JPH11239487A - Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチド - Google Patents
Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチドInfo
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- JPH11239487A JPH11239487A JP10303037A JP30303798A JPH11239487A JP H11239487 A JPH11239487 A JP H11239487A JP 10303037 A JP10303037 A JP 10303037A JP 30303798 A JP30303798 A JP 30303798A JP H11239487 A JPH11239487 A JP H11239487A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 ＡＮＴ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドの提供。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＡＮ
Ｔ５ポリペプチド、および特定のヌクレオチド配列に対
して少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配
列を含んでなるＡＮＴ５ポリヌクレオチドを得る。 【効果】 ＡＮＴ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドはうっ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡張性ま
たは収縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中を含む機
能障害または疾病の治療と、このような疾病の診断アッ
セイに有用である。
ドの提供。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるＡＮ
Ｔ５ポリペプチド、および特定のヌクレオチド配列に対
して少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配
列を含んでなるＡＮＴ５ポリヌクレオチドを得る。 【効果】 ＡＮＴ５ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドはうっ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡張性ま
たは収縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中を含む機
能障害または疾病の治療と、このような疾病の診断アッ
セイに有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療
の際のまたは治療に有効でありうるアゴニスト、アンタ
ゴニストおよび／またはインヒビターである化合物を同
定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの生産方法に関する。
ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療
の際のまたは治療に有効でありうるアゴニスト、アンタ
ゴニストおよび／またはインヒビターである化合物を同
定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの生産方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】薬物探索プロセスには目下根本的な大変
化が生じている。というのは、それが「機能的ゲノム
学」(functional genomics) 、すなわち高処理量のゲノ
ムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからであ
る。遺伝子または遺伝子産物を治療標的として同定する
ための手段としてのこのアプローチは、「ポジショナル
クローニング」に基づいた比較的初期のアプローチに急
速に取って代わりつつある。表現型、つまり生物学的機
能または遺伝病、が同定され、続いてその遺伝子地図の
位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められるだろ
う。機能的ゲノム学は、高処理量ＤＮＡ配列決定技術、
ならびに現在入手できる多くの分子生物学データベース
から興味のもてそうな遺伝子配列を同定するための生物
情報科学(bioinformatics)の様々なツールに大きく依存
している。
化が生じている。というのは、それが「機能的ゲノム
学」(functional genomics) 、すなわち高処理量のゲノ
ムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからであ
る。遺伝子または遺伝子産物を治療標的として同定する
ための手段としてのこのアプローチは、「ポジショナル
クローニング」に基づいた比較的初期のアプローチに急
速に取って代わりつつある。表現型、つまり生物学的機
能または遺伝病、が同定され、続いてその遺伝子地図の
位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められるだろ
う。機能的ゲノム学は、高処理量ＤＮＡ配列決定技術、
ならびに現在入手できる多くの分子生物学データベース
から興味のもてそうな遺伝子配列を同定するための生物
情報科学(bioinformatics)の様々なツールに大きく依存
している。
【０００３】ＡＤＰ／ＡＴＰトランスロケーター、すな
わちアデニンヌクレオチド・トランスロケーター（aden
ine nucleotide translocator：ＡＮＴ）、は最も豊富
に存在するミトコンドリアタンパク質である。ＡＮＴ
は、その機能状態において、ミトコンドリア内膜に非対
称的に埋め込まれている３０ｋＤサブユニットのホモダ
イマーである。このダイマーはゲートポアを形成し、そ
のゲートポア(gated pore)を通ってＡＴＰはマトリック
スから細胞質へと移動する。これまでに、ＡＮＴ１、Ａ
ＮＴ２およびＡＮＴ３の３つの異なるヒトＡＮＴｃＤＮ
Ａがクローニングされている。
わちアデニンヌクレオチド・トランスロケーター（aden
ine nucleotide translocator：ＡＮＴ）、は最も豊富
に存在するミトコンドリアタンパク質である。ＡＮＴ
は、その機能状態において、ミトコンドリア内膜に非対
称的に埋め込まれている３０ｋＤサブユニットのホモダ
イマーである。このダイマーはゲートポアを形成し、そ
のゲートポア(gated pore)を通ってＡＴＰはマトリック
スから細胞質へと移動する。これまでに、ＡＮＴ１、Ａ
ＮＴ２およびＡＮＴ３の３つの異なるヒトＡＮＴｃＤＮ
Ａがクローニングされている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】依然として、まだ未解
明の遺伝子およびその関連ポリペプチド／タンパク質を
薬物探索の標的として同定し特性づける必要性が存在し
ている。
明の遺伝子およびその関連ポリペプチド／タンパク質を
薬物探索の標的として同定し特性づける必要性が存在し
ている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、ＡＮＴ５、特
にＡＮＴ５ポリペプチドおよびＡＮＴ５ポリヌクレオチ
ド、組換え物質、並びにその生産方法に関する。もう一
つの態様において、本発明は、うっ血性心不全、虚血性
心疾患、不整脈、拡張性または収縮性機能不全、肥大型
心筋症および卒中（以後まとめて「前記疾患」という）
の治療をはじめとする、前記ポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドの使用方法に関する。他の態様では、本発明
は、本発明により提供される物質を用いてアゴニストお
よびアンタゴニスト／インヒビターを同定する方法、並
びに同定された化合物を用いてＡＮＴ５平衡異常と関連
した症状を治療することに関する。さらに他の態様にお
いて、本発明は不適当なＡＮＴ５活性またはＡＮＴ５レ
ベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに関
する。
にＡＮＴ５ポリペプチドおよびＡＮＴ５ポリヌクレオチ
ド、組換え物質、並びにその生産方法に関する。もう一
つの態様において、本発明は、うっ血性心不全、虚血性
心疾患、不整脈、拡張性または収縮性機能不全、肥大型
心筋症および卒中（以後まとめて「前記疾患」という）
の治療をはじめとする、前記ポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドの使用方法に関する。他の態様では、本発明
は、本発明により提供される物質を用いてアゴニストお
よびアンタゴニスト／インヒビターを同定する方法、並
びに同定された化合物を用いてＡＮＴ５平衡異常と関連
した症状を治療することに関する。さらに他の態様にお
いて、本発明は不適当なＡＮＴ５活性またはＡＮＴ５レ
ベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに関
する。
【０００６】一つの態様において、本発明はＡＮＴ５ポ
リペプチドに関する。この種のペプチドには、配列番号
２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％
の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、
さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ま
しくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するアミノ
酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドが含まれ
る。こうしたポリペプチドとしては配列番号２のアミノ
酸配列を含むものがある。
リペプチドに関する。この種のペプチドには、配列番号
２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％
の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、
さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ま
しくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するアミノ
酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドが含まれ
る。こうしたポリペプチドとしては配列番号２のアミノ
酸配列を含むものがある。
【０００７】本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸
配列が配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸
配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少
なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９
０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同
一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性
を有する単離されたポリペプチドが含まれる。こうした
ポリペプチドとしては配列番号２のアミノ酸配列からな
るポリペプチドがある。本発明の更なるペプチドには、
配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペプ
チドが含まれる。
配列が配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸
配列に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少
なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９
０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同
一性、最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性
を有する単離されたポリペプチドが含まれる。こうした
ポリペプチドとしては配列番号２のアミノ酸配列からな
るポリペプチドがある。本発明の更なるペプチドには、
配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペプ
チドが含まれる。
【０００８】本発明のポリペプチドはカルシウム感受性
アデニンヌクレオチド・トランスロケーター・ファミリ
ーのメンバーであると考えられる。それゆえ、それらに
は興味がもてる。なぜなら、心臓の収縮活性が心臓停止
または心室細動により停止すると酸素取込みの約６０〜
７０％が停止し、このことは、酸化的リン酸化による高
エネルギーリン酸産生の大部分が収縮活性に対してのも
のであることを示しているからである。ＡＮＴはミトコ
ンドリアとサイトゾルの間のＡＤＰ／ＡＴＰ流動の速度
を決定するので、ＡＮＴは酸化的エネルギー代謝におけ
る細胞質依存性レギュレーターの論理上の候補である。
筋肉の収縮および弛緩は、細胞質内のエネルギーおよび
カルシウムの両方の流動により直接調節される。重要な
ことは、本発明者らが新規なカルシウム感受性アデニン
ヌクレオチド・トランスリケーターをクローニングした
ことである。この新規なカルシウム感受性アデニンヌク
レオチド・トランスロケーターは、カルシウムによるエ
ネルギー流動を調節する際に役立ち得るので、筋肉の収
縮機能の調節にも役立ち得る。これらの特性を以後「Ａ
ＮＴ５活性」または「ＡＮＴ５ポリペプチド活性」また
は「ＡＮＴ５の生物学的活性」という。これらの活性の
中には、前記ＡＮＴ５ポリペプチドの抗原性および免疫
原性、特に配列番号２のポリペプチドの抗原性および免
疫原性も含まれる。本発明のポリペプチドはＡＮＴ５の
少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。
アデニンヌクレオチド・トランスロケーター・ファミリ
ーのメンバーであると考えられる。それゆえ、それらに
は興味がもてる。なぜなら、心臓の収縮活性が心臓停止
または心室細動により停止すると酸素取込みの約６０〜
７０％が停止し、このことは、酸化的リン酸化による高
エネルギーリン酸産生の大部分が収縮活性に対してのも
のであることを示しているからである。ＡＮＴはミトコ
ンドリアとサイトゾルの間のＡＤＰ／ＡＴＰ流動の速度
を決定するので、ＡＮＴは酸化的エネルギー代謝におけ
る細胞質依存性レギュレーターの論理上の候補である。
筋肉の収縮および弛緩は、細胞質内のエネルギーおよび
カルシウムの両方の流動により直接調節される。重要な
ことは、本発明者らが新規なカルシウム感受性アデニン
ヌクレオチド・トランスリケーターをクローニングした
ことである。この新規なカルシウム感受性アデニンヌク
レオチド・トランスロケーターは、カルシウムによるエ
ネルギー流動を調節する際に役立ち得るので、筋肉の収
縮機能の調節にも役立ち得る。これらの特性を以後「Ａ
ＮＴ５活性」または「ＡＮＴ５ポリペプチド活性」また
は「ＡＮＴ５の生物学的活性」という。これらの活性の
中には、前記ＡＮＴ５ポリペプチドの抗原性および免疫
原性、特に配列番号２のポリペプチドの抗原性および免
疫原性も含まれる。本発明のポリペプチドはＡＮＴ５の
少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。
【０００９】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列な
どがある。
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列な
どがある。
【００１０】また、前記ポリペプチドの変異体、すなわ
ち同類アミノ酸置換（ある残基が性質の似ている他の残
基により置換される）により基準ポリペプチドと相違し
ているポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこう
した置換は、Ala, Val, Leuおよび Ileの間；Ser とThr
の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個、１
〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異体が好適であ
る。
ち同類アミノ酸置換（ある残基が性質の似ている他の残
基により置換される）により基準ポリペプチドと相違し
ているポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこう
した置換は、Ala, Val, Leuおよび Ileの間；Ser とThr
の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個、１
〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異体が好適であ
る。
【００１１】本発明のポリペプチドは任意の適当な方法
で製造することができる。このようなポリペプチドに
は、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産さ
れたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプ
チドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。
で製造することができる。このようなポリペプチドに
は、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産さ
れたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプ
チドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。
【００１２】本発明の更なる態様において、本発明は、
ＡＮＴ５ポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌ
クレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド
が含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性
を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９
８〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、
少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドが最も
好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、
配列番号２のポリペプチドをコードする配列番号１に含
まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド
が挙げられる。
ＡＮＴ５ポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌ
クレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２
のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド
が含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性
を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９
８〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、
少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドが最も
好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、
配列番号２のポリペプチドをコードする配列番号１に含
まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド
が挙げられる。
【００１３】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも７
０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、
より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ま
しくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜
９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少な
くとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最も
好ましいものである。
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも７
０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一性、
より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに好ま
しくは少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜
９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少な
くとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最も
好ましいものである。
【００１４】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号１の全長にわたる配列番号１のポリヌクレオチド
に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なく
とも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％
の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリ
ヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９
７％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましい
が、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものがよ
り一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが最も好ましいものである。かかるポリ
ヌクレオチドとして、配列番号１のポリヌクレオチドを
含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１のポリヌ
クレオチドが挙げられる。本発明はまた、上記の全ての
ポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチドを
提供する。
列番号１の全長にわたる配列番号１のポリヌクレオチド
に対して少なくとも７０％の同一性、好ましくは少なく
とも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％
の同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリ
ヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９
７％の同一性を有するポリヌクレオチドが一層好ましい
が、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものがよ
り一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが最も好ましいものである。かかるポリ
ヌクレオチドとして、配列番号１のポリヌクレオチドを
含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１のポリヌ
クレオチドが挙げられる。本発明はまた、上記の全ての
ポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチドを
提供する。
【００１５】配列番号１のヌクレオチド配列は７ｑ２１
〜ｑ２２に存在するヒトＢＡＣクローンGS025M02との相
同性を示し、この完全配列はWaterston, R. Direct Sub
mission to GenBank. Submitted (12-SEP-1997) Depart
ment of Genetics, Washington University, 4444 Fore
st Park Avenue, St. Louis, Missouri 63108, USAから
入手できる。配列番号１のヌクレオチド配列はｃＤＮＡ
配列であり、６７４個のアミノ酸からなるポリペプチド
（すなわち、配列番号２のポリペプチド）をコードする
ポリペプチドコード配列（ヌクレオチド番号７１〜２０
９５）を含む。配列番号２のポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポリペプチ
ドコード配列と同一であっても、遺伝子コードの重複性
（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコ
ードする、配列番号１に含まれる配列以外の配列であっ
てもよい。
〜ｑ２２に存在するヒトＢＡＣクローンGS025M02との相
同性を示し、この完全配列はWaterston, R. Direct Sub
mission to GenBank. Submitted (12-SEP-1997) Depart
ment of Genetics, Washington University, 4444 Fore
st Park Avenue, St. Louis, Missouri 63108, USAから
入手できる。配列番号１のヌクレオチド配列はｃＤＮＡ
配列であり、６７４個のアミノ酸からなるポリペプチド
（すなわち、配列番号２のポリペプチド）をコードする
ポリペプチドコード配列（ヌクレオチド番号７１〜２０
９５）を含む。配列番号２のポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポリペプチ
ドコード配列と同一であっても、遺伝子コードの重複性
（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコ
ードする、配列番号１に含まれる配列以外の配列であっ
てもよい。
【００１６】本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドは、とりわけ、それと相同なポリペプチドお
よびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をも
つことが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つのＡＮ
Ｔ５活性を有する。
クレオチドは、とりわけ、それと相同なポリペプチドお
よびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をも
つことが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つのＡＮ
Ｔ５活性を有する。
【００１７】また、本発明は、配列番号１および配列番
号２の対応する全長配列の決定に先立って最初に同定さ
れた部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドに関する。したがって、更なる態様において、本
発明は、(a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌ
クレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性、最も好ましくは９７〜９９％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチ
ド、(b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチド、(c) 配列番号３のヌクレオチド配列か
らなるポリヌクレオチド、または(d) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポ
リペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる
ポリヌクレオチド、を提供する。
号２の対応する全長配列の決定に先立って最初に同定さ
れた部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドに関する。したがって、更なる態様において、本
発明は、(a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌ
クレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性、好
ましくは少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少
なくとも９０％の同一性、さらに好ましくは少なくとも
９５％の同一性、最も好ましくは９７〜９９％の同一性
を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチ
ド、(b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポ
リヌクレオチド、(c) 配列番号３のヌクレオチド配列か
らなるポリヌクレオチド、または(d) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポ
リペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる
ポリヌクレオチド、を提供する。
【００１８】さらに、本発明は、(a) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでな
るポリペプチド、(b) 配列番号４のアミノ酸配列を含ん
でなるポリペプチド、(c) 配列番号４のアミノ酸配列か
らなるポリペプチド、または(d)配列番号３に含まれる
ヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチド、を提供する。
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性、好ましくは少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらに
好ましくは少なくとも９５％の同一性、最も好ましくは
９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでな
るポリペプチド、(b) 配列番号４のアミノ酸配列を含ん
でなるポリペプチド、(c) 配列番号４のアミノ酸配列か
らなるポリペプチド、または(d)配列番号３に含まれる
ヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドにより
コードされるポリペプチド、を提供する。
【００１９】配列番号３のヌクレオチド配列およびそれ
によりコードされるペプチド配列はエクスプレスド・シ
ーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配
列から誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若
干のヌクレオチド配列読み取り誤差が必然的に存在する
ことを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 377
(supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号
３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペ
プチド配列は配列精度において同一の固有限界を受け
る。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド配
列は、相同性または構造類似性が最も高いタンパク質と
同一の領域、または相同性および／または構造類似性
（例えば、同類アミノ酸の差異）が高い領域を含んでい
る。
によりコードされるペプチド配列はエクスプレスド・シ
ーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配
列から誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若
干のヌクレオチド配列読み取り誤差が必然的に存在する
ことを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 377
(supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号
３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペ
プチド配列は配列精度において同一の固有限界を受け
る。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド配
列は、相同性または構造類似性が最も高いタンパク質と
同一の領域、または相同性および／または構造類似性
（例えば、同類アミノ酸の差異）が高い領域を含んでい
る。
【００２０】本発明のポリヌクレオチドは、標準的なク
ローニングおよびスクリーニング技術により、ヒトの心
臓、脳、子宮、乳腺、肺、前立腺、腎臓、気管、胃、肝
臓、胎盤、精巣、小腸、脊髄、卵巣、脾臓、膵臓、胸
腺、大動脈、白血球、骨格筋、副腎、脂肪、リンパ節、
結腸、甲状腺、骨髄、膀胱、唾液腺および虫垂の細胞中
のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、
ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, Science (1991) 252:1651
-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 355:632-634; A
dams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174）を用い
て得ることができる。また、本発明のポリヌクレオチド
はゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得るこ
とができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成
することもできる。
ローニングおよびスクリーニング技術により、ヒトの心
臓、脳、子宮、乳腺、肺、前立腺、腎臓、気管、胃、肝
臓、胎盤、精巣、小腸、脊髄、卵巣、脾臓、膵臓、胸
腺、大動脈、白血球、骨格筋、副腎、脂肪、リンパ節、
結腸、甲状腺、骨髄、膀胱、唾液腺および虫垂の細胞中
のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、
ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, Science (1991) 252:1651
-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 355:632-634; A
dams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174）を用い
て得ることができる。また、本発明のポリヌクレオチド
はゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得るこ
とができ、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成
することもできる。
【００２１】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、
または他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌
配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク質配
列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの）と
同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドの
コード配列が含まれる。例えば、融合ポリペプチドの精
製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。本発明
のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、
ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gen
tzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86:821-824
に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、ま
たはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチドは5'
および3'非コード配列、例えば、転写されるが翻訳され
ない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を
含んでいてもよい。
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、
または他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌
配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク質配
列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの）と
同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドの
コード配列が含まれる。例えば、融合ポリペプチドの精
製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。本発明
のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、
ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gen
tzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86:821-824
に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、ま
たはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチドは5'
および3'非コード配列、例えば、転写されるが翻訳され
ない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を
含んでいてもよい。
【００２２】本発明の更なる具体例としては、数個、例
えば５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、また
は１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチド
がある。
えば５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、また
は１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチド
がある。
【００２３】配列番号１に含まれるヌクレオチド配列と
同一であるか実質的に同一であるポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよび
ゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１に
対して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒト源由来
のパラログ体(paralog)ならびにヒト以外の種に由来す
るオーソログ体(ortholog)およびパラログ体をコードす
る遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単
離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブ
リダイゼーションプローブとして、または核酸増幅（Ｐ
ＣＲ）反応用のプライマーとして用いることができる。
一般的に、これらのヌクレオチド配列は基準のヌクレオ
チド配列と好ましくは８０％、より好ましくは９０％、
最も好ましくは９５％同一である。プローブまたはプラ
イマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好
ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチド
を有していてもよい。特に好ましいプローブは３０〜５
０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。特に好
ましいプライマーは２０〜２５個の範囲のヌクレオチド
を有するものである。
同一であるか実質的に同一であるポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよび
ゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１に
対して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒト源由来
のパラログ体(paralog)ならびにヒト以外の種に由来す
るオーソログ体(ortholog)およびパラログ体をコードす
る遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単
離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブ
リダイゼーションプローブとして、または核酸増幅（Ｐ
ＣＲ）反応用のプライマーとして用いることができる。
一般的に、これらのヌクレオチド配列は基準のヌクレオ
チド配列と好ましくは８０％、より好ましくは９０％、
最も好ましくは９５％同一である。プローブまたはプラ
イマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好
ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチド
を有していてもよい。特に好ましいプローブは３０〜５
０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。特に好
ましいプライマーは２０〜２５個の範囲のヌクレオチド
を有するものである。
【００２４】本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由
来する相同体およびオーソログ体を含む）をコードする
ポリヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド配列ま
たはその断片を有する標識プローブを用いて、ストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライ
ブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配列
を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各
工程を含んでなる方法により得られる。このようなハイ
ブリダイゼーション技法は当業者に公知である。好まし
いストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、
50% ホルムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン
酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５
×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/ml
の変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２
℃で一夜インキュベートし、次いでフィルターを 0.1×
SSC 中約６５℃で洗浄することを含む。かくして、本発
明は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を
有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスク
リーニングすることにより得られるポリヌクレオチドを
も包含する。
来する相同体およびオーソログ体を含む）をコードする
ポリヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド配列ま
たはその断片を有する標識プローブを用いて、ストリン
ジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当なライ
ブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配列
を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各
工程を含んでなる方法により得られる。このようなハイ
ブリダイゼーション技法は当業者に公知である。好まし
いストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、
50% ホルムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン
酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５
×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/ml
の変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２
℃で一夜インキュベートし、次いでフィルターを 0.1×
SSC 中約６５℃で洗浄することを含む。かくして、本発
明は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を
有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスク
リーニングすることにより得られるポリヌクレオチドを
も包含する。
【００２５】当業者には理解されるように、多くの場
合、ポリペプチドをコードする領域がそのｃＤＮＡの5'
末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配
列は不完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであ
り、この酵素はもともと「プロセシビティ」（processi
vity：重合中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の能力
の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳
型のＤＮＡコピーを完成させることができない。
合、ポリペプチドをコードする領域がそのｃＤＮＡの5'
末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配
列は不完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであ
り、この酵素はもともと「プロセシビティ」（processi
vity：重合中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の能力
の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳
型のＤＮＡコピーを完成させることができない。
【００２６】全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃ
ＤＮＡを伸長させるための、当業者に公知で利用可能な
方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法
（ＲＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohman
ら, PNAS USA 85, 8998-9002,1988を参照のこと）。例
えばMarathonTM技術(Clontech Laboratories Inc.)によ
り示されるような、上記技法の最近の改良により、より
長いｃＤＮＡの検索が大いに簡便化された。MarathonTM
技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡからｃＤ
ＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結す
る。続いて、遺伝子特異的およびアダプター特異的なオ
リゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて核酸増幅
（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅す
る。次に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物の
内部にアニールするように設計されたプライマー（典型
的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするア
ダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさら
に5'側にアニールする遺伝子特異的プライマー）を用い
てＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物をＤ
ＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤ
ＮＡに直接結合するか、または5'プライマー設計用の新
たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うことによ
り、全長ｃＤＮＡを構築することができる。
ＤＮＡを伸長させるための、当業者に公知で利用可能な
方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法
（ＲＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohman
ら, PNAS USA 85, 8998-9002,1988を参照のこと）。例
えばMarathonTM技術(Clontech Laboratories Inc.)によ
り示されるような、上記技法の最近の改良により、より
長いｃＤＮＡの検索が大いに簡便化された。MarathonTM
技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡからｃＤ
ＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結す
る。続いて、遺伝子特異的およびアダプター特異的なオ
リゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて核酸増幅
（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅す
る。次に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物の
内部にアニールするように設計されたプライマー（典型
的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするア
ダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさら
に5'側にアニールする遺伝子特異的プライマー）を用い
てＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物をＤ
ＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤ
ＮＡに直接結合するか、または5'プライマー設計用の新
たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うことによ
り、全長ｃＤＮＡを構築することができる。
【００２７】本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界
で公知の方法を用いて、発現系を含有する遺伝子操作宿
主細胞から生産することができる。したがって、更なる
態様において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレ
オチドを含有する発現系、該発現系により遺伝子操作さ
れた宿主細胞、および組換え技法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導さ
れたＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するため
に、無細胞翻訳系を使用することもできる。
で公知の方法を用いて、発現系を含有する遺伝子操作宿
主細胞から生産することができる。したがって、更なる
態様において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレ
オチドを含有する発現系、該発現系により遺伝子操作さ
れた宿主細胞、および組換え技法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導さ
れたＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するため
に、無細胞翻訳系を使用することもできる。
【００２８】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み込むために宿
主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチ
ドの導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Bi
ology (1986) および Sambrookら, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)
などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方
法により行うことができる。好適なこうした方法とし
て、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション(transvection)、マイクロインジェク
ション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エ
レクトロポレーション、形質導入、スクレープローディ
ング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic introduct
ion)または感染などがある。
クレオチドの発現系またはその一部を組み込むために宿
主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチ
ドの導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Bi
ology (1986) および Sambrookら, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)
などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方
法により行うことができる。好適なこうした方法とし
て、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション(transvection)、マイクロインジェク
ション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エ
レクトロポレーション、形質導入、スクレープローディ
ング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic introduct
ion)または感染などがある。
【００２９】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。
【００３０】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入因子由来、酵母染色体要素由
来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよう
なパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイル
ス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来する
ベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプ
ラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来する
ものがある。これらの発現系は発現を起こさせるだけで
なく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般
的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌク
レオチドを維持し、増やし、発現することができる系ま
たはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecu
lar Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載され
るような、日常的に用いられる公知の技法のいずれかに
より、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入すること
ができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細
胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、
適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むこ
とができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに
対して内因性であっても、異種シグナルであってもよ
い。
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入因子由来、酵母染色体要素由
来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよう
なパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイル
ス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来する
ベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプ
ラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来する
ものがある。これらの発現系は発現を起こさせるだけで
なく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般
的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌク
レオチドを維持し、増やし、発現することができる系ま
たはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecu
lar Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載され
るような、日常的に用いられる公知の技法のいずれかに
より、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入すること
ができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細
胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、
適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むこ
とができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに
対して内因性であっても、異種シグナルであってもよ
い。
【００３１】スクリーニングアッセイで使用するため本
発明のポリペプチドを発現させようとする場合、一般に
そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適
である。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用
に先立って細胞を回収する。該ポリペプチドが培地に分
泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するた
めに培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その
細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必
要がある。
発明のポリペプチドを発現させようとする場合、一般に
そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適
である。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用
に先立って細胞を回収する。該ポリペプチドが培地に分
泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するた
めに培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その
細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必
要がある。
【００３２】組換え細胞培養物から本発明のポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポ
リペプチドが単離および／または精製中に変性されると
きは、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポ
リペプチドが単離および／または精製中に変性されると
きは、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。
【００３３】本発明はまた、診断薬としての本発明のポ
リヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連した、
配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺
伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現
または変化した発現により生ずる疾病またはその疾病へ
の罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を下
しうる診断用ツールを提供するだろう。該遺伝子に突然
変異がある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベル
で見つけ出すことができる。
リヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連した、
配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺
伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現
または変化した発現により生ずる疾病またはその疾病へ
の罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を下
しうる診断用ツールを提供するだろう。該遺伝子に突然
変異がある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベル
で見つけ出すことができる。
【００３４】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料由来の細胞か
ら得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接
使用してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を
使ってゲノムＤＮＡを酵素的に増幅してもよい。同様の
方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。
欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較した
ときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突
然変異は増幅ＤＮＡを標識ＡＮＴ５ヌクレオチド配列と
ハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチ
した配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差異により区別できる。また、Ｄ
ＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲル
でのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、また
は直接ＤＮＡ塩基配列決定によっても検出できる（例え
ば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこ
と）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクシ
ョンアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテク
ション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-
4401を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝
子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、ＡＮＴ
５ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレ
オチドプローブのアレイ(array)を構築することができ
る。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、
遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分
子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられ
ている（例えば、M. Cheeら, Science, Vol.274, pp.61
0-613 (1996) を参照のこと）。
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料由来の細胞か
ら得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接
使用してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を
使ってゲノムＤＮＡを酵素的に増幅してもよい。同様の
方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。
欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較した
ときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突
然変異は増幅ＤＮＡを標識ＡＮＴ５ヌクレオチド配列と
ハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチ
した配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化によ
り、または融解温度の差異により区別できる。また、Ｄ
ＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲル
でのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、また
は直接ＤＮＡ塩基配列決定によっても検出できる（例え
ば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこ
と）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクシ
ョンアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテク
ション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-
4401を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝
子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、ＡＮＴ
５ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレ
オチドプローブのアレイ(array)を構築することができ
る。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、
遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分
子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられ
ている（例えば、M. Cheeら, Science, Vol.274, pp.61
0-613 (1996) を参照のこと）。
【００３５】診断アッセイは、前記の方法によりＡＮＴ
５遺伝子の変異を検出することで、前記疾患への罹りや
すさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被
験者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲ
ＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する方法に
より、前記疾患の診断を下すことができる。発現の低下
または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量
法、例えば核酸増幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、Ｒ
Ｎアーゼプロテクション、ノーザンブロッティング、そ
の他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮ
Ａレベルで測定することができる。宿主から得られたサ
ンプル中の本発明ポリペプチドのようなタンパク質のレ
ベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られてい
る。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセ
イ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬ
ＩＳＡアッセイなどがある。
５遺伝子の変異を検出することで、前記疾患への罹りや
すさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被
験者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲ
ＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する方法に
より、前記疾患の診断を下すことができる。発現の低下
または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量
法、例えば核酸増幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、Ｒ
Ｎアーゼプロテクション、ノーザンブロッティング、そ
の他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮ
Ａレベルで測定することができる。宿主から得られたサ
ンプル中の本発明ポリペプチドのようなタンパク質のレ
ベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られてい
る。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセ
イ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬ
ＩＳＡアッセイなどがある。
【００３６】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、(a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配
列番号１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b)
(a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、
(c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）もしくはその断片、または(d) 本発明の
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関す
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。
かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特にう
っ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡張性または収
縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中を診断するうえ
で有用である。
明は、(a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配
列番号１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b)
(a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、
(c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）もしくはその断片、または(d) 本発明の
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関す
る。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) また
は (d)が実質的な構成成分であることが理解されよう。
かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特にう
っ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡張性または収
縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中を診断するうえ
で有用である。
【００３７】また、本発明のヌクレオチド配列は染色体
の同定にも有用である。この配列は個々のヒト染色体上
の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置とハ
イブリダイズすることができる。本発明に従って関連配
列の染色体地図を作成することは、これらの配列と遺伝
子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階であ
る。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされた
ら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図デ
ータと相関させることができる。この種のデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (J
ohns Hopkins University Welch Medical Library から
オンラインで入手可能) 中に見いだせる。その後、同一
の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連
鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認
する。
の同定にも有用である。この配列は個々のヒト染色体上
の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置とハ
イブリダイズすることができる。本発明に従って関連配
列の染色体地図を作成することは、これらの配列と遺伝
子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階であ
る。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされた
ら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図デ
ータと相関させることができる。この種のデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (J
ohns Hopkins University Welch Medical Library から
オンラインで入手可能) 中に見いだせる。その後、同一
の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連
鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認
する。
【００３８】罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたは
ゲノム配列の差異も調べることができる。罹患個体の一
部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体
にも観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因で
ある可能性がある。本発明の遺伝子はヒト染色体７ｑ２
１〜ｑ２２にマップされる。
ゲノム配列の差異も調べることができる。罹患個体の一
部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体
にも観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因で
ある可能性がある。本発明の遺伝子はヒト染色体７ｑ２
１〜ｑ２２にマップされる。
【００３９】本発明のヌクレオチド配列はまた、組織の
位置決定にも有益である。かかる技法を用いれば、ヒト
ＡＮＴ５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを決定する
ことにより、該ヒトＡＮＴ５ポリペプチドの組織中での
発現パターンの決定が可能になる。これらの技法として
は、in situ ハイブリダイゼーション法およびヌクレオ
チド増幅法（例えば、ＰＣＲ）が含まれる。かかる技法
は当業界で周知である。これらの研究の結果から、その
生物における該ポリペプチドの正常な機能が示される。
さらに、ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡの標準的な発現パターン
をヒトＡＮＴ５遺伝子によりコードされるｍＲＮＡのも
のと比較検討することにより、疾患における変異型ヒト
ＡＮＴ５ポリペプチドの役割または正常型ヒトＡＮＴ５
ポリペプチドの不適当な発現の役割についての有益な洞
察が得られる。そのような不適当な発現は一時的なもの
であってもよく、場所的なものであってもよく、もしく
は単に定量的なものであってもよい。
位置決定にも有益である。かかる技法を用いれば、ヒト
ＡＮＴ５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを決定する
ことにより、該ヒトＡＮＴ５ポリペプチドの組織中での
発現パターンの決定が可能になる。これらの技法として
は、in situ ハイブリダイゼーション法およびヌクレオ
チド増幅法（例えば、ＰＣＲ）が含まれる。かかる技法
は当業界で周知である。これらの研究の結果から、その
生物における該ポリペプチドの正常な機能が示される。
さらに、ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡの標準的な発現パターン
をヒトＡＮＴ５遺伝子によりコードされるｍＲＮＡのも
のと比較検討することにより、疾患における変異型ヒト
ＡＮＴ５ポリペプチドの役割または正常型ヒトＡＮＴ５
ポリペプチドの不適当な発現の役割についての有益な洞
察が得られる。そのような不適当な発現は一時的なもの
であってもよく、場所的なものであってもよく、もしく
は単に定量的なものであってもよい。
【００４０】本発明のポリペプチド、その断片もしくは
類似体、またはそれらを発現する細胞は、本発明のポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原と
しても使用することができる。「免疫特異的」とは、そ
の抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対す
るその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質
的に高い親和性を示すことを意味する。
類似体、またはそれらを発現する細胞は、本発明のポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原と
しても使用することができる。「免疫特異的」とは、そ
の抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対す
るその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質
的に高い親和性を示すことを意味する。
【００４１】本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外
の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断
片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られ
る。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養
物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.お
よびMilstein, C., Nature(1975) 256:495-497)、トリ
オーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, Monoclonal Antibodies an
d Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss,Inc., 198
5) などがある。
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外
の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断
片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られ
る。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養
物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.お
よびMilstein, C., Nature(1975) 256:495-497)、トリ
オーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, Monoclonal Antibodies an
d Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss,Inc., 198
5) などがある。
【００４２】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、米国特許第4,946,778 号に記載される
ような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。
また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニ
ックマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用す
ることができる。前記の抗体を用いて、そのポリペプチ
ドを発現するクローンを単離・同定したり、アフィニテ
ィークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製する
こともできる。
をつくるために、米国特許第4,946,778 号に記載される
ような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。
また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニ
ックマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用す
ることができる。前記の抗体を用いて、そのポリペプチ
ドを発現するクローンを単離・同定したり、アフィニテ
ィークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製する
こともできる。
【００４３】本発明のポリペプチドに対する抗体は、と
りわけ、前記疾患の治療に使用できる可能性がある。
りわけ、前記疾患の治療に使用できる可能性がある。
【００４４】本発明の更なる態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドまたはその断片と、各種サブクラ
ス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリ
ンのＨ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含ん
でなる遺伝子工学的に作製された可溶性融合タンパク質
に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特にＩ
ｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒ
ンジ領域で起こる。特定例では、血液凝固因子Ｘａで開
裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部分を簡単
に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク
質の遺伝子工学的作製方法、並びに薬物スクリーニン
グ、診断および治療におけるそれらの使用に関する。ま
た、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質を
コードするポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質
技術の例は国際特許出願 WO94/29458 およびWO94/22914
に見いだせる。
本発明のポリペプチドまたはその断片と、各種サブクラ
ス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリ
ンのＨ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含ん
でなる遺伝子工学的に作製された可溶性融合タンパク質
に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特にＩ
ｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒ
ンジ領域で起こる。特定例では、血液凝固因子Ｘａで開
裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部分を簡単
に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク
質の遺伝子工学的作製方法、並びに薬物スクリーニン
グ、診断および治療におけるそれらの使用に関する。ま
た、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質を
コードするポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質
技術の例は国際特許出願 WO94/29458 およびWO94/22914
に見いだせる。
【００４５】本発明の更なる態様は哺乳動物において免
疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に前
記疾患から該動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチ
ドを哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗体
を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in
vivo で本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドの発現を指令するベクターを介して該ポリペプチ
ドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫
学的応答を引き出す方法に関する。
疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に前
記疾患から該動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチ
ドを哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗体
を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in
vivo で本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドの発現を指令するベクターを介して該ポリペプチ
ドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫
学的応答を引き出す方法に関する。
【００４６】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物において本発明のポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを含有する。ワクチン製剤
は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチド
は胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に
（例えば、皮下、筋肉内、静脈内または皮内注射によ
り）投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤
としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤
を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および
非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含
みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした
製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アン
プルおよびバイアル）で提供することができ、また、使
用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥
状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤
の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水
中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性
により変化するが、ルーチンな実験操作により簡単に決
定できる。
入したとき、その哺乳動物において本発明のポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを含有する。ワクチン製剤
は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチド
は胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に
（例えば、皮下、筋肉内、静脈内または皮内注射によ
り）投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤
としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤
を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および
非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含
みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした
製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アン
プルおよびバイアル）で提供することができ、また、使
用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥
状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤
の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水
中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性
により変化するが、ルーチンな実験操作により簡単に決
定できる。
【００４７】本発明のポリペプチドは、多くの病的状
態、特に前記疾患を含めて、さまざまな生物学的機能に
関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺
激または抑制する化合物を同定するスクリーニング法を
開発することが望ましい。したがって、更なる態様にお
いて、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制す
る化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を
提供する。一般的には、前記疾患の治療および予防目的
のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用され
る。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学
物質ライブラリーおよび天然産物の混合物から化合物を
同定することができる。このように同定されたアゴニス
ト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合によ
り、該ポリペプチドの天然のまたは修飾された基質、リ
ガンド、受容体、酵素などであってよく、また、その構
造的または機能的なミメティックであってもよい（Coli
ganら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapt
er 5 (1991)を参照のこと）。
態、特に前記疾患を含めて、さまざまな生物学的機能に
関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺
激または抑制する化合物を同定するスクリーニング法を
開発することが望ましい。したがって、更なる態様にお
いて、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制す
る化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を
提供する。一般的には、前記疾患の治療および予防目的
のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用され
る。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学
物質ライブラリーおよび天然産物の混合物から化合物を
同定することができる。このように同定されたアゴニス
ト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合によ
り、該ポリペプチドの天然のまたは修飾された基質、リ
ガンド、受容体、酵素などであってよく、また、その構
造的または機能的なミメティックであってもよい（Coli
ganら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapt
er 5 (1991)を参照のこと）。
【００４８】スクリーニング法では、本発明のポリペプ
チド、または該ポリペプチドを担持する細胞もしくは
膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合
を、候補化合物に直接または間接的に結合された標識を
用いて簡単に測定できる。あるいはまた、スクリーニン
グ法では標識した競合物質との競合を用いることもあ
る。さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合
物がポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグ
ナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて試験することができ
る。一般的には、既知のアゴニストの存在下で活性化の
インヒビターをアッセイして、アゴニストによる活性化
に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニスト
またはインヒビターの不在下で、候補化合物がポリペプ
チドの活性化を抑制するか否かを調べることによる逆ア
ゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、
構成的に活性のあるポリペプチドが用いられる。さら
に、これらのスクリーニング法は、候補化合物と本発明
のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつ
くり、この混合物中のＡＮＴ５活性を測定し、そしてこ
の混合物のＡＮＴ５活性をスタンダードと比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチドの
アンタゴニストを同定する高処理量スクリーニングアッ
セイでは、上記のようなＦｃ部分とＡＮＴ５ポリペプチ
ドから作製されるような融合タンパク質も使用すること
ができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-5
8 (1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270
(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。
チド、または該ポリペプチドを担持する細胞もしくは
膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合
を、候補化合物に直接または間接的に結合された標識を
用いて簡単に測定できる。あるいはまた、スクリーニン
グ法では標識した競合物質との競合を用いることもあ
る。さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合
物がポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグ
ナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて試験することができ
る。一般的には、既知のアゴニストの存在下で活性化の
インヒビターをアッセイして、アゴニストによる活性化
に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニスト
またはインヒビターの不在下で、候補化合物がポリペプ
チドの活性化を抑制するか否かを調べることによる逆ア
ゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、
構成的に活性のあるポリペプチドが用いられる。さら
に、これらのスクリーニング法は、候補化合物と本発明
のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつ
くり、この混合物中のＡＮＴ５活性を測定し、そしてこ
の混合物のＡＮＴ５活性をスタンダードと比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチドの
アンタゴニストを同定する高処理量スクリーニングアッ
セイでは、上記のようなＦｃ部分とＡＮＴ５ポリペプチ
ドから作製されるような融合タンパク質も使用すること
ができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-5
8 (1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270
(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。
【００４９】また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチドまたは該ポリペプチドに対する抗体を用いて、細
胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添
加化合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組
み立てることができる。例えば、当業界で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのポ
リペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれ
アンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用
いることができる。
プチドまたは該ポリペプチドに対する抗体を用いて、細
胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添
加化合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組
み立てることができる。例えば、当業界で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのポ
リペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれ
アンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用
いることができる。
【００５０】膜に結合した受容体または可溶性の受容体
が存在するのであれば、当業界で公知の標準的な受容体
結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明の
ポリペプチドを用いることができる。こうした受容体結
合法には、限定するものではないが、リガンド結合アッ
セイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：125I）で
標識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）するか、
または検出や精製に適したペプチド配列に融合させ、そ
して推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織
抽出物、体液など）とインキュベートする。その他の方
法としては、表面プラズモン共鳴および分光学のような
生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、
該ポリペプチドまたは（存在するのであれば）その受容
体への結合と競合する該ポリペプチドのアゴニストまた
はアンタゴニストを同定するために用いることもでき
る。スクリーニングアッセイを行うための標準的な方法
は当業界でよく理解されている。
が存在するのであれば、当業界で公知の標準的な受容体
結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明の
ポリペプチドを用いることができる。こうした受容体結
合法には、限定するものではないが、リガンド結合アッ
セイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：125I）で
標識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）するか、
または検出や精製に適したペプチド配列に融合させ、そ
して推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織
抽出物、体液など）とインキュベートする。その他の方
法としては、表面プラズモン共鳴および分光学のような
生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、
該ポリペプチドまたは（存在するのであれば）その受容
体への結合と競合する該ポリペプチドのアゴニストまた
はアンタゴニストを同定するために用いることもでき
る。スクリーニングアッセイを行うための標準的な方法
は当業界でよく理解されている。
【００５１】本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、該ポリペプ
チドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係
があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例え
ば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断片）、また
は本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子など
がある。
ニストの例としては、抗体、ある場合には、該ポリペプ
チドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係
があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例え
ば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断片）、また
は本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子など
がある。
【００５２】かくして、他の態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポ
リペプチドの産生を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) 本発明のポリペプチド、(b) 本発明のポリペプ
チドを発現している組換え細胞、(c) 本発明のポリペプ
チドを発現している細胞膜、または(d) 本発明のポリペ
プチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチド
は好ましくは配列番号２のポリペプチドである。このよ
うなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実
質的な構成成分であることが理解されよう。
本発明のポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポ
リペプチドの産生を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) 本発明のポリペプチド、(b) 本発明のポリペプ
チドを発現している組換え細胞、(c) 本発明のポリペプ
チドを発現している細胞膜、または(d) 本発明のポリペ
プチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチド
は好ましくは配列番号２のポリペプチドである。このよ
うなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実
質的な構成成分であることが理解されよう。
【００５３】当業者であれば、本発明のポリペプチド
は、その構造に基づいて該ポリペプチドのアゴニスト、
アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも
使用できることが容易に理解されよう。この方法は、
(a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、(b)
アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実
と思われる反応部位または結合部位の三次元構造を想定
し、(c) 想定された反応部位または結合部位と結合また
は反応すると予想される候補化合物を合成し、そして
(d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニス
トまたはインヒビターであるか否かを調べる、ことを含
んでなる。これは通常相互作用プロセスであることがさ
らに理解されよう。
は、その構造に基づいて該ポリペプチドのアゴニスト、
アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも
使用できることが容易に理解されよう。この方法は、
(a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、(b)
アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実
と思われる反応部位または結合部位の三次元構造を想定
し、(c) 想定された反応部位または結合部位と結合また
は反応すると予想される候補化合物を合成し、そして
(d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニス
トまたはインヒビターであるか否かを調べる、ことを含
んでなる。これは通常相互作用プロセスであることがさ
らに理解されよう。
【００５４】更なる態様において、本発明は、ＡＮＴ５
ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係し
た、例えばうっ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡
張性または収縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中な
どの異常な状態の治療法を提供する。
ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係し
た、例えばうっ血性心不全、虚血性心疾患、不整脈、拡
張性または収縮性機能不全、肥大型心筋症および卒中な
どの異常な状態の治療法を提供する。
【００５５】該ポリペプチドの活性が過剰である場合
は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのア
プローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素な
どの結合をブロックすることにより、または第２のシグ
ナルを抑制することで異常な状態を軽減することによ
り、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、
上記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学
上許容される担体とともに患者に投与することを含んで
なる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペプチ
ドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと
結合する能力がまだある可溶性形態のポリペプチドを投
与することができる。このような競合物質の典型的な例
はＡＮＴ５ポリペプチドの断片である。
は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのア
プローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素な
どの結合をブロックすることにより、または第２のシグ
ナルを抑制することで異常な状態を軽減することによ
り、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、
上記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学
上許容される担体とともに患者に投与することを含んで
なる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペプチ
ドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと
結合する能力がまだある可溶性形態のポリペプチドを投
与することができる。このような競合物質の典型的な例
はＡＮＴ５ポリペプチドの断片である。
【００５６】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ＡＮＴ５ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で産生されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする（例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝子
発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキ
シヌクレオチド), CRCPress, Boca Raton, FL (1988)
中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を参照のこ
と）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせんを形
成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる（例
えば、Leeら, Nucleic Acids Res (1979) 6:3073; Coon
eyら, Science (1988) 241:456; Dervanら, Science (1
991) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーは
それ自体を投与することもできるし、関連オリゴマーを
in vivo で発現させることもできる。合成アンチセンス
または三重らせんオリゴヌクレオチドは修飾塩基または
修飾骨格を含み得る。修飾骨格の例としては、メチルホ
スホネート、ホスホロチオエートまたはペプチド核酸の
骨格が含まれる。このような骨格は、ヌクレアーゼによ
る分解からの保護を付与する目的でアンチセンスまたは
三重らせんオリゴヌクレオチドに組み込まれ、当業界で
は周知である。これらの修飾骨格または他の修飾骨格を
用いて合成されるアンチセンスおよび三重らせん分子も
また、本発明の一部を形成するものである。
使って内因性ＡＮＴ５ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で産生されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする（例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression (遺伝子
発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキ
シヌクレオチド), CRCPress, Boca Raton, FL (1988)
中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を参照のこ
と）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせんを形
成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる（例
えば、Leeら, Nucleic Acids Res (1979) 6:3073; Coon
eyら, Science (1988) 241:456; Dervanら, Science (1
991) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーは
それ自体を投与することもできるし、関連オリゴマーを
in vivo で発現させることもできる。合成アンチセンス
または三重らせんオリゴヌクレオチドは修飾塩基または
修飾骨格を含み得る。修飾骨格の例としては、メチルホ
スホネート、ホスホロチオエートまたはペプチド核酸の
骨格が含まれる。このような骨格は、ヌクレアーゼによ
る分解からの保護を付与する目的でアンチセンスまたは
三重らせんオリゴヌクレオチドに組み込まれ、当業界で
は周知である。これらの修飾骨格または他の修飾骨格を
用いて合成されるアンチセンスおよび三重らせん分子も
また、本発明の一部を形成するものである。
【００５７】さらに、ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡ配列に特異
的なリボザイムを用いることにより、ヒトＡＮＴ５ポリ
ペプチドの発現を防止することができる。リボザイムは
触媒として活性なＲＮＡであり、天然のものであっても
合成のものであってもよい（例えば、Usman, N.ら, Cur
r. Opin. Struct. Biol (1996)6(4), 527-33）。合成リ
ボザイムは、ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡを選択された位置で
特異的に切断して該ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡが機能的ポリ
ペプチドへと翻訳されるのを防止するように設計するこ
とができる。リボザイムは、ＲＮＡ分子に通常見られる
天然のリボースリン酸骨格と天然の塩基とを用いて合成
することができる。あるいはまた、リボザイムは、非天
然の骨格を用いて合成してリボヌクレアーゼ分解からの
保護を付与してもよく（例えば、２′-Ｏ-メチルＲＮ
Ａ）、修飾塩基を含有していてもよい。
的なリボザイムを用いることにより、ヒトＡＮＴ５ポリ
ペプチドの発現を防止することができる。リボザイムは
触媒として活性なＲＮＡであり、天然のものであっても
合成のものであってもよい（例えば、Usman, N.ら, Cur
r. Opin. Struct. Biol (1996)6(4), 527-33）。合成リ
ボザイムは、ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡを選択された位置で
特異的に切断して該ヒトＡＮＴ５ｍＲＮＡが機能的ポリ
ペプチドへと翻訳されるのを防止するように設計するこ
とができる。リボザイムは、ＲＮＡ分子に通常見られる
天然のリボースリン酸骨格と天然の塩基とを用いて合成
することができる。あるいはまた、リボザイムは、非天
然の骨格を用いて合成してリボヌクレアーゼ分解からの
保護を付与してもよく（例えば、２′-Ｏ-メチルＲＮ
Ａ）、修飾塩基を含有していてもよい。
【００５８】ＡＮＴ５およびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有
効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すな
わち、前記アゴニスト）を製剤学上許容される担体とと
もに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含ん
でなる。別法として、患者の関連細胞においてＡＮＴ５
を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることが
できる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイ
ルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオ
チドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物
を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを
含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入
されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッ
ケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイ
ルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作およ
びin vivo ポリペプチド発現のために、これらの産生細
胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Hu
man Molecular Genetics, T Strachan and A P Read, B
IOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 2
0, Gene Therapy andother Molecular Genetic-based T
herapeutic Approaches(およびその中の引用文献) を参
照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明のポ
リペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与するこ
とである。
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有
効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すな
わち、前記アゴニスト）を製剤学上許容される担体とと
もに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含ん
でなる。別法として、患者の関連細胞においてＡＮＴ５
を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることが
できる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイ
ルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオ
チドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物
を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを
含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入
されたパッケージング細胞に導入する。その結果、パッ
ケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイ
ルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作およ
びin vivo ポリペプチド発現のために、これらの産生細
胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Hu
man Molecular Genetics, T Strachan and A P Read, B
IOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 2
0, Gene Therapy andother Molecular Genetic-based T
herapeutic Approaches(およびその中の引用文献) を参
照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明のポ
リペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与するこ
とである。
【００５９】更なる態様において、本発明は、治療に有
効な量のポリペプチド（例えば、可溶性形態の本発明ポ
リペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプ
チド、または小分子化合物を製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤と共に含有する医薬組成物を提供する。この
種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロー
ス、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組
合せがあるが、これらに限らない。本発明はさらに、上
記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容
器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。
効な量のポリペプチド（例えば、可溶性形態の本発明ポ
リペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプ
チド、または小分子化合物を製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤と共に含有する医薬組成物を提供する。この
種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロー
ス、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組
合せがあるが、これらに限らない。本発明はさらに、上
記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容
器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。
【００６０】医薬組成物は投与経路、例えば全身または
経口による投与経路に適合させることができる。全身投
与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注であ
る。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も
使用できる。全身投与の別の手段には、胆汁酸塩、フシ
ジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘
膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチ
ドまたは他の化合物を腸溶剤またはカプセル剤として製
剤化し得るのであれば、経口投与も可能である。これら
の化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投
与しても、かつ／または局在化させてもよい。
経口による投与経路に適合させることができる。全身投
与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注であ
る。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も
使用できる。全身投与の別の手段には、胆汁酸塩、フシ
ジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘
膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチ
ドまたは他の化合物を腸溶剤またはカプセル剤として製
剤化し得るのであれば、経口投与も可能である。これら
の化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投
与しても、かつ／または局在化させてもよい。
【００６１】必要な投与量範囲は、本発明のペプチドま
たは他の化合物の選択、投与経路、製剤の性質、患者の
状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な
投与量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲であ
る。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効
率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は広
範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静
注による投与よりも高い投与量を必要とすると予想され
よう。こうした投与量レベルの変動は、当業界でよく理
解されているような、標準的経験的な最適化手順を用い
て調整することができる。
たは他の化合物の選択、投与経路、製剤の性質、患者の
状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な
投与量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲であ
る。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効
率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は広
範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静
注による投与よりも高い投与量を必要とすると予想され
よう。こうした投与量レベルの変動は、当業界でよく理
解されているような、標準的経験的な最適化手順を用い
て調整することができる。
【００６２】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプ
ラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的に
操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプ
ラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的に
操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。
【００６３】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配
列は、類似の相同性を有する別の配列を同定する際の価
値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコン
ピュータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデ
ータを用いてＧＣＣのような公知の検索ツールにより配
列データベースを検索することで最大限促進される。し
たがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１
の配列を含んでなるポリヌクレオチドおよび／またはそ
れによりコードされるポリペプチドを保存したコンピュ
ータ読み取り可能媒体を提供する。
列は、類似の相同性を有する別の配列を同定する際の価
値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコン
ピュータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデ
ータを用いてＧＣＣのような公知の検索ツールにより配
列データベースを検索することで最大限促進される。し
たがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１
の配列を含んでなるポリヌクレオチドおよび／またはそ
れによりコードされるポリペプチドを保存したコンピュ
ータ読み取り可能媒体を提供する。
【００６４】以下の定義は上記の説明中でしばしば用い
られた用語を理解しやすくするためのものである。本明
細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗
体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によっ
て」改変されたことを意味する。「単離された」組成物
または物質が天然に存在するのであれば、それはそのも
との環境から変化しているか分離されており、またはそ
の両方である。例えば、生存している動物の体内に自然
界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物
質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書中で用いられるように、「単離された」も
のである。
られた用語を理解しやすくするためのものである。本明
細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗
体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によっ
て」改変されたことを意味する。「単離された」組成物
または物質が天然に存在するのであれば、それはそのも
との環境から変化しているか分離されており、またはそ
の両方である。例えば、生存している動物の体内に自然
界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物
質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書中で用いられるように、「単離された」も
のである。
【００６５】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を行う
ことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自
然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスお
よび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオ
リゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチ
ドも包含する。
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を行う
ことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自
然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスお
よび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオ
リゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチ
ドも包含する。
【００６６】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペ
プチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」
は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴ
マーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の
両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化
アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセス
で、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修
飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的
な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述さ
れている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノ
またはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこで
も行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペ
プチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異
なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチド
が多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチ
ドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある
又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、また
は分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセス
から生じることがあり、また、合成法によって製造する
こともできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、
ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド
誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、
ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の
形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホル
ミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩア
ンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミ
リストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（例えば、
Proteins - Structure and Molecular Properties 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; Posttranslational Covalent Modificat
ion of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, N
ew York,1983中のWold, F., Post-translational Prote
in Modifications: Perspectives and Prospects, pgs.
1-12; Seifterら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646;および Rattanら, “Protein Synthesi
s: Post-translational Modifications and Aging", An
n NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと）。
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペ
プチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」
は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴ
マーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の
両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化
アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセス
で、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修
飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的
な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述さ
れている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノ
またはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこで
も行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペ
プチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異
なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチド
が多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチ
ドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある
又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、また
は分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセス
から生じることがあり、また、合成法によって製造する
こともできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、
ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド
誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、
ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、
ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有結合架橋の
形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホル
ミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩア
ンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミ
リストイル化、酸化、タンパク質分解プロセシング、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある（例えば、
Proteins - Structure and Molecular Properties 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; Posttranslational Covalent Modificat
ion of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Press, N
ew York,1983中のWold, F., Post-translational Prote
in Modifications: Perspectives and Prospects, pgs.
1-12; Seifterら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646;および Rattanら, “Protein Synthesi
s: Post-translational Modifications and Aging", An
n NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと）。
【００６７】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付
加、融合および末端切断（トランケーション）をもたら
しうる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプ
チドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準
ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似
しており、多くの領域で同一となるような相違に限られ
る。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１
以上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違して
いてよい。置換または付加されるアミノ酸残基は遺伝子
コードによりコードされるものであっても、なくてもよ
い。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はア
レル変異体のように天然に存在するものでも、天然に存
在することが知られていない変異体であってもよい。ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない
変異体は、突然変異誘発法または直接合成により作製す
ることができる。
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付
加、融合および末端切断（トランケーション）をもたら
しうる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプ
チドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準
ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似
しており、多くの領域で同一となるような相違に限られ
る。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１
以上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違して
いてよい。置換または付加されるアミノ酸残基は遺伝子
コードによりコードされるものであっても、なくてもよ
い。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はア
レル変異体のように天然に存在するものでも、天然に存
在することが知られていない変異体であってもよい。ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない
変異体は、突然変異誘発法または直接合成により作製す
ることができる。
【００６８】当技術分野で知られた「同一性」とは、ポ
リペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の比較によ
り決定された、２以上のかかる配列間の関係のことであ
る。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配
列またはポリヌクレオチド配列の鎖間のマッチ(match)
により決定された、このような配列間の配列関係の程度
を意味する。「同一性」および「類似性」は公知の方法
により難なく算出することができ、こうした方法とし
て、例えば Computational Molecular Biology,Lesk,
A.M.編, Oxford University Press, New York, 1988; B
iocomputing: Informatics and Genome Projects, Smit
h, D.W. 編, Academic Press, New York,1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M.
and Griffin, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1
994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von H
einje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis
Primer, Gribskov, M. and Devereux, J. 編, M Stock
ton Press, New York, 1991; および Carillo, H. and
Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)
に記載された方法があるが、これらに限らない。同一
性を決定するための好ましい方法は、検討する配列間で
最大級のマッチが得られるように設計される。さらに、
同一性および類似性を決定する方法は一般に入手可能な
コンピュータプログラムに編集されている。２配列間の
同一性および類似性を決定する好適なコンピュータプロ
グラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Deve
reux, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (198
4))、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ (A
tschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (199
0))があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴＸプログ
ラムはＮＣＢＩおよび他のソースから一般に入手可能で
ある (BLAST Manual, Altschul, S.ら, NCBI NLM NIHBe
thesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 21
5: 403-410 (1990))。公知のSmith Watermanアルゴリズ
ムも同一性の決定に使用することができる。
リペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の比較によ
り決定された、２以上のかかる配列間の関係のことであ
る。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配
列またはポリヌクレオチド配列の鎖間のマッチ(match)
により決定された、このような配列間の配列関係の程度
を意味する。「同一性」および「類似性」は公知の方法
により難なく算出することができ、こうした方法とし
て、例えば Computational Molecular Biology,Lesk,
A.M.編, Oxford University Press, New York, 1988; B
iocomputing: Informatics and Genome Projects, Smit
h, D.W. 編, Academic Press, New York,1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M.
and Griffin, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1
994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von H
einje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis
Primer, Gribskov, M. and Devereux, J. 編, M Stock
ton Press, New York, 1991; および Carillo, H. and
Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)
に記載された方法があるが、これらに限らない。同一
性を決定するための好ましい方法は、検討する配列間で
最大級のマッチが得られるように設計される。さらに、
同一性および類似性を決定する方法は一般に入手可能な
コンピュータプログラムに編集されている。２配列間の
同一性および類似性を決定する好適なコンピュータプロ
グラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Deve
reux, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (198
4))、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ (A
tschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (199
0))があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴＸプログ
ラムはＮＣＢＩおよび他のソースから一般に入手可能で
ある (BLAST Manual, Altschul, S.ら, NCBI NLM NIHBe
thesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 21
5: 403-410 (1990))。公知のSmith Watermanアルゴリズ
ムも同一性の決定に使用することができる。
【００６９】ポリペプチド配列を比較するための好適な
パラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：BLOSSU
M62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：１２ ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして一般に入手可能である。前記のパラメータ
ーはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(def
ault parameter) である（末端ギャップのペナルティー
は無し）。
パラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：BLOSSU
M62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：１２ ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして一般に入手可能である。前記のパラメータ
ーはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(def
ault parameter) である（末端ギャップのペナルティー
は無し）。
【００７０】ポリヌクレオチド配列を比較するための好
適なパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：マッチ
＝＋１０、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして入手可能である。前記のパラメーターはポ
リヌクレオチド比較のためのデフォルトパラメーターで
ある。
適なパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：マッチ
＝＋１０、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして入手可能である。前記のパラメーターはポ
リヌクレオチド比較のためのデフォルトパラメーターで
ある。
【００７１】例として、本発明のポリヌクレオチド配列
は配列番号１の基準配列と同一、すなわち１００％同一
であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのヌ
クレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なく
とも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジション
およびトランスバージョンを含む）または付加よりなる
群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配列
の5'もしくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の間
のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチドの
間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグル
ープとして介在することができる。ヌクレオチド変異の
数は、配列番号１のヌクレオチドの総数に、それぞれの
（１００で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番
号１のヌクレオチドの総数から差し引くことにより、す
なわち、次式： ｎn ≦ｘn −（ｘn ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎn はヌクレオチド
変異の数であり、ｘn は配列番号１のヌクレオチドの総
数であり、ｙは例えば70％については0.70、80％につい
ては0.80、85％については0.85、90％については0.90、
95％については0.95などであり、ｘn とｙの非整数の積
は、その積をｘn から引く前に、最も近似する整数に切
り下げる。配列番号２のポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセン
ス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさ
せ、それにより、こうした変異後に該ポリヌクレオチド
によりコードされたポリペプチドを改変させることがで
きる。
は配列番号１の基準配列と同一、すなわち１００％同一
であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのヌ
クレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なく
とも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジション
およびトランスバージョンを含む）または付加よりなる
群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配列
の5'もしくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の間
のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチドの
間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグル
ープとして介在することができる。ヌクレオチド変異の
数は、配列番号１のヌクレオチドの総数に、それぞれの
（１００で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番
号１のヌクレオチドの総数から差し引くことにより、す
なわち、次式： ｎn ≦ｘn −（ｘn ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎn はヌクレオチド
変異の数であり、ｘn は配列番号１のヌクレオチドの総
数であり、ｙは例えば70％については0.70、80％につい
ては0.80、85％については0.85、90％については0.90、
95％については0.95などであり、ｘn とｙの非整数の積
は、その積をｘn から引く前に、最も近似する整数に切
り下げる。配列番号２のポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセン
ス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさ
せ、それにより、こうした変異後に該ポリヌクレオチド
によりコードされたポリペプチドを改変させることがで
きる。
【００７２】同様に、本発明のポリペプチド配列は配列
番号２の基準配列と同一、すなわち１００％の同一性で
あっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミ
ノ酸変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１
個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非同類アミノ酸
置換を含む）または付加よりなる群から選択され、こう
した変異は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカル
ボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間のいずれ
に存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々
に、または基準配列内に１以上の連続するグループとし
て介在することができる。所定の同一性％についてのア
ミノ酸変異の数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、そ
れぞれの（１００で割った）同一性％値を掛け、その積
を配列番号２のアミノ酸の総数から差し引くことによ
り、すなわち、次式： ｎa ≦ｘa −（ｘa ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎa はアミノ酸変異
の数であり、ｘa は配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.
80、85％については0.85などであり、ｘa とｙの非整数
の積は、その積をｘa から引く前に、最も近似する整数
に切り下げる。
番号２の基準配列と同一、すなわち１００％の同一性で
あっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミ
ノ酸変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１
個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非同類アミノ酸
置換を含む）または付加よりなる群から選択され、こう
した変異は基準ポリペプチド配列のアミノもしくはカル
ボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間のいずれ
に存在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々
に、または基準配列内に１以上の連続するグループとし
て介在することができる。所定の同一性％についてのア
ミノ酸変異の数は、配列番号２のアミノ酸の総数に、そ
れぞれの（１００で割った）同一性％値を掛け、その積
を配列番号２のアミノ酸の総数から差し引くことによ
り、すなわち、次式： ｎa ≦ｘa −（ｘa ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎa はアミノ酸変異
の数であり、ｘa は配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.
80、85％については0.85などであり、ｘa とｙの非整数
の積は、その積をｘa から引く前に、最も近似する整数
に切り下げる。
【００７３】「相同体」とは、対象の配列に対して高度
の配列関連性を有するポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドを示すための当技術分野で使用される一般的な用語
である。こうした関連性は、上記のような比較すべき配
列間の同一性および／または類似性の程度を決定するこ
とにより定量化できる。別の種におけるポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの機能的等価物であるポリヌクレ
オチドまたはポリペプチドを意味する「オーソログ体」
(ortholog)、および同一の種内で考えるときに機能的に
類似した配列を意味する「パラログ体」(paralog) とい
う用語はこの一般的な用語に含まれる。
の配列関連性を有するポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドを示すための当技術分野で使用される一般的な用語
である。こうした関連性は、上記のような比較すべき配
列間の同一性および／または類似性の程度を決定するこ
とにより定量化できる。別の種におけるポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの機能的等価物であるポリヌクレ
オチドまたはポリペプチドを意味する「オーソログ体」
(ortholog)、および同一の種内で考えるときに機能的に
類似した配列を意味する「パラログ体」(paralog) とい
う用語はこの一般的な用語に含まれる。
【００７４】「融合タンパク質」とは、２つの、しばし
ば無関係の、融合された遺伝子またはその断片によりコ
ードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A
-0 464には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部
分と他のヒトタンパク質またはその一部とを含んでなる
融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部とし
て免疫グロブリンＦｃ領域を使用することが有利であ
り、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する（例
えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつか
の使用にとっては、その融合タンパク質を発現させ、検
出し、精製した後でＦｃ部分を除去することが望ましい
だろう。
ば無関係の、融合された遺伝子またはその断片によりコ
ードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A
-0 464には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部
分と他のヒトタンパク質またはその一部とを含んでなる
融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部とし
て免疫グロブリンＦｃ領域を使用することが有利であ
り、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する（例
えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつか
の使用にとっては、その融合タンパク質を発現させ、検
出し、精製した後でＦｃ部分を除去することが望ましい
だろう。
【００７５】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。
【００７６】
SEQUENCE LISTING <110> SmithKline Beecham Laboratoires Pharmaceutiq
ues <120> ANT5 Polypeptides and ANT5 Polynucleotides <130> GH30985 <150> E.P. Application No.98401655.0 <151> 1998-7-2 <150> E.P. Application No.97402511.6 <151> 1997-10-23 <160> 4 <170> FastSEQ for Windows Version 3.0 <210> 1 <211> 2095 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 agccgcccgg gtcccaaacg ccagccagcc agtcagtggg tcccgcagtc gcccgcaacc 60 ggggcgaatc atggcggccg caagggtggc tttaaccaag agagcagatc cagctgagct 120 tagaacaata tttttgaagt atgcaagcat tgagaaaaac ggtgaatttt tcatgtcccc 180 caatgacttt gtcactcgat acttgaacat ttttggagaa agccagccta atccaaagac 240 tgtggaactt ttaagtggag tggtggatca gaccaaagat ggattaatat cttttcatga 300 atttgttgcc tttgaatctg tcctgtgtgc ccctgatgct ttgtttatgg tagcctttca 360 gctgtttgac aaagctggca aaggagaagt aacttttgag gatgttaagc aagtttttgg 420 acagaccaca attcatcaac atattccatt taactgggat tcagaatttg tgcaactaca 480 ttttggaaaa gaaagaaaaa gacacctgac atatgcggaa tttactcagt ttttattgga 540 aatacaactg gagcacgcaa agcaagcctt tgtgcaacgg gacaatgcta ggactgggag 600 agtcacagcc atcgacttcc gagacatcat ggtcaccatc cgcccccatg tcttgactcc 660 ttttgtagaa gaatgtctag tagctgctgc tggaggtacc acatcccatc aagttagttt 720 ctcctatttt 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ttctcggcca tctactttcc gtgctatgct catgtgaagg cttcctttgc aaatgaagat 960 gggcaggtta gcccaggaag cctgctctta gctggtgcca tagctggtat gcctgcagca 1020 tctttagtga cccctgctga tgttatcaag acgagattac aggtggctgc ccgggctggc 1080 caaaccactt acagcggagt gatagactgc tttagaaaga tactgcgtga agaaggacca 1140 aaagctctgt ggaagggagc tggtgctcgt gtatttcgat cctcacccca gtttggtgta 1200 actttgctga cttacgaatt gctacagcga tggttctaca ttgattttgg aggagtaaaa 1260 cccatgggat cagagccagt tcctaaatcc aggatcaacc tgcctgcccc gaatcctgat 1320 cacgttgggg gctacaaact ggcagttgct acatttgcag ggattgaaaa caaatttgga 1380 ctttacctac ctctcttcaa gccatcagta tctacctcaa aggctattgg tggaggccca 1440 tag 1443 <210> 4 <211> 447 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Glu Leu Ile Arg Lys Ile Tyr Ser Thr Leu Ala Gly Thr Arg Lys 1 5 10 15 Asp Val Glu Val Thr Lys Glu Glu Phe Val Leu Ala Ala Gln Lys Phe 20 25 30 Gly Gln Val Thr Pro Met Glu Val Asp Ile Leu Phe Gln Leu Ala Asp 35 40 45 Leu Tyr Glu Pro Arg Gly Arg Met Thr Leu Ala Asp Ile Glu Arg Ile 50 55 60 Ala Pro Leu Glu Glu Gly Thr Leu Pro Phe Asn Leu Ala Glu Ala Gln 65 70 75 80 Arg Gln Gln Lys Ala Ser Gly Asp Ser Ala Arg Pro Val Leu Leu Gln 85 90 95 Val Ala Glu Ser Ala Tyr Arg Phe Gly Leu Gly Ser Val Ala Gly Ala 100 105 110 Val Gly Ala Thr Ala Val Tyr Pro Ile Asp Leu Val Lys Thr Arg Met 115 120 125 Gln Asn Gln Arg Ser Thr Gly Ser Phe Val Gly Glu Leu Met Tyr Lys 130 135 140 Asn Ser Phe Asp Cys Phe Lys Lys Val Leu Arg Tyr Glu Gly Phe Phe 145 150 155 160 Gly Leu Tyr Arg Gly Leu Leu Pro Gln Leu Leu Gly Val Ala Pro Glu 165 170 175 Lys Ala Ile Lys Leu Thr Val Asn Asp Phe Val Arg Asp Lys Phe Met 180 185 190 His Lys Asp Gly Ser Val Pro Leu Ala Ala Glu Ile Leu Ala Gly Gly 195 200 205 Cys Ala Gly Gly Ser Gln Val Ile Phe Thr Asn Pro Leu Glu Ile Val 210 215 220 Lys Ile Arg Leu Gln Val Ala Gly Glu Ile Thr Thr Gly Pro Arg Val 225 230 235 240 Ser Ala Leu Ser Val Val Arg Asp Leu Gly Phe Phe Gly Ile Tyr Lys 245 250 255 Gly Ala Lys Ala Cys Phe Leu Arg Asp Ile Pro Phe Ser Ala Ile Tyr 260 265 270 Phe Pro Cys Tyr Ala His Val Lys Ala Ser Phe Ala Asn Glu Asp Gly 275 280 285 Gln Val Ser Pro Gly Ser Leu Leu Leu Ala Gly Ala Ile Ala Gly Met 290 295 300 Pro Ala Ala Ser Leu Val Thr Pro Ala Asp Val Ile Lys Thr Arg Leu 305 310 315 320 Gln Val Ala Ala Arg Ala Gly Gln Thr Thr Tyr Ser Gly Val Ile Asp 325 330 335 Cys Phe Arg Lys Ile Leu Arg Glu Glu Gly Pro Lys Ala Leu Trp Lys 340 345 350 Gly Ala Gly Ala Arg Val Phe Arg Ser Ser Pro Gln Phe Gly Val Thr 355 360 365 Leu Leu Thr Tyr Glu Leu Leu Gln Arg Trp Phe Tyr Ile Asp Phe Gly 370 375 380 Gly Val Lys Pro Met Gly Ser Glu Pro Val Pro Lys Ser Arg Ile Asn 385 390 395 400 Leu Pro Ala Pro Asn Pro Asp His Val Gly Gly Tyr Lys Leu Ala Val 405 410 415 Ala Thr Phe Ala Gly Ile Glu Asn Lys Phe Gly Leu Tyr Leu Pro Leu 420 425 430 Phe Lys Pro Ser Val Ser Thr Ser Lys Ala Ile Gly Gly Gly Pro 435 440 445
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 39/00 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ 39/395 Ｎ 45/00 45/00 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 ミシェル ソウチェ フランス国 35762 セント グレゴワー ル， ビーピー 58，ル ドゥ チェスネ イ ボウルガルド ４，スミスクライン ビーチャム ラボラトワール ファーマシ ューティック (72)発明者 アントワヌ ブリル フランス国 35762 セント グレゴワー ル， ビーピー 58，ル ドゥ チェスネ イ ボウルガルド ４，スミスクライン ビーチャム ラボラトワール ファーマシ ューティック
Claims (19)
- 【請求項１】 配列番号２の全長にわたる配列番号２の
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
るアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチ
ド。 - 【請求項２】 アミノ酸配列が少なくとも９５％の同一
性を有する、請求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項３】 配列番号２のアミノ酸配列を含んでな
る、請求項１に記載のポリペプチド。 - 【請求項４】 配列番号２のアミノ酸配列からなる、単
離されたポリペプチド。 - 【請求項５】 配列番号２の全長にわたる配列番号２の
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有す
るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで
なる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌクレ
オチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド。 - 【請求項６】 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリ
ペプチドをコードするヌクレオチド配列に対して少なく
とも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで
なる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌクレ
オチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド。 - 【請求項７】 配列番号１の全長にわたる配列番号１の
ヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を
有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌ
クレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補的なヌク
レオチド配列からなるポリヌクレオチド。 - 【請求項８】 前記の同一性が少なくとも９５％であ
る、請求項５〜７のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
チド。 - 【請求項９】 以下の(a)〜(c)から選択される単離され
たポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補
的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオ
チド、 (b) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド、および (c) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で、配列番号１のヌクレオチド
配列またはその断片を有する標識プローブを用いてスク
リーニングすることにより得られるポリヌクレオチド。 - 【請求項１０】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存
在するとき請求項１に記載のポリペプチドを産生し得る
ポリヌクレオチドを含有する発現系。 - 【請求項１１】 請求項１０に記載の発現系を含有する
宿主細胞、または請求項１に記載のポリペプチドを発現
しているその膜。 - 【請求項１２】 請求項１に記載のポリペプチドを産生
させるのに十分な条件下で請求項１１に記載の宿主細胞
を培養し、この培養培地から該ポリペプチドを回収する
ことを含んでなる、請求項１に記載のポリペプチドの生
産方法。 - 【請求項１３】 請求項１に記載のポリペプチドに対し
て免疫特異的な抗体。 - 【請求項１４】 請求項１に記載のポリペプチドの機能
を刺激または抑制する化合物を同定するためのスクリー
ニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直接または
間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存在下で測
定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制に
より生ずるシグナルをもたらすか否かを、該ポリペプチ
ドを担持している細胞または細胞膜に適した検出系を用
いて調べること、 (d) 候補化合物と、請求項１に記載のポリペプチドを含
有する溶液と、を一緒にして混合物を調製し、該混合物
中の該ポリペプチドの活性を測定し、該混合物の活性を
スタンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコード
するｍＲＮＡおよび該ポリペプチドの産生に及ぼす効果
を検出すること、よりなる群から選択される方法を含ん
でなるスクリーニング法。 - 【請求項１５】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の
ポリペプチドに対するアゴニストまたはアンタゴニス
ト。 - 【請求項１６】 治療に用いるための以下の(a)〜(c)か
ら選択される化合物： (a) 請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド
に対するアゴニストまたはアンタゴニスト、 (b) 請求項５〜９のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
チド、および (c) 請求項１に記載のポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列の発現をモジュレートする核酸分子。 - 【請求項１７】 被験者における請求項１に記載のポリ
ペプチドの発現または活性に関連した疾病または該疾病
への罹りやすさを検査する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列に突然変異があるか否かを調べるこ
と、および／または (b) 該被験者から得られたサンプルにおける該ポリペプ
チド発現の存在または量を分析すること、を含んでなる
方法。 - 【請求項１８】 以下の(a)〜(d)から選択される単離さ
れたポリヌクレオチド： (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有するヌク
レオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌ
クレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
オチド、および (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列を含んでなるたポリヌクレオチド。 - 【請求項１９】 以下の(a)〜(e)から選択されるポリペ
プチド： (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含んでなるポリペプチド、 (b) アミノ酸配列が配列番号４の全長にわたる配列番号
４のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を
有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
ド、 (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
および (e) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでな
るポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97402511 | 1997-10-23 | ||
| FR98401655:0 | 1997-10-23 | ||
| FR97402511:6 | 1997-10-23 | ||
| EP98401655 | 1998-07-02 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001361425A Division JP2002223784A (ja) | 1997-10-23 | 2001-11-27 | Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11239487A true JPH11239487A (ja) | 1999-09-07 |
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Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10303037A Pending JPH11239487A (ja) | 1997-10-23 | 1998-10-23 | Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチド |
| JP2001361425A Pending JP2002223784A (ja) | 1997-10-23 | 2001-11-27 | Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチド |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001361425A Pending JP2002223784A (ja) | 1997-10-23 | 2001-11-27 | Ａｎｔ５ポリペプチドおよびａｎｔ５ポリヌクレオチド |
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|---|---|
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| JP (2) | JPH11239487A (ja) |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2245997A1 (en) | 1999-04-23 |
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