JPH11335273A - インターロイキン４産生抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 経皮吸収性や安定性、安全性、価格に優れ
た、効力の強いインターロイキン４産生抑制剤、抗アレ
ルギー剤及びかゆみ、しわ形成予防治療剤の提供。 【解決手段】 次の一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ¹ は水素原子等を示し、Ａは次の一般式
（２） 【化２】 （Ｒ¹ は前記と同じ）等を示し、Ｂは−ＯＨ等を示
す。）で表されるカルキシン化合物を有効成分とするイ
ンターロイキン４産生抑制剤；抗アレルギー剤；及びか
ゆみ、しわ形成予防治療剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、カルキシン化合物
を有効成分とするインターロイキン４産生抑制剤、抗ア
レルギー剤及びかゆみ、しわ形成予防治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン４は、ヒトまたは動物
の免疫応答細胞であるＴリンパ球より産生される物質で
あり、Ｂリンパ球に作用してＩｇＥなどの抗体の産生を
増強することが知られている（臨床免疫，２７、４５−
５７（１９９５））。ＩｇＥは、アトピー性皮膚炎など
種々のアレルギー性疾患の患者に多く見出される抗体で
あり、これらアレルギー性疾患の発症に深く関与してい
ることが古くから知られている（Arch. Dermatol., 10
3, 575-580(1971)）。また、インターロイキン４はアレ
ルギー疾患における炎症部位への炎症性細胞の浸潤促進
作用を有することも知られている（Cell, 62, 457-467
(1990)）。これらのことから、インターロイキン４は、
アレルギー性疾患の発症に強く関与していると考えられ
る。従って、インターロイキン４の産生を抑制すること
ができれば、従来アレルギー性疾患に行われてきたヒス
タミン遊離抑制剤、ＩｇＥやヒスタミンの作用の抑制剤
などを用いた治療法及び予防法と比較して、より根本か
ら、治療及び予防できると考えられる。

【０００３】さらに、インターロイキン４は皮膚の様々
な非アレルギー的トラブルとも関係があるものと考えら
れる。インターロイキン４は角化細胞に作用してインタ
ーロイキン６の産生を増強する作用を有しており（Ann.
N. Y. Acad. Scl., 557, 454-465(1989)）、皮膚の炎
症に関与すると考えられる。またインターロイキン４に
よって刺激された肥満細胞は、エンドセリンに反応して
ヒスタミン遊離を起こすことが知られている（J. Immun
ol., 154, 1830-1837(1995)）。エンドセリンは紫外線
によって角化細胞から産生されることを考えると、紫外
線によるかゆみへの関与も十分考えられる。インターロ
イキン４は、線維芽細胞に作用してコラーゲン合成能を
修飾することも知られており（J. Clin. Invest., 90,
1479-1485(1992)）、皮膚のしわ及びたるみに関与する
可能性もある。従って、インターロイキン４産生抑制剤
は、アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患の治療及び
予防に有効であることに加えて、その他のインターロイ
キン４の関与するトラブル、すなわち、かゆみ、しわ、
しみ、水虫、口内炎等のトラブルの治療及び予防に有効
であることが期待できる。

【０００４】インターロイキン４の産生抑制物質として
は、一群のスルホニウム誘導体が唯一知られ（Japan.
J. Pharmacol., 61, 27-30(1993), Japan. J. Pharmaco
l., 61, 31-39(1993)）、経口薬に配合されてアトピー
性皮膚炎などのアレルギー疾患やかゆみ等の治療に使用
されている。しかし効力は十分ではない。また、構造上
経皮吸収性が低いため、投与経路が限定されていた。従
って効力が優れ、かつ、経皮吸収性や安定性、安全性の
優れたインターロイキン４産生抑制剤、抗アレルギー
剤、かゆみやしわ形成予防治療剤が必要とされていた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、経皮
吸収性や安定性、効力の強いインターロイキン４産生抑
制剤を提供することにあり、さらには、抗アレルギー
剤、特にアトピー性皮膚炎に対して予防あるいは治療効
果を有する抗アレルギー剤及びかゆみ、しわ形成予防治
療剤を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明者らは、下
記の一般式（１）で表されるカルキシン化合物が、イン
ターロイキン４産生抑制効果を有することを見出した。
さらに、かかるカルキシン化合物が、アレルギー性疾
患、特にアトピー性皮膚炎の予防治療剤及びかゆみ、し
わ形成予防治療剤として有用であることを見出し、本発
明を完成させた。

【０００７】本発明は、次の一般式（１）

【０００８】

【化１３】

【０００９】（式中、Ｒ¹ は水素原子またはＣＨ₃ＣＯ
−を示し、Ａは一般式（２）

【００１０】

【化１４】

【００１１】（Ｒ¹ は前記と同じ）、または一般式
（３）

【００１２】

【化１５】

【００１３】（Ｒ¹ は前記と同じ）を示し、Ｂは−ＯＨ
または−ＯＯＨを示す。）で表されるカルキシン化合物
を有効成分とするインターロイキン４産生抑制剤、抗ア
レルギー剤及びかゆみ、しわ形成予防治療剤を提供する
ものである。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明のインターロイキン４産生
抑制剤及び抗アレルギー剤等の有効成分である、一般式
（１）で表されるカルキシン化合物は、ショウガ科（Zi
ngiberaceae）の植物シュクシャ（Amomum xanthioides
Wallich）やアルピニア ブレファロカリクス（Alpinia
blepharocalyx）から抽出し、製造される。本発明のカ
ルキシン化合物はその抽出方法には特に制限はないが、
例えば上記種子塊をエタノール、ｎ−ヘキサン、エーテ
ル等で抽出し、抽出物をゲル濾過やシリカゲルカラムク
ロマト法、あるいは高速液体クロマト法等で精製して得
られる。

【００１５】このうち次式（４）

【００１６】

【化１６】

【００１７】、次式（５）

【００１８】

【化１７】

【００１９】、次式（６）

【００２０】

【化１８】

【００２１】及び次式（７）

【００２２】

【化１９】

【００２３】各々で表されるものが好ましい。また式
（４）〜（７）で表される化合物を任意の割合で混合し
たものでもよい。例えば式（４）の化合物と式（５）の
化合物は互いに異性体であり、これらを等量混合して用
いてもよい。

【００２４】かくして得られた化合物（１）は、優れた
インターロイキン４産生抑制活性を有し、抗アレルギー
剤、特にアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、気管支
喘息等の予防治療剤として、さらにかゆみ予防治療剤、
特に紫外線により生じるかゆみの予防治療剤、しわ形成
予防治療剤、特に繊維芽細胞のコラーゲン合成能修飾に
よるしわ形成の予防治療剤として有用である。

【００２５】本発明のインターロイキン４産生抑制剤、
抗アレルギー剤及びかゆみ、しわ形成予防治療剤は、細
胞毒性が低く、外用、内服のいずれでも投与できるが、
外用剤、特に皮膚外用剤が好ましい。皮膚外用剤組成物
には、前記化合物（１）の他、通常使用される外用基
剤、他の薬効成分等を配合できる。外用基剤としては、
油性基剤、油／水、水／油型の乳化系基剤及び水を各々
ベースとするいずれでも良い。

【００２６】油性基剤としては、特に制限はなく例え
ば、植物油、動物油、合成油脂肪酸、天然／合成のグリ
セリド等が挙げられる。また、保湿剤、紫外線吸収剤、
アルコール類、キレート類、pH調整剤、防腐剤、増粘
剤、色素、香料等を任意に組み合わせて配合できる。ま
た、上記薬効成分としては特に制限はなく、例えば鎮痛
消炎剤、殺菌消毒剤、ビタミン類、皮膚柔軟化剤等を必
要に応じて適宜使用できる。これら皮膚外用組成物は、
軟膏、クリーム、乳液、化粧水、パック、ファンデーシ
ョン等の形態をとる。前記化合物（１）の配合量、投与
量は、化粧品、医薬品、医薬部外品として通常の範囲内
であれば特に制限はないが、通常は成人１日あたり０．
１〜２０００mgの範囲で用いられる。

【００２７】

【実施例】次に本発明の実施例を示して本発明をさらに
詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定される
ものではない。

【００２８】製造例１ シュクシャ（Amomum xanthioides Wallich）末５kgを９
０％メタノールで抽出し、抽出物を濃縮後ｎ−ヘキサン
で脱脂したのち酢酸エチル転溶区を８０ｇ得た。これを
逆相フラッシュクロマトに供し７５％メタノール画分を
９．５ｇ得た。さらにＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０ク
ロマト、逆相ＨＰＬＣ、Ｓｕｍｉｃｈｉｒａｌ ＯＡ−
４７００カラムを用いて精製し、カルキシン化合物
（４）を０．２５ｇ及び化合物（５）を０．２３ｇ得
た。得られたカルキシン化合物の物性値は以下の通りで
ある。

【００２９】化合物４ FAB-MS(M＋H⁺）583.2、〔α〕_D−23.1°(MeOH, c＝0.0
2)、¹³ C-NMR(125MHz, CD₃OD)：δc32.74, 40.51, 42.24, 4
4.15, 57.03, 72.69,92.88, 107.45, 113.04, 116.25,
116.89, 117.68, 126.70, 128.51,129.28, 130.31, 13
1.07, 132.10, 135.41, 136.44, 137.38, 144.21,156.6
6, 156.96, 161.82, 163.58, 164.58, 167.01, 194.97

【００３０】化合物５ FAB-MS(M＋H⁺）583.2、〔α〕_D＋11.2°(MeOH, c＝0.0
4)、¹³ C-NMR(125MHz, CD₃OD)：δc32.58, 40.45, 42.33, 4
4.15, 56.99, 72.54,92.88, 107.42, 112.98, 116.25,
116.83, 117.65, 126.70, 128.64,129.25, 130.28, 13
1.04, 132.07, 135.35, 136.44, 137.29, 144.18,156.6
3, 156.90, 161.79, 163.55, 164.58, 166.95, 194.94

【００３１】製造例２ アルピニア ブレファロカリクス（Alpinia blepharoca
lyx）の種子粉砕物１０kgを文献記載（Chem. Pharm. Bu
ll., 42(12)2647-2649(1994)）の方法に従って分画、精
製、還元反応を行い、カルキシン化合物（６）を０．１
５ｇ、及び化合物（７）を０．１１ｇ得た。物性値は文
献値と一致した。

【００３２】本発明化合物（１）が、優れたインターロ
イキン４産生抑制活性を有し、抗アレルギー剤、特にア
トピー性皮膚炎に対する予防、治療効果、及びかゆみや
しわ形成の予防治療効果を有する有用な皮膚外用剤等で
ある点につき、試験例で具体的に説明する。

【００３３】試験例１ インターロイキン４産生抑制能
の測定 Ｂａｌｂ／ｃマウスに、２００μｇの蛋白質抗原（カサ
ガイヘモシアニン）をフロイントの完全アジュバントと
共に皮下注射し感作した。７日後、リンパ節を摘出し、
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ
（以下「ＰＢＳ」と略す）中で解して、リンパ球の懸濁
液を調製した。調製したリンパ球を９６穴プレートに１
ウェル当たり４×１０⁵ 細胞の濃度でまき、化合物
（４）、（６）及び（７）を、最終濃度０．０００４％
となる様に添加した１０％牛血清加ＲＰＭＩ １６４０
培地を用いて３７℃、一晩培養した後、蛋白質抗原（カ
サガイヘモシアニン）を添加した（最終濃度１０μｇ／
ml）。さらに３日間の培養の後、その培養上清をＥＬＩ
ＳＡ法による定量に供した。

【００３４】ＥＬＩＳＡ法による定量は、以下のとおり
である。５０μｌの４μｇ／ml抗インターロイキン４抗
体あるいは２μｇ／ml抗インターロイキン２抗体（いず
れもＰＢＳ溶液）をＥＬＩＳＡプレートに加えて４℃で
一晩インキュベートした。０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０
を含むＰＢＳ（以下、「ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ」と略す）
でプレートを洗浄の後、３％Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ
Ａｌｂｕｍｉｎ（以下、「ＢＳＡ」と略す）を含むＰ
ＢＳを加えて、室温で２時間インキュベートし、プレー
トのブロッキングを行った。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄
の後、７０μｌのサンプルすなわち培養上清を添加し、
室温で４時間インキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ
で洗浄の後、１００μｌの２μｇ／mlビオチン標識抗イ
ンターロイキン４抗体あるいはビオチン標識抗インター
ロイキン２抗体（いずれも３％のＢＳＡを含むＰＢＳ溶
液）を加えて室温で４５分間インキュベートした。ＰＢ
Ｓ／Ｔｗｅｅｎで洗浄の後、１００μｌのＡＢＣ溶液
（Avidin-peroxidase とBiotinのComplex、Vectstain
社のＡＢＣキットを使用）を加え、室温で３０分間イン
キュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄の後、１０
０μｌの基質溶液（ＡＢＴＳ）を加えて発色反応を行
い、プレートリーダーで４０５nmの吸光度を測定した。
インターロイキン４及びインターロイキン２産生抑制率
を、溶媒コントロールに対する抑制率を算出し、植物抽
出物のサイトカイン抑制効果を判定した。すなわちイン
ターロイキン４及びインターロイキン２産生抑制率
（％）（以下の表中では、それぞれ「ＩＬ４抑制率」、
「ＩＬ２抑制率」と略記する）は、植物抽出物を含有し
ない抽出溶液のみを加えたときのインターロイキン産生
を何％抑制するかを示すものである。

【００３５】また、化合物（４）、（６）及び（７）の
細胞毒性を調べるため、ＭＴＴアッセイを行った。ＭＴ
Ｔアッセイには、ＭＴＴアッセイキット（ケミコン社）
を使用した。ＭＴＴとは、生細胞のミトコンドリアによ
って分解されて薄い黄色から濃い青色に変化する物質で
あり、ＭＴＴアッセイにより化合物（４）、（６）及び
（７）の細胞毒性がわかる。アッセイは、使用説明書に
従い、溶媒コントロールに対する抑制率を算出し、化合
物（４）、（６）及び（７）の細胞毒性を判定した。Ｍ
ＴＴ分解活性抑制率（％）は、溶媒のみを加えたときの
ＭＴＴ分解活性を何％抑制するかを示す。すなわち、毒
性が高い程抑制率は高い。その結果、化合物（４）、
（６）及び（７）には、表１に示す通り、インターロイ
キン４産生抑制効果が認められた。化合物（４）、
（６）及び（７）のインターロイキン４産生抑制活性は
共に同程度であった。また、化合物（４）、（６）及び
（７）はインターロイキン２産生抑制効果を示さず、抑
制効果はインターロイキン４に特異的であった。さら
に、化合物（４）、（６）及び（７）は細胞毒性が極め
て弱かった。化合物（４）、（６）及び（７）は、イン
ターロイキン４の産生で誘起される、アトピー性皮膚炎
に対する外用剤や抗アレルギー剤として、またかゆみや
しわ形成の予防治療剤として有用である。

【００３６】

【表１】

【００３７】次に化合物（４）〜（７）を用いて、各種
の製剤を調製した実施例を以下に示す。

【００３８】実施例１ 製造例１で得られた化合物（４）を０．１ｇ、コレステ
ロール０．５ｇ、コレステリルイソステアレート１ｇ、
ポリエーテル変性シリコーン１．５ｇ、環状シリコーン
２０ｇ、メチルフェニルポリシロキサン２ｇ、メチルポ
リシロキサン２ｇ、硫酸マグネシウム０．５ｇ、５５％
エタノール５ｇ、カルボキシメチルキサン０．５ｇ、精
製水を混合しクリーム１００ｇとした。

【００３９】実施例２ 製造例１で得られた化合物（５）を０．１５ｇ、製造例
２で得られた化合物（６）を０．０５ｇ、化合物（７）
を０．０５ｇ、コレステロール０．５ｇ、コレステリル
イソステアレート１ｇ、ポリエーテル変性シリコーン
１．５ｇ、環状シリコーン２０ｇ、メチルフェニルポリ
シロキサン２ｇ、メチルポリシロキサン２ｇ、硫酸マグ
ネシウム０．５ｇ、５５％エタノール５ｇ、カルボキシ
メチルキサン０．５ｇ、精製水を混合しクリーム１００
ｇとした。

【００４０】実施例３ 製造例１で得られた化合物（４）を０．１ｇ、製造例２
で得られた化合物（６）を０．０５ｇ、結晶セルロース
５５ｇ、１０％ヒドロキシプロピルセルロースエタノー
ル溶液３５ｇを均一に混合し、捏和した。押出造粒機に
より造粒後乾燥し、篩別して顆粒剤とした。

【００４１】

【発明の効果】一般式（１）で表されるカルキシン化合
物を有効成分とするインターロイキン４産生抑制剤は、
優れたインターロイキン４産生抑制活性を示し、経皮吸
収性や安定性、安全性に優れ、強い効力を有する。また
かかるカルキシン化合物を有効成分とする抗アレルギー
剤及びかゆみ、しわ形成予防治療剤は、アトピー性皮膚
炎等のアレルギー性症状及びかゆみ、しわ形成に対して
予防または治療効果を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 芋川 玄爾 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内 (72)発明者 西澤 義則 栃木県芳賀郡市貝町赤羽2606 花王株式会 社研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒ¹ は水素原子またはＣＨ₃ＣＯ−を示し、Ａ
   は次の一般式（２） 【化２】 （Ｒ¹ は前記と同じ）、または次の一般式（３） 【化３】 （Ｒ¹ は前記と同じ）を示し、Ｂは−ＯＨまたは−ＯＯ
   Ｈを示す。）で表されるカルキシン化合物を有効成分と
   するインターロイキン４産生抑制剤。
2. 【請求項２】 次の一般式（１） 【化４】 （式中、Ｒ¹ は水素原子またはＣＨ₃ＣＯ−を示し、Ａ
   は次の一般式（２） 【化５】 （Ｒ¹ は前記と同じ）、または次の一般式（３） 【化６】 （Ｒ¹ は前記と同じ）を示し、Ｂは−ＯＨまたは−ＯＯ
   Ｈを示す）で表されるカルキシン化合物を有効成分とす
   る抗アレルギー剤。
3. 【請求項３】 アトピー性皮膚炎予防治療剤である請求
   項２記載の抗アレルギー剤。
4. 【請求項４】 外用剤である請求項２または３記載の抗
   アレルギー剤。
5. 【請求項５】 次の一般式（１） 【化７】 （式中、Ｒ¹ は水素原子またはＣＨ₃ＣＯ−を示し、Ａ
   は次の一般式（２） 【化８】 （Ｒ¹ は前記と同じ）、または次の一般式（３） 【化９】 （Ｒ¹ は前記と同じ）を示し、Ｂは−ＯＨまたは−ＯＯ
   Ｈを示す）で表されるカルキシン化合物を有効成分とす
   るかゆみ予防・治療剤。
6. 【請求項６】 次の一般式（１） 【化１０】 （式中、Ｒ¹ は水素原子またはＣＨ₃ＣＯ−を示し、Ａ
   は次の一般式（２） 【化１１】 （Ｒ¹ は前記と同じ）、または次の一般式（３） 【化１２】 （Ｒ¹ は前記と同じ）を示し、Ｂは−ＯＨまたは−ＯＯ
   Ｈを示す）で表されるカルキシン化合物を有効成分とす
   るしわ形成予防・治療剤。