JPH11310536A - 医薬組成物 - Google Patents
医薬組成物Info
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- JPH11310536A JPH11310536A JP10250922A JP25092298A JPH11310536A JP H11310536 A JPH11310536 A JP H11310536A JP 10250922 A JP10250922 A JP 10250922A JP 25092298 A JP25092298 A JP 25092298A JP H11310536 A JPH11310536 A JP H11310536A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- isoepoxybuterixin
- pharmaceutical composition
- extract
- column chromatography
- active ingredient
- Prior art date
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- Pending
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒュウガトウキ抽出エキス及び含有化学物質
を有効成分とする医薬組成物を提供する。 【解決手段】 ヒュウガトウキの地下茎をメタノールで
還流抽出し、濾液を減圧濃縮してメタノールエキスを得
る。これをＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーで粗分
画後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相ＯＤ
Ｓカラムクロマトグラフィーを用いて分離、精製を行
い、イソエポキシブテリキシンを得る。イソエポキシブ
テリキシンは既知化学物質ではあるが、これまで肝障害
における血清中のトランスアミラーゼ（ｓ−ＧＯＴ、ｓ
−ＧＰＴ）上昇抑制作用は知られていなかった。本発明
のイソエポキシブテリキシン抗肝炎剤は、天然物由来で
副作用も少なく、高い産業上の利用性を有する。
を有効成分とする医薬組成物を提供する。 【解決手段】 ヒュウガトウキの地下茎をメタノールで
還流抽出し、濾液を減圧濃縮してメタノールエキスを得
る。これをＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーで粗分
画後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相ＯＤ
Ｓカラムクロマトグラフィーを用いて分離、精製を行
い、イソエポキシブテリキシンを得る。イソエポキシブ
テリキシンは既知化学物質ではあるが、これまで肝障害
における血清中のトランスアミラーゼ（ｓ−ＧＯＴ、ｓ
−ＧＰＴ）上昇抑制作用は知られていなかった。本発明
のイソエポキシブテリキシン抗肝炎剤は、天然物由来で
副作用も少なく、高い産業上の利用性を有する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒュウガトウキ抽
出物および／または圧搾物、ならびにこのエキスから単
離された化合物を有効成分とする医薬組成物に関するも
のである。
出物および／または圧搾物、ならびにこのエキスから単
離された化合物を有効成分とする医薬組成物に関するも
のである。
【０００２】ヒュウガトウキ（Angelica furcijuga Kit
agawa）は、セリ科植物(Umbelliferae)のシシウド属（A
ngelica L.）に属する植物であり、宮崎県から大分県の
南部に分布する九州特産で、丘陵や山地のやや乾いた草
地に生える多年草である。最近では、近似した種の植物
であるイヌトウキ(Angelica shikokiana Makino)を有効
成分とする肝機能改善用あるいは抗高脂血症用医薬組成
物が知られている（特公平４−３３６５号）。また、イ
ヌトウキ含有化学物質としては、数種のクマリンと二種
のステロールが知られている。このクマリン系化合物、
イソエポキシブテリキシンについては、ヒト白血球を用
いる実験において、抗アレルギー、抗炎症剤が知られて
いる。（特公平５−４８２３３号公報）。
agawa）は、セリ科植物(Umbelliferae)のシシウド属（A
ngelica L.）に属する植物であり、宮崎県から大分県の
南部に分布する九州特産で、丘陵や山地のやや乾いた草
地に生える多年草である。最近では、近似した種の植物
であるイヌトウキ(Angelica shikokiana Makino)を有効
成分とする肝機能改善用あるいは抗高脂血症用医薬組成
物が知られている（特公平４−３３６５号）。また、イ
ヌトウキ含有化学物質としては、数種のクマリンと二種
のステロールが知られている。このクマリン系化合物、
イソエポキシブテリキシンについては、ヒト白血球を用
いる実験において、抗アレルギー、抗炎症剤が知られて
いる。（特公平５−４８２３３号公報）。
【０００３】本発明にかかるヒュウガトウキは、以前は
上記したイヌトウキと誤認されていたが、１９７１年北
川政夫により新種であると発表され、その後の栽培にお
ける観察実験による比較で、異なる種であることが証明
されている。（宮崎産業経営大学研究紀要第５巻第１号
／１９９３年１月）（宮崎県地方史研究紀要第１８輯／
宮崎県立図書館／平成４年３月）
上記したイヌトウキと誤認されていたが、１９７１年北
川政夫により新種であると発表され、その後の栽培にお
ける観察実験による比較で、異なる種であることが証明
されている。（宮崎産業経営大学研究紀要第５巻第１号
／１９９３年１月）（宮崎県地方史研究紀要第１８輯／
宮崎県立図書館／平成４年３月）
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、上記した
イヌトウキの薬理活性に着目し、同属の植物であるヒュ
ウガトウキについて鋭意研究した結果、医薬組成物とし
て有用であることを確認し、本発明に至った。すなわ
ち、ヒュウガトウキからの抽出エキスにつき精査した結
果、ヒュウガトウキ抽出エキス及び含有クマリン化合物
であるイソエポキシブテリキシンに、マウス皮膚発癌実
験系で有意に皮膚腫瘍の減少を確認した。また、同様に
ヒュウガトウキ抽出エキス及びイソエポキシブテリキシ
ンにつき、免疫反応を介した急性肝障害モデルであるＤ
−ガラクトサミンとリポポリサッカライド（大腸菌由来
菌体内毒素）を併用することにより誘発される肝障害に
おける血清中のトランスアミラーゼ（ｓ−ＧＯＴ、ｓ−
ＧＰＴ）上昇抑制作用を種々検討した結果、その抑制作
用があることを見出した。尚、上記したようにイヌトウ
キに抗肝炎作用があることは知られているが、イソエポ
キシブテリキシンに抗肝炎作用があることはこれまで全
く知られていなかった。
イヌトウキの薬理活性に着目し、同属の植物であるヒュ
ウガトウキについて鋭意研究した結果、医薬組成物とし
て有用であることを確認し、本発明に至った。すなわ
ち、ヒュウガトウキからの抽出エキスにつき精査した結
果、ヒュウガトウキ抽出エキス及び含有クマリン化合物
であるイソエポキシブテリキシンに、マウス皮膚発癌実
験系で有意に皮膚腫瘍の減少を確認した。また、同様に
ヒュウガトウキ抽出エキス及びイソエポキシブテリキシ
ンにつき、免疫反応を介した急性肝障害モデルであるＤ
−ガラクトサミンとリポポリサッカライド（大腸菌由来
菌体内毒素）を併用することにより誘発される肝障害に
おける血清中のトランスアミラーゼ（ｓ−ＧＯＴ、ｓ−
ＧＰＴ）上昇抑制作用を種々検討した結果、その抑制作
用があることを見出した。尚、上記したようにイヌトウ
キに抗肝炎作用があることは知られているが、イソエポ
キシブテリキシンに抗肝炎作用があることはこれまで全
く知られていなかった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、前記知見にも
とづくもので、医薬組成物であって、ヒュウガトウキ
（Angelica furcijuga Kitagawa）抽出物および／また
は圧搾物を有効成分とすることを特徴としている。特
に、前記知見にもとづくもので、抗癌剤または抗肝炎剤
として適用されるものである。
とづくもので、医薬組成物であって、ヒュウガトウキ
（Angelica furcijuga Kitagawa）抽出物および／また
は圧搾物を有効成分とすることを特徴としている。特
に、前記知見にもとづくもので、抗癌剤または抗肝炎剤
として適用されるものである。
【０００６】また、ヒュウガトウキに含まれている下記
化学式（化１）のイソエポキシブテリキシンを有効成分
とする抗癌剤または抗肝炎剤である。
化学式（化１）のイソエポキシブテリキシンを有効成分
とする抗癌剤または抗肝炎剤である。
【０００７】
【化１】
【０００８】尚、ローマ数字は特許庁がサポートしてい
ない文字のため、本明細書に記載されているｔｅｒｅｂ
ｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ１、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｏ
ｓｉｄｅ２、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ３、ｐ
ｒａｅｒｏｓｉｄｅ ２及びｐｒａｅｒｏｓｉｄｅ４の
それぞれのアラビア数字は、下記数１〜４に示すローマ
数字の代用として使用している。
ない文字のため、本明細書に記載されているｔｅｒｅｂ
ｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ１、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｏ
ｓｉｄｅ２、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ３、ｐ
ｒａｅｒｏｓｉｄｅ ２及びｐｒａｅｒｏｓｉｄｅ４の
それぞれのアラビア数字は、下記数１〜４に示すローマ
数字の代用として使用している。
【０００９】
【数１】
【００１０】
【数２】
【００１１】
【数３】
【００１２】
【数４】
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明に含有される抽出物および
圧搾物は、栽培種又は野生種のヒュウガトウキ（Angeli
ca furcijuga Kitagawa）の花、根、茎、葉、枝などか
ら採取される。植物エキスの採取法には、上記植物を水
洗・細断して抽出もしくは圧搾する方法、更には液体分
を留去して濃縮乾燥することにより、粉末状ないし固形
状のエキスにする方法がある。
圧搾物は、栽培種又は野生種のヒュウガトウキ（Angeli
ca furcijuga Kitagawa）の花、根、茎、葉、枝などか
ら採取される。植物エキスの採取法には、上記植物を水
洗・細断して抽出もしくは圧搾する方法、更には液体分
を留去して濃縮乾燥することにより、粉末状ないし固形
状のエキスにする方法がある。
【００１４】例えば抽出法においては、抽出溶媒として
のアルコール溶液の濃度は１０〜１００％、好ましくは
４０〜８０％がよく、抽出後は植物エキスの効能と取扱
の観点からアルコール溶液の濃度は２５％以下、場合に
よってはアルコール分を０にして使用してもよい。
のアルコール溶液の濃度は１０〜１００％、好ましくは
４０〜８０％がよく、抽出後は植物エキスの効能と取扱
の観点からアルコール溶液の濃度は２５％以下、場合に
よってはアルコール分を０にして使用してもよい。
【００１５】また、ヒュウガトウキから圧搾物を製造す
るには、地下茎などに付着した泥を落とし、全草を水洗
する。次いで、カッター、ミキサーなどで粗切して、プ
レスにより圧搾する。プレスの圧縮圧力は、５００〜
５，０００ｋｇ／ｃｍ２程度に設定すればよい。圧搾汁
をこのまま、または精製もしくは希釈して使用すること
ができる。
るには、地下茎などに付着した泥を落とし、全草を水洗
する。次いで、カッター、ミキサーなどで粗切して、プ
レスにより圧搾する。プレスの圧縮圧力は、５００〜
５，０００ｋｇ／ｃｍ２程度に設定すればよい。圧搾汁
をこのまま、または精製もしくは希釈して使用すること
ができる。
【００１６】ヒュウガトウキ含有のイソエポキシブテリ
キシンは、ヒュウガトウキの地下茎をメタノールで還流
抽出し、濾液を減圧濃縮し、メタノールエキスを得る。
これを常法にしたがいＨＰ−２０カラムクロマトグラフ
ィーで水→メタノール→アセトン→メタノールの順に溶
出させ、水溶出分、第１分画分、第２分画分、第３分画
分と粗分画する。次いで、第３分画分を順相、逆相シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー、順相、逆相高速カラ
ムクロマトグラフィーを用いて繰り返し、分離、精製を
行うことにより、十数種の新規あるいは既知クマリン化
合物とともに、イソエポキシブテリキシンを単離、取得
できる。
キシンは、ヒュウガトウキの地下茎をメタノールで還流
抽出し、濾液を減圧濃縮し、メタノールエキスを得る。
これを常法にしたがいＨＰ−２０カラムクロマトグラフ
ィーで水→メタノール→アセトン→メタノールの順に溶
出させ、水溶出分、第１分画分、第２分画分、第３分画
分と粗分画する。次いで、第３分画分を順相、逆相シリ
カゲルカラムクロマトグラフィー、順相、逆相高速カラ
ムクロマトグラフィーを用いて繰り返し、分離、精製を
行うことにより、十数種の新規あるいは既知クマリン化
合物とともに、イソエポキシブテリキシンを単離、取得
できる。
【００１７】イソエポキシブテリキシンのヒト１日当た
りの服用量は１０〜２５ｍｇ、またイソエポキシブテリ
キシンを含むヒュウガトウキ粉末では1０〜１５ｇ、ア
ルコール抽出エキスでは１〜１．５ｇ、水エキスでは2
〜３ｇ、圧搾汁では１〜２ｍｌで有効と推定される。適
当な賦形剤を加えて、顆粒や錠剤とすることもできる。
医薬のみならず、健康食品として広く利用できる。
りの服用量は１０〜２５ｍｇ、またイソエポキシブテリ
キシンを含むヒュウガトウキ粉末では1０〜１５ｇ、ア
ルコール抽出エキスでは１〜１．５ｇ、水エキスでは2
〜３ｇ、圧搾汁では１〜２ｍｌで有効と推定される。適
当な賦形剤を加えて、顆粒や錠剤とすることもできる。
医薬のみならず、健康食品として広く利用できる。
【００１８】
【実施例】（抽出及び単離）宮崎県産ヒュウガトウキ
（Angelica furcijuga Kitagawa）の新鮮地下茎４，０
００ｇを熱時メタノール約１０，０００ｍｌで抽出後、
減圧下溶媒留去し、メタノール抽出エキス２１７．０ｇ
（５．４％）（以下カッコ内はいずれも新鮮地下茎から
の収率を示す）を得た。メタノール抽出エキスのうち、
１９５．２ｇをダイアイオン高速−２０カラムクロマト
グラフィーに付し、Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ→ＭｅＣＯＭｅ→
ＭｅＯＨの順に溶出させ、水溶出部１４０ｇ（３．８９
％）、第１分画分６．６ｇ（０．１７％）、第２分画分
１７．７ｇ（０．４９％）、第３分画分２５．０ｇ
（０．６９％）をそれぞれ得た。水溶出部及び第１分画
分は、薄層クロマトグラフィーの検討から糖類及びアミ
ノ酸など一次代謝成分であったことから、第２分画分に
ついて、順相及び逆相シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー、及び高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ）によ
るＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ、ＭｅＣＮ−Ｈ２Ｏ、２ＰｒＯＨ−
Ｈ２Ｏで順次溶出した結果、新規リグナン配糖体ｔｅｒ
ｅｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ ３（１１）、クマリン骨
格中のラクトン部が開環した型の新規配糖体ｔｅｒｅｂ
ｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ ２（１０）（０．００２９
％）、新規アグリコンを有するクマリン配糖体ｔｅｒｅ
ｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ １（６）（０．０００７９
％）、ｆａｌｃａｒｉｎｄｉｏｌ（０．０４０％）、他
にクマリン配糖体ａｐｉｏｓｙｌｓｋｉｍｍｉｎ（０．
０３０％）、ｈｙｍｅｘｅｌｓｉｎ（０．０００９９
％）、ｐｒａｅｒｏｓｉｄｅ ２（０．０１２％）及び
４（０．０１９％）、ｍａｒｍｅｓｉｎｉｎ（０．００
０８９％）、（Ｒ）−ｐｅｕｃｅｄａｎｏｌ ７−Ο−
β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（０．００４
４％）、リグナン配糖体（＋）−ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏ
ｌ Ο−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ
（０．０００１０％） を得た。また第３分画分につい
て、順相及び逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー、高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ）によるＭｅ
ＯＨ−Ｈ２Ｏ、ＭｅＣＮ−Ｈ２Ｏ、２ＰｒＯＨ−Ｈ２Ｏ
で順次溶出し、次いで高速液体クロマトグラフィー（ｃ
ｎ）によるｎ−Ｈｅｘａｎｅ−２−ＰｒＯＨで順次溶出
した結果、三種の新規ケールラクトン型クマリンｔｅｒ
ｅｂｉｔｈａｃｉｎ Ｂ（１６）（０．００１９％）、
ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｉｎ Ｃ（２１）（０．０１４
％）、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｉｎ Ａ（１５）（０．
０１１％）、isoepoxybuterixin（０．０４０％）、ａ
ｎｏｍａｌｉｎ（０．０１３％）、ｐｔｅｒｙｘｉｎ
（０．０１７％）、ｉｓｏｐｔｅｒｙｘｉｎ（０．０４
０％）、ｓｕｋｓｄｒｆｉｎ（０．０１４％）、ｓｅｒ
ａｖｓｃｈａｎｉｎ（０．００２２％）、ｂｅｒｇａｐ
ｔｅｎ（０．００１１％）、（−）−ｆａｌｃａｒｉｎ
ｏｌ（＝ｐａｎａｘｙｎｏｌ）（０．００２１％）、ｆ
ａｌｃａｒｉｎｄｉｏｌ（０．００４６％）、β−ｓｉ
ｔｏｓｔｅｒｏｌ（０．０３２％）が単離された。
（Angelica furcijuga Kitagawa）の新鮮地下茎４，０
００ｇを熱時メタノール約１０，０００ｍｌで抽出後、
減圧下溶媒留去し、メタノール抽出エキス２１７．０ｇ
（５．４％）（以下カッコ内はいずれも新鮮地下茎から
の収率を示す）を得た。メタノール抽出エキスのうち、
１９５．２ｇをダイアイオン高速−２０カラムクロマト
グラフィーに付し、Ｈ２Ｏ→ＭｅＯＨ→ＭｅＣＯＭｅ→
ＭｅＯＨの順に溶出させ、水溶出部１４０ｇ（３．８９
％）、第１分画分６．６ｇ（０．１７％）、第２分画分
１７．７ｇ（０．４９％）、第３分画分２５．０ｇ
（０．６９％）をそれぞれ得た。水溶出部及び第１分画
分は、薄層クロマトグラフィーの検討から糖類及びアミ
ノ酸など一次代謝成分であったことから、第２分画分に
ついて、順相及び逆相シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー、及び高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ）によ
るＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ、ＭｅＣＮ−Ｈ２Ｏ、２ＰｒＯＨ−
Ｈ２Ｏで順次溶出した結果、新規リグナン配糖体ｔｅｒ
ｅｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ ３（１１）、クマリン骨
格中のラクトン部が開環した型の新規配糖体ｔｅｒｅｂ
ｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ ２（１０）（０．００２９
％）、新規アグリコンを有するクマリン配糖体ｔｅｒｅ
ｂｉｎｔｈａｃｏｓｉｄｅ １（６）（０．０００７９
％）、ｆａｌｃａｒｉｎｄｉｏｌ（０．０４０％）、他
にクマリン配糖体ａｐｉｏｓｙｌｓｋｉｍｍｉｎ（０．
０３０％）、ｈｙｍｅｘｅｌｓｉｎ（０．０００９９
％）、ｐｒａｅｒｏｓｉｄｅ ２（０．０１２％）及び
４（０．０１９％）、ｍａｒｍｅｓｉｎｉｎ（０．００
０８９％）、（Ｒ）−ｐｅｕｃｅｄａｎｏｌ ７−Ο−
β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（０．００４
４％）、リグナン配糖体（＋）−ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏ
ｌ Ο−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ
（０．０００１０％） を得た。また第３分画分につい
て、順相及び逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー、高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ）によるＭｅ
ＯＨ−Ｈ２Ｏ、ＭｅＣＮ−Ｈ２Ｏ、２ＰｒＯＨ−Ｈ２Ｏ
で順次溶出し、次いで高速液体クロマトグラフィー（ｃ
ｎ）によるｎ−Ｈｅｘａｎｅ−２−ＰｒＯＨで順次溶出
した結果、三種の新規ケールラクトン型クマリンｔｅｒ
ｅｂｉｔｈａｃｉｎ Ｂ（１６）（０．００１９％）、
ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｉｎ Ｃ（２１）（０．０１４
％）、ｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｉｎ Ａ（１５）（０．
０１１％）、isoepoxybuterixin（０．０４０％）、ａ
ｎｏｍａｌｉｎ（０．０１３％）、ｐｔｅｒｙｘｉｎ
（０．０１７％）、ｉｓｏｐｔｅｒｙｘｉｎ（０．０４
０％）、ｓｕｋｓｄｒｆｉｎ（０．０１４％）、ｓｅｒ
ａｖｓｃｈａｎｉｎ（０．００２２％）、ｂｅｒｇａｐ
ｔｅｎ（０．００１１％）、（−）−ｆａｌｃａｒｉｎ
ｏｌ（＝ｐａｎａｘｙｎｏｌ）（０．００２１％）、ｆ
ａｌｃａｒｉｎｄｉｏｌ（０．００４６％）、β−ｓｉ
ｔｏｓｔｅｒｏｌ（０．０３２％）が単離された。
【００１９】
【試験例１】（Ｄ−ＧａｌＮ／ＬＰＳ肝障害保護）２５
〜２７ｇのｄｄｙ系雌マウスを用い、Ｄ−ガラクトサミ
ン（Ｄ−ＧａｌＮ）３５０ｍｇ／ｋｇ及びリポポリサッ
カライド（ＬＰＳ）１０μｇ／ｋｇを腹腔内注射し、肝
障害を誘発した。表３の各テストサンプルは、Ｄ−Ｇａ
ｌＮ／ＬＰＳ注射の１時間前に与えられた。採血は、Ｄ
−ＧａｌＮ／ＬＰＳ注射１０時間後に行った。各値は、
Ｓ．Ｅ．Ｍによる平均値を示す（ｐ＜０．０５、ｐ＜
０．０１）。各サンプルの投与量及び血清トランスアミ
ラーゼ活性値（ｓ−ＧＰＴ、ｓ−ＧＯＴ）を表１に示
す。
〜２７ｇのｄｄｙ系雌マウスを用い、Ｄ−ガラクトサミ
ン（Ｄ−ＧａｌＮ）３５０ｍｇ／ｋｇ及びリポポリサッ
カライド（ＬＰＳ）１０μｇ／ｋｇを腹腔内注射し、肝
障害を誘発した。表３の各テストサンプルは、Ｄ−Ｇａ
ｌＮ／ＬＰＳ注射の１時間前に与えられた。採血は、Ｄ
−ＧａｌＮ／ＬＰＳ注射１０時間後に行った。各値は、
Ｓ．Ｅ．Ｍによる平均値を示す（ｐ＜０．０５、ｐ＜
０．０１）。各サンプルの投与量及び血清トランスアミ
ラーゼ活性値（ｓ−ＧＰＴ、ｓ−ＧＯＴ）を表１に示
す。
【００２０】
【表１】
【００２１】
【試験例２】（Ｄ−ＧａｌＮ誘発細胞毒性の保護作用）
ヒュウガトウキ抽出成分の肝保護作用は、初代培養肝細
胞を用いて３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イ
ル）−２−，５−ジフェニルテトラゾリウム ブロマイ
ド（ＭＴＴ）カラーメトリックアッセイにより測定し
た。肝細胞は、ウィスター系雄ラット（１３０〜１６０
ｇ）からコラーゲン散布法により分離した。仔牛血清１
０％、ペニシリン１００ユニット／ｍｌ、ストレプトマ
イシン１００μｇ／ｍｌ、インシュリン１μＭ、デクサ
メタゾーン１μＭを含むウィリアム培養液１００μｌ中
に4×１０４セルからなる細胞懸濁液を９６ウエル組織
培養プレートに接種、５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃、4
時間予備培養した。培養液をＤ−ＧａｌＮ（１ｍＭ）と
テストサンプルを含む新鮮培養液に変え、肝細胞を４４
時間培養した。培養液をさらに１００μｌの培養液に変
更、これに１０μｌのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍ
ｌ）を加えた。4時間培養後培養液を除去し、次いで
０．０４ＮのＨＣｌを含むイソプロパノール１００μｌ
を加え、細胞中に生成されたフォルマザンを溶解した。
フォルマザン溶液の光学濃度（Ｏ．Ｄ）は、マイクロプ
レートリーダーにより、５７０ｎｍ（リファレンス：６
５５ｎｍ）で測定した。抑止率は、次式数５で求めた。
結果を表２に示す。
ヒュウガトウキ抽出成分の肝保護作用は、初代培養肝細
胞を用いて３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イ
ル）−２−，５−ジフェニルテトラゾリウム ブロマイ
ド（ＭＴＴ）カラーメトリックアッセイにより測定し
た。肝細胞は、ウィスター系雄ラット（１３０〜１６０
ｇ）からコラーゲン散布法により分離した。仔牛血清１
０％、ペニシリン１００ユニット／ｍｌ、ストレプトマ
イシン１００μｇ／ｍｌ、インシュリン１μＭ、デクサ
メタゾーン１μＭを含むウィリアム培養液１００μｌ中
に4×１０４セルからなる細胞懸濁液を９６ウエル組織
培養プレートに接種、５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃、4
時間予備培養した。培養液をＤ−ＧａｌＮ（１ｍＭ）と
テストサンプルを含む新鮮培養液に変え、肝細胞を４４
時間培養した。培養液をさらに１００μｌの培養液に変
更、これに１０μｌのＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍ
ｌ）を加えた。4時間培養後培養液を除去し、次いで
０．０４ＮのＨＣｌを含むイソプロパノール１００μｌ
を加え、細胞中に生成されたフォルマザンを溶解した。
フォルマザン溶液の光学濃度（Ｏ．Ｄ）は、マイクロプ
レートリーダーにより、５７０ｎｍ（リファレンス：６
５５ｎｍ）で測定した。抑止率は、次式数５で求めた。
結果を表２に示す。
【００２２】
【数５】抑止率（％）＝｛（サンプルＯ．Ｄ−対照群
Ｏ．Ｄ）÷（正常群Ｏ．Ｄ−対照群Ｏ．Ｄ）｝
Ｏ．Ｄ）÷（正常群Ｏ．Ｄ−対照群Ｏ．Ｄ）｝
【００２３】
【表２】
【００２４】
【試験例４】（抗炎症薬理活性）ｄｄｙ系雄性マウス
（体重約３０ｇ）を頚椎脱臼により安楽死させ、腹腔内
に緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を６〜７ｍｌ注入し、軽く
マッサージした。得られた腹腔滲出液をＰＢＳ、次いで
ＲＰＭＩ１６４０（１０％牛胎仔血清、１００ユニット
／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシ
ンを含む）培地で洗浄した。９６穴平底マイクロプレー
トに１ウェル当たり５×１０５個／１００μｌの細胞を
加え、３７℃、５％炭酸ガス−９５％空気下で１時間培
養した。浮遊細胞をＰＢＳで洗浄し、上記培養液にリポ
ポリサッカライド（シグマ社製、サルモネラエンテリテ
ィディス由来）１０μｇ／ｍｌ及び被検物質を含むもの
を２００μｌ加え、２０時間培養した。培養上清１００
μｌにグリース試薬（１％スルファニルアミドと０．１
％Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン ジハイドロクロ
ライドを２．５％燐酸に溶解したもの）１００μｌを加
え、室温で１０分間放置した。マイクロプレートリーダ
ーによって吸光度を測定した（測定波長５６２ｎｍ、対
照波長６３０ｎｍ）。亜硝酸ナトリウムを標準物質とし
て培養液中に蓄積したＮＯ−の量をＮＯの生成量とみな
して判定した。被検物質としては、実施例で取得したフ
ァルカリノール、ファルカリンジオール及びイソエポキ
シブテリキシンと、抗炎症作用が知られている対照薬と
してハイドロコーチゾンを用いた。結果を表３に示す。
（体重約３０ｇ）を頚椎脱臼により安楽死させ、腹腔内
に緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を６〜７ｍｌ注入し、軽く
マッサージした。得られた腹腔滲出液をＰＢＳ、次いで
ＲＰＭＩ１６４０（１０％牛胎仔血清、１００ユニット
／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシ
ンを含む）培地で洗浄した。９６穴平底マイクロプレー
トに１ウェル当たり５×１０５個／１００μｌの細胞を
加え、３７℃、５％炭酸ガス−９５％空気下で１時間培
養した。浮遊細胞をＰＢＳで洗浄し、上記培養液にリポ
ポリサッカライド（シグマ社製、サルモネラエンテリテ
ィディス由来）１０μｇ／ｍｌ及び被検物質を含むもの
を２００μｌ加え、２０時間培養した。培養上清１００
μｌにグリース試薬（１％スルファニルアミドと０．１
％Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン ジハイドロクロ
ライドを２．５％燐酸に溶解したもの）１００μｌを加
え、室温で１０分間放置した。マイクロプレートリーダ
ーによって吸光度を測定した（測定波長５６２ｎｍ、対
照波長６３０ｎｍ）。亜硝酸ナトリウムを標準物質とし
て培養液中に蓄積したＮＯ−の量をＮＯの生成量とみな
して判定した。被検物質としては、実施例で取得したフ
ァルカリノール、ファルカリンジオール及びイソエポキ
シブテリキシンと、抗炎症作用が知られている対照薬と
してハイドロコーチゾンを用いた。結果を表３に示す。
【００２５】
【表３】
【００２６】表１から明らかなように、対照群ではＤ−
ＧａｌＮ／ＬＰＳ投与の１０時間後に著しい肝障害によ
り、血清トランスアミナーゼ活性（ｓ−ＧＰＴ、ｓ−Ｇ
ＯＴ）が約６０００単位まで上昇したが、ファルカリン
ジオールをはじめ、ヒュウガトウキ由来物質投与群では
いずれもｓ−ＧＯＴ、ｓ−ＧＰＴの上昇を有意に抑制し
た。
ＧａｌＮ／ＬＰＳ投与の１０時間後に著しい肝障害によ
り、血清トランスアミナーゼ活性（ｓ−ＧＰＴ、ｓ−Ｇ
ＯＴ）が約６０００単位まで上昇したが、ファルカリン
ジオールをはじめ、ヒュウガトウキ由来物質投与群では
いずれもｓ−ＧＯＴ、ｓ−ＧＰＴの上昇を有意に抑制し
た。
【００２７】この実験モデルにおいては、Ｄ−ＧａｌＮ
でやや障害を受けた肝細胞にＬＰＳ刺激で活性化したマ
クロファージが作用することによって強い障害が発生す
ると考えられている。そこで、作用機序を解明する目的
で、初代培養肝細胞を用い、Ｄ−ＧａｌＮによる細胞毒
性からの保護作用についてＭＴＴアッセイ法により検討
した。ＭＴＴアッセイ法は細胞の脱水素酵素によって黄
色のＭＴＴが赤紫色のホルマザンに変化することを利用
した細胞数測定方法である。その結果、表２に示すよう
に、イソエポキシブテリキシンには濃度依存的な肝細胞
保護作用が認められた。一方、ファルカリンジオールに
は、逆に肝細胞に対する毒性がみられた。その他の微量
成分としてイソプテリキシン（ｉｓｏｐｔｅｒｙｘｉ
ｎ）に保護作用が認められた。
でやや障害を受けた肝細胞にＬＰＳ刺激で活性化したマ
クロファージが作用することによって強い障害が発生す
ると考えられている。そこで、作用機序を解明する目的
で、初代培養肝細胞を用い、Ｄ−ＧａｌＮによる細胞毒
性からの保護作用についてＭＴＴアッセイ法により検討
した。ＭＴＴアッセイ法は細胞の脱水素酵素によって黄
色のＭＴＴが赤紫色のホルマザンに変化することを利用
した細胞数測定方法である。その結果、表２に示すよう
に、イソエポキシブテリキシンには濃度依存的な肝細胞
保護作用が認められた。一方、ファルカリンジオールに
は、逆に肝細胞に対する毒性がみられた。その他の微量
成分としてイソプテリキシン（ｉｓｏｐｔｅｒｙｘｉ
ｎ）に保護作用が認められた。
【００２８】また、ＬＰＳによるマクロファージの活性
化にともなって産生される一酸化窒素（ＮＯ）の量を指
標に、マクロファージの活性化を抑制するかどうか検討
した。ＮＯはただちに酸化されＮＯ２−に変化するた
め、培養液中のＮＯ２−の量をＮＯの量とみなした。イ
ソエポキシブテリキシンおよびファルカリンジオール
は、表３に示すようにマクロファージに対して細胞毒性
を示さない濃度でＮＯの産生を強く抑制した。またアノ
マリン（ａｎｏｍａｌｉｎ）、ベルガプテン（ｂｅｒｇ
ａｐｔｅｎ）、セラブシャニン（ｓｅｒａｖｓｃｈａｎ
ｉｎ）、イソプテリキシンや新規化合物テレビンタシン
Ａにも抑制作用が認められ、特に、ファルカリンジオー
ルに強い活性が認められた。ファルカリンジオールは肝
細胞毒性を示すにもかかわらず、マクロファージの活性
化を強く抑制するため、この肝障害を抑制したものと考
えられる。また、イソエポキシブテリキシンは肝臓側に
作用して肝保護作用を示すのみならず、マクロファージ
の活性化を抑制することによってＤ−ＧａｌＮ／ＩＰＳ
による肝障害を抑制するものと推察される。
化にともなって産生される一酸化窒素（ＮＯ）の量を指
標に、マクロファージの活性化を抑制するかどうか検討
した。ＮＯはただちに酸化されＮＯ２−に変化するた
め、培養液中のＮＯ２−の量をＮＯの量とみなした。イ
ソエポキシブテリキシンおよびファルカリンジオール
は、表３に示すようにマクロファージに対して細胞毒性
を示さない濃度でＮＯの産生を強く抑制した。またアノ
マリン（ａｎｏｍａｌｉｎ）、ベルガプテン（ｂｅｒｇ
ａｐｔｅｎ）、セラブシャニン（ｓｅｒａｖｓｃｈａｎ
ｉｎ）、イソプテリキシンや新規化合物テレビンタシン
Ａにも抑制作用が認められ、特に、ファルカリンジオー
ルに強い活性が認められた。ファルカリンジオールは肝
細胞毒性を示すにもかかわらず、マクロファージの活性
化を強く抑制するため、この肝障害を抑制したものと考
えられる。また、イソエポキシブテリキシンは肝臓側に
作用して肝保護作用を示すのみならず、マクロファージ
の活性化を抑制することによってＤ−ＧａｌＮ／ＩＰＳ
による肝障害を抑制するものと推察される。
【００２９】
【試験例４】（抗腫瘍薬理活性）実験動物に雌のＣＤ−
１系７〜８週令のマウスを一群２０匹とした。実験２日
前、バリカンで剃毛し、毛の成育の休毛期のマウスを用
いた。被検体はすべてアセトンに溶解させ、マイクロピ
ペットで０．２ｍｌ剃毛した皮膚に塗布した。まず発癌
のイニシエーターとしてジメチルベンゼンアントラセン
（ＤＭＢＡ）２００ｎｍｏｌをマウス皮膚に塗布した。
１０日後に週２回テトラデカノールホルボール−１３−
アセテート（ＴＰＡ）５ｎｍｏｌを塗布し、１８週間続
けた。被検体は、ＴＰＡ塗布と同時に週２回塗布、１８
週間続けた。判定は腫瘍のマウス当たりの数とマウスに
腫瘍の発生した割合との２種で評価した。結果を図１に
示す。
１系７〜８週令のマウスを一群２０匹とした。実験２日
前、バリカンで剃毛し、毛の成育の休毛期のマウスを用
いた。被検体はすべてアセトンに溶解させ、マイクロピ
ペットで０．２ｍｌ剃毛した皮膚に塗布した。まず発癌
のイニシエーターとしてジメチルベンゼンアントラセン
（ＤＭＢＡ）２００ｎｍｏｌをマウス皮膚に塗布した。
１０日後に週２回テトラデカノールホルボール−１３−
アセテート（ＴＰＡ）５ｎｍｏｌを塗布し、１８週間続
けた。被検体は、ＴＰＡ塗布と同時に週２回塗布、１８
週間続けた。判定は腫瘍のマウス当たりの数とマウスに
腫瘍の発生した割合との２種で評価した。結果を図１に
示す。
【００３０】図１から明らかなように、ヒュウガトウキ
エキス群及びイソエポキシブテリキシン群には、明白な
抗腫瘍効果が認められた。抗腫瘍効果は、腫瘍の発生し
たマウスの数でも、マウス１匹当たりの腫瘍数において
も確認された。
エキス群及びイソエポキシブテリキシン群には、明白な
抗腫瘍効果が認められた。抗腫瘍効果は、腫瘍の発生し
たマウスの数でも、マウス１匹当たりの腫瘍数において
も確認された。
【００３１】
【発明の効果】本発明のヒュウガトウキ抽出エキスおよ
びその含有イソエポキシブテリキシンは、上述のように
天然物由来のすぐれた医薬組成物として、また健康食品
として産業上広く利用できる。また、日ごろ手軽に摂取
できる健康食品数ｇで副作用もなく安心して長期にわた
り発癌を抑制できれば、社会的な貢献度も大きい。
びその含有イソエポキシブテリキシンは、上述のように
天然物由来のすぐれた医薬組成物として、また健康食品
として産業上広く利用できる。また、日ごろ手軽に摂取
できる健康食品数ｇで副作用もなく安心して長期にわた
り発癌を抑制できれば、社会的な貢献度も大きい。
【図１】ヤマニンジンアルコール抽出エキスとイソエポ
キシブテリキシンのＣＤ−１マウスでの皮膚腫瘍発生抑
制効果を示すグラフで、（イ）は腫瘍の発生したマウス
数を示し、（ロ）はマウス１匹当たりの腫瘍数を示す。
キシブテリキシンのＣＤ−１マウスでの皮膚腫瘍発生抑
制効果を示すグラフで、（イ）は腫瘍の発生したマウス
数を示し、（ロ）はマウス１匹当たりの腫瘍数を示す。
Claims (5)
- 【請求項１】 ヒュウガトウキ（Angelica furcijuga K
itagawa）抽出物および／または圧搾物を有効成分とす
ることを特徴とする医薬組成物。 - 【請求項２】 ヒュウガトウキ（Angelica furcijuga K
itagawa）抽出物および／または圧搾物を有効成分とす
ることを特徴とする抗肝炎剤。 - 【請求項３】 ヒュウガトウキ（Angelica furcijuga K
itagawa）抽出物および／または圧搾物を有効成分とす
ることを特徴とする抗癌剤。 - 【請求項４】 イソエポキシブテリキシン（isoepoxybu
terixin）を有効成分とすることを特徴とする抗肝炎
剤。 - 【請求項５】 イソエポキシブテリキシン（isoepoxybu
terixin）を有効成分とすることを特徴とする抗癌剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10250922A JPH11310536A (ja) | 1998-02-25 | 1998-09-04 | 医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8917398 | 1998-02-25 | ||
| JP10-89173 | 1998-02-25 | ||
| JP8916898 | 1998-02-25 | ||
| JP10-89168 | 1998-02-25 | ||
| JP10250922A JPH11310536A (ja) | 1998-02-25 | 1998-09-04 | 医薬組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11310536A true JPH11310536A (ja) | 1999-11-09 |
Family
ID=27306046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10250922A Pending JPH11310536A (ja) | 1998-02-25 | 1998-09-04 | 医薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11310536A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008125454A (ja) * | 2006-11-22 | 2008-06-05 | Manabu Nomura | 健康補助食品およびその製造方法 |
-
1998
- 1998-09-04 JP JP10250922A patent/JPH11310536A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008125454A (ja) * | 2006-11-22 | 2008-06-05 | Manabu Nomura | 健康補助食品およびその製造方法 |
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