JPH11279077A - 筋炎予防治療剤 - Google Patents
筋炎予防治療剤Info
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- JPH11279077A JPH11279077A JP10083695A JP8369598A JPH11279077A JP H11279077 A JPH11279077 A JP H11279077A JP 10083695 A JP10083695 A JP 10083695A JP 8369598 A JP8369598 A JP 8369598A JP H11279077 A JPH11279077 A JP H11279077A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 免疫グロブリンを有効成分とする自己反
応性Ｔ細胞が関与する筋炎の予防治療剤、および、自己
反応性Ｔ細胞を抑制する作用を有する薬物を有効成分と
する筋炎予防治療剤。 【効果】 本発明の免疫グロブリンは、自己反応性のＴ
細胞を抑制することにより、該細胞が関与する筋炎の発
症を抑制することができる。
応性Ｔ細胞が関与する筋炎の予防治療剤、および、自己
反応性Ｔ細胞を抑制する作用を有する薬物を有効成分と
する筋炎予防治療剤。 【効果】 本発明の免疫グロブリンは、自己反応性のＴ
細胞を抑制することにより、該細胞が関与する筋炎の発
症を抑制することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫グロブリンの
新規医薬用途に関する。また、自己反応性Ｔ細胞を抑制
することにより筋炎を予防および治療するための薬剤に
関する。
新規医薬用途に関する。また、自己反応性Ｔ細胞を抑制
することにより筋炎を予防および治療するための薬剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術】免疫グロブリン療法は、突発性血小板減
少性紫斑病（ＩＴＰ）に対する有効性が報告されて以
来、免疫異常が関与すると思われる様々な疾患に使用さ
れてきている。これまでに、全身性エリテマトーデス
（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ、自己免疫性溶血性貧
血、重症筋無力症、川崎病等の疾患への療法が試みら
れ、その有効例が報告されている（ランセット、１巻、
１２２８〜１２３０頁、１９８１年；ランセット、１
巻、４０６〜４０７頁、１９８４年；ランセット、２
巻、１０５５〜１０５８頁、１９８４年）。
少性紫斑病（ＩＴＰ）に対する有効性が報告されて以
来、免疫異常が関与すると思われる様々な疾患に使用さ
れてきている。これまでに、全身性エリテマトーデス
（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ、自己免疫性溶血性貧
血、重症筋無力症、川崎病等の疾患への療法が試みら
れ、その有効例が報告されている（ランセット、１巻、
１２２８〜１２３０頁、１９８１年；ランセット、１
巻、４０６〜４０７頁、１９８４年；ランセット、２
巻、１０５５〜１０５８頁、１９８４年）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記の
事情を考慮して鋭意研究を重ねた結果、免疫グロブリン
が、新規な薬理作用である自己反応性Ｔ細胞抑制作用を
有しており、本作用を基に自己反応性Ｔ細胞の関与する
筋炎を予防および治療できることを見出し、本発明を完
成した。
事情を考慮して鋭意研究を重ねた結果、免疫グロブリン
が、新規な薬理作用である自己反応性Ｔ細胞抑制作用を
有しており、本作用を基に自己反応性Ｔ細胞の関与する
筋炎を予防および治療できることを見出し、本発明を完
成した。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、免疫グロブリ
ンを有効成分として含有する自己反応性Ｔ細胞の関与す
る筋炎の予防治療剤である。また、本発明は、自己反応
性Ｔ細胞を抑制する作用を有する薬物を有効成分とする
筋炎予防治療剤である。
ンを有効成分として含有する自己反応性Ｔ細胞の関与す
る筋炎の予防治療剤である。また、本発明は、自己反応
性Ｔ細胞を抑制する作用を有する薬物を有効成分とする
筋炎予防治療剤である。
【０００５】次に本発明を詳細に説明する。自己反応性
Ｔ細胞とは、自己を構成する組織・細胞・成分などを抗
原として認識し、免疫反応を起こすようなＴ細胞を意味
する。具体的には自己の骨格筋ミオシンに対して反応性
を有するようなＴ細胞が例示される。
Ｔ細胞とは、自己を構成する組織・細胞・成分などを抗
原として認識し、免疫反応を起こすようなＴ細胞を意味
する。具体的には自己の骨格筋ミオシンに対して反応性
を有するようなＴ細胞が例示される。
【０００６】自己反応性Ｔ細胞の関与する筋炎とは、基
本的には上記の自己反応性Ｔ細胞が免疫反応を起こした
結果生じた筋炎を意味するが、これ以外にも当該Ｔ細胞
により直接的あるいは間接的に引き起こされた筋炎、当
該Ｔ細胞と何らかの因果関係を有する筋炎、当該Ｔ細胞
の発現を伴う筋炎、当該Ｔ細胞の活性化を伴う筋炎など
を広く含む概念である。
本的には上記の自己反応性Ｔ細胞が免疫反応を起こした
結果生じた筋炎を意味するが、これ以外にも当該Ｔ細胞
により直接的あるいは間接的に引き起こされた筋炎、当
該Ｔ細胞と何らかの因果関係を有する筋炎、当該Ｔ細胞
の発現を伴う筋炎、当該Ｔ細胞の活性化を伴う筋炎など
を広く含む概念である。
【０００７】自己反応性Ｔ細胞を抑制する作用を有する
薬物とは、上記の自己反応性Ｔ細胞が免疫反応を起こす
のを抑える薬物、当該Ｔ細胞の活性化を抑える薬物、当
該Ｔ細胞をブロックする薬物、当該Ｔ細胞を殺す薬物、
当該Ｔ細胞の産生を抑える薬物、当該Ｔ細胞の反応相手
である抗原（対象抗原）をブロックする薬物、当該対象
抗原より早く当該Ｔ細胞と反応する薬物、当該対象抗原
よりも当該Ｔ細胞との親和性が高い薬物などを意味す
る。
薬物とは、上記の自己反応性Ｔ細胞が免疫反応を起こす
のを抑える薬物、当該Ｔ細胞の活性化を抑える薬物、当
該Ｔ細胞をブロックする薬物、当該Ｔ細胞を殺す薬物、
当該Ｔ細胞の産生を抑える薬物、当該Ｔ細胞の反応相手
である抗原（対象抗原）をブロックする薬物、当該対象
抗原より早く当該Ｔ細胞と反応する薬物、当該対象抗原
よりも当該Ｔ細胞との親和性が高い薬物などを意味す
る。
【０００８】本発明の筋炎予防治療剤に含有される免疫
グロブリンの態様としては、特に限定されるものではな
いが、公知の手法により調製され得るものを用いること
ができる。例えば、ポリエチレングリコール処理型、ｐ
Ｈ４処理型、イオン交換樹脂処理型等の非化学修飾型；
アルキル化型、スルホン化型等の化学修飾型；プラスミ
ン、ペプシン、トリプシン等の酵素で処理された酵素処
理型等が用いられるが、中でも非化学修飾型の免疫グロ
ブリンが好ましく用いられる。
グロブリンの態様としては、特に限定されるものではな
いが、公知の手法により調製され得るものを用いること
ができる。例えば、ポリエチレングリコール処理型、ｐ
Ｈ４処理型、イオン交換樹脂処理型等の非化学修飾型；
アルキル化型、スルホン化型等の化学修飾型；プラスミ
ン、ペプシン、トリプシン等の酵素で処理された酵素処
理型等が用いられるが、中でも非化学修飾型の免疫グロ
ブリンが好ましく用いられる。
【０００９】本発明において非化学修飾型の免疫グロブ
リンとは、以下の諸性状を有するものをいう。 (1)自然のままで修飾や変化を受けておらず、従って免
疫グロブリンのフラグメントであるFab 、F(ab')2 、Fc
等を含まない。 (2)抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もない。 (3)抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。
リンとは、以下の諸性状を有するものをいう。 (1)自然のままで修飾や変化を受けておらず、従って免
疫グロブリンのフラグメントであるFab 、F(ab')2 、Fc
等を含まない。 (2)抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もない。 (3)抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。
【００１０】このような非化学修飾型の免疫グロブリン
は、自然状態のもので、しかも抗補体価の低いものであ
れば、いかなる方法にて得たものであってもよいが、既
存の設備で製造でき、既に医薬として使用されている筋
注用免疫グロブリンを用い、酸性処理でその凝固体を切
り離して得る方法が最も効率的である。また、非イオン
系界面活性剤による方法で抗補体作用の原因となる免疫
グロブリン凝集体を除去し、抗補体価の低い免疫グロブ
リンを得る方法が好ましい。
は、自然状態のもので、しかも抗補体価の低いものであ
れば、いかなる方法にて得たものであってもよいが、既
存の設備で製造でき、既に医薬として使用されている筋
注用免疫グロブリンを用い、酸性処理でその凝固体を切
り離して得る方法が最も効率的である。また、非イオン
系界面活性剤による方法で抗補体作用の原因となる免疫
グロブリン凝集体を除去し、抗補体価の低い免疫グロブ
リンを得る方法が好ましい。
【００１１】その調製方法は公知の手法により行えばよ
い。例えば、エタノール分画、ポリエチレングリコール
分画（特開昭５３−４７５１５号公報）、ポリエチレン
グリコールとヒドロキシエチルスターチの組み合わせに
よる分画（特開昭５１−９１３２１号公報）、酸処理
（特開昭５７−３２２２８号公報）、陰イオン交換体処
理（特表昭５９−５０１５４６号公報、特開昭６０−４
２３３６号公報）、加熱処理後のポリエチレングリコー
ル分画（特開昭６３−１８３５３９号公報）、液状製剤
化（特開昭５８−４３９１４号公報、特開昭６３−１９
７２７４公報）等が例示される。
い。例えば、エタノール分画、ポリエチレングリコール
分画（特開昭５３−４７５１５号公報）、ポリエチレン
グリコールとヒドロキシエチルスターチの組み合わせに
よる分画（特開昭５１−９１３２１号公報）、酸処理
（特開昭５７−３２２２８号公報）、陰イオン交換体処
理（特表昭５９−５０１５４６号公報、特開昭６０−４
２３３６号公報）、加熱処理後のポリエチレングリコー
ル分画（特開昭６３−１８３５３９号公報）、液状製剤
化（特開昭５８−４３９１４号公報、特開昭６３−１９
７２７４公報）等が例示される。
【００１２】また上記方法により得られた免疫グロブリ
ンに加熱処理を施すことが好ましい。例えば、液状加熱
方法としては、安定化剤として高濃度の糖または糖アル
コールを用いる方法（特開昭６１−１９１６２２号公
報）、安定化剤として高濃度のソルビトールを用い、低
イオン強度、酸性ｐＨで行う方法（特開昭６３−１４６
８３２号公報）等が例示される。また、乾燥加熱方法と
しては、安定化剤としてアルブミン、グリシン、ポリエ
チレングリコール、塩化ナトリウム、マンニトール等を
用いる方法（特開昭６１−７８７３０号公報）、安定化
剤として二糖類、糖アルコールを用いる方法（特開昭６
２−２２８０２４号公報、特開昭６３−２８３９３３号
公報）、安定化剤としてアルブミンと二糖類または糖ア
ルコールを併用する方法（特開昭６２−２８９５２３号
公報）等が例示される。
ンに加熱処理を施すことが好ましい。例えば、液状加熱
方法としては、安定化剤として高濃度の糖または糖アル
コールを用いる方法（特開昭６１−１９１６２２号公
報）、安定化剤として高濃度のソルビトールを用い、低
イオン強度、酸性ｐＨで行う方法（特開昭６３−１４６
８３２号公報）等が例示される。また、乾燥加熱方法と
しては、安定化剤としてアルブミン、グリシン、ポリエ
チレングリコール、塩化ナトリウム、マンニトール等を
用いる方法（特開昭６１−７８７３０号公報）、安定化
剤として二糖類、糖アルコールを用いる方法（特開昭６
２−２２８０２４号公報、特開昭６３−２８３９３３号
公報）、安定化剤としてアルブミンと二糖類または糖ア
ルコールを併用する方法（特開昭６２−２８９５２３号
公報）等が例示される。
【００１３】本発明で使用される免疫グロブリンの由来
は特に限定されず、具体的にはヒト、マウス、ラット等
が挙げられるが、好ましくはヒトである。このような免
疫グロブリンの具体例として、例えばポリエチレングリ
コール処理ヒト免疫グロブリンであるヴェノグロブリン
−Ｉ（商品名、ミドリ十字）、ヴェノグロブリン−ＩＨ
（商品名、ミドリ十字）等が例示される。
は特に限定されず、具体的にはヒト、マウス、ラット等
が挙げられるが、好ましくはヒトである。このような免
疫グロブリンの具体例として、例えばポリエチレングリ
コール処理ヒト免疫グロブリンであるヴェノグロブリン
−Ｉ（商品名、ミドリ十字）、ヴェノグロブリン−ＩＨ
（商品名、ミドリ十字）等が例示される。
【００１４】本発明の製剤は、本発明の目的に反しない
限り、通常医薬品に用いられる薬理的に許容される添加
剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤また
は製薬上必要な成分を含有してもよい。安定化剤として
は、グルコース等の単糖類、サッカロース、マルトース
等の二糖類、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコ
ール、塩化ナトリウム等の中性塩、グリシン等のアミノ
酸、アルブミン、ポリエチレングリコール、ポリオキシ
エチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニッ
ク）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル
（トゥイーン）等の非イオン系界面活性剤等が例示され
る。
限り、通常医薬品に用いられる薬理的に許容される添加
剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、安定化剤また
は製薬上必要な成分を含有してもよい。安定化剤として
は、グルコース等の単糖類、サッカロース、マルトース
等の二糖類、マンニトール、ソルビトール等の糖アルコ
ール、塩化ナトリウム等の中性塩、グリシン等のアミノ
酸、アルブミン、ポリエチレングリコール、ポリオキシ
エチレン−ポリオキシプロピレン共重合体（プルロニッ
ク）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル
（トゥイーン）等の非イオン系界面活性剤等が例示され
る。
【００１５】本発明の製剤は、液状製剤の場合はそのま
まで、あるいは適当な溶媒（例えば注射用蒸留水、生理
食塩水、ブドウ糖液等）で希釈し、乾燥製剤の場合は適
当な溶媒（例えば注射用蒸留水等）に溶解して、静脈内
投与される。
まで、あるいは適当な溶媒（例えば注射用蒸留水、生理
食塩水、ブドウ糖液等）で希釈し、乾燥製剤の場合は適
当な溶媒（例えば注射用蒸留水等）に溶解して、静脈内
投与される。
【００１６】本発明製剤の投与経路は、通常注射であ
り、特に静脈内投与が好ましい。本発明製剤の投与量
は、体重１ｋｇ当たり免疫グロブリンとして１００〜１
０００ｍｇ／日を、１〜数日間連日静脈内投与すること
が標準的であるが、症状、性別、体重等に応じて投与量
を増減すればよい。
り、特に静脈内投与が好ましい。本発明製剤の投与量
は、体重１ｋｇ当たり免疫グロブリンとして１００〜１
０００ｍｇ／日を、１〜数日間連日静脈内投与すること
が標準的であるが、症状、性別、体重等に応じて投与量
を増減すればよい。
【００１７】本発明の免疫グロブリンは、自己反応性Ｔ
細胞が関与する筋炎の予防および治療に有用である。具
体的には、自己の骨格筋ミオシンに対して反応性を有す
るＴ細胞が関与する筋炎の予防および治療に有用であ
る。
細胞が関与する筋炎の予防および治療に有用である。具
体的には、自己の骨格筋ミオシンに対して反応性を有す
るＴ細胞が関与する筋炎の予防および治療に有用であ
る。
【００１８】
【実施例】本発明をさらに詳細に説明するために、実施
例および実験例を挙げるが、本発明はこれらによって何
ら限定されるものではない。
例および実験例を挙げるが、本発明はこれらによって何
ら限定されるものではない。
【００１９】製剤例１ コーン氏の冷アルコール分画法で得られた画分II＋III
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解し、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃で
６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分子
量４０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添加し
て溶解しつつ、これに１Ｎ−水酸化ナトリウムを添加し
てｐＨを徐々に上昇させて、最終的にはｐＨ５．０に調
整した。その後直ちに遠心分離により沈殿を除いて澄明
な上清を得た。この上清に平均分子量４０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、緩やかに攪拌しな
がら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整し、沈
殿した免疫グロブリンを遠心分離により回収した。高度
に精製された免疫グロブリンは、例えば生理食塩水また
は０．０２Ｍ酢酸緩衝液に０．６％塩化ナトリウム、２
％マンニットおよび１％アルブミンを添加した溶液に再
び溶解させ、除菌濾過を行うことにより、臨床に使用で
きる静注用免疫グロブリン製剤とした。
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解し、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃で
６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分子
量４０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添加し
て溶解しつつ、これに１Ｎ−水酸化ナトリウムを添加し
てｐＨを徐々に上昇させて、最終的にはｐＨ５．０に調
整した。その後直ちに遠心分離により沈殿を除いて澄明
な上清を得た。この上清に平均分子量４０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、緩やかに攪拌しな
がら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整し、沈
殿した免疫グロブリンを遠心分離により回収した。高度
に精製された免疫グロブリンは、例えば生理食塩水また
は０．０２Ｍ酢酸緩衝液に０．６％塩化ナトリウム、２
％マンニットおよび１％アルブミンを添加した溶液に再
び溶解させ、除菌濾過を行うことにより、臨床に使用で
きる静注用免疫グロブリン製剤とした。
【００２０】製剤例２ ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、さらにこの溶
液１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添加し、ｐＨ
５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱処理した。
その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水にてこの液
を３倍に希釈し、ポリエチレングリコール（平均分子量
４０００）を終濃度が６％となるように添加し、２℃で
遠心分離を行い上清を得た。この上清を１Ｎ−水酸化ナ
トリウムを添加してｐＨ８．８に調整した後、ポリエチ
レングリコール（平均分子量４０００）を終濃度が１２
％となるように添加し、２℃で遠心分離を行い、沈殿し
たＩｇＧ画分を得た。このＩｇＧ画分を注射用水に溶解
し、この溶液に、０．４％食塩水で平衡化したＤＥＡＥ
−セファデックスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２ｍｌ）
し、０〜４℃の条件下で約１時間接触処理し、処理後濾
過することによりＤＥＡＥ−セファデックスを除去して
濾過液（ＩｇＧ溶液）を回収した。このＩｇＧ溶液を注
射用水で５％ＩｇＧ溶液に調整し、酢酸ナトリウムでこ
の溶液のｐＨを約５．５に調整し、さらにソルビトール
を終濃度が５％となるように添加した。この水溶液（伝
導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用免疫グロブリ
ン液状製剤を得た。
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、さらにこの溶
液１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添加し、ｐＨ
５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱処理した。
その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水にてこの液
を３倍に希釈し、ポリエチレングリコール（平均分子量
４０００）を終濃度が６％となるように添加し、２℃で
遠心分離を行い上清を得た。この上清を１Ｎ−水酸化ナ
トリウムを添加してｐＨ８．８に調整した後、ポリエチ
レングリコール（平均分子量４０００）を終濃度が１２
％となるように添加し、２℃で遠心分離を行い、沈殿し
たＩｇＧ画分を得た。このＩｇＧ画分を注射用水に溶解
し、この溶液に、０．４％食塩水で平衡化したＤＥＡＥ
−セファデックスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２ｍｌ）
し、０〜４℃の条件下で約１時間接触処理し、処理後濾
過することによりＤＥＡＥ−セファデックスを除去して
濾過液（ＩｇＧ溶液）を回収した。このＩｇＧ溶液を注
射用水で５％ＩｇＧ溶液に調整し、酢酸ナトリウムでこ
の溶液のｐＨを約５．５に調整し、さらにソルビトール
を終濃度が５％となるように添加した。この水溶液（伝
導度約１ｍｍｈｏ）を除菌濾過し、静注用免疫グロブリ
ン液状製剤を得た。
【００２１】実験例１ 免疫グロブリンによる自己の骨
格筋ミオシンに反応性を有するＴ細胞が関与する筋炎の
発症抑制作用 １．骨格筋ミオシン反応性Ｔ細胞の調製 （１）マウスの免疫およびそのマウスからのリンパ節細
胞、脾細胞および培養用自己血清の調製 ４．２ｍｇ／ｍｌに調製したウサギ骨格筋ミオシンＢ粗
画分（以下「ＭＢ」という。）および等量の完全フロイ
ンドアジュバント（ＣＦＡ）（ナカライテスク製）を混
和し、乳剤を作製した。この乳剤をＳＪＬ系マウスの背
部皮下に０．３ｍｌ／匹／回／週で計４回免疫した。
格筋ミオシンに反応性を有するＴ細胞が関与する筋炎の
発症抑制作用 １．骨格筋ミオシン反応性Ｔ細胞の調製 （１）マウスの免疫およびそのマウスからのリンパ節細
胞、脾細胞および培養用自己血清の調製 ４．２ｍｇ／ｍｌに調製したウサギ骨格筋ミオシンＢ粗
画分（以下「ＭＢ」という。）および等量の完全フロイ
ンドアジュバント（ＣＦＡ）（ナカライテスク製）を混
和し、乳剤を作製した。この乳剤をＳＪＬ系マウスの背
部皮下に０．３ｍｌ／匹／回／週で計４回免疫した。
【００２２】最終免疫の１週間後にマウスを麻酔下で心
臓採血した。この血液から血清を調製して培養用自己血
清とした。次に、採血後のマウスから摘出した脾臓をす
りつぶして細胞ペレットを調製した。トリス溶液、次い
でダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で洗浄した
後に、３×１０7 細胞／ｍｌの細胞浮遊液を調製した。
６ウエルプレートに１mlずつ播種し、２時間培養後に洗
浄して、非付着細胞を除去し、脾細胞由来抗原提示細胞
（ＡＰＣ）を得た。次に、採血、脾臓摘出後に採取した
リンパ節をすりつぶして細胞ペレットを調製し、ＤＭＥ
Ｍにより６×１０6 細胞／ｍｌのリンパ節細胞浮遊液を
調製した。
臓採血した。この血液から血清を調製して培養用自己血
清とした。次に、採血後のマウスから摘出した脾臓をす
りつぶして細胞ペレットを調製した。トリス溶液、次い
でダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で洗浄した
後に、３×１０7 細胞／ｍｌの細胞浮遊液を調製した。
６ウエルプレートに１mlずつ播種し、２時間培養後に洗
浄して、非付着細胞を除去し、脾細胞由来抗原提示細胞
（ＡＰＣ）を得た。次に、採血、脾臓摘出後に採取した
リンパ節をすりつぶして細胞ペレットを調製し、ＤＭＥ
Ｍにより６×１０6 細胞／ｍｌのリンパ節細胞浮遊液を
調製した。
【００２３】（２）ＭＢ免疫マウス由来リンパ節細胞の
抗原刺激 （１）で得たリンパ節細胞浮遊液を、脾細胞由来ＡＰＣ
が付着している６ウエルプレートに６mlずつ播種し、Ｍ
Ｂ２５μｇ／ｍｌ、自己血清１％の条件下で２日間培養
した。細胞を回収して生細胞を分離した後、２×１０6
細胞／ｍｌになるようにＤＭＥＭに浮遊させた。胎児ウ
シ血清（ＦＣＳ）とＩＬ−２をそれぞれ１％、２０ＪＲ
Ｕ／ｍｌになるように添加し、さらにフラスコで培養し
た。３日後に細胞を回収して、ＭＢ反応性リンパ節細胞
を得た。
抗原刺激 （１）で得たリンパ節細胞浮遊液を、脾細胞由来ＡＰＣ
が付着している６ウエルプレートに６mlずつ播種し、Ｍ
Ｂ２５μｇ／ｍｌ、自己血清１％の条件下で２日間培養
した。細胞を回収して生細胞を分離した後、２×１０6
細胞／ｍｌになるようにＤＭＥＭに浮遊させた。胎児ウ
シ血清（ＦＣＳ）とＩＬ−２をそれぞれ１％、２０ＪＲ
Ｕ／ｍｌになるように添加し、さらにフラスコで培養し
た。３日後に細胞を回収して、ＭＢ反応性リンパ節細胞
を得た。
【００２４】（３）ＭＢ反応性リンパ節細胞の解析 ＭＢ免疫マウスからリンパ節細胞を採取した直後、抗原
刺激の２日目および５日目（移入時）に、リンパ節細胞
をフローサイトメトリーにより解析し、総細胞数に対す
るＴ細胞（ＣＤ３陽性）数の割合、ＣＤ４陽性Ｔ細胞数
の割合、およびＣＤ８陽性Ｔ細胞数の割合を調べた。移
入時のリンパ節細胞は、９５％がＣＤ３陽性細胞、即ち
Ｔ細胞であり、ＣＤ４陽性Ｔ細胞は７８％、ＣＤ８陽性
Ｔ細胞は１７％であった。ＣＤ４陽性Ｔ細胞中のＴ細胞
活性化マーカーであるＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）および
ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４）は培養中に増加傾向を示し、
特に２日目から５日目にかけて増加していることから、
Ｔ細胞が活性化していることが確認された。ＣＤ６９に
はほとんど変化はみられなかった。ＣＤ８陽性Ｔ細胞中
のＴ細胞活性化マーカーについては、殆ど変化はみられ
なかった。この結果より、得られたリンパ節細胞はＴ細
胞であること、および抗原であるＭＢ刺激によりＴ細胞
が活性化していることが判明した。得られたＭＢ反応性
Ｔ細胞は１．７×１０9 細胞であった。
刺激の２日目および５日目（移入時）に、リンパ節細胞
をフローサイトメトリーにより解析し、総細胞数に対す
るＴ細胞（ＣＤ３陽性）数の割合、ＣＤ４陽性Ｔ細胞数
の割合、およびＣＤ８陽性Ｔ細胞数の割合を調べた。移
入時のリンパ節細胞は、９５％がＣＤ３陽性細胞、即ち
Ｔ細胞であり、ＣＤ４陽性Ｔ細胞は７８％、ＣＤ８陽性
Ｔ細胞は１７％であった。ＣＤ４陽性Ｔ細胞中のＴ細胞
活性化マーカーであるＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）および
ＣＤ４９ｄ（ＶＬＡ−４）は培養中に増加傾向を示し、
特に２日目から５日目にかけて増加していることから、
Ｔ細胞が活性化していることが確認された。ＣＤ６９に
はほとんど変化はみられなかった。ＣＤ８陽性Ｔ細胞中
のＴ細胞活性化マーカーについては、殆ど変化はみられ
なかった。この結果より、得られたリンパ節細胞はＴ細
胞であること、および抗原であるＭＢ刺激によりＴ細胞
が活性化していることが判明した。得られたＭＢ反応性
Ｔ細胞は１．７×１０9 細胞であった。
【００２５】２．自己反応性Ｔ細胞が関与する筋炎モデ
ルの作成、および、免疫グロブリン投与効果 ＳＬＪ系マウスを５匹ずつ、正常群、対照群、免疫グロ
ブリン投与群の３群にわけて、対照群５匹と免疫グロブ
リン投与群５匹の計１０匹にＭＢ反応性Ｔ細胞を５×１
０7 細胞／匹の細胞数で尾静脈内に移入した。移入後、
全群のマウスにＩＬ−２を５００ＪＲＵ／匹×２回／日
×５日腹腔内投与した。免疫グロブリン投与群には、細
胞移入日より５日間、製剤例２で得た免疫グロブリンを
４００ｍｇ／ｋｇ／日で尾静脈内投与した。対照群には
細胞移入日より５日間、生理食塩水を１６ｍｌ／ｋｇ／
日で尾静脈内投与した。正常群にはＩＬ−２のみを投与
し、免疫グロブリンや生理食塩水は投与しなかった。
ルの作成、および、免疫グロブリン投与効果 ＳＬＪ系マウスを５匹ずつ、正常群、対照群、免疫グロ
ブリン投与群の３群にわけて、対照群５匹と免疫グロブ
リン投与群５匹の計１０匹にＭＢ反応性Ｔ細胞を５×１
０7 細胞／匹の細胞数で尾静脈内に移入した。移入後、
全群のマウスにＩＬ−２を５００ＪＲＵ／匹×２回／日
×５日腹腔内投与した。免疫グロブリン投与群には、細
胞移入日より５日間、製剤例２で得た免疫グロブリンを
４００ｍｇ／ｋｇ／日で尾静脈内投与した。対照群には
細胞移入日より５日間、生理食塩水を１６ｍｌ／ｋｇ／
日で尾静脈内投与した。正常群にはＩＬ−２のみを投与
し、免疫グロブリンや生理食塩水は投与しなかった。
【００２６】細胞移入日から７日後に、ＣＯ2 吸入屠殺
後心臓採血し、後肢の大腿四頭筋を摘出した。筋組織は
ホルマリン固定後、常法に従いパラフィン包埋により切
片を作製し、ＨＥ染色標本を得た。マウス１個体につき
２０００個以上（片肢につき１０００個以上）の筋線維
を調べ、壊死の起きている筋線維の存在する割合、およ
び周囲または内部に５個以上の炎症性細胞が認められる
筋線維（壊死筋線維も含む）の存在する割合を算出し
た。
後心臓採血し、後肢の大腿四頭筋を摘出した。筋組織は
ホルマリン固定後、常法に従いパラフィン包埋により切
片を作製し、ＨＥ染色標本を得た。マウス１個体につき
２０００個以上（片肢につき１０００個以上）の筋線維
を調べ、壊死の起きている筋線維の存在する割合、およ
び周囲または内部に５個以上の炎症性細胞が認められる
筋線維（壊死筋線維も含む）の存在する割合を算出し
た。
【００２７】正常群と対照群の比較、および対照群と免
疫グロブリン投与群の比較をt-検定で行った。Ｆ検定に
より分散が等しい場合はStudent のt-検定で、分散が異
なる場合はWelch のt-検定にて行った。危険率ｐ＜０．
０５の場合を有意差ありと判断した。結果を表１に示
す。
疫グロブリン投与群の比較をt-検定で行った。Ｆ検定に
より分散が等しい場合はStudent のt-検定で、分散が異
なる場合はWelch のt-検定にて行った。危険率ｐ＜０．
０５の場合を有意差ありと判断した。結果を表１に示
す。
【００２８】
【表１】
【００２９】ＭＢ反応性Ｔ細胞を５×１０7 細胞／匹で
マウスに移入すると、炎症度は有意に高値を示し筋炎を
発症した。この筋炎はＭＢ反応性Ｔ細胞がマウス自身の
ミオシンと反応して発症したものであり、自己反応性Ｔ
細胞が関与する筋炎である。また、該筋炎は、免疫グロ
ブリンの投与により炎症の改善が示された。すなわち、
免疫グロブリンにより、自己反応性Ｔ細胞が関与する筋
炎の発症を抑制することができた。
マウスに移入すると、炎症度は有意に高値を示し筋炎を
発症した。この筋炎はＭＢ反応性Ｔ細胞がマウス自身の
ミオシンと反応して発症したものであり、自己反応性Ｔ
細胞が関与する筋炎である。また、該筋炎は、免疫グロ
ブリンの投与により炎症の改善が示された。すなわち、
免疫グロブリンにより、自己反応性Ｔ細胞が関与する筋
炎の発症を抑制することができた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 新谷 奈保子 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 中江 孝 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 小山 守 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 岩本 美能里 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 免疫グロブリンを有効成分とする自己反
応性Ｔ細胞の関与する筋炎予防治療剤。 - 【請求項２】 自己反応性Ｔ細胞を抑制する作用を有す
る薬物を有効成分とする筋炎の予防治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10083695A JPH11279077A (ja) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | 筋炎予防治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10083695A JPH11279077A (ja) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | 筋炎予防治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11279077A true JPH11279077A (ja) | 1999-10-12 |
Family
ID=13809641
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10083695A Pending JPH11279077A (ja) | 1998-03-30 | 1998-03-30 | 筋炎予防治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11279077A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7254102B2 (en) | 2000-08-14 | 2007-08-07 | Ricoh Company, Ltd. | Method for optically recording information according to a strategy and computer-readable recording medium for causing a computer to optically record information according to a strategy |
-
1998
- 1998-03-30 JP JP10083695A patent/JPH11279077A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7254102B2 (en) | 2000-08-14 | 2007-08-07 | Ricoh Company, Ltd. | Method for optically recording information according to a strategy and computer-readable recording medium for causing a computer to optically record information according to a strategy |
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Legal Events
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| A621 | Written request for application examination |
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