JPH11178595A - 菌体からの色素の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 光合成細菌の菌体に水溶性有機溶媒を加
えて得られた抽出液に水及び脂溶性有機溶媒を加え、得
られた脂溶性有機溶媒相をシリカゲルに接触させバクテ
リオクロロフィルを得、この後、該シリカゲルに塩素系
溶媒を接触させカロチノイドを溶出、分離し、水及び脂
溶性有機溶媒を加えて得られた水溶性有機溶媒相をシリ
カゲルに接触させ、アルコールでポルフィリンを溶出、
分離することを特徴とする光合成細菌の色素の分離法。 【効果】 光合成細菌から種々の色素を効率よく分離す
ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、光合成細菌の菌体
から生理活性物質等として有用な天然物カロチノイド、
ポルフィリン、コエンザイム等の色素の分離精製方法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】光合成細菌によって蓄積されるノイロス
ポレン、メチルクロロキサンチン、クロロキサンチン、
３，３′，４，４′，７′，８′−ヘキサヒドロスピリ
ロキサンチン、１′−ヒドロキシ−３，４，１′，２′
−テトラヒドロスファロイデン、ヒドロキシスファロイ
デンは、天然物カロチノイドとして光合成細菌にのみ蓄
積される希少なカロチノイドで、それらは、アポトーシ
ス誘導による癌抑制効果を有することが明らかにされて
いる。また、蓄積されるその他の色素であるポルフィリ
ンやコエンザイムＱ１０もＰＤＴ治療、強心剤としての
用途が知られており、これらは医薬品、食品、医薬部外
品、滋養物の業界で多目的に用いることができる。

【０００３】光合成細菌の菌体からの色素の抽出方法と
しては、従来から有機溶媒等を用いて菌体から色素を転
溶させる方法があり、近年、培養物にメタノールを加え
超音波破砕処理し塩化メチレン−メタノール混合溶媒に
より抽出する方法（特開平６−２２７８８号）、エタノ
ールを助溶媒とするアスタキサンチンの超臨界二酸化炭
素抽出（特開平８−１４０６９５号）、水溶性溶剤と脂
溶性溶剤を混合処理させることによる抽出方法（特開平
９−４８９２７号）などが報告されている。

【０００４】しかしながら上記のいずれの方法も、得ら
れた抽出物は、複数の色素の混合物であり、しかも他の
夾雑物を含むものであった。

【０００５】一方、色素の一つであるクロロフィルの分
離に関しては、二酸化炭素を使用した超臨界流体抽出に
よる方法（特公平５−２７６１９号）、藍藻からクロロ
フィルを沈殿により分離する方法（特開平６−２７１７
８３号）などがあるが、光合成細菌由来の複数の色素を
同時に分離精製する場合、分離方法が複雑になり、沈殿
による分離方法ではクロロフィルの他にポルフィリンも
同時に沈殿するうえ、上清にも微量のクロロフィルやポ
ルフィリンが混入するという問題がある。

【０００６】また、カロチノイド類は、それぞれの物理
的性質が互いに極めて類似しているため、これらの分離
精製は容易ではない。

【０００７】脂肪酸などの生理活性物質の分離には従来
真空蒸留法（特開昭６３−２９５５５号）が用いられて
いるが、カロチノイドや高度不飽和脂肪酸などは、熱に
不安定であるためこの操作温度では使用が困難である。
また、上記色素のＨＰＬＣによる分取法も実験室規模で
検討されているが、溶離液からの溶質の回収や充填物の
交換等を要するため、必ずしも低濃度の原料からの分離
精製には経済的な方法とはいえない。一般的に分析用の
クロマトグラフィーでは、精製度、定量性を第一目的と
し、分離能を高めるために高価で粒度が細かい充填剤及
び複雑な混合溶媒を使用している。このような分析方法
を、工業的な精製方法としてスケールアップした場合に
は、充填剤の粒度の細かさによる非常な圧力損失、試料
の負荷量を大きくするためには大きな装置容量が必要で
ある。また、１バッチ当たりの所要時間が長いなどの問
題がある。それを解消すべくシリカゲル又は活性アルミ
ナを吸着剤とする開口クロマトグラフィー精製による方
法に関して、特公昭５４−３７９６５号、特開昭６２−
２４１９７０号、特開昭６３−９１３６０号、特開平１
−１６０９５３号などの種々の方法が開示されている。

【０００８】しかしながら、いずれの方法によっても、
前記した如く光合成細菌由来の色素は、同族体が多く、
物性が極めて似ているため、効率よく分離精製できなか
った。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明の目的
は、光合成細菌の菌体から、種々の色素を高純度かつ効
率よく分離精製し得る方法を提供することにある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】斯かる実状に鑑み本発明
者らは鋭意研究を行ったところ、水溶性有機溶媒を用い
た溶媒抽出法、脂溶性有機溶媒を用いた溶媒抽出法、特
定の粒径のシリカゲルと含塩素系溶媒を用いたクロマト
グラフィーを組合わせることにより、光合成細菌の種々
の色素を効率よく分離精製することができることを見出
し、本発明を完成した。

【００１１】すなわち、本発明は、光合成細菌の菌体か
ら水溶性有機溶媒で色素を抽出し、得られた抽出液に水
及び脂溶性有機溶媒を加え、生じた脂溶性有機溶媒相を
粒径５０〜２５００μｍのシリカゲルに接触させた後、
該シリカゲルから塩素系溶剤で溶出させることを特徴と
するカロチノイド類の分離方法を提供するものである。

【００１２】また、本発明は、光合成細菌の菌体から水
溶性有機溶媒で色素を抽出し、得られた抽出液に水及び
脂溶性有機溶媒を加え、得られた脂溶性有機溶媒相を粒
径５０〜２５００μｍのシリカゲルに接触させ、シリカ
ゲルへの非吸着成分を採取することを特徴とするバクテ
リオクロロフィルの分離方法を提供するものである。

【００１３】更に、本発明は、光合成細菌の菌体から水
溶性有機溶媒で色素を抽出し、得られた抽出液に水及び
脂溶性有機溶媒を加え、得られた水溶性有機溶媒相を粒
径５０〜２５００μｍのシリカゲルに接触させた後、ア
ルコールで溶出することを特徴とするポルフィリンの分
離方法を提供するものである。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明に用いる光合成細菌は、特
に限定されず、例えば、紅色非硫黄細菌（Ｒｈｏｄｏｂ
ａｃｔｏｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ，Ｒｈｏｄｏｂａ
ｃｔｏｒ ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）、紅色硫黄細菌（Ｃｈ
ｒｏｍａｔｉｕｍ）や、これらの変異株を挙げることが
できる。

【００１５】培養した菌体は、遠心分離法等により集菌
し、これに水溶性有機溶媒を加えて色素を抽出する。こ
こで用いる水溶性有機溶媒としては、例えば、メタノー
ル、エタノール、ｎ−プロパノール、２−プロパノール
等の低級アルコールが挙げられ、これらは１種でも２種
以上混合して用いてもよい。ここでの色素の抽出は、集
菌した菌体に上記溶媒を加え懸濁し、この後、遠心分離
法により菌体を分離して行うことが好ましい。

【００１６】次に得られた上清に、水及び脂溶性有機溶
媒を加えるが、この水の量は、上記水溶性有機溶媒に対
し０．０１〜１容量倍とすることが好ましく、０．０５
〜０．２容量倍とすることが特に好ましい。

【００１７】脂溶性有機溶媒としては、鎖状又は環状の
飽和炭化水素系溶媒、エーテル系溶媒が好ましく、例え
ばｎ−ペンタン、シクロペンタン、ｎ−ヘキサン、シク
ロヘキサン、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、メ
チルエチルエーテル等を挙げることができ、これらは１
種でも２種以上を混合して用いてもよい。脂溶性有機溶
媒の使用量は、前記の水溶性溶媒量の１〜１０容量倍と
することが好ましく、１〜２容量倍とすることが特に好
ましい。脂溶性有機溶媒を加えることにより、カロチノ
イド類の色素をこれに転溶させることができ、水溶性の
夾雑物やポルフィリンを水溶性溶媒中に残すことができ
る。

【００１８】脂溶性溶媒相中の色素混合物は、真空蒸留
にて濃縮してもよい。その後、開口カラム等に充填した
シリカゲル吸着剤に色素混合物を通すと、バクテリオク
ロロフィルのみが吸着せずに通過し、これ以外の色素類
はシリカゲルに吸着するため、バクテリオクロロフィル
のみを分離することができる。ここで用いるシリカゲル
吸着剤の粒径は比較的大きい方が良いが、後のカロチノ
イドの分離は粒径が小さい程分離能が高まるため、これ
らを同一カラムで行う場合は、シリカゲル吸着剤の粒径
は５０〜２５００μｍが好ましく、５０〜１０００μｍ
が特に好ましい。バクテリオクロロフィルは、具体的に
はシリカゲルカラムから前記脂溶性溶媒で溶出でき、得
られた溶液を室温で真空蒸留により溶媒を除去すること
により単離することができる。

【００１９】次に、バクテリオクロロフィル以外の色素
が吸着したシリカゲルに塩素系溶剤を接触させ、カロチ
ノイド類等の色素を溶出させる。ここで用いる塩素系溶
媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭
素、ジクロロエタン及びトリクロロエタン等のクロロア
ルカンが挙げられ、これらは１種でも２種以上を混合し
て用いてもよい。シリカゲルからノイロスポレン、メチ
ルクロロキサンチン、コエンザイムＱ１０、クロロキサ
ンチン、３，３′，４，４′，７′，８′−ヘキサヒド
ロスピリロキサンチン、１′−ヒドロキシ−３，４，
１′，２′−テトラヒドロスファロイデン、ヒドロキシ
スファロイデンが溶出してくるが、溶出順序は使用する
溶媒により異なる。また、分画しても同一のフラクショ
ン内に複数のカロチノイドが混在してくる場合があり、
当然、各フラクションに混在するカロチノイドの組合わ
せは使用する溶媒によって変わってくる。従って、回収
したフラクションのうち、複数のカロチノイドを含むフ
ラクションは、溶媒を真空蒸留除去し、カロチノイドを
吸着させるのに適した溶媒（ヘキサン等）に溶解させ、
再びシリカゲル吸着剤を充填した開口カラムに吸着さ
せ、カラムクロマトグラフィーを行う。この時、溶出溶
媒は上記で使用した以外のもので、ジクロロメタン、ク
ロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン及びトリクロ
ロエタンからなる群から任意に選択された１種又は２種
以上の含塩素系溶媒を使用することにより、上記で単離
できなかったカロチノイド類を分離精製することができ
る。溶出によって回収されたフラクション中の溶媒は室
温で真空蒸留除去し、カロチノイドが単離できるまで上
記の操作を繰り返し行う。好ましくは、２〜３回繰り返
し行う。

【００２０】上記シリカゲル吸着剤を用いた開口カラム
による分離精製において、カロチノイド類、特にメチル
クロロキサンチンとコエンザイムＱ１０に関しては溶出
速度は非常に接近しており、上記の溶媒での分離が困難
である。そこで、上記の如くして得られたカロチノイド
類を含む溶出液をシリカゲルに接触させた後、芳香族系
溶媒から選ばれる１種又は２種以上を含有する溶媒で溶
出してカロチノイド類とコエンザイムＱ１０とを分離す
る。芳香族系溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシ
レン、好ましくはベンゼンが挙げられ、必要に応じ塩素
系溶媒等他の溶媒を併用しても良い。ここで用いる塩素
系溶媒としてはジクロロメタン、クロロホルム、四塩化
炭素、ジクロロエタン、トリクロロエタン等のクロロア
ルカンが挙げられる。これらの溶媒を使用することによ
って、カロチノイド類とコエンザイムＱ１０の溶出速度
の差が大きくなり、これを分離することができる。ここ
で用いる溶媒は１種より２種を混合したものが好まし
く、特にクロロホルムとベンゼンとの組合わせが好まし
い。なお、カロチノイド類とコエンザイムＱ１０とを分
離する際のシリカゲルの粒径は特に制限されない。

【００２１】本発明方法において、ポルフィリンは、上
記方法で脂溶性有機溶媒を加え、二相分離した一方の水
溶性溶媒相を真空蒸留して冷蔵し、沈殿させることによ
って簡単に回収できる。また、ポルフィリンを純度よく
回収するには、上記水溶性溶媒相を真空蒸留にて溶媒を
除去し、ｎ−ペンタン、シクロペンタン、ｎ−ヘキサ
ン、シクロヘキサン、ジメチルエーテル、ジエチルエー
テル及びメチルエチルエーテルの群から選ばれた１種又
は２種以上の溶媒に溶かす。この溶液を、開口カラムに
充填したシリカゲル吸着剤に接触させ、ポルフィリンを
吸着させる。シリカゲル吸着剤の粒径は大きいほど夾雑
物を除去し易い為、シリカゲル吸着剤の粒径は、５０〜
２５００μｍが好ましく、特に５０〜１０００μｍが好
ましい。次にジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭
素、ジクロロエタン及びトリクロロエタンからなる群か
ら任意に選択された１種又は２種以上の溶媒を開口カラ
ムの頂上から接触させ、夾雑物を除去する。ここで使用
する塩素系溶媒では、ポルフィリンは溶出されてこない
ため、夾雑物を完全に溶出させることができる。この後
アルコール、中でもメタノール、エタノール、プロパノ
ール、２−プロパノールの群から選ばれた１種に接触さ
せることによって、上記シリカゲル吸着剤からポルフィ
リンを溶出させ回収することができる。回収したポルフ
ィリンは真空蒸留によって濃縮し、冷蔵によって沈殿を
析出させて分離すると純度のよいものを得ることができ
る。

【００２２】

【実施例】次に実施例により本発明を具体的に示すが、
これは一例であり、本発明はこれに限定されるものでは
ない。本実施例において試薬はすべて和光純薬社製の特
級を使用した。また、使用した有機溶媒はすべて真空蒸
留により回収した。実施例に用いた光合成細菌の菌体は
次の様にして得た。下記表１に示した組成の培地１、
１．８Ｌを、３Ｌの発酵槽に入れ、１２１℃で１５分間
滅菌し、室温に冷却した。

【００２３】

【表１】

【００２４】あらかじめ、培地１を５０ml調製した３０
０ml容のバッフル付三角フラスコに光合成細菌変異株ロ
ドバクターセファロイデス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｏｒ
ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）ＣＲ−００７２００９（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１６２１７）を植菌し、暗所、３２℃で４８
時間回転振とう培養した。これを上記発酵槽に、全量植
菌し、３２℃、通気量０．３６Ｌ／分、４００rpm で攪
拌培養した。硫酸と水酸化ナトリウムを用いてpH６．４
〜６．５に制御しながら培養を続け、培養４０時間後、
レブリン酸０．２１０ｇ、グリシン８．１ｇ、酵母エキ
ス１８ｇを添加し、攪拌回転数を３２５rpm にして、硫
酸と水酸化ナトリウムを用いてpH６．３〜６．４に保ち
ながら培養を続けた。更に１２時間、２６時間、３８時
間後にグリシンを８．１ｇづつ添加した。このときのレ
ブリン酸添加後の培養液内溶存酸素濃度の平均値は、
０．０１ppm であった。また、レブリン酸添加後の培養
液内の酸化還元電位は、−１８０mV〜−５０mVの範囲で
推移していた。この培養液１０００mlを分取し、遠心分
離で分離後、培養菌体を集菌し、色素の抽出に用いた。
培養液１０００ml中の乾燥菌体量は１０ｇであった。

【００２５】実施例において色素の分析は次の様に行っ
た。 ＜色素の分析＞回収した色素は真空蒸留により溶媒をと
ばし、ヘキサンに溶解した後、島津社製ＨＰＬＣ ＬＣ
−１０ＡＤにてカロチノイド類の組成分析を行った。カ
ラムはメルク社製 Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ Ｓｉ６０
４×２５０mmを用い、展開溶媒（ｎ−ヘキサン：イソプ
ロパノール＝９５：５）を室温で０．８ml／min の条件
で流した。検出器には、島津社製液体クロマトグラフ用
フォトダイオードアレー検出機ＳＰＤ−Ｍ１０Ａを使用
した。単離した色素はＦＤ−ＭＳにて同定した。色素の
定量は固体で得た物以外は、吸光度を測定し、次式から
測定した。 色素量＝Ａｓ×Ｖ×１０００／Ｅ×Ｗ Ａｓ：色素ヘキサン溶液の吸光度 Ｖ：測定した試料の容量（ml） Ｅ：分子吸光係数 Ｗ：測定した試料量（ｇ） （共役数９のカロチノイド：Ａｓ＝４４０nmのときのパ
ーセント吸光係数ε＝３０００） （共役数１０のカロチノイド：Ａｓ＝４５３nmのときの
パーセント吸光係数ε＝２５００） （コエンザイムＱ１０：Ａｓ＝２７５nmのときのパーセ
ント吸光係数ε＝１８０） （バクテリオクロロフィル：Ａｓ＝７７０nmのときのパ
ーセント吸光係数ε＝４００） （ポルフィリン：Ａｓ＝４１７nmのときの分子吸光係数
ε＝５３０００） ＊分子吸光係数：分子１モル／Ｌの吸光度 ＊パーセント吸光係数：分子１０ｇ／Ｌの吸光度

【００２６】＜その他の実験操作の条件＞カロチノイド
などの色素は、熱や光によって分解、異性化などが起こ
るため分離精製操作はすべて室温（３０℃以下）で行っ
た。また、カラムクロマト等の操作も遮光条件にて行
い、保存に関しては褐色容器を使用した。

【００２７】実施例１ 集菌した湿菌体７５ｇに色素抽出溶媒としてエタノール
５００ml（水溶性溶媒）を加え、懸濁させ再び遠心分離
して上清である色素−エタノール溶液を回収した。次に
エタノール量の１０％の水、及びエタノール量の２倍量
のｎ−ヘキサン（脂溶性溶媒）を加え、分液ロートにて
２相に分液させた。水−エタノール相よりポルフィリン
２４．６mg、ｎ−ヘキサン相よりカロチノイドを総量に
して２．５５mg、バクテリオクロロフィルを０．９５m
g、コエンザイムＱ１０を１５．６mg抽出することがで
きた。

【００２８】実施例２ 上記ｎ−ヘキサン相を室温で真空蒸留することによって
総カロチノイド量１mg／mlの濃度まで濃縮し、開口カラ
ムクロマトグラフィーによる単一色素の分離精製に用い
た。長さ４５cm、内径３cmの開口カラムにｎ−ヘキサン
及び和光純薬社製シリカゲル、ワコーゲルＣ−１００
（粒径が１５０〜４２５μｍ）１００ccを充填し、上記
色素ヘキサン濃縮液をカラムの頂上から２．５ml供給
し、バクテリオクロロフィル以外の色素を吸着させた。
更に、カラム頂上よりｎ−ヘキサンを供給し、ＳＶ＝
０．１min^-1でバクテリオクロロフィルのみを溶出し
た。溶出した３００mlのｎ−ヘキサンをカラムの底部か
ら回収して真空蒸留にて溶媒を除去し、バクテリオクロ
ロフィルを０．６２mg回収した。

【００２９】実施例３ 次いで、クロロホルムを上記カラムの頂上から供給し、
カラムからカロチノイド類をＳＶ＝０．１min^-1で溶出
させたところ、溶出時間の異なる３つの黄色のフラクシ
ョンが得られ、溶出されてきた順に第１フラクション、
第２フラクション、第３フラクションとした。溶出した
第１フラクション１００ml、第２フラクション２００m
l、及び第３フラクション２００mlをカラムの底部から
回収して真空蒸留にて溶媒を除去した。その後、各フラ
クションをｎ−ヘキサン溶液とし、フォトダイオードア
レーを検出機とした液体クロマトグラフィーにて各フラ
クションの成分を分析した結果、第１フラクションには
ノイロスポレン、第２フラクションにはメチルクロロキ
サンチン及びコエンザイムＱ１０、第３フラクションに
はクロロキサンチン、３，３′，４，４′，７′，８′
−ヘキサヒドロスピリロキサンチン、１′−ヒドロキシ
−３，４，１′，２′−テトラヒドロスファロイデン及
びヒドロキシスファロイデンが含まれることを確認し
た。回収した各フラクションの総カロチノイド量はそれ
ぞれ第１フラクションが０．１２mg、第２フラクション
が０．５９mg、第３フラクションが０．８６mgであっ
た。

【００３０】実施例４ 実施例１に示した水−エタノール相を真空蒸留にて溶媒
を除去し３０mlのｎ−ヘキサンに溶かした。長さ４５c
m、及び内径４cmの開口カラムにｎ−ヘキサン及び和光
純薬社製シリカゲル、ワコーゲルＣ−１００（粒径が１
５０〜４２５μｍ）５０ccを充填し、上記ｎ−ヘキサン
溶液をカラムの頂上から３０ml供給し、ポルフィリンを
吸着させた。更に、カラム頂上よりクロロホルムを供給
し、ＳＶ＝０．１min^-1で夾雑物を溶出した。次いで、
エタノールをカラム頂上からＳＶ＝０．１min^-1で供給
し、ポルフィリンを溶出した。回収したポルフィリン−
エタノール溶液は真空蒸留によってポルフィリン濃度が
１mg／mlになるまで濃縮し、冷蔵によって沈殿を析出さ
せ、ポルフィリン１５．７mgを得た。

【００３１】実施例５ 長さ３０cm、及び内径３cmの開口カラムにヘキサン及び
和光純薬社製シリカゲルＣ−３００（粒径が４５〜７５
μｍ）７０ccを充填し、先ほど実施例３で回収した第２
フラクションのメチルクロロキサンチン、コエンザイム
Ｑ１０を含む色素のヘキサン濃縮液をカラムの頂上から
１ml供給して吸着させた。次いで、クロロホルム：ベン
ゼンが３：１の混合溶媒をカラムの頂上から供給してカ
ラムからメチルクロロキサンチンを含むフラクション５
０ml、及びコエンザイムＱ１０を含むフラクション１０
０mlをＳＶ＝０．１min^-1で溶出し、真空蒸留にて溶媒
を除去した。回収したメチルクロロキサンチン量は０．
５mg、コエンザイムＱ１０量は５．４mgであった。

【００３２】実施例６ 長さ３０cm、及び内径３cmの開口カラムにヘキサン及び
和光純薬社製シリカゲルＣ−３００（粒径が４５〜７５
μｍ）７０ccを充填し、先ほど実施例３で回収した第３
フラクションのクロロキサンチン、３，３′，４，
４′，７′，８′−ヘキサヒドロスピリロキサンチン、
１′−ヒドロキシ−３，４，１′，２′−テトラヒドロ
スファロイデン、ヒドロキシスファロイデンを含むカロ
チノイド色素のヘキサン濃縮液をカラムの頂上から１ml
供給して吸着させた。次いで、１′，２′−ジクロロエ
タンをカラムの頂上から供給してカラムからクロロキサ
ンチンを含むフラクション１００ml、３，３′，４，
４′，７′，８′−ヘキサヒドロスピリロキサンチンを
含むフラクション５０ml、１′−ヒドロキシ−３，４，
１′，２′−テトラヒドロスファロイデンを含むフラク
ション５０ml、ヒドロキシスファロイデンを含むフラク
ション５０mlをＳＶ＝０．１min^-1で溶出し、真空蒸留
にて溶媒を除去した。回収したクロロキサンチン量は
０．５８mg、３，３′，４，４′，７′，８′−ヘキサ
ヒドロスピリロキサンチン量は、０．１４mg、１′−ヒ
ドロキシ−３，４，１′，２′−テトラヒドロスファロ
イデン量は０．０５mg、ヒドロキシスファロイデン量は
０．０５mgであった。

【００３３】

【発明の効果】本発明方法によれば、光合成細菌から種
々の色素を効率よく分離精製することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 堀田 康司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社コ スモ総合研究所研究開発センター内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 光合成細菌の菌体から水溶性有機溶媒で
   色素を抽出し、得られた抽出液に水及び脂溶性有機溶媒
   を加え、得られた脂溶性有機溶媒相を粒径５０〜２５０
   ０μｍのシリカゲルに接触させた後、該シリカゲルから
   塩素系溶剤で溶出させることを特徴とするカロチノイド
   類の分離方法。
2. 【請求項２】 光合成細菌の菌体から水溶性有機溶媒で
   色素を抽出し、得られた抽出液に水及び脂溶性有機溶媒
   を加え、得られた脂溶性有機溶媒相を粒径５０〜２５０
   ０μｍのシリカゲルに接触させ、シリカゲルへの非吸着
   成分を採取することを特徴とするバクテリオクロロフィ
   ルの分離方法。
3. 【請求項３】 光合成細菌の菌体から水溶性有機溶媒で
   色素を抽出し、得られた抽出液に水及び脂溶性有機溶媒
   を加え、得られた水溶性有機溶媒相を粒径５０〜２５０
   ０μｍのシリカゲルに接触させた後、アルコールで溶出
   することを特徴とするポルフィリンの分離方法。
4. 【請求項４】 請求項１記載のカロチノイド類を含む溶
   出液をシリカゲルに接触させた後、芳香族系溶媒から選
   ばれる１種又は２種以上を含有する溶媒で溶出させるこ
   とを特徴とするカロチノイド類とコエンザイムＱ１０の
   分離方法。