。次に、
第２のＴヘルパーハイブリドーマを用いてｃＤＮＡライ
ブラリーを調製し、そして第１Ｔヘルパーハイブリドー
マから調製されたｃＤＮＡプローブを用いてスクリーニ
ングした。これが、Ｔ細胞特異的膜関連配列の実質的な
濃縮（約２００倍）をもたらした。
【００４０】減少した数の選択されたクローンを、最初
に調製したプローブを用いて再スクリーニングした。次
に陽性クローンをニックトランスレートし、そしてノー
サンブロッティング条件下でＢ−細胞ｍＲＮＡにハイブ
リダイズせしめた。Ｂ−細胞ｍＲＮＡにハイブリダイズ
しなかったクローンをＴ−細胞特異的であるとして選択
した。
に調製したプローブを用いて再スクリーニングした。次
に陽性クローンをニックトランスレートし、そしてノー
サンブロッティング条件下でＢ−細胞ｍＲＮＡにハイブ
リダイズせしめた。Ｂ−細胞ｍＲＮＡにハイブリダイズ
しなかったクローンをＴ−細胞特異的であるとして選択
した。
【００４１】次に、これらのクローンを用いて、次のよ
うにして体細胞組み替えを研究した。１０００ｎｔより
大きいＲＮＡにハイブリダイズするそれらを、ヘルパー
Ｔ細胞ハイブリドーマ及び胸腺腫を含む分離源からのゲ
ノム性ＤＮＡのサザンブロックにハイブリダイズさせ
た。ＤＮＡを標準的方法により調製し、特定の制限酵
素、この場合ＰｖｕＩＩ、により消化し、０．９％アガ
ロースを通して電気泳動し、そしてニトロセルロース上
にブロットした。穏和な〜激しい厳格さが用いられ、そ
して胸腺腫及びハイブリドーマの両者が、他の非Ｔ細胞
ＤＮＡとは実質的に異るパターンを与えることが見出さ
れた。α−サブユニットのために用いられた方法は、異
る特異性のＴ細胞間の可変領域特異的に削減された（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔｅｄ、その配列にハイブリダイズするも
のは除去した）ｃＤＮＡプローブを用いた。ヘルパーハ
イブリドーマのｍＲＮＡからランダムプライムされたラ
ベル化ｃＤＮＡを合成した。約３００〜４００ｎｔの平
均サイズに断片化した後、２本鎖核酸から単鎖を分離す
るためにヒドロキシアパタイトを用いながら、少なくと
も２つの異るＴヘルパーハイブリドーマ又はＴヘルパー
様リンパ腫系からのｍＲＮＡにより削減した。
うにして体細胞組み替えを研究した。１０００ｎｔより
大きいＲＮＡにハイブリダイズするそれらを、ヘルパー
Ｔ細胞ハイブリドーマ及び胸腺腫を含む分離源からのゲ
ノム性ＤＮＡのサザンブロックにハイブリダイズさせ
た。ＤＮＡを標準的方法により調製し、特定の制限酵
素、この場合ＰｖｕＩＩ、により消化し、０．９％アガ
ロースを通して電気泳動し、そしてニトロセルロース上
にブロットした。穏和な〜激しい厳格さが用いられ、そ
して胸腺腫及びハイブリドーマの両者が、他の非Ｔ細胞
ＤＮＡとは実質的に異るパターンを与えることが見出さ
れた。α−サブユニットのために用いられた方法は、異
る特異性のＴ細胞間の可変領域特異的に削減された（ｓ
ｕｂｔｒａｃｔｅｄ、その配列にハイブリダイズするも
のは除去した）ｃＤＮＡプローブを用いた。ヘルパーハ
イブリドーマのｍＲＮＡからランダムプライムされたラ
ベル化ｃＤＮＡを合成した。約３００〜４００ｎｔの平
均サイズに断片化した後、２本鎖核酸から単鎖を分離す
るためにヒドロキシアパタイトを用いながら、少なくと
も２つの異るＴヘルパーハイブリドーマ又はＴヘルパー
様リンパ腫系からのｍＲＮＡにより削減した。
【００４２】次に、残りの単鎖ｃＤＮＡを、もとのｃＤ
ＮＡを与えるセルラインから調製されたｃＤＮＡライブ
ラリーにハイブリダイズせしめた。同じＴ−ヘルパーハ
イブリドーマからのオリゴ−ｄＴブライムｃＤＮＡ（こ
こで、ｃＤＮＡは、マクロファージ又は他のリンパ球系
からのｍＲＮＡにより削減された膜結合ポリゾームｍＲ
ＮＡから逆転写される）により陽性クローンを再スクリ
ーニングすることにより関連のない配列の追加の除去を
達成することができる。得られるハイブリダイズするク
ローンはＴ−細胞レセプターの可変領域に関連すること
が見出される。
ＮＡを与えるセルラインから調製されたｃＤＮＡライブ
ラリーにハイブリダイズせしめた。同じＴ−ヘルパーハ
イブリドーマからのオリゴ−ｄＴブライムｃＤＮＡ（こ
こで、ｃＤＮＡは、マクロファージ又は他のリンパ球系
からのｍＲＮＡにより削減された膜結合ポリゾームｍＲ
ＮＡから逆転写される）により陽性クローンを再スクリ
ーニングすることにより関連のない配列の追加の除去を
達成することができる。得られるハイブリダイズするク
ローンはＴ−細胞レセプターの可変領域に関連すること
が見出される。
【００４３】ハイブリドＤＮＡ技法を用いることによ
り、α−及びβ−サブユニットを別々に調製することが
でき、あるいは有機分子、例えばポリペプチド、ポリサ
ッカライド、リピド、ハプテン及びこれらの組合わせの
特定の配置に対する高い特異性及び親和性を有するレセ
プターとして組み合わせることができる。レセプターの
一群が実質上同様の方法で使用され得る免疫グロブリン
に類似してもたらされるが、免疫グロブリンに関連する
性質、例えばＦｃ決定基、補体関連細胞毒性、又は免疫
グロブリンと特に関連する他の特性を欠いている。この
発明のレセプターは、血液中イン−ビボで表面膜結合Ｔ
−細胞レセプターと競争して類似抗原により活性化され
たヘルパー細胞の増殖を阻害することができる。
り、α−及びβ−サブユニットを別々に調製することが
でき、あるいは有機分子、例えばポリペプチド、ポリサ
ッカライド、リピド、ハプテン及びこれらの組合わせの
特定の配置に対する高い特異性及び親和性を有するレセ
プターとして組み合わせることができる。レセプターの
一群が実質上同様の方法で使用され得る免疫グロブリン
に類似してもたらされるが、免疫グロブリンに関連する
性質、例えばＦｃ決定基、補体関連細胞毒性、又は免疫
グロブリンと特に関連する他の特性を欠いている。この
発明のレセプターは、血液中イン−ビボで表面膜結合Ｔ
−細胞レセプターと競争して類似抗原により活性化され
たヘルパー細胞の増殖を阻害することができる。
【００４４】Ｔ−細胞レセプターは、免疫グロブリンが
使用されるほとんどの状況において、例えば診断測定、
アフィニティークロマトグラフィー、部位特性療法又は
診断において使用することができ、この場合Ｔ−細胞レ
セプターは放射性核種、ｎｍｒ活性化合物、蛍光物質、
毒素、例えばアブリン、リシン等、又はこれらに類似す
るものに直接的又は間接的に接合され得る。
使用されるほとんどの状況において、例えば診断測定、
アフィニティークロマトグラフィー、部位特性療法又は
診断において使用することができ、この場合Ｔ−細胞レ
セプターは放射性核種、ｎｍｒ活性化合物、蛍光物質、
毒素、例えばアブリン、リシン等、又はこれらに類似す
るものに直接的又は間接的に接合され得る。
【００４５】α−及びβ−鎖のために用いられる遺伝子
を手にすることにより、鎖、及びそれ故にレセプター
を、ヒト細胞に比べて増殖要件が厳格でないヒト細胞以
外の細胞から多量に製造することができる。Ｔ−細胞レ
セプターは細菌、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、
Ｂ．ズブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等、真核生
物、例えば酵母、糸状菌類、ネズミ細胞等において製造
することができる。
を手にすることにより、鎖、及びそれ故にレセプター
を、ヒト細胞に比べて増殖要件が厳格でないヒト細胞以
外の細胞から多量に製造することができる。Ｔ−細胞レ
セプターは細菌、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、
Ｂ．ズブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等、真核生
物、例えば酵母、糸状菌類、ネズミ細胞等において製造
することができる。
【００４６】次の例は、限定のためではなく例示のため
に与えられる。
に与えられる。
【００４７】
【実験】ヘルパーＴ細胞抗原特異的レセプターサブユニ
ットα−及びβ−（ＴH −Ａｇレセプター、α−又はβ
−サブユニット）をコードする遺伝子の遺伝子単離法は
次の通りである。まず、β−サブユニットの単離につい
て検討する。膜結合Ｔヘルパー細胞ｃＤＮＡプローブ
を、Ｂ細胞メッセンジャーＲＮＡを用いて削減し、そし
て別のＴH−Ｂ（ＴH 細胞をＢ細胞リンパ腫を用いて削
減した）ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするた
めに使用された。
ットα−及びβ−（ＴH −Ａｇレセプター、α−又はβ
−サブユニット）をコードする遺伝子の遺伝子単離法は
次の通りである。まず、β−サブユニットの単離につい
て検討する。膜結合Ｔヘルパー細胞ｃＤＮＡプローブ
を、Ｂ細胞メッセンジャーＲＮＡを用いて削減し、そし
て別のＴH−Ｂ（ＴH 細胞をＢ細胞リンパ腫を用いて削
減した）ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするた
めに使用された。
【００４８】ライブラリーは、ＴH ハイブリドーマＭ１
２又は２Ｂ４〔ヘドリック等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９
８２）３０：１４１−１５２〕を用い、以下に述べるＢ
細胞特異的ライブラリー〔デービス等、プロシーディン
グ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・ア
メリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（印刷中）〕作成方法、およびアフリカツメガエル
胚段階特異的ライブラリー〔サーゼント及びダウィド、
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）（１９８３）２２２：１
３５−１３９〕作成方法と同様の方法の方法を用いて造
成された。
２又は２Ｂ４〔ヘドリック等、セル（Ｃｅｌｌ）（１９
８２）３０：１４１−１５２〕を用い、以下に述べるＢ
細胞特異的ライブラリー〔デービス等、プロシーディン
グ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・ア
メリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（印刷中）〕作成方法、およびアフリカツメガエル
胚段階特異的ライブラリー〔サーゼント及びダウィド、
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）（１９８３）２２２：１
３５−１３９〕作成方法と同様の方法の方法を用いて造
成された。
【００４９】Ｂ細胞リンパ腫Ｌ１０Ａ及びＢａ１１７
〔キム等、ジャーナル・オブ・イムノロジー・（Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．）（１９７９）１２２：５４９−５５
４〕からＢ細胞ｍＲＮＡを得た。ｃＤＮＡは検出のため
に32Ｐ−ラベルされた。ＴH −Ｂ（ＴHｃＤＮＡからＢ
細胞ｍＲＮＡにハイブリダイズするものを削減した）ラ
イブラリーは、ヒドロキシアパタイト段階における削減
において量として９５％のｃＤＮＡが除去されたことか
ら判断して、Ｔ細胞特異的配列が２０倍濃縮された。
〔キム等、ジャーナル・オブ・イムノロジー・（Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．）（１９７９）１２２：５４９−５５
４〕からＢ細胞ｍＲＮＡを得た。ｃＤＮＡは検出のため
に32Ｐ−ラベルされた。ＴH −Ｂ（ＴHｃＤＮＡからＢ
細胞ｍＲＮＡにハイブリダイズするものを削減した）ラ
イブラリーは、ヒドロキシアパタイト段階における削減
において量として９５％のｃＤＮＡが除去されたことか
ら判断して、Ｔ細胞特異的配列が２０倍濃縮された。
【００５０】Ｂ−細胞ライブラリーについての例示的方
法は次の通りである。セルラインＢａ１１７、Ｂ−細胞
リンパ腫（ＩｇＭ+ ＩｇＤ+ Ｉａ+ ）〔キム等、ジャー
ナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）
（１９７９）１２２：５４９−５５４〕、及びＢａ１
４，Ｔ−細胞胸腺腫（Ｔｈｙｌ+ Ｌｙｔｌ- Ｌｙｔ２+
ＴＬ+ ）〔キム等、前掲（１９７８）１２１：３３９−
３４４〕をＲＰＭＩ、グルタミン、７０％ウシ胎児血清
及び５×１０-5Ｍ β−メルカプトエタノール中で５％
ＣＯ2 雰囲気下で増殖せしめた。高濃度（１〜２×１０
-6／ｍｌ）に増殖した後新培地により２〜４時間レフレ
ッシュし、細胞をＰＢＳと共に冷却し、そして収得し
た。
法は次の通りである。セルラインＢａ１１７、Ｂ−細胞
リンパ腫（ＩｇＭ+ ＩｇＤ+ Ｉａ+ ）〔キム等、ジャー
ナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）
（１９７９）１２２：５４９−５５４〕、及びＢａ１
４，Ｔ−細胞胸腺腫（Ｔｈｙｌ+ Ｌｙｔｌ- Ｌｙｔ２+
ＴＬ+ ）〔キム等、前掲（１９７８）１２１：３３９−
３４４〕をＲＰＭＩ、グルタミン、７０％ウシ胎児血清
及び５×１０-5Ｍ β−メルカプトエタノール中で５％
ＣＯ2 雰囲気下で増殖せしめた。高濃度（１〜２×１０
-6／ｍｌ）に増殖した後新培地により２〜４時間レフレ
ッシュし、細胞をＰＢＳと共に冷却し、そして収得し
た。
【００５１】この細胞を冷ＰＢＳ中で数回洗浄し、そし
て０．１４Ｍ ＫＣ１，０．０２ＭＴｒｉｓ，ｐＨ８．
０，０．００１５Ｍ ＭｇＣｌ2 中に再懸濁し、ＮＰ−
４０を１％に加えることによって細胞溶解し、そして核
をペレット化した。細胞質画分を０．５％ＳＤＳ，５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡとし、そして飽和フェノールで２〜３回、
Ｓｅｖａｇ（ＣＨＣｌ3 ：イソアミルアルコール２４：
１）で１回抽出し、エタノールで沈澱せしめ〔ムシンス
キ等、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッ
ド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９８０）７７：７４０
５−７４０９〕、そしてポリＡ+ ＲＮＡをオリゴ−ｄＴ
セルロース上で選択した（１〜２回）。
て０．１４Ｍ ＫＣ１，０．０２ＭＴｒｉｓ，ｐＨ８．
０，０．００１５Ｍ ＭｇＣｌ2 中に再懸濁し、ＮＰ−
４０を１％に加えることによって細胞溶解し、そして核
をペレット化した。細胞質画分を０．５％ＳＤＳ，５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡとし、そして飽和フェノールで２〜３回、
Ｓｅｖａｇ（ＣＨＣｌ3 ：イソアミルアルコール２４：
１）で１回抽出し、エタノールで沈澱せしめ〔ムシンス
キ等、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・ア
カデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッ
ド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９８０）７７：７４０
５−７４０９〕、そしてポリＡ+ ＲＮＡをオリゴ−ｄＴ
セルロース上で選択した（１〜２回）。
【００５２】Ｂ−細胞リンパ腫からのｃＤＮＡを、５０
ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．３，６ｍＭ Ｍｇｃｌ2 ，７
０ｍＭ ＫＣｌ，１ｍＭの各ｄＮＴＰ、第１鎖に１０5
ｃｐｍ／μｇの比活性を得る32Ｐ−ｄＣＴＰ，１０μｇ
／ｍｌオリゴ−ｄＴ，２０ｍＭジチオスレイトール、１
００μｇ／ｍｌアクチノマイシン“Ｄ”を含む１００μ
ｌの反応混合物中で１〜５μｇの鋳型ポリＡ+ ＲＮＡか
ら合成した。１μｇのポリＡ+ ＲＮＡ当り１０ユニット
のＡＭＶ逆転写酵素を加え、そして４２℃にて２時間イ
ンキュベートした。
ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．３，６ｍＭ Ｍｇｃｌ2 ，７
０ｍＭ ＫＣｌ，１ｍＭの各ｄＮＴＰ、第１鎖に１０5
ｃｐｍ／μｇの比活性を得る32Ｐ−ｄＣＴＰ，１０μｇ
／ｍｌオリゴ−ｄＴ，２０ｍＭジチオスレイトール、１
００μｇ／ｍｌアクチノマイシン“Ｄ”を含む１００μ
ｌの反応混合物中で１〜５μｇの鋳型ポリＡ+ ＲＮＡか
ら合成した。１μｇのポリＡ+ ＲＮＡ当り１０ユニット
のＡＭＶ逆転写酵素を加え、そして４２℃にて２時間イ
ンキュベートした。
【００５３】同容積の０．２Ｍ ＮａＯＨを添加した
後、混合物を７０℃にて２０分間インキュベートし、氷
上で冷却し、１Ｍ ＨＣｌにより中和し、そして酢酸ナ
トリウム（ｐＨ６．５）及びＳＤＳをそれぞれ０．２Ｍ
及び０．１％に添加した。室温において、１００ｍＭ
Ｎａｃｌ，５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５，１ｍＭＥ
ＤＴＡ及び０．０２％ＳＤＳのランニング緩衝液によ
り、パスツールピペットカラム中のＧ−５０Ｆセファデ
ックスからｃＤＮＡを排除した。１５μｇのｔＲＮＡを
担体として加え、そしてｃＤＮＡをシラン処理されたエ
ッペンドルフチューブ（１．５ｍｌ）中で沈澱せしめ
た。
後、混合物を７０℃にて２０分間インキュベートし、氷
上で冷却し、１Ｍ ＨＣｌにより中和し、そして酢酸ナ
トリウム（ｐＨ６．５）及びＳＤＳをそれぞれ０．２Ｍ
及び０．１％に添加した。室温において、１００ｍＭ
Ｎａｃｌ，５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．５，１ｍＭＥ
ＤＴＡ及び０．０２％ＳＤＳのランニング緩衝液によ
り、パスツールピペットカラム中のＧ−５０Ｆセファデ
ックスからｃＤＮＡを排除した。１５μｇのｔＲＮＡを
担体として加え、そしてｃＤＮＡをシラン処理されたエ
ッペンドルフチューブ（１．５ｍｌ）中で沈澱せしめ
た。
【００５４】沈澱を７０％エタノールで１回洗浄し、乾
燥し、そして０．５Ｍリン酸緩衝液、５ｍＭ ＥＤＴ
Ａ，０．１％ＳＤＳ中に再懸濁し、そしてシールしたガ
ラス毛細管中でＴ−細胞胸腺ＲＮＡと、１０倍過剰１〜
１．５ｍｇ／ｍｌにてハイブリダイズせしめた。反復配
列を吸着するために、剪断されたマウスゲノム性ＤＮＡ
（１．２ｍｇ／ｍｌ，１０μｇ／反応）を含めた。６０
秒間煮沸した後、混合物を１６〜２０時間６０℃にてイ
ンキュベートした。次に、ヒドロキシアパタイトクロマ
トグラフィーを用いて、０．１２Ｍリン酸緩衝液、０．
１％ＳＤＳ中で６０℃にて材料を画分した。
燥し、そして０．５Ｍリン酸緩衝液、５ｍＭ ＥＤＴ
Ａ，０．１％ＳＤＳ中に再懸濁し、そしてシールしたガ
ラス毛細管中でＴ−細胞胸腺ＲＮＡと、１０倍過剰１〜
１．５ｍｇ／ｍｌにてハイブリダイズせしめた。反復配
列を吸着するために、剪断されたマウスゲノム性ＤＮＡ
（１．２ｍｇ／ｍｌ，１０μｇ／反応）を含めた。６０
秒間煮沸した後、混合物を１６〜２０時間６０℃にてイ
ンキュベートした。次に、ヒドロキシアパタイトクロマ
トグラフィーを用いて、０．１２Ｍリン酸緩衝液、０．
１％ＳＤＳ中で６０℃にて材料を画分した。
【００５５】単鎖画分をＤＮＡポリメラーゼＩ（クレノ
ウ断片）を用いて２本鎖にし、ＳＩヌクレアーゼにより
端を揃え、ｐＢＲ３２２のＰｓｔＩ部位にＧ−Ｃテイル
化した。次に、プラスミドをＥ．コリ中に高効率（５０
〜４００×１０3 μｇ／挿入）で、平均挿入部サイズ約
５００ｎｔでクローン化した。５０００の選択されたク
ローンのライブラリーをスクリーニングし、そして標準
的方法〔マニアチル等、モレキュラー・クローニング
（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ）、コールド・ス
プリング・ハーバー・プレス・コールド・スプリング・
ハーバー，１９８２〕により、Ｂ細胞Ｌ１０Ａからとっ
たＢ細胞メッセンジャーとに共通な配列が削減されてい
る、Ｔハイブリドーマ２Ｂ４から得た膜結合Ｔヘルパー
細胞ｃＤＮＡプローブ（ＭＢＴ2B4 −ＢLIOA）を用いて
再スクリーニングした。
ウ断片）を用いて２本鎖にし、ＳＩヌクレアーゼにより
端を揃え、ｐＢＲ３２２のＰｓｔＩ部位にＧ−Ｃテイル
化した。次に、プラスミドをＥ．コリ中に高効率（５０
〜４００×１０3 μｇ／挿入）で、平均挿入部サイズ約
５００ｎｔでクローン化した。５０００の選択されたク
ローンのライブラリーをスクリーニングし、そして標準
的方法〔マニアチル等、モレキュラー・クローニング
（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ）、コールド・ス
プリング・ハーバー・プレス・コールド・スプリング・
ハーバー，１９８２〕により、Ｂ細胞Ｌ１０Ａからとっ
たＢ細胞メッセンジャーとに共通な配列が削減されてい
る、Ｔハイブリドーマ２Ｂ４から得た膜結合Ｔヘルパー
細胞ｃＤＮＡプローブ（ＭＢＴ2B4 −ＢLIOA）を用いて
再スクリーニングした。
【００５６】３５の明確な陽性が得られ、これはライブ
ラリーの約１０％であった。どれが同じ遺伝子に由来し
そしてどれが異るかを決定するため、及び誤陽性を除去
するため、これらのプラスミドクローンのそれぞれをニ
ックトランスレートし、そして代表的なノーザンブロッ
トとハイブリダイズさせた。５個がＢ細胞ｍＲＮＡと反
応性であり、そして残りの３０個がｍＲＮＡサイズの１
０種類の異るパターンに分類された。その発現を次の表
に示した。
ラリーの約１０％であった。どれが同じ遺伝子に由来し
そしてどれが異るかを決定するため、及び誤陽性を除去
するため、これらのプラスミドクローンのそれぞれをニ
ックトランスレートし、そして代表的なノーザンブロッ
トとハイブリダイズさせた。５個がＢ細胞ｍＲＮＡと反
応性であり、そして残りの３０個がｍＲＮＡサイズの１
０種類の異るパターンに分類された。その発現を次の表
に示した。
【００５７】
【表１】
【００５８】ＴＭ８はラットｔｈｙ−１ｃＤＮＡクロー
ンと強く交差ハイブリダイズした。ｔｈｙ−１は古典的
なＴ−細胞膜抗原である。今や、ｃＤＮＡライブラリー
がハイブリドーマ３．３Ｔ（ヘーベル−カッツ等、前
掲）から調製された。
ンと強く交差ハイブリダイズした。ｔｈｙ−１は古典的
なＴ−細胞膜抗原である。今や、ｃＤＮＡライブラリー
がハイブリドーマ３．３Ｔ（ヘーベル−カッツ等、前
掲）から調製された。
【００５９】１０００ｎｔ以上のメッセンジャーにハイ
ブリダイズする７つのクローンのそれぞれをラベルし、
そして胸腺腫ＢＷ５１４７（マウス系ＡＫＲから、ヘー
ベル−カッツ等、前掲）、ＡＫＲ肝、抗原特異的Ｔ−細
胞２Ｂ４（Ｂ１０．ＡマウスからのＴ−細胞とＢＷ５１
４７との融合）、及びＢ１０．Ａ肝からのＤＮＡから成
るサザンブロットにハイブリダイズせしめた。
ブリダイズする７つのクローンのそれぞれをラベルし、
そして胸腺腫ＢＷ５１４７（マウス系ＡＫＲから、ヘー
ベル−カッツ等、前掲）、ＡＫＲ肝、抗原特異的Ｔ−細
胞２Ｂ４（Ｂ１０．ＡマウスからのＴ−細胞とＢＷ５１
４７との融合）、及びＢ１０．Ａ肝からのＤＮＡから成
るサザンブロットにハイブリダイズせしめた。
【００６０】ＤＮＡは標準的方法（マニアチス等、前
掲）により調製し、制限酵素ＰｖｕＩＩで消化し、０．
９％アガロースを通して電気泳動し、そしてニトロセル
ロース上にプロットした。サザンブロットからのオート
ラジオグラムは、ＴＭ８（ｔｈｙ−１）と共に見られる
ＡＫＲ及びＢ１０．Ａの間の制限多形性を除き、各クロ
ーンとのハイブリダイゼーションのパターンはＴＭ８６
の場合を除くＤＮＡ源のすべてについて同一であった。
掲）により調製し、制限酵素ＰｖｕＩＩで消化し、０．
９％アガロースを通して電気泳動し、そしてニトロセル
ロース上にプロットした。サザンブロットからのオート
ラジオグラムは、ＴＭ８（ｔｈｙ−１）と共に見られる
ＡＫＲ及びＢ１０．Ａの間の制限多形性を除き、各クロ
ーンとのハイブリダイゼーションのパターンはＴＭ８６
の場合を除くＤＮＡ源のすべてについて同一であった。
【００６１】親株のいずれかからの肝ＤＮＡに比べて、
ＢＷ５１４７又は２Ｂ４のいずれかのクローンにハイブ
リダイズするＰｖｕＩＩ断片の非常に異るパターンが存
在した。検査されたクローンはまた、ゲノム性ＤＮＡの
ＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄ ＩＩＩ消化物にハイブリダイ
ズせしめ、そして各場合においてＴＭ８６のみがＴ−細
胞ＤＮＡと肝ＤＮＡとの間の有意の相異を示した。ＴＭ
８６クローンはｐＢＲ３２２からＰｓｔＩにより切出し
可能である。
ＢＷ５１４７又は２Ｂ４のいずれかのクローンにハイブ
リダイズするＰｖｕＩＩ断片の非常に異るパターンが存
在した。検査されたクローンはまた、ゲノム性ＤＮＡの
ＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄ ＩＩＩ消化物にハイブリダイ
ズせしめ、そして各場合においてＴＭ８６のみがＴ−細
胞ＤＮＡと肝ＤＮＡとの間の有意の相異を示した。ＴＭ
８６クローンはｐＢＲ３２２からＰｓｔＩにより切出し
可能である。
【００６２】レセプター遺伝子のゲノム性組み替えが異
る抗原特異性のＴ−細胞についてユニークであるか否か
を試験するため、５種類の抗原特異的Ｔ−細胞ハイブリ
ドーマからのＤＮＡから成るゲノム性ブロットをクロー
ンＴＭ８６からのニックトランスレートされた挿入部と
ハイブリダイズせしめた。その結果は、抗原特異的Ｔ−
細胞のそれぞれからのＤＮＡはユニークパターンをもた
らすということであった。３種類の異るＢ−細胞リンパ
腫瘍ＤＮＡは肝臓のそれと同じパターンを与え、組み替
えがＴ−細胞にユニークであるらしいことが示された。
る抗原特異性のＴ−細胞についてユニークであるか否か
を試験するため、５種類の抗原特異的Ｔ−細胞ハイブリ
ドーマからのＤＮＡから成るゲノム性ブロットをクロー
ンＴＭ８６からのニックトランスレートされた挿入部と
ハイブリダイズせしめた。その結果は、抗原特異的Ｔ−
細胞のそれぞれからのＤＮＡはユニークパターンをもた
らすということであった。３種類の異るＢ−細胞リンパ
腫瘍ＤＮＡは肝臓のそれと同じパターンを与え、組み替
えがＴ−細胞にユニークであるらしいことが示された。
【００６３】さらに、一連の細胞毒性ラインがＴヘルパ
ー細胞のそれと類似するメッセンジャーＲＮＡを発現し
（ここに記載される遺伝子との交差反応により）、そし
てさらにこれらのゲノム性ＤＮＡの組み替えを示す。異
るＴ−リンパ球において独立して生ずる他のｃＤＮＡク
ローンを得るため、ラムダベクターｇｔ１０（ロナルド
・デービス・スタンフォード大学、スタンフォード、カ
リホルニアから一般に入手可能である）を用いて胸腺細
胞ｃＤＮＡライブラリーを調製した。このライブラリー
を、標準的条件〔マニアチス等、モレキュラー・クロー
ニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）（コー
ルド・スプリング・ハーバー・プレス）コールド・スプ
リング・ハーバー、ニューヨーク（１９８２）〕を用い
てＴＭ８６クローンによりスクリーニングした。
ー細胞のそれと類似するメッセンジャーＲＮＡを発現し
（ここに記載される遺伝子との交差反応により）、そし
てさらにこれらのゲノム性ＤＮＡの組み替えを示す。異
るＴ−リンパ球において独立して生ずる他のｃＤＮＡク
ローンを得るため、ラムダベクターｇｔ１０（ロナルド
・デービス・スタンフォード大学、スタンフォード、カ
リホルニアから一般に入手可能である）を用いて胸腺細
胞ｃＤＮＡライブラリーを調製した。このライブラリー
を、標準的条件〔マニアチス等、モレキュラー・クロー
ニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）（コー
ルド・スプリング・ハーバー・プレス）コールド・スプ
リング・ハーバー、ニューヨーク（１９８２）〕を用い
てＴＭ８６クローンによりスクリーニングした。
【００６４】このライブラリーは、若いＢａｌｂ／Ｃ系
マウスの全胸腺ポリＡ+ ＲＮＡから造成した。ＡＭＶ逆
転写酵素（アマーシャム）を用いてｃＤＮＡを調製し
た。ｃＤＮＡがメチル化されず、これが３′−側上ｍＲ
ＮＡ配列内での開裂を説明した。ＤＮＡポリメラーゼＩ
によりフィルインした後、各端にＥｃｏＲ Ｉリンカー
を連結した。次に、生じた断片を所望のサイズ範囲に画
分し、そしてラムダベクターｇｔ１０のファージレプレ
ッサー遺伝子中に位置する１個のＥｃｏＲ Ｉ制限部位
に挿入した。
マウスの全胸腺ポリＡ+ ＲＮＡから造成した。ＡＭＶ逆
転写酵素（アマーシャム）を用いてｃＤＮＡを調製し
た。ｃＤＮＡがメチル化されず、これが３′−側上ｍＲ
ＮＡ配列内での開裂を説明した。ＤＮＡポリメラーゼＩ
によりフィルインした後、各端にＥｃｏＲ Ｉリンカー
を連結した。次に、生じた断片を所望のサイズ範囲に画
分し、そしてラムダベクターｇｔ１０のファージレプレ
ッサー遺伝子中に位置する１個のＥｃｏＲ Ｉ制限部位
に挿入した。
【００６５】レプレッサー遺伝子へＤＮＡ断片が挿入さ
れるとｃＩ-ファージができるが、このファージは透明
なプラークを形成する。ｃＩ+ファージは濁ったプラー
クを形成するので、ハイブリドファージの選択が可能に
なる。ｇｔ１０ライブラリーから親ファージを除去する
ため、使用された細菌宿主はＣ600ｒｋ-ｍｋ+ｈｆＩで
あった。この宿主に対して、親ファージは非常に低頻度
でプラークを形成する。ｃＩ+親ファージは抑制され、
他方ｃＩ-ハイブリドファージは正常にプレート増殖す
る。
れるとｃＩ-ファージができるが、このファージは透明
なプラークを形成する。ｃＩ+ファージは濁ったプラー
クを形成するので、ハイブリドファージの選択が可能に
なる。ｇｔ１０ライブラリーから親ファージを除去する
ため、使用された細菌宿主はＣ600ｒｋ-ｍｋ+ｈｆＩで
あった。この宿主に対して、親ファージは非常に低頻度
でプラークを形成する。ｃＩ+親ファージは抑制され、
他方ｃＩ-ハイブリドファージは正常にプレート増殖す
る。
【００６６】陽性にハイブリダイズする組換体をｐＵＣ
９〔ビエラ及びメッシング、ジーン（Ｇｅｎｅ）（１９
８２）１９：２５９−２６８〕のＥｃｏＲ Ｉ部位にサ
ブクローン化した。３個の胸腺由来クローンを得、８６
Ｔ１，８６Ｔ３，８６Ｔ５と命名した。部分制限地図を
図１に示す。８６Ｔシリーズの分子はすべて同じ３′位
置で終り、これはコード配列の３′末端の近位の内部Ｅ
ｃｏＲ Ｉ認識部位のためである。５′末端の変化はお
そらくライブラリーの造成中のランダムな鎖停止のため
である。
９〔ビエラ及びメッシング、ジーン（Ｇｅｎｅ）（１９
８２）１９：２５９−２６８〕のＥｃｏＲ Ｉ部位にサ
ブクローン化した。３個の胸腺由来クローンを得、８６
Ｔ１，８６Ｔ３，８６Ｔ５と命名した。部分制限地図を
図１に示す。８６Ｔシリーズの分子はすべて同じ３′位
置で終り、これはコード配列の３′末端の近位の内部Ｅ
ｃｏＲ Ｉ認識部位のためである。５′末端の変化はお
そらくライブラリーの造成中のランダムな鎖停止のため
である。
【００６７】ノーザンブロット中にみられる最大のｍＲ
ＮＡが１３００ｎｔである事実に基づいて、ポリＡテイ
ル分の１５０〜２５０ヌクレオチドを差し引くと１０５
０〜１１５０ｎｔの予想されるクローンサイズを与え
る。したがって８６Ｔ１の９３８ヌクレオチドサイズは
胸腺細胞分子のためのコード領域配列のほとんどを含有
するはずであると結論される。図２及び図３に示すよう
に、８６Ｔ１を完全に配列決定し、他のクローン部位配
列と比較した。
ＮＡが１３００ｎｔである事実に基づいて、ポリＡテイ
ル分の１５０〜２５０ヌクレオチドを差し引くと１０５
０〜１１５０ｎｔの予想されるクローンサイズを与え
る。したがって８６Ｔ１の９３８ヌクレオチドサイズは
胸腺細胞分子のためのコード領域配列のほとんどを含有
するはずであると結論される。図２及び図３に示すよう
に、８６Ｔ１を完全に配列決定し、他のクローン部位配
列と比較した。
【００６８】この比較に基いて、多くの結論を導くこと
ができる： （１）４個のｃＤＮＡクローン中２個の５′末端は同一
でなく、しかし図１において注目されるような例外はあ
るがすべては同一の３′末端を有する。８６Ｔ３の完全
な不変領域が配列決定され、そして１個のヌクレオチド
を除き８６Ｔ１について示されたそれと同一であること
が見出された。この５′可変及び不変領域構造は免疫グ
ロブリンｃＤＮＡクローンに類似する。
ができる： （１）４個のｃＤＮＡクローン中２個の５′末端は同一
でなく、しかし図１において注目されるような例外はあ
るがすべては同一の３′末端を有する。８６Ｔ３の完全
な不変領域が配列決定され、そして１個のヌクレオチド
を除き８６Ｔ１について示されたそれと同一であること
が見出された。この５′可変及び不変領域構造は免疫グ
ロブリンｃＤＮＡクローンに類似する。
【００６９】（２）メチオニン開始コドンにすぐ続い
て、予想されるリーダーポリペプチドに対応する疎水性
アミノ酸のストレッチが存在する。特に、配列Ｌｅｕ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕはカッパーライト鎖リーダーポリペプチ
ド間で共通である。 （３）可変及び不変領域間の１６アミノ酸要素は８６Ｔ
１及び８６Ｔ５間でヌクレオチドレベルにおいて共有さ
れるが、しかし８６Ｔ３又はＴＭ８６とはそうでなく、
独立に調和するＪ−様領域が示唆される。
て、予想されるリーダーポリペプチドに対応する疎水性
アミノ酸のストレッチが存在する。特に、配列Ｌｅｕ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕはカッパーライト鎖リーダーポリペプチ
ド間で共通である。 （３）可変及び不変領域間の１６アミノ酸要素は８６Ｔ
１及び８６Ｔ５間でヌクレオチドレベルにおいて共有さ
れるが、しかし８６Ｔ３又はＴＭ８６とはそうでなく、
独立に調和するＪ−様領域が示唆される。
【００７０】（４）システイン及び他の残基の配置は免
疫グロブリン及び関連分子との有意な構造的類似性を示
唆する。 （５）８６Ｔ３の見かけ上の可変領域は、そうでなけれ
ば正常な不変領域とフレームが整合する多く（５個）の
終止コドンのため、機能的でないようであり、そして事
実、このクローンはリーディングフレーム内に終止コド
ンを有し、この遺伝子のすべての転写物が、少なくとも
胸腺において、活性な分子を生成するのに有効とは限ら
ないことが示される。
疫グロブリン及び関連分子との有意な構造的類似性を示
唆する。 （５）８６Ｔ３の見かけ上の可変領域は、そうでなけれ
ば正常な不変領域とフレームが整合する多く（５個）の
終止コドンのため、機能的でないようであり、そして事
実、このクローンはリーディングフレーム内に終止コド
ンを有し、この遺伝子のすべての転写物が、少なくとも
胸腺において、活性な分子を生成するのに有効とは限ら
ないことが示される。
【００７１】既知蛋白質との進化的関連性についてこの
ｃＤＮＡクローンの配列を分析するため、誘導されたア
ミノ酸配列を、ウイルブル及びリプマン、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・ア
メリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（１９８３）８０：７２６−７３０の迅速比較プロ
グラムを用いてデイホフの蛋白質配列データバンクと比
較した。
ｃＤＮＡクローンの配列を分析するため、誘導されたア
ミノ酸配列を、ウイルブル及びリプマン、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシス・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・ア
メリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ）（１９８３）８０：７２６−７３０の迅速比較プロ
グラムを用いてデイホフの蛋白質配列データバンクと比
較した。
【００７２】デイホフバンクの約２３００の配列から、
２５の配列の相同性が、該データバンクの平均相同性か
らの５標準偏差より大又は同じであった。これらの２５
の配列の内、２４個が免疫グロブリン不変又は領域配列
であり、そして１つがクラスＩＩヒト組織適合性分子で
あった。さらに、８６Ｔ１の可変部分は免疫グロブリン
の可変部分と一致し、他方不変部分は免疫グロブリン不
変領域と一致する。マウス−カッパー可変領域（カバト
等、前掲）中の１８個の不変残基の内１３個が８６Ｔ１
の配列中に存在し、そしてヘビー鎖可変領域の１０個の
不変残基中６個が８６Ｔ１中に存在する。
２５の配列の相同性が、該データバンクの平均相同性か
らの５標準偏差より大又は同じであった。これらの２５
の配列の内、２４個が免疫グロブリン不変又は領域配列
であり、そして１つがクラスＩＩヒト組織適合性分子で
あった。さらに、８６Ｔ１の可変部分は免疫グロブリン
の可変部分と一致し、他方不変部分は免疫グロブリン不
変領域と一致する。マウス−カッパー可変領域（カバト
等、前掲）中の１８個の不変残基の内１３個が８６Ｔ１
の配列中に存在し、そしてヘビー鎖可変領域の１０個の
不変残基中６個が８６Ｔ１中に存在する。
【００７３】免疫グロブリン可変領域のジスルフィドル
ープを形成するシステイン残基間の間隔はカッパー及び
ラムダーライト鎖の両者については典型的には６５アミ
ノ酸であり、そしてヘビー鎖のそれについては７０アミ
ノ酸である。８６Ｔ１可変領域の最も外側の２個のシス
テイン間の距離は中間６８アミノ酸である。異る免疫グ
ロブリンＶ領域を並べてみると、８６Ｔ１のリーダーペ
プチドが位置２０のアスパラギンのすぐ前で開裂される
ことが予測される。
ープを形成するシステイン残基間の間隔はカッパー及び
ラムダーライト鎖の両者については典型的には６５アミ
ノ酸であり、そしてヘビー鎖のそれについては７０アミ
ノ酸である。８６Ｔ１可変領域の最も外側の２個のシス
テイン間の距離は中間６８アミノ酸である。異る免疫グ
ロブリンＶ領域を並べてみると、８６Ｔ１のリーダーペ
プチドが位置２０のアスパラギンのすぐ前で開裂される
ことが予測される。
【００７４】おそらく第１不変領域ドメイン、特に位置
１６４の近傍にわたって、免疫グロブリンとの顕著な相
同性が観察された。この領域において、システインへの
直接５′の配列はライト鎖に相同であり、そして配列
３′はヘビー鎖に相同であることに注目することは興味
あることであった。８６Ｔ１配列の最終システイン（位
置２６０）の近傍においても、カッパー及びラムダライ
ト鎖の両者の実質的な相同性が観察された。
１６４の近傍にわたって、免疫グロブリンとの顕著な相
同性が観察された。この領域において、システインへの
直接５′の配列はライト鎖に相同であり、そして配列
３′はヘビー鎖に相同であることに注目することは興味
あることであった。８６Ｔ１配列の最終システイン（位
置２６０）の近傍においても、カッパー及びラムダライ
ト鎖の両者の実質的な相同性が観察された。
【００７５】４種のクローンの内、８６Ｔ１と８６Ｔ５
の間で１６アミノ酸が共有されたが、しかし配列決定さ
れた他の２個のクローン８６Ｔ３及びＴＭ８６とは共有
されなかった。この相同性は正確に、免疫グロブリン中
の連結（Ｊ）領域要素により占められる領域に属す。８
６Ｔ１及びＴＭ８６の両者の推定上のＪ領域は、すべて
の免疫グロブリンＪ領域との実質的な相同性を示す。サ
イズに関して、推定的Ｊ領域は、ライト鎖（１３アミノ
酸）よりもヘビー鎖（平均１７アミノ酸）と一層関連す
る。
の間で１６アミノ酸が共有されたが、しかし配列決定さ
れた他の２個のクローン８６Ｔ３及びＴＭ８６とは共有
されなかった。この相同性は正確に、免疫グロブリン中
の連結（Ｊ）領域要素により占められる領域に属す。８
６Ｔ１及びＴＭ８６の両者の推定上のＪ領域は、すべて
の免疫グロブリンＪ領域との実質的な相同性を示す。サ
イズに関して、推定的Ｊ領域は、ライト鎖（１３アミノ
酸）よりもヘビー鎖（平均１７アミノ酸）と一層関連す
る。
【００７６】Ｊ要素に加えて、アミノ酸１０３−１１５
間の隣接５′領域は８６Ｔ５及びＴＭ８６の間に実質的
な相同性を有する。特に、これらの２つのｃＤＮＡクロ
ーン間の１７ヌクレオチド及び９ヌクレオチドの同一性
は、ヘビー鎖免疫グロブリンのＤ領域におそらく類似す
るであろう他の可能性ある“ミニ−遺伝子”要素を示唆
する。他方、これらの相同性は、関連可変領域遺伝子の
幾つかの高度に保存された領域を代表するであろう。
間の隣接５′領域は８６Ｔ５及びＴＭ８６の間に実質的
な相同性を有する。特に、これらの２つのｃＤＮＡクロ
ーン間の１７ヌクレオチド及び９ヌクレオチドの同一性
は、ヘビー鎖免疫グロブリンのＤ領域におそらく類似す
るであろう他の可能性ある“ミニ−遺伝子”要素を示唆
する。他方、これらの相同性は、関連可変領域遺伝子の
幾つかの高度に保存された領域を代表するであろう。
【００７７】ヒドロパティシティー（ｈｙｄｒｏｐａｔ
ｈｉｃｉｔｙ）プロット〔カイト及びドーリットル、ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ）（１９８２）１５７：１０５−１３
２〕が行われ、そして次のことが示された：８６Ｔ１分
子は球状蛋白質に特徴的な交互に現われる疎水性−親水
性ストレッチを有し；予想されるリーダーポリペプチド
が疎水性環境中に存在し；トランスメンブラン延長領域
が８６Ｔ１配列の末端に示され、これに続いて、多数の
リンパ球細胞膜マーカーの細胞質部分に特徴的な正電荷
（Ｌｙｓ−ａｒｇ−ｌｙｓ）の連鎖が存在する。
ｈｉｃｉｔｙ）プロット〔カイト及びドーリットル、ジ
ャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ）（１９８２）１５７：１０５−１３
２〕が行われ、そして次のことが示された：８６Ｔ１分
子は球状蛋白質に特徴的な交互に現われる疎水性−親水
性ストレッチを有し；予想されるリーダーポリペプチド
が疎水性環境中に存在し；トランスメンブラン延長領域
が８６Ｔ１配列の末端に示され、これに続いて、多数の
リンパ球細胞膜マーカーの細胞質部分に特徴的な正電荷
（Ｌｙｓ−ａｒｇ−ｌｙｓ）の連鎖が存在する。
【００７８】結論において、８６Ｔ１の構造は１９アミ
ノ酸リーダーポリペプチド、９８アミノ酸可変領域、１
６アミノ酸Ｊ領域並びに１個の球状不変領域ドメインと
これに続くトランスメンブラン及び細胞質蛋白質から成
るそれである。免疫グロブリンとの類似性により、各球
状ドメイン中の２個の最外側システインは連結されてお
り、そして位置２６０の最終システインは受容体ヘテロ
ダイマーの他の鎖に結合するであろう。
ノ酸リーダーポリペプチド、９８アミノ酸可変領域、１
６アミノ酸Ｊ領域並びに１個の球状不変領域ドメインと
これに続くトランスメンブラン及び細胞質蛋白質から成
るそれである。免疫グロブリンとの類似性により、各球
状ドメイン中の２個の最外側システインは連結されてお
り、そして位置２６０の最終システインは受容体ヘテロ
ダイマーの他の鎖に結合するであろう。
【００７９】さらに、８６Ｔ１の合成ペプチド断片に対
して生じた抗血清は、Ｔ−ヘルパーハイブリドーマによ
るＩＬ−２の抗原依存性放出を有意に阻害することが見
出された。従って、上記の座はＴ−リンパ球の少なくと
も幾つかのサブセット中で特異的に組み替えられそして
発現される免疫グロブリン遺伝子の１つのタイプを代理
すること、及びこれはＴ−細胞による抗原の認識におい
て役割を演ずることが結論される。
して生じた抗血清は、Ｔ−ヘルパーハイブリドーマによ
るＩＬ−２の抗原依存性放出を有意に阻害することが見
出された。従って、上記の座はＴ−リンパ球の少なくと
も幾つかのサブセット中で特異的に組み替えられそして
発現される免疫グロブリン遺伝子の１つのタイプを代理
すること、及びこれはＴ−細胞による抗原の認識におい
て役割を演ずることが結論される。
【００８０】つぎにＴH −Ａｇレセプターα−ユニット
の単離及び特定についてのべる。β−サブユニットの単
離及び特定において前に記載された方法は繰り返さな
い。ウシ胸腺ＤＮＡを用いて、標準的方法（マニアチス
等、前掲）により、ポリＡ+ 細胞質２Ｂ４ｍＲＮＡから
ランダムプライム32Ｐ−ラベルｃＤＮＡを合成した。ｃ
ＤＮＡは最初７００ｎｔの平均長さであり、そして２週
間にわたりオートラジオリシス（ａｕｔｏｒａｄｉｏ−
ｌｙｓｉｓ）により約３００〜４００ｎｔに断片化され
た。ＴH ハイブリドーマＣ１０ｍＲＮＡそして次にＴH
様リンパ腫セルラインＥＬ−４からのｍＲＮＡによるハ
イブリダイゼーション及びヒドロキシアパタイト選択を
用いて削減ハイブリダイゼーションを行った。
の単離及び特定についてのべる。β−サブユニットの単
離及び特定において前に記載された方法は繰り返さな
い。ウシ胸腺ＤＮＡを用いて、標準的方法（マニアチス
等、前掲）により、ポリＡ+ 細胞質２Ｂ４ｍＲＮＡから
ランダムプライム32Ｐ−ラベルｃＤＮＡを合成した。ｃ
ＤＮＡは最初７００ｎｔの平均長さであり、そして２週
間にわたりオートラジオリシス（ａｕｔｏｒａｄｉｏ−
ｌｙｓｉｓ）により約３００〜４００ｎｔに断片化され
た。ＴH ハイブリドーマＣ１０ｍＲＮＡそして次にＴH
様リンパ腫セルラインＥＬ−４からのｍＲＮＡによるハ
イブリダイゼーション及びヒドロキシアパタイト選択を
用いて削減ハイブリダイゼーションを行った。
【００８１】次に、２回削減されたプローブをベクター
λｇｔ１０中２Ｂ４ ｃＤＮＡライブラリーのフィルタ
ーにハイブリダイズさせた。約２０，０００のプラーク
をスクリーニングした。７個の陽性を拾い上げ、そして
Ｐ３８８Ｄ１マクロファージラインからのｍＲＮＡによ
り削減した２Ｂ４からの膜結合ポリゾーム性ｍＲＮＡか
ら調製されたオリゴ−ｄＴプライムｃＤＮＡのプローブ
（ＭＢＴH *−Ｍａｃ）により再スクリーニングした。
λｇｔ１０中２Ｂ４ ｃＤＮＡライブラリーのフィルタ
ーにハイブリダイズさせた。約２０，０００のプラーク
をスクリーニングした。７個の陽性を拾い上げ、そして
Ｐ３８８Ｄ１マクロファージラインからのｍＲＮＡによ
り削減した２Ｂ４からの膜結合ポリゾーム性ｍＲＮＡか
ら調製されたオリゴ−ｄＴプライムｃＤＮＡのプローブ
（ＭＢＴH *−Ｍａｃ）により再スクリーニングした。
【００８２】７個の陽性の内３個がＭＢＴH *−Ｍａｃに
ついて陽性であり、そしてこれら３個の内２個は相互に
交差ハイブリダイズした。交差ハイブリダイズするプロ
ーブの１つをＴＴ１１と命名し、そしてさらに研究する
ために選択した。ＴＴ１１ｃＤＮＡクローンをニックト
ランスレーションによりラベルし、そして次のｍＲＮＡ
のパネルを含むノーザンブロットにハイブリダイズせし
めた： ａ）Ｂａｌ１７，Ｂ−細胞リンパ腫； ｂ）Ｍ
１０４ｅ形質細胞腫； ｃ）３Ｔ３線維芽細胞系；
ｄ）Ｐ３３８Ｄ1 、マクロファージ系； ｅ）２Ｂ４；
ｆ）ＥＬ−４；ｇ）ＢＷ５１４７。
ついて陽性であり、そしてこれら３個の内２個は相互に
交差ハイブリダイズした。交差ハイブリダイズするプロ
ーブの１つをＴＴ１１と命名し、そしてさらに研究する
ために選択した。ＴＴ１１ｃＤＮＡクローンをニックト
ランスレーションによりラベルし、そして次のｍＲＮＡ
のパネルを含むノーザンブロットにハイブリダイズせし
めた： ａ）Ｂａｌ１７，Ｂ−細胞リンパ腫； ｂ）Ｍ
１０４ｅ形質細胞腫； ｃ）３Ｔ３線維芽細胞系；
ｄ）Ｐ３３８Ｄ1 、マクロファージ系； ｅ）２Ｂ４；
ｆ）ＥＬ−４；ｇ）ＢＷ５１４７。
【００８３】すべては標準的方法により調製されたポリ
Ａ+ 細胞質ＲＮＡである。２Ｂ４について約１．８ｋｂ
に単一バンドが観察された。他方ＥＬ−４について２個
のバンド、すなわちＥＬ−４レーン中１．８ｋｂに弱い
バンド及び１．３ｋｂに濃い第２バンドが観察された。
ＴＴ１１の配列をコードする遺伝子が組み替えの結果で
あることを証明するため、異るマウス系の肝臓からのゲ
ノムＤＮＡ、種々のＴ細胞系及びＢ細胞リンパ腫Ｌ１０
Ａのハイブリドを、ａ）Ｈｉｎｄ ＩＩＩ； ｂ）Ｅｃ
ｏ ＲＶ； ｃ）Ｘｂａ Ｉ； ｄ）Ｂｇｌ ＩＩで消
化し、そして０．７％アガロースを通して電気泳動し、
ニトロセルロース上にブロットし、そして標準的方法に
よりＴＴ１１の５′側の半分のプローブ（Ｅｃｏ ＲＩ
−Ｅｃｏ ＲＶ、第３図）にハイブリダイズさせた。
Ａ+ 細胞質ＲＮＡである。２Ｂ４について約１．８ｋｂ
に単一バンドが観察された。他方ＥＬ−４について２個
のバンド、すなわちＥＬ−４レーン中１．８ｋｂに弱い
バンド及び１．３ｋｂに濃い第２バンドが観察された。
ＴＴ１１の配列をコードする遺伝子が組み替えの結果で
あることを証明するため、異るマウス系の肝臓からのゲ
ノムＤＮＡ、種々のＴ細胞系及びＢ細胞リンパ腫Ｌ１０
Ａのハイブリドを、ａ）Ｈｉｎｄ ＩＩＩ； ｂ）Ｅｃ
ｏ ＲＶ； ｃ）Ｘｂａ Ｉ； ｄ）Ｂｇｌ ＩＩで消
化し、そして０．７％アガロースを通して電気泳動し、
ニトロセルロース上にブロットし、そして標準的方法に
よりＴＴ１１の５′側の半分のプローブ（Ｅｃｏ ＲＩ
−Ｅｃｏ ＲＶ、第３図）にハイブリダイズさせた。
【００８４】ＦＮ１及びＦＮ１３と命名される２つのレ
ーンはＢＡＬＢ／ｃＸ Ｃ５７Ｂ／６系マウス由来のＫ
ＬＨ反応性ＴH ハイブリドーマ及びＡＫＲ系胸腺系ＢＷ
５１４７からのものであった。親ＤＮＡに対してＦＮ１
のＨｉｎｄ ＩＩＩ消化物中に親バンドが現われ、他方
ＡＫＰ肝臓ＤＮＡのＥｃｏ ＲＶ消化物中の１つのバン
ドがＢＷ５１４７中で消失し、そしてＥｃｏ ＲＩ消化
物は親肝臓ＤＮＡに対してＢＷ５１４７中に現われる親
バンドを示す。Ｃ５７Ｂ／６ＤＮＡのＸｂａＩ消化物に
ついて多形性である２つのバンドが観察される。
ーンはＢＡＬＢ／ｃＸ Ｃ５７Ｂ／６系マウス由来のＫ
ＬＨ反応性ＴH ハイブリドーマ及びＡＫＲ系胸腺系ＢＷ
５１４７からのものであった。親ＤＮＡに対してＦＮ１
のＨｉｎｄ ＩＩＩ消化物中に親バンドが現われ、他方
ＡＫＰ肝臓ＤＮＡのＥｃｏ ＲＶ消化物中の１つのバン
ドがＢＷ５１４７中で消失し、そしてＥｃｏ ＲＩ消化
物は親肝臓ＤＮＡに対してＢＷ５１４７中に現われる親
バンドを示す。Ｃ５７Ｂ／６ＤＮＡのＸｂａＩ消化物に
ついて多形性である２つのバンドが観察される。
【００８５】これらのバンドの両者がＦＮ１ハイブリド
中に存在し、しかしＦＮ１３中には１個のみが存在し、
これは単に染色体の組み替え又は部分的欠失の結果かも
しれない。親に対するＦＮ１中の新バンドがＢｇｌ Ｉ
Ｉ消化物中に観察される。１つの消化物は、すべてのＴ
−細胞ＤＮＡ中の組み替えの証拠を示さないが、ＴＴ１
１がＴ−細胞レセプター様遺伝子であることを信ずるの
に十分なそのような事象徴候が存在する。
中に存在し、しかしＦＮ１３中には１個のみが存在し、
これは単に染色体の組み替え又は部分的欠失の結果かも
しれない。親に対するＦＮ１中の新バンドがＢｇｌ Ｉ
Ｉ消化物中に観察される。１つの消化物は、すべてのＴ
−細胞ＤＮＡ中の組み替えの証拠を示さないが、ＴＴ１
１がＴ−細胞レセプター様遺伝子であることを信ずるの
に十分なそのような事象徴候が存在する。
【００８６】マキサム及びギルバート、メソッド・イン
・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．）（１９
８０）６５：４９９−５６０の方法により、図４に示す
ストラテジーを用いてＴＴ１１ｃＤＮＡクローンを部分
配列決定し、配列を図４及び図５に示した。クローンは
３′−末端においてポリＡのストレッチ（約１５０ｎ
ｔ）により方向付けられ、５′側半分の配列決定が最初
の１２ｎｔ内に開始コドン（ＡＴＧ）を伴う８１０ｎｔ
の長いオープンリーディングフレームを示した。
・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．）（１９
８０）６５：４９９−５６０の方法により、図４に示す
ストラテジーを用いてＴＴ１１ｃＤＮＡクローンを部分
配列決定し、配列を図４及び図５に示した。クローンは
３′−末端においてポリＡのストレッチ（約１５０ｎ
ｔ）により方向付けられ、５′側半分の配列決定が最初
の１２ｎｔ内に開始コドン（ＡＴＧ）を伴う８１０ｎｔ
の長いオープンリーディングフレームを示した。
【００８７】この配列は、ちょうどＴ−細胞レセプター
β−鎖及びサイトウ等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）
（１９８４）３０９：７５７−７６２のＨＤＳ４クロー
ンがそうであるように、Ｉｇリーダーに類似する領域、
可変領域、連結（Ｊ）領域、及び不変領域を示した。こ
の配列の特徴は、不変領域中の推定上のドメイン内シス
テイン（後者の２種のＴ−細胞特異的遺伝子に共通）の
外側の余分のシステイン、前記領域に続くトランスメン
ブラン領域及び細胞質領域であり、これらのすべてはβ
−鎖遺伝子中の分離されたエクソンとしてコードされ
る。異るβ−鎖配列中に見出される４個又は５個と同様
に、４個の可能性あるＮ−リンクグリコシル化部位が存
在する。ほとんどのカルボキシ末端部位はトランスメン
ブラン領域に埋め込まれるので、これらの４個の可能性
ある部位の内３個のみがグリコシル化のために利用可能
のようである。
β−鎖及びサイトウ等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）
（１９８４）３０９：７５７−７６２のＨＤＳ４クロー
ンがそうであるように、Ｉｇリーダーに類似する領域、
可変領域、連結（Ｊ）領域、及び不変領域を示した。こ
の配列の特徴は、不変領域中の推定上のドメイン内シス
テイン（後者の２種のＴ−細胞特異的遺伝子に共通）の
外側の余分のシステイン、前記領域に続くトランスメン
ブラン領域及び細胞質領域であり、これらのすべてはβ
−鎖遺伝子中の分離されたエクソンとしてコードされ
る。異るβ−鎖配列中に見出される４個又は５個と同様
に、４個の可能性あるＮ−リンクグリコシル化部位が存
在する。ほとんどのカルボキシ末端部位はトランスメン
ブラン領域に埋め込まれるので、これらの４個の可能性
ある部位の内３個のみがグリコシル化のために利用可能
のようである。
【００８８】Ｔ−細胞レセプターα−サブユニットのプ
ロセッシングの正確な位置は確定されていないが、免疫
グロブリンタイプに対する類推により、図３に示す＋１
のグルタミンのすぐ前であろう。他方、ＲＥＸ Ｔ−細
胞からのヒトβ−鎖のＮ−末端アミノ酸配列〔アクト
等、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド
・ステイツ（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ）（１９８４）８１：３８５１−３８５５に基い
て、プロセシング点は＋３のアスパラギンのすぐ前かも
しれない。
ロセッシングの正確な位置は確定されていないが、免疫
グロブリンタイプに対する類推により、図３に示す＋１
のグルタミンのすぐ前であろう。他方、ＲＥＸ Ｔ−細
胞からのヒトβ−鎖のＮ−末端アミノ酸配列〔アクト
等、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド
・ステイツ（Ｐｒｏ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ）（１９８４）８１：３８５１−３８５５に基い
て、プロセシング点は＋３のアスパラギンのすぐ前かも
しれない。
【００８９】第１の場所においては、分子量２７．８ｋ
ｄであって、これはアリソン等により観察された分子量
と一致する（彼らは、エンドＦでＮ−リンク糖が除去さ
れたネズミα−鎖から２７ｋｄの分子量を得た）。Ｉｇ
対応物のＶ及びＣ領域との全体的相同性は相対的に低い
（１０〜２６％）。しかしながら、５種類の既知のＩｇ
様遺伝子中に見出される保存された残基の多くが、特に
Ｖ領域及びＪ領域要素中に存在する。ＴＴ１１可変領域
中のシステインの間隔は６５アミノ酸であり、これはラ
イト鎖のそれと同一であり、そして残基３５で始まる配
列“ＷＹＲＱ”及び残基８３−９１における“ＤＳＡ−
Ｙ−ＣＡＶ”もほとんどのＩ−，Ｇ−，Ｔ細胞レセプタ
ーＶ領域において高度に保存される。
ｄであって、これはアリソン等により観察された分子量
と一致する（彼らは、エンドＦでＮ−リンク糖が除去さ
れたネズミα−鎖から２７ｋｄの分子量を得た）。Ｉｇ
対応物のＶ及びＣ領域との全体的相同性は相対的に低い
（１０〜２６％）。しかしながら、５種類の既知のＩｇ
様遺伝子中に見出される保存された残基の多くが、特に
Ｖ領域及びＪ領域要素中に存在する。ＴＴ１１可変領域
中のシステインの間隔は６５アミノ酸であり、これはラ
イト鎖のそれと同一であり、そして残基３５で始まる配
列“ＷＹＲＱ”及び残基８３−９１における“ＤＳＡ−
Ｙ−ＣＡＶ”もほとんどのＩ−，Ｇ−，Ｔ細胞レセプタ
ーＶ領域において高度に保存される。
【００９０】β−鎖及びＨＤＳ４と同様に、Ｊ領域は最
もよく保存された部分である。７／１６残基がβ−鎖共
通配列〔ガスコイグネ等、ネイチュア（Ｎａｔｕｒｅ）
（１９８４）３１０：３８７−８９１〕に相同であり、
９／１６残基がＪT ３（ガスコイグネ等、前掲）と同じ
である。ＴＴ１１はトランスメンブラン領域にＴ細胞レ
セプター配列に特異的な配列“ＩＬＬＬＫ”を有する。
免疫グロブリンスーパーファミリーの他の構成員中には
荷電アミノ酸（リジン又はアルギニン）の保存は一般的
ではなく見出すことができない。
もよく保存された部分である。７／１６残基がβ−鎖共
通配列〔ガスコイグネ等、ネイチュア（Ｎａｔｕｒｅ）
（１９８４）３１０：３８７−８９１〕に相同であり、
９／１６残基がＪT ３（ガスコイグネ等、前掲）と同じ
である。ＴＴ１１はトランスメンブラン領域にＴ細胞レ
セプター配列に特異的な配列“ＩＬＬＬＫ”を有する。
免疫グロブリンスーパーファミリーの他の構成員中には
荷電アミノ酸（リジン又はアルギニン）の保存は一般的
ではなく見出すことができない。
【００９１】確立されてはいないが、α−サブユニット
中にＤ領域が存在するという強い支持が存在するようで
ある。特に、Ｊ領域の“ＳＧＮ”アミノ酸配列のすぐ
５′（β遺伝子コンプレックス中のＪT ３の５′境界を
標示する）に、ヌクレオチド配列“ＧＧＧＧ”が存在す
る。これはβ−サブユニットの遺伝子Ｄ領域に特徴的で
あり、１４の内７はそれらの３′側の３−７Ｇ間の列を
含む〔トネガワ、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９
８３）３０２：５７５−５８１〕。
中にＤ領域が存在するという強い支持が存在するようで
ある。特に、Ｊ領域の“ＳＧＮ”アミノ酸配列のすぐ
５′（β遺伝子コンプレックス中のＪT ３の５′境界を
標示する）に、ヌクレオチド配列“ＧＧＧＧ”が存在す
る。これはβ−サブユニットの遺伝子Ｄ領域に特徴的で
あり、１４の内７はそれらの３′側の３−７Ｇ間の列を
含む〔トネガワ、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒｅ）（１９
８３）３０２：５７５−５８１〕。
【００９２】前に記載したノーザンブロットデータもＤ
領域の存在を支持する。ＥＬ−４レーン中に明瞭に見ら
れそして他のＴH 系中に観察される２つのバンドは、Ｖ
ＤＪＣ転写物〔カバレル等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒ
ｅ）（１９８４）３１０：４２１−４２３〕より３００
ｎｔ短いβ−鎖のＤＪＣ転写物に特徴的である。α−及
びβ−サブユニットのｍＲＮＡの比率を確立するため、
胸腺細胞、ｃｏｎＡ（コンカナバリンＡ）で刺激された
脾臓及び２Ｂ４ｃＤＮＡライブラリーを、ＴＴ１１，Ｈ
ＤＳ４及びＧβプローブより試験した。ＴＴ１１及びＣ
T βはそれぞれ２Ｂ４及びｃｏｎＡ脾臓ライブラリー中
に非常によく似た頻度１：１〜１：３で存在するが、Ｈ
ＤＳ４は非常にまれである。未成熟Ｔ−細胞対成熟Ｔ−
細胞におけるＴＴ１１：β−鎖の比率の実質的な変化が
観察され、Ｂ−細胞においてライト鎖免疫グロブリンの
発現がヘビー鎖のそれに続くのと同様に、ＴＴ１１遺伝
子の発現がβ−鎖の発現の後に生ずることが示唆され
た。
領域の存在を支持する。ＥＬ−４レーン中に明瞭に見ら
れそして他のＴH 系中に観察される２つのバンドは、Ｖ
ＤＪＣ転写物〔カバレル等、ネイチュアー（Ｎａｔｕｒ
ｅ）（１９８４）３１０：４２１−４２３〕より３００
ｎｔ短いβ−鎖のＤＪＣ転写物に特徴的である。α−及
びβ−サブユニットのｍＲＮＡの比率を確立するため、
胸腺細胞、ｃｏｎＡ（コンカナバリンＡ）で刺激された
脾臓及び２Ｂ４ｃＤＮＡライブラリーを、ＴＴ１１，Ｈ
ＤＳ４及びＧβプローブより試験した。ＴＴ１１及びＣ
T βはそれぞれ２Ｂ４及びｃｏｎＡ脾臓ライブラリー中
に非常によく似た頻度１：１〜１：３で存在するが、Ｈ
ＤＳ４は非常にまれである。未成熟Ｔ−細胞対成熟Ｔ−
細胞におけるＴＴ１１：β−鎖の比率の実質的な変化が
観察され、Ｂ−細胞においてライト鎖免疫グロブリンの
発現がヘビー鎖のそれに続くのと同様に、ＴＴ１１遺伝
子の発現がβ−鎖の発現の後に生ずることが示唆され
た。
【００９３】上記の結果から、Ｔ−細胞抗原レセプター
サブユニット及びその断片の発現をもたらす新規なＤＮ
Ａ配列及び造成物が提供されることが明らかである。こ
のＤＮＡ配列は、表面膜蛋白質として保持され得るハイ
ブリド蛋白質を製造するための種々の方法において使用
することができ、リンパ球の由来又はタイプを決定する
ため、Ｔ−細胞からＤＮＡ配列を単離するため、Ｔ−細
胞レセプターサブユニットをコードするＤＮＡ配列を製
造するためのプライマーとして使用するため、又は哺乳
動物宿主からの外来性蛋白質の分泌のために使用するた
めのプローブを得るためにラベルすることができる。
サブユニット及びその断片の発現をもたらす新規なＤＮ
Ａ配列及び造成物が提供されることが明らかである。こ
のＤＮＡ配列は、表面膜蛋白質として保持され得るハイ
ブリド蛋白質を製造するための種々の方法において使用
することができ、リンパ球の由来又はタイプを決定する
ため、Ｔ−細胞からＤＮＡ配列を単離するため、Ｔ−細
胞レセプターサブユニットをコードするＤＮＡ配列を製
造するためのプライマーとして使用するため、又は哺乳
動物宿主からの外来性蛋白質の分泌のために使用するた
めのプローブを得るためにラベルすることができる。
【００９４】Ｔ細胞抗原レセプターの単離、細胞混合物
からＴ細胞の除去、Ｔ細胞の同定、又はＴ細胞に抗体を
イン−ビボ又はイン−ビトロで結合させてそれらの生存
性、増殖、因子の分泌等に影響を与える、等の目的でこ
れらのペプチドを抗体を製造するために使用することが
できる。前記の発明は理解を明確にする目的で説明及び
例により幾分詳細に記載されたが、添付された請求の範
囲内において幾つかの変化及び変法を実施することがで
きることは自明であろう。
からＴ細胞の除去、Ｔ細胞の同定、又はＴ細胞に抗体を
イン−ビボ又はイン−ビトロで結合させてそれらの生存
性、増殖、因子の分泌等に影響を与える、等の目的でこ
れらのペプチドを抗体を製造するために使用することが
できる。前記の発明は理解を明確にする目的で説明及び
例により幾分詳細に記載されたが、添付された請求の範
囲内において幾つかの変化及び変法を実施することがで
きることは自明であろう。
【図１】図１は、Ｔ−細胞抗原レセプター断片の制限地
図であり、陰を付した部分は異るｃＤＮＡクローン間の
主要相同性を示す。配列決定はマリサム及びジルバー
ト、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド
・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９７７）７４：５６０の
方法により行われた。太い矢印は３′−末端ラベル（ク
レノウ）を示し、そして矢印は５′−末端ラベル（ポリ
ヌクレオチドキナーゼ）を示す。
図であり、陰を付した部分は異るｃＤＮＡクローン間の
主要相同性を示す。配列決定はマリサム及びジルバー
ト、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカ
デミー・オブ・サイエンシス・オブ・ザ・ユナイテッド
・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）（１９７７）７４：５６０の
方法により行われた。太い矢印は３′−末端ラベル（ク
レノウ）を示し、そして矢印は５′−末端ラベル（ポリ
ヌクレオチドキナーゼ）を示す。
【図２】図２は、８６ＴＩの完全ヌクレオチド配列及び
他のｃＤＮＡクローンの部分配列を示し、５′−非翻訳
領域（ＵＴ）、リーダーポリペプチド及び可変を示し、
番号付与は８６ＴＩのアミノ酸配列に従い、そして可能
性ある炭水化物結合部位（ＣＨＯ）（Ｎ−Ｘ−Ｓ又はＮ
Ｘ−Ｔ）が示されている。
他のｃＤＮＡクローンの部分配列を示し、５′−非翻訳
領域（ＵＴ）、リーダーポリペプチド及び可変を示し、
番号付与は８６ＴＩのアミノ酸配列に従い、そして可能
性ある炭水化物結合部位（ＣＨＯ）（Ｎ−Ｘ−Ｓ又はＮ
Ｘ−Ｔ）が示されている。
【図３】図３は、８６ＴＩの完全ヌクレオチド配列及び
他のｃＤＮＡクローンの部分配列を示し、連結及び不変
領域を示し、番号付与は８６ＴＩのアミノ酸配列に従
い、そして可能性ある炭水化物結合部位（ＣＨＯ）（Ｎ
−Ｘ−Ｓ又はＮＸ−Ｔ）が示されている。
他のｃＤＮＡクローンの部分配列を示し、連結及び不変
領域を示し、番号付与は８６ＴＩのアミノ酸配列に従
い、そして可能性ある炭水化物結合部位（ＣＨＯ）（Ｎ
−Ｘ−Ｓ又はＮＸ−Ｔ）が示されている。
【図４】図４は、ＴＴ１１ｃＤＮＡクローンの配列決定
ストラテジーを示し、細線はポリヌクレオチドキナーゼ
による５′−末端ラベリングを示し、そして太い線はＤ
ＮＡポリメラーゼＩのクレノウ断片による３′−末端ラ
ベリングを示す。これはさらに、ヌクレオチド配列、推
定されるアミノ酸を示し、そして一般に個々の領域を示
す。“ＣＨＯ”はＮ−リンクグリコシル化のための潜在
的なシグナル配列を示す。
ストラテジーを示し、細線はポリヌクレオチドキナーゼ
による５′−末端ラベリングを示し、そして太い線はＤ
ＮＡポリメラーゼＩのクレノウ断片による３′−末端ラ
ベリングを示す。これはさらに、ヌクレオチド配列、推
定されるアミノ酸を示し、そして一般に個々の領域を示
す。“ＣＨＯ”はＮ−リンクグリコシル化のための潜在
的なシグナル配列を示す。
【図５】図５は、ＴＴ１１ｃＤＮＡクローンのヌクレオ
チド配列、推定されるアミノ酸を示し、そして一般に個
々の領域を示す。“ＣＨＯ”はＮ−リンクグリコシル化
のための潜在的なシグナル配列を示す。
チド配列、推定されるアミノ酸を示し、そして一般に個
々の領域を示す。“ＣＨＯ”はＮ−リンクグリコシル化
のための潜在的なシグナル配列を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 デイビス，マーク エム. アメリカ合衆国，カリフォルニア 94041, マウンテンビュー，フォックスボラフ ド ライブ 422 (72)発明者 ヘドリック，スティーブン エム. アメリカ合衆国，カリフォルニア 92075, ソラナ ビーチ，サンタ ケタ 1031
Claims (5)
- 【請求項１】 ２４から７３２ヌクレオチドである核酸
であって、該核酸またはその相補体はネズミ以外の哺乳
類Ｔ細胞抗原レセプターのβサブユニットの一部をコー
ドし、該Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットは下記の
配列の核酸またはその相補体にハイブリダイゼーション
法によりハイブリダイズできるポリヌクレオチドにより
コードされていることを特徴とする単離された核酸。 【化１】 - 【請求項２】 ２４から７３２ヌクレオチドである核酸
を含む核酸構築体であって、該核酸またはその相補体は
ネズミ以外の哺乳類Ｔ細胞抗原レセプターのβサブユニ
ットの一部をコードし、該Ｔ細胞抗原レセプターβサブ
ユニットは下記の配列の核酸またはその相補体にハイブ
リダイゼーション法によりハイブリダイズできるポリヌ
クレオチドによりコードされていることを特徴とする、
核酸構築体。 【化２】 - 【請求項３】 核酸構築体を含む形質転換宿主細胞であ
って、該核酸構築体が２４から７３２ヌクレオチドであ
る核酸を含み、該核酸またはその相補体はネズミ以外の
哺乳類Ｔ細胞抗原レセプターのβサブユニットの一部を
コードし、該Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットは下
記の配列の核酸またはその相補体にハイブリダイゼーシ
ョン法によりハイブリダイズできるポリヌクレオチドに
よりコードされていることを特徴とする、形質転換宿主
細胞。 【化３】 - 【請求項４】 ２４から７３２ヌクレオチドである単離
された核酸を得る方法であって、該核酸又はその相補体
はネズミ以外の哺乳類Ｔ細胞抗原レセプターのβサブユ
ニットの一部をコードし、該Ｔ細胞抗原レセプターβサ
ブユニットは下記の配列の核酸またはその相補体にハイ
ブリダイゼーション法によりハイブリダイズできるポリ
ヌクレオチドによりコードされており、 【化４】 該方法が下記の工程 （ａ）ネズミ以外の哺乳類Ｔ細胞タンパク質をコードす
る核酸を含有するサンプルを、ハイブリダイゼーション
条件下で、Ｔ細胞抗原レセプターβ−サブユニットの定
常領域をコードするヌクレオチド配列からなる核酸プロ
ーブと接触せしめ、そして（ｂ）（ｉ）前記プローブに
選択的にハイブリダイズし、（ii）Ｔ細胞特異的遺伝子
組換えを示す、核酸ポリマーを単離する、からなること
を特徴とする方法。 - 【請求項５】 ２４から７３２ヌクレオチドである単離
された核酸を得る方法であって、該核酸又はその相補体
はネズミ以外の哺乳類Ｔ細胞抗原レセプターのβサブユ
ニットの一部をコードし、該Ｔ細胞抗原レセプターβサ
ブユニットは下記の配列の核酸またはその相補体にハイ
ブリダイゼーション法によりハイブリダイズできるポリ
ヌクレオチドによりコードされており、 【化５】 該方法が下記の工程 （ａ）Ｔ細胞で発現されている核酸をＢ細胞で発現され
ている核酸又はその相補体とハイブリダイゼーション条
件下で接触させ、（ｂ）ハイブリダイズしなかったＴ細
胞特異的な核酸を増幅し、（ｃ）増幅された、Ｂ細胞と
ハイブリダイズしないＴ細胞特異的核酸であって、Ｔ細
胞特有の遺伝子再構成を示すものを単離する、からなる
ことを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US58533384A | 1984-03-01 | 1984-03-01 | |
| US66380984A | 1984-10-22 | 1984-10-22 | |
| US585333 | 1984-10-22 | ||
| US663809 | 1984-10-22 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60501144A Division JP2783404B2 (ja) | 1984-03-01 | 1985-02-28 | Ｔ・細胞抗原レセプター特異的ポリペプチドβ−サブユニットをコードする核酸 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1146779A true JPH1146779A (ja) | 1999-02-23 |
Family
ID=27079355
Family Applications (7)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5222809A Pending JPH06225765A (ja) | 1984-03-01 | 1993-08-16 | Ｔ−細胞レセプターβ−サブユニットポリペプチド |
| JP7064678A Pending JPH07274976A (ja) | 1984-03-01 | 1995-02-28 | Ｔ−細胞レセプターα−サブユニット−抗原特異的ポリペプチド及び関連ポリヌクレオチド |
| JP8193461A Pending JPH09121871A (ja) | 1984-03-01 | 1996-07-23 | Ｔ細胞抗原レセプターα−サブユニット関連核酸及び抗体 |
| JP9099029A Pending JPH1067675A (ja) | 1984-03-01 | 1997-04-16 | Ｔ細胞抗原特異的レセプターαサブユニットポリペプチド医薬 |
| JP9236123A Pending JPH10114672A (ja) | 1984-03-01 | 1997-09-01 | Ｔ細胞増殖阻害用Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットポリペプチド医薬組成物 |
| JP10011629A Pending JPH10210992A (ja) | 1984-03-01 | 1998-01-23 | Ｔ細胞抗原レセプターαサブユニット関連核酸 |
| JP10053440A Pending JPH1146779A (ja) | 1984-03-01 | 1998-03-05 | 哺乳類Ｔ細胞抗原特異的レセプターβサブユニットをコードする核酸 |
Family Applications Before (6)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5222809A Pending JPH06225765A (ja) | 1984-03-01 | 1993-08-16 | Ｔ−細胞レセプターβ−サブユニットポリペプチド |
| JP7064678A Pending JPH07274976A (ja) | 1984-03-01 | 1995-02-28 | Ｔ−細胞レセプターα−サブユニット−抗原特異的ポリペプチド及び関連ポリヌクレオチド |
| JP8193461A Pending JPH09121871A (ja) | 1984-03-01 | 1996-07-23 | Ｔ細胞抗原レセプターα−サブユニット関連核酸及び抗体 |
| JP9099029A Pending JPH1067675A (ja) | 1984-03-01 | 1997-04-16 | Ｔ細胞抗原特異的レセプターαサブユニットポリペプチド医薬 |
| JP9236123A Pending JPH10114672A (ja) | 1984-03-01 | 1997-09-01 | Ｔ細胞増殖阻害用Ｔ細胞抗原レセプターβサブユニットポリペプチド医薬組成物 |
| JP10011629A Pending JPH10210992A (ja) | 1984-03-01 | 1998-01-23 | Ｔ細胞抗原レセプターαサブユニット関連核酸 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5316925A (ja) |
| EP (3) | EP0174366B1 (ja) |
| JP (7) | JPH06225765A (ja) |
| AT (1) | ATE188251T1 (ja) |
| DE (3) | DE3588219T2 (ja) |
| HK (2) | HK1006855A1 (ja) |
| SG (1) | SG70553A1 (ja) |
| WO (1) | WO1985003947A1 (ja) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4713332A (en) * | 1984-01-13 | 1987-12-15 | The Ontario Cancer Institute | T cell specific CDNA clone |
| US4873190A (en) * | 1984-06-13 | 1989-10-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Heterodimeric T lymphocyte receptor |
| EP0174366B1 (en) | 1984-03-01 | 1994-10-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | T-cell receptor-specific for antigen polypeptides and related polynucleotides |
| US4874845A (en) * | 1984-06-13 | 1989-10-17 | Massachusetts Institute Of Technology | T lymphocyte receptor subunit |
| US5189147A (en) * | 1984-06-13 | 1993-02-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Meterodimeric T lymphocyte receptor antibody |
| ES2093606T3 (es) * | 1987-06-23 | 1997-01-01 | Univ Leland Stanford Junior | Gen del receptor de celulas t localizado en el locus alfa y estructuras artificiales de adn. |
| US5336603A (en) * | 1987-10-02 | 1994-08-09 | Genentech, Inc. | CD4 adheson variants |
| US6710169B2 (en) | 1987-10-02 | 2004-03-23 | Genentech, Inc. | Adheson variants |
| US6413516B1 (en) * | 1989-03-21 | 2002-07-02 | The Immune Response Corporation | Peptides and methods against psoriasis |
| US6464978B1 (en) | 1989-03-21 | 2002-10-15 | The Immune Response Corporation | Vaccination and methods against multiple sclerosis resulting from pathogenic responses by specific T cell populations |
| US5776459A (en) * | 1989-07-19 | 1998-07-07 | Connetics Corporation | TCR V beta 5 peptides |
| US5614192A (en) * | 1989-07-19 | 1997-03-25 | Connective Therapeutics, Inc. | T cell receptor peptides as therapeutics for immune-related disease |
| US6416971B1 (en) * | 1990-05-15 | 2002-07-09 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Soluble single chain T cell receptors |
| US7294712B2 (en) * | 1990-06-04 | 2007-11-13 | Aventis Pharma S.A. | Nucleotide sequences coding for variable regions of β chains of human T lymphocyte receptors, corresponding peptide segments and the diagnostic and therapeutic uses |
| KR100227303B1 (ko) * | 1991-02-12 | 1999-12-01 | 장-끌로드 비에이으포스 | 인체 t 임파구 수용체의 베타 사슬의 가변성 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 대응하는 펩티드 세그먼트 및 진단 및 치료 용도 |
| US5552300A (en) * | 1994-01-13 | 1996-09-03 | T Cell Sciences, Inc. | T cell antigen receptor V region proteins and methods of preparation thereof |
| US6451571B1 (en) | 1994-05-02 | 2002-09-17 | University Of Washington | Thymidine kinase mutants |
| US5688690A (en) * | 1994-09-16 | 1997-11-18 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Human cytotoxic lymphocyte signal transduction surface protein (P38) and monoclonal antibodies thereto |
| US6087096A (en) * | 1995-11-13 | 2000-07-11 | Dau; Peter C. | Method of intrafamily fragment analysis of the T cell receptor α and β chain CDR3 regions |
| EP1029918A4 (en) | 1997-09-26 | 2003-01-02 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | HIV-RECOGNIZING T-KILLER T-LYMPHOCYTE RECEPTOR |
| US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
| DE19816129A1 (de) * | 1998-04-09 | 1999-10-14 | Dolores Schendel | T-Zellrezeptor-Expressionskassette |
| US20020165149A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-11-07 | Kranz David M. | Mutated class II major histocompatibility proteins |
| DE10109855A1 (de) * | 2001-03-01 | 2002-09-12 | Stanislawski Thomas | Polypeptide eines p53-Protein-spezifischen murinen alpha/beta T-Zell Rezeptors, diese kodierende Nukleinsäuren und deren Verwendung |
| US20030199092A1 (en) * | 2002-01-11 | 2003-10-23 | The Regents Of The University Of California | Methods for increasing mRNA half-life in eukaryotic cells |
| CN101098891B (zh) | 2005-01-05 | 2014-05-21 | F-星生物技术研究与开发有限公司 | 分子中互补决定区以外的区域中工程改造了的具有结合特性的合成免疫球蛋白结构域 |
| US20080064631A1 (en) * | 2006-01-13 | 2008-03-13 | Jeffrey Molldrem | T-cell receptors for use in diagnosis and therapy of cancers and autoimmune disease |
| AT503889B1 (de) | 2006-07-05 | 2011-12-15 | Star Biotechnologische Forschungs Und Entwicklungsges M B H F | Multivalente immunglobuline |
| US10155038B2 (en) | 2007-02-02 | 2018-12-18 | Yale University | Cells prepared by transient transfection and methods of use thereof |
| US9249423B2 (en) | 2007-02-02 | 2016-02-02 | Yale University | Method of de-differentiating and re-differentiating somatic cells using RNA |
| WO2008097926A2 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Yale University | Transient transfection with rna |
| WO2009045898A2 (en) * | 2007-09-28 | 2009-04-09 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Assessing t cell repertoires |
| EP2098536A1 (en) | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 4-Antibody AG | Isolation and identification of antigen- or ligand-specific binding proteins |
| EP2113255A1 (en) | 2008-05-02 | 2009-11-04 | f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. | Cytotoxic immunoglobulin |
| JP5829606B2 (ja) * | 2009-06-29 | 2015-12-09 | カリフォルニア・インスティテュート・オブ・テクノロジーＣａｌｉｆｏｒｎｉａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｏｆｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ | 単一細胞からの未知の再配列されたｔ細胞受容体の単離 |
| US10526391B2 (en) | 2014-07-22 | 2020-01-07 | The University Of Notre Dame Du Lac | Molecular constructs and uses thereof |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4468464A (en) * | 1974-11-04 | 1984-08-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Biologically functional molecular chimeras |
| US4363877B1 (en) * | 1977-09-23 | 1998-05-26 | Univ California | Recombinant dna transfer vectors |
| US4356270A (en) * | 1977-11-08 | 1982-10-26 | Genentech, Inc. | Recombinant DNA cloning vehicle |
| US4394443A (en) * | 1980-12-18 | 1983-07-19 | Yale University | Method for cloning genes |
| US4446235A (en) * | 1982-03-22 | 1984-05-01 | Genentech, Inc. | Method for cloning human growth hormone varient genes |
| US4550086A (en) * | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
| US4713332A (en) * | 1984-01-13 | 1987-12-15 | The Ontario Cancer Institute | T cell specific CDNA clone |
| US4923799A (en) * | 1984-02-06 | 1990-05-08 | The Ontario Cancer Institute | T cell specific cDNA clone |
| EP0174366B1 (en) * | 1984-03-01 | 1994-10-26 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | T-cell receptor-specific for antigen polypeptides and related polynucleotides |
| US4874845A (en) * | 1984-06-13 | 1989-10-17 | Massachusetts Institute Of Technology | T lymphocyte receptor subunit |
| US4873190A (en) * | 1984-06-13 | 1989-10-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Heterodimeric T lymphocyte receptor |
-
1985
- 1985-02-28 EP EP85901706A patent/EP0174366B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-28 EP EP94101806A patent/EP0609901A1/en not_active Withdrawn
- 1985-02-28 WO PCT/US1985/000367 patent/WO1985003947A1/en active IP Right Grant
- 1985-02-28 EP EP93112159A patent/EP0570027B1/en not_active Revoked
- 1985-02-28 AT AT93112159T patent/ATE188251T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-02-28 DE DE3588219T patent/DE3588219T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-28 SG SG1996003098A patent/SG70553A1/en unknown
- 1985-02-28 DE DE0570027T patent/DE570027T1/de active Pending
- 1985-02-28 DE DE3584209T patent/DE3584209T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-12-03 US US07/924,395 patent/US5316925A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-08-16 JP JP5222809A patent/JPH06225765A/ja active Pending
-
1994
- 1994-04-29 US US08/235,601 patent/US5840304A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-02-28 JP JP7064678A patent/JPH07274976A/ja active Pending
-
1996
- 1996-07-23 JP JP8193461A patent/JPH09121871A/ja active Pending
-
1997
- 1997-04-16 JP JP9099029A patent/JPH1067675A/ja active Pending
- 1997-09-01 JP JP9236123A patent/JPH10114672A/ja active Pending
-
1998
- 1998-01-23 JP JP10011629A patent/JPH10210992A/ja active Pending
- 1998-03-05 JP JP10053440A patent/JPH1146779A/ja active Pending
- 1998-05-20 US US09/082,593 patent/US6180104B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-22 HK HK98105909A patent/HK1006855A1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-12-23 HK HK98115236A patent/HK1013844A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE188251T1 (de) | 2000-01-15 |
| JPH07274976A (ja) | 1995-10-24 |
| EP0174366A1 (en) | 1986-03-19 |
| JPH1067675A (ja) | 1998-03-10 |
| DE570027T1 (de) | 1994-11-17 |
| WO1985003947A1 (en) | 1985-09-12 |
| JPH09121871A (ja) | 1997-05-13 |
| EP0174366B1 (en) | 1994-10-26 |
| US6180104B1 (en) | 2001-01-30 |
| HK1013844A1 (en) | 1999-09-10 |
| DE3588219T2 (de) | 2000-05-18 |
| EP0174366A4 (en) | 1987-03-26 |
| EP0570027B1 (en) | 1999-12-29 |
| DE3584209D1 (de) | 1994-12-01 |
| SG70553A1 (en) | 2000-02-22 |
| EP0609901A1 (en) | 1994-08-10 |
| US5316925A (en) | 1994-05-31 |
| HK1006855A1 (en) | 1999-03-19 |
| JPH06225765A (ja) | 1994-08-16 |
| DE3584209T2 (de) | 1995-05-04 |
| JPH10114672A (ja) | 1998-05-06 |
| EP0570027A1 (en) | 1993-11-18 |
| DE3588219D1 (de) | 2000-02-03 |
| US5840304A (en) | 1998-11-24 |
| JPH10210992A (ja) | 1998-08-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH1146779A (ja) | 哺乳類Ｔ細胞抗原特異的レセプターβサブユニットをコードする核酸 | |
| US7553939B2 (en) | T cell regulatory genes and methods of use thereof | |
| Long et al. | Complete sequence of an HLA‐dR beta chain deduced from a cDNA clone and identification of multiple non‐allelic DR beta chain genes. | |
| Evans et al. | Structure and expression of a mouse major histocompatibility antigen gene, H-2Ld. | |
| Kronenberg et al. | Rearrangement and transcription of the β-chain genes of the T-cell antigen receptor in different types of murine lymphocytes | |
| CA1340869C (en) | T cell activation markers | |
| JP2690289B2 (ja) | Ｔ細胞抗原受容体に対する抗体 | |
| Kraig et al. | T and B cells that recognize the same antigen do not transcribe similar heavy chain variable region gene segments. | |
| Hood et al. | Genes of the major histocompatibility complex | |
| US7838220B2 (en) | T cell regulatory genes associated with immune disease | |
| JP3195784B2 (ja) | ひとリンパ球抗原複合体のＤＲ−β−鎖部位を暗号化するＤＮＡおよびその判定用生産物 | |
| Ollo et al. | Mouse immunoglobulin allotypes: post-duplication divergence of γ 2a and γ 2b chain genes | |
| JP3067777B2 (ja) | アルファー遺伝子座中に位置するｔ細胞レセプター遺伝子およびｄｎａ構成物 | |
| Jaeger et al. | Nucleotide sequences, polymorphism and gene deletion of T cell receptor beta-chain constant regions of Pan troglodytes and Macaca mulatta. | |
| JP2783404B2 (ja) | Ｔ・細胞抗原レセプター特異的ポリペプチドβ−サブユニットをコードする核酸 | |
| Watanabe et al. | Porcine T-cell receptor β-chain: a genomic sequence covering Dβ1. 1 to Cβ2 gene segments and the diversity of cDNA expressed in piglets including novel alternative splicing products | |
| US5136022A (en) | T cell activation markers | |
| JPH0387185A (ja) | ヒト免疫グロブリン遺伝子関連ｄｎａ断片及び該ｄｎａ断片を用いる診断方法 | |
| WO1997010267A1 (en) | HUMAN SMCY cDNA AND RELATED PRODUCTS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20020311 |