JPH11266890A - １−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造法 - Google Patents
１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造法Info
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- JPH11266890A JPH11266890A JP9551498A JP9551498A JPH11266890A JP H11266890 A JPH11266890 A JP H11266890A JP 9551498 A JP9551498 A JP 9551498A JP 9551498 A JP9551498 A JP 9551498A JP H11266890 A JPH11266890 A JP H11266890A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 医薬品、化粧品、農薬、食品添加物、飼料添
加物、液晶などの原料として広範な用途が期待されてい
る１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類を安
価で大量に製造する。 【解決手段】 シュードモナス属に属する菌株を、天然
物である丁子油を含有する培地で培養し、培地中に１−
置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類を生成蓄積
せしめ、これを採取する。
加物、液晶などの原料として広範な用途が期待されてい
る１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類を安
価で大量に製造する。 【解決手段】 シュードモナス属に属する菌株を、天然
物である丁子油を含有する培地で培養し、培地中に１−
置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類を生成蓄積
せしめ、これを採取する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明により、医薬品、化粧
品、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶などの原料と
して広範な用途が期待されている１−置換−３−メトキ
シ−４−オキシベンゼン類の製造が可能となる。
品、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶などの原料と
して広範な用途が期待されている１−置換−３−メトキ
シ−４−オキシベンゼン類の製造が可能となる。
【０００２】
【従来技術】１−置換−３−メトキシ−４−オキシベン
ゼン類は、天然に存在し、天然物からの抽出により得る
ことができるが、天然物の保有量に限りがあり、抽出の
工程が面倒でコストが高く、大量生産に向かない。ま
た、化学的な合成法もあるが、合成法が繁雑であり、原
料が高価で入手困難である。
ゼン類は、天然に存在し、天然物からの抽出により得る
ことができるが、天然物の保有量に限りがあり、抽出の
工程が面倒でコストが高く、大量生産に向かない。ま
た、化学的な合成法もあるが、合成法が繁雑であり、原
料が高価で入手困難である。
【０００３】フェルラ酸は植物の細胞壁の構成成分であ
り、医薬品、化粧品、農薬、食品添加物、飼料添加物、
液晶などの原料として広範な用途が期待されている物質
であるため、１−置換−３−メトキシ−４−オキシベン
ゼン類の中でも、特にその製造法について検討されてい
る。フェルラ酸はバニリンとマロン酸の縮合反応によっ
てできることが知られているが(J. Am. Chem. Soc., 74
巻，5346頁，1952年）、製造に３週間ほどかかるので工
業的な方法ではない。近年、米ヌカ廃油などをアルカリ
加水分解することで得られているが（特告平７−７８０
３２号公報参照）、この方法でも依然として高価なの
で、広範な用途の可能性が期待されつつその利用が妨げ
られている。
り、医薬品、化粧品、農薬、食品添加物、飼料添加物、
液晶などの原料として広範な用途が期待されている物質
であるため、１−置換−３−メトキシ−４−オキシベン
ゼン類の中でも、特にその製造法について検討されてい
る。フェルラ酸はバニリンとマロン酸の縮合反応によっ
てできることが知られているが(J. Am. Chem. Soc., 74
巻，5346頁，1952年）、製造に３週間ほどかかるので工
業的な方法ではない。近年、米ヌカ廃油などをアルカリ
加水分解することで得られているが（特告平７−７８０
３２号公報参照）、この方法でも依然として高価なの
で、広範な用途の可能性が期待されつつその利用が妨げ
られている。
【０００４】オイゲノールを微生物に作用させてバニリ
ン関連物質を製造する試みがなされているが、（特開平
５−２２７９８０号公報、特開平３−３０６８３号公
報、特開昭６２−１９００９２号公報、Agric. Biol. C
hem., 41巻, 925-929頁，1977年及び同誌 47巻，2639-2
640頁，1983年）いずれもバニリンまたはバニリン酸は
生成するものの、フェルラ酸の効率的な製造には成功し
ていない。そこで、本発明者らは自然界よりオイゲノー
ル資化性菌シュードモナス・フルオレッセンスE118生工
菌寄第15185号(Pseudomonas fluorescens E118 FERM P-
15185)を分離し、この菌体が効率よくオイゲノールをフ
ェルラ酸に変換することを見いだした（特開平９−１５
４５９１号公報参照）。
ン関連物質を製造する試みがなされているが、（特開平
５−２２７９８０号公報、特開平３−３０６８３号公
報、特開昭６２−１９００９２号公報、Agric. Biol. C
hem., 41巻, 925-929頁，1977年及び同誌 47巻，2639-2
640頁，1983年）いずれもバニリンまたはバニリン酸は
生成するものの、フェルラ酸の効率的な製造には成功し
ていない。そこで、本発明者らは自然界よりオイゲノー
ル資化性菌シュードモナス・フルオレッセンスE118生工
菌寄第15185号(Pseudomonas fluorescens E118 FERM P-
15185)を分離し、この菌体が効率よくオイゲノールをフ
ェルラ酸に変換することを見いだした（特開平９−１５
４５９１号公報参照）。
【０００５】しかし、化学的な合成によりオイゲノール
を製造するには、グアヤコールアリルエーテルのオルト
位を保護してクライゼン転位を行えばよいが、工程が複
雑でコストがかかる。また、天然物であり、オイゲノー
ル含量が高い丁子油などの精油から精留や抽出などの方
法によりオイゲノールを単離するのも困難である。
を製造するには、グアヤコールアリルエーテルのオルト
位を保護してクライゼン転位を行えばよいが、工程が複
雑でコストがかかる。また、天然物であり、オイゲノー
ル含量が高い丁子油などの精油から精留や抽出などの方
法によりオイゲノールを単離するのも困難である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】医薬品、化粧品、農
薬、食品添加物、飼料添加物、液晶などの原料として広
範な用途が期待されている１−置換−３−メトキシ−４
−オキシベンゼン類を安価で大量に製造することであ
る。
薬、食品添加物、飼料添加物、液晶などの原料として広
範な用途が期待されている１−置換−３−メトキシ−４
−オキシベンゼン類を安価で大量に製造することであ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは鋭意検討し
た結果、天然物であり安価で手に入りやすい丁子油その
ものを原料としてを１−置換−３−メトキシ−４−オキ
シベンゼン類製造する方法を見いだすに至った。すなわ
ち、本発明は、以下に示すものである。
た結果、天然物であり安価で手に入りやすい丁子油その
ものを原料としてを１−置換−３−メトキシ−４−オキ
シベンゼン類製造する方法を見いだすに至った。すなわ
ち、本発明は、以下に示すものである。
【０００８】（１）シュードモナス属に属する菌株を、
丁子油を含有する培地で培養し、培地中にフェルラ酸お
よびその関連物質を生成蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする１−置換−３−メトキシ−４−オキシベ
ンゼン類の製造方法。 （２）シュードモナス属に属する菌株がシュードモナス
・フルオレッセンスE118生工菌寄第15185号(Pseudomona
s fluorescens E-118 FERM P-15185)である前記（１）
記載の１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
製造方法。 （３）シュードモナス属に属する菌株が、休止菌体また
は固定化菌体である前記（１）記載の１−置換−３−メ
トキシ−４−オキシベンゼン類の製造方法。 （４）１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
がコニフェリルアルコール、バニリン、およびバニリン
酸の中から選ばれる一種以上の化合物である前記（１）
記載の１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
の製造方法。
丁子油を含有する培地で培養し、培地中にフェルラ酸お
よびその関連物質を生成蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする１−置換−３−メトキシ−４−オキシベ
ンゼン類の製造方法。 （２）シュードモナス属に属する菌株がシュードモナス
・フルオレッセンスE118生工菌寄第15185号(Pseudomona
s fluorescens E-118 FERM P-15185)である前記（１）
記載の１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
製造方法。 （３）シュードモナス属に属する菌株が、休止菌体また
は固定化菌体である前記（１）記載の１−置換−３−メ
トキシ−４−オキシベンゼン類の製造方法。 （４）１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
がコニフェリルアルコール、バニリン、およびバニリン
酸の中から選ばれる一種以上の化合物である前記（１）
記載の１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
の製造方法。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明で使用する丁子油はインド
ネシア原産の常緑高木チョウジ（Syzygium aromaticum
Merrill et Perry）のつぼみ、花柄ないし葉を水蒸気蒸
留して得た精油で、日本は年間約１５０ｔを輸入してい
る。また、丁子油は天然物なので近年の消費者の天然物
指向の傾向から、原料としてよりふさわしい。本発明に
おける１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
としては、フェルラ酸、フェルラアルデヒド、コニフェ
リルアルコール、コニフェリルアルデヒド、バニリン、
バニリン酸、バニリルアルコールなどが挙げられ、これ
らの混合物をも含む。丁子油の１−置換−３−メトキシ
−４−オキシベンゼン類への変換能を有する菌株であれ
ばいかなる微生物でも本発明の製造方法に利用できる
が、特に活性の高いシュードモナス・フルオレッセンス
E118株が好ましい。
ネシア原産の常緑高木チョウジ（Syzygium aromaticum
Merrill et Perry）のつぼみ、花柄ないし葉を水蒸気蒸
留して得た精油で、日本は年間約１５０ｔを輸入してい
る。また、丁子油は天然物なので近年の消費者の天然物
指向の傾向から、原料としてよりふさわしい。本発明に
おける１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
としては、フェルラ酸、フェルラアルデヒド、コニフェ
リルアルコール、コニフェリルアルデヒド、バニリン、
バニリン酸、バニリルアルコールなどが挙げられ、これ
らの混合物をも含む。丁子油の１−置換−３−メトキシ
−４−オキシベンゼン類への変換能を有する菌株であれ
ばいかなる微生物でも本発明の製造方法に利用できる
が、特に活性の高いシュードモナス・フルオレッセンス
E118株が好ましい。
【００１０】その菌株を、丁子油を含んだ培地で好気的
に培養する。培養液は丁子油を含んでいて本菌株が生育
するものであればいかなるものでもよいが、好ましくは
丁子油０．１から０．５％（ｖ／ｖ）、しょ糖０．５か
ら３％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．０５から０．２％（ｗ
／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０１から０．１％
（ｗ／ｖ）、硫酸第一鉄７水塩０．０５から０．２％
（ｗ／ｖ）、酵母エキス０．１から１％（ｗ／ｖ）、酵
母エキス０．１から１％（ｗ／ｖ）及び金属塩混液０．
０５から０．２％（ｖ／ｖ）からなるもので、ｐＨ６．
５から８．０のものが用いられる。丁子油は培養中に消
費され尽くした場合は逐次培地に添加してもよい。金属
塩混液は脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．
４ｇ、ほう酸０．３ｇ、硫酸銅５水塩０．０４ｇ、よう
化カリウム０．１ｇ、硫酸マンガン７水塩０．４ｇ、モ
リブデン酸ナトリウム２水塩０．２ｇを溶かした溶液か
らなるものが好ましい。
に培養する。培養液は丁子油を含んでいて本菌株が生育
するものであればいかなるものでもよいが、好ましくは
丁子油０．１から０．５％（ｖ／ｖ）、しょ糖０．５か
ら３％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．０５から０．２％（ｗ
／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０１から０．１％
（ｗ／ｖ）、硫酸第一鉄７水塩０．０５から０．２％
（ｗ／ｖ）、酵母エキス０．１から１％（ｗ／ｖ）、酵
母エキス０．１から１％（ｗ／ｖ）及び金属塩混液０．
０５から０．２％（ｖ／ｖ）からなるもので、ｐＨ６．
５から８．０のものが用いられる。丁子油は培養中に消
費され尽くした場合は逐次培地に添加してもよい。金属
塩混液は脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．
４ｇ、ほう酸０．３ｇ、硫酸銅５水塩０．０４ｇ、よう
化カリウム０．１ｇ、硫酸マンガン７水塩０．４ｇ、モ
リブデン酸ナトリウム２水塩０．２ｇを溶かした溶液か
らなるものが好ましい。
【００１１】本発明の製造方法における培養は、２０〜
３５℃で１８〜７２時間通気撹拌により行う。培養時間
が短いとコニフェリル・アルコールまたはフェルラ酸が
得られる。培養時間が長いと、フェルラ酸に加えてバニ
リンまたはバニリン酸が得られる。得られた培養液から
遠心分離または濾過で微生物菌体を取り除く。上清を陰
イオン交換樹脂カラム、続いてシリカゲル・カラムにと
おして１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
を精製する。
３５℃で１８〜７２時間通気撹拌により行う。培養時間
が短いとコニフェリル・アルコールまたはフェルラ酸が
得られる。培養時間が長いと、フェルラ酸に加えてバニ
リンまたはバニリン酸が得られる。得られた培養液から
遠心分離または濾過で微生物菌体を取り除く。上清を陰
イオン交換樹脂カラム、続いてシリカゲル・カラムにと
おして１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類
を精製する。
【００１２】遠心分離または濾過で得られた菌体を、菌
体０．５ｇ（湿重量）に対して１Ｍリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ７．０）１ｍＬの割合で懸濁し、菌体懸濁液を
得る。休止菌体反応のための反応液は、菌体懸濁液と中
性付近の緩衝液及び丁子油が含まれれものであればいか
なる組成のものでも良い。丁子油成分が反応液から消費
され尽くした場合は逐次、反応液に添加して良い。ポリ
オキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル等の界
面活性剤やｎ−ヘプタンなどの水不溶性有機溶媒を反応
液に添加しても良い。
体０．５ｇ（湿重量）に対して１Ｍリン酸カリウム緩衝
液（ｐＨ７．０）１ｍＬの割合で懸濁し、菌体懸濁液を
得る。休止菌体反応のための反応液は、菌体懸濁液と中
性付近の緩衝液及び丁子油が含まれれものであればいか
なる組成のものでも良い。丁子油成分が反応液から消費
され尽くした場合は逐次、反応液に添加して良い。ポリ
オキシエチレンアルキルエーテルリン酸エステル等の界
面活性剤やｎ−ヘプタンなどの水不溶性有機溶媒を反応
液に添加しても良い。
【００１３】休止菌体反応は２５〜５０℃の温度で、丁
子油とｐＨ緩衝液が入った反応液を、丁子油成分をもは
や消費しなくなるまでの時間、好ましくは５から７２時
間の間、振盪、あるいは撹拌して行う。反応停止後、遠
心分離または濾過にて反応液から菌体を除去して上清を
得る。上清から公知の方法にて、フェルラ酸を分離精製
する。すなわち、上清に塩酸を滴下してフェルラ酸の粗
結晶を得る。粗結晶を少量の熱水に溶かし、冷却して再
結晶を得る。再結晶を繰り返して精製フェルラ酸を得
る。
子油とｐＨ緩衝液が入った反応液を、丁子油成分をもは
や消費しなくなるまでの時間、好ましくは５から７２時
間の間、振盪、あるいは撹拌して行う。反応停止後、遠
心分離または濾過にて反応液から菌体を除去して上清を
得る。上清から公知の方法にて、フェルラ酸を分離精製
する。すなわち、上清に塩酸を滴下してフェルラ酸の粗
結晶を得る。粗結晶を少量の熱水に溶かし、冷却して再
結晶を得る。再結晶を繰り返して精製フェルラ酸を得
る。
【００１４】菌体の固定化は、菌体内の丁子油をフェル
ラ酸に転換する酵素系が失活しないならば、いかなる方
法でもよい。菌体をセラミックやガラスの微粉末などの
担体に吸着させたり、グルタルアルデヒド等の架橋材で
菌体同士を架橋させたり、アルギン酸などの高分子化合
物で菌体を包み込んだりしてもよい。固定化菌体を用い
た反応は、休止菌体反応と同様な組成の反応液で同様に
保温し、振盪あるいは攪拌して行う。または、固定化菌
体を充填したカラムに反応液を流し込んで溶出液を集め
てもよい。反応停止後、遠心分離または濾過にて反応液
から固定化菌体を除去して上清を得る。上清から公知の
方法にて、フェルラ酸を分離精製する。分離した固定化
菌体は反復使用できる。
ラ酸に転換する酵素系が失活しないならば、いかなる方
法でもよい。菌体をセラミックやガラスの微粉末などの
担体に吸着させたり、グルタルアルデヒド等の架橋材で
菌体同士を架橋させたり、アルギン酸などの高分子化合
物で菌体を包み込んだりしてもよい。固定化菌体を用い
た反応は、休止菌体反応と同様な組成の反応液で同様に
保温し、振盪あるいは攪拌して行う。または、固定化菌
体を充填したカラムに反応液を流し込んで溶出液を集め
てもよい。反応停止後、遠心分離または濾過にて反応液
から固定化菌体を除去して上清を得る。上清から公知の
方法にて、フェルラ酸を分離精製する。分離した固定化
菌体は反復使用できる。
【００１５】
【実施例】つぎに、実施例により本発明を具体的に説明
する。本発明はこれらの実施例にのみ限定されるもので
はない。
する。本発明はこれらの実施例にのみ限定されるもので
はない。
【００１６】実施例１ シュードモナス・フルオレッセンスE118生工菌寄第1518
5号(Pseudomonas fluorescens E118 FERM P-15185)を、
丁子油０．２％（ｖ／ｖ）、しょ糖１％（ｗ／ｖ）、リ
ン酸２カリウム０．２％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．０３
％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０５％（ｗ
／ｖ）、酵母エキス０．０３％（ｗ／ｖ）、及び金属塩
混液０．１％（ｖ／ｖ）からなるｐＨ７．０に調製した
培養液２Ｌで２４時間通気撹拌培養した。金属塩混合液
として脱イオン水１Ｌに塩化カルシウム２水塩０．４
ｇ、ホウ酸０．３ｇ、硫酸銅５水塩０．０４ｇ、ヨウ化
カリウム０．１ｇ、硫酸第一鉄７水塩０．２ｇ、硫酸マ
ンガン７水塩０．４ｇ、モリブデン酸ナトリウム２水塩
０．２ｇを溶解した溶液を用いた。培養後の培養液を遠
心分離し、培養液を陰イオン交換樹脂（ＩＲＡ）カラム
にとおし、続いてシリカゲル・カラムにとおして精製フ
ェルラ酸０．５ｇおよびバニリン酸０．１ｇを得た。
5号(Pseudomonas fluorescens E118 FERM P-15185)を、
丁子油０．２％（ｖ／ｖ）、しょ糖１％（ｗ／ｖ）、リ
ン酸２カリウム０．２％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．０３
％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０５％（ｗ
／ｖ）、酵母エキス０．０３％（ｗ／ｖ）、及び金属塩
混液０．１％（ｖ／ｖ）からなるｐＨ７．０に調製した
培養液２Ｌで２４時間通気撹拌培養した。金属塩混合液
として脱イオン水１Ｌに塩化カルシウム２水塩０．４
ｇ、ホウ酸０．３ｇ、硫酸銅５水塩０．０４ｇ、ヨウ化
カリウム０．１ｇ、硫酸第一鉄７水塩０．２ｇ、硫酸マ
ンガン７水塩０．４ｇ、モリブデン酸ナトリウム２水塩
０．２ｇを溶解した溶液を用いた。培養後の培養液を遠
心分離し、培養液を陰イオン交換樹脂（ＩＲＡ）カラム
にとおし、続いてシリカゲル・カラムにとおして精製フ
ェルラ酸０．５ｇおよびバニリン酸０．１ｇを得た。
【００１７】実施例２ 実施例１の培養で得られた菌体を生理食塩水で洗浄し、
生理食塩水に懸濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体
懸濁液の濃度は０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。こ
の菌体懸濁液１ｍＬに１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ
７．０）０．２ｍＬと丁子油を４０ｍｇ加え、脱イオン
水で２ｍＬにした反応液を３０℃で４時間振とうした。
２ｍＬのメタノールを加えて反応を停止した後、反応液
を遠心分離し、分離した上清について高速液体クロマト
グラフでフェルラ酸などの分析を行った。高速液体クロ
マトグラフィーは、サイズが４．６×１５０ｍｍのＯＤ
Ｓ Ｃ１８カラムを用い、メタノール：脱イオン水：酢
酸＝４５：５２：３の成分比の溶出液を毎分１．０ｍＬ
の流速で流して展開し、２８０ｎｍの吸光度を検出し
た。標準のフェルラ酸の保持時間である３．０分付近の
ピークをフェルラ酸、２．２分付近のピークをバニリン
酸とした。その結果、フェルラ酸５ｍｇおよびバニリン
酸１．５ｍｇを得た。
生理食塩水に懸濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体
懸濁液の濃度は０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。こ
の菌体懸濁液１ｍＬに１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ
７．０）０．２ｍＬと丁子油を４０ｍｇ加え、脱イオン
水で２ｍＬにした反応液を３０℃で４時間振とうした。
２ｍＬのメタノールを加えて反応を停止した後、反応液
を遠心分離し、分離した上清について高速液体クロマト
グラフでフェルラ酸などの分析を行った。高速液体クロ
マトグラフィーは、サイズが４．６×１５０ｍｍのＯＤ
Ｓ Ｃ１８カラムを用い、メタノール：脱イオン水：酢
酸＝４５：５２：３の成分比の溶出液を毎分１．０ｍＬ
の流速で流して展開し、２８０ｎｍの吸光度を検出し
た。標準のフェルラ酸の保持時間である３．０分付近の
ピークをフェルラ酸、２．２分付近のピークをバニリン
酸とした。その結果、フェルラ酸５ｍｇおよびバニリン
酸１．５ｍｇを得た。
【００１８】実施例３ 実施例１の培養で得られた菌体を生理食塩水で洗浄し、
生理食塩水に懸濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体
懸濁液の濃度は０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。こ
の菌体懸濁液１０ｍＬをセラミック微粉末２ｇに吸着さ
せ、これに１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）２
ｍＬと丁子油を０．４ｇ加え、脱イオン水で２０ｍＬに
した反応液を３０℃で振とうした。２４時間後、丁字油
をさらに０．４ｇ添加して振とうした。 ２４時間後、
２０ｍＬのメタノールを加えて反応を停止した後、反応
液を遠心分離し、分離した上清について高速液体クロマ
トグラフで１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼ
ン類を測定した。高速液体クロマトグラフィーは、サイ
ズが４．６×１５０ｍｍのＯＤＳ Ｃ１８カラムを用
い、メタノール：脱イオン水：酢酸＝４５：５２：３の
成分比の溶出液を１．０ｍＬ／分の流速で流して展開
し、２８０ｎｍの吸光度を検出した。標準のフェルラ酸
の保持時間である３．０分付近のピークをフェルラ酸、
２．２分付近のピークをバニリン酸とした。その結果、
フェルラ酸１１０ｍｇおよびバニリン酸３３ｍｇを得
た。同じ操作を１０回繰り返した。１０回目のフェルラ
酸の生産量の低下率は１２％であった。１０回目のバニ
リン酸の生産量の低下率は１５％であった。
生理食塩水に懸濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体
懸濁液の濃度は０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。こ
の菌体懸濁液１０ｍＬをセラミック微粉末２ｇに吸着さ
せ、これに１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）２
ｍＬと丁子油を０．４ｇ加え、脱イオン水で２０ｍＬに
した反応液を３０℃で振とうした。２４時間後、丁字油
をさらに０．４ｇ添加して振とうした。 ２４時間後、
２０ｍＬのメタノールを加えて反応を停止した後、反応
液を遠心分離し、分離した上清について高速液体クロマ
トグラフで１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼ
ン類を測定した。高速液体クロマトグラフィーは、サイ
ズが４．６×１５０ｍｍのＯＤＳ Ｃ１８カラムを用
い、メタノール：脱イオン水：酢酸＝４５：５２：３の
成分比の溶出液を１．０ｍＬ／分の流速で流して展開
し、２８０ｎｍの吸光度を検出した。標準のフェルラ酸
の保持時間である３．０分付近のピークをフェルラ酸、
２．２分付近のピークをバニリン酸とした。その結果、
フェルラ酸１１０ｍｇおよびバニリン酸３３ｍｇを得
た。同じ操作を１０回繰り返した。１０回目のフェルラ
酸の生産量の低下率は１２％であった。１０回目のバニ
リン酸の生産量の低下率は１５％であった。
【００１９】比較例１ （オイゲノールの化学合成）グアヤコール１．２５ｇ、
ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ ０．０１ｇ、塩化ナトリウム飽和水
溶液８０ｍＬおよび塩化アリル０．７７ｇを５００ｍＬ
フラスコに入れ、攪拌しながら８０℃まで加熱した。一
時間後、１０％（Ｗ／Ｖ）酢酸ナトリウム水溶液８．２
ｍＬを３時間かけて加えた。その後、反応液を徐々に加
熱して１００℃になった後に空冷した。室温になってか
らトルエン５０ｍＬを加えて分層させた。トルエン層に
塩化ナトリウム飽和水溶液５０ｍＬで３回洗浄した。洗
浄後のトルエン層から、トルエンを蒸発させた後、６ｍ
ｍＨｇ（ＳＩ単位だと８００Ｐａ）にて蒸留を行った。
１１５−１４９℃でオイゲノール異性体含有量９０％
（Ｗ／Ｖ）の留分０．４２ｍＬが得られた。このうちｏ
−オイゲノール（天然型）は１１％（Ｖ／Ｖ）であり、
０．５ｇがとれた。グアヤコールから天然型オイゲノー
ルへの収率は８％であった。
ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ ０．０１ｇ、塩化ナトリウム飽和水
溶液８０ｍＬおよび塩化アリル０．７７ｇを５００ｍＬ
フラスコに入れ、攪拌しながら８０℃まで加熱した。一
時間後、１０％（Ｗ／Ｖ）酢酸ナトリウム水溶液８．２
ｍＬを３時間かけて加えた。その後、反応液を徐々に加
熱して１００℃になった後に空冷した。室温になってか
らトルエン５０ｍＬを加えて分層させた。トルエン層に
塩化ナトリウム飽和水溶液５０ｍＬで３回洗浄した。洗
浄後のトルエン層から、トルエンを蒸発させた後、６ｍ
ｍＨｇ（ＳＩ単位だと８００Ｐａ）にて蒸留を行った。
１１５−１４９℃でオイゲノール異性体含有量９０％
（Ｗ／Ｖ）の留分０．４２ｍＬが得られた。このうちｏ
−オイゲノール（天然型）は１１％（Ｖ／Ｖ）であり、
０．５ｇがとれた。グアヤコールから天然型オイゲノー
ルへの収率は８％であった。
【００２０】比較例２ （丁子油からのオイゲノールの精製）丁子油３００ｇ
に、５％（ｗ／ｗ）のＮａＯＨ水溶液１００ｍＬを加え
振とうして他の油を除いた後、希硫酸１００ｍＬを加え
てオイゲノールを析出させた。次いで、水１００ｍＬで
２回洗浄し、無水硫酸マグネシウム３０ｇを加えて乾燥
させた。次いで、減圧蒸留により、５ｍｍＨｇで１０８
℃〜１１２℃の留分を分留することによりオイゲノール
（純度９８ＧＣ％）３．２ｇを得た。つまり、丁子油か
らのオリゲノールの精製は収率約１％という非効率的な
ものであった。
に、５％（ｗ／ｗ）のＮａＯＨ水溶液１００ｍＬを加え
振とうして他の油を除いた後、希硫酸１００ｍＬを加え
てオイゲノールを析出させた。次いで、水１００ｍＬで
２回洗浄し、無水硫酸マグネシウム３０ｇを加えて乾燥
させた。次いで、減圧蒸留により、５ｍｍＨｇで１０８
℃〜１１２℃の留分を分留することによりオイゲノール
（純度９８ＧＣ％）３．２ｇを得た。つまり、丁子油か
らのオリゲノールの精製は収率約１％という非効率的な
ものであった。
【００２１】比較例３ （オイゲノールからのフェルラ酸）シュードモナス・フ
ルオレッセンスE118 FERM P-15185をオイゲノール０．
１５％（ｖ／ｖ）、しょ糖１％（ｗ／ｖ）、ペプトン
０．１％（ｗ／ｖ）、りん酸２カリウム０．２％（ｗ／
ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０５％（ｗ／ｖ）、
酵母エキス０．０３％（ｗ／ｖ）及び金属塩混合液０．
１％（ｖ／ｖ）からなるｐＨを７．０に調製した培養液
１Ｌで２４時間、通気撹拌培養した。金属塩混合液とし
て脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．４ｇ、
ほう酸０．３ｇ，硫酸銅５水塩０．０４ｇ，よう化カリ
ウム０．１ｇ，硫酸第一鉄７水塩０．２ｇ，硫酸マンガ
ン７水塩０．４ｇ，モリブデン酸ナトリウム２水塩０．
２ｇを溶かした溶液を用いた。培養後の培養液を遠心分
離して得た菌体を生理食塩水で洗浄し、生理食塩水に懸
濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体懸濁液の濃度は
０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。この菌体懸濁液１
ｍＬに、１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．
２ｍＬとオイゲノール１．６ｍｇを添加し、脱イオン水
で２ｍＬにした反応液を、３０℃で２時間振とうした。
その後、２ｍＬのメタノールをこの反応液に加えて反応
を停止した後、遠心分離して菌体を除去し、分離した上
清について、高速液体クロマトグラフィーでフェルラ酸
の定量分析を行った。標準のフェルラ酸の保持時間であ
る３．０分付近のピークをフェルラ酸とし、１．８ｍｇ
のフェルラ酸が検出された。しかし、バニリン酸の保持
時間である２．２分付近のピークは認められなかった。
ルオレッセンスE118 FERM P-15185をオイゲノール０．
１５％（ｖ／ｖ）、しょ糖１％（ｗ／ｖ）、ペプトン
０．１％（ｗ／ｖ）、りん酸２カリウム０．２％（ｗ／
ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０５％（ｗ／ｖ）、
酵母エキス０．０３％（ｗ／ｖ）及び金属塩混合液０．
１％（ｖ／ｖ）からなるｐＨを７．０に調製した培養液
１Ｌで２４時間、通気撹拌培養した。金属塩混合液とし
て脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．４ｇ、
ほう酸０．３ｇ，硫酸銅５水塩０．０４ｇ，よう化カリ
ウム０．１ｇ，硫酸第一鉄７水塩０．２ｇ，硫酸マンガ
ン７水塩０．４ｇ，モリブデン酸ナトリウム２水塩０．
２ｇを溶かした溶液を用いた。培養後の培養液を遠心分
離して得た菌体を生理食塩水で洗浄し、生理食塩水に懸
濁し、菌体懸濁液を得た。得られた菌体懸濁液の濃度は
０．５ｇ（湿重量）／ｍＬであった。この菌体懸濁液１
ｍＬに、１Ｍりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．
２ｍＬとオイゲノール１．６ｍｇを添加し、脱イオン水
で２ｍＬにした反応液を、３０℃で２時間振とうした。
その後、２ｍＬのメタノールをこの反応液に加えて反応
を停止した後、遠心分離して菌体を除去し、分離した上
清について、高速液体クロマトグラフィーでフェルラ酸
の定量分析を行った。標準のフェルラ酸の保持時間であ
る３．０分付近のピークをフェルラ酸とし、１．８ｍｇ
のフェルラ酸が検出された。しかし、バニリン酸の保持
時間である２．２分付近のピークは認められなかった。
【００２２】
【発明の効果】本発明の方法を用いることにより、医薬
品、化粧品、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶など
の原料として広範な用途が期待されている１−置換−３
−メトキシ−４−オキシベンゼン類を安価で大量に製造
することが可能となる。また、丁子油は天然物なので近
年の消費者の天然物指向の傾向から、原料としてよりふ
さわしい。チョウジ産地の現場で１−置換−３−メトキ
シ−４−オキシベンゼン類にまで加工が可能になれば１
−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類がより安
価になり、また産地の地域振興に役立つことが想像でき
る。
品、化粧品、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶など
の原料として広範な用途が期待されている１−置換−３
−メトキシ−４−オキシベンゼン類を安価で大量に製造
することが可能となる。また、丁子油は天然物なので近
年の消費者の天然物指向の傾向から、原料としてよりふ
さわしい。チョウジ産地の現場で１−置換−３−メトキ
シ−４−オキシベンゼン類にまで加工が可能になれば１
−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類がより安
価になり、また産地の地域振興に役立つことが想像でき
る。
Claims (4)
- 【請求項１】 シュードモナス属に属する菌株を、丁子
油を含有する培地で培養し、培地中に１−置換−３−メ
トキシ−４−オキシベンゼン類を生成蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする、１−置換−３−メトキシ
−４−オキシベンゼン類の製造法。 - 【請求項２】 シュードモナス属に属する菌株がシュー
ドモナス・フルオレッセンスE118生工菌寄第15185号(Ps
eudomonas fluorescens E118 FERM P-15185)である請求
項１記載の１−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼ
ン類の製造方法。 - 【請求項３】 シュードモナス属に属する菌株が、休止
菌体または固定化菌体である請求項１記載の１−置換−
３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造方法。 - 【請求項４】 １−置換−３−メトキシ−４−オキシベ
ンゼン類がコニフェリルアルコール、バニリン、および
バニリン酸の中から選ばれる一種以上の化合物である請
求項１記載の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9551498A JPH11266890A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | １−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造法 |
| PCT/JP1999/001493 WO1999049068A1 (fr) | 1998-03-24 | 1999-03-24 | Procede de production de 1-substitues-3-methoxy-4-oxybenzenes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9551498A JPH11266890A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | １−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11266890A true JPH11266890A (ja) | 1999-10-05 |
Family
ID=14139690
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9551498A Pending JPH11266890A (ja) | 1998-03-24 | 1998-03-24 | １−置換−３−メトキシ−４−オキシベンゼン類の製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11266890A (ja) |
| WO (1) | WO1999049068A1 (ja) |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4227076A1 (de) * | 1992-08-17 | 1994-02-24 | Haarmann & Reimer Gmbh | Verfahren zur Herstellung substituierter Methoxyphenole und dafür geeignete Mikroorganismen |
| JPH09154591A (ja) * | 1995-12-05 | 1997-06-17 | Chisso Corp | フェルラ酸の製造法 |
| JP4309969B2 (ja) * | 1996-02-23 | 2009-08-05 | チッソ株式会社 | 新規酸化還元酵素及びそれを用いた３―（ｐ―ヒドロキシフェニル）―２―プロペノール誘導体等の製造法 |
| DE19649655A1 (de) * | 1996-11-29 | 1998-06-04 | Haarmann & Reimer Gmbh | Syntheseenzyme für die Herstellung von Coniferylalkohol, Coniferylaldehyd, Ferulasäure, Vanillin und Vanillinsäure und deren Verwendung |
-
1998
- 1998-03-24 JP JP9551498A patent/JPH11266890A/ja active Pending
-
1999
- 1999-03-24 WO PCT/JP1999/001493 patent/WO1999049068A1/ja active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1999049068A1 (fr) | 1999-09-30 |
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