JPH11239489A - ｄｎａＧ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ｄｎａＧポリペプチドおよび該ポリペプチド
をコードしているポリヌクレオチド、ならびに組換え法
によるかかるポリペプチドの製造方法を提供する。さら
に抗細菌化合物のスクリーニングのためのｄｎａＧの使
用方法を提供する。 【解決手段】 配列番号：２に全長にわたり配列番号：
２のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を
有する単離ポリペプチド、あるいは配列番号：１の全長
にわたり配列番号：１のヌクレオチド配列に対して少な
くとも７０％の同一性を有する単離ポリヌクレオチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規に同定された
ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、その製造および
使用、ならびにその変種、アゴニストおよびアンタゴニ
スト、ならびにその使用に関する。特に、本発明は、ｄ
ｎａＧ（ＤＮＡプライマーゼ）ファミリーのポリヌクレ
オチドおよびポリペプチドならびにそれらの変種（以
下、「ｄｎａＧ」、「ｄｎａＧポリヌクレオチド」、お
よび「ｄｎａＧポリペプチド」と称する）に関する。

【０００２】

【従来の技術】ストレプトコッカス属（Streptococci）
は医学的に重要な微生物属を形成しており、ヒトに，例
えば中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎を包含する、いくつかの型の疾患を引き起
こすことが知られている。ストレプトコッカス属の単離
から１００年以上も経過しているため、ストレプトコッ
カス・ニューモニアエ（Streptococcus pneumoniae）
は、より詳細な研究が為された微生物の一つである。例
えば、事実、ＤＮＡが遺伝物質であるという初期の見解
の大部分は、この微生物を用いたGriffithならびに、Av
ery、MacleodおよびMcCartyの研究により示された。ス
トレプトコッカス・ニューモニアエに関する研究は膨大
であるにも関わらず、この微生物の毒性に関しては多く
の疑問が残されている。抗生物質の開発のための標的と
してストレプトコッカス属の遺伝子および遺伝子産物を
用いるのはとりわけ好ましいことである。

【０００３】ストレプトコッカス・ニューモニアエ感染
の頻度は過去２０〜３０年間に劇的に上昇している。こ
れは多重抗生物質耐性株の出現、および免疫系が低下し
た人口の増加に起因している。いくつかのまたはすべて
の標準的な抗生物質に対して耐性を有するストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ株を単離することはもはやめず
らしいことではない。この現象がこの生物に対する新し
い抗微生物剤、ワクチンおよび診断試験についての必要
性を形成した。

【０００４】そのうえ、薬剤の発見方法は、現在のとこ
ろ、「機能的遺伝学」、すなわち、高処理量のゲノムま
たは遺伝子に基づく生物学を包含するので抜本的な改革
を受けている。このアプローチは、「位置的クローニン
グ」に基づく初期のアプローチおよび他の方法に取って
代わりつつある。機能的遺伝学は、現在利用可能な多く
の分子生物学的データベースならびに他のソースから潜
在的に興味ある遺伝子配列を同定するための種々の道具
に大きく依存している。薬剤の発見の標的としての、さ
らなる遺伝子および他のポリヌクレオチド配列ならびに
それらの関連ポリペプチドの同定および特徴づけをする
必要性があり続けている。

【０００５】抗微生物活性に関して化合物をスクリーニ
ングするために有用であるという利点を有した、本発明
のｄｎａＧ具体例のごとき因子に対する要望があること
は明白である。かかる因子はまた、感染、機能不全およ
び疾患の発生病理における役割を決定するのに有用であ
る。感染、機能不全および疾患を予防、改善または治癒
するための方法を見出すために、かかる因子ならびにそ
のアンタゴニストおよびアゴニストを同定および特徴づ
けする必要も明らかにある。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ｄｎａＧ、
詳細にはｄｎａＧポリペプチドおよびｄｎａＧポリヌク
レオチド、組み換え物質ならびにそれらの製造方法に関
する。もう１つの態様において、本発明は、かかるポリ
ペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関し、と
りわけ、微生物による疾病の治療を包含する。さらなる
態様において、本発明は、本発明により提供される材料
を用いるアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法、
ならびに同定されたアゴニストまたはアンタゴニスト化
合物を用いる微生物による感染およびかかる感染に関連
した症状の治療方法に関する。さらなる態様において、
本発明は、微生物による感染およびかかる感染に関連し
た症状の検出のための診断アッセイ、例えば、ｄｎａＧ
発現または活性の検出のためのアッセイに関する。

【０００７】開示された本発明の精神および範囲内での
種々の変更および修飾は、以下の説明を読み、本開示の
他の部分を読めば、当業者に容易に明らかになるであろ
う。

【０００８】

【課題を解決するための手段】以下により詳細に説明す
るように、本発明は、ｄｎａＧポリペプチドおよびポリ
ヌクレオチドに関する。詳細には、本発明は、イー・コ
リ（E. coli）のｄｎａＧポリペプチドに対するアミノ
酸配列相同性により関連づけられるストレプトコッカス
・ニューモニアエ（Streptococcus pneumoniae）のｄｎ
ａＧのポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。
特に、本発明は、それぞれ配列番号：１および配列番
号：２として表１に示されるヌクレオチドおよびアミノ
酸配列を有するｄｎａＧに関する。当業者は、下記配列
表に「ＤＮＡ」として示す配列を一般的にはリボポリヌ
クレオチドを包含するポリヌクレオチドにおいて利用で
きると認識するので、かかる配列は本発明の典型例であ
る。

【０００９】表１ ｄｎａＧポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列 （Ａ）ストレプトコッカス・ニューモニアエのｄｎａＧ
ポリヌクレオチド配列［配列番号１］ 5'-TCTCCTGATTGCCAAGTTTCGTGGTGAAAAGCGTGGACTATTTCCGA
GACGTCTGGCTAGCTATAAGGATAAGTTTCAGG CGACCATTGAAAAAGTGGGAAACGGTCTTGAGAAACACTTGAATACACCG
ATTGAGTTCTTATCTGGTGGACAAAGACAG GCTTTGAGTCTCTTGATGGCAACCTTGAAGCGACCTGAATTACTCTTGTT
AGACGAGCATACTGCTGCCCTGGATCCAAA GACTAGTGTTGCTTTGATGGAATTGACAGATGAATTTGTTAAGAAAGATC
AATTGACAGCCCTTATGATTACCCATCATA TGGAAGATGCTCTCAAATATGGCAATCGCTTGATTGTCATGAAAGAAGGA
CGGGTTATCCAAGATTTGAAACAAGAAGAA AAAGCAAAAATGAAAATCTCTGATTATTATCAACTCTTTGAATAAAGTAG
GGAAAATGAGTGAAATGGTTTACTTTTTTT CTGAAATAAAGTATACTATATAAAGTAAACTATGATAACATGGAGGTATT
GTGTATGGTTGACAAACAAGTCATTGAAGA AATCAAAAACAATGCCAACATTGTGGAAGTCATAGGAGATGTGATTTCTT
TACAAAAGGCAGGACGGAACTATCTAGGGC TCTGTCCTTTTCATGGTGAAAAAACACCTTCTTTCAGCGTTGTAGAGGAC
AAGCAGTTTTACCACTGTTTTGGTTGTGGT CGCTCAGGTGATGTCTTTAAATTCATCGAGGAGTACCAAGGGGTTACCTT
TATGGAGGCTGTCCAAATCTTAGGTCAGCG TGTCGGGATTGAGGTTGAAAAACCGCTTTATAGTGAACAGAAGCCAGCCT
CGCCTCACCAAGCTCTTTATGATATGCACG AAGATGCGGCTAAATTTTACCATGCTATTCTCATGACAACGACTATGGGC
GAAGAGGCCAGAAATTACCTTTATCAGCGG GGTTTGACAGATGAAGTGCTTAAACATTTTTGGATTGGTTTAGCACCTCC
AGAACGAAACTATCTCTATCAACGTTTGTC TGATCAGTATCGTGAAGAGGATTTACTGGATTCAGGCCTGTTTTATCTTT
CGGATGCCAATCAATTTGTAGACACCTTTC ACAATCGCATTATGTTTCCCCTGACAAATGACCAAGGAAAGGTCATTGCC
TTCTCAGGTCGTATCTGGCAAAAAACGGAT TCACAAACTTCTAAGTATAAAAACAGCCGATCGACTGTAATTTTTAACAA
AAGTTACGAATTATATCATATGGATAGGGC AAAAAGATCTTCTGGAAAAGCTAGTGAGATTTACCTGATGGAAGGATTCA
TGGATGTTATTGCAGCCTATCGGGCTGGAA TCGAAAATGCTGTGGCGTCGATGGGAACGGCCTTGAGTCGAGAGCATGTT
GAGCATCTGAAAAGGTTAACCAAGAAATTG GTTCTTGTTTACGATGGAGATAAGGCTGGGCAAGCCGCGACATTGAAAGC
ATTGGATGAAATTGGTGATATGCCTGTGCA AATCGTCAGCATGCCTGATAACTTGGATCCTGATGAATATCTACAAAAAA
ATGGTCCAGAAGACTTGGCCTATCTATTAA CGAAAACTCGTATTAGTCCGATTGAGTTCTACATTCATCAGTACAAACCT
GAAAACGGTGAAAATCTGCAGGCTCAGATT GAGTTTCTTGAAAAAATAGCTCCCTTGATTGTTCAAGAAAAGTCCATCGC
TGCTCAAAACAGCTATATTCATATTTTAGC TGACAGTCTGGCGTCCTTTGATTATACCCAGATTGAGCAGATTGTTAATG
AGAGTCGTCAGGTGCAAAGGCAGAATCGCA TGGAAAGAATTTCCAGACCGACGCCAATCACCATGCCTGTCACCAAGCAG
TTATCGGCTATTATGAGGGCAGAAGCCCAT CTACTCTATCGGATGATGGAATCCCCTCTTGTTTTGAACGATTACCGTTT
GCGAGAAGACTTTGCATTTGCTACACCTGA ATTTCAGGTCTTACATGACTTGCTTGGCCAGTATGGAAATCTTCCTCCAG
AAGTTTTAGCAGAGCAGACAGAGGAAGTTG AAAGAGCTTGGTACCAAGTTTTAGCTCAGGATTTGCCTGCTGAGATATCG
CCGCAGGAACTTAGTGAAGTAGAGATGACT CGAAACAAGGCTCTCTTGAATCAGGACAATATGAGAATCAAAAAGAAGGT
GCAGGAAGCTAGCCATGTAGGAGATACAGA TACAGCCCTAGAAGAATTGGAACGTTTAATTTCCCAAAAGAGAAGAATGG
AGTAATAATGGCAACAAAACAAAAAGAAGT AACAACATTTGACGTACAGGTAGCAGAATTTATCCGTAATCATAAGCAAA
AAGGGACAGCAACAGATGATGAAATCAATG CAAGTCTGGTTATTCCTTTTACCTTGGACGCTGATGGGATTGAAGATCTC
TTGCAACGGATTCAGGATGCAGGGATTTCT ATCACAGATAACGAAGGAAATCCAAGTGCGCGTGTTCTTAGCAATGAAGA
AGAACCAGAACTCAGCGATGAGGACTTGAT TGGGTCAACTTCTGCTAAGGTCAATGACCCTGTCCGTATGTACTTGAAAG
AAATAGGGGTCGTTCCTCTCTTGACCAATG AAGAGGAGAAAGAGTTGGCACTGGCTGTTGAAGCTGGTGATATCGAAGCC
AAACAACGTCTTGCGGAAGCCAATCTTCGT TTGGTTGTTTCCATTGCCAAACGCTATG-3'

【００１０】（Ｂ）この表のポリヌクレオチド配列より
推定されるストレプトコッカス・ニューモニアエのｄｎ
ａＧポリペプチド配列［配列番号２］ NH₂-MEVLCMVDKQVIEEIKNNANIVEVIGDVISLQKAGRNYLGLCPFHG
EKTPSFSVVEDKQFYHCFGCGRSGDVFKFIEEYQ GVTFMEAVQILGQRVGIEVEKPLYSEQKPASPHQALYDMHEDAAKFYHAI
LMTTTMGEEARNYLYQRGLTDEVLKHFWIG LAPPERNYLYQRLSDQYREEDLLDSGLFYLSDANQFVDTFHNRIMFPLTN
DQGKVIAFSGRIWQKTDSQTSKYKNSRSTV IFNKSYELYHMDRAKRSSGKASEIYLMEGFMDVIAAYRAGIENAVASMGT
ALSREHVEHLKRLTKKLVLVYDGDKAGQAA TLKALDEIGDMPVQIVSMPDNLDPDEYLQKNGPEDLAYLLTKTRISPIEF
YIHQYKPENGENLQAQIEFLEKIAPLIVQE KSIAAQNSYIHILADSLASFDYTQIEQIVNESRQVQRQNRMERISRPTPI
TMPVTKQLSAIMRAEAHLLYRMMESPLVLN DYRLREDFAFATPEFQVLHDLLGQYGNLPPEVLAEQTEEVERAWYQVLAQ
DLPAEISPQELSEVEMTRNKALLNQDNMRI KKKVQEASHVGDTDTALEELERLISQKRRME-COOH

【００１１】寄託材料 ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３株
を含む寄託株を、１９９６年４月１１日に、スコットラ
ンド、ＡＢ２ １ＲＹ、アバディーン、マチャードライ
ブ２３Ｓt.のナショナル・コレクション・オブ・インダ
ストリアル・アンド・マリーン・バクテリア・リミテッ
ド（本明細書にて「ＮＣＩＭＢ」という）に、ＮＣＩＭ
Ｂ受託番号４０７９４の下で寄託した。その寄託株は寄
託の際にストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３と命名された。１９９６年４月１７日に、同様
に、エシェリシア・コリ中のストレプトコッカス・ニュ
ーモニアエ０１００９９３ＤＮＡライブラリーがＮＣＩ
ＭＢに寄託され、受託番号４０８００が与えられた。ス
トレプトコッカス・ニューモニアエ寄託株を、本明細書
では「寄託株」または「寄託株のＤＮＡ」と称する。

【００１２】寄託株は全長のｄｎａＧ遺伝子を含んでい
る。寄託株に含まれるポリヌクレオチドの配列ならびに
それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列
は、本明細書における配列の記載とのいずれの不一致に
おいても支配的である。寄託株の寄託は、特許手続き上
の微生物寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件
下で行われている。特許が発行されると何ら制限または
条件もなく、最終的に株は分譲される。寄託株は当業者
の便宜のためにのみ提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.１１２条
の下に要求されるような、寄託が実施可能要件であるこ
とを承認するものではない。

【００１３】寄託株、それに由来の化合物を製造、使用
または販売するには、ライセンスが必要であるが、その
ようなライセンスはここで付与されるものではない。本
発明の一の態様は、寄託株に含まれるストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ０１００９９３株により発現可能な
成熟ポリペプチドをコードする単離核酸分子を提供する
ことである。さらには、本発明は寄託株中のＤＮＡのｄ
ｎａＧヌクレオチド配列およびそれによりコードされる
アミノ酸配列を提供する。また、本発明は寄託株より単
離されたｄｎａＧポリペプチド配列およびそれに由来の
アミノ酸配列を提供する。

【００１４】ポリペプチド 本発明ｄｎａＧポリペプチドは、系統発生論的に他のｄ
ｎａＧ（ＤＮＡプライマーゼ）ファミリーの蛋白に実質
的に関連している。本発明の１の態様において、ストレ
プトコッカス・ニューモニアエのポリペプチド（本明細
書では「ｄｎａＧ」および「ｄｎａＧポリペプチド」と
いう）、ならびに生物学的、診断上、予防上、臨床的ま
たは治療上有用なその変種、ならびにそれを含む組成物
が提供される。本発明のとりわけ好ましい具体例は、ｄ
ｎａＧ遺伝子の自然発生対立遺伝子によりコードされる
ｄｎａＧポリペプチドの変種である。

【００１５】さらに本発明は下記のものである単離ポリ
ペプチド： （ａ）配列番号：２の全長にわたって配列番号：２のア
ミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好まし
くは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも
９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９
％の同一性を有するかまたは全く同一であるアミノ酸配
列を含むかまたはそれよりなるポリペプチド； （ｂ）配列番号：１の全長にわたって配列番号：１に対
して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも
８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同
一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一
性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を
有するかまたは全く同一であるポリヌクレオチド配列を
含むかまたはそれよりなる単離ポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチド； （ｃ）配列番号：２の全長にわたって配列番号：２のア
ミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好まし
くは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも
９５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９
％の同一性を有するかまたは全く同一であるポリペプチ
ドをコードしているポリヌクレオチド配列を含むかまた
はそれよりなる単離ポリヌクレオチドによりコードされ
るポリペプチドを提供する。

【００１６】本発明のポリペプチドは、表１［配列番
号：２］のポリペプチド（とりわけ成熟ポリペプチド）
ならびにポリペプチドおよびフラグメント、詳細には、
ｄｎａＧの生物活性を有し、表１［配列番号：１］のポ
リペプチドまたはその該当部分と少なくとも７０％の同
一性、好ましくは表１［配列番号：２］のポリペプチド
と少なくとも８０％の同一性、より好ましくは表１［配
列番号：２］のポリペプチドと少なくとも９０％の類似
性（より好ましくは、少なくとも９０％の同一性）、さ
らにより好ましくは表１［配列番号：２］のポリペプチ
ドと少なくとも９５％の類似性（より好ましくは少なく
とも９５％の同一性）、さらにずっと好ましくは表１
［配列番号：２］のポリペプチドと少なくとも９９また
は９９．５％の同一性を有するポリペプチドおよびフラ
グメントを包含し、さらにかかるポリペプチドの部分も
包含し、一般に、ポリペプチドのかかる部分は少なくと
も３０個のアミノ酸、より好ましくは、少なくとも５０
個のアミノ酸を含む。

【００１７】本発明はまた、 Ｘ−（R₁）_m−（R₂）−（R₃）_n−Ｙ ［式中、アミノ末端のＸは水素または金属、または本明
細書において修飾ポリペプチドについて説明される他の
残基であり、カルボキシル末端のＹは水素または金属、
または本明細書において修飾ポリペプチドについて説明
される他の残基であり、R₁およびR₃はいずれかのアミノ
酸残基または修飾アミノ酸残基であり、ｍは１〜１００
０の整数または０であり、ｎは１〜１０００の整数また
は０であり、R₂は本発明のアミノ酸配列、特に表１のア
ミノ酸配列またはそれらの修飾形態を意味する］で示さ
れるポリペプチドを包含する。上記の式中、R₂はアミノ
末端残基がその左側でR₁に結合し、そのカルボキシ末端
残基がその右側でR₃に結合するように方向づけられる。
ｍおよび／またはｎが１より大きい場合、Ｒ₁またはＲ₃
のいずれかでで表されるアミノ酸残基の鎖は、ヘテロポ
リマーまたはホモポリマーのいずれであってもよく、ヘ
テロポリマーが好ましい。本発明の他の好ましい具体例
は、ｍが１ないし５０、１００または５００の間の整数
であり、ｎが１ないし５０、１００または５００の間の
整数のものである。本発明がストレプトコッカス・ニュ
ーモニアエ由来のものであるのが最も好ましいが、同じ
分類学上の属の他の生物由来のものであっても好まし
い。また本発明ポリペプチドは、例えば、同じ科または
目から得られるものであってもよい。

【００１８】フラグメントは、その全体が上記したポリ
ペプチドのアミノ酸配列の全部ではないが、一部と同じ
であるアミノ酸配列を有する変種ポリペプチドである。
ｄｎａＧポリペプチドと同様、フラグメントは「独立し
ている（free-standing）」であるか、またはそれらが
一の部分または領域、最も好ましくは単一の連続した領
域、単一のより大きなポリペプチドを形成するより大き
なポリペプチドの中に含まれていてもよい。

【００１９】好ましいフラグメントは、例えば、表１
［配列番号：２］のアミノ酸配列または、アミノ末端を
含む連続した一連の残基またはカルボキシル末端を含む
連続した一連の残基のような、その変種の一部を有する
末端切断ポリペプチドを包含する。宿主細胞、特に、ス
トレプトコッカス・ニューモニアエ中の本発明のポリペ
プチドの分解型も好ましい。さらに、アルファヘリック
スおよびアルファヘリックス形成領域、ベータシートお
よびベータシート形成領域、ターンおよびターン形成領
域、コイルおよびコイル形成領域、親水領域、疎水領
域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、フレ
キシブル領域、表面形成領域、基質結合領域、および高
抗原指数領域を含むフラグメントのような、構造的また
は機能的属性によって特徴づけられるフラグメントもま
た好ましいフラグメントである。

【００２０】さらに好ましいフラグメントは、配列番
号：２のアミノ酸配列由来の少なくとも１５、２０、３
０、４０、５０または１００個の連続したアミノ酸を有
するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド、あるいは配
列番号：２のアミノ酸配列から末端切断または欠失され
た少なくとも１５、２０、３０、４０、５０または１０
０個の連続したアミノ酸を有するアミノ酸配列を含む単
離ポリペプチドを包含する。

【００２１】生物学的に活性なフラグメントも好ましい
フラグメントである。生物学的に活性なフラグメント
は、類似活性または改良活性を有するもの、または望ま
しくない活性が減少したフラグメントを含め、ｄｎａＧ
の活性を媒介するフラグメントである。さらに、動物、
特にヒトにおいて抗原性または免疫原性であるフラグメ
ントも含まれる。特に好ましいものは、ストレプトコッ
カス・ニューモニアエの生存に必須の機能または個体、
特に、ヒトにおいて疾患を開始または疾病を維持する能
力を与える酵素の受容体またはドメインを含むフラグメ
ントである。

【００２２】本発明のポリペプチドのフラグメントであ
る変種は、ペプチド合成法により対応する全長のポリペ
プチドの製造に使用することができる。したがって、こ
れらの変種は、本発明の全長ポリペプチドを製造するた
めの中間体として使用できる。

【００２３】アミノ酸に関する標準的１文字および３文
字表記に加えて、「Ｘ」または「Ｘａａ」なる語もま
た、本発明のあるポリペプチドを記載するのに用いられ
る。「Ｘ」および「Ｘａａ」は、２０種の天然に存在す
るいずれかのアミノ酸がポリペプチド配列のそのように
指定される位置にあってもよいことを意味する。

【００２４】ポリヌクレオチド ｄｎａＧポリペプチドをコードしているポリヌクレオチ
ド、詳細には、本明細書でｄｎａＧと命名されるポリペ
プチドをコードしているポリヌクレオチドを提供するこ
とが本発明の１の目的である。本発明の特に好ましい具
体例において、ポリヌクレオチドは、全長の遺伝子を含
む、表１（配列番号：１）に示す配列を含むｄｎａＧポ
リペプチド、またはその変種をコードしている領域を含
む。出願人らは、この全長の遺伝子は当該ポリペプチド
を有する生物（例えば、ストレプトコッカス・ニューモ
ニアエ）の増殖および／または生存に必須であると考え
る。本発明のさらなる態様として、ｄｎａＧポリペプチ
ドおよびポリヌクレオチド、詳細には、ストレプトコッ
カス・ニューモニアエのｄｎａＧポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドをコードおよび／または発現する単離核
酸分子が提供され、核酸分子としては、例えば、未プロ
セッシングＲＮＡ、リボザイムＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡ、Ｂ−およびＺ−ＤＮＡが挙げられ
る。本発明のさらなる具体例は、生物学的、診断上、予
防上、臨床的または治療上有用なポリヌクレオチドおよ
びポリペプチド、ならびにその変種、ならびにそれらを
含む組成物を包含する。

【００２５】本発明のもう一つの態様は、表１［配列番
号：２］の推定アミノ酸配列を有するｄｎａＧポリペプ
チドをコードする単離ポリヌクレオチド、それに密接に
関連するポリヌクレオチドおよびそれらの変種に関す
る。

【００２６】もう１つの特に好ましい本発明具体例にお
いて、表１（配列番号：２）のアミノ酸配列を含むかま
たはそれよりなる、ストレプトコッカス・ニューモニア
エ由来のｄｎａＧポリペプチドが提供される。表１［配
列番号：１］に示すポリヌクレオチド配列のような本明
細書の情報を使用し、出発材料としてストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ０１００９９３を使用し、細菌から
の染色体ＤＮＡフラグメントをクローニングし、配列決
定し、つづいて全長クローンを得る標準的クローニング
およびスクリーニング法を使用して、ｄｎａＧポリペプ
チドをコードする本発明のポリヌクレオチドを得ること
ができる。例えば、表１［配列番号：１］に示す配列の
ような本発明のポリヌクレオチド配列を得るには、典型
的には、エシェリシア・コリまたは他の適当な宿主中の
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３の
染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを、部分配列か
ら由来する放射標識したオリゴヌクレオチド、好ましく
は１７量体またはそれより長いオリゴヌクレオチドでプ
ローブする。ついで、該プローブと同じＤＮＡを有する
クローンを厳密な条件を使用して区別できる。該オリジ
ナル配列から設計された配列決定プライマーで同定され
た個々のクローンを配列決定することにより、該配列を
両方の方向に伸長し、全長を決定することが可能であ
る。都合よくは、プラスミド・クローンから調製された
変性二本鎖ＤＮＡを用いてかかる配列決定を行う。適当
な技法は、Maniatis,T.，Fritsch,E.F.およびSambrook
ら、MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd E
d.；Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spri
ng Harbor, New York（1989）（特に、ハイブリダイゼ
ーションによるスクリーニング１.９０および変性二本
鎖ＤＮＡ鋳型の配列決定１３.７０を参照のこと）によ
り記載されている。直接ゲノムＤＮＡ配列決定を行って
全長の遺伝子配列を得てもよい。例えば、表１［配列番
号：１］に示すポリヌクレオチドは、ストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ０１００９９３から由来するＤＮＡ
ライブラリー中に見いだされたものである。

【００２７】そのうえ、表１［配列番号：１］のＤＮＡ
配列は、表１［配列番号：２］に示すのとほぼ同数のア
ミノ酸残基を有し、公知のアミノ酸残基の分子量から計
算できる推定分子量を有する蛋白をコードする読み枠を
有する。配列番号１のヌクレオチド番号５２０と、ヌク
レオチド番号２２９３で始まる停止コドンとの間の配列
番号１のポリヌクレオチドが、配列番号２のポリペプチ
ドをコードする。

【００２８】さらなる態様において、本発明は、下記の
ポリヌクレオチドを含むかまたはそれらよりなる単離ポ
リヌクレオチドを提供する： （ａ）配列番号：１の全長にわたって配列番号：１に対
して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも
８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同
一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一
性、さらにより好ましくは少なくとも９７〜９９％の同
一性を有するかまたは全く同一であるポリヌクレオチド
配列； （ｂ）配列番号：２の全長にわたって配列番号：２のア
ミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好まし
くは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なく
とも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも
９５％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９７
〜９９％またはちょうど１００％の同一性を有するポリ
ペプチドをコードしているポリヌクレオチド配列。 厳密なハイブリダイゼーション条件において配列番号：
１もしくは３の配列またはそれらのフラグメントを含む
かまたはそれらよりなる標識または検出可能プローブを
用いて適当なライブラリーをスクリーニングし、次い
で、該ポリヌクレオチド配列を含む全長遺伝子および／
またはゲノムクローンを単離する工程を含む方法によ
り、本発明ポリペプチドをコードしているポリヌクレオ
チド（ストレプトコッカス・ニューモニアエ以外の種由
来のホモログおよびオーソログを包含）を得てもよい。

【００２９】本発明は、表１［配列番号：１］のコーデ
ィング配列と、その全長にわたって同一であるポリヌク
レオチド配列を提供する。また、本発明は、成熟ポリペ
プチドまたはそのフラグメント用のコーディング配列自
体ならびにリーダーまたは分泌配列、プレ、プロまたは
プレプロ蛋白配列をコードするコーディング配列のよう
な他のコーディング配列を有するリーディング・フレー
ム中の成熟ポリペプチドまたはフラグメントのコーディ
ング配列を提供する。ポリヌクレオチドはまた、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、終止シグナル（例
えば、ｒｈｏ−依存的およびｒｈｏ−非依存的終止シグ
ナル）、リボソーム結合部位、Kozak配列、ｍＲＮＡを
安定化する配列、イントロン、ポリアデニル化シグナル
のごとき少なくとも１つの非コーディング５’および
３’配列を包含する非コーディング配列を含むが、これ
らに限定するものではない。また、ポリヌクレオチド配
列はさらなるアミノ酸をコードしているさらなるコーデ
ィング配列を含んでいてもよい。例えば、融合ポリペプ
チドの精製を促進するマーカー配列をコードすることが
できる。本発明のある種の具体例において、マーカー配
列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）において提供さ
れ、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1989）86：821
-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド
であるか、またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，37:767(1
984)）であり、ともにそれらに融合したポリペプチド配
列の精製において有用である。本発明ポリヌクレオチド
は、限定するものではないが、構造遺伝子および遺伝子
の発現を調節する、本来的に結合している配列からなる
ポリヌクレオチドを包含する。

【００３０】本発明の好ましい具体例は、表１の配列番
号１に示されるヌクレオチド５２０からヌクレオチド２
２９３のすぐ上流にあるヌクレオチドまたはそのヌクレ
オチドを含むヌクレオチドまでを有するポリヌクレオチ
ドであり、それは共にｄｎａＧポリペプチドをコードす
る。

【００３１】本発明はまた、式： Ｘ−（R₁）_m−（R₂）−（R₃）_n−Ｙ ［式中、分子の５’末端のＸは水素または金属、または
修飾ヌクレオチド残基であるか、あるいはＹと一緒にな
って共有結合を形成し、分子の３’末端のＹは水素また
は金属、または修飾ヌクレオチド残基であるか、あるい
はＸと一緒になって共有結合を形成し、R₁およびR₃は、
各々、独立していずれかの核酸残基または修飾ヌクレオ
チド残基であり、ｍは１〜３０００の整数または０であ
り、ｎは１〜３０００の整数または０であり、R₂は本発
明の核酸配列または修飾核酸配列、特に表１より選択さ
れる核酸配列を意味する］で示されるポリヌクレオチド
を包含する。上記した式のポリヌクレオチド中、R₂は
５’末端残基がその左側でR₁に結合し、その３’末端残
基がその右側でR₃に結合するように方向付けられる。ｍ
および／またはｎが１より大きい場合、Ｒ₁および／ま
たはＲ₂のいずれかで表される核酸残基の鎖は、ヘテロ
ポリマーまたはホモポリマーのいずれであってもよく、
ヘテロポリマーが好ましい。好ましい具体例において、
ＸおよびＹが一緒になって共有結合を形成する場合、前
記した式のポリヌクレオチドは閉じた環状ポリヌクレオ
チドであり、それはその式が第２の鎖が相補性を有する
第１の鎖を示す二本鎖ポリヌクレオチドであり得る。も
う一つ別の具体例において、ｍおよび／またはｎは１と
１０００の間の整数である。他の好ましい本発明の具体
例は、ｍが１ないし５０、１００または５００の間の整
数であり、ｎが１ないし５０、１００または５００の間
の整数である。

【００３２】本発明のポリヌクレオチドはストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ由来であるのが最も好ましい
が、分類学上同じ属の生物より得ることも好ましい。ま
た、例えば、分類学上同じ科または目から得てもよい。
本明細書で使用する「ポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド」なる用語は、本発明のポリペプチド、特
に、細菌性ポリペプチド、より詳細には、表１［配列番
号：２］に示すアミノ酸配列を有するストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ・ｄｎａＧのポリペプチドをコード
する配列を含むポリヌクレオチドを包含する。この用語
はコードおよび／非コーディング配列を含んでもよいさ
らなる領域と共に、該ポリペプチドをコードする単一の
連続または非連続領域（例えば、組み込まれたファー
ジ、挿入された配列、組み込まれたベクター配列、組み
込まれたトランスポゾン配列、またはＲＮＡエデティン
グ（editing）もしくはゲノムＤＮＡ再組織化により中
断されている）を含むポリヌクレオチドを包含する。本
発明はさらに、表１［配列番号：２］の推定アミノ酸配
列を有するポリペプチドの変種をコードする、本明細書
に記載したポリヌクレオチドの変種に関する。本発明の
ポリヌクレオチドのフラグメントである変種は本発明の
全長ポリヌクレオチドの合成に使用できる。

【００３３】さらに好ましい具体例は、数個、わずか
な、５〜１０、１〜５、１〜３、２または１個あるいは
０個のアミノ酸残基が、いずれかの組み合わせで置換、
欠失または付加された表１［配列番号：２］のｄｎａＧ
ポリペプチドのアミノ酸配列を有する、ｄｎａＧ変種を
コードするポリヌクレオチドである。特に好ましくは、
ｄｎａＧポリペプチドの特性、活性を変化させないサイ
レント置換、付加および欠失である。

【００３４】本発明のさらに好ましい具体例は、表１
［配列番号：２］に示すアミノ酸配列をを有するｄｎａ
Ｇポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの全長に
わたって少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレ
オチドおよびそのようなポリヌクレオチドに相補的なポ
リヌクレオチドである。また、最も好ましいものは、ｄ
ｎａＧポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと全
長にわたって少なくとも８０％の同一性を有する領域か
らなるポリヌクレオチドおよびそれと相補的なポリヌク
レオチドである。この点で、その同じものと全長にわた
って少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチ
ドが特に好ましく、中でも少なくとも９５％の同一性を
有するものが特に好ましい。さらには、少なくとも９５
％の同一性を有するものの中で少なくとも９７％の同一
性を有するものがより好ましく、中でも少なくとも９８
％および少なくとも９９％の同一性を有するものが特に
好ましい。少なくとも９９％の同一性を有するものがよ
り好ましい。好ましい具体例は、表１［配列番号：１］
のＤＮＡによってコードされている成熟ポリペプチドと
実質的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドである。本発明の
ある好ましい具体例によれば、特に厳密な条件下で、例
えば表１のポリヌクレオチドのごときｄｎａＧポリヌク
レオチド配列にハイブリダイゼーションするポリヌクレ
オチドが提供される。

【００３５】さらに本発明は、本明細書にて上記した配
列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関
する。この点において、本発明は特に、本明細書にて上
記したポリヌクレオチドに厳密な条件下でハイブリダイ
ゼーションするポリヌクレオチドに関する。本明細書で
用いる場合、「厳密な条件」および「厳密なハイブリダ
イゼーション条件」という語は、ハイブリダイゼーショ
ンが、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくと
も９７％の同一性がある場合にのみ起こることを意味す
る。厳密なハイブリダイゼーション条件の一例として、
５０％ホルムアルデヒド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ Ｎa
Ｃl、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン
酸ナトリウム（pＨ７.６）、５ｘデンハート（Denhard
t’s）溶液、１０％硫酸デキストランおよび２０μｇ／
ｍｌ変性切断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃で一
夜インキュベーションし、ついでハイブリダイゼーショ
ン支持体を０.１ｘＳＳＣ（約６５℃）で洗浄すること
が挙げられる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件
は公知であり、Sambrookら、MOLECULAR CLONING：ALABO
RATORY MANUAL，Second Edition，Cold Spring Harbor,
N.Y.（1989）、特に、第11章に例示されている。本発
明により提供されるポリヌクレオチド配列に関して溶液
ハイブリダイゼーションを用いてもよい。

【００３６】本発明は、配列番号：１に示したポリヌク
レオチド配列の完全遺伝子を含む適当なライブラリー
を、厳密なハイブリダイゼーション条件下、配列番号：
１に示す該ポリヌクレオチド配列の配列を有するプロー
ブまたはそのフラグメントでスクリーニングし、該ＤＮ
Ａ配列を単離することにより得ることができるポリヌク
レオチド配列を含むかまたはそれよりなるポリヌクレオ
チドを提供する。そのようなポリヌクレオチドを得るの
に有用なフラグメントには、例えば、本明細書のいずれ
かの場所で十分に説明するプローブおよびプライマーが
包含される。

【００３７】本明細書において本発明のポリヌクレオチ
ドの分析についてさらに説明するように、例えば、上記
したような本発明のポリヌクレオチドを、ＲＮＡ、ｃＤ
ＮＡおよびゲノムＤＮＡに対するハイブリダイゼーショ
ンプローブとして使用し、ｄｎａＧをコードする全長ｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、ｄｎａＧ遺伝子
に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離することができる。そのよ
うなプローブは、一般に、少なくとも１５塩基を含むで
あろう。好ましくは、そのようなプローブは少なくとも
３０塩基からなり、少なくとも５０塩基を有してもよ
い。特に好ましいプローブは、少なくとも２０塩基を有
し、３０以下の塩基を有する。例えば、ｄｎａＧ遺伝子
のコード領域は、表１（配列番号：１）のＤＮＡ配列を
使用してスクリーニングしてオリゴヌクレオチド・プロ
ーブを合成することにより単離できる。ついで、本発明
の遺伝子の配列と相補性の配列を有する標識したオリゴ
ヌクレオチドを用いてｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍ
ＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、ライブラリ
ーのどのメンバーがプローブとハイブリダイゼーション
するか決定する。

【００３８】全長のＤＮＡを得るための、あるいは短い
ＤＮＡを伸長させるための利用可能で当業者によく知ら
れたいくつかの方法があり、例えば、ｃＤＮＡ末端の迅
速増幅（ＲＡＣＥ）（例えば、Frohman, et al., PNAS
USA 85,8998-9002, 1988参照）に基づく方法がある。ma
rathon^TM法（Clontech Laboratories Inc.）に例示され
る当該方法の最近の変法は、例えば、より長いｃＤＮＡ
の検索を有意に簡単にしている。Marathon^TM法におい
て、ｃＤＮＡは選択組織から抽出されたｍＲＮＡから調
製され、各末端に「アダプター」配列が連結される。次
いで、遺伝子特異的かつアダプター特異的オリゴヌクレ
オチドプライマーを用いて核酸増幅（ＰＣＲ）を行って
ＤＮＡの「失われた」５’末端を増幅する。次いで、
「ネステッド」プライマー、すなわち、増幅生成物の範
囲ににアニールするように設計されたプライマー（典型
的には、アダプター配列中のさらなる３’にアニールす
るアダプター特異的プライマーならびに選択遺伝子配列
中のさらなる５’にアニールする遺伝子特異的プライマ
ー）を用いてＰＣＲ反応を繰り返す。次いで、この反応
の生成物をＤＮＡ配列決定により分析し、次いで、存在
しているＤＮＡに生成物を直接結合して完全配列を得る
こと、あるいは５’プライマーの設計に関する新たな配
列の情報を用いて別個の全長ＰＣＲを行うことにより、
全長のＤＮＡを構築する。

【００３９】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、本明細書においてポリヌクレオチド分析に関し
てさらに説明するように、例えば、疾患、特にヒトの疾
患に対する治療および診断の発見のための研究試薬およ
び研究材料として用いることができる。表１（配列番号
１または２または３または４）の配列に由来するオリゴ
ヌクレオチドである本発明のポリヌクレオチドは、本明
細書に記載の方法に使用できるが、好ましくはＰＣＲに
使用し、本明細書で同定したポリヌクレオチドが全体と
して、または部分的に感染組織において細菌中で転写さ
れるか否か測定する。そのような配列はまた、病原体が
達した感染の段階およびタイプの診断においても有用性
がある。

【００４０】また、本発明は、成熟蛋白に、さらなるア
ミノまたはカルボキシ末端アミノ酸が加わるか、成熟ポ
リペプチドの内部にアミノ酸が加わった（例えば、成熟
形態が一つ以上のポリペプチド鎖を有する場合）ポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。この
ような配列は、とりわけ、前駆体から成熟形態への蛋白
のプロセッシングにおいて役割を果たし、蛋白を運び、
蛋白の半減期を長くしたり、短くしたり、あるいは分析
または生産のための蛋白の取り扱いを容易にすることが
できる。インビボで一般的なように、該付加アミノ酸は
細胞酵素により成熟蛋白からプロセッシングにより除か
れる。本発明の各ポリヌクレオチドおよび全ポリヌクレ
オチドについて、それに相捕的なポリヌクレオチドが提
供される。これらの相捕的ポリヌクレオチドが、相捕的
である各ポリヌクレオチドに対して十分に相捕的である
ことが好ましい。一またはそれ以上のプロ配列に融合し
たポリペプチドの成熟形態を有する前駆体蛋白は該ポリ
ペプチドの不活性形でもよい。プロ配列がそのような不
活性前駆体から除かれると、一般に活性化される。プロ
配列のいくらかまたは全体を、活性化の前に除去でき
る。一般に、そのような前駆体はプロ蛋白と称される。

【００４１】核酸塩基に関する標準記号Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ
／Ｕに加えて、また「Ｎ」なる語を、本発明の特定のポ
リヌクレオチドを記載するのに用いることができる。
「Ｎ」は、隣接するヌクレオチド位置と一緒になって作
用する場合、正確な読み枠を読中で読まれる場合で、Ｎ
がそのような読み枠において未成熟終止コドンを形成す
る効果を有する塩基でないことが好ましい場合を除き、
４種のＤＮＡ塩基またはＲＮＡ塩基のいずれかがＤＮＡ
またはＲＮＡ配列のその指定位置にあることを意味す
る。

【００４２】要するに、本発明のポリヌクレオチドは成
熟蛋白、リーダー配列の加わった成熟蛋白（プレ蛋白と
も称される）、プレ蛋白のリーダー配列ではない１また
はそれ以上のプロ配列を有する成熟蛋白の前駆体、また
はリーダー配列と、一般に、ポリペプチドの活性な成熟
形態を生成するプロセッシング工程の間に除去される１
またはそれ以上のプロ配列を有するプロ蛋白の前駆体で
あるプレプロ蛋白をコードする。

【００４３】ベクター、宿主細胞、発現系 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作される宿主細胞および組換え技術による本発明のポ
リペプチドの製造に関する。さらに無細胞翻訳系を用
い、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを使用してかか
る蛋白を製造することができる。本発明の組み換えポリ
ペプチドを、発現系を含む遺伝子操作された宿主細胞か
ら、当業者によく知られた方法により製造してもよい。
したがって、さらなる態様において、本発明は、本発明
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドを含む発現系、か
かる発現系で遺伝子操作された宿主細胞、ならびに組み
換え法による本発明ポリペプチドの製造に関する。組換
え体産生のために、宿主細胞を遺伝子操作し、発現系も
しくはそれらの一部、または本発明のポリヌクレオチド
を取り込むことができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞
への導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション、マイクロインジェクション、陽イオ
ン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーシ
ョン、トランスダクション、スクレープ・ローディン
グ、弾道導入および感染のような、Davisら、BASIC MET
HODS IN MOLECULAR BIOLOGY（1986）およびSambrook
ら、MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd E
d. Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring
Harbor, N.Y.（1989）のごとき複数の標準的研究室マ
ニュアルに記載されている方法によって行うことができ
る。

【００４４】適当な宿主の代表例は、レンサ球菌（stre
ptococcus）、ブドウ球菌（staphylococcus）、腸球菌
（enterococcus）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミセ
ス（streptomyces）、シアノバクテリア（cyanpobacter
ia）、枯草菌（Bacillus subtilis）およびストレプト
コッカス・ニューモニアエ（Streptococcus pneumonia
e）のごとき細菌細胞；クルベロミセス（Kluveromyce
s）、サッカロミセス（Saccharomyces）のごとき酵母細
胞、担子菌、カンジダ・アルビカンス（Candida albica
ns）およびアスペルギルス（Aspergillus）；ドロソフ
ィラ（Drosophila）S2およびスポドプテラ（Spodopter
a）Sf9細胞のごとき昆虫細胞；CHO、COS、HeLa、C127、
3T3、BHK、293、CV-1およびボーウェス（Bowes）メラノ
ーマ細胞のごとき動物細胞；および裸子植物または被子
植物のごとき植物細胞を包含する。

【００４５】本発明のポリペプチドを製造するために非
常に多様な発現系を使用することができる。かかる系
は、とりわけ、染色体、エピソームおよびウイルス由来
の系、例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファー
ジ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿
入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、バキュ
ロウイルス、ＳＶ４０のごときパポバウイルス、ワクシ
ニアウイルス、アデノウイルス、ニワトリポックスウイ
ルス、偽狂犬病ウイルスおよびレトロウイルスのような
ウイルス由来のベクター、およびコスミドおよびファー
ジミドなどのプラスミドおよびバクテリオファージの遺
伝因子由来のベクターのごとき、それらの組み合わせに
由来するベクターを包含する。発現系構築物は、発現を
制御ならびに引き起こす調節領域を有していてもよい。
一般に、宿主においてポリヌクレオチドを維持、増幅ま
たは発現し、および／またはポリペプチドを発現するの
に適した系またはベクターを、この点にて発現に使用し
てもよい。適当なＤＮＡ配列を、例えば、Sambrookら、
MOLECULAR CLONING，A LABORATORY MANUAL（前掲）に示
されている技術のごとき、種々のよく知られた慣用的技
術のいずれかによって、発現系に挿入してもよい。

【００４６】真核細胞の組み換え発現系において、翻訳
された蛋白を小胞体内腔、周辺腔または細胞外環境に分
泌するために、適当な分泌シグナルを発現されるポリペ
プチドに挿入してもよい。これらのシグナルは、ポリペ
プチドに固有のものであってもよく、または異種のシグ
ナルであってもよい。本発明のポリペプチドは、硫酸ア
ンモニウムまたはエタノール沈澱、酸抽出、アニオンま
たはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロー
スクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシル
アパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを包含する、よく知られた方法によって組換
え細胞培養物から回収および精製できる。最も好ましく
は、高品質液体クロマトグラフィーが精製に使用され
る。ポリペプチドが単離および／または精製の間に変性
する場合、蛋白を再生するための周知方法を用いて、再
び活性な立体配座とすることができる。

【００４７】診断、予後、セロタイピングおよび変異ア
ッセイ 本発明は、診断試薬としての本発明ｄｎａＧポリヌクレ
オチドおよびポリペプチドの使用にも関する。真核生
物、特に哺乳動物、とりわけヒトにおけるｄｎａＧポリ
ヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの検出は、疾
病の診断、疾病の段階決定、または薬剤に対する感染生
物の応答を調べる方法を提供するであろう。ｄｎａＧ遺
伝子または蛋白を含む生物に感染した、あるいは感染の
おそれのある真核生物、特に哺乳動物、とりわけヒト
を、種々の既知方法ならびに本明細書記載の方法により
核酸またはアミノ酸レベルで検出してもよい。

【００４８】予後、診断または他の分析に供するポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは、感染していると思わ
れる個体および／または感染した個体の身体材料から得
られる。これらの源由来のポリヌクレオチド、特にＤＮ
ＡまたはＲＮＡを検出に直接用いてもよく、あるいは分
析に付す前にＰＣＲもしくはその他の増幅法を用いるこ
とにより酵素的に増幅できる。ＲＮＡ（詳細にはｍＲＮ
Ａ）、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡも同じようして使用
できる。増幅を用いると、個体に存在する原核生物の種
および株を原核生物遺伝子の遺伝子型の分析により特徴
づけすることができる。対照配列の遺伝子型と比較した
増幅生成物の大きさの変化により、欠失および挿入を検
出できる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識したｄｎａ
Ｇポリヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションさせ
ることにより同定できる。完全に対合した配列は、ＲＮ
ase消化により、または融解温度の差により、誤対合二
重らせんと区別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変性剤
を伴ったまたは変性剤を含まないゲル中のＤＮＡフラグ
メントの電気泳動の移動度の変化により、または直接的
なＤＮＡの配列決定により検出できる。例えば、Myers
ら、Science，230:1242（1985）を参照のこと。特異的
な位置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセ
イ、例えば、ＲＮaseおよびＳ１保護または化学的切断
法によっても明らかにすることができる。例えば、Cott
onら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，85:4397-4401（198
5）を参照のこと。ヌクレアーゼ保護アッセイ、例え
ば、ＲＮａｓｅ、Ｖ１およびＳ２保護アッセイまたは化
学的開裂法により、特定位置における配列の変化を明ら
かにすることができる。例えば、Cotton et al., Proc.
Natl.Acad. Sci., USA, 85:4397-4401 (1985)参照。

【００４９】もう１つの具体例において、ｄｎａＧヌク
レオチド配列またはそのフラグメントを含むオリゴヌク
レオチドプローブの一群を構築して、例えば遺伝学的変
異、セロタイプ、分類学的分類または同定のための効果
的なスクリーニングを行うことができる。アレイ法は適
応範囲が広く、遺伝子発現、遺伝学的連関、および遺伝
学的変化を包含する分子遺伝学における種々の問題を解
決するために用いられる（例えば、Chee et al., Scien
ce,274:610 (1996)参照）。

【００５０】よって、もう１つの態様において、本発明
は、（ａ）本発明ポリヌクレオチド、好ましくは配列番
号：１のヌクレオチド配列、またはそのフラグメント；
（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して相捕的なヌク
レオチド配列；（ｃ）本発明ポリペプチド、好ましくは
配列番号：２のポリペプチド、またはそのフラグメン
ト；あるいは（ｄ）本発明ポリペプチドに対する抗体、
好ましくは配列番号：２のポリペプチドに対する抗体を
含む診断キットに関する。かかるキットにおいて、
（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が重要な成分を含
んでいてもよいことが理解されよう。かかるキットは、
とりわけ疾病または疾病に対する感受性についての診断
において有用である。

【００５１】また本発明は、診断試薬としての本発明ポ
リヌクレオチドの使用にも関する。疾病または発病に関
連した本発明ポリヌクレオチド、好ましくは配列番号：
１のポリヌクレオチドの変異形態の検出は、ポリヌクレ
オチドの発現低下、発現過剰または発現の変化により生
じる疾病の診断、疾病経過の予後、疾病段階の決定、ま
たは疾病に対する感受性の決定に加えて用いる診断用道
具、またはかかる診断等の決定のための道具を提供する
であろう。かかるポリヌクレオチドにおける変異を有す
る生物、特に感染生物を、本明細書記載のいずれかの場
所で説明するような種々の方法によりポリヌクレオチド
レベルで検出してもよい。本発明ヌクレオチド配列は生
物の染色体の同定にも価値がある。配列は特別に標的化
され、生物（詳細にはストレプトコッカス・ニューモニ
アエ）の染色体上の特定の位置とハイブリダイゼーショ
ンしうる。本発明染色体に関連した配列のマッピング
は、それらの配列を病原性および／または生物の環境学
的地位および／または生物の薬剤耐性とを関連づけ、さ
らには生物に遺伝子を対応させることにおける重要な工
程でありうる。配列を正確な染色体位置にマッピングし
たならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図
のデータと関連づけることができる。かかるデータは、
配列データベースにおいてオンラインで見いだされる。
次いで、遺伝学的方法、例えば、リンケージ（物理的に
近接した遺伝子の同時遺伝）の分析、あるいはコンジュ
ゲーション（conjugation）のごとき接合の研究によ
り、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病と
の関係を同定する。第１の表現型を有する生物と、異な
る第２の表現型を有する生物との間のポリヌクレオチド
および／またはポリペプチド配列の相違を調べることも
できる。第１の表現型を有する生物のいくつかまたは全
部に変異が観察されるが、第２の表現型を有する生物に
は変異が観察されない場合、変異は第１の表現型の発生
原因である可能性がある。

【００５２】本発明のポリヌクレオチドおよび／または
ポリペプチド中に変異または多型性（対立遺伝子変異）
を担持する生物由来の細胞を、例えばセロタイピングを
可能にするような種々の技術によりＤＮＡレベルで検出
できる。例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いてＲＮＡにおける
変異を検出することができる。ＲＴ−ＰＣＲを自動検出
系、例えばＧeneＳcan等と組み合わせて用いるのが特に
好ましい。ＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡもまた
同じ目的でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲに用いることがで
きる。一例として、ｄｎａＧポリペプチドをコードする
核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用いて変異を同定お
よび分析することができる。典型的なプライマーの例を
下表２に示す。

【００５３】 表２ ｄｎａＧポリヌクレオチド増幅用プライマー 配列番号 プライマー配列 3 5'-ATGGAGGTATTGTGTATGGTTGACAAACAAGTC-3' 4 5'-TTACTCCATTCTTCTCTTTTGGGAAATTAAACG-3'

【００５４】また本発明は、式： Ｘ−（R₁）_m−（R₂）−（R₃）_n−Ｙ ［式中、分子の５’末端のＸは水素または金属、または
修飾ヌクレオチド残基であり、分子の３’末端のＹは水
素または金属、または修飾ヌクレオチド残基であり、R₁
およびR₃は、各々、独立していずれかの核酸残基または
修飾ヌクレオチド残基であり、ｍは１〜２０の整数また
は０であり、ｎは１〜２０の整数または０であり、R₂は
本発明プライマー配列、特に表２より選択される核酸配
列を意味する］で示されるポリヌクレオチドを包含す
る。上記した式のポリヌクレオチド中、R₂は５’末端残
基がその左側でR₁に結合し、その３’末端残基がその右
側でR₃に結合するように方向付けられる。ｍおよび／ま
たはｎが１より大きい場合、いずれかのＲ基で表される
核酸残基の鎖は、ヘテロポリマーまたはホモポリマーの
いずれであってもよく、好ましくは表１のポリヌクレオ
チドの領域に相捕的なヘテロポリマーである。好ましい
具体例において、ｍおよび／またはｎは１ないし１０の
間の整数である。

【００５５】さらに本発明は、５’および／または３’
末端から１、２、３または４個のヌクレオチドが除去さ
れたプライマーを提供する。特に、これらのプライマー
を、個体由来の試料、例えば身体材料から単離されたｄ
ｎａＧＤＮＡおよび／またはＲＮＡの増幅に用いること
ができる。プライマーを用いて感染個体から単離された
ポリヌクレオチドを増幅して、ポリヌクレオチド配列研
究のための種々の方法に供してもよい。このようにし
て、ポリヌクレオチド配列中の変異を検出し、変異を用
いて感染または感染段階もしくは経路を診断および／ま
たは予後を行い、あるいは感染物のセロタイプおよび／
または分類を行ってもよい。

【００５６】本発明はさらに、疾患、好ましくは細菌感
染、さらに好ましくはストレプトコッカス・ニューモニ
アエによる感染の診断方法であって、表１［配列番号：
１］の配列を有するポリヌクレオチドの発現レベルの上
昇を、個体由来のサンプルから決定することを特徴とす
る方法を提供する。ｄｎａＧポリヌクレオチドの発現の
増加または低下は、ポリヌクレオチドの定量法として当
該分野で周知の方法である任意の方法、例えば増幅、Ｐ
ＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮase保護、ノーザンブロッテ
ィング、スペクトロメトリーおよびその他のハイブリダ
イゼーション法を用いて測定できる。

【００５７】さらに、正常対照組織サンプルと比較して
ｄｎａＧポリペプチドの過剰発現を検出するための本発
明による診断アッセイを用いて、例えば感染の存在を検
出することができる。宿主由来のサンプル中のｄｎａＧ
ポリペプチドのレベルを決定するために用いることがで
きるアッセイ技法は、当業者に周知である。このような
アッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、競合的結合アッ
セイ、ウェスタンブロット分析、抗体サンドイッチアッ
セイ、抗体検出およびＥＬＩＳＡアッセイを包含する。

【００５８】ディファレンシャル発現（differential e
xpression） 本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、ディフ
ァレンシャルスクリーニング法の試薬として用いてもよ
い。多くのディファレンシャルスクリーニングおよびデ
ィファレンシャルディスプレイ法が当該分野に存在し、
本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを用いるこ
とができる。例えば、ディファレンシャルディスプレイ
法はChuang et al., J. Bacteriol. 175:2026-2036 (19
93)に記載されている。この方法は、ランダムプライム
されたＲＴ−ＰＣＲを用いて存在するｍＲＮＡを同定す
ることにより生物中で発現される遺伝子を同定するもの
である。感染前および感染後の特徴を比較することによ
り、感染の間にアップレギュレーションおよびダウンレ
ギュレーションされる遺伝子を同定し、ＲＴ−ＰＣＲ生
成物を配列決定し、「未知」ＯＲＦにマッチさせること
ができる。

【００５９】インビボ発現法（ＩＶＥＴ）はCamilli et
al., Proc. Natl. Acad Sci. USA91:2634-2638 (199
4)に記載されている。ＩＶＥＴは、研究室での培養物と
の比較を行って、感染における重要な役割に関与してい
る、感染中にアップレギュレーションされる遺伝子を同
定するものである。この方法により同定されるＯＲＦは
感染の確立および／または維持において重要な役割を有
すると考えられる。この方法において、標的生物のラン
ダムな染色体フラグメントを、プラスミドベクター中の
プロモーター不含組み換え遺伝子の上流にクローン化す
る。レソルバーゼ（resolvase）部位に隣接した抗生物
質耐性遺伝子を担持する標的細胞中にこの構築物を導入
する。抗生物質存在下での増殖は、レコンビナーゼ（re
combinase）遺伝子の転写を支持しうるプラスミドベク
ター中にクローン化されたフラグメントの集団から消失
し、それゆえ、抗生物質耐性の消失を引き起こす。各抗
生物質感受性細菌により担持される染色体フラグメント
は感染の間に通常アップレギュレーションされる遺伝子
のプロモーターまたは当該遺伝子の一部を担持している
はずである。レコンビナーゼ遺伝子上流の配列決定によ
りアップレギュレーションされる遺伝子の同定が可能と
なる。

【００６０】ＲＴ−ＰＣＲを用いて遺伝子発現パターン
を分析してもよい。本発明ポリヌクレオチドを用いるＲ
Ｔ−ＰＣＲ用に、メッセンジャーＲＮＡを細菌感染組
織、例えばネズミの感染後４８時間たった肺から単離
し、次いで、ランダムヘキサヌクレオチドでプラムされ
たＲＮＡ試料の逆転写を行い、その後遺伝子特異的プラ
イマーペアーを用いてＰＣＲを行うことによって各ｍＲ
ＮＡ量を評価する。得られたＰＣＲ生成物の定量による
特定のｍＲＮＡ種の存在および量の決定は、感染組織中
で転写された細菌遺伝子についての情報を提供する。遺
伝子転写の分析を感染の異なる時点において行って細菌
による発病における遺伝子調節についての詳細な知識を
得て、いずれの遺伝子産物が抗細菌剤のスクリーニング
のための標的であるのかを明確に理解することができ
る。使用ＰＣＲプライマーの遺伝子特異的な性質によ
り、細菌ｍＲＮＡ調製物が常に哺乳動物ＲＮＡを含む必
要があるとはいえないことが理解されよう。このこと
は、感染組織からの簡単かつ迅速なＲＮＡの調製を可能
にし、細菌中で非常に短命（半減期２分のオーダー）な
細菌ｍＲＮＡ種を得ることを可能にする。最適には、非
常に短時間のうちに、ＴＲＩｚｏｌｅ（GIBCO-BRL）存
在下で機械的に破砕し、次いで、ＴＲＩｚｏｌｅ試薬お
よびＤＮＡａｓｅ処理を製造者の指示に従って行って夾
雑ＤＮＡを除去することにより、感染ネズミ肺組織から
細菌ｍＲＮＡを調製する。好ましくは、適当に標識され
た配列特異的オリゴヌクレオチドプローブを用いてノー
ザンをプローブすることにより検出されるストレプトコ
ッカス・ニューモニアエの１６ＳリボソームＲＮＡが最
大量となるような条件を見いだすことによってプロセス
を最適化する。典型的には、５’色素標識プライマーを
ＰＣＲ反応において各ＰＣＲプライマーペアーに用い、
最適にはＰＣＲ反応を８ないし２５サイクルで終了す
る。ＰＣＲ生成物を６％ポリアクリルアミドで分離し、
GeneScanner（ＡＢＩにより製造されている）を用いて
検出し定量する。

【００６１】グリッディング（gridding）およびポリヌ
クレオチド引き算 方法は、いわゆる「高密度ＤＮＡアレイ（high density
array）」またはグリッドを用いる遺伝子発現および同
一性についての情報を得るためのものである。例えば、
M.Chee et al., Science, 274:610-614 (1996)およびそ
の中の引用文献参照。かかるグリッディングアッセイを
用いて、発現配列タグ（ＥＳＴ）と呼ばれるある種の新
規遺伝子配列が同定された（Adams et al., Science, 2
52:1651-1656 (1991)）。遺伝子産物に基づいて特定の
遺伝子配列を同定するための方法のバラエティーも記載
されている。例えば、１９９１年５月３０日公開国際特
許出願ＷＯ９１／０７０８７参照。さらに、所望配列の
増幅のための方法が記載されている。例えば、１９９１
年１１月１４日公開の国際特許出願ＷＯ９１／１７２７
１参照。

【００６２】本発明ポリヌクレオチドをポリヌクレオチ
ドアレイの成分として、好ましくは高密度アレイまたは
グリッドとして用いてもよい。これらの高密度アレイは
診断および予後目的に特に有用である。例えば、異なる
遺伝子、さらにはポリヌクレオチドまたは本発明ポリヌ
クレオチドを含む各スポットのセットをプロービング
（身体試料から得たプローブを用いるハイブリダイゼー
ションまたは核酸増幅を用いるプロービングのごとき）
に使用して、個体中の特定のヌクレオチド配列または関
連配列の存在を決定してもよい。かかる存在は、病原
体、特にストレプトコッカス・ニューモニアエの存在を
示す可能性があり、疾病または疾病経過の診断および／
または予後に有用である可能性がある。配列番号：１の
ポリヌクレオチド配列の多くの変種を含むグリッドが好
ましい。また、配列番号：２のポリペプチド配列をコー
ドしているポリヌクレオチド配列の多くの変種を含むも
のが好ましい。

【００６３】抗体 本発明ポリペプチドおよびポリヌクレオチドまたはそれ
らの変種、あるいはそれらを発現する細胞を、かかるポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドそれぞれに対して免
疫特異的な抗体を得るための免疫原として用いることが
できる。１の好ましい本発明の具体例において、ｄｎａ
Ｇポリペプチドまたはポリヌクレオチドに対する抗体が
提供される。

【００６４】本発明のポリペプチドに対して得られる抗
体は、ポリペプチドあるいはエピトープが付いたフラグ
メント、アナログまたは細胞を、好ましくはヒト以外の
動物に、慣用的プロトコールを用いて投与することによ
り得ることができる。モノクローナル抗体を調製する場
合、連続的細胞系培養により産生される抗体を提供する
当該分野にて周知の技術を用いることができる。例え
ば、Kohler, G.およびMilstein, C., Nature，256：495
−497（1975）；Kozborら、Immunology Today, 4：72
（1983）；Coleら、MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER
THERAPY, Alan R Liss,Inc.、77−96頁（1985）に記載
されるような種々の技法が挙げられる。

【００６５】一本鎖抗体を製造するための技術（米国特
許第４９４６７７８号）を用いて、本発明のポリペプチ
ドに対する一本鎖抗体を産生することができる。また、
トランスジェニックマウスまたは他の生物、例えば他の
哺乳動物を用いて、ヒト化抗体を発現させることができ
る。

【００６６】別法として、ファージディスプレイ（phag
e display）技法を利用して、抗‐ｄｎａＧの保持に関
してスクリーニングしたヒトのリンパ球のＰＣＲ増幅し
たｖ遺伝子のレパートリー由来の、または無処理のライ
ブラリー由来の、ポリペプチドに対する結合活性を有す
る抗体遺伝子を選択してもよい（McCafferty,Ｊ.ら、Na
ture 348:552-554（1990）；Marks,J.ら、Biotechnolog
y 10:779-783(1992)）。これらの抗体の親和性はチェイ
ンシャフリング（chain shuffling）により改善するこ
ともできる（Clackson,T.ら、Nature 352:624-628（199
1））。

【００６７】前記の抗体を用いてポリペプチドを発現す
るクローンを単離または同定することができ、アフィニ
ティークロマトグラフィーにより該ポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドを精製することができる。従って、と
りわけ、ｄｎａＧポリペプチドまたはｄｎａＧポリヌク
レオチドに対する抗体を用いて、感染、とりわけ細菌感
染を治療することができる。

【００６８】ポリペプチド変種は、本発明の特定の態様
を形成する、抗原的、エピトープ的または免疫学的に等
価な変種を包含する。

【００６９】本発明ポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ド、例えば、本発明ポリペプチドの抗原的にまたは免疫
学的に同等な誘導体または融合蛋白は、マウスまたは他
の動物、例えばラットもしくはニワトリを免疫するため
の抗原として使用される。融合蛋白はポリペプチドに安
定性を付与できる。抗原は、例えば抱合することによ
り、免疫原性キャリヤ蛋白、例えばウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）またはキーホール・リムペット・ヘモシアニ
ン（keyhole limpet haemocyanin：ＫＬＨ）に結合させ
ることができる。別法として、蛋白もしくはポリペプチ
ド、またはその抗原的もしくは免疫学的に等価なポリペ
プチドの多重コピーを含む多重抗原性ペプチドは、免疫
原性を改良するのに十分な抗原性を有しており、キャリ
ヤを使用しなくてすむ。

【００７０】好ましくは、抗体またはその変種を修飾し
て個体における免疫原性を減少させる。例えば、個体が
ヒトである場合、抗体は最も好ましくは「ヒト化」され
ており；例えばJones,P.ら、Nature 321：522−525（19
86）またはTempestら、Biotechnology 9:266-273（199
1）に記載されているように、ハイブリドーマ由来の抗
体の相補性決定領域がヒトモノクローナル抗体に移植さ
れている。本発明の１の態様によれば、治療または予防
目的、詳細には遺伝学的免疫化のための本発明ポリヌク
レオチドの使用が提供される。本発明の特に好ましい具
体例は、ｄｎａＧポリヌクレオチドの自然発生対立遺伝
子変種およびそれによりコードされるポリペプチドであ
る。

【００７１】本発明ポリヌクレオチドの遺伝学的免疫に
おける使用には、好ましくは、プラスミドＤＮＡの筋肉
への直接注射（Wolffら、Hum.Mol.Genet 1：363（199
2）；Manthorpeら、Hum.Gene Ther. 4：419（196
3））、特異的蛋白キャリヤを複合させたＤＮＡの送達
（Wuら、J.Biol Chem. 264：16985（1989））、リン酸
カルシウムを用いるＤＮＡ共沈（Benvenisty & Reshe
f、PNAS USA 83：9551（1986））、種々の形態のリポソ
ーム中へのＤＮＡ封入（Kanedaら、Science 243：375
（1989））、微粒子爆撃（Tangら、Nature 356：152（1
992）；Eisenbraunら、ＤＮＡ Cell Biol 12：791（199
3））およびクローン化レトロウイルスベクターを用い
たインビボ感染（Seegerら、PNAS USA 81：5849（198
4））などの適当な送達方法を用いる。

【００７２】アンタゴニストおよびアゴニスト−アッセ
イおよび分子 さらに、本発明ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを
用いて、例えば、細胞、無細胞調製物、化学的ライブラ
リー、および天然産物の混合物中の、小分子基質とリガ
ンドとの結合を評価することもできる。これらの基質お
よびリガンドは天然の基質およびリガンドでよく、また
は構造上もしくは機能上の模倣物でもよい。例えば、Co
liganら、Current Protocols in Immunology 1（2）：
第5章（1991）を参照のこと。

【００７３】本発明ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは多くの生物学的機能の原因であり、該機能には多く
の疾病状態、詳細には上記疾病が包含される。それゆ
え、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの機能を刺激
または阻害する化合物を同定するためのスクリーニング
法を工夫することが望ましい。したがって、さらなる態
様において、本発明は、本発明ポリペプチドまたはポリ
ヌクレオチドならびに関連ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの機能を刺激または阻害する化合物を同定する
ためのスクリーニング方法を提供する。一般的には、ア
ゴニストまたはアンタゴニストを上記疾病の治療および
予防のために用いてもよい。種々の源、例えば、細胞、
無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物の混合
物から化合物を同定できる。そのようにして同定された
かかるアゴニスト、アンタゴニストまたは阻害剤は、天
然または修飾基質、リガンド、受容体、酵素等であって
もよく、場合によってはｄｎａＧポリペプチドおよびポ
リヌクレオチド、あるいはそれらの構造上または機能上
の模倣物であってもよい（Coligan et al., CurrentPro
tocols in Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)参
照）。

【００７４】スクリーニング法は、単に化合物のポリペ
プチドまたはポリヌクレオチドへの、あるいはポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを有する細胞もしくは膜へ
の、あるいはポリペプチド含む融合蛋白への結合を、直
接的または間接的に候補化合物に結合した標識により測
定するものであってもよい。別法として、スクリーニン
グ法は標識競争物質との競争を用いるものであってもよ
い。さらに、これらのスクリーニング法は、ポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドを含む細胞に適した検出系を
用いて、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの活性化
または阻害により生じるシグナルを化合物が発生させる
かどうかを試験するものであってもよい。一般的には、
既知アゴニスト存在下で活性化の阻害剤をアッセイし、
次いで、候補化合物存在下でのアゴニストによる活性化
の効果を観察する。構成的に活性のあるポリペプチドお
よび／または構成的に発現されるポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドを、アゴニストまたは阻害剤の効果を逆
転させる物質を探すスクリーニング法に用いてもよく、
候補化合物がポリペプチドまたはポリヌクレオチドの活
性化を阻害するかどうかを試験することによる。さら
に、スクリーニング法は、単に、候補化合物を本発明ポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドを含有する溶液と混
合して混合物を作成し、混合物中のｄｎａＧポリペプチ
ドおよび／またはポリヌクレオチド活性を測定し、次い
で、混合物中のｄｎａＧポリペプチドおよび／またはポ
リヌクレオチド活性を標準に対して比較することを特徴
とする。Ｆｃ部分および上記ｄｎａＧポリペプチドから
作成されるような融合蛋白を用いて高処理量アッセイを
行って本発明ポリペプチドのアンタゴニストならびに系
統分類的および／または機能的に関連したポリペプチド
を同定することもできる（D.Bennett et al., J. Mol.
Recognition, 8:52-58 (1955);およびK.Johanson et a
l., J. Biol. Chem., 270(16):9549-9471 (1955)参
照）。

【００７５】本発明ポリペプチドと結合および／または
相互作用するポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗
体を用いて、細胞中のｍＲＮＡおよび／またはポリペプ
チドの精製に対する添加化合物の影響を検出するための
スクリーニング方法を組み立ててもよい。例えば、ＥＬ
ＩＳＡアッセイを構築して、モノクローナルおよびポリ
クローナル抗体を用いてポリペプチドの分泌または細胞
結合レベルを、当該分野において標準的な方法により測
定してもよい。これにより、適当に操作された細胞また
は組織からのポリペプチドの生成を阻害または促進しう
る作用剤（それぞれ、アンタゴニストまたはアゴニスト
という）を見いだすことができる。

【００７６】本発明はまた、ｄｎａＧポリペプチドまた
はポリヌクレオチドの作用、特に静菌および／または殺
菌性である化合物の作用を亢進（アゴニスト）または遮
断（アンタゴニスト）する化合物を同定するための化合
物のスクリーニング方法を提供する。スクリーニング方
法には高処理量（high−throughput）技術が包含され
る。例えば、アゴニストまたはアンタゴニストをスクリ
ーニングするために、ｄｎａＧポリペプチドおよびかか
るポリペプチドの標識基質またはリガンドを含む合成反
応混合物、膜、細胞エンベロープもしくは細胞壁のごと
き細胞コンパートメント、またはそれらのいずれかの調
製物を、ｄｎａＧアゴニストまたはアンタゴニストであ
るかもしれない候補分子の存在下または不在下でインキ
ュベートする。候補分子がｄｎａＧポリペプチドに作動
または拮抗する能力は、標識リガンドの結合の低下また
はかかる基質からの生成物の生成低下に反映される。結
合しても影響を及ぼさない分子、すなわちｄｎａＧポリ
ペプチドの効果を誘起しない分子は、ほとんどの場合、
良好なアンタゴニストであろう。よく結合し、基質から
の生成物の生成速度を高め、シグナルトランスダクショ
ンを増大させ、あるいは化学チャンネル活性を増大させ
る分子はアゴニストである。基質からの生成物の生成速
度、シグナルトランスダクション、あるいは化学チャン
ネル活性のレベルの検出はリポーターシステムを用いる
ことにより強調できる。この点に関して有用なリポータ
ーシステムは、生成物に転換される比色標識基質、ｄｎ
ａＧポリヌクレオチドまたはポリペプチド活性の変化に
応答するリポーター遺伝子、および当該分野で公知の結
合アッセイを包含するが、これらに限定するものではな
い。

【００７７】本発明ポリペプチドを用いて膜結合または
可溶性受容体を同定してもよく、かかるポリペプチドは
当該分野において標準的な受容体結合法により同定され
る。これらの方法、リガンド結合およびクロスリンキン
グアッセイを包含するが、これらに限らない。これらの
方法において、ポリペプチドを放射性標識（例えば^{12 5}
Ｉ）、化学修飾（例えばビオチン化）または検出および
精製に適したペプチド配列に融合され、推定上の受容体
（例えば細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、身体材
料）の源とともにインキュベーションする。他の方法は
表面プラスモン共鳴および分光学的法法を包含する。こ
れらのスクリーニング方法を用いて、ポリペプチドのそ
の受容体への結合と競争するポリペプチドのアゴニスト
およびアンタゴニストを同定してもよい。かかるアッセ
イを行うための標準的方法は当該分野においてよく知ら
れている。

【００７８】蛍光タグを付した分子に関する蛍光分極値
は回転相関時間（rotational correlation time）また
は回転速度（tumbling rate）に依存する。別の応答レ
ギュレーターポリペプチドもしくは他のポリペプチドと
結合した応答レギュレーターポリペプチドのごとき蛋白
複合体であって蛍光標識分子を含むように標識されてい
るものは、蛍光標識されたモノマー蛋白よりも高い分極
値を有するであろう。この方法を用いて、ポリペプチド
複合体を分裂させる小型分子を特徴づけるのが好まし
い。

【００７９】蛍光エネルギー転移を用いて、応答レギュ
レーターポリペプチドダイマー、トリマー、テトラマ
ー、または高次構造、あるいは別のポリペプチドに結合
した応答レギュレーターポリペプチドにより形成される
構造の形成を妨害する小型分子を特徴づけてもよい。応
答レギュレーターポリペプチドをドナーおよびアクセプ
ター両方の蛍光発色団で標識することができる。２種の
標識種を混合し、ドナー蛍光発色団を励起したならば、
アクセプターの蛍光を観察することにより蛍光エネルギ
ー転移を検出することができる。ダイマー化をブロック
する化合物は蛍光エネルギー転移を阻害するであろう。

【００８０】表面プラスモン共鳴を用いて、応答レギュ
レーターポリペプチドの自己結合ならびに応答レギュレ
ーターポリペプチドと別のポリペプチドもしくは小型分
子との結合に対する小型分子の影響をモニターすること
ができる。低いサイト密度（site density）において応
答レギュレーターポリペプチドをセンサーチップにカッ
プリングさせて、共有結合分子がモノマー性となるよう
にすることができる。次いで、溶液蛋白を応答レギュレ
ーターポリペプチド被覆表面上に通し、局所屈折率の変
化により生じる共鳴角の変化をモニターすることにより
特異的結合をリアルタイムで検出することができる。こ
の方法を用いて、応答レギュレーターポリペプチドの自
己結合ならびに応答レギュレーターポリペプチドと別の
ポリペプチドもしくは小型分子との結合に関する反応速
度および平衡結合定数に対する小型分子の影響を特徴づ
けることができる。

【００８１】シンチレーション近接アッセイを用いて、
応答レギュレーターポリペプチドと別の応答レギュレー
ターポリペプチドもしくは別の分子との結合の間の相互
作用を特徴づけることができる。応答レギュレーターポ
リペプチドをシンチレーション充填ビーズにカップリン
グさせることができる。放射性標識応答レギュレーター
ポリペプチドの添加は結合を生じ、放射性源分子はシン
チレーション液に極めて近接した状態となる。よって、
応答レギュレーターポリペプチドの結合によりシグナル
が放出され、応答レギュレーターポリペプチドの自己結
合または応答レギュレーターポリペプチドと別のポリペ
プチドもしくは小型分子との結合を妨害する化合物はシ
グナルを減少させるであろう。

【００８２】ＩＣＳバイオセンサーはＡＭＢＲＩ（Aust
ralian Membrane Biotechnology Research Institute）
により記載されている。それらは高分子の自己結合をカ
ップリングし、懸濁膜二重層中のガンマシジンにより促
進されるイオンチャンネルを閉鎖し、それゆえバイオセ
ンサーのアドミッタンス（イン−ダンスと同様）の測定
可能な変化が起こる。このアプローチは６０回のアドミ
ッタンス変化でも直線性があり、理想的には、小型分子
コンビナトリアルライブラリーの大規模な高処理量スク
リーニングに適する。

【００８３】本発明の他の具体例において、本発明ポリ
ペプチドおよびまたはポリヌクレオチドと結合あるいは
相互作用して、その活性または発現を阻害または活性化
する化合物を同定する方法であって、ポリペプチドおよ
び／またはポリヌクレオチドへの結合、あるいはポリペ
プチドおよび／またはポリヌクレオチドと化合物との他
の相互作用を可能にする条件下で本発明ポリペプチドお
よび／またはポリヌクレオチドをスクリーニングすべき
化合物と接触させて、アゴニストとの結合あるいは他の
相互作用を評価し（該方法において、好ましくは、かか
る結合または相互作用はポリペプチドおよび／またはポ
リヌクレオチドと化合物との結合あるいは相互作用に応
答した検出可能シグナルを提供しうる第２の化合物に関
連したものである）、次いで、ポリペプチドおよび／ま
たはポリヌクレオチドと化合物との結合あるいは相互作
用から生じるシグナルの存在または不存在を検出するこ
とにより、化合物がポリペプチドおよび／またはポリヌ
クレオチドと結合あるいは相互作用し、その活性または
発現を活性化または阻害するかどうかを決定する方法が
提供される。

【００８４】ｄｎａＧアンタゴニストのアッセイのもう
１つの例は、競争阻害アッセイに適した条件下で、ｄｎ
ａＧおよび潜在的なアンタゴニストを、ｄｎａＧ結合分
子、組換えｄｎａＧ結合分子、天然基質もしくはリガン
ド、または基質もしくはリガンド模倣物と混合する、競
合アッセイである。ｄｎａＧ分子を例えば放射活性また
は比色化合物により標識し、結合分子に結合した、ある
いは生成物に変換したｄｎａＧ分子の数を正確に決定し
て、潜在的なアンタゴニストの効果を評価できる。

【００８５】潜在的なアンタゴニストは、本発明のポリ
ヌクレオチドおよび／またはポリペプチドと結合し、そ
れによりその活性を阻害し、消滅させる小型有機分子、
ペプチド、ポリペプチドおよび抗体を包含する。潜在的
アンタゴニストはまた、ｄｎａＧにより誘導される活性
を誘導しない結合分子のような結合分子の同一部位に結
合し、ｄｎａＧを結合から排除することによりｄｎａＧ
の作用を妨げる、密接に関連した蛋白または抗体のよう
な小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドであってもよ
い。

【００８６】潜在的なアンタゴニストは、ポリペプチド
の結合部位に結合してその部位を占領し、それにより細
胞性結合分子との結合を妨害して、正常な生物学的活性
を妨害する小型分子を包含する。小型分子の例は、小型
有機分子、ペプチド、ペプチド様分子を包含するが、こ
れらに限定するものではない。その他の潜在的なアンタ
ゴニストはアンチセンス分子を包含する（これらの分子
についての記載に関しては、Okano,J.，Neurochem. 56:
560（1991）；OLIGODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE IN
HIBTORS OF GENE EXPRESSION、ＣＲＣプレス、ボッカラ
ートン、フロリダ州（1988）を参照のこと）。好ましい
潜在的アンタゴニストは、ｄｎａＧに関連する化合物お
よびその変種を包含する。好ましい潜在的なアンタゴニ
ストはｄｎａＧに関連した化合物およびｄｎａＧの変種
を包含する。潜在的なポリペプチドアンタゴニストの他
の例は抗体を包含し、あるいはいくつかの場合には、ポ
リペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素等の密接に
関連したオリゴヌクレオチドまたは蛋白、あるいはリガ
ンド、基質、受容体、酵素等のフラグメント、あるいは
本発明ポリペプチドに結合するが応答を誘発せず、その
結果ポリペプチドの活性を阻害することとなる小型分子
を包含する。

【００８７】ある種の本発明ポリペプチドは天然ｄｎａ
Ｇポリペプチドの生物学的模倣物、機能的模倣物であ
る。これらの機能的模倣物を、とりわけ、ｄｎａＧポリ
ペプチドの活性に拮抗するように、あるいは本明細書に
いずれかの場所に記載の様式で抗原または免疫原として
用いてもよい。本発明ポリペプチドの機能的模倣物は末
端切断ポリペプチドを包含するが、これに限らない。例
えば、好ましい機能的模倣物は、配列番号：２に示すポ
リペプチドを含むポリペプチドであってアミノまたはカ
ルボキシ末端の２０、３０、４０、５０、６０、７０ま
たは８０個のアミノ酸を欠くポリペプチドを包含し、さ
らにこれらの末端切断配列の１つまたはそれ以上のもの
を含む融合蛋白を包含する。これらの機能的模倣物のそ
れぞれをコードしているポリヌクレオチドを発現カセッ
トとして用いて各模倣物ポリペプチドを発現させてもよ
い。これらのカセットが５’および３’制限部位を有し
ていて所望の場合にカセットを一緒にして連結するため
の便利な手段となることが好ましい。これらのカセット
が当該分野で知られたまたは本明細書にいずれかの場所
に記載された遺伝子発現シグナルを含むことがさらに好
ましい。

【００８８】よって、もう１つの態様において、本発明
は、本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチ
ドに関するアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受
容体、基質、酵素等；あるいはかかるポリペプチドおよ
び／またはポリヌクレオチドの生成を減少または促進す
る化合物を同定するためのスクリーニングキットに関す
る。該キットは： （ａ）本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオ
チド； （ｂ）本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオ
チドを発現する組み換え細胞； （ｃ）本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオ
チドを発現する細胞膜；あるいは （ｄ）本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオ
チドに対する抗体を含むものであり、好ましくは該ポリ
ペプチドは配列番号：２のものであり、好ましくは該ポ
リヌクレオチドは配列番号：１のものである。かかるキ
ットにおいて、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）は
重要成分を含有していてもよいことが理解されよう。

【００８９】本発明ポリペプチドおよび／またはポリヌ
クレオチドを、ポリペプチドおよび／またはポリヌクレ
オチドのアゴニスト、アンタゴニストまたは阻害剤の構
造に基づく設計方法に用いてもよいことが、当業者に容
易に理解されよう。該方法は： （ａ）最初にポリペプチドおよび／またはポリヌクレオ
チド、またはそれらの複合体の３次元構造を決定し、
（ｂ）アゴニスト、アンタゴニストまたは阻害剤の反応
部位、結合部位またはモチーフである可能性のある部位
の３次元構造を推定し、（ｃ）推定された反応部位、結
合部位および／またはモチーフと結合または反応すると
予想される候補化合物を合成し、次いで（ｄ）候補化合
物が実際にアゴニスト、アンタゴニストまたは阻害剤で
あるかどうかを試験することを含む。これが繰り返しプ
ロセスであり、自動およびコンピューター制御工程を用
いてこの繰り返しプロセスを行ってもよいことが、さら
に理解されよう。

【００９０】さらなる態様において、本発明は、例えば
ｄｎａＧポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド
の過剰発現、発現不足、上昇した活性、または低下した
活性に関連した疾病のごとき異常な状態の治療方法を提
供する。ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド
の発現および／または活性が過剰な場合、いくつかの方
法を用いることができる。１の方法は、ポリペプチドお
よび／またはポリヌクレオチドの機能および／または発
現を阻害（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素等の
結合をブロックすることにより、あるいは２次的シグナ
ルを阻害することにより）するに有効な量の上記阻害化
合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体ととも
に対象に投与し、そのことにより異常なな症状を改善す
ることを含む。もう１つの方法において、やはり内在性
ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチドと競争し
てリガンド、基質、受容体、酵素等に結合することがで
きる可溶性形態のポリペプチドを投与してもよい。かか
る競争物質の典型例はｄｎａＧポリペプチドおよび／ま
たはポリヌクレオチドのフラグメントを包含する。

【００９１】さらなる態様において、本発明は、本発明
ポリペプチドまたはそのフラグメントおよび種々のサブ
クラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロ
ブリンの重鎖または軽鎖の不変領域の種々の部分を含
む、遺伝子工学により得られる可溶性融合蛋白に関す
る。好ましい免疫グロブリンはヒトＩｇＧ（詳細にはＩ
ｇＧ１）の重鎖の不変部分であり、融合はヒンジ領域で
起こる。特定の具体例において、血液凝固因子Ｘａを用
いて開裂できる開裂配列を導入することによりＦｃ部分
を簡単に除去することができる。さらにそのうえ、本発
明は、遺伝子工学によるこれらの融合蛋白の製造方法、
ならびに薬剤スクリーニング、診断および治療における
それらの使用に関する。本発明のさらなる態様はかかる
融合蛋白をコードしているポリヌクレオチドにも関す
る。融合蛋白法の例は国際特許出願ＷＯ９４／２９４５
８およびＷＯ９４／２２９１４に見いだされる。

【００９２】さらにもう１つのアプローチにおいて、発
現ブロッキング法を用いて内在性ｄｎａＧポリペプチド
をコードしている遺伝子の発現を阻害することができ
る。このブロッキングは遺伝子発現のいずれの工程を標
的としてもよいが、好ましくは、転写および／または翻
訳を標的とする。この種の既知方法の例は、体内で生じ
るかまたは別個に投与されるアンチセンス配列の使用を
包含する（例えば、Oligodeoxynucleotides as Antisen
se Inhibitors of Gene Expression, CRC Press,Bocca
Raton, FL (1988)中O'Connor, J. Neurochem (1991) 5
6:560参照）。別法として、遺伝子とともに三重らせん
を形成するオリゴヌクレオチドを提供してもよい。例え
ば、Lee et al., Nucleic Acids Res (1979) 6:3073; C
ooney et al., Science (1988) 241:456; Dervan et a
l., Science (1991) 251:1360参照。これらのオリゴヌ
クレオチドはそれ自体投与することができ、あるいは重
要部分のオリゴマーをインビボで発現させることもでき
る。

【００９３】本明細書で得られるＤＮＡ配列は、各々、
抗菌化合物の発見および開発に用いることができる。発
現でコードされた蛋白は、抗菌薬物をスクリーニングす
るための標的として用いることができる。加えて、コー
ドされた蛋白のアミノ末端領域をコードするＤＮＡ配列
あるいはシャイン・ダルガノまたは他の個々のｍＲＮＡ
の翻訳容易化配列を用いて、目的とするコーディング配
列の発現を調節するアンチセンス配列を構築することが
できる。

【００９４】本発明はまた、感染の続発症に関与する、
病原体および哺乳動物宿主間の最初の物理的相互作用を
妨害するための、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオ
チドまたは阻害物質の使用を提供する。特に本発明の分
子は、細菌、特にグラム陽性菌が内在装置上の哺乳動物
細胞外マトリックス蛋白、または創傷部の細胞外マトリ
ックス蛋白に付着することを防御するために；真核生
物、好ましくは哺乳動物の細胞外マトリックス蛋白と組
織損傷を媒介する細菌性ｄｎａＧ蛋白との間の細菌付着
を遮断するために；内在装置の埋め込みまたは他の外科
的手技以外により開始した感染における病因の通常の進
行を遮断するために使用することができる。

【００９５】本発明のさらに別の態様によれば、ｄｎａ
Ｇのアゴニストおよびアンタゴニスト、好ましくは静菌
性または殺菌性アゴニストおよびアンタゴニストが提供
される。本発明のアンタゴニストおよびアゴニストを用
いて、例えば、疾患を予防、阻害し、そして／または治
療することができる。

【００９６】ヘリコバクター・ピロリ（Ｈelicobacter
pylori）（本明細書中、エッチ・ピロリともいう）菌
は、胃癌、潰瘍、胃炎を発病している世界中の人々の３
分の１以上の胃に感染している（国際癌研究機関（Inte
rnational Agency for Research on Cancer）（1994）S
chistomoses，Liver Flukes and Helicobacter Pylori
（International Agency for Research on Cancer，Lyo
n，France；http：／／www．uicc．ch／ecp／ecp2904．
htm））。さらに、この国際癌研究機関は、最近になっ
て、ヘリコバクター・ピロリと胃腺癌の間の因果関係を
認識し、その細菌をグループＩ（限定的）発癌物質と分
類した。本発明により提供されるスクリーニング法を用
いて見出される本発明の好ましい抗菌化合物（ｄｎａＧ
ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチドのアゴニ
ストおよびアンタゴニスト）、特に広スペクトルの抗生
物質は、ヘリコバクター・ピロリ感染の治療に有用であ
る。このような治療はヘリコバクター・ピロリ誘発性
癌、例えば胃腸癌の出現を減少させる。かかる治療はま
た胃潰瘍および胃炎も治癒する。

【００９７】ワクチン 生成物、組成物、ならびにｄｎａＧ発現の評価、疾病の
治療、遺伝学的変異のアッセイ、および細菌、特にスト
レプトコッカス・ニューモニアエ細菌に対する免疫学的
応答を生起させるためのｄｎａＧポリペプチドおよび／
またはポリヌクレオチドの生物への投与方法が本発明に
より提供される。本発明の別の態様は、個体、特に哺乳
動物における免疫学的応答を誘発する方法であって、抗
体および／またはＴ細胞免疫応答を生成するのに適当な
ｄｎａＧポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチ
ド、またはそのフラグメントもしくは変種を個体に接種
し、該個体を感染、特に細菌感染、最も好ましくはスト
レプトコッカス・ニューモニアエ感染から防御すること
を含む方法に関する。さらに、そのような免疫学的応答
による細菌複製を遅らせる方法も提供する。本発明のさ
らにもう一つ別の態様は、個体における免疫学的応答を
誘発する方法であって、インビボでｄｎａＧポリヌクレ
オチドおよび／またはポリペプチド、またはそのフラグ
メントまたは変種を発現するために、該ｄｎａＧポリヌ
クレオチドおよび／またはポリペプチド、またはそのフ
ラグメントまたは変種の発現を指向する核酸ベクターを
該個体に送達し、例えば、サイトカイン産生Ｔ細胞また
は細胞毒性Ｔ細胞を含め、抗体および／またはＴ細胞免
疫応答を生じさせるように免疫学的応答を誘発し、該個
体にて疾患が既に確立されているか否かにかかわらず該
個体を疾患から保護することを含む方法に関する。遺伝
子を投与する一例は、粒子上のコーティングとして遺伝
子を所望の細胞に投与することによるものである。この
ような核酸ベクターはＤＮＡ、ＲＮＡ、リボザイム、修
飾核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、ＤＮＡ−蛋白複
合体またはＲＮＡ−蛋白複合体を含んでいてもよい。

【００９８】本発明のさらなる態様は、その中に免疫学
的応答を誘発する能力を有するか、または誘発している
個体に導入されると、その個体においてｄｎａＧポリヌ
クレオチドおよび／またはそれによりコードされるポリ
ペプチドに対する免疫学的応答を誘発する免疫学的組成
物であって、該ｄｎａＧポリヌクレオチドおよび／また
はそれによりコードされるポリペプチド、または他の本
発明ポリペプチドの抗原をコードし、発現するＤＮＡを
含む組換えｄｎａＧポリヌクレオチドおよび／またはそ
れによりコードされるポリペプチドを含む組成物に関す
る。免疫学的応答は、治療的および予防的に使用でき、
抗体免疫および／またはＣＴＬまたはＣＤ４＋Ｔ細胞か
ら生ずるような細胞性免疫から得ることができる。

【００９９】ｄｎａＧポリペプチドまたはそのフラグメ
ントは、それ自体抗体を産生しないが、第１の蛋白の安
定化ならびに免疫原性および保護特性を有するであろう
融合蛋白の産生能を有する補蛋白（co−Protein）と融
合させることができる。このような融合組換え蛋白は、
好ましくは、さらに、ヘモフィラス・インフルエンザ
（Hemophilus influenzae）からのリポプロテインＤ、
グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）また
はベータガラクトシダーゼのような抗原性補蛋白、蛋白
を可溶化し、その産生および精製を容易にするような比
較的大きい補蛋白からなる。さらに、補蛋白は、免疫系
の全身的な刺激を与える上で、アジュバントとして作用
してもよい。補蛋白は第１の蛋白のアミノまたはカルボ
キシ末端のいずれかに結合してもよい。本発明は、本発
明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドおよび、Sat
o，Y.ら，Science，273：352(1996)に記載されるような
免疫刺激ＤＮＡ配列からなる組成物、特にワクチン組成
物および方法を提供する。

【０１００】また、本発明は、ストレプトコッカス・ニ
ューモニアエ感染の動物モデルにおけるそのような遺伝
的免疫実験において使用したＤＮＡ構築物中で細菌細胞
表面蛋白の非可変領域をコードすることが明らかにされ
た、記載されたポリヌクレオチドまたはその特定のフラ
グメントを使用する方法も提供する。そのような実験
は、予防的または治療的免疫応答を起こさせることので
きる蛋白エピトープの同定に特に有用である。この方法
により、動物、とりわけヒトにおける細菌感染、特にス
トレプトコッカス・ニューモニアエ感染の予防剤または
治療剤の開発のために、動物の必須器官から感染の抵抗
または除去に特に有用なモノクローナル抗体を産生させ
ることができると考えられる。

【０１０１】宿主を免疫するための抗原として本発明ポ
リペプチドを用い、例えば、損傷組織への細菌の付着を
遮断することにより、細菌の侵入を妨げる特異抗体を生
じさせることができる。組織損傷の例としては、例え
ば、機械的、化学的または熱的損傷による、または内在
装置の埋め込みによる皮膚や結合組織の傷、あるいは
口、乳腺、子宮または膣のような粘膜における傷が挙げ
られる。

【０１０２】本発明はまた、本発明の免疫原性組換えポ
リペプチドおよび／またはポリヌクレオチドと適当な担
体とからなるワクチン処方も包含する。蛋白は胃で破壊
されうるので、非経口的投与（例えば、皮下、筋肉内、
静脈内、皮内等の投与を包含する）が望ましい。非経口
投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝剤、抗菌剤、およ
びその処方を個体の体液、好ましくは血液と等張にする
溶質を含有してもよい、水性および非水性滅菌注射溶
液；懸濁化剤または増粘剤を含有してもよい、水性およ
び非水性滅菌懸濁液を包含する。処方は、単位投与また
は複数投与用コンテナ、例えば、密封されたアンプルお
よびバイアルにて提供され、使用直前に滅菌液体担体を
添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵することができ
る。ワクチン処方はまた、水中油系のごとき処方の免疫
原性を高めるアジュバント系および当該分野において知
られている他の系を有してもよい。投与量はワクチンの
比活性に依存し、慣用的実験操作によって容易に決定で
きる。

【０１０３】本発明をある種のｄｎａＧポリペプチドお
よびポリヌクレオチドについて記載したが、この記載は
天然のポリペプチドおよびポリヌクレオチドのフラグメ
ント、ならびに組換えポリペプチドまたはポリヌクレオ
チドの免疫原性を実質的に変化させない付加、欠失また
は置換を有する同様なポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドも包含することが理解されるであろう。

【０１０４】組成物、キットおよび投与 本発明のさらなる態様において、単細胞または多細胞生
物に投与される、ｄｎａＧポリヌクレオチドおよび／ま
たはｄｎａＧポリペプチドを含む組成物が提供される。
本発明はまた、上記したポリヌクレオチドおよび／また
はポリペプチドあるいはそれらのアゴニストまたはアン
タゴニストからなる組成物に関する。本発明のポリペプ
チドは、対象への投与に適した医薬担体のような細胞、
組織または器官用の未滅菌または滅菌担体と組み合わせ
て使用できる。かかる組成物は、例えば、媒体添加また
は治療上有効量の本発明のポリペプチドおよび／または
ポリヌクレオチドと、医薬上許容される担体または賦形
剤を含む。かかる担体は、限定するものではないが、食
塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロー
ル、エタノールおよびその組み合わせを包含する。処方
は投与方法に適していなければならない。本発明は、さ
らには、上記した本発明の組成物の一またはそれ以上の
成分を充填した、一またはそれ以上のコンテナを含む診
断および医薬用パックおよびキットに関する。

【０１０５】本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド
および他の化合物を、単独で、または、治療用化合物な
どの他の化合物と組み合わせて用いてもよい。該医薬組
成物は、例えば、とりわけ、局所、経口、経肛門、経
膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、経鼻、経皮経路に
よる投与を含む、いずれかの有効な、都合のよい方法で
投与される。治療および予防において、活性成分は個体
に注射用組成物、例えば、好ましくは等張の滅菌水性分
散液として投与される。

【０１０６】また、組成物は、例えば、軟膏、クリー
ム、ローション、眼軟膏、点眼剤、点耳剤、マウスウォ
ッシュ、含浸包帯および縫合糸ならびにエアゾルの形態
の局所用処方とすることができ、適当な通常の添加剤、
例えば、保存料、薬剤浸透を助ける溶媒、軟膏やクリー
ムにおけるエモリエント等を含むことができる。そのよ
うな局所用処方はまた、適合する通常の担体、例えば、
クリームまたは軟膏基剤、ローション用のエタノールま
たはオレイルアルコールも含有することができる。この
ような担体は、処方の約１〜９８重量％を構成してもよ
く、より一般的には、処方の約８０重量％までを構成す
る。

【０１０７】さらなる態様において、本発明は、医薬上
許容される担体または賦形剤を混合された治療上有効量
のポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド、例え
ば可溶性形態の本発明ポリペプチドおよび／またはポリ
ヌクレオチド、アゴニストまたはアンタゴニストペプチ
ドまたは小型分子化合物を含む組成物が提供される。か
かる担体は、セイライン、緩衝化セイライン、デキスト
ロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれら
の混合物を包含するが、これらに限らない。さらに本発
明は、上記本発明組成物の１種またはそれ以上の成分を
入れた１個またはそれ以上の容器を含む医薬パックおよ
びキットに関する。本発明のポリペプチド、ポリヌクレ
オチドおよび他の化合物を単独で、あるいは治療化合物
のごとき他の化合物と組み合わせて使用してもよい。

【０１０８】組成物を投与経路（例えば、全身投与また
は経口投与）に適合させる。医薬組成物の全身投与の好
ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含する。
皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を用い
ることもできる。全身投与のための別の手段は、胆汁酸
塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき浸透
剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さらに、
腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるなら
ば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は局
所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の形
態であってもよい。

【０１０９】哺乳動物、特にヒトに投与するには、一日
の活性薬剤の用量は、０.０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／
ｋｇ、典型的には約１ｍｇ／ｋｇである。いずれにして
も、個体に最も適した実際の用量は医者により決定さ
れ、個体の年齢、体重および応答により変化する。上記
の用量は、平均的な場合の例示である。もちろん、より
高いまたは低い用量範囲が適当な個体もあり、それらも
本発明の範囲内である。内在装置には外科移植、補綴お
よびカテーテル、すなわち、個体の体内に導入され、そ
の位置に長時間止まる装置が包含される。例えば、その
ような装置としては、人工関節、心臓弁、ペースメーカ
ー、血管グラフト、血管カテーテル、脊髄液シャント、
尿カテーテル、連続歩行腹膜透析（continuous ambulat
ory peritoneal dialysis：ＣＡＰＤ）カテーテルが挙
げられる。

【０１１０】本発明の組成物は、内在装置の挿入の直前
に関連する細菌に対する全身的効果を達成するために注
射で投与できる。治療は、手術の後、装置が体内にある
間継続できる。加えて、組成物は、細菌の傷汚染、特
に、ストレプトコッカス・ニューモニアエの傷汚染を防
止するために、いずれの手術用の手術周辺カバーの拡張
にも使用できる。多くの整形外科医は、補綴関節を有す
るヒトは、菌血症を生じ得る歯の治療前に抗生物質によ
る予防を考慮すべきと考えている。後の重い感染は、重
篤な合併症となり、時に、補綴関節の損失および著しい
罹病率、致死率を伴う。したがって、該活性物質を、こ
の状況の予防的抗生物質の代替品として使用することに
まで拡張することができる。

【０１１１】上記した治療に加えて、本発明の組成物
は、一般に、傷組織に露出したマトリックス・蛋白への
細菌付着を予防するための傷治療剤、抗生物質予防に代
え、あるいは共に、歯の治療における予防的用途に使用
できる。別法として、本発明の組成物は挿入直前に内在
装置を浸すのに使用できる。該活性物質は、好ましく
は、傷または内在装置を浸す場合、１μｇ／ｍｌ〜１０
ｍｇ／ｍｌの濃度で使用できる。

【０１１２】便利には、ワクチン組成物は注射剤の形態
である。通常のアジュバントを使用して免疫応答を高め
ることができる。ワクチン用の適当な単位投与量は抗体
０.５〜５μｇ／ｋｇであり、この用量を、好ましくは
１〜３週間の間隔で１〜３回投与する。指示した用量範
囲で、本発明の化合物では、その化合物の適当な個体へ
の投与を妨げる、有害な毒作用は何も観察されない。

【０１１３】配列データベース、触知可能媒体中の配
列、およびアルゴリズムポリヌクレオチドおよびポリペ
プチド配列は、その２次元および３次元構造を決定し、
類似の相同性を有するさらなる配列を同定するための貴
重な情報源を形成する。配列をコンピューター読み込み
可能媒体に保存し、次いで、既知の高分子構造プログラ
ムにおいて保存したデータを用いて、ＧＣＣのごときよ
く知られた既知検索ツールを用いてデータベースを検索
することにより、これらのアプローチを最も容易に簡略
化することができる。本発明ポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドは検索分析に有用なデータベースならびに配
列分析アルゴリズム中の成分として有用である。見出し
のこのセクションならびにこのセクションに関連した請
求項の用語「配列データベース、触知可能媒体中の配
列、およびアルゴリズム」「本発明ポリヌクレオチド」
および「本発明ポリヌクレオチド配列」は、本発明ポリ
ヌクレオチドの検出可能な化学的または物理的特性を意
味し、触知可能媒体に還元または保存されていてもよい
ものである。例えば、クロマトグラフィーのスキャンデ
ータまたはピークのデータ、写真のデータまたはそこか
ら得られたスキャンデータ、コールドベース、および質
量スペクトル分析データが挙げられる。データベースお
よびアルゴリズムという見出しのこのセクションならび
にそれに関連した請求項で用いる用語「本発明ポリペプ
チド」および「本発明ポリペプチド配列」は、本発明ポ
リペプチドの検出可能な化学的または物理的特性を意味
し、触知可能媒体に還元または保存されていてもよいも
のである。例えば、クロマトグラフィーのスキャンデー
タまたはピークのデータ、写真のデータまたはそこから
得られたスキャンデータ、コールドベース、および質量
スペクトル分析データが挙げられる。

【０１１４】本発明は、本発明ポリペプチド配列および
／または本発明ポリヌクレオチド配列を保存したコンピ
ューター読み込み可能媒体を提供する。例えば、下記の
メンバーを含み、保存したコンピューター読み込み可能
媒体が提供される：メンバーは、本発明ポリヌクレオチ
ドの配列を含むポリヌクレオチド；本発明ポリペプチド
配列の配列を含むポリペプチド；少なくとも１つの配列
が本発明ポリヌクレオチド配列の配列を含むものである
ポリヌクレオチド配列のセット；少なくとも１つの配列
が本発明ポリペプチド配列の配列を含むものであるポリ
ヌペプチド配列のセット；本発明ポリヌクレオチド配列
の配列を含むポリヌクレオチド配列を表すデータセッ
ト；本発明ポリペプチド配列の配列を含むポリペプチド
をコードしているポリヌクレオチド配列を表すデータセ
ット；本発明ポリヌクレオチド配列の配列を含むポリヌ
クレオチド；本発明ポリペプチド配列の配列を含むポリ
ペプチド；少なくとも１つの配列が本発明ポリヌクレオ
チド配列の配列を含むものであるポリヌクレオチド配列
のセット；少なくとも１つの配列が本発明ポリペプチド
配列の配列を含むものであるポリペプチド配列のセッ
ト；本発明ポリヌクレオチド配列の配列を含むポリヌク
レオチド配列を表すデータセット；本発明ポリペプチド
配列の配列を含むポリペプチド配列をコードしているポ
リヌクレオチド配列を示すデータセットである。コンピ
ューター読み込み可能媒体は情報またはデータを保存す
るのに用いる物体のいずれの組成物であってもよく、例
えば、市販フロッピーディスク、テープ、チップ、ハー
ドドライブ、コンパクトディスク、およびビデオディス
クを包含する。特徴配列または鎖、詳細には遺伝学的配
列またはコードされた遺伝学的配列の分析方法が本発明
により提供される。配列分析のための好ましい方法は、
例えば、同一性および類似性の分析のごとき配列相同性
分析、ＲＮＡ構造分析、配列アッセンブリー、クラディ
スティック（cladistic）分析、配列モチーフ分析、読
み枠決定、核酸塩基コーリング（calling）、核酸塩基
トリミング、および配列決定クロマトグラムピーク分析
の方法を包含する。

【０１１５】コンピューターによる方法は相同性の同定
を行うために提供される。この方法は、本発明ポリヌク
レオチド配列を含む第１のポリヌクレオチド配列をコン
ピューター読み込み可能媒体中に提供し、次いで、該第
１のポリヌクレオチド配列を少なくとも１つの第２のポ
リヌクレオチドまたはポリペプチド配列と比較して相同
性を同定する工程を含む。

【０１１６】コンピューターによる方法は相同性の同定
を行うためにも提供され、該方法は、本発明ポリペプチ
ド配列を含む第１のポリペプチド配列をコンピューター
読み込み可能媒体中に提供し、次いで、該第１のポリペ
プチド配列を少なくとも１つの第２のポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列と比較して相同性を同定する工
程を含む。

【０１１７】さらにコンピューターによる方法はポリヌ
クレオチドアッセンブリー用にも提供され、該方法は、
本発明ポリヌクレオチド配列を含む第１のポリヌクレオ
チド配列をコンピューター読み込み可能媒体中に提供
し、次いで、該第１のポリヌクレオチド配列と少なくと
も１つの第２のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配
列との間の少なくとも１つの重複領域をスクリーニング
する工程を含む。

【０１１８】本発明のさらなる具体例はポリヌクレオチ
ドアッセンブリーのためのコンピューターによる方法を
提供し、該方法は、本発明ポリペプチド配列を含む第１
のポリペプチド配列をコンピューター読み込み可能媒体
中に提供し、次いで、該第１のポリペプチド配列と少な
くとも１つの第２のポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ド配列との間の少なくとも１つの重複領域をスクリーニ
ングする工程を含む。

【０１１９】本発明のもう１つの好ましい具体例におい
て、下記のものからなる群より選択されるメンバーを保
存したコンピューター読み込み可能媒体が提供される：
メンバーは、配列番号：１の配列を含むポリヌクレオチ
ド；配列番号：２の配列を含むポリペプチド；少なくと
も１つの配列が配列番号：１の配列を含むものであるポ
リヌクレオチド配列のセット；少なくとも１つの配列が
配列番号：２の配列を含むものであるポリペプチド配列
のセット；配列番号：１の配列を含むポリヌクレオチド
配列を表すデータセット；配列番号：２の配列を含むポ
リペプチド配列をコードしているポリヌクレオチド配列
を表すデータセット；配列番号：１の配列を含むポリヌ
クレオチド；配列番号：２の配列を含むポリペプチド；
少なくとも１つの配列が配列番号：１の配列を含むもの
であるポリヌクレオチド配列のセット；少なくとも１つ
の配列が配列番号：２の配列を含むものであるポリペプ
チド配列のセット；配列番号：１の配列を含むポリヌク
レオチド配列を表すデータセット；配列番号：２の配列
を含むポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオ
チド配列を表すデータセットである。さらなる好ましい
本発明の具体例は、相同性の同定を行うためのコンピュ
ーターによる方法を提供し、該方法は、配列番号：１の
配列を含むポリヌクレオチド配列をコンピューター読み
込み可能媒体中に提供し、次いで、該ポリヌクレオチド
配列を少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはポリペ
プチド配列を比較して相同性を同定する工程を含む。

【０１２０】さらなる好ましい本発明の具体例は、相同
性の同定を行うためのコンピューターによる方法を提供
し、配列番号：２の配列を含むポリペプチド配列をコン
ピューター読み込み可能媒体中に提供し、次いで、該ポ
リペプチド配列を少なくとも１つのポリヌクレオチドま
たはポリペプチド配列を比較して相同性を同定する工程
を含む。

【０１２１】さらなる好ましい本発明の具体例は、ポリ
ヌクレオチドアッセンブリーのためのコンピューターに
よる方法を提供し、該方法は、配列番号：１の配列を含
む第１のポリヌクレオチド配列をコンピューター読み込
み可能媒体中に提供し、次いで、該第１のポリヌクレオ
チド配列と第２のポリヌクレオチド配列との間の少なく
とも１つの重複領域をスクリーニングする工程を含む。

【０１２２】本発明のさらなる具体例は、相同性の同定
を行うためのコンピューターによる方法を提供し、該方
法は、配列番号：１の配列を含むポリヌクレオチド配列
をコンピューター読み込み可能媒体中に提供し、次い
で、該ポリヌクレオチド配列を少なくとも１つのポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド配列と比較して相同性を
同定する工程を含む。

【０１２３】本明細書において引用したすべての文献
（特許および特許出願に限らない）は出典明示によりそ
の内容を本明細書の一部とする。本願が優先権を主張す
るいずれの特許出願もまた出典明示により本明細書の一
部とする。

【０１２４】用語 本明細書中で頻繁に使用される特定の用語を、その理解
を容易にするために以下に定義する。「抗体（複数でも
可）」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗
体、キメラ、１本鎖、およびヒト化抗体、ならびにＦａ
ｂフラグメントを包含し、さらにＦａｂまたは他の免疫
グロブリン発現ライブラリーの産物を包含する。「抗原
的に等価な誘導体（複数でも可）」は、特定の抗体によ
り特異的に認識されるポリペプチド、ポリヌクレオチ
ド、またはいずれかの等価物を包含し、該特定の抗体
は、本発明蛋白、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド
に対して生成した場合に、病原体と哺乳動物宿主との間
の身体的相互作用を妨害するものである。「二特異的
（複数でも可）」とは、少なくとも２つの抗原結合ドメ
インを含む抗体を意味し、各ドメインは異なるエピトー
プに指向されている。「身体材料（複数でも可）」と
は、個体または生物由来の材料を意味し、骨、血液、血
清、脳脊髄液、精液、唾液、筋肉、軟骨、器官組織、皮
膚、尿、糞便または生検材料のごとき細胞、組織および
排泄物等を包含する。該生物は、個体に感染、侵入、ま
たは棲息するものである。「疾病（複数でも可）」は、
細菌感染により引き起こされる、あるいは細菌感染に関
連した疾病を意味し、例えば、中耳炎、結膜炎、肺炎、
菌血症、脳髄膜炎、副鼻腔炎、膿胸、および心内膜炎、
そして最も詳細には脳髄膜炎、例えば脳脊髄液の感染を
包含する。「融合蛋白（複数でも可）」は、２種の、し
ばしば関係のない融合遺伝子またはそのフラグメントに
よりコードされた蛋白をいう。一例において、ＥＰ−Ａ
−０４６４には、別のヒト蛋白またはその一部と一緒に
なった免疫グロブリン分子の不変領域の種々の部分を含
む融合蛋白が開示されている。多くの場合、免疫グロブ
リンのＦｃ領域を融合蛋白の一部分として用いることは
治療および診断における使用に有利であり、例えば、改
善された薬物動態学的特性が得られる（例えば、ＥＰ−
Ａ ０２３２２６２参照）。一方、いくつかの用途に
は、融合蛋白が発現、検出および精製された後、Ｆｃ部
分を欠失できることが望ましいであろう。「宿主細胞
（複数でも可）」は外来性ポリヌクレオチド配列によっ
て形質転換またはトランスフェクションされた、あるい
は形質転換またはトランスフェクションされうる細胞で
ある。

【０１２５】「同一性」は、当該分野で公知であり、配
列の比較で決定されるような、２またはそれ以上のポリ
ペプチド配列あるいは２またはそれ以上のポリヌクレオ
チド配列の間の関係である。また、当該分野では、「同
一性」は、場合によっては、配列の鎖間の対合によって
決定されるような、ポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ド配列間の配列の関連性の度合を意味する。「同一性」
は、Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.
編，Oxford University Press，New York，1988；Bioco
mputing：Informatics and Genome Projects, Smith,
D.W.編，Academic Press，New York，1993；Computer A
nalysis of Sequence Data，Part I，Griffin, A.M.お
よびGriffin, H.G.編，Humana Press，New Jersey，199
4；Sequence Analysis in Molecular Biology，Von Hei
nje,G．Academic Press，1987；およびSequence Analys
is Primer，Gribskov,M.およびDevereux, J.編，M Stoc
kton Press，New York，1991；およびCarllio,HおよびL
ipman,D.，SIAM J.Applied Math., 48：1073(1988)に記
載されている方法（これらに限らない）を含め、公知方
法により容易に決定することができる。同一性を決定す
る好ましい方法は、テストする配列間に最大の対合を与
えるように設計されている。そのうえ、同一性を測定す
る方法は公に入手できるコンピュータ・プログラムに集
成されている。２つの配列の間の同一性を測定する好ま
しいコンピュータ・プログラム方法は、例えば、ＧＣＳ
プログラムパッケージ（Devereux,J.ら，Nucleic Acids
Research（1984）12（1）：387）、BLASTP、BLASTNお
よびFASTA（Atschul,S. F.ら, J.Molec.Biol.（1990）2
15：403−410）を包含するが、これに限らない。BLAST
XプログラムはNCBIおよび他の源（BLAST Manual，Altsh
ul, S．ら，NCBI NLM NIH Bethesda，MD20894；Altschu
l,S．ら，J．Mol．Biol.，215：403−410(1990)）から
公に入手できる。また、周知のスミス・ウォーターマン
（Smith Waterman)アルゴリズムを用いて同一性を決定
することもできる。

【０１２６】ポリペプチド配列の比較のためのパラメー
ターは以下のものを包含する： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J.Mol.Bio
l. 48:443-453 (1970) 比較マトリックス：Hentikoff and Hentikoff, Proc.Na
tl.Acad.Sci.USA.89:10915-10919 (1992)からのBLOSSUM
62 ギャップペナルティー：１２ ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターに関して有用なプログラムは、Ge
netics Computer Group, Madison WI.から「ギャップ」
プログラムとして公に利用できる。上記パラメーターは
ポリペプチド比較のための省略時パラメーターである
（エンドギャップについてペナルティーを伴わない）。
ポリヌクレオチド比較のための好ましいパラメーターは
下記のものを包含する： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J.Mol.Bio
l. 48:443-453 (1970) 比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターに関して有用なプログラムは、Ge
netics Computer Group, Madison WI.から「ギャップ」
プログラムとして公に利用できる。上記パラメーターは
ポリヌクレオチド比較のための省略時パラメーターであ
る。

【０１２７】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドにつ
いての「同一性」に関する好ましい意味は、下記（１）
および（２）に示される。 （１）さらにポリヌクレオチドの具体例は、配列番号：
１の対照配列に対して少なくとも５０、６０、７０、８
０、８５、９０、９５、９７または１００％の同一性を
有する単離ポリヌクレオチド配列を包含し、本発明ポリ
ヌクレオチド配列は配列番号：１の対照配列と同一であ
ってもよく、あるいは対照配列と比較してある程度の数
までのヌクレオチドの変化を有していてもよい。かかる
変化は、少なくとも１個のヌクレオチドの欠失、置換
（トランジションおよびトランスバージョンを包含）ま
たは挿入からなる群より選択され、該変化は対照ヌクレ
オチド配列の５’または３’末端の位置あるいはそれら
の末端位置の間の位置において、対照配列中のヌクレオ
チドにおいて個々にまたは散在して、あるいは対照配列
中の１またはそれ以上の連続した群として生じてもよ
い。配列番号：１中の全ヌクレオチド数と個々の同一性
パーセント値（１００で割ったもの）とをかけて、その
積を配列番号：１中の全ヌクレオチド数から差し引くこ
とによりヌクレオチド変化の数を決定する。これを下式
により説明する： ｎ_n≦ｘ_n−（ｘ_n・ｙ） 式中、ｎ_nはヌクレオチド変化の数であり、ｘ_nは配列番
号：１中の全ヌクレオチド数であり、ｙは、例えば７０
％なら０．７０、８０％なら０．８０、８５％なら０．
８５、９０％なら０．９０、９５％なら０．９５、９７
％なら０．９７、１００％なら１．００であり、・は積
の演算子であり、ｘ_nとｙとの整数でない積は切り捨て
により最も近い整数とした後、ｘ_nから差し引く。配列
番号：２のポリペプチドをコードしているポリヌクレオ
チド配列の変化は、好ましくはコーディング配列中のナ
ンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト変異を引き
起こす可能性があり、それゆえ、かかる変化に随伴して
ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチド
が変化する。例えば、本発明ポリヌクレオチド配列は配
列番号：１の対照配列と同一であってもよく、すなわ
ち、１００％同一であってもよく、あるいは対照配列と
比較してある程度の数までの核酸の変化を有していても
よい（その場合、同一性％は１００％未満である）。か
かる変化は、少なくとも１個の核酸の欠失、置換（トラ
ンジションおよびトランスバージョンを包含）または挿
入からなる群より選択され、該変化は対照ポリヌクレオ
チド配列の５’または３’末端の位置あるいはそれらの
末端位置の間の位置において、対照配列中の核酸におい
て個々にまたは散在して、あるいは対照配列中の１また
はそれ以上の連続した群として生じてもよい。配列番
号：１中の全核酸数に個々の同一性を示す整数を１００
で割った値をかけて、その積を配列番号：１中の全核酸
数から差し引くことにより同一性％値についての核酸変
化数を決定する。あるいはこのことは下式により説明さ
れる： ｎ_n≦ｘ_n−（ｘ_n・ｙ） 式中、ｎ_nは核酸変化の数であり、ｘ_nは配列番号：１中
の全核酸数であり、ｙは、例えば７０％なら０．７０、
８５％なら０．８５等であり、ｘ_nとｙとの整数でない
積は切り捨てにより最も近い整数とした後、ｘ_nから差
し引く。

【０１２８】（２）さらにポリペプチドの具体例は、配
列番号：２のポリペプチド対照配列に対して少なくとも
５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９７また
は１００％の同一性を有するポリペプチドを含む単離ポ
リペプチドを包含し、該ポリペプチド配列は配列番号：
２の対照配列と同一であってもよく、あるいは対照配列
と比較してある程度の数までのアミノ酸の変化を有して
いてもよい。かかる変化は、少なくとも１個のアミノ酸
の欠失、置換（保存的および非保存的置換を包含）また
は挿入からなる群より選択され、該変化は対照ポリペプ
チド配列のアミノまたはカルボキシ末端の位置あるいは
それらの末端位置の間の位置において、対照配列中のア
ミノ酸において個々にまたは散在して、あるいは対照配
列中の１またはそれ以上の連続した群として生じてもよ
い。配列番号：２中の全アミノ酸数と同一性を示す整数
を１００で割った値とをかけて、その積を配列番号：２
中の全アミノ酸数から差し引くことによりアミノ酸変化
の数を決定する。これを下式により説明する： ｎ_a≦ｘ_a−（ｘ_a・ｙ） 式中、ｎ_aはアミノ酸変化数であり、ｘ_aは配列番号：２
中の全アミノ酸数であり、ｙは、例えば７０％なら０．
７０、８０％なら０．８０、８５％なら０．８５、９０
％なら０．９０、９５％なら０．９５、９７％なら０．
９７、１００％なら１．００であり、・は積の演算子で
あり、ｘ_aとｙとの整数でない積は切り捨てにより最も
近い整数とした後、ｘ_aから差し引く。例えば、本発明
ポリペプチド配列は配列番号：２の対照配列と同一であ
ってもよく、すなわち、１００％同一であってもよく、
あるいは対照配列と比較してある程度の数までのアミノ
酸の変化を有していてもよい（その場合、同一性％は１
００％未満である）。かかる変化は、少なくとも１個の
アミノ酸の欠失、置換（保存的または非保存的置換を包
含）または挿入からなる群より選択され、該変化は対照
ポリペプチド配列のアミノまたはカルボキシ末端の位置
あるいはそれらの末端位置の間の位置において、対照配
列中のアミノ酸において個々にまたは散在して、あるい
は対照配列中の１またはそれ以上の連続した群として生
じてもよい。配列番号：２中の全アミノ酸数に個々の同
一性パーセント値（１００で割ったもの）をかけて、そ
の積を配列番号：２中の全アミノ酸数から差し引くこと
により同一性％値についてのアミノ酸変化数を決定す
る。これを下式により説明する： ｎ_a≦ｘ_a−（ｘ_a・ｙ） 式中、ｎ_aはアミノ酸変化の数であり、ｘ_aは配列番号：
２中の全アミノ酸数であり、ｙは、例えば７０％なら
０．７０、８５％なら０．８５等であり、ｘ_aとｙとの
整数でない積は切り捨てにより最も近い整数とした後、
ｘ_aから差し引く。

【０１２９】「免疫学的に等価な誘導体」は、ポリペプ
チド、ポリヌクレオチド、またはいずれかの等価物を包
含し、それらが脊椎動物において抗体を生成させるため
に適当な処方中に用いられた場合に、抗体は病原体と哺
乳動物宿主との間の即時的な身体的相互作用を妨害する
ように作用する。「免疫特異的」とは、他の関連ポリペ
プチドまたはポリヌクレオチド、特に先行技術のポリペ
プチドまたはポリヌクレオチドに対してよりも本発明ポ
リペプチドまたは本発明ポリヌクレオチドに対して実質
的に大きなアフィニティーを有する抗体の特性を意味す
る。「個体（複数でも可）」とは多細胞真核生物を意味
し、後生動物類、哺乳動物、ヤギ類、ウシ類、類人猿、
霊長類およびヒトを包含するが、これらに限らない。

【０１３０】「単離された」とは、「ヒトの手によ
り」、その天然の状態から変えられること、すなわち、
天然物の場合、その本来的な環境から変化または除去あ
るいは両方されたことを意味する。例えば、生体に天然
に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単
離された」ものではないが、その天然状態で共存する物
質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは、本明細書で用いる用語としての「単離された」
ものである。さらには、形質転換、遺伝的操作により、
または他のいずれかの方法により生物に導入されている
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、まだ生物内に
あり、その生物が生きているまたは死んでいるとして
も、「単離された」ものである。

【０１３１】「生物（複数でも可）」は、（ｉ）Strept
ococcus、Staphylococcus、Bordetella、Corynebacteri
um、Mycobacterium、Neisseia、Haemophilus、Actinomy
ces、Streptomyces、Nocardia、Enterobacter、Yersini
a、Fancisella、Pasturella、Moraxella、Acinetobacte
r、Erysipelothrix、Branhamella、Actinobacillus、St
reptobacillus、Listeria、Calymmatobacterium、Bruce
lla、Bacillus、Closterdium、Treponema、Escherichi
a、Salmonella、Kleibsiella、Vibrio、Proteus、Erwin
ia、Borrelia、Leptospira、Spirillum、Campylobacte
r、Shigella、Legionella、Pseudomonas、Aeromonas、R
ickettsia、Chlamydia、BorreliaおよびMycoplasmaであ
る属（これらに限らない）のメンバー、ならびにグルー
プＡのStreptococcus、グループＢのStreptococcus、グ
ループＣのStreptococcus、グループＤのStreptococcu
s、グループＧのStreptococcus、Streptococcus pneumo
niae、Streptococcus pyrogenes、Streptococcus agala
ctiae、Streptococcus faecalis、Streptococcus faeci
um、Streptococcus durans、Neisseria gonorrheae、Ne
isseria meningitidis、Staphylococcus aureus、Staph
ylococcus epidermidis、Corynebacterium diptheria
e、Garnella vaginalis、Mycobacterium tuberculosi
s、Mycobacterium bovis、Mycobacterium ulcerans、My
cobacterium leprae、Actinomyces israelli、Listeria
monocytogenes、Bordetella pretusis、Bordetella pa
rapretusis、Bordetella bronchiseptica、Esherichia
coli、Shigella dysenteriae、Haemophilus influenza
e、Haemophilus aegyptius、Haemophilus parainfluenz
ae、Haemophilus ducreyi、Bordetella、Salmonella ty
phi、Citrobacter freundii、Proteus mirabilis、Prot
eus vulgaris、Yersinia pestis、Klebsiella pneumoni
ae、Serratia marcessens、Vibrio cholera、Shigellad
ysenterii、Shigella flexneri、Pseudomonas aerugino
sa、Franscisella tularensis、Brucella abortis、Bac
illus anthracis、Bacillus cereus、Clostridium perf
ringens、Clostridium tetani、Clostridium butulinu
m、Treponema pallidum、Rickettsia rickettsiiおよび
Chlamydia trachomitisである種またはグループ（これ
らに限らない）のメンバーを包含する原核生物、（ｉ
ｉ）Archaebacter（これに限らない）を包含する古細
菌、および（ｉｉｉ）原生動物、真菌類、Saccharomyce
s、KluveromycesまたはCandida属（これらに限らない）
のメンバー、およびSaccharomyces cerevisiae、Kluver
omyces lactisまたはCandida albicans種のメンバー
（これらに限らない）を包含する単細胞または糸状真核
生物を意味する。

【０１３２】「ポリヌクレオチド（複数でも可）」は、
一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボ
ヌクレオチドのいずれをもいい、それらは非修飾ＲＮＡ
またはＤＮＡ、あるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであっ
てもよい。「ポリヌクレオチド」は、単鎖および二本鎖
ＤＮＡ、単鎖および二本鎖領域または単鎖、二本鎖およ
び三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、単鎖および二本鎖
ＲＮＡ、単鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、
および単鎖またはより典型的には二本鎖または三本鎖領
域または一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよ
いＤＮＡおよびＲＮＡを含含むハイブリッド分子を包含
するが、これに限定されない。さらに、本明細書におい
て用いる「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮ
Ａ、あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方からなる三本鎖
領域をいう。これらの領域の鎖は同じ分子からのもので
も、異なる分子からのものでもよい。該領域は、これら
分子の一またはそれ以上のすべてを含んでもよいが、よ
り典型的には、分子のいくつかの領域のみを含む。三本
螺旋領域の分子の一つは、しばしば、オリゴヌクレオチ
ドである。本明細書において用いる場合、「ポリヌクレ
オチド（複数でも可）」なる用語はまた、一つまたはそ
れ以上の修飾された塩基を含有する上記ＤＮＡまたはＲ
ＮＡを包含する。すなわち、安定性または他の理由で修
飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも、該用語が
本明細書で意図するところの「ポリヌクレオチド（複数
でも可）」である。さらに、イノシンなどの通常でない
塩基、またはトリチル化された塩基などの修飾塩基を含
むＤＮＡまたはＲＮＡ（２つの例だけを示す）も、その
用語を本明細書で用いる場合のポリヌクレオチドであ
る。多種の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡになされており、
当業者に公知のように多くの有用な目的に使用されてい
ることが理解されよう。本明細書で用いる「ポリヌクレ
オチド」なる語は、ポリヌクレオチドのこのような化学
的、酵素的または代謝的に修飾された形態、ならびにウ
イルスおよび、例えば、単純型細胞および複雑型細胞な
どの細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。「ポリヌクレオチド（複数でも可）」はま
た、しばしばオリゴヌクレオチド（複数でも可）と称さ
れる比較的短いポリヌクレオチドも包含する。

【０１３３】「ポリペプチド（複数でも可）」は、ペプ
チド結合または修飾ペプチド結合で互いに結合した２つ
またはそれ以上のアミノ酸を含含むいずれのペプチドま
たは蛋白をもいう。「ポリペプチド（複数でも可）」
は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマー
と称される短い鎖、および一般に蛋白と称される長い鎖
の両方をいう。ポリペプチドは、遺伝子によりコードさ
れている２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含有しても
よい。「ポリペプチド（複数でも可）」は、プロセッシ
ングおよび他の翻訳後の修飾のごとき自然の工程、また
は化学修飾技法のいずれかによって修飾されたものを有
する。かかる修飾は、基本テキストにて、およびより詳
細な研究論文にて、ならびに膨大な研究文献にて詳しく
記載されており、それらは当業者に周知である。同じ型
の修飾が、所定のポリペプチド中、いくつかの部位で、
同じまたは異なる程度にて存在してもよいことは明らか
であろう。また、所定のペプチドは多くの型の修飾を有
していてもよい。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含め、ポリペプチ
ドのどこででも起こりうる。修飾は、例えば、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、
交差結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、
共有交差結合の形成、シスチンの形成、ピログルタメー
トの形成、ホルミル化、ガンマーカルボキシル化、糖鎖
形成、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白分解的プロ
セッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、糖鎖形
成、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマーカ
ルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル
化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごとき転移
ＲＮＡにより媒介される蛋白へのアミノ酸付加、および
ユビキチネーションを包含する。例えば、PROTEINS−ST
RUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 第２版，Ｔ.Ｅ.Ｃ
reighton，Ｗ.Ｈ.Ｆreeman and Ｃompany，New York（1
993）およびＷold,Ｆ.，POSTTRANSLATIONAL COVALENT M
ODIFICATION OF PROTEINS，Posttranslational Protein
Modifications：Perspectives and Prospects,pgs. 1
−12，B.C.Johnson編，Academic Press，New York（198
3）；Seifterら,Meth Enzymol.（1990）182：626−64
6、およびRattanら, Protein Synthesis：Posttranslat
ional Modifications and Aging，Ann N.Y. Acad Sci
（1992）663：48-62を参照のこと。ポリペプチドは、分
枝してもよく、分枝を伴ったまたは伴わない環状であっ
てもよい。環状、分枝および分枝環状ポリペプチドは、
翻訳後の天然のプロセッシングの結果であり、同様に全
く合成的な方法で合成できる。

【０１３４】「組み換え発現系（複数でも可）」は、本
発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造のため
に宿主細胞または宿主細胞溶解物中に導入または形質転
換された発現系またはその部分または本発明ポリヌクレ
オチドをいう。

【０１３５】「引き算セット（subtraction set）」
は、本発明の少なくとも１のポリヌクレオチドを含む１
種またはそれ以上、しかし好ましくは１００種未満のポ
リヌクレオチドである。

【０１３６】本明細書中で使用される「変種（複数でも
可）」なる語は、各々、対照標準のポリヌクレオチドま
たはポリペプチドと異なるが、本質的な特性を保持して
いるポリヌクレオチドまたはポリペプチドである。ポリ
ヌクレオチドの典型的な変種は、別の対照標準のポリヌ
クレオチドとヌクレオチド配列において異なっている。
変種のヌクレオチド配列における変化は、対照標準のポ
リヌクレオチドによってコードされたポリペプチドのア
ミノ酸配列と変わっていてもよいし、または変わってい
なくてもよい。ヌクレオチドの変化は、後述するよう
に、対照標準の配列によってコードされたポリペプチド
において、アミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断
をもたらしうる。ポリペプチドの典型的な変種は、別の
対照標準のポリペプチドとはアミノ酸配列において異な
っている。一般に、差異は、対照標準のポリペプチドと
その変種の配列が全体的に非常に類似しており、多くの
領域においては同一であるように限定される。変種およ
び対照標準のポリペプチドは、一またはそれ以上の置
換、付加、欠失のいずれかの組み合わせによって、アミ
ノ酸配列において異なってもよい。置換または挿入され
たアミノ酸残基は、遺伝コードによってコードされたも
のであってもなくてもよい。また本発明は、本発明の各
ポリペプチドの変種、すなわち保存的アミノ酸置換によ
り対照標準とは異なっており、そのことにより残基が同
様の特性を有する別の残基に置換されているものを包含
する。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ
およびＩｌｅ間；ＳｅｒおよびＴｈｒ間；酸性残基Ａｓ
ｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；塩基性残基
ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基Ｐｈｅおよ
びＴｙｒ間のものである。数個、５〜１０個、１〜５
個、１〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸がいずれ
かの組み合わせで置換、欠失、または付加されている変
種が特に好ましい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチ
ドの変種は、対立遺伝子変種のような天然に存在するも
のであってもよく、または天然に存在することが知られ
ていない変種であってもよい。ポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの天然に存在しない変種は、変異誘発法ま
たは直接合成あるいは当業者に公知の他の組換え法によ
って作られてもよい。

【０１３７】

【実施例】以下の実施例は、別に詳細に記載したこと以
外は、当業者に周知で慣用的な標準的な技法を用いて実
施する。実施例は例示であって、本発明を限定するもの
ではない。 実施例１ 株の選択、ライブラリーの製造および配列
決定 表１（配列番号：１）に示すＤＮＡ配列を有するポリヌ
クレオチドは、エシェリシア・コリ中のストレプトコッ
カス・ニューモニアエの染色体ＤＮＡのクローンライブ
ラリーより得た。重複するストレプトコッカス・ニュー
モニアエＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のクロー
ンからの配列データを用いて、配列番号１の連続したＤ
ＮＡ配列を構築した。ライブラリーは常套手段、例えば
以下の方法１および２により製造してもよい。全細胞Ｄ
ＮＡをストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９
９３より、標準法に従って単離し、以下に示す二つの方
法のいずれかによりサイズ分画する。

【０１３８】方法１ 標準的方法に従ってサイズ分画するために、全細胞ＤＮ
Ａをニードル（needle）に通して機械的に剪断する。１
１ｋｂｐまでの大きさのＤＮＡフラグメントをエキソヌ
クレアーゼおよびＤＮＡポリメラーゼで処理することに
よって末端切断し、ＥｃｏＲＩリンカーを付加する。フ
ラグメントを、ＥｃｏＲＩで切断したベクター、ラムダ
ＺａｐＩＩに連結し、標準的方法によりライブラリーを
パッケージングし、次いでパッケージングしたライブラ
リーでエシェリシア・コリを感染させる。ライブラリー
を標準方法により増幅する。

【０１３９】方法２ 全細胞ＤＮＡをライブラリーベクターにクローニングす
るための一連のフラグメントを得るのに適当な１つの制
限酵素（例えば、ＲｓａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓ
ｈｌ２３５Ｉ）またはその組み合わせで部分的に加水分
解し、かかるフラグメントを標準的方法に従ってサイズ
分画する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡに連結し、次い
でそのフラグメントをＥｃｏＲＩで切断したベクター、
ラムダＺａｐＩＩに連結し、標準的方法によりライブラ
リーをパッケージングし、パッケージングしたライブラ
リーでエシェリシア・コリを感染させる。ライブラリー
を標準方法により増幅する。

【０１４０】

【配列表】

<110> SMithKline Beecham Corporation <120> dnaG <130> GM10111 <150> 60/070,912 <151> 1997-10-21 <160> 4 <170> FastSEQ for Windows Version 3.0

【０１４１】<210> 1 <211> 2748 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <220> <221> CDS <222> (520)...(2292) <400> 1 tctcctgatt gccaagtttc gtggtgaaaa gcgtggacta tttccgagac gtctggctag 60 ctataaggat aagtttcagg cgaccattga aaaagtggga aacggtcttg agaaacactt 120 gaatacaccg attgagttct tatctggtgg acaaagacag gctttgagtc tcttgatggc 180 aaccttgaag cgacctgaat tactcttgtt agacgagcat actgctgccc tggatccaaa 240 gactagtgtt gctttgatgg aattgacaga tgaatttgtt aagaaagatc aattgacagc 300 ccttatgatt acccatcata tggaagatgc tctcaaatat ggcaatcgct tgattgtcat 360 gaaagaagga cgggttatcc aagatttgaa acaagaagaa aaagcaaaaa tgaaaatctc 420 tgattattat caactctttg aataaagtag ggaaaatgag tgaaatggtt tacttttttt 480 ctgaaataaa gtatactata taaagtaaac tatgataac atg gag gta ttg tgt 534 Met Glu Val Leu Cys 1 5 atg gtt gac aaa caa gtc att gaa gaa atc aaa aac aat gcc aac att 582 Met Val Asp Lys Gln Val Ile Glu Glu Ile Lys Asn Asn Ala Asn Ile 10 15 20 gtg gaa gtc ata gga gat gtg att tct tta caa aag gca gga cgg aac 630 Val Glu Val Ile Gly Asp Val Ile Ser Leu Gln Lys Ala Gly Arg Asn 25 30 35 tat cta ggg ctc tgt cct ttt cat ggt gaa aaa aca cct tct ttc agc 678 Tyr Leu Gly Leu Cys Pro Phe His Gly Glu Lys Thr Pro Ser Phe Ser 40 45 50 gtt gta gag gac aag cag ttt tac cac tgt ttt ggt tgt ggt cgc tca 726 Val Val Glu Asp Lys Gln Phe Tyr His Cys Phe Gly Cys Gly Arg Ser 55 60 65 ggt gat gtc ttt aaa ttc atc gag gag tac caa ggg gtt acc ttt atg 774 Gly Asp Val Phe Lys Phe Ile Glu Glu Tyr Gln Gly Val Thr Phe Met 70 75 80 85 gag gct gtc caa atc tta ggt cag cgt gtc ggg att gag gtt gaa aaa 822 Glu Ala Val Gln Ile Leu Gly Gln Arg Val Gly Ile Glu Val Glu Lys 90 95 100 ccg ctt tat agt gaa cag aag cca gcc tcg cct cac caa gct ctt tat 870 Pro Leu Tyr Ser Glu Gln Lys Pro Ala Ser Pro His Gln Ala Leu Tyr 105 110 115 gat atg cac gaa gat gcg gct aaa ttt tac cat gct att ctc atg aca 918 Asp Met His Glu Asp Ala Ala Lys Phe Tyr His Ala Ile Leu Met Thr 120 125 130 acg act atg ggc gaa gag gcc aga aat tac ctt tat cag cgg ggt ttg 966 Thr Thr Met Gly Glu Glu Ala Arg Asn Tyr Leu Tyr Gln Arg Gly Leu 135 140 145 aca gat gaa gtg ctt aaa cat ttt tgg att ggt tta gca cct cca gaa 1014 Thr Asp Glu Val Leu Lys His Phe Trp Ile Gly Leu Ala Pro Pro Glu 150 155 160 165 cga aac tat ctc tat caa cgt ttg tct gat cag tat cgt gaa gag gat 1062 Arg Asn Tyr Leu Tyr Gln Arg Leu Ser Asp Gln Tyr Arg Glu Glu Asp 170 175 180 tta ctg gat tca ggc ctg ttt tat ctt tcg gat gcc aat caa ttt gta 1110 Leu Leu Asp Ser Gly Leu Phe Tyr Leu Ser Asp Ala Asn Gln Phe Val 185 190 195 gac acc ttt cac aat cgc att atg ttt ccc ctg aca aat gac caa gga 1158 Asp Thr Phe His Asn Arg Ile Met Phe Pro Leu Thr Asn Asp Gln Gly 200 205 210 aag gtc att gcc ttc tca ggt cgt atc tgg caa aaa acg gat tca caa 1206 Lys Val Ile Ala Phe Ser Gly Arg Ile Trp Gln Lys Thr Asp Ser Gln 215 220 225 act tct aag tat aaa aac agc cga tcg act gta att ttt aac aaa agt 1254 Thr Ser Lys Tyr Lys Asn Ser Arg Ser Thr Val Ile Phe Asn Lys Ser 230 235 240 245 tac gaa tta tat cat atg gat agg gca aaa aga tct tct gga aaa gct 1302 Tyr Glu Leu Tyr His Met Asp Arg Ala Lys Arg Ser Ser Gly Lys Ala 250 255 260 agt gag att tac ctg atg gaa gga ttc atg gat gtt att gca gcc tat 1350 Ser Glu Ile Tyr Leu Met Glu Gly Phe Met Asp Val Ile Ala Ala Tyr 265 270 275 cgg gct gga atc gaa aat gct gtg gcg tcg atg gga acg gcc ttg agt 1398 Arg Ala Gly Ile Glu Asn Ala Val Ala Ser Met Gly Thr Ala Leu Ser 280 285 290 cga gag cat gtt gag cat ctg aaa agg tta acc aag aaa ttg gtt ctt 1446 Arg Glu His Val Glu His Leu Lys Arg Leu Thr Lys Lys Leu Val Leu 295 300 305 gtt tac gat gga gat aag gct ggg caa gcc gcg aca ttg aaa gca ttg 1494 Val Tyr Asp Gly Asp Lys Ala Gly Gln Ala Ala Thr Leu Lys Ala Leu 310 315 320 325 gat gaa att ggt gat atg cct gtg caa atc gtc agc atg cct gat aac 1542 Asp Glu Ile Gly Asp Met Pro Val Gln Ile Val Ser Met Pro Asp Asn 330 335 340 ttg gat cct gat gaa tat cta caa aaa aat ggt cca gaa gac ttg gcc 1590 Leu Asp Pro Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Asn Gly Pro Glu Asp Leu Ala 345 350 355 tat cta tta acg aaa act cgt att agt ccg att gag ttc tac att cat 1638 Tyr Leu Leu Thr Lys Thr Arg Ile Ser Pro Ile Glu Phe Tyr Ile His 360 365 370 cag tac aaa cct gaa aac ggt gaa aat ctg cag gct cag att gag ttt 1686 Gln Tyr Lys Pro Glu Asn Gly Glu Asn Leu Gln Ala Gln Ile Glu Phe 375 380 385 ctt gaa aaa ata gct ccc ttg att gtt caa gaa aag tcc atc gct gct 1734 Leu Glu Lys Ile Ala Pro Leu Ile Val Gln Glu Lys Ser Ile Ala Ala 390 395 400 405 caa aac agc tat att cat att tta gct gac agt ctg gcg tcc ttt gat 1782 Gln Asn Ser Tyr Ile His Ile Leu Ala Asp Ser Leu Ala Ser Phe Asp 410 415 420 tat acc cag att gag cag att gtt aat gag agt cgt cag gtg caa agg 1830 Tyr Thr Gln Ile Glu Gln Ile Val Asn Glu Ser Arg Gln Val Gln Arg 425 430 435 cag aat cgc atg gaa aga att tcc aga ccg acg cca atc acc atg cct 1878 Gln Asn Arg Met Glu Arg Ile Ser Arg Pro Thr Pro Ile Thr Met Pro 440 445 450 gtc acc aag cag tta tcg gct att atg agg gca gaa gcc cat cta ctc 1926 Val Thr Lys Gln Leu Ser Ala Ile Met Arg Ala Glu Ala His Leu Leu 455 460 465 tat cgg atg atg gaa tcc cct ctt gtt ttg aac gat tac cgt ttg cga 1974 Tyr Arg Met Met Glu Ser Pro Leu Val Leu Asn Asp Tyr Arg Leu Arg 470 475 480 485 gaa gac ttt gca ttt gct aca cct gaa ttt cag gtc tta cat gac ttg 2022 Glu Asp Phe Ala Phe Ala Thr Pro Glu Phe Gln Val Leu His Asp Leu 490 495 500 ctt ggc cag tat gga aat ctt cct cca gaa gtt tta gca gag cag aca 2070 Leu Gly Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Pro Glu Val Leu Ala Glu Gln Thr 505 510 515 gag gaa gtt gaa aga gct tgg tac caa gtt tta gct cag gat ttg cct 2118 Glu Glu Val Glu Arg Ala Trp Tyr Gln Val Leu Ala Gln Asp Leu Pro 520 525 530 gct gag ata tcg ccg cag gaa ctt agt gaa gta gag atg act cga aac 2166 Ala Glu Ile Ser Pro Gln Glu Leu Ser Glu Val Glu Met Thr Arg Asn 535 540 545 aag gct ctc ttg aat cag gac aat atg aga atc aaa aag aag gtg cag 2214 Lys Ala Leu Leu Asn Gln Asp Asn Met Arg Ile Lys Lys Lys Val Gln 550 555 560 565 gaa gct agc cat gta gga gat aca gat aca gcc cta gaa gaa ttg gaa 2262 Glu Ala Ser His Val Gly Asp Thr Asp Thr Ala Leu Glu Glu Leu Glu 570 575 580 cgt tta att tcc caa aag aga aga atg gag taataatggc aacaaaacaa 2312 Arg Leu Ile Ser Gln Lys Arg Arg Met Glu 585 590 aaagaagtaa caacatttga cgtacaggta gcagaattta tccgtaatca taagcaaaaa 2372 gggacagcaa cagatgatga aatcaatgca agtctggtta ttccttttac cttggacgct 2432 gatgggattg aagatctctt gcaacggatt caggatgcag ggatttctat cacagataac 2492 gaaggaaatc caagtgcgcg tgttcttagc aatgaagaag aaccagaact cagcgatgag 2552 gacttgattg ggtcaacttc tgctaaggtc aatgaccctg tccgtatgta cttgaaagaa 2612 ataggggtcg ttcctctctt gaccaatgaa gaggagaaag agttggcact ggctgttgaa 2672 gctggtgata tcgaagccaa acaacgtctt gcggaagcca atcttcgttt ggttgtttcc 2732 attgccaaac gctatg 2748

【０１４２】<210> 2 <211> 591 <212> PRT <213> Streptococcus pneumoniae <400> 2 Met Glu Val Leu Cys Met Val Asp Lys Gln Val Ile Glu Glu Ile Lys 1 5 10 15 Asn Asn Ala Asn Ile Val Glu Val Ile Gly Asp Val Ile Ser Leu Gln 20 25 30 Lys Ala Gly Arg Asn Tyr Leu Gly Leu Cys Pro Phe His Gly Glu Lys 35 40 45 Thr Pro Ser Phe Ser Val Val Glu Asp Lys Gln Phe Tyr His Cys Phe 50 55 60 Gly Cys Gly Arg Ser Gly Asp Val Phe Lys Phe Ile Glu Glu Tyr Gln 65 70 75 80 Gly Val Thr Phe Met Glu Ala Val Gln Ile Leu Gly Gln Arg Val Gly 85 90 95 Ile Glu Val Glu Lys Pro Leu Tyr Ser Glu Gln Lys Pro Ala Ser Pro 100 105 110 His Gln Ala Leu Tyr Asp Met His Glu Asp Ala Ala Lys Phe Tyr His 115 120 125 Ala Ile Leu Met Thr Thr Thr Met Gly Glu Glu Ala Arg Asn Tyr Leu 130 135 140 Tyr Gln Arg Gly Leu Thr Asp Glu Val Leu Lys His Phe Trp Ile Gly 145 150 155 160 Leu Ala Pro Pro Glu Arg Asn Tyr Leu Tyr Gln Arg Leu Ser Asp Gln 165 170 175 Tyr Arg Glu Glu Asp Leu Leu Asp Ser Gly Leu Phe Tyr Leu Ser Asp 180 185 190 Ala Asn Gln Phe Val Asp Thr Phe His Asn Arg Ile Met Phe Pro Leu 195 200 205 Thr Asn Asp Gln Gly Lys Val Ile Ala Phe Ser Gly Arg Ile Trp Gln 210 215 220 Lys Thr Asp Ser Gln Thr Ser Lys Tyr Lys Asn Ser Arg Ser Thr Val 225 230 235 240 Ile Phe Asn Lys Ser Tyr Glu Leu Tyr His Met Asp Arg Ala Lys Arg 245 250 255 Ser Ser Gly Lys Ala Ser Glu Ile Tyr Leu Met Glu Gly Phe Met Asp 260 265 270 Val Ile Ala Ala Tyr Arg Ala Gly Ile Glu Asn Ala Val Ala Ser Met 275 280 285 Gly Thr Ala Leu Ser Arg Glu His Val Glu His Leu Lys Arg Leu Thr 290 295 300 Lys Lys Leu Val Leu Val Tyr Asp Gly Asp Lys Ala Gly Gln Ala Ala 305 310 315 320 Thr Leu Lys Ala Leu Asp Glu Ile Gly Asp Met Pro Val Gln Ile Val 325 330 335 Ser Met Pro Asp Asn Leu Asp Pro Asp Glu Tyr Leu Gln Lys Asn Gly 340 345 350 Pro Glu Asp Leu Ala Tyr Leu Leu Thr Lys Thr Arg Ile Ser Pro Ile 355 360 365 Glu Phe Tyr Ile His Gln Tyr Lys Pro Glu Asn Gly Glu Asn Leu Gln 370 375 380 Ala Gln Ile Glu Phe Leu Glu Lys Ile Ala Pro Leu Ile Val Gln Glu 385 390 395 400 Lys Ser Ile Ala Ala Gln Asn Ser Tyr Ile His Ile Leu Ala Asp Ser 405 410 415 Leu Ala Ser Phe Asp Tyr Thr Gln Ile Glu Gln Ile Val Asn Glu Ser 420 425 430 Arg Gln Val Gln Arg Gln Asn Arg Met Glu Arg Ile Ser Arg Pro Thr 435 440 445 Pro Ile Thr Met Pro Val Thr Lys Gln Leu Ser Ala Ile Met Arg Ala 450 455 460 Glu Ala His Leu Leu Tyr Arg Met Met Glu Ser Pro Leu Val Leu Asn 465 470 475 480 Asp Tyr Arg Leu Arg Glu Asp Phe Ala Phe Ala Thr Pro Glu Phe Gln 485 490 495 Val Leu His Asp Leu Leu Gly Gln Tyr Gly Asn Leu Pro Pro Glu Val 500 505 510 Leu Ala Glu Gln Thr Glu Glu Val Glu Arg Ala Trp Tyr Gln Val Leu 515 520 525 Ala Gln Asp Leu Pro Ala Glu Ile Ser Pro Gln Glu Leu Ser Glu Val 530 535 540 Glu Met Thr Arg Asn Lys Ala Leu Leu Asn Gln Asp Asn Met Arg Ile 545 550 555 560 Lys Lys Lys Val Gln Glu Ala Ser His Val Gly Asp Thr Asp Thr Ala 565 570 575 Leu Glu Glu Leu Glu Arg Leu Ile Ser Gln Lys Arg Arg Met Glu 580 585 590

【０１４３】<210> 3 <211> 33 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <400> 3 atggaggtat tgtgtatggt tgacaaacaa gtc 33

【０１４４】<210> 4 <211> 33 <212> DNA <213> Streptococcus pneumoniae <400> 4 ttactccatt cttctctttt gggaaattaa acg 33

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/315 Ｃ０７Ｋ 14/315 16/12 16/12 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 デボラ・ディー・ジャワースキー アメリカ合衆国19382ペンシルベニア州ウ エスト・チェスター、スキルズ・ブールバ ード1827番 (72)発明者 ミン・ワン アメリカ合衆国19422ペンシルベニア州ブ ルー・ベル、センテニアル・ドライブ302 番 (72)発明者 リチャード・ロイド・ウォーレン アメリカ合衆国19422ペンシルベニア州ブ ルー・ベル、キャスカート・ロード825番 (72)発明者 アナ・リサ・レノックス アメリカ合衆国18901ペンシルベニア州ド イルズタウン、ペブル・ヒル・ロード482 番

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって配
   列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するアミノ酸配列を含む単離ポリペプチド；（ｉ
   ｉ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む単離ポリペプチ
   ド、または（ｉｉｉ）配列番号：２のアミノ酸配列であ
   る単離ポリペプチド；および（ｖｉ）配列番号：１のポ
   リヌクレオチド配列を含む組み換えポリヌクレオチドに
   よりコードされるポリペプチドからなる群より選択され
   る単離ポリペプチド。
2. 【請求項２】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって配
   列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するポリペプチドをコードしているポリヌクレオチ
   ド配列を含む単離ポリヌクレオチド； （ｉｉ）配列番号：２のポリペプチドをコードしている
   ヌクレオチド配列に対してその全長にわたって少なくと
   も （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオ
   チド； （ｉｉｉ）配列番号：１の全長にわたって配列番号：１
   のヌクレオチド配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチ
   ド； （ｉｖ）配列番号：２のポリペプチドをコードしている
   ヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド； （ｖ）配列番号：１のポリヌクレオチドである単離ポリ
   ヌクレオチド。 （ｖｉ）厳密なハイブリダイゼーション条件下で配列番
   号：１の配列またはそのフラグメントの配列を有する標
   識プローブを用いて適当なライブラリーをスクリーニン
   グすることにより得ることのできる単離ポリヌクレオチ
   ド； （ｖｉｉ）ストレプトコッカス・ニューモニアエ中に含
   まれるｄｎａＧ遺伝子により発現される成熟ポリペプチ
   ドをコードしている単離ポリヌクレオチド；および （ｖｉｉｉ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉ
   ｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）または（ｖｉｉ）の該単離ポリ
   ヌクレオチドに対して相捕的なポリヌクレオチド配列か
   らなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 請求項１のポリペプチドに対して抗原性
   のある、あるいは免疫特異的な抗体。
4. 【請求項４】 個体の治療方法であって、 （ｉ）請求項１のポリペプチドの活性または発現の促進
   を必要とする個体については、 （ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアゴニス
   トを個体に投与すること；または（ｂ）インビボで該ポ
   リペプチドの活性を生じるような形態の、該ポリペプチ
   ドをコードしているポリヌクレオチド配列を含む単離ポ
   リヌクレオチドを個体に提供することを含み、あるいは
   （ｉｉ）請求項１のポリペプチドの活性または発現の阻
   害を必要とする個体については、 （ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアンタゴ
   ニストを個体に投与すること；または（ｂ）該ポリペプ
   チドをコードしているポリヌクレオチド配列の発現を阻
   害する核酸分子を個体に投与すること；または（ｃ）リ
   ガンド、基質、または受容体を求めて該ポリペプチドと
   競争する治療上有効量のポリペプチドを個体に投与する
   ことを含む、の治療方法。
5. 【請求項５】 個体における請求項１のポリペプチドの
   発現または活性に関連した、個体における疾病またはか
   かる疾病に対する感受性の診断または予後の方法であっ
   て、下記工程： （ａ）該個体のゲノム中の該ポリペプチドをコードして
   いるヌクレオチド配列における変異の存在または不存在
   を決定すること；または（ｂ）該個体由来の試料中の該
   ポリペプチドの発現の存在または量を分析することを含
   む方法。
6. 【請求項６】 請求項１のポリペプチドの機能を活性化
   または阻害する化合物を同定するためのスクリーニング
   方法であって、 （ａ）候補化合物に直接または間接的に結合した標識を
   用いてポリペプチドまたはポリペプチドを有する細胞も
   しくは膜またはその融合蛋白への候補化合物の結合を測
   定すること； （ｂ）標識競争物質の存在下でポリペプチドまたはポリ
   ペプチドを有する細胞もしくは膜またはその融合蛋白へ
   の候補化合物の結合を測定すること； （ｃ）ポリペプチドを有する細胞もしくは細胞膜に適す
   る検出系を用いて、候補化合物がポリペプチドの活性化
   または阻害により発生するシグナルを生じさせるかどう
   かを試験すること； （ｄ）候補化合物と、請求項１のポリペプチドを含有す
   る溶液とを混合して混合物を作成し、混合物中のポリペ
   プチドの活性を測定し、次いで、混合物の活性を標準と
   比較すること； （ｅ）例えばＥＬＩＳＡアッセイを用いて細胞中で該ポ
   リペプチドをコードしているｍＲＮＡおよび該ポリペプ
   チドの生成に対する候補化合物の影響を検出すること、
   あるいは （ｆ）（１）化合物の相互作用を評価するために、化合
   物とポリペプチドとの間の相互作用を可能にする条件下
   でポリペプチドを含む組成物をスクリーニングすべき化
   合物と接触させ（かかる相互作用は、化合物とポリペプ
   チドとの相互作用に応答した検出可能シグナルを生じる
   ことのできる第２の成分に関連したものである）；次い
   で（２）化合物とポリペプチドとの相互作用から生じる
   シグナルの存在または不存在を検出することにより、化
   合物がポリペプチドと相互作用し、その活性を活性化ま
   たは阻害するかどうかを決定することからなる群から選
   択される方法を含む方法。
7. 【請求項７】 請求項１のポリペプチドの活性または発
   現についてのアゴニストまたはアンタゴニスト。
8. 【請求項８】 適合する宿主中に存在する場合に、請求
   項１のポリペプチドを生成する能力のあるポリヌクレオ
   チドを含む発現系。
9. 【請求項９】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって配
   列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有する群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリ
   ペプチド；（ｉｉ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む
   単離ポリペプチド、または（ｉｉｉ）配列番号：２のア
   ミノ酸配列である単離ポリペプチド；および（ｖｉ）配
   列番号：１のポリヌクレオチド配列を含む組み換えポリ
   ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドからなる
   群より選択されるポリペプチドを発現する、請求項８の
   発現系を含む宿主細胞またはその膜。
10. 【請求項１０】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって
    配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有する群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリ
    ペプチド；（ｉｉ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む
    単離ポリペプチド、または（ｉｉｉ）配列番号：２のア
    ミノ酸配列である単離ポリペプチド；および（ｖｉ）配
    列番号：１のポリヌクレオチド配列を含む組み換えポリ
    ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドからなる
    群より選択されるポリペプチドの製造方法であって、該
    ポリペプチドの生成に十分な条件下で請求項９の宿主細
    胞を培養することを含む方法。
11. 【請求項１１】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって
    配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有する群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリ
    ペプチド；（ｉｉ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む
    単離ポリペプチド、または（ｉｉｉ）配列番号：２のア
    ミノ酸配列である単離ポリペプチド；および（ｖｉ）配
    列番号：１のポリヌクレオチド配列を含む組み換えポリ
    ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドからなる
    群より選択されるポリペプチドを発現する、請求項８の
    発現系を含む宿主細胞またはその膜の製造方法であっ
    て、適合宿主中に存在する場合に上記ポリペプチド
    （ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）を生成可
    能なポリヌクレオチドを含む発現系で細胞を形質転換ま
    たはトランスフェクションして、適当な培養条件下で宿
    主細胞が上記ポリペプチド（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉ
    ｉ）または（ｉｖ）を生成するようにすることを含む方
    法。
12. 【請求項１２】 （ｉ）配列番号：２の全長にわたって
    配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも （ａ）７０％の同一性； （ｂ）８０％の同一性； （ｃ）９０％の同一性；または （ｄ）９５％の同一性 を有する群から選択されるアミノ酸配列を含む単離ポリ
    ペプチド；（ｉｉ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む
    単離ポリペプチド、または（ｉｉｉ）配列番号：２のア
    ミノ酸配列である単離ポリペプチド；および（ｖｉ）配
    列番号：１のポリヌクレオチド配列を含む組み換えポリ
    ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドからなる
    群より選択されるポリペプチドを発現する、請求項１１
    の方法により製造される宿主細胞またはその膜。
13. 【請求項１３】 配列番号：１の配列を含むポリヌクレ
    オチド；配列番号：２の配列を含むポリペプチド；少な
    くとも１つの配列が配列番号：１の配列を含むものであ
    るポリヌクレオチド配列のセット；少なくとも１つの配
    列が配列番号：２の配列を含むものであるポリペプチド
    配列のセット；配列番号：１の配列を含むポリヌクレオ
    チド配列を表すデータセット；配列番号：２の配列を含
    むポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチド
    配列を表すデータセット；配列番号：１の配列を含むポ
    リヌクレオチド；配列番号：２の配列を含むポリペプチ
    ド；少なくとも１つの配列が配列番号：１の配列を含む
    ものであるポリヌクレオチド配列のセット；少なくとも
    １つの配列が配列番号：２の配列を含むものであるポリ
    ペプチド配列のセット；配列番号：１の配列を含むポリ
    ヌクレオチド配列を表すデータセット；配列番号：２の
    配列を含むポリペプチド配列をコードしているポリヌク
    レオチド配列を表すデータセットからなる群より選択さ
    れるメンバーを保存したコンピューター読み込み可能媒
    体。
14. 【請求項１４】 相同性の同定を行うためのコンピュー
    ターによる方法であって、配列番号：１の配列を含むポ
    リヌクレオチド配列をコンピューター読み込み可能媒体
    中に提供し、次いで、該ポリヌクレオチド配列を少なく
    とも１つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列と
    比較して相同性を同定する工程を含む方法。
15. 【請求項１５】 ポリクレオチドアッセンブリーのため
    のコンピューターによる方法であって、配列番号：１の
    配列を含む第１のポリヌクレオチド配列をコンピュータ
    ー読み込み可能媒体中に提供し、次いで、該第１のポリ
    ヌクレオチド配列と第２のポリヌクレオチド配列との間
    の少なくとも１つの重複領域をスクリーニングする工程
    を含む方法。