JPH10507673A

JPH10507673A - 石灰化耐性生体補完組織とその製造方法

Info

Publication number: JPH10507673A
Application number: JP8514645A
Authority: JP
Inventors: レヴィ，ロバート，ジェー．; ラーナー，イヤル
Original assignee: ユニヴァーシティオブミシガン
Priority date: 1994-10-21
Filing date: 1995-10-20
Publication date: 1998-07-28
Also published as: AU4003795A; DE69534671D1; US5674298A; CN1162252A; IL115708A0; EP0786970B1; WO1996013227A1; IL115708A; EP0786970A4; AU713605B2; EP0786970A1; ATE311832T1; CA2202247A1; NZ296283A; BR9509473A; NO971744D0; ZA958900B; DE69534671T2; NO971744L; CN1200655C

Abstract

(57)【要約】天然起源の生体補完材料はエポキシド架橋剤で処理される。いくつかの実施例では、その組織は低分子量エポキシドで高いｐＨレベルの水性溶液中で架橋される。別の実施例では、その組織は生理学的ｐＨレベルで、トリスまたはイミダゾールのごとき第三または第四アミンで触媒されたエポキシド架橋剤で架橋される。有利な実施例においては、生体補完組織はポリホスホナート：ポリエポキシドのモノ付加物を使用して、ポリホスホナート石灰化防止剤のごとき石灰化防止剤で架橋されかつ誘導体化される。

Description

【発明の詳細な説明】石灰化耐性生体補完組織とその製造方法発明の背景本発明は一般に生体内石灰化に耐性のある材料に関し、より詳細にはエポキシド架橋剤を使用した、生体内移植に適する石灰化耐性生体材料の製造方法に関する。毎年１０万以上の人工心臓弁が患者に移植されている。弁置換外科手術が心臓弁疾患の唯一の処置法である。現在使用されている代用弁は全部がポリウレタンのごとき合成重合性材料から構成されうるメカニカル弁；ウシの囲心腔またはブタの大動脈弁から得られる生体人工弁；および大動脈同種移植片である。メカニカル弁の使用は血栓症および弁疾患を招来する組織肥大とにより複雑化する場合が多い。生体補完心臓弁はメカニカル人工弁と比較して向上されたトロンボゲン形成性および血行力学的特性を有している。しかしながら、ブタ大動脈弁またはウシ囲心腔からつくられた生体補完心臓弁の臨床的失敗の最頻原因となっているのは石灰化である。ヒトの大動脈同種移植片は生体補完心臓弁よりも遅い速度ではあるが、弁組織と周辺大動脈壁との両者の疲労を含む病理学的石灰化を蒙ることが観察されている。病理学的石灰化は狭窄および／または逆流の形での弁疾患を招き、再移植が必要となる。したがって、それら組織が石灰化を受けるという理由で、生体補完心臓弁と同種移植片の使用はこれまで制限されていた。実際に、小児患者では石灰化が加速されることが判明しており、このためこのグループの患者には生体補完心臓弁の使用が禁忌となっていた。さらに残念なことに、病理学的石灰化により合成血管移植片や心室補助システムの如き他の人工心臓器官の使用も複雑化されている。なぜならば、これら人工移植器官の製造に使用される合成重合体の可撓性に石灰化が影響を及ぼすからである。心臓脈管組織の病理学的石灰化のメカニズムはまだ完全に解明されていない。 “病理学的石灰化”という言葉は一般的にリン酸カルシウム無機塩の望ましくない沈着を指す。石灰化はホスト要因、移植片要因、外部要因たとえばメカニカルストレスなどによって起こり得る。カルシウムの沈着が活力を失った細胞特に細胞膜に関連があることを示唆するいくつかの証拠があり、このような細胞では細胞内のカルシウム濃度を低く維持するためのカルシウムポンプ（Ｃa²⁺−Ｍg²⁺− ＡＴＰアーゼ）がもはや機能しなくなるかまたは不正機能する。石灰化はヒドロキシアパタイトとして存在するカルシウムとリンの堆積と共に始まり、これが発達して結節となり、この結節が場合によって弁疾患を導くことが観察されている。移植前の生体補完組織の調製は、組織を後の生体内の酵素劣化に対して安定化する処理を包含し、たとえば、組織の上部および内部での分子、特にコラーゲンを架橋によって安定化する処理である。この目的のためにはグリオキサール、ホルムアルデヒド及びグルタールアルデヒドを含む各種のアルデヒドが使用されてきている。しかし、選択される剤はグルタールアルデヒドである。グルタールアルデヒドは組織を固定するばかりでなく、良好な滅菌剤であり、組織の抗原性を減少させる。今日まで、グルタールアルデヒドは水性条件下生理学的ｐＨにおいて使用できる移植用組織調製のための唯一の効果的架橋剤であった。残念なことには、グルタールアルデヒドは石灰化を促進することが知られている。このため、当技術分野では石灰化を促進しないで生体補完組織を架橋する手段が求められている。ポリエポキシドのごとき非アルデヒド架橋剤もすでに開発されている（たとえば Nagasi Chemicals，Osaka，Japan によってデナコール（Denacol）の商品名で販売されているポリグリセロールポリグリシジルエーテル）。しかし、生体内でのポリエポキシド架橋された組織の有効性を証明する包括的な研究はいまだなされていない。生体補完組織の石灰化を抑制する研究は洗浄剤またはジホスホナート石灰化防止剤を使用する組織の前処理にほとんど集中されている。非共有結合洗浄剤たとえばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、および共有結合洗浄剤たとえばアミノオレイン酸による洗浄剤前処理は循環血液中に露出された材料で有効性が証明されている。しかしながら、洗浄剤及びジホスホナートの両者は血液と材料との相互反応によって時間の経過と共に移植された生体補完組織を洗い出してしまう傾向がある。すなわち、これらの処理は単に不可避的な石灰化過程の開始を遅らせるだけである。したがって、生体補完心臓弁ならびに他の移植可能な生体材料または生体内の病理学的石灰化にさらされる装置のために長期間の石灰化耐性を与える手段がこの場合も求めらる。加えて、洗浄剤は組織に不利な作用を及ぼし、材料の強度、耐久性、一体性の重要な尺度であるコラーゲン変性温度あるいは収縮温度（Ｔ_s）の縮減を与える。場合によっては、洗浄剤の使用は局部毒性を生じる。したがって、洗浄剤の有害作用を伴わないで生体補完組織に石灰化耐性を賦与する有効な方法が求められている。上記した技術はすべて、いぜんとして、移植された試料のカルシウム含量により測定される生体内病理学的石灰化をある程度発生させる。したがって、より高度に石灰化を防止できる処置が求められている。ジホスホナートのごとき石灰化防止剤の全身的使用は骨および全体の成長に対し顕著な副作用を招く。したがって、低レベルの局所的薬量および最少限の副作用をもって病理学的石灰化を防止できる部位特異性治療法が求められている。したがって、本発明の１つの目的は生体内病理学的石灰化に対して向上された抵抗性を有する哺乳動物内に移植するための生体材料を提供することである。本発明の他の目的は生体内病理学的石灰化に対して長期間または延長された抵抗性を有する哺乳動物内に移植するための生体材料を提供することである。本発明のさらにいま１つの目的は局在化された石灰化を抑制することができ、石灰化防止剤の全身的投与に伴う有害副作用が回避される哺乳動物内に移植するための生体材料を提供することである。本発明のさらなる目的は生体材料を生体内病理学的石灰化に対してより耐性とするため、エポキシ架橋剤を使用して哺乳動物内に移植するための生体材料を製作および／または処理する方法を提供することである。発明の要旨上記ならびに他の目的は本発明によって達成される。本発明は、その１つの面においては、生体内に移植するために適し、不可逆的に結合された有効量のエポキシド架橋剤を含み、これが移植組織を安定化しかつ石灰化を制止し、それによって当該生体材料基質を生体内病理学的石灰化に対して耐性としている、生体材料を提供するものである。本発明のいま１つの面においては、生体材料はポリホスホナート：ポリエポキシドのモノ付加物で架橋されそして誘導体化される。ここで使用される“誘導体化”という言葉は上記したポリホスホナートのごとき石灰化防止剤がエポキシ結合を介して生体材料組織の表面に共有的に結合されることを意味する。本明細書で使用される“生体材料”という言葉は異なる動物、典型的には哺乳動物種から得ることのできるコラーゲン質材料をさす。この生体材料はたとえば移植に適当なものであり、生体補完組織などがその例である。ただし、本発明はそれらに限定されるものではない。非限定的に具体例をあげれば心臓弁特にブタの心臓弁；大動脈根、壁および／または尖頭；ウシの囲心腔；結合組織から得られた材料たとえば硬膜；同種移植組織たとえば大動脈同種移植片および伏在静脈バイバス移植片；腱、靭帯、皮膚部片、動脈、血管などである。もちろん、生体内に移植するために適当であることが公知であるかまたは公知となる予定である生物学的に得られた材料も本発明の考慮の対象に含まれる。好ましくは水溶性でありそしてカルシウム拮抗物質として機能しうるあらゆるエポキシ化合物が本発明の考慮の対象に含まれる。非限定的に適当なエポキシド架橋剤を例示すれば、モノ−またはジエポキシドたとえばジグリシジルブタンジオールエステル、エタンジオールジグリシジルエステル、エリトリトール無水物（ＥＤＥ）、ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＧＡＢ）及びエピクロルヒドリン、ならびに多価エポキシドたとえば Nagasi Chemicals，Osaka，Japan によってデナコール（Denacol）の商品名で販売されているエポキシドなどである。デナコール（Denacol）エポキシドは多価ポリグリセロールポリグリシジルエーテルである。たとえば、デナコール５１２（Denacol 512）は１分子につき４つのエポキシドを有し、そしてデナコール５２１（Denacol 521）は１分子につき５つのエポキシドを有している。ここで、“ポリエポキシド”という言葉は１分子に少なくとも２つのエポキシド部分を有する反応性多価エポキシドを意味する。本明細書で使用される“ポリホスホナート”という言葉は１分子に少なくとも２つのホスホナートを有する化合物を包含する。このようなポリホスホナートは市場で入手可能であるかまたは当技術分野に通常の知識を有する者によって合成可能である。代表的なポリホスホナートをあげれば３−アミノ−１−ヒドロキシプロパン１、１−ジホスホン酸（ＡＰＤ）およびエタンヒドロキシジホスホナート（ＥＨＤＰ）である。特定の実施例においては、他のポリホスホナートたとえばアミノメチルトリホスホン酸およびブチルペンタホスホン酸が好ましく使用される。さらなる例を非限定的に示せばヘキサメチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）およびジエチレントリアミンペンタ（メチレンホスホン酸）などである。しかしながら、エポキシ官能基と反応するタイプの少なくとも１つの官能基を有しているいずれの石灰化防止剤が本発明を実施するための使用に適している。他のアミノ含有石灰化防止剤たとえばホスホクエン酸塩のアミノ誘導体も適当であろう。さらなる例を非限定的に示せば石灰化防止剤のヒドロキシルまたはスルホヒドリル誘導体である。本発明の方法の１つの実施態様においては、生体材料は次のようにして生体内石灰化に対して耐性とされる。すなわち、生体材料基質を高ｐＨ価においてポリエポキシドで前処理して、ポリエポキシドと生体材料基質との間に不可逆的な共有結合を形成させ、石灰化部位を架橋すると共にブロックする。本発明の方法の別の実施態様においては、石灰化耐性生体補完組織が当該組織を７．０乃至８．０の生理学的ｐＨ価においてエポキシド架橋剤で架橋または固定することによって製造される。触媒系が水性条件下、生理学的ｐＨ価における生体補完組織のエポキシド架橋を可能にする。たとえば、第三または第四アミン触媒を加えたポリエポキシドの水性溶液が石灰化耐性組織をつくることが見いだされている。本発明の方法のさらに別の実施態様においては、過剰のポリエポキシドが残るような条件のもとでポリホスホナートのごとき多官能性石灰化防止剤とポリエポキシドとのモノ付加物が生成される。その過剰なエポキシが組織を架橋しそしてモノ付加物の反応性エポキシ官能基が組織タンパク質のアミノ基に結合し、そしてホスホナート含有付加物と組織との永久的共有結合がなされる。図面の簡単な説明本発明は添付図面を参照し、以下の詳細な説明を読むことによって一層良く理解されるであろう。図面中：図１は本発明の方法に従って処理し、続いて２１日間ラットの皮下に移植したブタ大動脈弁検体のカルシウム含量（μg/mg）を表すグラフである；図２は本発明の方法に従って高分子量ポリエポキシドよって架橋され、そのあと２１日間ラットの皮下に移植したブタ大動脈弁検体のカルシウム含量（μg/mg ）を表すグラフである；図３は触媒で浸漬処理したブタ大動脈弁検体のカルシウム含量（μg/mg）を表すグラフである；図４は別の触媒の存在下、高いｐＨレベル（１０乃至１１）でエポキシド架橋剤で処理したブタ大動脈弁検体のカルシウム含量（μg/mg）を表すグラフである；図５はｐＨ１０または１１でエポキシド架橋剤で処理したブタ大動脈弁尖頭の検体のコラーゲン変性温度（℃）を表すグラフである；及び図６は触媒の存在下、ｐＨ６乃至１２の範囲の各種ｐＨレベルにおいてポリエポキシド架橋剤デナコール（Denacol）で処理したブタ大動脈弁尖頭の検体のコラーゲン変性温度（℃）を表すグラフである。発明の詳細な説明以下、本発明の原理に従って石灰化耐性生体補完生体材料を製造するための技術のいくつかの例を記載する。これらの例は主として石灰化耐性心臓弁構成組織の製造について記載されているが、そこに記載されている技術は体内据置き式または外科的植え込み式装置のために使用されるタイプの生体材料を含む他のいずれかの装置、補完片またはインプラントの製作のために適用可能なものである。Ｉ．生体補完組織のエポキシドによる架橋Ａ．高ｐＨ法本発明の方法の１つの実施態様においては、新鮮な生体補完組織はｐＨ１０以上のｐＨ価で、石灰化部位の不可逆的架橋とブロックがなされるのに十分な時間、水溶性エポキシド架橋剤の水性溶液中で培養処理される。反応性多価エポキシドまたはジエポキシドでありうるエポキシド架橋剤の濃度は好ましくは約０．０１Ｍ乃至１．０Ｍ、より好ましくは約０．０５Ｍ乃至０．５Ｍの範囲である。溶液は当技術分野でのいずれかの公知の方法で、たとえば０．５Ｍホウ酸ナトリウムを使用して、１０以上のｐＨ、好ましくは１０乃至１１の範囲のｐＨ価に緩衝される。好ましい実施例においては、培養期間は約２４時間から２１日間までの間、一般的には７日間である。しかしながら、ここに記載した実施例での培養時間の長さは例示的なものであり、当業者によって変更されうる。しかし、注目されるべきことは示唆した７日間の間に生体補完組織にはなんら有害な作用も観察されなかったことである。培養温度は約４乃至６３℃の範囲でありうる。したがって、組織内のタンパク質は変性されない。好ましくは、温度は約２０℃以上であり、２５乃至３７℃の範囲が最も好ましい。ブタ大動脈弁尖頭またはウシ囲心腔のごとき生体補完片は取得後一般にグルタールアルデヒドに浸漬されて安定化され、保存される。たとえば０．０５ヘペス（HEPES）緩衝剤（Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO から入手可能なＮ−２ −ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン酸）中グルタールアルデヒドの０．２％溶液に入れて安定化され保存される。グルタールアルデヒドで保存処理された生体補完片はそのあと４℃で長期間貯蔵可能である。本発明の有利な実施態様によれば、本発明の原理に従ってエポキシド架橋剤の水溶液中で培養されたグルタールアルデヒド前処理生体補完組織は優れた石灰化耐性を示す。１つの特定な実施例においては、ブタ大動脈弁尖頭が低分子量エポキシド、好ましくはブタンジオールジグリシジルエーテルのごとき主鎖長内に４乃至６個の炭素原子を有する低分子量エポキシド０．１Ｍの高ｐＨ溶液（＞ｐＨ１０、好ましくはｐＨ１０．５乃至１１．５）中、２５℃の温度で７日間安定化され、保存され、これにより石灰化部位の安定化とブロッキングが達成される。Ｂ．生理学的ｐＨ法本発明の方法の別の実施態様においては、生体補完組織は生理学的ｐＨ、すなわち、ｐＨ７．０乃至８．０、好ましくはｐＨ７．４に緩衝された水溶性エポキシド架橋剤の水性溶液に浸漬される。この架橋液は水性条件下生理学的ｐＨにおいて生体補完組織をポリエポキシドで架橋可能にするための“触媒”として働く第三または第四アミンを含有する。本発明の実施にあたって使用可能な適当な第三または第四アミンを非限定的に例示すればトリス（ヒドロキシメトジル）アミノメタン塩酸塩（トリスと約す）およびイミダゾールである。いくつかの実施例においては触媒も溶液を緩衝する。エポキシド架橋剤は水性溶液中に０．００５乃至０．５Ｍの濃度で存在する。触媒の濃度は通常約０．０１Ｍであるが、エポキシド架橋剤の濃度に関連して変更されうる。他の反応条件、たとえば時間や温度は上記の高ｐＨ法の実施態様の場合と同様である。１つの特定の例示的実施例においては、０．１Ｍ濃度のデナコール５２１(Den acol 521)のごときポリエポキシドが０．０１ＭイミダゾールまたはトリスでｐＨ７．４に緩衝される。生体補完組織検体は２５℃の温度で７日間このエポキシド溶液に浸漬される。 11．生体補完組織のポリホスホナート：ポリエポキシドモノ付加物による架橋と誘導体化本発明の１つの有利な実施態様によれば、生体補完組織片はポリホスホナート：ポリエポキシドモノ付加物によって同時的に架橋かつ誘導体化される。ポリホスホナートを少なくとも１：２、好ましくは１：１０のモル比で純粋ポリエポキシドのストックと混合する。この条件においては、ポリホスホナート：ポリエポキシドのモノ付加物が優先的に生成され、過剰の未反応ポリエポキシドが残る。このモノ付加物含有混合物を水で０．００５乃至０．５Ｍ、好ましくは約０．１Ｍの濃度まで希釈する。いくつかの実施例の場合では、このモノ付加物含有混合物が前記のごとき触媒アミンすなわちトリスまたはイミダゾールで生理学的ｐＨに緩衝される。新鮮な、あるいは、グルタールアルデヒド前処理された生体補完組織をこの希釈されたモノ付加物含有混合物中に十分な時間浸漬して、生体補完組織の架橋ならびにポリホスホナートの該組織への結合反応を同時に達成させる。より詳細に説明すると、モノ付加物含有混合物には過剰の未反応ポリエポキシドも含まれており、この未反応ポリエポキシドが組織を架橋し、他方、モノ付加物の反応性エポキシ官能基が組織タンパク質のアミノ基と反応結合して、ホスホナート含有付加物がその組織に永久的に共有結合する。これにより得られる結果が永久的な石灰化耐性である。本発明のこの方法の１つの実施例においては、１ＭのＡＰＤがＧＡＢのごとき反応性ポリエポキシド１０Ｍに加えられ、そしてモノ付加物が生成されるまで約３０分間放置される。このモノ付加物溶液を水で０．１Ｍの濃度まで希釈し、そしてｐＨ７．５乃至１０に緩衝する。新鮮な生体補完組織が、架橋と誘導体化を達成するため、この希釈モノ付加物溶液に２５℃の温度で２４時間乃至２１日間浸漬される。ジホスホナート塩（純粋な酸の形）のための上記した濃度範囲は単なる例示であり、架橋と結合の両方を最適化するため当技術分野に通常の知識を有する者によって変更できるものであることを留意されたい。さらにまた、上記実施例に記載した培養の温度ならびに時間も例示的なものであり、当技術分野に通常の知識を有する者によって変更可能である。さらにまた、有機溶剤が生物学的な組織に不利な作用を持つという理由から、生体補完組織の処理のために水性溶液を推奨したけれども、有機溶剤も当然本発明の考慮の範囲内にあるものである。たとえば、イソプロパノールやエタノールは生体補完組織に関連してすでに安全に使用されている。実験の部：ラット皮下モデル内の生体補完組織成牛から採取したウシ体壁囲心腔の形の生体補完組織試料を屠殺場で入手し、直ちに低分子量エポキシドであるジグリシジルブタンジオールエステル（ＧＡＢ）の溶液ならびに高分子量エポキシドであるデナコール５２１（Denacol 521）（ＤＥＮ）の溶液に入れ、そしてｐＨ１０および１１、温度３７℃で７日間培養した。比較のため、いくつかの試料を０．６％グルタールアルデヒド溶液に入れてｐＨ１１、温度３７℃で７日間培養した。これらのウシ囲心腔試料を乳離れしたばかりのラット（オス、ＣＤ、Sprague- Dawley、体重５０乃至６０ｇ）の腹側腹壁内の切開した２つの皮下ポーチ内に移植した。移植後一定期間（２１日および６０日）経過後、それら組織試料を取り出して組織中のＣａ²⁺イオン濃度を測定して石灰化の進行を調べた。結果は表１に示すとおりであった。表１は高いｐＨの低分子量エポキシド溶液中で処理したウシ囲心腔試料の場合に顕著な石灰化抑制効果があったことを示している。ブタ大動脈弁尖頭の形の生体補完組織試料をＧＡＢ溶液およびデナコール５２１（Denacol 521）溶液に入れ、そしてｐＨ１０および１１、温度２５℃で７日間浸漬処理した。他の試料をＡＰＤ：ＧＡＢならびにＡＰＤ：デナコール(Denac ol)（ポリホスホナート１Ｍ対ポリエポキシド１０Ｍ）のモノ付加物を含有する溶液に入れてｐＨ１０、温度２５℃で７日間浸漬処理した。エポキシド架橋剤で処理した後、この尖頭試料を洗浄して架橋剤溶液を洗い落し、そして乳離れしたばかりのラットの腹側腹壁内の切開した２つの皮下ポーチに移植した。２１日後、それら組織試料を取り出し、そして組織中のＣａ²⁺イオン濃度を測定して石灰化の進行を調べた。結果は図１にグラフで示されている。図中のいずれの試料の場合も、カルシウム濃度はカルシウムμg/mg組織で表されている。また、未架橋組織（FRESH）が比較のため示されている。図２は本発明による２つの方法で高分子量ポリエポキシドであるデナコール５２１（Denacol 521）を使用して架橋されたブタ大動脈弁試料のカルシウム濃度（μg/mg）を表すグラフである。第１番目の方法においては、試料はイミダゾールでｐＨ７．４に緩衝されたデナコール５２１（Denacol 521）水性溶液に入れて浸漬処理した。第２番目の方法においては、グルタールアルデヒド前処理した試料をイミダゾールでｐＨ７．４に緩衝されたモノ付加物ＡＰＤ：デナコール５２１（Denacol 521）（１：１０）の水性希釈物に入れ浸漬処理した。対照試料は当技術分野の常用方法に従ってグルタールアルデヒドで架橋した。比較のために、グルタールアルデヒド前処理した試料をｐＨ７．４でジホスホナート、ＡＰＤで処理した。図２に示されているように、ラット皮下ポーチ内に２１日間移植した後において、本発明の方法によって処理された試料は対照よりはるかに少量のカルシウムを含有していた。エポキシド架橋剤が石灰化耐性に役立つことを証明するため、グルタールアルデヒド前処理されたブタ大動脈弁尖頭試料をｐＨ７．４のイミダゾールの水性溶液ならびにイミダゾールでｐＨ７．４に緩衝されたデナコール５２１（Denacol 521）の溶液に入れそして温度２５℃で７日間浸漬処理した。グルタールアルデヒド前処理されたブタ大動脈弁尖頭組織は対照を含む。図３は２１日間外移植したこれらの試料のカルシウム濃度（μg/mg）を表すグラフである。イミダゾールで触媒されたデナコール（Denacol）溶液は顕著なカルシウム濃度低下をもたらしている。図４は低分子量エポキシド（ＧＡＢ）ならびに高分子量エポキシド（デナコール(Denacol)）を使用し、高ｐＨレベル（１０〜１１、NaOHで緩衝）、２５℃の温度、０．１Ｍのトリスの存在下で７日間処理されたブタ大動脈弁試料のカルシウム濃度（μg/mg）を表すグラフである。図４の結果を図１および表１と比較すれば、トリス触媒の石灰化抑制作用は明らかである。図５は本発明の方法に従ってｐＨ１０または１１でＧＡＢまたはデナコール（ Denacol）で処理理したブタ大動脈弁尖頭について、グルタールアルデヒドを使用して得られたデータに対応するコラーゲン変性温度または収縮温度Ｔ_sを表すデータのグラフ表示である。FRESH すなわち未処理の尖頭およびグルタールアルデヒド処理した対照のコラーゲン変性温度も比較のため示されている。さらに、０．０１Ｍのトリスまたはイミダゾールを使用し、生理学的ｐＨでエポキシド架橋剤を使用した場合にも同様に満足すべき収縮温度が得られる。図６は６乃至１２の範囲の各種ｐＨ価にＮａＯＨで緩衝した、０．０１Ｍのイミダゾールを添加した０．１Ｍのデナコール（Denacol）水性溶液に入れて２５℃で７日間処理したブタ大動脈弁尖頭の収縮温度を示す。グルタールアルデヒドで処理された組織の収縮温度は約８７℃である。以上、本発明を特定の実施例および使用例について説明したが、当技術分野に通常の知識を有する者は、これらの教示のもとに、請求項記載の本発明の範囲と精神から逸脱することなくさらに多くの実施例を創出することが可能である。したがって、図面ならびに本明細書の記載は本発明の理解を助けるためのものであって、本発明の範囲を限定するものでないことを理解されたい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ラーナー，イヤルイスラエル．77402 アッシュドット，ベンエリーザーストリート２，アパートメント 26

Claims

【特許請求の範囲】１．生体内に移植するための生物学的に得られた生体材料、この生体材料はホスト生物の体内において実質的に不溶性でありそして不可逆的にそれに結合された、該生体材料基質を安定化しかつ石灰化部位をブロックして該生体材料基質を生体内病理学的石灰化に対して耐性とするために有効な量のエポキシド架橋剤を有している。２．該エポキシド架橋剤がジグリシジルブタンジオールエステル、エタンジオールジグリシジルエステル、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよび４乃至６個の炭素原子を有するポリグリセロールポリグリシジルエーテルからなる群から選択された低分子量エポキシドである請求項１記載の生体材料。３．該エポキシド架橋剤がポリエポキシドである請求項２記載の生体材料。４．該生物学的に得られた生体材料が、エポキシ官能基と反応性のある生体材料の部位においてそれに共有結合された、ポリエポキシド：多官能性石灰化防止剤のモノ付加物をさらに含有しており、該石灰化防止剤はエポキシ官能基と反応するタイプの少なくとも１つの官能基を有している請求項１または３記載の生体材料。５．該生物学的に得られる生体材料基質がウシ囲心腔、ブタ大動脈弁尖頭、伏在静脈バイパス移植片、大動脈同種移植片および硬膜からなる群から選択される請求項１または４記載の生体材料。６．生体補完組織を、１０よりも大きいｐＨ価において該生体補完組織の架橋が可能となる十分な時間、エポキシド架橋剤の溶液中で培養することからなる生体補完組織を処理する方法。７．該エポキシド架橋剤がジグリシジルブタンジオールエステル、エタンジオールジグリシジルエステル、ブタンジオールジグリシジルエーテルおよび４乃至６個の炭素原子を有するポリグリセロールポリグリシジルエーテルからなる群から選択された低分子量エポキシドである請求項６記載の方法。８．該架橋が可能となる十分な時間が約２４時間乃至２１日間である請求項６記載の方法。９．生体補完組織を、生理学的ｐＨ価において該生体補完組織の架橋が可能となる十分な時間、エポキシド架橋剤及び触媒の溶液の中で培養することからなる生体補完組織を処理する方法。 10．該触媒が第三または第四アミンである請求項９記載の方法。 11．該触媒がトリス及びイミダゾールからなる群から選択される請求項９記載の方法。 12．下記工程からなる生体補完組織を処理する方法：（ａ）多官能性石灰化防止剤及びポリエポキシドのモノ付加物をポリエポキシドの過剰量を使用して生成させ；（ｂ）そのモノ付加物を水で希釈し；そして（ｃ）該モノ付加物の希釈された水性溶液で生体補完組織を、該組織を架橋しかつ該生体補完組織をエポキシ官能基と反応性のある生物材料の部位においてポリホスホナート石灰化防止剤で不可逆的に誘導体化するために十分な時間処理する。 13．該多官能性石灰化防止剤がエポキシ官能基と反応するタイプの少なくとも１つの官能基を有している請求項１２記載の生体補完組織を処理する方法。 14．該多官能性石灰化防止剤がポリホスホナートである請求項１２記載の生体補完組織を処理する方法。