JPH11332564A - 遺伝子トラップ用ベクターと、このベクターを用いた 遺伝子トラップ方法 - Google Patents

遺伝子トラップ用ベクターと、このベクターを用いた 遺伝子トラップ方法

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JPH11332564A
JPH11332564A JP10141952A JP14195298A JPH11332564A JP H11332564 A JPH11332564 A JP H11332564A JP 10141952 A JP10141952 A JP 10141952A JP 14195298 A JP14195298 A JP 14195298A JP H11332564 A JPH11332564 A JP H11332564A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 キイロショウジョウバエの新規遺伝子のクロ
ーニングおよび機能分析を容易にする新規ベクター系、
およびこのベクター系による遺伝子トラップ法を提供す
る。 【解決手段】以下のヌクレオチド配列：人工の共通スプ
ライシング受容部位、合成ストップ／スタート配列、レ
ポーター遺伝子、薬剤耐性遺伝子、キイロショウジョウ
バエの検出可能な表現型の遺伝子、および合成スプライ
シング供与部位をこの順序で有する組換え体プラスミド
であるキイロショウジョウバエの未知遺伝子トラップ用
ベクター、およびベクターを使用するキイロショウジョ
ウバエの未知遺伝子トラップ方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、キイロショウジ
ョウバエ（ドロソフィラ・メラノガステル：Drosophila
melamogaster）の新規遺伝子のクローニングおよび機能
分析を容易にする新規ベクター系、およびこのベクター
系による遺伝子トラッピングに関するものである。
【０００２】
【従来の技術とその課題】トウモロコシやマウスを含む
広範な生物体において、遺伝子トラッピングの応用例が
数多く存在する（Gossler et al. Science, 244:463-46
5, 1989 ）。遺伝子トラッピングのための道具として
は、トラップされた遺伝子のクローニングおよび分析を
目的として種々の型のエンハンサートラップＰエレメン
トベクター（Wilson et al., Genes & Development, 3:
1301-1313, 1989 ）の応用、並びにＧal４／ＵＡＳ転写
アクティベーター系の協力下でのモザイク解析に関する
その使用が効果的であることが証明されている。しかし
ながら、ベクターコンストラクトまたは他のレポーター
遺伝子の発現パターンが１種以上の遺伝子に属するエン
ハンサーにより影響を受ける場合がある。また、エンハ
ンサートラップの挿入により１種以上の隣接遺伝子が機
能発現するかどうかを決定することが困難な場合もあ
る。
【０００３】これらの事情と、その最も近いエクソンが
挿入部位から３０ｋＢ以上離れて位置している遺伝子の
発現変化が変異表現型の原因となる場合があるという事
実とが一緒になって、影響を受けた遺伝子をクローンし
分析することが困難になることがありうる。この出願の
１つの目的は、特別にデザインした人工の調節配列を含
むベクター系、および陽性の組換え体系統を容易にスク
リーニングするための選択方法を提供することである。
より詳しくは、この出願は、広く使用されているエンハ
ンサートラップＰエレメントベクターに比較して、影響
を受けた遺伝子を更に容易にかつ迅速にクローニングす
ることのでききるベクター系を提供することを目的とし
ている。この出願の別の目的は、エンハンサートラップ
系統を用いる多くの場合とは異なり、この発明のベクタ
ー系は、レポーター遺伝子の発現が単一の内因性転写ユ
ニットによってのみ影響され、かつその遺伝子自体の発
現のみを生み出すという理由から、得られたトラップ現
象を容易に検出し、しかもレポーター遺伝子のより特徴
的な（「機能的な」）発現パターンを極めて高い確率で
得ることのできる方法を提供することである。
【０００４】
【発明の開示】この出願の第１の発明は、以下のヌクレ
オチド配列：人工の共通スプライシング受容部位、合成
ストップ／スタート配列、レポーター遺伝子、薬剤耐性
遺伝子、キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の
遺伝子、および合成スプライシング供与部位をこの順序
で有する組換え体プラスミドであるキイロショウジョウ
バエの未知遺伝子トラップ用ベクターである。
【０００５】この第１発明の１つの実施態様は、組換え
体プラスミドとして、pCasper3に由来するプラスミドを
用いることである。第１発明の他の実施態様は、レポー
ター遺伝をＧal４遺伝子、Ｇal４ＤＮＡ結合領域−ｐ５
３融合遺伝子、またはＧal４−ほたるルシフェラーゼ融
合遺伝子とすることである。
【０００６】この第１発明の別の実施態様は、キイロシ
ョウジョウバエにおける検出可能な表現型の遺伝子をミ
ニ白眼遺伝子とすることである。第１発明のさらに他の
実施態様は、薬剤耐性遺伝子をネオマイシン−ホスホト
ランスフェラーゼ遺伝子とし、そのプロモーターをヒー
トショックプロモーターとすることである。
【０００７】この出願の第２の発明は、以下のヌクレオ
チド配列：人工の共通スプライシング受容部位、合成ス
トップ／スタート配列、レポーター遺伝子、薬剤耐性遺
伝子、キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の遺
伝子、および合成スプライシング供与部位をこの順序で
有する組換え体プラスミドであるベクターを使用する方
法であって、以下のステップ： （ａ）白眼遺伝子を持たないハエのゲノムに前記ベクタ
ーを挿入し、（ｂ）薬剤耐性である１次形質転換体を選
択し、（ｃ）１次形質転換体を転移酵素発現系統と交配
させてベクターを他の位置に転移させ、（ｄ）眼の色が
濃いハエを採集することにより２次形質転換体を選択
し、（ｅ）２次形質転換体をＵＡＳ（上流活性化配列）
−ルシフェラーゼ含有系統と交配し、産出したハエにお
けるレポーター遺伝子の発現を測定し、（ｆ）トラップ
された遺伝子をクローニングにより同定し、レポーター
遺伝子およびハエの検出可能な表現型の遺伝子に融合し
たｃＤＮＡ群の配列を決定する、ことからなるキイロシ
ョウジョウバエ未知遺伝子のトラップ方法である。
【０００８】この出願の第３の発明は、以下のヌクレオ
チド配列：人工の共通スプライシング受容部位、合成ス
トップ／スタート配列、レポーター遺伝子としてのＧal
４ＤＮＡ結合領域−ｐ５３融合遺伝子、薬剤耐性遺伝
子、キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の遺伝
子、および合成スプライシング供与部位をこの順序で有
する組換え体プラスミドであるベクターＡ、およびpCas
perhs のポリクローニング部位内にヒートショックプロ
モーターと結合したＧal４活性化領域−ラージＴ抗原融
合遺伝子を有するpCasperhs 由来ベクターＢを使用する
方法であって、（ａ）白眼遺伝子を持たない別個のハエ
のゲノムにベクターＡおよびベクターＢをそれぞれ挿入
し、（ｂ）薬剤耐性であるベクターＡの１次形質転換体
を選択し、眼の色をもつベクターＢの１次形質転換体を
選択し、（ｃ）ベクターＡの１次形質転換体を転移酵素
発現系統と交配してベクターを他の位置に転移させ、
（ｄ）眼の色が濃いハエを採集することによりベクター
Ａの２次形質転換体を選択し、（ｅ）この２次形質転換
体をベクターＢの１次形質転換体と交配してベクターＡ
とベクターＢの両者を有するハエを産出させ、（ｆ）ス
テップ（ｅ）で得たハエをＵＡＳ−ルシフェラーゼ含有
系統と交配して、その結果産出したハエにおけるレポー
ター遺伝子の発現を測定し、（ｇ）トラップされた遺伝
子をクローニングにより同定し、レポーター遺伝子およ
びハエの検出可能な表現型の遺伝子と融合したｃＤＮＡ
群の配列を決定する、ことからなるキイロショウジョウ
バエの未知遺伝子のトラップ方法である。
【０００９】第２および第３発明の実施態様は第１発明
の実施態様に対応するものであり、これらについては以
下の記載でさらに詳細に説明する。
【００１０】
【発明の実施の形態】この発明のベクター構築体は、例
えば、一般的に使用されるＰエレメント形質転換ベクタ
ーであるpCasper3（Pirotta, Vectors: A survey of ml
ecular cloning vectors and their uses, eds. Rodrig
uez, R.L. & Denhardt, D.T., Butterworths, Boston.
437-456, 1998 ）および簡便なＧal４−ＵＡＳ発現系
（Brandand Perrimon, Development, 118:401-415, 199
3）に基づいて構築することができる。
【００１１】すなわち、プロモーターのないＧal４遺伝
子がpCasper3のポリクローニング部位に挿入した。この
Ｇal４遺伝子の上流には人工の共通スプライシング受容
部位および合成ストップ／スタート配列が配置されてお
り、トラップされた遺伝子上流のエキソン（群）から始
まりＧａｌ４の適切なリーディングフレームに至る翻訳
を支配している。
【００１２】ミニ白眼遺伝子は、その３’ＵＴＲ（非翻
訳領域）全部を除去し、人工のスプライシング供与部位
を置き換えることのよって、それ自身のポリアデニル化
部位をもたない断片化遺伝子とした。遺伝子トラップ現
象が生じない場合には、この断片化ミニ白眼遺伝子は目
の色を付与しないと考えられる。そこで、この発明で
は、抗生物質による１次形質転換体の選択を補助するた
めにヒートショックプロモーターを結合したネオマイシ
ン−ホスホトランスフェラーゼ（ｈｓ−ｎｅｏ）遺伝子
を挿入した。
【００１３】図１はジーントラップ構築体（pTrap-hsn
e）の概略地図であり、配列番号１はpTrap-hsneベクタ
ーの全ヌクレオチド配列である。別のジーントラップ構
築体であるpTrap-G4-p53（図２）は、プラスミドpTrap-
hsneのＧal４コード化配列をＧal４ＤＮＡ結合領域−ｐ
５３融合遺伝子（Clontech社製、Matchmaker Two Hybri
d System, #K1605-1）で置き換えることにより作り出し
た。この構築体が、ヒートショックプロモーターを結合
したＧal４活性化領域−ラージＴ抗原を含有する別のベ
クターpCasperhs-G4-LT （図３）と同じハエのゲノム中
に共存すると、機能性Ｇal４分子のアセンブリーは、ｐ
５３−ラージＴ抗原相互作用を通じて、外部からのヒー
トショックにより調節することができる。
【００１４】このようにして、Ｇal４活性の意図的な時
間的制御が可能になる。換言すると、トラップされた遺
伝子のプロモーターによって空間的に決定されているパ
ターンでのＧal４の発現を、いまや外部ヒートショック
により任意の段階で誘導することが可能となる。Ｇal４
発現の検出を容易にするために、別の構築体において
は、Ｇal４遺伝子をＧal４−ほたるルシフェラーゼ融合
遺伝子に置き換えてpTrap-G4-luc（図４）を得た。この
人工遺伝子は、両酵素活性が保存された融合ポリペプチ
ドをコード化している。
【００１５】ルシフェラーゼ活性の測定はルミノアッセ
イにより容易に行うことができるため（Brandes et a
l., Neuron, 16:687-694, 1996）、個々の生きたハエに
おけるＧal４を容易に検出することができる。次に、こ
のベクター系を用いる遺伝子トラップ法である第２およ
び第３発明の最良の形態を詳細に説明する。 （１）スクリーニング：ジーントラップ構築体は、顕微
注入により白眼遺伝子を持たないハエのゲノムに導入す
ることができる。１次形質転換体の選択は、ｈｓ−ｎｅ
ｏ遺伝子により付与されたネオマイシン類似体Ｇ４１８
耐性を使用して行うことが可能である。（ただし、これ
らの構築体を用いて形質転換実験を実施する場合、断片
化ミニ白眼遺伝子は、一般に、ほとんどの場合ｗ−表現
型と区別できる極めて僅かに黄色の眼を生じることにな
るので、Ｇ４１８による選択は不必要となる。）ジーン
トラップ構築体を有する系統の樹立後、デルタ２−３遺
伝因子を発現する転移酵素を含有するジャンプスタータ
ー呼ばれる系統と交配することにより、通常の方法で２
次形質転換体を作成することができる。
【００１６】通常、２次形質転換体の４から８パーセン
トは、祖先のハエに比較して極めて濃い目の色（濃橙色
または赤色）をしている。このことは、構築体がプロモ
ーターの下流に挿入され、ミニ白眼遺伝子が、除去され
た遺伝子の代わりにその遺伝子の転写「促進要素」（例
えばポリアデニル化部位および転写ターミネーター）を
使用していることを示している。これらは、遺伝子トラ
ップ現象の最も有望な候補である可能性が極めて高い。
これらの系統の場合、ベクターはおそらく遺伝子のイン
トロン内かまたは最初のイントロンの上流へ、適切な配
向（すなわち転写方向が「トラップされた遺伝子」と、
またミニ白眼遺伝子（およびＧal４）とも同じ）で５’
ＵＴＲ内に挿入されている。ミニ白眼遺伝子はそれ自身
のプロモーターをもち、それゆえその発現パターンはト
ラップされた遺伝子のそれと全く異なると思われる。
【００１７】これらの陽性系統は、次の段階で、ＵＡＳ
−ルシフェラーゼレポーター遺伝子構築体を保有する
「マーカー」系統と交配することにより検査される。
（pTrap-G4-lucベクターを使用する場合、この段階は不
必要である。）通常、極めて強い相関性が、目の色とＧ
al４発現の間に見られる：目の色が濃い系統の９０％以
上が、ルミノメーターを用いるルシフェラーゼアッセイ
でＧal４を発現していることが証明されている（Brande
s et al., Neuron, 16:687-692, 1996）。（２）クロー
ニング：ジーントラップ構築体を内在性遺伝子のイント
ロン内に挿入する場合、構築体のマーカー遺伝子は、人
工のスプライシング受容および付与部位を使用してｍＲ
ＮＡレベルでスプライシングされ、トラップされた遺伝
子のエキソンになると思われる。さらに正確に述べる
と、Ｇal４のｍＲＮＡは挿入部位の上流に位置するエキ
ソン（群）に連結されるはずであるが、同時にミニ白眼
遺伝子のｍＲＮＡが続くエキソン（群）に融合してトラ
ップされた遺伝子の２重標的化を達成している（図
５）。
【００１８】この特徴は、３’および５’ＲＡＣＥ（Ra
pid Amplification of cDNA Ends：ｃＤＮＡ末端の急速
増幅）法により、トラップされた遺伝子を迅速かつ容易
に同定するのに使用することができる。捕獲したｍＲＮ
Ａの一部分のみのクローニングおよび配列決定でさえ
も、ＢＤＧＰ（Berkeley Drosophia Gemone Project ）
ＥＳＴ（Expressed Sequence Tag）ライブラリー中から
高い確率で相同的なｍＲＮＡを見出すことが可能であ
る。
【００１９】すでにクローニングされている遺伝子の同
定は、同様のエンハンサートラップ構築体により作り出
された突然変異を分析する際には通常は平均して１年以
上の期間を要するのに対して、この発明の方法の場合に
は１週間未満で遺伝子の同定が可能となる場合もある。
Ｐエレメントベクターは、活性遺伝子の５’ＵＴＲまた
は近傍に組み込まれる傾向があることが文献上周知であ
り、またこの発明者も経験した。（この発明者は、これ
らの場合に、もしベクターが最初のイントロンの上流に
挿入され、それ故人工のスプライシング受容部位が使用
できないならば、Ｇal４遺伝子は近くのプロモーターか
ら読み通し転写により発現されることを見出してい
る。） この傾向の利点は、逆転写ＰＣＲもしくはvectoretteＰ
ＣＲによって、または適当な制限消化によって構築体の
ネオマイシン耐性遺伝子を回収するプラスミドレスキュ
ーによって、挿入部位のフランキングゲノム配列のクロ
ーニングと配列決定により利用することができる。この
場合もＢＤＧＰライブラリーを検索して意味のある一致
があるかどうかを調べることができる。 （３）レスキュー：観察された突然変異の表現型が実際
にＰエレメント挿入の結果起こったことを確認するただ
一つの信頼できる方法は、特定の表現型をレスキューす
ることである。予期されることは、表現型（野生型のハ
エとの何かの差異）がＰエレメントの挿入により散布さ
れた遺伝子（群）の発現変化によって起こったというこ
とである。レスキューは、疑いのある遺伝子のｃＤＮＡ
を、その遺伝子自身と同じ空間的および時間的パターン
で最も好ましく発現することによりなされる。
【００２０】予期されたように、第１発明のベクター構
築体は通常、強い表現型を引き起こす。トラップされた
遺伝子はｍＲＮＡレベルで２個の部分に分離し、多くの
場合無効変異をもたらすと思われるので、これは全く意
外ではない。したがって、この方法で得た突然変異はし
ばしばホモ接合性の致死性または不稔性を示す。低次形
態の突然変異は、遺伝子トラップＰエレメント構築体の
不正確な切除により得ることができる。
【００２１】上記のように、Ｇal４の発現は、単にＧal
４遺伝子がそれ自身のプロモーターをもたず共通の融合
ｍＲＮＡを共有するという理由から、トラップされた遺
伝子のそれを正確に反映せざるを得ない。この同一発現
は、トラップされた遺伝子のＵＡＳ結合クローンｃＤＮ
Ａを保有する別のハエとこのハエとを交配することによ
り、突然変異の表現型をレスキューすることを可能とす
る。
【００２２】このようにして、元のホモ接合性無効変異
遺伝子をトラップしたハエ、または無効変異アレル上に
ある種の低次形態アレルをもったハエのトランスヘテロ
接合体をレスキューすることができる。 （４）トラップされた遺伝子の空間的および発生的発現
パターンの測定：トラップされた遺伝子の空間的および
時間的に制御された発現の組織化学的測定もまた、同じ
ハエのゲノムにＵＡＳ−ｌａｃＺ構築体を導入し、ベー
ターガラクトシダーゼに対するＸ−ｇａｌまたは抗体染
色を実施することにより、容易に行うことができる。 （５）モザイク分析：種々の、特徴的な、そしてpTrap-
G4-p53/pCasperhs-G4-TLベクター系の場合には誘導可能
なＧal４発現パターンを持つような、ハエ系統の膨大な
コレクションを保有することは、種々のＧal４発現パタ
ーンをもった突然変異のバックグラウンド上にそれらの
ＵＡＳ構築体を発現させることにより、対象となる全て
の遺伝子のモザイク分析を実行可能にする。
【００２３】この方法は、どこでいつ、特定遺伝子の発
現が突然変異表現型のレスキューのために必要とされる
かという問題に回答を与えるものである。同様に、任意
の遺伝子を種々の異所性パターンで発現させて新規な優
生表現型を生じさせることができる。この方法は、その
特定遺伝子の役割を決定し、それが関与する経路を同定
する助けとなるかもしれない。
【００２４】
【実施例】以下の実施例は、この発明の種々の特徴に関
する具体的実施態様を説明するものである。この実施例
は、いかなる意味でもこの発明の限定を意図するもので
はない。図６は、aop-Ｇal４およびm-white-aop 融合ｍ
ＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ産物の配列決定結果を示す。
【００２５】鋳型は、公知のａｏｐ（anterior open/po
kkuri/yan ）発生遺伝子の最初のイントロン中に組み込
んだベクターpTrap-hsneo を有する陽性遺伝子トラップ
系統から調製した全ＲＮＡを用いた。この配列から、両
方のスプライシングが正確に、予期された場所である人
工調節配列の特定のヌクレオチドで生じたことが確認さ
れた。
【００２６】図７では、陽性遺伝子トラップ系統とＵＡ
Ｓ−ｌａｃＺ構築体を含有するハエとを交配して得たハ
エの脳の種々の部分における特徴的なベ−タ−ガラクト
シダーゼ染色パターン像を示す。
【００２７】
【発明の効果】この発明のベクター系は、観察された表
現型の原因となる遺伝子を容易かつ迅速にクローニング
することを可能とする。さらに、関心がある任意の遺伝
子のＵＡＳ由来のコード配列を使用することにより、そ
の特定の遺伝子を、トラップされた遺伝子と同一のパタ
ーンで発現させることができ、これらの発現は希望する
任意の発生段階に時間的に調節することができる。
【００２８】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：１１２０６塩基対 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：環状 配列の種類：ＤＮＡ 配列の特徴： 存在位置 ：配列の種類 ０００１−０２３７：３’Ｐ配列 ０２３８−０２７４：合成スプライシング受容部位および ストップ／スタート配列 ０２７５−３１６４：Ｇal４遺伝子（コード化領域および３’ＵＴＲ） ３１６５−３４２６：ｈｓｐ７０ターミネーター ３４２７−３４５７：合成連結配列 ３４５８−４９０７：コンプレメンター鎖上のヒートショックプロモーター 結合ネオマイシン耐性遺伝子 ４９０８−８２７５：ミニ白眼遺伝子 ８２７６−８２９９：合成スプライシング供与部位 ８３００−８４４６：５’Ｐ配列 ８４４７−１１２０６：完全ｐＵＣ８配列を含むpCasper3シャトルベクターの 細菌性部分 ０２３８−０２７４：合成ＤＮＡ ３４２７−３４５７：合成ＤＮＡ ４９０８−４９１４：合成ＤＮＡ ８２７６−８２２９：合成ＤＮＡ 配列： CATGATGAAA TAACATAAGG TGGTCCCGTC GGCAAGAGAC ATCCACTTAA CGTATGCTTG 60 CAATAAGTGC GAGTGAAAGG AATAGTATTC TGAGTGTCGT ATTGAGTCTG AGTGAGACAG 120 CGATATGATT GTTGATTAAC CCTTAGCATG TCCGTGGGGT TTGAATTAAC TCATAATATT 180 AATTAGACGA AATTATTTTT AAAGTTTTAT TTTTAATAAT TTGCGAGTAC GCAAAGCTCT 240 TTCTCTTACA GGTCGAATTG ATGTGATGGA TCCAATGAAG CTACTGTCTT CTATCGAACA 300 AGCATGCGAT ATTTGCCGAC TTAAAAAGCT CAAGTGCTCC AAAGAAAAAC CGAAGTGCGC 360 CAAGTGTCTG AAGAACAACT GGGAGTGTCG CTACTCTCCC AAAACCAAAA GGTCTCCGCT 420 GACTAGGGCA CATCTGACAG AAGTGGAATC AAGGCTAGAA AGACTGGAAC AGCTATTTCT 480 ACTGATTTTT CCTCGAGAAG ACCTTGACAT GATTTTGAAA ATGGATTCTT TACAGGATAT 540 AAAAGCATTG TTAACAGGAT TATTTGTACA AGATAATGTG AATAAAGATG CCGTCACAGA 600 TAGATTGGCT TCAGTGGAGA CTGATATGCC TCTAACATTG AGACAGCATA GAATAAGTGC 660 GACATCATCA TCGGAAGAGA GTAGTAACAA AGGTCAAAGA CAGTTGACTG TATCGATTGA 720 CTCGGCAGCT CATCATGATA ACTCCACAAT TCCGTTGGAT TTTATGCCCA GGGATGCTCT 780 TCATGGATTT GATTGGTCTG AAGAGGATGA CATGTCGGAT GGCTTGCCCT TCCTGAAAAC 840 GGACCCCAAC AATAATGGGT TCTTTGGCGA CGGTTCTCTC TTATGTATTC TTCGATCTAT 900 TGGCTTTAAA CCGGAAAATT ACACGAACTC TAACGTTAAC AGGCTCCCGA CCATGATTAC 960 GGATAGATAC ACGTTGGCTT CTAGATCCAC AACATCCCGT TTACTTCAAA GTTATCTCAA 1020 TAATTTTCAC CCCTACTGCC CTATCGTGCA CTCACCGACG CTAATGATGT TGTATAATAA 1080 CCAGATTGAA ATCGCGTCGA AGGATCAATG GCAAATCCTT TTTAACTGCA TATTAGCCAT 1140 TGGAGCCTGG TGTATAGAGG GGGAATCTAC TGATATAGAT GTTTTTTACT ATCAAAATGC 1200 TAAATCTCAT TTGACGAGCA AGGTCTTCGA GTCAGGTTCC ATAATTTTGG TGACAGCCCT 1260 ACATCTTCTG TCGCGATATA CACAGTGGAG GCAGAAAACA AATACTAGCT ATAATTTTCA 1320 CAGCTTTTCC ATAAGAATGG CCATATCATT GGGCTTGAAT AGGGACCTCC CCTCGTCCTT 1380 CAGTGATAGC AGCATTCTGG AACAAAGACG CCGAATTTGG TGGTCTGTCT ACTCTTGGGA 1440 GATCCAATTG TCCCTGCTTT ATGGTCGATC CATCCAGCTT TCTCAGAATA CAATCTCCTT 1500 CCCTTCTTCT GTCGACGATG TGCAGCGTAC CACAACAGGT CCCACCATAT ATCATGGCAT 1560 CATTGAAACA GCAAGGCTCT TACAAGTTTT CACAAAAATC TATGAACTAG ACAAAACAGT 1620 AACTGCAGAA AAAAGTCCTA TATGTGCAAA AAAATGCTTG ATGATTTGTA ATGAGATTGA 1680 GGAGGTTTCG AGACAGGCAC CAAAGTTTTT ACAAATGGAT ATTTCCACCA CCGCTCTAAC 1740 CAATTTGTTG AAGGAACACC CTTGGCTATC CTTTACAAGA TTCGAACTGA AGTGGAAACA 1800 GTTGTCTCTT ATCATTTATG TATTAAGAGA TTTTTTCACT AATTTTACCC AGAAAAAGTC 1860 ACAACTAGAA CAGGATCAAA ATGATCATCA AAGTTATGAA GTTAAACGAT GCTCCATCAT 1920 GTTAAGCGAT GCAGCACAAA GAACTGTTAT GTCTGTAAGT AGCTATATGG ACAATCATAA 1980 TGTCACCCCA TATTTTGCCT GGAATTGTTC TTATTACTTG TTCAATGCAG TCCTAGTACC 2040 CATAAAGACT CTACTCTCAA ACTCAAAATC GAATGCTGAG AATAACGAGA CCGCACAATT 2100 ATTACAACAA ATTAACACTG TTCTGATGCT ATTAAAAAAA CTGGCCACTT TTAAAATCCA 2160 GACTTGTGAA AAATACATTC AAGTACTGGA AGAGGTATGT GCGCCGTTTC TGTTATCACA 2220 GTGTGCAATC CCATTACCGC ATATCAGTTA TAACAATAGT AATGGTAGCG CCATTAAAAA 2280 TATTGTCGGT TCTGCAACTA TCGCCCAATA CCCTACTCTT CCGGAGGAAA ATGTCAACAA 2340 TATCAGTGTT AAATATGTTT CTCCTGGCTC AGTAGGGCCT TCACCTGTGC CATTGAAATC 2400 AGGAGCAAGT TTCAGTGATC TAGTCAAGCT GTTATCTAAC CGTCCACCCT CTCGTAACTC 2460 TCCAGTGACA ATACCAAGAA GCACACCTTC GCATCGCTCA GTCACGCCTT TTCTAGGGCA 2520 ACAGCAACAG CTGCAATCAT TAGTGCCACT GACCCCGTCT GCTTTGTTTG GTGGCGCCAA 2580 TTTTAATCAA AGTGGGAATA TTGCTGATAG CTCATTGTCC TTCACTTTCA CTAACAGTAG 2640 CAACGGTCCG AACCTCATAA CAACTCAAAC AAATTCTCAA GCGCTTTCAC AACCAATTGC 2700 CTCCTCTAAC GTTCATGATA ACTTCATGAA TAATGAAATC ACGGCTAGTA AAATTGATGA 2760 TGGTAATAAT TCAAAACCAC TGTCACCTGG TTGGACGGAC CAAACTGCGT ATAACGCGTT 2820 TGGAATCACT ACAGGGATGT TTAATACCAC TACAATGGAT GATGTATATA ACTATCTATT 2880 CGATGATGAA GATACCCCAC CAAACCCAAA AAAAGAGTAA AATGAATCGT AGATACTGAA 2940 AAACCCCGCA AGTTCACTTC AACTGTGCAT CGTGCACCAT CTCAATTTCT TTCATTTATA 3000 CATCGTTTTG CCTTCTTTTA TGTAACTATA CTCCTCTAAG TTTCAATCTT GGCCATGTAA 3060 CCTCTGATCT ATAGAATTTT TTAAATGACT AGAATTAATG CCCATCTTTT TTTTGGACCT 3120 AAATTCTTCA TGAAAATATA TTACGAGGGC TTATTCAGAA GCTTATCGAT ACCGTCGACT 3180 AAAGCCAAAT AGAAATTATT CAGTTCTGGC TTAAGTTTTT AAAAGTGATA TTATTTATTT 3240 GGTTGTAACC AACCAAAAGA ATGTAAATAA CTAATACATA ATTATGTTAG TTTTAAGTTA 3300 GCAACAAATT GATTTTAGCT ATATTAGCTA CTTGGTTAAT AAATAGAATA TATTTATTTA 3360 AAGATAATTC GTTTTTATTG TCAGGGAGTG AGTTTGCTTA AAAACTCGTT TAGATCCACT 3420 AGAAGGACCG CGGCTCCTCG ACCGGATCGA AAGGAGGGCG AAGAACTCCA GCATGAGATC 3480 CCCGCGCTGG AGGATCATCC AGCCGGCGTC CCGGAAAACG ATTCCGAAGC CCAACCTTTC 3540 ATAGAAGGCG GCGGTGGAAT CGAAATCTCG TGATGGCAGG TTGGGCGTCG CTTGGTCGGT 3600 CATTTCGAAC CCCAGAGTCC CGCTCAGAAG AACTCGTCAA GAAGGCGATA GAAGGCGATG 3660 CGCTGCGAAT CGGGAGCGGC GATACCGTAA AGCACGAGGA AGCGGTCAGC CCATTCGCCG 3720 CCAAGCTCTT CAGCAATATC ACGGGTAGCC AACGCTATGT CCTGATAGCG GTCCGCCACA 3780 CCCAGCCGGC CACAGTCGAT GAATCCAGAA AAGCGGCCAT TTTCCACCAT GATATTCGGC 3840 AAGCAGGCAT CGCCATGGGT CACGACGAGA TCCTCGCCGT CGGGCATGCG CGCCTTGAGC 3900 CTGGCGAACA GTTCGGCTGG CGCGAGCCCC TGATGCTCTT CGTCCAGATC ATCCTGATCG 3960 ACAAGACCGG CTTCCATCCG AGTACGTGCT CGCTCGATGC GATGTTTCGC TTGGTGGTCG 4020 AATGGGCAGG TAGCCGGATC AAGCGTATGC AGCCGCCGCA TTGCATCAGC CATGATGGAT 4080 ACTTTCTCGG CAGGAGCAAG GTGAGATGAC AGGAGATCCT GCCCCGGCAC TTCGCCCAAT 4140 AGCAGCCAGT CCCTTCCCGC TTCAGTGACA ACGTCGAGCA CAGCTGCGCA AGGAACGCCC 4200 GTCGTGGCCA GCCACGATAG CCGCGCTGCC TCGTCCTGCA GTTCATTCAG GGCACCGGAC 4260 AGGTCGGTCT TGACAAAAAG AACCGGGCGC CCCTGCGCTG ACAGCCGGAA CACGGCGGCA 4320 TCAGAGCAGC CGATTGTCTG TTGTGCCCAG TCATAGCCGA ATAGCCTCTC CACCCAAGCG 4380 GCCGGAGAAC CTGCGTGCAA TCCATCTTGT TCAATCATGC GAAACGATCC TCATCCTGTC 4440 TCTTGATCAG ATCCCCTATT CAGAGTTCTC TTCTTGTATT CAATAATTAC TTCTTGGCAG 4500 ATTTCAGTAG TTGCAGTTGA TTTACTTGGT TGCTGGTTAC TTTTAATTGA TTCACTTTAA 4560 CTTGCACTTT ACTGCAGATT GTTTAGCTTG TTCAGCTGCG CTTGTTTATT TGCTTAGCTT 4620 TCGCTTAGCG ACGTGTTCAC TTTGCTTGTT TGAATTGAAT TGTCGCTCCG TAGACGAAGC 4680 GCCTCTATTT ATACTCCGGC GCTCTTTTCG CGAACATTCG AGGCGCGCTC TCTCGAACCA 4740 ACGAGAGCAG TATGCCGTTT ACTGTGTGAC AGAGTGAGAG AGCATTAGTG CAGAGAGGGA 4800 GAGACCCAAA AAGAAAAGAG AGAATAACGA ATAACGGCCA GAGAAATTTC TCGAGTTTTC 4860 TTTCTGCCAA ACAAATGACC TACCACAATA ACCAGTTTGT TTTGGGATCT AGTCCCTAAT 4920 TCTAGTATGT ATGTAAGTTA ATAAAACCCT TTTTTGGAGA ATGTAGATTT AAAAAAACAT 4980 ATTTTTTTTT TATTTTTTAC TGCACTGGAC ATCATTGAAC TTATCTGATC AGTTTTAAAT 5040 TTACTTCGAT CCAAGGGTAT TTGAAGTACC AGGTTCTTTC GATTACCTCT CACTCAAAAT 5100 GACATTCCAC TCAAAGTCAG CGCTGTTTGC CTCCTTCTCT GTCCACAGAA ATATCGCCGT 5160 CTCTTTCGCC GCTGCGTCCG CTATCTCTTT CGCCACCGTT TGTAGCGTTA CCTAGCGTCA 5220 ATGTCCGCCT TCAGTTGCAC TTTGTCAGCG GTTTCGTGAC GAAGCTCCAA GCGGTTTACG 5280 CCATCAATTA AACACAAAGT GCTGTGCCAA AACTCCTCTC GCTTCTTATT TTTGTTTGTT 5340 TTTTGAGTGA TTGGGGTGGT GATTGGTTTT GGGTGGGTAA GCAGGGGAAA GTGTGAAAAA 5400 TCCCGGCAAT GGGCCAAGAG GATCAGGAGC TATTAATTCG CGGAGGCAGC AAACACCCAT 5460 CTGCCGAGCA TCTGAACAAT GTGAGTAGTA CATGTGCATA CATCTTAAGT TCACTTGATC 5520 TATAGGAACT GCGATTGCAA CATCAAATTG TCTGCGGCGT GAGAACTGCG ACCCACAAAA 5580 ATCCCAAACC GCAATCGCAC AAACAAATAG TGACACGAAA CAGATTATTC TGGTAGCTGT 5640 GCTCGCTATA TAAGACAATT TTTAAGATCA TATCATGATC AAGACATCTA AAGGCATTCA 5700 TTTTCGACTA CATTCTTTTT TACAAAAAAT ATAACAACCA GATATTTTAA GCTGATCCTA 5760 GATGCACAAA AAATAAATAA AAGTATAAAC CTACTTCGTA GGATACTTCG TTTTGTTCGG 5820 GGTTAGATGA GCATAACGCT TGTAGTTGAT ATTTGAGATC CCCTATCATT GCAGGGTGAC 5880 AGCGGACGCT TCGCAGAGCT GCATTAACCA GGGCTTCGGG CAGGCCAAAA ACTACGGCAC 5940 GCTCCTGCCA CCCAGTCCGC CGGAGGACTC CGGTTCAGGG AGCGGCCAAC TAGCCGAGAA 6000 CCTCACCTAT GCCTGGCACA ATATGGACAT CTTTGGGGCG GTCAATCAGC CGGGCTCCGG 6060 ATGGCGGCAG CTGGTCAACC GGACACGCGG ACTATTCTGC AACGAGCGAC ACATACCGGC 6120 GCCCAGGAAA CATTTGCTCA AGAACGGTGA GTTTCTATTC GCAGTCGGCT GATCTGTGTG 6180 AAATCTTAAT AAAGGGTCCA ATTACCAATT TGAAACTCAG TTTGCGGCGT GGCCTATCCG 6240 GGCGAACTTT TGGCCGTGAT GGGCAGTTCC GGTGCCGGAA AGACGACCCT GCTGAATGCC 6300 CTTGCCTTTC GATCGCCGCA GGGCATCCAA GTATCGCCAT CCGGGATGCG ACTGCTCAAT 6360 GGCCAACCTG TGGACGCCAA GGAGATGCAG GCCAGGTGCG CCTATGTCCA GCAGGATGAC 6420 CTCTTTATCG GCTCCCTAAC GGCCAGGGAA CACCTGATTT TCCAGGCCAT GGTGCGGATG 6480 CCACGACATC TGACCTATCG GCAGCGAGTG GCCCGCGTGG ATCAGGTGAT CCAGGAGCTT 6540 TCGCTCAGCA AATGTCAGCA CACGATCATC GGTGTGCCCG GCAGGGTGAA AGGTCTGTCC 6600 GGCGGAGAAA GGAAGCGTCT GGCATTCGCC TCCGAGGCAC TAACCGATCC GCCGCTTCTG 6660 ATCTGCGATG AGCCCACCTC CGGACTGGAC TCATTTACCG CCCACAGCGT CGTCCAGGTG 6720 CTGAAGAAGC TGTCGCAGAA GGGCAAGACC GTCATCCTGA CCATTCATCA GCCGTCTTCC 6780 GAGCTGTTTG AGCTCTTTGA CAAGATCCTT CTGATGGCCG AGGGCAGGGT AGCTTTCTTG 6840 GGCACTCCCA GCGAAGCCGT CGACTTCTTT TCCTAGTGAG TTCGATGTGT TTATTAAGGG 6900 TATCTAGCAT TACATTACAT CTCAACTCCT ATCCAGCGTG GGTGCCCAGT GTCCTACCAA 6960 CTACAATCCG GCGGACTTTT ACGTACAGGT GTTGGCCGTT GTGCCCGGAC GGGAGATCGA 7020 GTCCCGTGAT CGGATCGCCA AGATATGCGA CAATTTTGCT ATTAGCAAAG TAGCCCGGGA 7080 TATGGAGCAG TTGTTGGCCA CCAAAAATTT GGAGAAGCCA CTGGAGCAGC CGGAGAATGG 7140 GTACACCTAC AAGGCCACCT GGTTCATGCA GTTCCGGGCG GTCCTGTGGC GATCCTGGCT 7200 GTCGGTGCTC AAGGAACCAC TCCTCGTAAA AGTGCGACTT ATTCAGACAA CGGTGAGTGG 7260 TTCCAGTGGA AACAAATGAT ATAACGCTTA CAATTCTTGG AAACAAATTC GCTAGATTTT 7320 AGTTAGAATT GCCTGATTCC ACACCCTTCT TAGTTTTTTT CAATGAGATG TATAGTTTAT 7380 AGTTTTGCAG AAAATAAATA AATTTCATTT AACTCGCGAA CATGTTGAAG ATATGAATAT 7440 TAATGAGATG CGAGTAACAT TTTAATTTGC AGATGGTTGC CATCTTGATT GGCCTCATCT 7500 TTTTGGGCCA ACAACTCACG CAAGTGGGCG TGATGAATAT CAACGGAGCC ATCTTCCTCT 7560 TCCTGACCAA CATGACCTTT CAAAACGTCT TTGCCACGAT AAATGTAAGT CTTGTTTAGA 7620 ATACATTTGC ATATTAATAA TTTACTAACT TTCTAATGAA TCGATTCGAT TTAGGTGTTC 7680 ACCTCAGAGC TGCCAGTTTT TATGAGGGAG GCCCGAAGTC GACTTTATCG CTGTGACACA 7740 TACTTTCTGG GCAAAACGAT TGCCGAATTA CCGCTTTTTC TCACAGTGCC ACTGGTCTTC 7800 ACGGCGATTG CCTATCCGAT GATCGGACTG CGGGCCGGAG TGCTGCACTT CTTCAACTGC 7860 CTGGCGCTGG TCACTCTGGT GGCCAATGTG TCAACGTCCT TCGGATATCT AATATCCTGC 7920 GCCAGCTCCT CGACCTCGAT GGCGCTGTCT GTGGGTCCGC CGGTTATCAT ACCATTCCTG 7980 CTCTTTGGCG GCTTCTTCTT GAACTCGGGC TCGGTGCCAG TATACCTCAA ATGGTTGTCG 8040 TACCTCTCAT GGTTCCGTTA CGCCAACGAG GGTCTGCTGA TTAACCAATG GGCGGACGTG 8100 GAGCCGGGCG AAATTAGCTG CACATCGTCG AACACCACGT GCCCCAGTTC GGGCAAGGTC 8160 ATCCTGGAGA CGCTTAACTT CTCCGCCGCC GATCTGCCGC TGGACTACGT GGGTCTGGCC 8220 ATTCTCATCG TGAGCTTCCG GGTGCTCGCA TATCTGGCTC TAAGACTTCG GGCCCGACGC 8280 AAGGAGTAGA AGGTAAGTAG CGGCCGCACG TAAGGGTTAA TGTTTTCAAA AAAAAATTCG 8340 TCCGCACACA ACCTTTCCTC TCAACAAGCA AACGTGCACT GAATTTAAGT GTATACTTCG 8400 GTAAGCTTCG GCTATCGACG GGACCACCTT ATGTTATTTC ATCATGGGCC AGACCCACGT 8460 AGTCCAGCGG CAGATCGGCG GCGGAGAAGT TAAGCGTCTC CAGGATGACC TTGCCCGAAC 8520 TGGGGCACGT GGTGTTCGAC GATGTGCAGC TAATTTCGCC CGGCTCCACG TCCGCCCATT 8580 GGTTAATCAG CAGACCCTCG TTGGCGTAAC GGAACCATGA GAGGTACGAC AACCATTTGA 8640 GGTATACTGG CACCGAGCCC GAGTTCAAGA AGAAGGCGTT TTTCCATAGG CTCCGCCCCC 8700 CTGACGAGCA TCACAAAAAT CGACGCTCAA GTCAGAGGTG GCGAAACCCG ACAGGACTAT 8760 AAAGATACCA GGCGTTTCCC CCTGGAAGCT CCCTCGTGCG CTCTCCTGTT CCGACCCTGC 8820 CGCTTACCGG ATACCTGTCC GCCTTTCTCC CTTCGGGAAG CGTGGCGCTT TCTCAATGCT 8880 CACGCTGTAG GTATCTCAGT TCGGTGTAGG TCGTTCGCTC CAAGCTGGGC TGTGTGCACG 8940 AACCCCCCGT TCAGCCCGAC CGCTGCGCCT TATCCGGTAA CTATCGTCTT GAGTCCAACC 9000 CGGTAAGACA CGACTTATCG CCACTGGCAG CAGCCACTGG TAACAGGATT AGCAGAGCGA 9060 GGTATGTAGG CGGTGCTACA GAGTTCTTGA AGTGGTGGCC TAACTACGGC TACACTAGAA 9120 GGACAGTATT TGGTATCTGC GCTCTGCTGA AGCCAGTTAC CTTCGGAAAA AGAGTTGGTA 9180 GCTCTTGATC CGGCAAACAA ACCACCGCTG GTAGCGGTGG TTTTTTTGTT TGCAAGCAGC 9240 AGATTACGCG CAGAAAAAAA GGATCTCAAG AAGATCCTTT GATCTTTTCT ACGGGGTCTG 9300 ACGCTCAGTG GAACGAAAAC TCACGTTAAG GGATTTTGGT CATGAGATTA TCAAAAAGGA 9360 TCTTCACCTA GATCCTTTTA AATTAAAAAT GAAGTTTTAA ATCAATCTAA AGTATATATG 9420 AGTAAACTTG GTCTGACAGT TACCAATGCT TAATCAGTGA GGCACCTATC TCAGCGATCT 9480 GTCTATTTCG TTCATCCATA GTTGCCTGAC TCCCCGTCGT GTAGATAACT ACGATACGGG 9540 AGGGCTTACC ATCTGGCCCC AGTGCTGCAA TGATACCGCG AGACCCACGC TCACCGGCTC 9600 CAGATTTATC AGCAATAAAC CAGCCAGCCG GAAGGGCCGA GCGCAGAAGT GGTCCTGCAA 9660 CTTTATCCGC CTCCATCCAG TCTATTAATT GTTGCCGGGA AGCTAGAGTA AGTAGTTCGC 9720 CAGTTAATAG TTTGCGCAAC GTTGTTGCCA TTGCTACAGG CATCGTGGTG TCACGCTCGT 9780 CGTTTGGTAT GGCTTCATTC AGCTCCGGTT CCCAACGATC AAGGCGAGTT ACATGATCCC 9840 CCATGTTGTG CAAAAAAGCG GTTAGCTCCT TCGGTCCTCC GATCGTTGTC AGAAGTAAGT 9900 TGGCCGCAGT GTTATCACTC ATGGTTATGG CAGCACTGCA TAATTCTCTT ACTGTCATGC 9960 CATCCGTAAG ATGCTTTTCT GTGACTGGTG AGTACTCAAC CAAGTCATTC TGAGAATAGT 10020 GTATGCGGCG ACCGAGTTGC TCTTGCCCGG CGTCAACACG GGATAATACC GCGCCACATA 10080 GCAGAACTTT AAAAGTGCTC ATCATTGGAA AACGTTCTTC GGGGCGAAAA CTCTCAAGGA 10140 TCTTACCGCT GTTGAGATCC AGTTCGATGT AACCCACTCG TGCACCCAAC TGATCTTCAG 10200 CATCTTTTAC TTTCACCAGC GTTTCTGGGT GAGCAAAAAC AGGAAGGCAA AATGCCGCAA 10260 AAAAGGGAAT AAGGGCGACA CGGAAATGTT GAATACTCAT ACTCTTCCTT TTTCAATATT 10320 ATTGAAGCAT TTATCAGGGT TATTGTCTCA TGAGCGGATA CATATTTGAA TGTATTTAGA 10380 AAAATAAACA AATAGGGGTT CCGCGCACAT TTCCCCGAAA AGTGCCACCT GACGTCTAAG 10440 AAACCATTAT TATCATGACA TTAACCTATA AAAATAGGCG TATCACGAGG CCCTTTCGTC 10500 TCGCGCGTTT CGGTGATGAC GGTGAAAACC TCTGACACAT GCAGCTCCCG GAGACGGTCA 10560 CAGCTTGTCT GTAAGCGGAT GCCGGGAGCA GACAAGCCCG TCAGGGCGCG TCAGCGGGTG 10620 TTGGCGGGTG TCGGGGCTGG CTTAACTATG CGGCATCAGA GCAGATTGTA CTGAGAGTGC 10680 ACCATATGCG GTGTGAAATA CCGCACCGAA TCGCGCGGAA CTAACGACAG TCGCTCCAAG 10740 GTCGTCGAAC AAAAGGTGAA TGTGTTGCGG AGAGCGGGTG GGAGACAGCG AAAGAGCAAC 10800 TACGAAACGT GGTGTGGTGG AGGTGAATTA TGAAGAGGGC GCGCGATTTG AAAAGTATGT 10860 ATATAAAAAA TATATCCCGG TGTTTTATGT AGCGATAAAC GAGTTTTTGA TGTAAGGTAT 10920 GCAGGTGTGT AAGTCTTTTG GTTAGAAGAC AAATCCAAAG TCTACTTGTG GGGATGTTCG 10980 AAGGGGAAAT ACTTGTATTC TATAGGTCAT ATCTTGTTTT TATTGGCACA AATATAATTA 11040 CATTAGCTTT TTGAGGGGGC AATAAACAGT AAACACGATG GTAATAATGG TAAAAAAAAA 11100 AACAAGCAGT TATTTCGGAT ATATGTCGGC TACTCCTTGC GTCGGGCCCG AAGTCTTAGA 11160 GCCAGATATG CGAGCACCCG GAAGCTCACG ATGAGAATGG CCAGAC 11206
【図面の簡単な説明】
【図１】この発明のベクターであるpTrap-hsneo の概略
地図である。
【図２】この発明のベクターであるpTrap-G4-p53の概略
地図である。
【図３】この発明のベクターであるpCasperhs-G4-LT の
概略地図である。
【図４】この発明のベクターであるpTrap-G4-lucの概略
地図である。
【図５】クローニングのためにこの発明のベクターが挿
入されたハエゲノムの概略図である。
【図６】aop-Ｇal４およびm-white-aop 融合ｍＲＮＡの
ＲＴ−ＰＣＲ産物の配列決定結果である。
【図７】陽性遺伝子トラップ系統とＵＡＳ−ｌａｃＺ構
築体を含有するハエとを交配して得たハエ脳の種々の部
分における特徴的なベーターガラクトシダーゼ染色パタ
ーン像である。

Claims (19)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下のヌクレオチド配列：人工の共通ス
    プライシング受容部位、 合成ストップ／スタート配列、 レポーター遺伝子、 薬剤耐性遺伝子、 キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の遺伝子、
    および合成スプライシング供与部位をこの順序で有する
    組換え体プラスミドであるキイロショウジョウバエの未
    知遺伝子トラップ用ベクター。
  2. 【請求項２】 組換え体プラスミドが、pCasper3に由来
    するプラスミドである請求項１のベクター。
  3. 【請求項３】 レポーター遺伝子が、Ｇal４遺伝子であ
    る請求項１または２のベクター。
  4. 【請求項４】 配列番号１のヌクレオチド配列を有する
    請求項３のベクター。
  5. 【請求項５】 レポーター遺伝子が、Ｇal４ＤＮＡ結合
    領域−ｐ５３融合遺伝子である請求項１または２のベク
    ター。
  6. 【請求項６】 レポーター遺伝子が、Ｇal４−ほたるル
    シフェラーゼ融合遺伝子である請求項１または２のベク
    ター。
  7. 【請求項７】 キイロショウジョウバエの検出可能な表
    現型の遺伝子が、ミニ白眼遺伝子である請求項１ないし
    ６のいずれかのベクター。
  8. 【請求項８】 薬剤耐性遺伝子が、ネオマイシン−ホス
    ホトランスフェラーゼ遺伝子であり、そのプロモーター
    がヒートショックプロモーターである請求項１ないし７
    のいずれかのベクター。
  9. 【請求項９】 pCasperhs のポリクローニング部位内
    に、ヒートショックプロモーターと結合したＧal４活性
    化領域−ラージＴ抗原融合遺伝子を有するpCasperhs 由
    来ベクター。
  10. 【請求項１０】 以下のヌクレオチド配列：人工の共通
    スプライシング受容部位、 合成ストップ／スタート配列、 レポーター遺伝子、 薬剤耐性遺伝子、 キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の遺伝子、
    および合成スプライシング供与部位をこの順序で有する
    組換え体プラスミドであるベクターを使用する方法であ
    って、以下のステップ： （ａ）白眼遺伝子を持たないハエのゲノムに前記ベクタ
    ーを挿入し、 （ｂ）薬剤耐性である１次形質転換体を選択し、 （ｃ）１次形質転換体を転移酵素発現系統と交配させて
    ベクターを他の位置に転移させ、 （ｄ）眼の色が濃いハエを採集することにより２次形質
    転換体を選択し、 （ｅ）２次形質転換体をＵＡＳ（上流活性化配列）−ル
    シフェラーゼ含有系統と交配し、産出したハエにおける
    レポーター遺伝子の発現を測定し、 （ｆ）トラップされた遺伝子をクローニングにより同定
    し、レポーター遺伝子およびハエの検出可能な表現型の
    遺伝子に融合したｃＤＮＡ群の配列を決定する、ことか
    らなるキイロショウジョウバエ未知遺伝子のトラップ方
    法
  11. 【請求項１１】 組換え体プラスミドが、pCasper3に由
    来するプラスミドである請求項１０の方法。
  12. 【請求項１２】 ベクターのレポーター遺伝子が、Ｇal
    ４遺伝子であり、ステップ（ｅ）においてＧal４の発現
    を測定する請求項１０または１１の方法。
  13. 【請求項１３】 ベクターのレポーター遺伝子がＧal４
    −ほたるルシフェラーゼ融合遺伝子であり、ステップ
    （ｅ）において２次形質転換体をＵＡＳ−ルシフェラー
    ゼ含有系統と交配せずにこの融合遺伝子の発現を測定す
    る請求項１０または１１の方法。
  14. 【請求項１４】 キイロショウジョウバエの検出可能な
    表現型の遺伝子がミニ白眼遺伝子であり、ステップ
    （ｆ）でレポーター遺伝子およびミニ白眼遺伝子に融合
    したｃＤＮＡをクローニングし、配列決定する請求項１
    ０ないし１４のいずれかの方法。
  15. 【請求項１５】 薬剤耐性遺伝子がネオマイシン−ホス
    ホトランスフェラーゼ遺伝子、そのプロモーターがヒー
    トショックプロモーターであり、ステップ（ｂ）でＧ４
    １８耐性形質転換体を選択する請求項１０ないし１５の
    いずれかの方法。
  16. 【請求項１６】 以下のヌクレオチド配列：人工の共通
    スプライシング受容部位、 合成ストップ／スタート配列、 レポーター遺伝子としてのＧal４ＤＮＡ結合領域−ｐ５
    ３融合遺伝子、 薬剤耐性遺伝子、 キイロショウジョウバエの検出可能な表現型の遺伝子、
    および合成スプライシング供与部位をこの順序で有する
    組換え体プラスミドであるベクターＡ、およびpCasperh
    s のポリクローニング部位内にヒートショックプロモー
    ターと結合したＧal４活性化領域−ラージＴ抗原融合遺
    伝子を有するpCasperhs 由来ベクターＢを使用する方法
    であって、 （ａ）白眼遺伝子を持たない別個のハエのゲノムにベク
    ターＡおよびベクターＢをそれぞれ挿入し、 （ｂ）薬剤耐性であるベクターＡの１次形質転換体を選
    択し、眼の色をもつベクターＢの１次形質転換体を選択
    し、 （ｃ）ベクターＡの１次形質転換体を転移酵素発現系統
    と交配してベクターを他の位置に転移させ、 （ｄ）眼の色が濃いハエを採集することによりベクター
    Ａの２次形質転換体を選択し、 （ｅ）この２次形質転換体をベクターＢの１次形質転換
    体と交配してベクターＡとベクターＢの両者を有するハ
    エを産出させ、 （ｆ）ステップ（ｅ）で得たハエをＵＡＳ−ルシフェラ
    ーゼ含有系統と交配して、その結果産出したハエにおけ
    るレポーター遺伝子の発現を測定し、 （ｇ）トラップされた遺伝子をクローニングにより同定
    し、レポーター遺伝子およびハエの検出可能な表現型の
    遺伝子と融合したｃＤＮＡ群の配列を決定する、ことか
    らなるキイロショウジョウバエの未知遺伝子のトラップ
    方法。
  17. 【請求項１７】 ベクターＡがpCasper3に由来するプラ
    スミドである請求項１６の方法。
  18. 【請求項１８】 キイロショウジョウバエの検出可能な
    表現型の遺伝子がミニ白眼遺伝子であり、ステップ
    （ｇ）でレポーター遺伝子およびミニ白眼遺伝子と融合
    したｃＤＮＡ群をクローニングし、配列決定する請求項
    １６または１７の方法。
  19. 【請求項１９】 薬剤耐性遺伝子がネオマイシン−ホス
    ホトランスフェラーゼ遺伝子、そのプロモーターがヒー
    トショックプロモーターであり、ステップ（ｂ）でＧ４
    １８耐性形質転換体を選択する請求項１６ないし１８の
    いずれかの方法。
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