JPH1080291A

JPH1080291A - 新規化合物ｗｆ１５４８３、その製法及びその用途

Info

Publication number: JPH1080291A
Application number: JP9140515A
Authority: JP
Inventors: Michimasa Hashimoto; 道真橋本; Yasuhisa Tsurumi; 泰久鶴海; Shigehiro Takase; 茂弘高瀬; Toru Kino; 亨木野; Masaharu Hashimoto; 正治橋本
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-06-11
Filing date: 1997-05-29
Publication date: 1998-03-31
Also published as: AUPO039896A0

Abstract

(57)【要約】【解決手段】抗真菌活性を有する新規化合物ＷＦ１５
４８４３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂ、糸状菌に属するＷＦ
１５４８３生産菌株を培養することによる該新規化合物
の製造方法、並びに該新規化合物を有効成分とする医薬
組成物及び抗真菌剤。【効果】本発明の新規化合物は抗真菌作用を示すこと
から、医薬、農薬および掃除用品の分野等で抗真菌剤と
して使用することができる。特に、哺乳動物の真菌感染
症の治療薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規化合物ＷＦ１
５４８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂに関する。より詳細に
は、本発明は、抗真菌活性を有する新規化合物ＷＦ１５
４８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂ、糸状菌に属するＷＦ１
５４８３生産菌株によるそれらの製造方法並びにそれら
を含有する医薬組成物および抗真菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】従来よ
り、放線菌や糸状菌等の微生物から他の微生物に対する
抗菌活性を有する物質が数多く単離され、医薬、農薬等
に利用されてきた。本発明の目的は、抗真菌活性を有す
る新規物質及びその製造方法を提供することである。ま
た本発明の別の目的は、該新規物質を含有する新規医薬
組成物及び抗真菌剤の提供である。

【０００３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、土壌分離
菌より抗真菌作用を示す微生物生産物をスクリーニング
した結果、糸状菌に属する菌株の培養物から抗真菌活性
を有する新規化合物ＷＦ１５４８３Ａ及びＷＦ１５４８
３Ｂを単離することに成功して、本発明を完成するに至
った。

【０００４】すなわち、本発明は、抗真菌活性を有し、
且つ後述の理化学的性質を有する新規化合物ＷＦ１５４
８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂである。また、本発明は、
糸状菌に属するＷＦ１５４８３生産菌株を培地中で培養
し、得られる培養物からＷＦ１５４８３Ａ及び／又はＷ
Ｆ１５４８３Ｂを採取することを含む該新規化合物の製
造方法である。さらに、本発明は、ＷＦ１５４８３Ａ及
び／又はＷＦ１５４８３Ｂを有効成分とする新規医薬組
成物及び新規抗真菌剤である。

【０００５】

【発明の実施の形態】新規化合物ＷＦ１５４８３Ａ及び
ＷＦ１５４８３Ｂは以下の理化学的性質を有する。

【０００６】（１）ＷＦ１５４８３Ａａ）外観：無色粉末ｂ）分子式：Ｃ₆₀Ｈ₉₇Ｎ₁₅Ｏ₂₁ ｃ）元素分析：Ｃ 50.16；Ｈ 7.58 ; Ｎ 14.53 ｄ）融点：１１５〜１１９℃（分解）ｅ）分子量：１３６４．５３ [FAB-MS：m/z 1387 (M +
Na)] ｆ）紫外線吸収スペクトル：図１に示す λ_max（ε）（50% CH₃CN水）：222 nm (sh), 275 nm
(E^1% _1cm10.5) ｇ）赤外線吸収スペクトル：図２に示す ν_max(KBr) ：3300, 3080, 2930, 2860, 1660, 1520,
1450, 1240,1080 cm ^-1 ｈ）溶解性：難溶：水，メタノール，アセトニトリル不溶：ｎ−ヘキサンｉ）呈色反応：陽性：ヨウ素蒸気との反応，硫酸セリウムとの反応疑陽性：ニンヒドリン反応，塩化第二鉄反応陰性：ドラーゲンドルフ反応，モーリッシュ反応ｊ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル (500MHz, DMSO-d₆, 310K) : 図３に示す δ ppm：9.08 (1H, s, 交換可能), 8.12 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.07 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.06 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 8.05 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.01 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.00 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.95 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.94 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.89 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.87 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.85 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.78 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.48 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.31 (1H, br s, 交換可能), 7.17 (1H, br s, 交換可能), 6.97 (2H, d, J=8Hz), 6.87 (1H, br s, 交換可能), 6.79 (1H, br s, 交換可能), 6.63 (2H, d, J=8Hz), 5.25 (1H, br s, 交換可能), 5.00 〜4.78 (4H, 交換可能), 4.51 (1H, m), 4.40 〜4.17 (11H, m), 4.06 (1H, m), 3.82 〜3.74 (3H, m), 3.70〜3.57 (7H, m), 2.90 (1H, dd, J=14 及び5.5Hz), 2.69 (1H, dd, J=14及び9Hz), 2.57 〜2.40 (2H, m), 2.25 (1H, dd, J=15及び9Hz), 2.19 (1H, dd, J=15 及び4Hz), 1.68 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.30 (3H, d, J=7Hz), 1.25 (3H, d, J=7Hz), 1.35〜1.15 (24H, m), 1.17 (3H, d, J=7Hz), 1.05 (3H, d, J=6Hz), 0.85 (3H, t, J=7Hz) ｋ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル (125MHz, DMSO) : 図４に
示す δ ppm : 172.5 (s), 172.4 (s), 172.3 (s), 172.2
(s),171.9 (s), 171.8 (s), 171.3 (s), 171.1 (s), 17
0.4 (s),170.2 (s), 170.2 (s), 170.1 (s), 169.6
(s), 169.3 (s),169.0 (s), 155.7 (s), 129.8 (d×2),
127.6 (s), 114.9 (d ×2),68.0 (d), 66.5 (d), 61.5
(t), 61.4 (t), 61.3 (t), 58.4 (d),56.5 (d), 55.6
(d), 55.4 (d), 55.2 (d), 54.9 (d), 52.9 (d),50.1
(d), 49.0 (d), 48.8 (d), 48.7 (d), 42.2 (t), 42.2
(t),38.8 (t), 36.7 (t), 36.0 (t), 31.4 (t), 31.1
(t), 28.9 (t),28.9 (t), 28.9 (t), 28.9 (t), 28.9
(t), 28.9 (t), 28.8 (t),28.6 (t), 28.5 (t), 25.2
(t), 21.9 (t), 19.4 (q), 17.3 (q),17.2 (q), 17.2
(q), 13.8 (q) ｌ）旋光性： [α] ²³ _D＝＋７°(c=0.25, DMSO) ｍ）アミノ酸分析：アラニン，グリシン，セリン，スレ
オニン，アスパラギン酸，チロシン

【０００７】（２）ＷＦ１５４８３Ｂａ）外観：無色粉末ｂ）化学式：Ｃ₅₉Ｈ₉₅Ｎ₁₅Ｏ₂₁ ｃ）分子量：１３５０．５０ [FAB-MS：m/z 1373 (M +
Na)] ｄ）紫外線吸収スペクトル：図５に示す λ_max（ε）（50% CH₃CN水）：222 nm (sh), 275 nm
(E^1% _1cm11) ｅ）溶解性：難溶：水，メタノール，アセトニトリル不溶：ｎ−ヘキサンｆ）呈色反応：陽性：ヨウ素蒸気との反応，硫酸セリウム反応疑陽性：ニンヒドリン反応，塩化第二鉄反応陰性：ドラーゲンドルフ反応，モーリッシュ反応ｇ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル (500MHz, DMSO-d₆, 310K) ：図６に示す δ ppm : 9.08 (1H, s, 交換可能), 8.12 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.07 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.06 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 8.04 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.02 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.01 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.95 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.94 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.88 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.86 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.85 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.79 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.48 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.30 (1H, br s, 交換可能), 7.16 (1H, br s, 交換可能), 6.98 (2H, d, J=8Hz), 6.87 (1H, br s, 交換可能), 6.79 (1H, br s, 交換可能), 6.63 (2H, d, J=8Hz), 5.25 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 4.94 (1H, t, J=5.5Hz, 交換可能), 4.91〜4.87 (2H, m, 交換可能), 4.84 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 4.51 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.37〜4.17 (10H, m), 4.07 (1H, m), 3.81〜3.74 (3H, m), 3.70 〜3.58 (7H, m), 2.90 (1H, dd, J=14及び5.5Hz), 2.68 (1H, dd, J=14 及び9Hz), 2.55〜2.44 (2H, m), 2.26 (1H, dd, J=15 及び9Hz), 2.18 (1H, dd, J=15及び4Hz), 1.67 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.29 (3H, d, J=7Hz), 1.25 (3H, d, J=7Hz), 1.35 〜1.15 (22H, m), 1.17 (3H, d, J=7Hz), 1.05 (3H, d, J=6Hz), 0.86 (3H, t, J=7Hz) ｈ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル (125MHz, DMSO) ：図７に
示す δ ppm : 172.5 (s), 172.4 (s), 172.3 (s), 172.2
(s),171.9 (s), 171.8 (s), 171.3 (s), 171.1 (s), 17
0.4 (s),170.2 (s), 170.2 (s), 170.1 (s), 169.6
(s), 169.3 (s),169.0 (s), 155.7 (s), 129.8 (d×2),
127.6 (s), 114.9 (d ×2),68.0 (d), 66.5 (d), 61.5
(t), 61.4 (t), 61.3 (t), 58.4 (d),56.5 (d), 55.6
(d), 55.4 (d), 55.2 (d), 54.9 (d), 52.9 (d),50.1
(d), 49.0 (d), 48.8 (d), 48.7 (d), 42.2 (t), 42.2
(t),38.8 (t), 36.7 (t), 36.0 (t), 31.4 (t), 31.1
(t), 28.9 (t),28.9 (t), 28.9 (t), 28.9 (t), 28.9
(t), 28.8 (t), 28.6 (t),28.5 (t), 25.2 (t), 21.9
(t), 19.4 (q), 17.3 (q), 17.2 (q),17.2 (q), 13.8
(q) ｉ）アミノ酸分析：アラニン，グリシン，セリン，スレ
オニン，アスパラギン酸，チロシン

【０００８】本明細書においては、以下、化合物ＷＦ１
５４８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂを一般にＷＦ１５４８
３と総称して呼ぶ場合もある。

【０００９】本発明のＷＦ１５４８３は、例えば、糸状
菌Ｎｏ．１５４８３株等の糸状菌に属するＷＦ１５４８
３生産菌株を培地中で培養し、その培養物から該化合物
を採取することにより調製することができる。糸状菌に
属するＷＦ１５４８３生産菌のうち、糸状菌Ｎｏ．１５
４８３株は、本発明者らにより茨城県筑波山で採集した
落葉試料より新たに分離された。糸状菌Ｎｏ．１５４８
３株の凍結乾燥試料は、ブダペスト条約に基づく国際寄
託機関である通商産業省工業技術院生命工学工業技術研
究所（〒３０５茨城県つくば市東１丁目１番３号）に
１９９６年５月７日付で受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５５
２６として国際寄託された。

【００１０】本発明の化合物ＷＦ１５４８３の生産は、
ここに記載される特定の微生物の使用によるものに限定
されないことを理解されたい。すなわち、ＷＦ１５４８
３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂの少なくとも１つを生産し得
るいかなる自然又は人工の変異体の使用も包含するもの
であり、天然より得られる変異体、並びにＸ線照射、紫
外線照射、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジン等の化学的変異誘発剤処理等の慣用の方法によ
り上述の微生物から誘導され得る人為的な変異体も含ま
れる。

【００１１】ＷＦ１５４８３生産菌１５４８３株は茨城
県筑波山で採集した落葉試料から分離された。この微生
物は各種培地上で抑制的に生育し、オリーブ茶又は黄味
灰の色調のコロニーを形成する。いくつかの寒天培地上
で１５４８３株はフィアライドと円筒形の分生子からな
る分生子構造（アナモルフ）を形成する。以下に１５４
８３株の菌学的性質を示す。

【００１２】該菌株の種々の寒天培地上での培養的性質
を表１に要約した。ポテトデキストロース寒天上のコロ
ニーは抑制的に生育し、２５℃で２週間培養後に直径
１．５〜２．０ｃｍに拡がる。コロニーは円形で全体が
隆起するか、中心部が盛り上がった凸円状で、皺を生
じ、表面はフェルト状であった。コロニーの色調は黒又
はオリーブ茶で、周縁部は黄味灰である。裏面もオリー
ブ茶で、周縁部は黄味灰である。分生子構造は観察され
ない。コーンミール寒天上でもコロニーは抑制的に生育
し、上記と同一の条件下で直径１．０〜２．０ｃｍに拡
がる。コロニーの表面は平坦で薄く、フェルト状で、色
調は白から黄味白で、中心部は茶味灰である。裏面は白
から緑味灰、中心部は茶味灰である。当該培地上では分
生子構造が豊富に形成された。

【００１３】

【表１】

【００１４】１５４８３株の形態的特徴は三浦培地（Mi
ura とKudo, Trans. Mycol. Soc. Japan, 11: 116-118
(1970)）上での培養を観察して記録した。１５４８３株
はフィアライドを菌糸上に直接、あるいは短い分枝の上
に形成する。分生子柄は栄養菌糸との差が不明瞭で特定
することができない。フィアライドは分生子形成部を１
カ所持ち、無色、滑面、アンプル形からフラスコ形で、
稀に複数のフィアライドが塊になる。フィアライドの大
きさは、長さ４〜１１．５μｍ、膨らんだ基部が３〜５
μｍ、短い首の部分は約１μｍで、分生子を粘塊状に形
成する。分生子は、無色、滑面で、一細胞、円筒形で両
端は丸く、大きさは（１２〜）１４〜１６（〜１８）×
２〜２．５（〜３）μｍである。栄養菌糸は滑面で隔壁
を持ち、無色で分枝する。その菌糸細胞は円筒形で、幅
１．０〜４．０μｍである。厚膜胞子は観察されない。

【００１５】１５４８３株は３〜２９℃で生育可能で、
生育最適温度は２０〜２４℃である。これらのデータは
ポテトデキストロース寒天（ニッスイ）上で決定した。

【００１６】１５４８３株のフィアライドと分生子の特
徴は、Ellis （Dematiaceous Hyphomycetes, pp.526-52
7, CAB, Kew (1971)）に記載されるケトプシナ属（Chae
topsina Rambelli 1956 ）のものと類似しているが、ケ
トプシナ属の分生子柄は剛毛様の分生子柄の中央部付近
に短い分枝とフィアライド形成することが特徴で、栄養
菌糸とは容易に区別できる点で異なっている。したがっ
て、分類学的位置付けが不明確であるため、該ＷＦ１５
４８３生産菌１５４８３株を糸状菌Ｎｏ．１５４８３株
と称した。

【００１７】一般に、本発明のＷＦ１５４８３は、同化
し得る炭素源や窒素源を含む培地中で、好ましくは好気
条件下（例えば、振盪培養、液内培養等）でＷＦ１５４
８３生産菌を培養することにより製造され得る。培地中
の好ましい炭素源は、グルコース、フルクトース、グリ
セリン、デンプンのような炭水化物である。また、他に
ラクトース、アラビノース、キシロース、デキストリ
ン、糖蜜等の炭素源を含んでいてもよい。

【００１８】好ましい窒素源は、酵母エキス、ペプト
ン、グルテン粉、綿実粉、大豆粉、コーンスチープリカ
ー、乾燥酵母等、並びにアンモニウム塩類（例えば、硝
酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム等）、尿素、アミノ酸などのような無機及び有機窒素
化合物である。

【００１９】炭素源及び窒素源は組み合わせて使用する
と有利ではあるが、痕跡量の生育因子及び相当量の無機
栄養素を含む純度の低い物質もまた使用に適しているの
で、それらを純粋な形で使用する必要はない。

【００２０】所望により、炭酸カルシウム、リン酸ナト
リウム又はリン酸カリウム、ヨウ化ナトリウム又はヨウ
化カリウム、マグネシウム塩、塩化コバルト等のような
無機塩類を加えてもよい。また、必要な場合には、とり
わけ培地が著しく発泡する場合には、液状パラフィン、
高級アルコール、植物油、鉱物油及びシリコーンのよう
な消泡剤を加えてもよい。

【００２１】ＷＦ１５４８３の大量生産の条件としては
液内好気培養が好ましい。少量生産には、フラスコ又は
瓶中での振盪又は表面培養が用いられる。さらに、大型
タンク内で増殖させる場合には、目的化合物の生産工程
における増殖遅延を回避するために、増殖期にある菌を
使用して生産タンク中に接種することが好ましい。すな
わち、まず比較的少量の培地に菌の胞子または菌糸を接
種し、これを培養することにより増殖期の種菌を製造
し、次いで該種菌を無菌的に大型タンクに移すのが望ま
しい。増殖期の種菌を製造するための培地としては、Ｗ
Ｆ１５４８３の主生産に使用される培地と実質的に同一
であるか、あるいは若干異なる培地を使用することがで
きる。

【００２２】培養液の攪拌及び通気は種々の方法で行う
ことができる。攪拌は、プロペラ又はこれに類似の機械
的攪拌装置の使用、ファーメンターの回転又は振盪、種
々のポンプ装置の使用、あるいは滅菌エアーを培養液中
を通過させることによって行えばよい。また、通気は滅
菌エアーを培養液中を通過させることにより行うことが
できる。

【００２３】培養は、通常約４℃〜約４０℃、好ましく
は約２０℃〜約３０℃の温度で、５０時間〜１００時間
行われるが、これらは培養条件及び培養規模に応じて変
化させてもよい。

【００２４】このようにして生産されたＷＦ１５４８３
は、抗生物質のような他の発酵生産物を採取するのに通
常使用される慣用の方法により培養物から採取すること
ができる。一般に、生産されたＷＦ１５４８３のほとん
どは培養濾液中に見出される。したがって、該化合物
は、培養液を濾過及び／又は遠心分離して得られる培養
濾液から、減圧濃縮、凍結乾燥、常用の溶媒による抽
出、ｐＨ調整、常用の樹脂（例えば、陰イオン又は陽イ
オン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂等）による処理、常
用の吸着剤（例えば、活性炭、ケイ酸、シリカゲル、セ
ルロース、アルミナ等）による処理、結晶化、再結晶な
どのような常法によって単離することができる。

【００２５】ＷＦ１５４８３のいくつかの生物学的性質
は、以下の試験において詳細に説明される。試験例１ＷＦ１５４８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂの抗
真菌活性ＷＦ１５４８３Ａ及びＷＦ１５４８３Ｂのカンディダ・
アルビカンス（Candida albicans）に対する抗真菌活性
を最少必須培地を用いて、また、アスペルギルス・フミ
ガツス（Aspergillus fumigatus ）及びクリプトコッカ
ス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans ）に
対する抗真菌活性を酵母窒素ベース・デキストロース培
地を用いて、９６穴マイクロタイタープレート中の微量
ブイヨン希釈法により測定した。連続２倍希釈した試料
溶液５０μｌに、同じ培地に懸濁した微生物懸濁液５０
μｌを加えて終濃度１×１０⁵ＣＦＵ／ｍｌとした。カ
ンディダ及びアスペルギルスは３７℃で２４時間、クリ
プトコッカスは３７℃で４８時間、それぞれＣＯ₂イン
キュベーターを用いて５％ＣＯ₂の雰囲気中で培養し
た。培養終了後、各ウェル中の微生物の生育阻害を顕微
鏡観察し、最小有効濃度（ＭＥＣ）を測定した。その結
果を表２に示す。

【００２６】

【表２】

【００２７】試験例２急性毒性ＩＣＲマウス（雌、４週齢）にＷＦ１５４８３Ａ及びＷ
ｆ１５４８３Ｂをそれぞれ皮下注射した結果、ＬＤ₅₀値
はいずれも＞１００ｍｇ／ｋｇ体重であった。

【００２８】本発明の化合物ＷＦ１５４８３は抗真菌作
用を示すので、医薬分野、農薬分野、掃除用品の分野等
で抗真菌剤として使用され得る。とりわけ、該化合物
は、カンディダ症やアスペルギルス症などの哺乳動物
（例えば、ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサ
ギ、ウシ、ブタ等）の真菌感染症の治療薬として使用す
ることができる。

【００２９】本発明の化合物ＷＦ１５４８３は、医薬上
許容できる担体との混合物として、哺乳動物（例えば、
ヒト、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ウシ、ブ
タ等）に、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、バッカル
錠、舌下錠及び液剤のような医薬組成物の形態で経口投
与又は非経口投与することができる。医薬上許容できる
担体としては、賦形剤（例えば、ショ糖、デンプン、マ
ンニット、ソルビット、ラクトース、グルコース、セル
ロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、
等）、結合剤（例えば、セルロース、メチルセルロー
ス、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロ
リドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコ
ール、ショ糖、デンプン等）、崩壊剤（例えば、デンプ
ン、カルボキシメチルセルロース及びそのカルシウム
塩、ヒドロキシプロピルスターチ、グリコール−スター
チのナトリウム塩、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシ
ウム、クエン酸カルシウム等）、潤滑剤（例えば、ステ
アリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル
硫酸ナトリウム等）、芳香剤（例えば、クエン酸、メン
トール、グリシン、オレンジ粉等）、保存剤（例えば、
安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパ
ラベンプロピルパラベン等）、安定化剤（例えば、クエ
ン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等）、懸濁化剤（例え
ば、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステア
リン酸アルミニウム等）、分散剤（例えば、界面活性剤
等）、水性希釈剤（例えば、水等）、油類（例えば、ゴ
マ油等）及び基剤ワックス（例えば、カカオバター、ポ
リエチレングリコール、白灯油等）のような医薬用とし
て常用される種々の有機及び無機の担体物質が挙げられ
る。

【００３０】本発明の化合物ＷＦ１５４８３は、経口投
与又は非経口投与、特に皮下、静脈内、筋肉内、直腸又
は経皮投与することができる。ＷＦ１５４８３の投与量
は、疾患の種類、患者の体重及び／又は年齢、さらに投
与経路の種類によって変化するが、その最適投与量は、
通常０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲から選択
される。

【００３１】農薬用又は掃除用品用のＷＦ１５４８３含
有抗真菌剤は、使用目的に応じてその適当量を使用し、
それぞれの分野で常用の手法を用いて調製することがで
きる。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を示して本発明をより具体的に
説明する。

【００３３】実施例１（１）糸状菌Ｎｏ．１５４８３株の培養２％グリセリン、２％ショ糖、２％綿実粉（ファ
ーマメディア）、１％乾燥酵母、１％ペプトン、０．
１％ＫＨ₂ＰＯ₄及び０．１％Ｔｗｅｅｎ８０から
なる培地を５００ｍｌ容三角フラスコ３本に各１２０ｍ
ｌずつ分注し、１２１℃で３０分間加圧滅菌した後、斜
面培養した１５４８３株を一白金耳接種した。これをロ
ータリーシェーカーを用いて２５℃で４日間振盪培養し
て種培養液を得た。別に、３％可溶性デンプン（ＭＳ
３６００）、２％綿実粉（ファーマメディア）、０．
５％オートミール、２％ＫＨ₂ＰＯ₄、１％Ｎａ
₂ＨＰＯ₄・１２Ｈ₂Ｏ、０．０５％アデカミール
ＬＧ−１０９（消泡剤；旭電化製）及び０．０５％シ
リコンＫＭ−７０（消泡剤；信越化学製）からなる培
地２０Ｌを３０Ｌ容ジャーファーメンターに入れ、１２
１℃で３０分間加圧滅菌した。この培地に上記の種培養
液を接種し、２５℃で４日間通気攪拌培養した（通気
量：２０Ｌ／分，内圧：１ｋｇ／ｃｍ²，攪拌速度：２
５０ｒｐｍ）。

【００３４】（２）ＷＦ１５４８３Ａ及びＷＦ１５４８
３Ｂの単離精製培養終了後、培養液に等容のアセトンを加え、室温で約
１時間攪拌した後、ラヂオライト＃６００（濾過補助
剤）を適量加えて該混合物を濾過し、約３０Ｌの濾液を
得た。該濾液に水を加えて約５０Ｌに希釈した後、予め
水で平衡化しておいたダイアイオンＨＰ−２０（三菱化
学製）カラム４Ｌに吸着させた。該カラムを水２０Ｌ及
び５０％メタノール水溶液２０Ｌで洗浄後、メタノー
ル１２Ｌにて溶出した。溶出液を減圧濃縮、残渣７２５
ｍｌを得た。この残渣を予め水で平衡化しておいたＹＭ
ＣＧＥＬＯＤＳ−Ａ１２０２３０／７０（ＹＭＣ
社製）カラム１５０ｍｌに吸着させた。該カラムを５０
％メタノール水溶液５００ｍｌで洗浄後、７０％メ
タノール水溶液４５０ｍｌ（１５０ｍｌ／フラクショ
ン）、次いで８０％メタノール水溶液７５０ｍｌ（１
５０ｍｌ／フラクション）にて溶出した。該溶出液を下
記条件のＨＰＬＣにて分析した。ＷＦ１５４８３Ｂがま
ず溶出し（保持時間５．９分）、続いてＷＦ１５４８３
Ａが溶出した（保持時間８．５分）。ＷＦ１５４８３物
質を含むフラクションをプールした。ＨＰＬＣ条件；カラム：ＹＭＣＯＤＳ−ＡＭ３０３（内径４．６ｍｍ
×長さ２５０ｍｍ）（ＹＭＣ社製）溶離剤：５０％アセトニトリル水溶液（ｖ／ｖ）流速：１ｍｌ／分検出：ＵＶ検出器（２１０ｎｍ）

【００３５】ＷＦ１５４８３Ａを含むプールフラクショ
ンを減圧濃縮、乾固して粗粉末を得た。該粉末をメタノ
ールで洗浄後、酢酸：メタノール：水（２：１：１，ｖ
／ｖ）１Ｌに溶解し、予め５０％メタノール水溶液で
平衡化しておいたＹＭＣＧＥＬＯＤＳ−ＡＭ１２
０−Ｓ５０（ＹＭＣ社製）カラム７００ｍｌに吸着させ
た。該カラムを５０％メタノール水溶液１４００ｍｌ
で洗浄後、４５％アセトニトリル３．５Ｌ（１４０ｍ
ｌ／フラクション）にて溶出した。目的の化合物を含む
フラクションを回収し、減圧濃縮、乾固してＷＦ１５４
８３Ａの白色粉末１３００ｍｇを得た。

【００３６】ＷＦ１５４８３Ｂを含むプールフラクショ
ンを減圧濃縮して残渣を得た。これを予め水で平衡化し
ておいたＹＭＣＧＥＬＯＤＳ−ＡＭ１２０−Ｓ５
０（ＹＭＣ社製）カラム１７５ｍｌに吸着させた。該カ
ラムを水１７５ｍｌ、５０％メタノール水溶液３５０ｍ
ｌおよび７０％メタノール水溶液７００ｍｌで洗浄
後、８０％メタノール水溶液７００ｍｌ（３５ｍｌ／
フラクション）で溶出した。ＷＦ１５４８３Ｂを含むフ
ラクションを回収し、減圧濃縮、乾固して淡褐色の粗粉
末を得た。該粉末をメタノールで洗浄後、酢酸：メタノ
ール：水（２：１：１，ｖ／ｖ）１Ｌに溶解し、ＹＭＣ
−ＰａｃｋＯＤＳ−ＡＭＳＨ−３４３（内径２ｃｍ
×長さ２５ｃｍ，移動相：４５％アセトニトリル，流
速：９．９ｍｌ／分；ＹＭＣ社製）カラムを用いた逆相
ＨＰＬＣによってさらに精製した。目的の化合物を含む
フラクションを回収し、減圧濃縮、乾固してＷＦ１５４
８３Ｂの白色粉末５０ｍｇを得た。

【００３７】

【発明の効果】本発明の化合物ＷＦ１５４８３Ａ及びＷ
Ｆ１５４８３Ｂは抗真菌作用を示すことから、ヒトをは
じめとする哺乳動物の真菌感染症の治療薬として有用で
ある。さらに、該化合物は、土壌改良剤のような農薬
用、あるいは家庭用抗カビ剤のような掃除用品用の抗真
菌剤としても有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＷＦ１５４８３Ａの紫外線吸収スペクトルを示
す図である。

【図２】ＫＢｒ法により測定したＷＦ１５４８３Ａの赤
外線吸収スペクトルを示す図である。

【図３】ＷＦ１５４８３Ａの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを
示す図である。

【図４】ＷＦ１５４８３Ａの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを
示す図である。

【図５】ＷＦ１５４８３Ｂの紫外線吸収スペクトルを示
す図である。

【図６】ＷＦ１５４８３Ｂの¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルを
示す図である。

【図７】ＷＦ１５４８３Ｂの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを
示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の性質（Ａ）または（Ｂ）を有する
化合物、ＷＦ１５４８３。性質（Ａ）；ａ）外観：無色粉末ｂ）分子式：Ｃ₆₀Ｈ₉₇Ｎ₁₅Ｏ₂₁ ｃ）元素分析：Ｃ 50.16；Ｈ 7.58 ; Ｎ 14.53 ｄ）融点：１１５〜１１９℃（分解）ｅ）分子量：１３６４．５３ [FAB-MS：m/z 1387 (M +
Na)] ｆ）紫外線吸収スペクトル：図１に示す λ_max（ε）（50% CH₃CN水）：222 nm (sh), 275 nm
(E^1% _1cm10.5) ｇ）赤外線吸収スペクトル：図２に示す ν_max(KBr) ：3300, 3080, 2930, 2860, 1660, 1520,
1450, 1240,1080 cm ^-1 ｈ）溶解性：難溶：水，メタノール，アセトニトリル不溶：ｎ−ヘキサンｉ）呈色反応：陽性：ヨウ素蒸気との反応，硫酸セリウムとの反応疑陽性：ニンヒドリン反応，塩化第二鉄反応陰性：ドラーゲンドルフ反応，モーリッシュ反応ｊ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル (500MHz, DMSO-d₆, 310K) : 図３に示す δ ppm：9.08 (1H, s, 交換可能), 8.12 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.07 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.06 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 8.05 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.01 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.00 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.95 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.94 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.89 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.87 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.85 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.78 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.48 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.31 (1H, br s, 交換可能), 7.17 (1H, br s, 交換可能), 6.97 (2H, d, J=8Hz), 6.87 (1H, br s, 交換可能), 6.79 (1H, br s, 交換可能), 6.63 (2H, d, J=8Hz), 5.25 (1H, br s, 交換可能), 5.00 〜4.78 (4H, 交換可能), 4.51 (1H, m), 4.40 〜4.17 (11H, m), 4.06 (1H, m), 3.82 〜3.74 (3H, m), 3.70〜3.57 (7H, m), 2.90 (1H, dd, J=14 及び5.5Hz), 2.69 (1H, dd, J=14及び9Hz), 2.57 〜2.40 (2H, m), 2.25 (1H, dd, J=15及び9Hz), 2.19 (1H, dd, J=15 及び4Hz), 1.68 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.30 (3H, d, J=7Hz), 1.25 (3H, d, J=7Hz), 1.35〜1.15 (24H, m), 1.17 (3H, d, J=7Hz), 1.05 (3H, d, J=6Hz), 0.85 (3H, t, J=7Hz) ｋ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル (125MHz, DMSO) : 図４に
示す δ ppm : 172.5 (s), 172.4 (s), 172.3 (s), 172.2
(s),171.9 (s), 171.8 (s), 171.3 (s), 171.1 (s), 17
0.4 (s),170.2 (s), 170.2 (s), 170.1 (s), 169.6
(s), 169.3 (s),169.0 (s), 155.7 (s), 129.8 (d×2),
127.6 (s), 114.9 (d ×2),68.0 (d), 66.5 (d), 61.5
(t), 61.4 (t), 61.3 (t), 58.4 (d),56.5 (d), 55.6
(d), 55.4 (d), 55.2 (d), 54.9 (d), 52.9 (d),50.1
(d), 49.0 (d), 48.8 (d), 48.7 (d), 42.2 (t), 42.2
(t),38.8 (t), 36.7 (t), 36.0 (t), 31.4 (t), 31.1
(t), 28.9 (t),28.9 (t), 28.9 (t), 28.9 (t), 28.9
(t), 28.9 (t), 28.8 (t),28.6 (t), 28.5 (t), 25.2
(t), 21.9 (t), 19.4 (q), 17.3 (q),17.2 (q), 17.2
(q), 13.8 (q) ｌ）旋光性： [α] ²³ _D＝＋７°(c=0.25, DMSO) ｍ）アミノ酸分析：アラニン，グリシン，セリン，スレ
オニン，アスパラギン酸，チロシン性質（Ｂ）；ａ）外観：無色粉末ｂ）化学式：Ｃ₅₉Ｈ₉₅Ｎ₁₅Ｏ₂₁ ｃ）分子量：１３５０．５０ [FAB-MS：m/z 1373 (M +
Na)] ｄ）紫外線吸収スペクトル：図５に示す λ_max（ε）（50% CH₃CN水）：222 nm (sh), 275 nm
(E^1% _1cm11) ｅ）溶解性：難溶：水，メタノール，アセトニトリル不溶：ｎ−ヘキサンｆ）呈色反応：陽性：ヨウ素蒸気との反応，硫酸セリウム反応疑陽性：ニンヒドリン反応，塩化第二鉄反応陰性：ドラーゲンドルフ反応，モーリッシュ反応ｇ）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル (500MHz, DMSO-d₆, 310K) ：図６に示す δ ppm : 9.08 (1H, s, 交換可能), 8.12 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.07 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.06 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 8.04 (1H, t, J=6Hz, 交換可能), 8.02 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 8.01 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.95 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.94 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.88 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.86 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.85 (1H, d, J=7Hz, 交換可能), 7.79 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.48 (1H, d, J=8Hz, 交換可能), 7.30 (1H, br s, 交換可能), 7.16 (1H, br s, 交換可能), 6.98 (2H, d, J=8Hz), 6.87 (1H, br s, 交換可能), 6.79 (1H, br s, 交換可能), 6.63 (2H, d, J=8Hz), 5.25 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 4.94 (1H, t, J=5.5Hz, 交換可能), 4.91〜4.87 (2H, m, 交換可能), 4.84 (1H, d, J=6Hz, 交換可能), 4.51 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.37〜4.17 (10H, m), 4.07 (1H, m), 3.81〜3.74 (3H, m), 3.70 〜3.58 (7H, m), 2.90 (1H, dd, J=14及び5.5Hz), 2.68 (1H, dd, J=14 及び9Hz), 2.55〜2.44 (2H, m), 2.26 (1H, dd, J=15 及び9Hz), 2.18 (1H, dd, J=15及び4Hz), 1.67 (1H, m), 1.55 (1H, m), 1.29 (3H, d, J=7Hz), 1.25 (3H, d, J=7Hz), 1.35 〜1.15 (22H, m), 1.17 (3H, d, J=7Hz), 1.05 (3H, d, J=6Hz), 0.86 (3H, t, J=7Hz) ｈ）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル (125MHz, DMSO) ：図７に
示す δ ppm : 172.5 (s), 172.4 (s), 172.3 (s), 172.2
(s),171.9 (s), 171.8 (s), 171.3 (s), 171.1 (s), 17
0.4 (s),170.2 (s), 170.2 (s), 170.1 (s), 169.6
(s), 169.3 (s),169.0 (s), 155.7 (s), 129.8 (d×2),
127.6 (s), 114.9 (d ×2),68.0 (d), 66.5 (d), 61.5
(t), 61.4 (t), 61.3 (t), 58.4 (d),56.5 (d), 55.6
(d), 55.4 (d), 55.2 (d), 54.9 (d), 52.9 (d),50.1
(d), 49.0 (d), 48.8 (d), 48.7 (d), 42.2 (t), 42.2
(t),38.8 (t), 36.7 (t), 36.0 (t), 31.4 (t), 31.1
(t), 28.9 (t),28.9 (t), 28.9 (t), 28.9 (t), 28.9
(t), 28.8 (t), 28.6 (t),28.5 (t), 25.2 (t), 21.9
(t), 19.4 (q), 17.3 (q), 17.2 (q),17.2 (q), 13.8
(q) ｉ）アミノ酸分析：アラニン，グリシン，セリン，スレ
オニン，アスパラギン酸，チロシン
【請求項２】糸状菌に属するＷＦ１５４８３生産菌株
を培地中で培養し、得られる培養物からＷＦ１５４８３
を採取することを含む、請求項１記載の化合物ＷＦ１５
４８３の製造方法。
【請求項３】有効成分として請求項１記載のＷＦ１５
４８３を医薬上許容され得る担体とともに含有する医薬
組成物。
【請求項４】請求項１記載のＷＦ１５４８３を含有す
る抗真菌剤。