JP2002500885A

JP2002500885A - ヒトバニロイド受容体相同体

Info

Publication number: JP2002500885A
Application number: JP2000528673A
Authority: JP
Inventors: デイビス，ジョン，ベレスフォード; ダックワース，デイビッド，マルコム; ヘイエス，フィリップ，デイビッド
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1998-01-27
Filing date: 1999-01-25
Publication date: 2002-01-15
Also published as: EP1066381A1; WO1999037765A1

Abstract

(57)【要約】 VANILREP2ポリペプチドおよびポリヌクレオチド、ならびにかかるポリペプチドを組換え技術により生産する方法が開示されている。さらに、VANILREP2ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを治療に用いる方法、およびそのための診断アッセイも開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】発明の分野本発明は、新たに同定されたポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療の際のまたは治療
に有効でありうるアゴニスト、アンタゴニストおよび／またはインヒビターであ
る化合物を同定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの
生産方法に関する。発明の背景薬物探索プロセスには目下根本的な大変化が生じている。というのは、それが
「機能性遺伝子科学」(functional genomics)、すなわちハイスループット（高効率）のゲノムまたは遺伝子ベースの生物学に及んでいるからである。遺伝子お
よび遺伝子産物を治療の標的として同定するための手段としてのこのアプローチ
は「ポジショナルクローニング」に基づいた比較的初期のアプローチに急速に取
って代わりつつある。表現型、つまり生物学的機能または遺伝病、が同定され、
続いてその遺伝子地図の位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められるだろ
う。

【０００１】機能性遺伝子科学は、ハイスループットＤＮＡ配列決定技術および現在入手で
きる多くの分子生物学データベースから興味のもてそうな遺伝子配列を同定する
ための生物情報科学(bioinformatics)の様々なツールに大きく依存している。依
然として、まだ未解明の遺伝子およびその関連ポリペプチド／タンパク質を薬物
探索の標的として同定し特性づける必要性が存在している。発明の概要本発明は、VANILREP2、特にVANILREP2ポリペプチドおよびVANILREP2ポリヌクレオチド、組換え物質、並びにその生産方法に関する。もう一つの態様において
、本発明は、疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、術後疼痛、慢性関節リウマチ性
疼痛、神経痛、ニューロパシー、痛覚過敏、神経損傷、虚血、神経変性、発作、
失禁および炎症性障害（以後まとめて「前記疾患」という）の治療をはじめとす
る、前記ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。他の態様で
は、本発明は、本発明により提供される物質を用いてアゴニストおよびアンタゴ
ニスト／インヒビターを同定する方法、並びに同定された化合物を用いてVANILR
EP2平衡異常と関連した症状を治療することに関する。さらに他の態様において、本発明は不適当なVANILREP2活性またはVANILREP2レベルと関連した疾病を検出
するための診断アッセイに関する。発明の説明一つの態様において、本発明はVANILREP2ポリペプチドに関する。これらには、配列番号２のポリペプチドおよびその多型変異体（例えば配列番号６のポリペ
プチドPVP-1等）が含まれる。この種のペプチドには、配列番号２または配列番号６の全長にわたる配列番号２または配列番号６それぞれのアミノ酸配列に対し
て少なくとも９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有
するアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドが含まれる。こうしたポ
リペプチドとしては配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列を含むものがあ
る。

【０００２】本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸配列が配列番号２または配列番号６
の全長にわたる配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性、好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有する単離され
たポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドとしては配列番号２または配
列番号６のアミノ酸配列からなるポリペプチドがある。

【０００３】本発明の更なるペプチドには、配列番号１または配列番号５に含まれるヌクレ
オチド配列を含んでなるポリヌクレオチドによりコードされる単離されたポリペ
プチドが含まれる。

【０００４】本発明のポリペプチドはイオンチャンネルファミリーのメンバーであると考え
られる。それゆえ、それらには興味がもてる。なぜなら、それらはチリペッパー
（chillli pepper）の成分であるカプサイシン（バニロイド（vanilloid）化合物）の作用機構に関連しているからである。カプサイシンは、有害性刺激につい
ての情報を中枢神経系に伝達する感覚ニューロンを選択的に活性化することによ
り灼けつく痛みの感覚を誘発する。イオンチャンネルはカチオンに対して透過性
であり、二価カチオン、特にカルシウムイオンを優先的に透過させる。カルシウ
ムイオンの透過性のレベルは、ほとんどの非選択的カチオンチャンネルに関して
観察されるレベルを超え、NMDA型グルタミン酸受容体およびα7ニコチン性アセチルコリン受容体（双方ともこの性質が注目されている）に関して観察される値
と類似している。これらの特性を以後「VANILREP2活性」または「VANILREP2ポリ
ペプチド活性」または「VANILREP2の生物学的活性」という。これらの活性の中には、前記VANILREP2ポリペプチドの抗原性および免疫原性活性、特に配列番号２または配列番号６のポリペプチドの抗原性および免疫原性活性も含まれる。本
発明のポリペプチドはVANILREP2の少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。

【０００５】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク質の形であっても、融合タンパク質
のような、より大きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加のアミ
ノ酸配列を含めることが有利であり、このようなアミノ酸配列としては、分泌す
なわちリーダー配列、プロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列
、または組換え生産の間の安定性を確保する付加的配列などがある。

【０００６】また、前記ポリペプチドの変異体、すなわち同類アミノ酸置換（ある残基が性
質の似ている他の残基により置換される）により基準ポリペプチドと相違してい
るポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Leu
および Ileの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；
塩基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr の間で起こる。特に、
数個、５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意
の組合せで置換、欠失または付加されている変異体が好適である。

【０００７】本発明のポリペプチドは任意の適当な方法で製造することができる。このよう
なポリペプチドには、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産されたポ
リペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、またはこれらの方法の組合せに
より製造されたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【０００８】本発明の更なる態様において、本発明は、VANILREP2ポリヌクレオチドに関する。このようなポリヌクレオチドには、配列番号２または配列番号６の全長にわ
たる配列番号２または配列番号６それぞれのアミノ酸配列に対して少なくとも９
５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる
単離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同
一性を有するポリペプチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性
を有するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリペプ
チドが最も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号２ま
たは配列番号６それぞれのポリペプチドをコードする配列番号１または配列番号
５に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドが挙げられる。

【０００９】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号２または配列番号６のポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列に対して、その全コード領域にわたって、
少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポ
リヌクレオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有する
ポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性を有する
ものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド
が最も好ましいものである。

【００１０】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配列番号１または配列番号５の全長に
わたる配列番号１または配列番号５それぞれのポリヌクレオチドに対して少なく
とも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌク
レオチドが含まれる。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有するポリヌ
クレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性を有するものが
より一層好ましく、少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最も
好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとして、配列番号１または配列番
号５のポリヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチドおよび配列番号１または
配列番号５それぞれのポリヌクレオチドが挙げられる。

【００１１】本発明はまた、上記の全てのポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオ
チドを提供する。

【００１２】配列番号１または配列番号５のヌクレオチド配列はラットバニロイド受容体VR
1(M.J.Caterinaら、Nature 389:816-824, 1997)とのホモロジーを有する。配列番号１のヌクレオチド配列はcDNA配列であり、配列番号２のポリペプチドである
764アミノ酸のポリペプチドをコードするポリペプチドコード配列（ヌクレオチド5〜2296）を含む。配列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれるポリペプチドコード配列と同一であるか、または配列
番号１に含まれるものとは異なるが、遺伝的コードの重複性（縮重性）の結果と
してやはり配列番号２のポリペプチドをコードする配列である。配列番号２のポ
リペプチドは、構造的には、ラットバニロイド受容体VR1とのホモロジーおよび／または構造類似性を有する他のイオンチャンネルファミリータンパク質と関連
している(M. J. Caterinaら、Nature 389:816-824, 1997)。

【００１３】配列番号５のヌクレオチド配列はcDNA配列であり、配列番号６のポリペプチド
である763アミノ酸のポリペプチドをコードするポリペプチドコード配列（ヌクレオチド5〜2293）を含む。配列番号６のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、配列番号５に含まれるポリペプチドコード配列と同一であるか、また
は配列番号５に含まれるものとは異なるが、遺伝的コードの重複性（縮重性）の
結果としてやはり配列番号６のポリペプチドをコードする配列である。配列番号
６のポリペプチドは、構造的には、ラットバニロイド受容体VR1とのホモロジーおよび／または構造類似性を有する他のイオンチャンネルファミリータンパク質
と関連している(M. J. Caterinaら、Nature 389:816-824, 1997)。

【００１４】本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それと相
同なポリペプチドおよびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をもつこ
とが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは少なくとも１つのVANILREP2活性を有する。

【００１５】また、本発明は、配列番号１、配列番号５、配列番号２および配列番号６の対
応する全長配列の決定に先立って最初に同定された部分的なまたは他のポリヌク
レオチドおよびポリペプチドに関する。

【００１６】したがって、更なる態様において、本発明は、 (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチド配列に対して少なく
とも９５％の同一性、好ましくは９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配
列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチド配列に対して少なく
とも９５％の同一性、好ましくは９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、または (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性、好ましくは９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列からな
るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、を提供する。

【００１７】さらに、本発明は、 (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性、好ましくは９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含ん
でなるポリペプチド、 (b) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性、好ましくは９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有す
るポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、または (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、並びに配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドに
よりコードされるポリペプチド、を提供する。

【００１８】配列番号３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペプチド配列は
エクスプレスド・シーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配列か
ら誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若干のヌクレオチド配列読み取
り誤差が必然的に存在することを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 37
7 (supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペプチド配列は配列精度において同一の固有の限
界を受ける。

【００１９】本発明のポリヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリーニングに
より、ヒト胎盤、脳、心臓、メラノサイト、肝臓、脾臓、包皮、肺、甲状腺、扁
桃腺、全胚、ジャーカット（Jurkat）T細胞、B細胞、精巣の細胞中のｍＲＮＡか
ら誘導されたｃＤＮＡライブラリーから得ることができる（Sambrookら、Molecu
lar Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory
Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989）等)。また、本発明のポリヌクレオチ
ドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から得ることができ、商業的に入
手可能な公知の技法を用いて合成することもできる。

【００２０】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリペプチドの組換え体生産のために用
いる場合、そのポリヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、ま
たは他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌配列、プレ−、プロ−もし
くはプレプロ−タンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの
）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドのコード配列が含まれ
る。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列がコードされ得
る。本発明のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、ｐＱＥベクタ
ー(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gentzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (
1989) 86:821-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、またはＨ
Ａタグである。また、このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例えば
、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２１】本発明の更なる具体例としては、数個、例えば５〜１０個、１〜５個、１〜３
個、１〜２個、または１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付
加されている、配列番号２または配列番号６それぞれのアミノ酸配列を含んでな
るポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチドがある。

【００２２】配列番号１または配列番号５それぞれに含まれるヌクレオチド配列と同一であ
るか十分に同一であるポリヌクレオチドは、本発明のポリペプチドをコードする
全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１または
配列番号５に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒト起源のパラログ体
(paralogs)ならびにヒト以外の種に由来するオーソログ体(ortholog)およびパラ
ログ体をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する
ために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとし
て、または核酸増幅（ＰＣＲ）反応用のプライマーとして用いることができる。
一般的に、これらのヌクレオチド配列は基準のヌクレオチド配列と７０％、好ま
しくは８０％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％同一である。プロ
ーブまたはプライマーはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含み、好ましくは
３０個以上を含み、５０個以上のヌクレオチドを有していてもよい。特に好まし
いプローブは３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。特に好ま
しいプライマーは２０〜２５個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００２３】本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由来する相同体を含む）をコードする
ポリヌクレオチドは、配列番号１または配列番号５のヌクレオチド配列またはそ
の断片を有する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件下で適当なライブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配列
を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる方法に
より得られる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に公知である。
好ましいストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、50% ホルムアミド
、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム
(pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪
断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２℃で一夜インキュベートし、次いで
フィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄することを含む。かくして、本発明は
、配列番号１または配列番号５のヌクレオチド配列またはその断片を有する標識
プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当な
ライブラリーをスクリーニングすることにより得られるポリヌクレオチドをも包
含する。

【００２４】当業者には理解されるように、多くの場合、ポリペプチドをコードする領域が
そのｃＤＮＡの5'末端で短く切断されることから、単離されたｃＤＮＡ配列は不
完全であるだろう。それは逆転写酵素のためであり、この酵素はもともと「プロ
セシビティ」（processivity：重合反応中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の
能力の尺度）が低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳型のＤＮＡコピーを
完成させることができない。

【００２５】全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃＤＮＡを伸長させるための、当業者
に公知で利用可能な方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法（Ｒ
ＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohmanら, PNAS USA 85, 8998-9002,
1988を参照のこと）。例えばMarathon^TM技術(Clontech Laboratories Inc.)により示されるような、上記技法の最近の改良により、より長いｃＤＮＡの検索が
大いに簡便化された。Marathon^TM技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡ
からｃＤＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結する。続いて、遺伝
子特異的およびアダプター特異的なオリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用
いて核酸増幅（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅する。次に、
「nested」プライマー、すなわち増幅産物の内部にアニールするように設計され
たプライマー（典型的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールするアダプ
ター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさらに5'側にアニールする遺伝子
特異的プライマー）を用いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物を
ＤＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃＤＮＡに直接結合するか
、または5'プライマー設計用の新たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うこ
とにより、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００２６】本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界で公知の方法を用いて、発現系を含
有する遺伝子操作宿主細胞から生産することができる。したがって、更なる態様
において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレオチドを含有する発現系、該
発現系により遺伝子操作された宿主細胞、および組換え法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡを用いてこの
種のタンパク質を生産するために、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００２７】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌクレオチドの発現系またはその一部
を組み込むために宿主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチドの
導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Biology (1986) および Sambro
okら、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbo
r Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989）などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方法により行うことができる。好適なこうした方
法として、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキス
トラン媒介トランスフェクション、トランスベクション(transvection)、マイク
ロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポ
レーション、形質導入、スクレープローディング(scrape loading)、弾丸導入(b
allistic introduction)または感染などがある。

【００２８】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞（例：ストレプトコッカス(Strepto
cocci)、スタフィロコッカス(Staphylococci)、大腸菌(E.coli)、ストレプトミセス(Streptomyces)、枯草菌(Bacillus subtilis)）、真菌細胞（例：酵母、アスペルギルス(Aspergillus)）、昆虫細胞（例：ドロソフィラ(Drosophila)Ｓ２、スポドプテラ(Spodoptera)Ｓｆ９細胞）、動物細胞（例：ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｈ
ｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 293、Bowes メラノーマ細胞）および
植物細胞が挙げられる。

【００２９】多種多様な発現系を使用することができる。こうした発現系として、特に、染
色体、エピソームおよびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由来、バク
テリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入因子由来
、酵母染色体エレメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよ
うなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮
性狂犬病ウイルス、レトロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せに
由来するベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプラスミドとバク
テリオファージの遺伝的要素に由来するものがある。これらの発現系は発現を起
こさせるだけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般的に、宿
主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現
することができる系またはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecula
r Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載されるような、日常的に用いら
れる公知の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入する
ことができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細胞周辺腔に、または
細胞外の環境に分泌させるために、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに
組み込むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに対して内因性
であっても、異種シグナルであってもよい。

【００３０】スクリーニングアッセイで使用するため本発明のポリペプチドを発現させよう
とする場合、一般にそのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先立って細胞を回収する。
該ポリペプチドが培地に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その細胞をまず溶解し、そ
の後にポリペプチドを回収する必要がある。

【００３１】組換え細胞培養物から本発明のポリペプチドを回収し精製するには、硫酸アン
モニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマト
グラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含めた公知の方法を用いるこ
とができる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる
。ポリペプチドが細胞内合成、単離および／または精製中に変性されるときは、
タンパク質を再生させるための公知の技法を用いて、活性のあるコンフォメーシ
ョンを復元することが可能である。

【００３２】本発明はまた、診断薬としての本発明のポリヌクレオチドの使用に関する。機
能障害と関連した、配列番号１または配列番号５それぞれのポリヌクレオチドに
より特徴づけられる遺伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現ま
たは空間的もしくは時間的に変化した発現により生ずる疾病またはその疾病への
罹りやすさの診断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツールを提供
するだろう。該遺伝子に突然変異がある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレ
ベルで見つけ出すことができる。

【００３３】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血液、尿、唾液、組織の生検または剖
検材料由来の細胞から得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用
してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使ってゲノムＤＮＡを酵素的
に増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる
。欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイ
ズの変化により検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識VANILREP2ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッチした配列とミ
スマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区別
できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲルでのＤ
ＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、または直接ＤＮＡ塩基配列決定によ
っても検出できる（例えば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクションアッセイ（例えば、Ｒ
ＮアーゼおよびＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確認できる
（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-4401を参照のこと）
。別の実施態様では、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行うた
め、VANILREP2ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイ(array)を構築することができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含めた分子遺
伝学のさまざまな問題を解きあかすために用いられている（例えば、M. Cheeら,
Science, Vol.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００３４】診断アッセイは、前記の方法によりVANILREP2遺伝子の変異を検出することで、前記疾患への罹りやすさを診断または判定する方法を提供する。さらに、被験
者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍＲＮＡのレベルの異常な低下
または増加を測定する方法により、前記疾患の診断を下すことができる。発現の
低下または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定量法、例えば核酸増幅
（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッテ
ィング、その他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲＮＡレベルで測
定することができる。宿主から得られたサンプル中の本発明ポリペプチドのよう
なタンパク質のレベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られている。こう
したアッセイ法として、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタン
ブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００３５】かくして、もう一つの態様において、本発明は、 (a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１または配列番号５そ
れぞれのヌクレオチド配列）もしくはその断片、 (b) (a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、 (c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２または配列番号６それぞ
れのポリペプチド）もしくはその断片、または (d) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２または配列番号６それぞ
れのポリペプチド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関する。

【００３６】このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分
であることが理解されよう。かかるキットは疾患または疾患への罹りやすさ、特
に、疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、術後疼痛、慢性関節リウマチ性疼痛、神
経痛、ニューロパシー、痛覚過敏、神経損傷、虚血、神経変性、発作、失禁およ
び炎症性障害を診断するうえで有用である。

【００３７】また、本発明のヌクレオチド配列は染色体の位置決定にも有用である。この配
列は個々のヒト染色体上の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置とハ
イブリダイズすることができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成す
ることは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階
である。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされたら、その染色体上のそ
の配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることができる。この種のデー
タは、例えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (Johns Hopkins U
niversity Welch Medical Library からオンラインで入手可能) 中に見いだせる
。その後、同一の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連鎖解析（
物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認する。

【００３８】罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることがで
きる。罹患個体の一部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体にも
観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因である可能性がある。

【００３９】また、本発明のヌクレオチド配列は、組織の位置決定にも有用である。こうし
た技術によって、組織におけるヒトVANILREP2ポリペプチドの発現パターンを、これらをコードするｍＲＮＡを検出することで決定することができる。これらの
技術として、in situハイブリダイゼーション技術、およびヌクレオチド増幅技術(例えばＰＣＲ)が挙げられる。こうした技術は当該技術分野で周知である。こ
れらの研究の結果から、生物における該ポリペプチドの正常な機能の指標が得ら
れる。さらに、ヒトVANILREP2 ｍＲＮＡの正常な発現パターンとヒトVANILREP2 遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの発現パターンとの比較検討により、疾患
状態における突然変異ヒトVANILREP2ポリペプチドの役割、あるいは正常なヒトV
ANILREP2ポリペプチドの不適切な発現の役割についての有益な知見が得られる。
そうした不適切な発現は、時間的、空間的または単に量的な性質のものでもあり
得る。

【００４０】本発明のポリペプチド、その断片もしくは類似体、またはそれらを発現する細
胞は、本発明のポリペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原として
も使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が従来技術における他
の関連ポリペプチドに対するその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実
質的に高い親和性を示すことを意味する。

【００４１】本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣用のプロトコールを用いて、動物（
好ましくはヒト以外の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノクローナル抗体の調製に
は、連続細胞系の培養物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができる
。例を挙げると、ハイブリドーマ法 (Kohler, G.およびMilstein, C., Nature (
1975) 256:495-497)、トリオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法 (Kozborら,
Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハイブリドーマ法 (Coleら, Mo
noclonal Antibodies and Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 19
85) などがある。

【００４２】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体をつくるために、米国特許第4,946,
778号に記載されるような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動
物を含む他の生物を利用することができる。

【００４３】前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現するクローンを単離・同定した
り、アフィニティークロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製することもで
きる。

【００４４】本発明のポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、前記疾患の治療に使用でき
る可能性がある。

【００４５】本発明の更なる態様において、本発明は、本発明のポリペプチドまたはその断
片と、各種サブクラス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリンの
Ｈ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含んでなる遺伝子工学的に作製さ
れた可溶性融合タンパク質に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特に
ＩｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒンジ領域で起こる。特
定例では、血液凝固因子Ｘａで開裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部
分を簡単に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク質の遺伝子工学
的作製方法、並びに薬物スクリーニング、診断および治療におけるそれらの使用
に関する。また、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質をコードする
ポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質技術の例は国際特許出願 WO94/2945
8 およびWO94/22914に見いだせる。

【００４６】本発明の更なる態様は哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関し、
この方法は、特に前記疾患から該動物を防御するための抗体および／またはＴ細
胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチドを哺乳動物に接種すること
を含んでなる。本発明のさらに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗
体を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in vivo で本発明のポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介して該ポ
リペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き
出す方法に関する。

【００４７】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導入したとき、その哺乳動物において
本発明のポリペプチドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン製剤
（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチド
を含有する。ワクチン製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチ
ドは胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に（例えば、皮下、筋肉内
、静脈内または皮内注射により）投与することが好ましい。非経口投与に適した
製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液と等
張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または
増粘剤を含みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量
容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイアル）で提供すること
ができ、また、使用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増強するためのア
ジュバント系、例えば水中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性により変化するが、ルー
チンな実験操作により簡単に決定できる。

【００４８】本発明のポリペプチドは、多くの病的状態、特に前記疾患を含めて、さまざま
な生物学的機能に関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を刺激また
は抑制する化合物を同定するスクリーニング法を開発することが望ましい。した
がって、更なる態様において、本発明は、このポリペプチドの機能を刺激または
抑制する化合物を同定するための化合物のスクリーニング法を提供する。一般的
には、前記疾患の治療および予防目的のためにアゴニストまたはアンタゴニスト
が使用される。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学物質ライブラ
リーおよび天然産物の混合物から化合物を同定することができる。このように同
定されたアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合により、該ポ
リペプチドの天然のまたは修飾された基質、リガンド、受容体、酵素などであっ
てよく、また、その構造的または機能的なミメティックであってもよい（Coliga
nら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)を参照のこと）。

【００４９】スクリーニング法では、本発明のポリペプチド、または該ポリペプチドを担持
する細胞もしくは膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合を、候補
化合物に直接または間接的に結合された標識を用いて簡単に測定できる。あるい
はまた、スクリーニング法では標識した競合物質との競合を用いることもある。
さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合物がポリペプチドの活性化ま
たは抑制により生ずるシグナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて試験することができる。一般的には、既知
のアゴニストの存在下で活性化のインヒビターをアッセイして、アゴニストによ
る活性化に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニストまたはインヒビ
ターの不在下で、候補化合物がポリペプチドの活性化を抑制するか否かを調べる
ことによる逆アゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、構成的に
活性のあるポリペプチドが用いられる。さらに、これらのスクリーニング法は、
候補化合物と本発明のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつくり
、この混合物中のVANILREP2活性を測定し、そしてこの混合物のVANILREP2活性を
スタンダードと比較する各ステップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチ
ドのアンタゴニストを同定するハイスループットスクリーニングアッセイでは、
上記のようなＦｃ部分とVANILREP2ポリペプチドから作製されるような融合タンパク質も使用することができる(D. Bennettら, J. Mol. Recognition, 8:52-58
(1995) およびK. Johansonら, J. Biol. Chem., 270(16):9459-9471 (1995)を参
照のこと）。

【００５０】また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは該ポリペプチドに対す
る抗体を用いて、細胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添加化
合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組み立てることができる。例え
ば、当業界で公知の標準方法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を
用いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するためのＥＬ
ＩＳＡアッセイを構築することができ、これは適切に操作された細胞または組織
からのポリペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニスト
またはアゴニストともいう）の探索に用いることができる。

【００５１】膜に結合した受容体または可溶性の受容体が存在するのであれば、当業界で公
知の標準的な受容体結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明のポリ
ペプチドを用いることができる。こうした受容体結合法には、限定するものでは
ないが、リガンド結合アッセイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修
飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適したペプチド配列に融合さ
せ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など
）とインキュベートする。その他の方法としては、表面プラズモン共鳴および分
光学のような生物物理的方法がある。これらのスクリーニング法は、該ポリペプ
チドまたは（存在するのであれば）その受容体への結合と競合する該ポリペプチ
ドのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために用いることもできる。ス
クリーニングアッセイを行うための標準的な方法は当業界でよく理解されている
。

【００５２】本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴニストの例としては、抗体、ある場
合には、該ポリペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係があ
るオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの断片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子などがある。

【００５３】かくして、他の態様において、本発明は、本発明のポリペプチドのアゴニスト
、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポリペ
プチドの産生を低下または増加させる化合物を同定するためのスクリーニングキ
ットに関し、このキットは、 (a) 本発明のポリペプチド、 (b) 本発明のポリペプチドを発現している組換え細胞、 (c) 本発明のポリペプチドを発現している細胞膜、または (d) 本発明のポリペプチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチドは好ましくは配列番号２または配列番号６のポ
リペプチドである。

【００５４】このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分
であることが理解されよう。

【００５５】当業者であれば、本発明のポリペプチドは、その構造に基づいて該ポリペプチ
ドのアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも使用で
きることが容易に理解されよう。この方法は、 (a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、 (b) アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実と思われる反応部
位または結合部位の三次元構造を想定し、 (c) 想定された反応部位または結合部位と結合または反応すると予想される候
補化合物を合成し、そして (d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビター
であるか否かを調べる、ことを含んでなる。これは通常反復プロセスであることがさらに理解されよう。

【００５６】更なる態様において、本発明は、VANILREP2ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係した、例えば本発明は、疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、
術後疼痛、慢性関節リウマチ性疼痛、神経痛、ニューロパシー、痛覚過敏、神経
損傷、虚血、神経変性、発作、失禁および炎症性障害の治療法を提供する。

【００５７】該ポリペプチドの活性が過剰である場合は、いくつかのアプローチが利用可能
である。一つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの結
合をブロックすることにより、または第２のシグナルを抑制することで異常な状
態を軽減することにより、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、上
記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに
患者に投与することを含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペ
プチドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと結合する能力がまだ
ある可溶性形態のポリペプチドを投与することができる。このような競合物質の
典型的な例はVANILREP2ポリペプチドの断片である。

【００５８】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を使って内因性VANILREP2ポリペプチドをコードする遺伝子の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、体
内で産生されるか外部から投与されるアンチセンス配列の使用を必要とする（例
えば、Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (
遺伝子発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリゴデオキシヌクレオチド),
CRC Press, Boca Raton, FL (1988) 中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:5
60を参照のこと）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重らせん(トリプレックス)を形成するオリゴヌクレオチドを供給することもできる（例えば、Leeら, Nu
cleic Acids Res (1979) 6:3073; Cooneyら, Science (1988) 241:456; Dervan ら, Science (1991) 251:1360 を参照のこと）。これらのオリゴマーはそれ自体
を投与することもできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させることもでき
る。合成アンチセンスまたはトリプレックスオリゴヌクレオチドは修飾塩基また
は修飾骨格を含みうる。後者の例にはメチルホスホネート、ホスホロチオエート
またはペプチド核酸骨格が含まれる。そうした骨格はアンチセンスまたはトリプ
レックスオリゴヌクレオチド中に取り込まれてヌクレアーゼによる分解からの防
御を提供しており、当分野で公知である。これらの、または他の修飾骨格を用い
て合成されたアンチセンスおよびトリプレックス分子も本発明の一部を構成する
。

【００５９】さらに、ヒトVANILREP2ポリペプチドの発現は、ヒトVANILREP2 ｍＲＮＡ配列に特異的なリボザイムを用いることにより阻止することができる。リボザイムは
触媒的に活性なＲＮＡであり、天然のものでも合成されたものでも良い(例えば、Usman, Nら、Curr. Opin. Struct. Biol. (1996)6(4), 527-33を参照されたい
)。合成リボザイムは、選択した部位でヒトVANILREP2ｍＲＮＡを特異的に切断す
るように設計することができ、それによりヒトVANILREP2ｍＲＮＡから機能性ポリペプチドへの翻訳が阻止される。通常ＲＮＡ分子に見られるような天然のリボ
ースリン酸骨格および天然の塩基を用いてリボザイムを合成することもできる。
また、リボヌクレアーゼ分解からの防御を提供するために非天然骨格を用いてリ
ボザイム、例えば、2'-Ｏ-メチルＲＮＡを合成することも可能であり、該リボザ
イムは修飾塩基を含みうる。

【００６０】 VANILREP2およびその活性の過少発現に関係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプローチを取ることができる。一つのアプローチは、治療に有効
な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（すなわち、前記アゴニスト）を
製剤学上許容される担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを
含んでなる。別法として、患者の関連細胞においてVANILREP2を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いることができる。例えば、上で述べたような複製欠
損レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺伝
子操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドを
コードするＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入され
たパッケージング細胞に導入する。その結果、パッケージング細胞は対象の遺伝
子を含有する感染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作お
よびin vivo ポリペプチド発現のために、これらのプロデューサー細胞を患者に
投与する。遺伝子治療の概論に関しては、Human Molecular Genetics, T Strach
an and A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapter 20, Ge
ne Therapy and other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches(およ
びその中の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明の
ポリペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与することである。

【００６１】更なる態様において、本発明は、治療に有効な量のポリペプチド（例えば、可
溶性形態の本発明ポリペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプチド
、または小分子化合物を製剤学上許容される担体または賦形剤と共に含有する医
薬組成物を提供する。この種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロ
ース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これら
に限らない。本発明はさらに、上記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１
以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発明のポリペプチ
ドおよび他の化合物は単独で使用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と一
緒に使用してもよい。

【００６２】医薬組成物は投与経路、例えば全身または経口による投与経路に適合させるこ
とができる。全身投与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注である。
皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用できる。全身投与の別の
手段には、胆汁酸塩、フシジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経
粘膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチドまたは他の化合物を
腸溶剤またはカプセル剤として製剤化し得るのであれば、経口投与も可能である
。これらの化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投与しても、かつ
／または局在化させてもよい。

【００６３】必要な投与量範囲は、本発明のペプチドまたは他の化合物の選択、投与経路、
製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な投与
量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲である。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は
広範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静注による投与よりも高
い投与量を必要とすると予想されよう。こうした投与量レベルの変動は、当業界
でよく理解されているような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整すること
ができる。

【００６４】治療に用いるポリペプチドは、上述したような「遺伝子治療」と称する治療法
において、患者の体内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞を、
ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより
、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的
に操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００６５】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列は、類似の相同性を有する別の配
列を同定する際の価値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコンピュ
ータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデータを用いてＧＣＧのような
公知の検索ツールにより配列データベースを検索することで最大限促進される。
したがって、更なる態様において、本発明は、配列番号１または配列番号５の配
列を含んでなるポリヌクレオチドおよび／またはそれによりコードされるポリペ
プチドを保存したコンピュータ読み取り可能媒体を提供する。

【００６６】以下の定義は上記の説明中でしばしば用いられた用語を理解しやすくするため
のものである。

【００６７】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体
、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリ
ン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。

【００６８】「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によって」改変されたことを
意味する。「単離された」組成物または物質が天然に存在するのであれば、それ
はそのもとの環境から変化しているか分離されており、またはその両方である。
例えば、生存している動物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物質から分離
されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書中で用いられるように
、「単離された」ものである。

【００６９】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデ
オキシリボヌクレオチドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ
、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得る。「ポリヌクレオチド」に
は、制限するものではないが、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖
領域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡとＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも
、またはより典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合っ
たものでもよい）が含まれる。加えて、「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤ
ＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポリヌクレ
オチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ
、および安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲ
ＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチル化された塩基およびイノ
シンのような特殊な塩基がある。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を
行うことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界に一般的に存在
するポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、並びに
ウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。ま
た、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される比較的短
いポリヌクレオチドも包含する。

【００７０】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合（すなわ
ち、ペプチドアイソスター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペプチ
ドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」は短鎖（通常はペプチド、オ
リゴペプチドまたはオリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）
の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化アミノ酸以外のアミノ
酸を含んでもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプ
ロセスで、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修飾されたアミノ酸
配列を含む。このような修飾は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究
文献に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまたはカル
ボキシル末端を含めてポリペプチドのどこでも行うことができる。同じタイプの
修飾が所定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異なる
程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチドが多くのタイプの修飾を含ん
でいてもよい。ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のあ
る又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、または分枝した環状のポリ
ペプチドは翻訳後の天然プロセスから生じることがあり、また、合成法によって
製造することもできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシ
ル化、アミド化、ビオチン化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌク
レオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結
合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合の
形成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの
形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、
ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解
プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アル
ギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化
などがある（例えば、Proteins - Structure and Molecular Properties, 2nd E
d., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, New York, 1993; Posttransl
ational Covalent Modification of Proteins, B.C. Johnson編, Academic Pres
s, New York, 1983中のWold, F., Post-translational Protein Modifications:
Perspectives and Prospects, pgs. 1-12; Seifterら, “Analysis for protei
n modifications and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (1990) 182:626-6
46; および Rattanら, “Protein Synthesis: Post-translational Modificatio
ns and Aging", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62 を参照のこと）。

【００７１】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、不可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変異体は基準ポリヌクレオチド
とヌクレオチド配列の点で相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、
基準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変更
しても、しなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、以下で述べるように、基準配
列によりコードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付加、融合および
末端切断（トランケーション）をもたらしうる。典型的なポリペプチドの変異体
は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準ポリペプ
チドの配列と変異体の配列が全般的によく類似しており、多くの領域で同一とな
るような相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１以
上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違していてよい。置換または付加
されるアミノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっても、なくて
もよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はアレル変異体のように
天然に存在するものでも、天然に存在することが知られていない変異体であって
もよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない変異体は、突
然変異誘発法または直接合成により作製することができる。

【００７２】当技術分野で知られた「同一性」とは、ポリペプチド配列またはポリヌクレオ
チド配列の比較により決定された、２以上のかかる配列間の関連性のことである
。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配列またはポリヌクレオチド
配列の鎖間のマッチ(match)により決定された、このような配列間の配列関連性の程度を意味する。「同一性」および「類似性」は公知の方法により難なく算出
することができ、こうした方法として、例えば Computational Molecular Biolo
gy, Lesk, A.M.編, Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing:
Informatics and Genome Projects, Smith, D.W. 編, Academic Press, New Yo
rk, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. and
Griffin, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in M
olecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysi
s Primer, Gribskov, M. and Devereux, J. 編, M Stockton Press, New York,
1991; および Carillo, H. and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073
(1988) に記載された方法があるが、これらに限らない。同一性を決定するため
の好ましい方法は、検討する配列間で最大級のマッチが得られるように設計され
る。さらに、同一性および類似性を決定する方法は一般に入手可能なコンピュー
タプログラムに編集されている。２配列間の同一性および類似性を決定する好適
なコンピュータプログラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Devereux
, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (1984))、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳ
ＴＮおよびＦＡＳＴＡ (Atschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (1990
)) があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴＸプログラムはＮＣＢＩおよび他
のソースから一般に入手可能である (BLAST Manual, Altschul, S.ら, NCBI NLM
NIH Bethesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 215: 403-410 (199
0))。公知のSmith Watermanアルゴリズムも同一性の決定に使用することができる。

【００７３】ポリペプチド配列を比較するための好適なパラメーターは次のものを含む：１）アルゴリズム：Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970)；比較マトリックス：BLOSSUM62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Aca
d. Sci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：12 ギャップ長ペナルティー：４これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Genetics Computer Group
(Madison WI)から「ｇａｐ」プログラムとして一般に入手可能である。前記のパ
ラメーターはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(default parameter
) である（末端ギャップのペナルティーは無し）。

【００７４】ポリヌクレオチド配列を比較するための好適なパラメーターは次のものを含む
：１）アルゴリズム：Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443-453 (1970)；比較マトリックス：マッチ＝＋10、ミスマッチ＝０ギャップペナルティー：50 ギャップ長ペナルティー：３これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Genetics Computer Group
(Madison WI)から「ｇａｐ」プログラムとして入手可能である。これらのパラメ
ーターは核酸比較のためのデフォルトパラメーターである。

【００７５】例として、本発明のポリヌクレオチド配列は配列番号１または配列番号５の基
準配列と同一、すなわち100％同一であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのヌクレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なくとも１個のヌ
クレオチドの欠失、置換（トランジションおよびトランスバージョンを含む）ま
たは付加よりなる群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配列の5'も
しくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の間のどこに存在してもよく、基準
配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグル
ープとして介在することができる。ヌクレオチド変異の数は、配列番号１または
配列番号５のヌクレオチドの総数に、それぞれの（100で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番号１または配列番号５のヌクレオチドの総数から差し引く
ことにより、すなわち、次式：ｎ_n ≦ｘ_n −（ｘ_n・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_nはヌクレオチド変異の数であり、ｘ_nは配
列番号１または配列番号５のヌクレオチドの総数であり、ｙは例えば70％につい
ては0.70、80％については0.80、85％については0.85、90％については0.90、95
％については0.95などであり、ｘ_nとｙの非整数の積は、その積をｘ_nから引く前
に、最も近似する整数に切り下げる。配列番号２または配列番号６のポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセンス、
ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさせ、それにより、こうした変
異後に該ポリヌクレオチドによりコードされたポリペプチドを改変させることが
できる。

【００７６】同様に、本発明のポリペプチド配列は配列番号２または配列番号６の基準配列
と同一、すなわち100％の同一性であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミノ酸変異を含んで同一性％が100％未満であってもよい。前記変異は少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換（同類および非同類アミノ酸置換を含む
）または付加よりなる群から選択され、こうした変異は基準ポリペプチド配列の
アミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこれらの末端位置の間のいずれに存
在してもよく、基準配列中のアミノ酸の間に個々に、または基準配列内に１以上
の連続するグループとして介在することができる。所定の同一性％についてのア
ミノ酸変異の数は、配列番号２または配列番号６のアミノ酸の総数に、それぞれ
の（100で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番号２または配列番号６のアミノ酸の総数から差し引くことにより、すなわち、次式：ｎ_a ≦ｘ_a −（ｘ_a・ｙ）により求めることができる。式中、ｎ_aはアミノ酸変異の数であり、ｘ_aは配列番
号２または配列番号６中のアミノ酸の総数であり、ｙは例えば70％については0.
70、80％については0.80、85％については0.85などであり、ｘ_aとｙの非整数の積は、その積をｘ_aから引く前に、最も近似する整数に切り下げる。

【００７７】「相同体」とは、対象の配列に対して高度の配列関連性を有するポリヌクレオ
チドまたはポリペプチド配列を示すための当技術分野で使用される一般的な用語
である。こうした関連性は、上記のような比較すべき配列間の同一性および／ま
たは類似性の程度を決定することにより定量化できる。別の種におけるポリヌク
レオチドまたはポリペプチドの機能的等価物であるポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドを意味する「オーソログ体」(ortholog)、および同一の種内で考えると
きに機能的に類似した配列を意味する「パラログ体」(paralog) という用語はこ
の一般的な用語に含まれる。

【００７８】「融合タンパク質」とは、２つの、しばしば無関係の、融合された遺伝子また
はその断片によりコードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A-0 4
64には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部分と他のヒトタンパク質また
はその一部とを含んでなる融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療
および診断における使用には、融合タンパク質の一部として免疫グロブリンＦｃ
領域を使用することが有利であり、これにより例えば薬物速度論的性質が向上す
る（例えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつかの使用にとっては
、その融合タンパク質を発現させ、検出し、精製した後でＦｃ部分を除去するこ
とが望ましいだろう。実施例 VANILREP2 mRNA発現の解析を、単球からマクロファージへの成熟の間、および
、痛覚過敏に関与し得るような炎症メディエーターに対して応答する、単核食細
胞系統の細胞中において評価した。

【００７９】単球を、向流遠心洗浄（counter-current centrifugal elutriation）により、Stevensonら(1983)の方法の改良方法を使って調製した。単核白血球を、ヒストパク(Histopaque)を介した密度勾配遠心を使って精製した。収集した細胞を、
2%自己由来血清を補充したカルシウムまたはマグネシウム不含PBS中に再懸濁させ、洗浄チャンバー中にローディングした。向流の速度を漸増させ、単球をそれ
らの濃度が95%に達した時に回収したが、典型的には流速18ml/分の時であった。
続いて単球を2%ヒト血清を補充したRPMI中で培養した。C13細胞を、グルタミンおよび10%ウシ胎児血清を補充したDMEM中で培養し、1ng/mlのIL-1αまたはビヒクルのいずれかで24時間にわたり処理した。適切な時間においてトリゾール(Tri
zol)を使って細胞を回収し、製造者の指示に従ってRNAを単離した。RNAをSupers
criptIIを使って逆転写させ、その結果得られたcDNAをタックマン(Taqman)アッセイにおいて使用した。サンプルcDNAおよび適切な無RT対照を、タックマンプラ
イマー/プローブを含む25μｌの最終反応容量へと添加し、Perkin Elmer 7700 T
aqman machineで40サイクル処理した。サンプル中で3種類の異なるハウスキーピ
ング遺伝子（酸性リボソームホスホプロテインPO(36B4)、ヒポキサンチン-グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HPRT）およびグリセルアルデヒド-3- リン酸脱水素酵素(GAPDH)）を測定した。目的の転写物各々を3種類のハウスキー
ピング遺伝子全てに関して正規化した(Stevenson, H.Cら、J. Immun. Methods 6
2(1983) 353-363)。

【００８０】 VANILREP2の発現は、単球において、4日後にマクロファージへの単球の成熟の
過程で、アップレギュレートされることが判明した。VANILREP2はまた、C13細胞
においても、24時間にわたる1ng/mlのIL-1αへの曝露に続いてアップレギュレー
トされた。

【００８１】本明細書中に引用された、特許および特許出願明細書を含めた全ての刊行物は
、あたかも各刊行物が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体を参
考としてここに組み入れるものとする。配列情報配列番号１配列番号２配列番号３配列番号４上記において、配列番号４は、記号「Query」で示した１以上の任意の配列を指す。記号「Sbjct」は基準配列、ラットバニロイド受容体VR1(AF029310)を指す。配列番号５（VANILERP2の多型変異体PVP-1）配列番号６（VANILERP2の多型変異体PVP-1）

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｑ 1/68 5/00 Ａ (31)優先権主張番号９９０１２０９．８ (32)優先日平成11年１月20日(1999．1．20) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ (72)発明者デイビス，ジョン，ベレスフォードイギリス国シーエム19 ５エーダブルエセックス，ハーロー，サードアベニュー，ニューフロンティアーズサイエンスパークサウス，スミスクラインビーチャムファーマシューティカルズ（番地なし) (72)発明者ダックワース，デイビッド，マルコムイギリス国シーエム19 ５エーダブルエセックス，ハーロー，サードアベニュー，ニューフロンティアーズサイエンスパークサウス，スミスクラインビーチャムファーマシューティカルズ（番地なし) (72)発明者ヘイエス，フィリップ，デイビッドイギリス国シーエム19 ５エーダブルエセックス，ハーロー，サードアベニュー，ニューフロンティアーズサイエンスパークサウス，スミスクラインビーチャムファーマシューティカルズ（番地なし)

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２または配列番号6それぞれの全長にわたる配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有す
るアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチド。
【請求項２】アミノ酸配列が少なくとも９８％の同一性を有する、請求項
１に記載のポリペプチド。
【請求項３】配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列を含んでなる、
請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列からなる、単離
されたポリペプチド。
【請求項５】配列番号２または配列番号６それぞれの全長にわたる配列番
号２または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有す
るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌク
レオチド、または該ポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリ
ヌクレオチド。
【請求項６】配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有す
るヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌ
クレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。
【請求項７】配列番号１または配列番号５それぞれの全長にわたる配列番
号１または配列番号５のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を
有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド、または該ポ
リヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド。
【請求項８】前記の同一性が少なくとも９８％である、請求項５〜７のい
ずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】以下の(a)〜(c)から選択される単離されたポリヌクレオチド
、または該ポリヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオ
チド： (a) 配列番号２または配列番号６のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号１または配列番号５のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチ
ド、および (c) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
下で、配列番号１または配列番号５のヌクレオチド配列またはその断片を有する
標識プローブを用いてスクリーニングすることにより得られるポリヌクレオチド
。
【請求項１０】下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在するとき請求項１
に記載のポリペプチドを産生し得るポリヌクレオチドを含有する発現系。
【請求項１１】請求項１０に記載の発現系を含有する宿主細胞、または請
求項１に記載のポリペプチドを発現しているその膜。
【請求項１２】請求項１に記載のポリペプチドを産生させるのに十分な条
件下で請求項１１に記載の宿主細胞を培養し、この培養培地から該ポリペプチド
を回収することを含んでなる、請求項１に記載のポリペプチドの生産方法。
【請求項１３】請求項１に記載のポリペプチドに対して免疫特異的な抗体
。
【請求項１４】請求項１に記載のポリペプチドの機能を刺激または抑制す
る化合物を同定するためのスクリーニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直
接または間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプチドを担持している細
胞もしくはその膜）またはその融合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存
在下で測定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグナルを
もたらすか否かを、該ポリペプチドを担持している細胞または細胞膜に適した検
出系を用いて調べること、 (d) 候補化合物と、請求項１に記載のポリペプチドを含有する溶液と、を一緒
にして混合物を調製し、該混合物中の該ポリペプチドの活性を測定し、該混合物
の活性をスタンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコードするｍＲＮＡおよび該
ポリペプチドの産生に及ぼす効果を検出すること、よりなる群から選択される方法を含んでなるスクリーニング法。
【請求項１５】被験者における請求項１に記載のポリペプチドの発現また
は活性に関連した疾病または該疾病への罹りやすさを検査する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に突
然変異があるか否かを調べること、および／または (b) 該被験者から得られたサンプルにおける該ポリペプチド発現の存在または
量を分析すること、を含んでなる方法。
【請求項１６】以下の(a)〜(d)から選択される単離されたポリヌクレオチ
ド： (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチド配列に対して少なく
とも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、および (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
【請求項１７】以下の(a)〜(e)から選択される単離されたポリペプチド： (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、 (b) アミノ酸配列が配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対
して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、 (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、および (e) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドに
よりコードされるポリペプチド。