JPH10507369A

JPH10507369A - ウィルス、特にレトロウィルスの複製を阻害するためへの“免疫不全ウィルス抑制リンフォカイン（ｉｓｌ）”の使用

Info

Publication number: JPH10507369A
Application number: JP8529994A
Authority: JP
Inventors: クルート，ラインハルト; バイアー，ミヒャエル; メツネル，カリン; ベルナー，アルブレッヘト
Original assignee: Bundesrepublik Deutschland
Current assignee: Bundesrepublik Deutschland
Priority date: 1995-04-07
Filing date: 1996-04-04
Publication date: 1998-07-21
Also published as: KR100262420B1; WO1996031607A3; EP0821734A2; AU712852B2; EP0736600A2; US5985613A; WO1996031607A2; MX9707674A; US6383739B1; DE19513152A1; CA2217450A1; KR19980703704A; NZ307494A; EP0736600A3; AU5686196A

Abstract

(57)【要約】末梢血液リンパ球におけるレトロウィルスの複製を阻害する単離されたポリペプチドは、ウィルス感染及び良性及び悪性増殖疾患の治療のための治療剤として有用であり、ここで前記ポリペプチドは、ｉ）配列番号１に示されるDNA 配列又はその相補的配列によりコードされ；ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ；iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）〜ii）に定義された配列と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされることを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】ウィルス、特にレトロウィルスの複製を阻害するためへの“免疫不全ウィルス抑制リンフォカイン(ISL)”の使用本発明は、ウィルスの複製を阻害するためへの“免疫不全ウィルス抑制リンフォカイン(ISL)”の使用、ISL を含む治療組成物又はそれをコードする核酸分子に関する。 ISL 活性は、一次リンパ球(primary lymphoute; PBMC)に対するHTV 複製の阻害により定義される。一定の CD8⁺細胞、たとえば CD8⁺の他に、HLA-DR⁺，CD28^-又は CD11B^-であるヒト及び動物起源のものが、免疫不全ウィルス、たとえばHIV 及びSIV を抑制するために、活性を示すことは知られている。この活性は、免疫不全ウィルス抑制リンフォカイン又は“ISL”として言及される分子に起因している。ISL は、HIV 又はSIV により感染される CD4⁺細胞におけるウィルスの複製を阻害することができる(Ennen，Findeklee，Kurth など，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，Vol．91 ，p.7207-7211(1994))。しかしながら、ISL の正体は今日まで、不明であった。 CD4⁺T 細胞におけるHIV の複製をダウン−レギュレート(down regulate)する刺激されたヒト CD8⁺T リンパ球により分泌される可溶性因子が存在することは、少なくとも1989年(Walker，C.M.，and Leighly，J.A.，Immunology，Vol.66，p. 628-630(1989))以来、知られている。しかしながら、この活性が単一の物質に起因するか否かを確立することは現在まで不可能であり、そしてその対応する細胞培養を設定するための方法を記載し、そしてそのような抗ウィルス因子を精製するための方法を示唆する多くの出版物が存在するけれども、その活性を有する物質を単離し、そして特徴づけることは、今日まだ不可能である。そのような出版物は次のものである：WO94/23058及びWO93/0883、並びにMackewicz など(Lancet， 344，p.1671-1673(1994)); Mackewicz など（AIDS Research and Human Retrovi ruses，Vol.8，No.6，p.1039-1050(1992); Castro，Walker など(Cellular Immu nology 132，p.246-255(1991)); Blackbournなど(Journal of Medical Primatol ogy No.23，p.343-354(1994)); Chen など（AIDS Research and Human Retrovir uses Vol.9，No.11，p.1079-1086); Kannagiなど(The Journal of Immunology， Vol.140，No.7，p.2237-2242(1988)); Joag など(Virology 200，p.436-446(199 4)); Walker，Moodyなど(Science，Vol.234，p.1563-1566(1986)); Walker，Eri ckson など(Journal of Virology，Vol.65，No.11，p.5921-5927(1991)); Walke r，Thomson-Honnebierなど(Cellular Immunology 137，p.420-428(1991)); Knuc hel，Bednarik など(Journal of Acgnired Immune Deficieneg Syndromes，No.7 ，p.438-446(1994)); Ennen，Findeklee，Kurth など(Proc．Natl．Acad．Sci. ，USA，Vol.91，p.7207-7211(1994))及びHsueh，Walker など(Cellular Immunol ogy 159，p.271-279(1994))。 CD8⁺細胞から生成される免疫不全ウィルス抑制活性に対しておよそ７年間行われて来た上記の集中的な研究にもかかわらず、ISL がタンパク質であるとの仮定とは別に、その生物学的性質（特に、ISL の分子構造）は全く不明である。また、次のものも不明である： −その遺伝子又はそれがいくつかの因子から成る場合複数の遺伝子； −それが感染されている及び感染されていない CD4⁺細胞に対して作用するその態様。ISL の作用が HIV-LTR（長い末端反復体）の転写速度の負の調節に基づいているとする予備的な示唆が存在する； −他の感染におけるその作用の機構。その転写が、HIV の転写因子に匹敵する転写因子により調節されるウィルスが、ISL による負の調節にもゆだねられるであろうと仮定され得る； −正常及び悪性細胞増殖に対するその作用の機構。現知識の状況によれば、インターフェロンと同様、正常又は悪性細胞増殖に対する阻害効果が可能であることは否定できない； −ISL がCD4 発現を調節するかどうかの事実； − HIV−感染した患者の場合、インビトロで測定できるISL 活性の低下が時間と共に生じる理由； −ISL がまた、HIV により感染されたヒトにおける感染と疾病の進行との間の長い潜伏期を一部担当するか否か、すなわち陽性予後と肯定的に相関するか否かの事実。従って、ISL を同定し、そしてそれが１の物質を表わすか又はいくつかの物質を表わすかを明確にし、並びに免疫不全ウィルス及び他のウィルスに対するその治療作用に関してそれを試験するという問題が発生した。 Cruikshank and Center(Journal of Immunology 128（1982）2569-2574)は、本発明のポリペプチドの配列にかなり類似する配列を有する“リンパ球化学誘引因子”（lymphocyte chemoatractant factor; LCF）と呼ばれるタンパク質を記載している。それはヒトリンパ球により発現され、そしてリンフォカインのグループのメンバーである。ゲル濾過による適切な精製の後、ドデシル硫酸ナトリウムにより約14,400の分子量を有するモノマーに切断される約56,200の分子量を有する均質生成物が得られた。このリンフォカインは、遅延型免疫応答（遅延型過敏反応）の形成及び増幅において役割を演じることが仮定された。 LCF の核酸配列は、Cruikshank，W.，など.，Proc．Nat．Acad．Sci．USA 91 （1994）5109-5113により記載されている。それに由来するヌクレオチド配列及びタンパク質配列は、GenBank データベースでアクセス番号M90391として入手でき、そして配列番号３及び４に示されている。 Cruikshankなど(Journal of Immunology 138，3817-3823(1987))から、LCF が CD4⁺リンパ球上のインターロイキン２(IL2)受容体及びHLA-DR抗原の発現を刺激することも知られている。従って、LCF はまた、成長因子としても言及される。さらに、Journal of Immunology 146，2928-2934（1991）においてCruikshankなどは、LCF がリンパ球において CD4−依存性細胞質内シグナルを誘発することを記載しており、そして従って、それらのシグナルが第２タイプのメッセンジャーとして作用することを結論づけた。J．Exp．Med．173，p.1521-1528(1991)において、Rand，Cruikshankなどは、さらに、LCF によるヒト好酸球の刺激、及び活性化されたＴ−リンパ球によるその大規模な生成を記載している。最後に、Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，Vol.91，p.5109-5113(1994)において、Cruikshankなどは、マイトジエン−刺激された単核血液細胞（PBMC：末梢血液単核細胞）からの発現ライブラリーからのLCF cDNAの単離及び生物学的活性組換えLCF タンパク質（rLCF）を生成するためにE.コリ中への導入によるLCF のクローニングを記載する。組換えLCF は、9.0 の等電点を示す（Center，D.M.，など.，J．Lab．Cli n．Med．125（1995）167-171）。 Cruikshank，W.，など（Proc．Nat．Acad．Sci．USA91（1994）5109-5113）は、LCF が細胞内反応において好酸球及び CD4⁺単核細胞の同時補充に寄与することを記載している。Cruikshankはさらに、CD4⁺細胞に対するLCF 活性が組織における感作されていないＴ細胞の蓄積のための機構を提供することを示唆している。IL-2応答のために CD4⁺T 細胞を感作するその能力がこのＴ細胞集団の特異的拡張において役割を演ずる。WO94/28134 において、同じ著者は、免疫抑制剤として又は免疫抑制治療の部分としてLCF を使用することを示唆している。しかしながら、LCF の抗ウィルス活性は、それらの出版物には記載されておらず、又はそれから自明でもない。それとは逆に、Ce nter，D.M.，など（1995）（前記）は、LCF が炎症工程を増幅することを結論づけている。発明の要約本発明の目的は、免疫不全ウィルス抑制リンフォカイン(ISL)の同定及び分子クローニング、並びにISL 活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子の単離である。そのようなポリペプチドは、改良された性質、特にWO94/28134に記載されるポリペプチドよりも高い活性を有する。より具体的には、本発明は、真核生物、たとえばヒト、モンキー及び他の種のISL をコードするそれらの核酸分子に関する。下記に示されるような緊縮条件下で配列番号１にハイブリダイズし、そしてISL 活性を有するポリペプチドをコードする核酸分子が特に好ましい。天然、合成及び組換え的に生成されたISL がウィルス、特にレトロウィルスの複製をインビボ及びインビトロで抑制できることが示されている。本発明のヌクレオチド配列は、CD4⁺リンパ球に結合し、そしてウィルス、たとえば特にHIV-1，HIV-2及びSIV 株の複製を抑制することができるポリペプチドをコードする。従って、そのようなポリペプチド、活性フラグメント及び誘導体もまた、本発明の目的物でもある。ISL の機能は、MHC 複合体におけるその表示（ representa tion）により制限されない。本発明のもう１つの目的は、ウィルス感染、好ましくはレトロウィルス感染及び／又はウィルスに基づく良性及び悪性疾患の治療処置へのISL の使用、及びIS L を含む療法組成物の製造、並びにそのような療法剤の製造のためへのその使用である。本発明のもう１つの目的は、疾病、特にウィルス感染の処理のために効果的な量でISL を含む療法組成物である。その医薬組成物又は剤はまた、医薬的に適合できる適切なキャリヤー物質も含む。本発明のもう１つの目的は、ポリクローナル又はモノクローナル抗−ISL 抗体又はその免疫活性フラグメント、及びそのような抗体の生成方法、並びに真核細胞、特に哺乳類サンプル、好ましくは哺乳類細胞に由来するサンプル中のISL 決定及びウィルス感染の検出のためへのそれらの使用である。本発明のもう１つの目的は、ウィルス活性化された哺乳類細胞、特にＴ細胞の検出のためへのISL の使用である。本発明のもう１つの目的は、可溶性又は不溶性の自由な又は細胞結合されたIS L の検出のための方法である。そのような診断方法は、急性又は慢性の感染を検出するための、ウィルス感染の進路をモニターするための、及び／又はウィルスに基づく良性及び悪性疾患のモニター及び検出するための方法である。本発明のさらなる目的は、ヒト細胞においてのISL の活性化のために真核細胞においてISL の発現を確保できるヌクレオチド分子の、インビボ又はエクスビボ遺伝子療法への使用である。本発明のさらなる目的は、CD8⁺T 細胞においてISL 活性を活性化する少なくとも１種の物質及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る、ウィルス複製、特にレトロウィルス複製により特徴づけられる病理学的状態を処理するのに有用な治療用組成物に関する。従って、本発明のもう１つの目的は、患者におけるウィルスの複製を阻害するための物質及び治療用剤の生成のための方法に関し、ここで前記方法は、CD4⁺細胞におけるウィルス複製が阻害される程度、ISL 活性を有するタンパク質、好ましくは配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質の CD8⁺T 細胞における発現を活性化する、治療的に有効な量の物質と医薬的に許容できるキャリヤーとを組合すことを含んで成る。本発明のさらなる目的は、CD8⁺T 細胞におけるISL 活性を活性化する少なくとも１種の物質及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る、ウィルス複製、特にレトロウィルス複製により特徴づけられる病理学的状態を処理するのに有用な治療用組成物にも関する。発明の詳細な記載本発明は、アッセイ（また、以後に、HIV 阻害アッセイとしても言及される）におけるレトロウィルスにより感染されていない正常なヒト血液サンプルのバフィーコートから調製される CD8⁺−消耗された（depletel）末梢血液リンパ球（P BMC）におけるHIV-1、好ましくは HIV-1_SF2の複製を阻害するISL 活性を有する新規の単離されたポリペプチドに基づいており、ａ）前期アッセイでは、前記 CD8⁺−消耗されたPBMCが、150 μｌの培地において0.1 μｇの前記ポリペプチド／1.5×10⁶個の細胞と共に37℃で30分間インキュベートされ；ｂ）続いて、前記 CD8⁺−消耗されたPBMCが、50組織感染用量₅₀（TCID₅₀）を含むHIV-1 ストック溶液50μｌと共に150 μｌ中、1.5 ×10⁶個の細胞を37℃で１時間インキュベートすることによって、HIV-1、好ましくはHIV-1SF2により感染せしめられ；ｃ）前記感染された CD8⁺−消耗されたPBMCが、結合されていないHIV-1 及び好ましくはポリペプチドを除去するために洗浄され；ｄ）CD8⁺−消耗されたPBMCが、５％CO₂雰囲気下で37℃で培養され、そして培地が変えられ、そして前記ポリペプチドが、３，６，９及び12日後に添加され；ｅ）CD8⁺−消耗されたPBMC細胞培養上清液におけるHIV-1 の量が、上清液の連続的な３倍希釈、及び前記HIV-1 株により85％又はそれ以上の程度まで通常、感染できるべきである高い感受性の指示細胞系、好ましくはヒトHTLV−形質転換されたリンパ腫細胞系MT4の2000個の細胞を150 μｌの培地当たりに含む四重ウェルにおける接種により、感染後９及び12日で決定され；ｆ）個々のウェルにおけるウィルス複製が、製造業者の説明に従って、単一のウェルごとの細胞培養上清液における逆転写酵素（RT）の決定により（好ましくは、Boehringer Mannheim GmbH，Biochemica，68298 Mannheim，Germany のReve rse Transcriptase Assay，Order No : 1468 120が適用されている）、感染後８日で決定され；ｇ）CD8⁺−消耗されたPBMC培養物の組織感染用量50（TCID₅₀）が、次の式に従ってのKarber(Karber，G，193)，Assay for statistical analysis of pharmaco logical experiments，Areh．Exper．Path．V.Pharmakol．162，148）により公開された方法に従って計算され： Log TCID₅₀＝ L−d(s−0.5)、式中、Ｌ＝最低のウィルス希釈度の対数、ｄ＝ウィルス希釈度の対数、ｓ＝ウィルス−陽性細胞培養物の合計；ｈ）CD8⁺−消耗されたPBMC培養物におけるHIV-1 複製の阻害が、段階ａ）〜ｇ）に従ってのアッセイにおける細胞培養上清液のウィルス含有量と段階ａ）〜ｇ）に従ってのアッセイのウィルス含有量（ここで、HIV 複製の阻害について試験されるべき前記ポリペプチドがポリペプチドを含まない緩衝液（未処理対照）により置換されている）の比較により計算され；ｉ）CD8⁺−消耗されたPBMCにおけるウィルス複製の量が、そのウィルスの量が未処理の対照に比較して約50％又はそれ以下、より好ましくは10％又はそれ以下、最っとも好ましくは１％又はそれ以下であるような態様で阻害されるのであれば阻害性が見出され、そして前記ポリペプチドが、ｉ）配列番号１に示されるDNA 配列によりコードされ、 ii）緊縮(stringent)条件下で配列番号１又は３とハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）〜ii）に定義された配列と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ、但し、前記ポリペプチドは、配列番号３に示されるDNA 配列によりコードされるポリペプチドとは異なっている。配列番号２又は４の好ましいポリペプチドのほかに、ISL 活性を有する有用なポリペプチドはまた、図３の好ましいポリペプチドである。図３はまた、それらのポリペプチドをコードするDNA 配列をも示している。さらなる好ましいポリペプチドは、アミノ酸26（アラニン）が欠失されている本発明のポリペプチドである。そのようなポリペプチドはまた、ヒト及びモンキーにおいて天然の対立遺伝子形として存在する。続く例においては、HIV-1_SF2として知られているHIV-1 株が用いられる。これは典型的なNorth American/European 株である。そのヌクレオチド配列は配列番号７に示されており、そしてまた、Ge n Bankアクセス番号KO2007としてアクセス可能である。他のHIV 株は、HIV-1_SF3 ₃ （配列番号８）、並びにたとえばChang-Mayer など.，J.Virol．64（1990）439 0-4398；Levy，J.A.など.，Science 232（1986）998-1001；Luciw，P.A.など.， Nature 312（1984）760-763；Sanchez-Pescador，R．など.，Science 227（1985 ）484-492 に示される株を包含する。 ISL 活性の決定のために適用されるアッセイにおいては、Ficollグラジエント精製され、そしてフィトヘマグルチニン（phytohaemagglutinin; PHA）により刺激されたPBMCが、HIV-1 株により感染され、そして培養された。CD8⁺−消耗されたPBMCが、PBMCの使用に比較して、改良された精度のために使用される。しかしながら、PBMCを用いることもまた可能である。CD8⁺−消耗された細胞は、特異的抗体を用いての細胞分別（cell sorting）により選択される。そのような方法は、当業界において広く知られているものである。培養上清液がそれらのウィルス含有率について試験される。このためには、たとえば、逆転写酵素又はP24 抗原の決定が実施され得る。もう１つの可能性は、個々の場合、ウィルスフリーの細胞上清液として言及される、高い感受性の指示細胞系(indicator cell line)の感染のレベルを決定することである。そのような試験においては、試験される物質が少なくとも50％、好ましくは70％、より好ましくは90％又はそれ以上の逆転写酵素活性の低下を引き起こす場合に、ISL 活性が認められるであろう。ポリペプチドは、そのDNA 配列及びそれに由来するアミノ酸配列により定義され得る。ISL ポリペプチドは、個々に異なる天然の対立遺伝子の変動を伴って存在することができる。そのようなアミノ酸の変動は通常、アミノ酸の置換である。しかしながら、それらはまた、全体の配列に対するアミノ酸の欠失、挿入又は付加であり得る。程度及びタイプの両者に関して、発現される細胞及び細胞タイプに依存する本発明のISL タンパク質は、グリコシル化されているか又はグリコシルされていない形で存在することができる。ISL 活性を有するポリペプチドは、上記HIV 阻害アッセイにより容易に同定され得る。図３は、ヒト及び異なったモンキーのISL のDNA 及びポリペプチド配列の比較を示す。コドン2.6（Alaをコードする）が欠失されている対立遺伝子変異体がそれらのすべての種に存在することがさらに見出された。図３から見出されるように、ISL ポリペプチド及びそれをコードする核酸配列が好ましく、ここでアミノ酸７がSer 又はThr であり、アミノ酸25がThr 又はSer であり、アミノ酸31がCy s 又はTyr であり、アミノ酸76がVal 又はIle であり、アミノ酸86がGly 又はAl a であり、アミノ酸112 がIle 又はThr であり、アミノ酸121 がSer 又はPro であり、そして／又はアミノ酸128 がGly 又はAla である。アミノ酸26が欠失される好ましいポリペプチドもまた存在する。そのような変異は、一般的に生物学的性質の変更を伴わないで、ISL の抗ウィルス腫瘍治療（良性又は悪性）及び／又は免疫抑制活性を改良することができる。 “ISL 活性を有するポリペプチド又はISL”とはまた、マイナーなアミノ酸変動を有するが、しかし実質的に同じISL 活性を有するタンパク質をも意味する。実質的に同じとは、活性が同じ生物学的性質のものであること、及びポリペプチドがアミノ酸配列において好ましくは少なくとも75％の相同性を示すことを意味する。より好ましくは、アミノ酸配列は、少なくとも90％同一である。 “指示細胞系”(indicator cell line)とは、HIV 阻害アッセイに使用されるH IV-1 株により85％又はそれ以上の程度まで通常、感染性であるべきであるリンパ腫細胞系を意味する。好ましくは、そのような指示細胞系は、引用により本明細書に組込まれる、Norley，S.G.，など .，Biologicals 21（1993）251-258に記載されるMT4である。他の有用なリンパ腫細胞系は、引用により本明細書に組込まれる、Cheng-Mayer，C.,など，Virol ．181（1991）288-294 及びJ．Virol．65（1991）6931-6941 により記載される。それらの出版物には、HIV-1 により高いか又は低い程度感染されるリンパ腫細胞系が記載されている。命名された細胞系から、HIV 阻害アッセイのHIV 株により85％又はそれ以上の程度まで通常、感染性であるそれらの細胞系のみが有用である。 “ISL 活性”とは、ヒト(ISL)又は動物起源(たとえば、アフリカグリーンモンキーのリンパ球におけるISL(ISL-agm))の活性化された及び活性化されていない CD8⁺リンパ球の組織培養物上清液の抗ウィルス作用を意味する。 “ISL”とは好ましくは、その配列が配列番号１，２，３又は４で示される分子を示す。 ISL は、そのグリコシル化された又はグリコシル化されていない形で、活性であるポリペプチドである。グリコシル化されていない形は、原核細胞における組換え技法により生成され得る。 ISL は、活性化されていない（少量）及び、活性化されたＴリンパ球により生成される。ISL は、CD4⁺リンパ球に、好ましくはCD4 受容体分子に、又はCD4 分子と会合する（associated）分子に結合する。ISL は、現在までに試験されたすべてのHIV-1 及びHIV-2 株並びに前に試験されたすべてのSIV 株の複製を抑制した。この効果は、末梢血液からの CD4⁺リンパ球及び多くのヒト CD4⁺−陽性Ｔ細胞リンパ腫に対して観察され得る。少なくともアフリカグリーンモンキーのISL がヒト CD4⁺細胞におけるHIV の複製を抑制することができるので、ISL は種間 −特異的作用を有する。ISL の機能は、MHC 遺伝子座（主要組織適合遺伝子複合体）の不適合性により制限されず、そしてそれは細胞に対して溶解作用を有さない。ISLは、HIV により感染された無症状患者の CD8⁺リンパ球により、及び症状患者からの細胞により（少ない）、合成される。ISL はまた、健康な血液提供者の活性化された CD8⁺細胞により生成される。ISL 合成の程度は、HIV−感染された患者の臨床状態に定量的に相関する。無症状患者におけるISL 活性は、症状患者においてよりも高い（相当数の活性化された CD8⁺リンパ球を有する）。ISL の抗ウィルス作用は、これまで知られているリンフォカイン及びインターフェロンと同一ではない。ISL 活性はまた、HIV−感染された及び感染されていないチンパンジー、並びにSIV −感染された及び感染されていないアフリカグリーンモンキー、Rhesusモンキー及びSo oty マンガベーの活性化された CD8⁺リンパ球の細胞培養物上清液にも検出されている（Ennen，J.,など，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91（1994）7207-7211）。ISL は、他の HIV/SIV株による過感染（saperinfection）に対して保護することができる（Cheng-Mayer，C.,など，J.Virol．64（1990）4390-4398）。 ISL 活性を有するタンパク質は、Cruikshankなど，Proc．Natl．Acad．Sci．U SA 91（1994）5109-5113及びWO94/28134に記載されており、そしてLCF と命名される（前記を参照のこと）。このタンパク質は、配列番号３によりコードされ、そして従って、配列番号４の配列を有する。Cruikshankは、GenBank データベースにより与えられるアクセス番号M90391として報告される配列について言及する。GenBank 及びCruikshankの図２に示されるタンパク質配列は同一であるが、その核酸配列は、ヌクレオチド1070で差異を示す。GenBank の配列において、このヌクレオチドはＴであるが、Cruikshankの出版物の図２においては、このヌクレオチドはＧである。TTG は Phe ではなく、Leu をコードするので、Ｇは印刷上の誤りであることは明らかである。これは、独立したPCR 増幅に由来するISL cDNAのクローニングにより確かめられる。それらのクローンから、コドン96におけるLCF 配列は配列TTT により実際、表わされることが明白である。従って、ヌクレオチド1070はＴである。用語“核酸分子”とは、たとえばDNA，RNA、又は誘導体化された活性DNA もしくはRNA であるポリヌクレオチドを示す。しかしながら、DNA 及び／又はRNA 分子が好ましい。用語“緊縮条件下でハイブリダイズする”とは、２種の核酸フラグメントがSa mbrookなど.,“Expression of cloned gones in E.coli”in Molecular Cloning : A Laboratory manual（1989）Cold Spring Harbor Laboratory Press，New Y ork，USA，9.47-9.62 及び11.45-11.61 に記載される標準的ハイブリダイゼーション条件下でお互いにハイブリダイズすることができることを意味する。より具体的には、“緊縮条件”とは、本明細書に使用される場合、約45℃での 6.0×SSC においてのハイブリダイゼーション、続く50℃での 2.0×SSC の洗浄を意味する。緊縮性の選択のためには、洗浄段階における塩濃度は、低い緊縮性のために50℃で約 2.0×SSC から高い緊縮性のために50℃で約 0.2×SSC まで選択され得る。さらに、洗浄段階における温度は、室温での低い緊縮条件から約65 ℃での高い緊縮条件まで高められ得る。本出願を通して使用される用語“単離された”とは、ISL 活性を有する核酸又はポリペプチドを意味し、そして組換えDNA 技法により生成される場合、細胞物質又は培養培地、又は化学的に合成される場合、化学前駆体又は他の化学物質を実質的に有さない。単離された核酸は好ましくは、その核酸が由来する生物における核酸を天然において端に有する配列（すなわち、前記核酸の５′及び３′端に位置する配列）を有さない。 ISL は、ISL に対するモノクローナル抗体を用いてアフィニティークロマトグラフィーにより、活性化されたＴ細胞から単離され、そして精製され得る。他の既知のタンパク質精製技法、たとえば免疫沈殿、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、等電点電気泳動、選択沈殿、電気泳動及び同様の方法を用いることもまた好ましい。精製工程の間に単離された画分は、 ISL 特異的抗体を用いることによって、ISL 活性の存在について分析され得る。本発明のポリペプチドはまた、組換え手段により又は合成的に生成され得る。グリコシル化されていないISL ポリペプチドは、それが原核生物において組換え生産される場合に得られる。本発明により供給される核酸配列の助けにより、いづれか所望の細胞（たとえば、ヒト細胞の他に、また他の哺乳類の細胞）のゲノムにおけるISL 遺伝子又はその変異体を調べ、それらを同定し、そしてISL タンパク質をコードする所望する遺伝子を単離することが可能である。そのような工程及び適切なハイブリダイゼーション条件は、当業者に知られており、そしてたとえば、Sambrook，J.，など.,“Expression of cloned genes in E.coli”in M olecular Cloning : A Laboratory manual（1989）Cold Spring Harbor Laborat ory Press，New York，USA，及びB.D．Hames，S.G．Higgins，Nucleic acid hyb ridisation-a practical approach（1985）IRL Press，Oxford，England により記載される。この場合、それらの出版物に記載される標準の方法は通常、実験のために使用される。組換えDNA 技法及びHIV 阻害アッセイの知識の使用は、多くの活性ISL 誘導体の生成を可能にする。そのような誘導体は、置換、欠失又は付加により個々の又はいくつかのアミノ酸において修飾され得る。その誘導体化は、たとえば、部位特定突然変異誘発により実施され得る。そのような変動は当業者により容易に実施され得る(J．Sambrook，B.D．Hames， loc．cit.)。ISL の特徴的な性質（ウィルス複製の阻害）が保存されることは、上記HIV 阻害アッセイにより単に確かめられるべきである。従って、さらに本発明は、外因性DNA の真核又は原核発現の生成物であるISL ペプチドにも関する。本発明はさらに、上記HIV 阻害アッセイにおけるレトロウィルスにより感染されていない正常なヒト血液サンプルのバフィーコートから調製される、CD8⁺−消耗されたPBMCにおけるHIV-1 の複製を阻害するポリペプチド又はそのフラグメントもしくは誘導体をコードする単離された核酸分子にも関し、そしてここで前記核酸分子は、ｉ）配列番号１に示されるDNA 配列又はその相補的配列、 ii）緊縮条件下で配列番号１又は３とハイブリダイズする核酸分子、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）又はii）に言及される配列の１つと緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子から成る群から選択され、但し、前記単離された核酸分子は配列番号３と同一ではない。本発明の好ましい態様においては、配列番号４のポリペプチドをコードする核酸分子もまた、拒否される。 ISL タンパク質をコードするそのような核酸の助けにより、本発明のタンパク質は、再生できる態様で且つ多量に得られる。原核生物又は真核生物、たとえば原核宿主細胞又は真核宿主細胞における発現のためには、核酸が、当業者に知られている方法に従って、適切な発現ベクター中に組込まれる。そのような発現ベクターは好ましくは、調節可能／誘導可能プロモーターを含む。次に、それらの組換えベクターは、適切な宿主細胞、たとえば原核宿主細胞としてのE.コリ、又はサッカロミセスセレビシアエ（Saccharomyces cerevisiae）、真核宿主細胞としての奇形癌細胞系（Terato carcinoma cell line）PA-1 sc 9117(Buttnerなど.，Mol．Cell．Biol．11（1991）3573-3583)、昆虫細胞、CHO 又はCOS 細胞中に発現のために導入され、そしてその形質転換された又はトランスダクションされた宿主細胞が、異種遺伝子の発現を可能にする条件下で培養される。タンパク質の単離は、宿主細胞から又は宿主細胞の培養上清液から、既知の方法に従って実施され得る。そのような方法は、たとえばAusubel I.，Frederick M，Curront Protocols in Mol．Biol．(1992)，John wiley and Sons，New Yorkにより記載されている。また、タンパク質のインビトロ再活性化は、それが細胞培養物に可溶性形で見出されない場合、必要である。 ISL タンパク質を組換え生産する形質転換された又はトランスダクションされた宿主細胞の検出及び前記タンパク質の精製は、好ましくは、そのタンパク質に結合する抗体により行なわれる。そのような抗体は、抗原又は免疫原として本発明のタンパク質を用いることによって、既知方法に従って単純な態様で得られる。従って、本発明はさらに、そのタンパク質を結合する抗体の生成のためへの、本発明のISL 活性を有するタンパク質の使用にも関する。抗−ISL 抗体は、精製されたISL 又はそのポリペプチド誘導体により、好ましくはアジュバントと共に適切な脊椎動物の宿主を免疫化することにより生成される。前記技法は、文献において良く知られており、そしてたとえば、Harlow and Lane eds.，Antibodies : A laboratory manual(1988)，Cold Spring Harbor L aboratories Pressにより記載されている。このためには、この目的のために通常使用される動物、たとえば特に、羊、ウサギ又はマウスが、本発明のタンパク質（好ましくは、図３のタンパク質）により免疫化され、そして続いて、抗血清が既知の方法に従って、免疫化された動物から単離され、又は免疫化された動物の脾臓細胞が不滅化された細胞、たとえば骨髄腫細胞により、Kohler and Milstein（Nature 256（1975）495-497）の方法に従って、融合される。ISL タンパク質に対してのモノクローナル抗体を生成するそれらの細胞が、この手段で得られるハイブリドーマ細胞から選択され、そしてクローン化される。この手段で得られたモノクローナル又はポリクローナル抗体が、支持材料、たとえばセルロースに、ISL の免疫吸着精製のために結合され得る。さらに、この種類の抗体が、サンプル、たとえば組織又は体液におけるIS L の検出のために、好ましくはウィルス感染及びウィルスにより誘発された良性及び悪性疾患の検出のために、最も好ましくは、哺乳類サンプルにおけるレトロウィルス感染の決定のために使用され得る。そのようなアッセイにおいては、IS L は、特定段階におけるその抗体に免疫学的に結合される。従って、本発明はさらに、ISL タンパク質、好ましくは、前記ISL タンパク質により動物を免疫化し、そしてその免疫化された動物の血清又は脾臓細胞から抗体を単離することによって得られる、Cruikshankにより開示されないISL タンパク質に対する特定の抗体、及びISL の決定のためへのそれらの使用にも関する。さらに、本発明は、医薬剤の製造のための、及びウィルス感染、好ましくはレトロウィルス感染、たとえばHIV 感染の処置のための、並びに良性及び悪性疾患の治療、特に腫瘍治療、最も好ましくはウィルス感染された腫瘍の治療のための、配列番号３のタンパク質を包含する上記態様で定義されたポリペプチドの使用にも関する。前記タンパク質は、前記治療用途のための医薬配合物において、通常使用される助剤、充填剤及び／又は添加剤と共に加工される。従って、本発明は、さらに、本発明のISL ポリペプチドを、所望には、助剤、充填剤及び／又は通常使用される添加剤と共に含む治療用組成物にも関する。本発明のポリペプチドが治療用途のために使用される場合、それらの用量は意図された使用に依存する。その用量を見出し、そしてその適用を最適化するためには、通常、ポリペプチドの半減期及び生物利用性のような性質、及び患者の年齢及び体重がまた、考慮されるであろう。最適な治療効果は、本発明のポリペプチドが、感染の後、できるだけ早く、好ましくは最初のウィルスピークの後、できるだけ早く適用される場合に達成される。ここで、ウィルス複製を効果的に阻害する本発明のポリペプチド及び物質の濃度がウィルス感染の初期段階の間、血液に保持されることが重要である。これは、たとえば、12〜72時間の間隔で、本発明のポリペプチド１〜1000μｇ／患者の適用により達成され得る。適用の期間は、適切には、本発明に従ってのウィルス複製又はウィルスの量の決定の方法により、又は当業者に知られているウィルス決定の他の方法により決定され得る。適用期間は、数日〜数カ月の範囲である。本発明はさらに、遺伝子療法における、そして特に、遺伝子療法、好ましくは抗ウィルス又は免疫抑制治療又は良性又は悪性疾患の治療のための医薬の製造のための、ISL 遺伝子又はそのフラグメント、好ましくはISL 活性を有し、又は５ ′未翻訳領域からのポリヌクレオチドを活性化するポリペプチドをコードする核酸分子の使用にも関する。体細胞の遺伝子療法は、たとえばレトロウィルスベクター、他のウィルスベクターを用いて、又は非ウィルス遺伝子トランスファーにより達成され得る（たとえば，T．Friedmann，Science 244（1989）1275 ; Mo rgan 1993，RAC DATA MANAGEMENT REPORT，June 1993）。遺伝子療法のために適切なベクターシステムは、たとえばレトロウィルス（Mu lligan，R.C.（1991）in Nobel Symposium 8 : Ethiology of human disease at the DNA level（Lirdsten，J．and Patlersun Editors）143-189，Raven Press ）、アデノ関連ウィルス（McLughlin，J．Virol．62(1988)，1963）、ワクシニアウィルス（Mossなど.，Ann．Rev．Immunol．5（1987）305）、ウシ乳頭腫ウィルス（Rasmussen など.，Methods Enzymol．139（1987）642）、又はヘルペスウィルス、たとえばエプスタイン−バールウィルス(Margolskeeなど.，Mol．Cell ．Biol．8（1988）2937)又は単純ヘルペスウィルスの群から選択されたウィルスである。非ウィルス性供給システムもまた知られている。このためには、通常、“ヌード”核酸、好ましくはDNA、又は助剤、たとえばトランスファー試薬（リポソーム、デンドロマー、ポリリシン−トランスフェリン−接合体）と共に核酸が使用される（Felgner など.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84（1987）7413）。たとえば、W.F．Anderson など.,アメリカ特許第 5,399,346号に記載されるようなエクスビボ(ex vivo)遺伝子療法が特に好ましい。この方法によれば、本発明のポリペプチドは、ヒト細胞をヒト中に導入することによってヒトに供給され、ここで前記ヒト細胞は、本発明のポリペプチドをコードするDNA セグメントをそこに挿入するためにインビトロで処理されており、そして治療的に有効量の前記ポリペプチドを前記ヒトにおいてインビボで発現する。ヒト細胞としては、好ましくは線維芽細胞、又は好ましくは CD3⁺，CD4⁺，CD8⁺により特徴づけられる自己由来の造血幹細胞が使用される。CD34の高い発現及びCD38発現の不在により特徴づけられる初期のヒト造血前駆体細胞が特に好ましい。しかしながら、また、より分化された造血幹細胞、たとえばCD34⁺及びCD38⁺細胞も使用され得る。そのような細胞は、たとえばTerstapp enなど.，Blood 77（1991）1218 又はHuang and Terstappen，Nature 360（1992 ）745 により記載されている。線維芽細胞のトランスフェクションのためには、好ましくは、サイトメガロウィルス(CMV)−基礎のベクターが使用される。造血幹細胞のトランスフェクションのためには、モロニーネズミ白血病ベクター(mol ony murine leukemia vector; MMLV)に基づくレトロウィルスベクターを使用することが好ましい。そのような技法は、たとえば引用により本明細書に組込まれる上記アメリカ特許第 5,399,346号に技術的に記載されている。治療的な適用の規制のためには、自殺遺伝子システム(suicide gene system)（たとえば、tk-Ge n(Ganciclovir)）の使用が好ましい。遺伝子療法のもう１つの好ましい方法は、相同組換えに基づく。これにおいては、ISL タンパク質をコードする遺伝子のいずれかが体細胞のゲノム中に１もしくは複数のコピーとして挿入され得、そして／又は細胞に内因的に存在するISL 遺伝子が調節され、好ましくは活性化され得る。相同組換え方法は、たとえばKucherlapati，Proc．in Nucli．Acids Res．and Mol．Biol．36（1989）301 ; Thomasなど.，Cell 44（1986）419-428 ; Thomas and Capecchi，Cell 51（1987）503-512 ; Doetschmanなど.，Proc．Natl．Aca d．Sci．USA 85（1988）8583-8587 及びDoetschmanなど.，Nature 330（1987）5 76-578に記載される。それらの方法においては、ゲノムにおける特定部位で組込まれるべきDNA の一部（ISL の遺伝子フラグメント）が、標的DNA に結合される。その標的DNA は、ゲノムDNA の領域（好ましくは、 ISL 遺伝子内又はそれに対して近位の）に対して相補的（相同）であるDNA である。一本鎖DNA の２つの相同部分(たとえば、標的DNA 及びゲノムDNA)がお互い接近して存在する場合、それらはハイブリダイズし、そして二本鎖ヘリックスを形成するであろう。次に、ISL 遺伝子フラグメント及び標的DNA が、組換えの発生によりゲノム中に組込まれ得る。この相同組換えは、インビトロ及びインビボ（患者において）の両者で行なわれ得る。好ましくは、ISL 活性を有するタンパク質をコードするDNA，ISL発現を阻害するフラグメント（ノック−アウト配列）、又は細胞のゲノムの組込みの後、ISL 活性を有するタンパク質のその細胞における発現を活性化できるフラグメントが使用される。そのようなフラグメントはたとえば、その対応するISL 領域に対して非相同であり、又はISL 遺伝子中への組込みの後、実際的にサイレントな又はわずかな程度発現されるISL 遺伝子を転写的に及び／又は翻訳的に活性化するプロモーター及び／又はエンハンサー領域であり得る。従って、このDNA により、１又は複数のISL 遺伝子が標的細胞中に新しく導入され、又は哺乳類細胞のゲノムにおける実質的に転写的にサイレントな遺伝子が、その哺乳類細胞が内因性ISL タンパク質の生成を可能にされるように活性化される。最後に、DNA 構造体が相同組換えによりゲノム中に挿入され、ここで前記 DNA 構造体は次のものを含んで成る：作用可能に連結される場合、遺伝子の発現を刺激することができるDNA 調節要素；及び遺伝子内又はそれに隣接して存在する、ゲノムにおける領域に対して相同である１又は複数のDNA 標的要素。この構造体は、調節セグメントがISL 活性を有するタンパク質をコードする遺伝子に作用可能に連結されるような態様で、哺乳類細胞のゲノム中に挿入される。好ましくは、前記構造体はさらに、特にISL 活性を有するタンパク質をコードする遺伝子が細胞中に挿入される場合、増幅配列も包含する。標的細胞中へのISL 遺伝子の導入のためには、構造体は、調節要素、１又は複数のISL 遺伝子、及び１又は複数の標的セグメントを含んで成る。その標的セグメントは、それらがゲノムの適切な領域とハイブリダイズし、それにより、相同組換の後、その挿入された外因性ISL 遺伝子が発現されるような態様で選択される。相同組換えが開始される多くの方法が知られている。好ましくは、相同組換えは、DNA 複製又は細胞の有糸分裂の間に生じる。この種類のDNA は、腫瘍及びウィルス感染の治療処置のための剤の生成、又は宿主生物における相同又は非相同 ISL タンパク質の生成のために使用され得る。本発明のさらなる目的は、好ましくは、ヒト身体のサンプル、たとえばヒト細胞調製物、細胞上清液及び体液、たとえば血液、血清又は血漿における、ISL ポリペプチド、核酸配列、ウィルス活性化された細胞及びISL 発現の決定のための方法に関する。そのような決定は、好ましくは、哺乳類、特にヒト細胞集団のウィルス感染の検出のために有用である。この方法は、前記細胞の活性化状態の決定、及び CD4⁺細胞のウィルス、好ましくはレトロウィルス感染の決定のために特に有用である。診断方法は好ましくは、即座に、又は最初のウィルスピークの後、できるだけ早く適用される。本発明のさらなる目的は、体液、特に血液血清又は血漿における活性化された／活性化されていない CD8⁺及び／又は CD4⁺細胞の割合の決定のための、ISL ポリペプチドにより動物を免疫化し、そしてその免疫化された動物の血清又は脾臓細胞から抗体を単離することによって得られるポリペプチドに免疫学的に結合する抗体の使用に関する。そのような試験は、ISL ポリペプチドの一部又はすべてに対して向けられる抗体に基づいて提供され得る。そのような抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体、キメラ性抗体、ヒト適合された抗体又はそのフラグメント、たとえばF(ab)，F(ab)₂、一本鎖F_v、又は同様のものであり得る。そのようなアッセイにおいて、抗体は、ISL の免疫−特異的認識のために使用される。追加の検出（この複合体の分離及び続くモニターリングを伴って又は伴わないでの）は、当業界において広く知られている免疫−アッセイにより行なわれ得る。たとえば、抗体は、モニターリング剤、たとえば螢光インジケーター、放射性又は酵素ラベリングによりラベルされ得る。急性又は慢性感染（たとえば、血液ドナーにおいてさえ）の検出のために、又は(（レトロ）ウィルス)感染（たとえばAIDSを有する患者において）の進行をモニターするために、血清及び他の体液におけるISL 濃度、及びISL −生成細胞の数を診断決定することが特に好ましく、ここで螢光指示された又は放射性又は酵素ラベルにより、又はラベルされた抗−抗体により供給される抗体が、反応せしめられ、ISL 又は ISL−生成細胞と接触せしめられ、抗原／抗体複合体が既知手段により分離され、そしてそれらの濃度がラベルを通して決定される。適切な試験方法は、CD8⁺T 細胞をインビトロで、試験される物質と共にインキュベートし、そして好ましくは１〜12日後、本発明に従ってISL 発現を検出することにより、又はISL ポリペプチドを決定することにより、好ましくは抗−ISL −抗体に基づく試験により、ISL 活性を決定する段階を含んで成る。そのような試験は、たとえば次の態様で実施される：ａ）市販の96−ウェルELISA プレートがモノクローナル抗−ISL−抗体により被覆され；ｂ）ISL 含有量について試験されるべきサンプルが抗体被覆されたウェルに室温で１時間、添加され、そしてウェルが洗浄され；ｃ）結合されたISL が、アフィニティー精製されたポリクローナルヤギ−抗-I SL-IgG- 調製物のインキュベーション、続く抗−ヤギ特異的ホースラディシュペルオキシダーゼによる抗体のラベル化、及び続くOPD による可視化により検出される。当業界において知られている他の免疫学的アッセイもまた、適切である。核酸、好ましくはRNAS、最も好ましくは、ISL タンパク質をコードするmRNAS を検出するために使用され得る、本発明により供給されるISL タンパク質の核酸配列に基づいての試験を提供することもまた可能である。そのような試験は、たとえば、細胞又は細胞溶解物において、及び核酸診断により実施され得る。この場合、試験されるべきサンプルは、ISL タンパク質をコードする核酸配列とハイブリダイズするプローブと接触せしめられる。プローブとサンプルからの核酸との間のハイブリダイゼーションは、発現されたISL タンパク質の存在を示す。そのような方法は、当業界に知られており、そしてたとえば、WO89/06698，EP-AO2 00362,アメリカ特許第2915082 号、EP-AO063879，EP-AO173251，EP-AO128018 に記載されている。本発明の好ましい態様において、ISL タンパク質をコードするサンプル中の核酸は、試験する前、たとえば良く知られているPCR技法により増幅される。誘導体化された（ラベルされた）核酸プローブが通常、核酸診断の分野において使用される。このプローブはサンプルからのキャリヤー結合された変性DNA 又はRNA と接触せしめられ、そしてこの工程においては、温度、イオン強度、pH値及び他の緩衝条件は、核酸サンプルの長さ及び予測されるハイブリッドの溶融温度に依存して、ラベルされたDNA 又はRNA が相同DNA 又は RNA に結合することができるような態様で選択される（また、Southern，E.M.， J.Mol．Biol．98(1975)，503-517; Wohl，G.M.など.，Proc．Natl．Acad．Sci． USA 76(1979)，3683-3687 を参照のこと）。適切なキャリヤーは、ニトロセルロースに基づく膜又はキャリヤー材料(たとえば、Schleicher and Schiill，B.A.8 5，Amersham Hybond，C.)、強化され又は結合された、粉末形でのニトロセルロース、又は種々の官能基（たとえば、ニトロ基）により誘導体化されたナイロン膜(たとえば、Schleicher and Schiill，Nytran; NEN，Gene Screen; Amersham Hybond M.； Pall Biodyne)である。次に、ハイブリダイズされたDNA 又はRNA は、キャリヤーを、洗浄及び飽和を通して、非特異的結合を妨げた後、抗体又は抗体フラグメントと共にインキュベートすることによって検出される。前記抗体又は抗体フラグメントは、誘導体化の間、核酸プローブ中に導入される物質に対して向けられる。しかしながら、直接的にラベルされたDNA を使用することもまた可能である。前記抗体と共にインキュベートした後、それは、特異的に結合された抗体接合体を検出するためにのみ、再び洗浄される。次に、その決定は、良く知られている方法に従って、抗体又は抗体フラグメントのラベルを通して実施される。 ISL 発現の検出は、たとえば、 −固定された組織スミア及び単離された中期染色体を用いての固定された完全な細胞との現場ハイブリダイゼーションとして、 −コロニーハイブリダイゼーション（細胞）及びプラークハイブリダイゼーション（ファージ及びウィルス）として、 −ノサン（Northern）ハイブリダイゼーション（RNA 検出）として、 −血清分析（たとえば、スロット−ブロット分析による血清における細胞の細胞タイプ分析）として、 −増幅（たとえば、PCR 技法）の後、実施され得る。従って、本発明は、試験されるべきサンプルが下記のものを含んで成る群から選択される核酸プローブと共にインキュベートされ：ａ）配列番号１及び３に示されるDNA 配列又はそれらに対する相補的配列、ｂ）ａ）からの配列の１つと、緊縮条件下でハイブリダイズする核酸、前記核酸プローブが前記サンプルからの核酸と共にインキュベートされ、そしてサンプル中の核酸のハイブリダイゼーション及び核酸プローブが、所望により追加の結合パートナーにより検出されることを特徴とする、ISL タンパク質をコードする核酸の検出のための方法も包含する。従って、ISL は、ウィルス性の良性及び悪性疾患の診断における価値ある予測マーカーである。驚くべきことには、本発明よれば、ウィルスの複製の阻害のためにISL ポリペプチド又は核酸を直接的に使用する必要がないことが見出された。細胞において ISL の生成を誘発する物質を使用することもまた可能である。そのような細胞は好ましくは、ヒト血液リンパ球、特に CD8⁺細胞である。ISL 生成の誘発のためには、前記細胞がそのような活性物質と共にインビボ又はインビトロでインキュベートされる。活性化がインビトロで行われる場合、続いて細胞が、たとえば上記アメリカ特許第5,399,346 号に従って、患者に投与される。本発明によれば、 ISL 生成を活性化するそのような物質を同定することが可能である。そのような物質は、たとえばフィトヘマグルチニン(PHA)、コンカナバリンA(C onA)、ヒスタミン、ポリペプチド又は核酸分子であることが見出された。核酸分子は、標的細胞において前記核酸分子の発現を確保する追加の要素を含むベクターとして使用される。前記要素は当業界において知られている（たとえば、調節配列、プロモーター及び／又はオペレーター領域）。そのような核酸分子によるトランスフェクションのための適切な標的細胞は好ましくは、ヒト細胞、最も好ましくは、ヒト血液細胞、たとえばリンパ球、特に CD8⁺細胞である。従って、本発明のさらなる目的は、患者におけるウィルスの複製の阻害のための物質及び治療剤の同定及び生産のための方法に関する。前記方法は、CD8⁺細胞、好ましくはインビボにおいて、ISL 活性を有するタンパク質の発現を活性化する物質の治療的有効量を医薬的許容できるキャリヤーと共に組合すことも含んで成る。その発現が活性化されるタンパク質は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質である。適切な物質は、アッセイ（物質アッセイ）において同定され得、ここで、ａ）健康な血液提供者からのPBMCが、Ficoll−グラジエント分離により単離され；ｂ）CD8⁺細胞が磁気細胞分別により単離され；ｃ）前記調製物の純度がFACS分析により試験され；ｄ）前記調製物が、CD8⁺細胞の適切な刺激を確保するために約95％程度の CD8⁺ 細胞及び５％程度の非− CD8⁺汚染物を有すべきであり；ｅ）ISL 活性の発現の誘導について試験されるべき物質が、１pM〜10mMの濃度範囲で細胞培養物に添加され；ｆ）IL-2が前記細胞培養物(180Ｕ／ml細胞培養培地)に又は前記物質が核酸分子である場合、トランスフェクトされた細胞の培養物に添加され；ｇ）３日後、培地を完全に除去し、そして細胞がIL-2(180Ｕ／ml細胞培養培地 )と共に３日間、培養され；ｈ）細胞培養上清液が遠心分離され（×1000）、細胞が除去され、無菌濾過され、そしてアリコートされ；そしてさらに、上記HIV阻害アッセイにより調査され、この調査は次のようにして行われ、ｉ）CD8⁺−消耗されたPBMCが、150 μｌの培地において、50μｌの前記細胞培養上清液／1.5 ×10⁶個の細胞と共に、37℃で30分間インキュベートされ；ｋ）前記 CD8⁺−消耗されたPBMCが続いて、50組織感染量₅₀（TCID₅₀）を含む HIV-1ストック溶液50μｌと共に150 μｌ培地中、1.5 ×10⁶個の細胞を37℃で１時間インキュベートすることによって、HIV-1、好ましくはHIV-1_SF2により感染させ；ｌ）前記感染された CD8⁺−消耗されたPBMCが、結合されていない HIV-1を除去するために洗浄され；ｍ）CD8⁺−消耗されたPBMCが５％CO₂雰囲気下で37℃で培養され、そして前記細胞培養上清液が３，６，９及び12日後に置換され；ｎ）CD8⁺−消耗されたPBMC細胞培養上清液中の HIV-1の量が、上清液の連続的な３倍希釈、及び前記 HIV-1株により85％又はそれ以上の程度まで通常、感染できるべきである高い感受性の指示細胞系、好ましくはヒトHTLV−形質転換されたリンパ腫細胞系MT４の2000個の細胞を、150 μｌの培地当たりに含む四重ウェルにおける接種により、感染後９及び12日で決定され；ｏ）個々のウェルにおけるウィルス複製が、製造業者の説明に従って、単一のウェルごとの細胞培養上清液における逆転写酵素（RT）の決定により(Boehringe r Mannheim GmbH，Biochemica，68298 Mannheim，Germony のReverse Transcrip tase Assay，Order No.： 1468120)、感染後８日で決定され；ｐ）CD8⁺−消耗されたPBMC培養物の組織感染量₅₀（TCID₅₀）が、次の式に従ってKarber（Karber，G．1931，Assuy for statistical analysis of pharmacolog ical experiments，Arch．Exper．Path．V.Pharmakol．162，148）により公開された方法に従って計算された： LogTCID₅₀＝Ｌ−ｄ(ｓ−0.5)，式中、Ｌ＝最低のウィルス希釈度の対数、ｄ＝ウィルス希釈度の対数、ｓ＝ウィルス−陽性細胞培養物の合計；ｑ）CD8⁺−消耗されたPBMC培養物における HIV-1複製の阻害が、段階ｉ）〜ｐ）に従ってのアッセイにおける細胞培養上清液のウィルス含有量と段階ｉ）〜ｐ）に従ってのアッセイのウィルス含有量（ここで、HIV複製の阻害について試験されるべき前記ポリペプチドが、ポリペプチドを含まない緩衝液（未処理の対照）により置換されている）の比較により計算され；ｒ）CD8⁺−消耗されたPBMCにおけるウィルス複製の量が、そのウィルスの量が未処理の対照に比較して約50％、より好ましくは10％、最も好ましくは１％又はそれ以下であるような態様で阻害される場合に阻害性が認められる。本発明のさらなる目的は、CD8⁺Ｔ細胞におけるISL 活性を活性化し、そして上記物質アッセイ及びHIV 阻害アッセイの性質により特徴づけられる少なくとも１種の物質、及び医薬的に許容できるキャリヤーを含んで成る、過度のウィルス複製、特にレトロウィルス複製により特徴づけられる病理学的状態を処理するのに有用な治療用組成物に関する。上記物質アッセイから得られ、且つそのアッセイにより特徴づけられるそのような物質は、哺乳類細胞におけるISL の誘発及び／又は活性化のために、ウィルス、好ましくはレトロウィルス、特にHIV 及び／又は HTLVの複製の阻害のために、良性及び悪性疾患及びウィルス、好ましくはレトロウィルス、特にHIV 及び／又はHTLV感染の治療処置のために有用である。感染後できるだけ早く、好ましくは最初のウィルスピークの後できるだけ早く、そのようなウィルス感染の治療処置のために前記物質を用いることが、特に好ましい。次の例、配列の列挙及び図は、本発明を理解するために供給されるが、それらは本発明を制限するものではない。修飾が本発明の範囲及び行われ得ることが理解される。配列表配列番号１： ISL_agm(African green monkey)のヌクレオチド及びそれに由来するタンパク質配列を示す。配列番号２： ISL_agmのタンパク質配列を示す。配列番号３：LCF のヌクレオチド及びそれに由来するタンパク質配列を示す。配列番号４：LCF のタンパク質配列を示す。配列番号５：ISL クローニングのためのプライマー１を示す。配列番号６：ISL クローニングのためのプライマー２を示す。配列番号７： HIV-1_SF2のDNA 配列を示す。配列番号８： HIV-1_SF33のDNA 配列を示す。図面の説明図１：精製されたISL(Ｂ)及び活性化されたヒト CD8⁺リンパ球(ISL)の細胞培養上清液（Ｃ）によるＴ細胞リンパ腫系H9におけるHIV-1_SF2複製の阻害。ウィルス複製の定量的なかなりの阻害性を、次のHIV 及びSIV 株： HIV-1_SF2，HIV-1_SF ₃₃ ，HIV-1_SF162，HIV-2_UC3及びSIV_agm（(A)比較、組織培養のみ）を用いて測定する。図２：組換えISL による一次 CD4⁺リンパ球での HIV-1_SF2複製の阻害。LogTCI D₅₀：組織培養物感染量₅₀（細胞培養物の感染量₅₀）の対数。定量的なかなりの阻害性が次の免疫不全ウィルス株に関して見出される： HIV-1_SF33，HIV-1_SF162，HIV-2_UC3及びSIV_agm。図３：ヒト及びモンキーISL のDNA 及びポリペプチド配列の比較。ａ）ヒト；ｂ）p.トログロダイト(P.troglodytes)（チンパンジー）；ｃ）M.ムラタチン( M.mulatta chin.)：ｄ）M.ムラヤインド(M.mulatta ind.)；ｅ）M.ネメストリナ（M.nemestrina）；DM．ファスシクラリス（M.bascicularis）；ｇ）C.アエチオプス(C.aethiops)(AGM)。例1. ISL のクローニング、発現及び精製 1.1 RNA単離５×10⁷個のPBMC（ヒト又はモンキー）を、10μｇ／mlのコンカナバリンＡ及び180 単位／mlのIL-2と共に48時間培養した。RNA を調製するために、前記細胞をBPS により１度洗浄し、そして続いて、５mlの変性溶液により溶解した（RNA 単離キット、Stratagene）。酢酸ナトリウム１ml、フェノール５ml及びクロロホルム／イソアミルアルコール（２×：１）１mlの添加の後、その溶解物を氷上に、15分間維持した。続いて、水性相を、６mlのイソプロパノールと共に混合し、 RNA を沈殿せしめ、そして−20℃で２時間、貯蔵した。最後に、沈殿物を無水エタノールにより１度、洗浄し、そして150 μｌの水に溶解した。収量を測光学的に測定し、そして120 μｇであった。 1.2 cDNA合成 cDNA 合成のための混合物は、RNA 10μｇ、オリゴーdT0.2 μｇ、13mMのDTT 及び５μｌの第１鎖反応混合物(第１鎖cDNA合成キット、Pharmacia )を、15μｌの体積で含んでいる。反応物を37℃で、１時間インキュベートし、そして続いて、−20℃で後での使用のために貯蔵した。 1.3 ISL cDNAの増幅及びクローニング PCR によるISL cDNAの増幅及び続くクローニングのために、次のオリゴヌクレオチドを合成した：前記プライマーは、追加の NdeＩ又はBamHI 切断部位を導入する。 PCR 混合物（100 μｌの反応体積）は、それぞれ、１μｌのcDNA（セクション３における合成からの）、50ｐモルのプライマー１及び２，12.5μモルのdNTP,1 0 μｌの10×TAQ 緩衝液及び2.5 単位のTaq ポリメラーゼ（Perkin-Elmer）を含んだ。サイクル条件は、94℃で30秒、53℃で１分、及び72℃で１分であった。35回のサイクルが実施された。 PCR 生成物を、精製し、そして NdeＩ及びBamHI により37℃で16時間、消化した。クローニング調製のためには、ベクターpET156(Novagen)をまた、NdeＩ及び BamHI により切断し、そして続いて、アガロースゲル上で精製した。連結を、100ng のベクター、25ngのPCR 生成物（Insert）、２μｌの10％リガーゼ緩衝液及び0.2 μｌのリガーゼ(New England Biolabs)を含む混合物20μｌにおいて室温で２時間、実施した。E.コリDH５において、2.5 Ｋボルト、25μファラデー、200 オーム（BIO-RAD エレクトロオペレーター）での電気泳動による形質転換の後、細胞をアンピシリン耐性プレート上に配置した。組換えクローンを、プラスミド調製物（pMISLB）の制限分析により同定し、そしてそれを用いて意図されたタンパク質発現のためにBL21-DE3株を形質転換した。ISL cDNAのクローニングをさらに、ヌクレオチド配列を決定することによって確かめた。その見出された配列は、コドン96における不一致を除いて、公開されたLCF 配列（Cruikahankなど.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，Vol.91(1994)510 9-5113）と一致した。公開された配列とは対照的に、コドン96は塩基配列TTG から構成されないが、しかしむしろ、配列TTT から構成されており、そして従って、フェニルアラニンではなくロイシンをコードする。独立したPCR 増幅に由来する追加のISL クローンの配列決定は、コドン96における真のISL 配列が実際、配列TTT により表わされることを明確に示した。 ISL に対して相同のタンパク質を、免疫不全ウィルスによる感染された動物及び特に、疾病に落いらないで感染されている動物、たとえばチンノアンジー（P ．troglodytes）、アフリカングリーンモンキー（C.aethiops）、スーティマンガベー、M．mulatta chin.，M．mulatta ind.，M．nemestrina又はM．fascicula ris からの CD8⁺リンパ球を含む体液から、類似する態様で単離する。それらのタンパク質及び核酸を、ヒトISL に類似する態様で治療的に及び診断に使用することが可能である。例2. 組換え可溶性ISL の発現及び精製 2.1 ヒトISL ISL を、ベクターpET156における６個のヒスチジン残基のリーダーとの融合においてアミノ末端的に発現する。pMISLBの一晩の培養物20mlを個々の場合に用いて、２ｌの2XTY／アンピシリン培地を接種した。培養物を25℃で振盪し、そして 0.4 のOD₆₀₀に達した時、それらを１Ｍのイソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド１mlの添加により誘発した。さらに４時間後、細胞をペレット化し、そして−70℃で14時間、凍結した。続いて、前記ペレットを融解し、そして250ml のPBS により１度、洗浄した。細胞を、氷−冷却されたPBS50ml に、その懸濁液を１％ND−40，10mMのEDTA，0. 4 ＭのNacl及び50μｇ／mlのリゾチームに適合せしめることによって、溶解した。氷上での60分のインキュベーションの後、溶解物を、遠心分離により不溶性成分を除去した。アミノ末端で６個のヒスチジン残基を有するISL(His6-ISL)を、クロマトグラフィー段階により精製した。このためには、溶解物を、20mMのMgcl₂，10mM のイミダゾール、0.5 ＭのHaclに適合せしめ、そして0.1ml ／分の流速で、Ni²⁺−NT A −アガロース（Oiagen）カラムに適用した。0.25mlのNi²⁺−NTA −アガロースは、初期培養物１ｌ当たりに使用され、続いて、カラムを20体積のPBS，25mM のイミダゾールにより洗浄し、そしてHis6-ISLを最終的に、４mlのPBS、200mM のイミダゾールにより溶出した。この態様で単離されたHis6-ISL融合タンパク質は、SDS ゲル電気泳動での試験の後、90％以上の純度を有した。収量は、初期培養物１ｌ当たり約５mgのタンパク質であった。最終的に、精製されたタンパク質から、NAP-10カラム(Pharmacia )上でのゲル濾過により、低分子量不純物、たとえばイミダゾールを除去し、そしてPBS に移した。その後、そのタンパク質濃度は0.5〜１mg／mlであった。（精製スケムについては、表１を参照のこと）。 2.2 ISL 誘導性LCF LCF はほとんど相同の配列を有するので、可能な抗−ウィルス効力についてLC F を試験するために、ISL クローニングについての実験の他に、活性化された C D8⁺リンパ球のcDNAライブラリーからLCF が特異的にクローン化された。LCF がI SL 作用を有し、そしてHIV 及びSIV 複製を阻害することができることが示された。 2.3 アフリカングリーンモンキーからのISL 誘導体(ISL-agm) ヒトISL（配列番号１）に対して相同のタンパク質を、アフリカングリーンモンキーから単離した(ISL-agm)。ヒトISL(ISL-hu(配列番号２))のヌクレオチド配列は、下記表に示されるように異なっている。 2.4 他のモンキーからのISL 誘導体他のモンキーからの核酸及びタンパク質配列を、同じ態様で単離することができる。配列の比較は、図３に示されている。 2.5 E.コリにおける融合−フリーのISL の組換え発現 ISL をコードするDNA 配列を、E.コリにおける効果的な発現を可能にするような態様で変性する。たとえば、発現プラスミドを、適切なE.コリ株中にトランスフェクトする。そのような株は、lac リプレッサーの制御下での発現プラスミド、たとえば発現プラスミドp11379の使用の場合、lac リプレッサーの十分に高い細胞内濃度を有する株である。それらの種類の株は、第２プラスミド、たとえばpREP4(Diagen Gmb H)，pUB500又はpUBS520(Brinckmannなど.，Gene 85(1989)109-114)のトランスフェクションにより調製され得る。適用されるE.コリ株は、好ましくは、たとえば E.コリUT5600(Earhartなど.，FEMS Microbiology Letters6(1979)277-280)，E. コリBL21(Groodberg and Dunn，J．Bact eriol．170(1988)1245-1253)又はE.コリＢに良くあることだが、細胞性質の低いプロテアーゼ活性を有すべきである。次に、発現培養が、タンパク質凝集体として、当業界に知られている態様で達成され、そしてEPO241022，EPO364926，EPO2 19874 及びDE-A4037196 に記載される方法に従って処理される。詳細には、たとえば次の方法がこの目的のために適用される：E.コリ発酵からのISL-含有溶解物を、６Ｍの塩酸グアニジン、100mMのトリスHCl(pH8)、１mMのE DTAに適合せしめ、続いてpHを３〜４に調整し、そしてpH3.5 で、４Ｍの塩酸グアニジンに対して透析する。次に、溶解されたタンパク質の再生を、１Ｍのアルギニン(pH8.1)、１mMのEDTA，５mMのGSH(グルタチオン、還元されている)及び0. 5mM のGSSG（グルタチオン、酸化されている）において実施する。ISL をさらに、通常のクロマトグラフィー技法により精製することができる。 2.6 哺乳類細胞におけるISL の組換え発現このためには、cDNAを、強いプロモーターエンハンガーシステムに基づいて、哺乳類細胞、好ましくはCHO 又はCOS 細胞中に転写されているベクター中に連結する。そのようなプロモーター及びエンハンサーは、ほとんど、ウィルス、たとえばSV40，hCMV，ポリオーマ又はレトロウィルスからである。他には、一定の細胞型又は組織型に対して特異的であるプロモーターエンハンサーシステム、たとえばWAP-，MMTV- 又は免疫グロブリンプロモーター、又はたとえばメタロチオネインプロモーターを誘発できるシステムがまた適用され得る。この種類のベクターは、RNA プロセッシングのためのドナー及びレセプターシグナル及びポリーＡ −付加のためのシグナルをISL cDNA（後者が用いられる場合）に補足する。たとえば、pCMX-pL1（Umesuno など.，Cell65(1991)1255-1266）は、そのような適切なベクターである。このベクターの１つの及び唯一のEcoRＩ切断部位を中に、Ec oRＩリンカーを供給されたcDNAを連結し、ここで前記cDNAがCMV プロモーターの読み取り方向に配向されていることが、このベクターのポリリンカーにおける他の切断部位の助けによる制限分析により確かめられる。他のベクター、たとえば pCDNA3(Invitrogen，San Diego/USA)又はpSG3(Stratagene，LaJolla/USA)中にクローニングする場合、完全に類似する方法が適用される。そのようにして得られた発現プラスミドのDNA を、E.コリから調製し、そして特定の場合、細胞タイプに対して特異的である技法（Methods of Enzymology185（Goeddel，David V.,(e d.)，Gene Expression Technology，Academic Press 1991，rectiunV）を適用して、哺乳類細胞中にトランスフェクトする。トランスフェクションの後、細胞を、ウシ胎児血清の添加を伴わないでMEM(Gibco)において培養し、それにより、IS L は、48時間後、その細胞培養上清液に検出できる。例3. Ｔ細胞リンパ腫系、一次リンパ球（PBMC）及び精製された一次 CD4⁺リンパ球上でのISL によるHIV 複製の阻害の試験 3.1 細胞を感染するためのHIV ウィルスストックの獲得ヒト免疫不全ウィルス（HIV-1，HIV-2）及びシミアン免疫不全ウィルス(SIV) は、ヒトＴ細胞リンパ腫系及び一次 CD4⁺リンパ球において複製する。一次リンパ球培養物（PBMC）から得られるウィルスを含む細胞培養上清液は通常、Ｔ細胞系から得られるものよりも一層、感染性のウィルスを含む。HIV1株 HIV-1_SF162 の場合、このウィルスは既知のＴ細胞リンパ腫系のいづれにおいても複製しないので、複製はPBMC上でのみ可能である。従って、次の実験において使用される標準のウィルス上清液は、一次リンパ球に基づいて生成された。このためには、Fi collグラジエントにより精製され、そして植物凝集素(PHA)により刺激された（この方法の詳細な記載については、下記を参照のこと）PBMCを、HIV-1株 HIV-1_SF2，HIV-1_SF33，HIV-1_SF16 ₂ (Cheng-Mayer，C.,など.，J．Virol．64(1990)4390-4398)及び HIV-2株 HIV-2_U _C3 (Castro，B.A.,なと.，Virologyl78(1990)527-534)により感染せしめた。それらのウィルス株はまた、PBMC上で早く独占的に継代培養され、そしてウィルスを含むその細胞培養上清液が−70℃で貯蔵された。感染のためには、0.1 の感染の多重度(MOI)を有する120 ×10⁶個のPBMCを37℃ で２時間インキュベートし、細胞をRPMI培地により洗浄し、そして３×10⁶／ml の細胞培養培地の細胞計数に対応する40mlの細胞培養培地（RPMI1640，20％FCS, ２mMのグルタミン、180Ｕ／mlのIL-2）において12日間、培養した。その細胞培養培地を３日目に変え、これに基づいて、細胞計数を再び３×10⁶／ml培地に調整した。６，９及び12日目、細胞培養上清液を集め、細胞及び細胞残骸を、遠心分離により除去し、それを濾過（0.45μｍの孔サイズ）により滅菌し、そして0. 5ml のアリコートで−70℃で貯蔵した。 3.2 Ｔ細胞リンパ腫系の増殖のための細胞培養条件Ｔ細胞リンパ腫系H9，CEM，Molt4クローン８，MT4 及びC8166 を、37℃及び５％CO₂雰囲気下で、10％FCS 及び２mMのグルタミンにより補充されたRPMI1640培地において培養する。細胞を、３日ごとに、同時に培地を変えながら、継代培養し、そして細胞計数を１×10⁵／mlに調整する。 3.3 一次血液リンパ球（PBMC）の調製及び増殖末梢血液リンパ球を、正常な血液ドナーから単離された“軟膜”から調製する。完全な血液を用いて、非ヒト霊長類、たとえばアフリカングリーンモンキー及びrhesusモンキーからPBMCを調製する。このためには、“軟膜”又は完全な血液を、Ficoll−Hypaque グラジエント上に積層し、そして1000×ｇで30分間、遠心分離する。血清上清液を捨て、単核細胞を集め、そしてハンクス溶液により数回洗浄する。細胞（３×10⁶ ／ml）をRPMI1640，20％FCS,２mMのグルタミン上に取り、そして９mg／mlの植物凝集素(PHA)により３日間刺激し、そして 180Ｕ／mlのIL-2と共に増殖する。細胞を37℃及び５％のCO₂雰囲気下で培養する。次に、培地を完全に変え、そして細胞を、３×10⁶／ml培養培地の細胞計数に、PHA を伴わないで、さらに培養し、又は実験に使用する。 3.4 磁気活性化された細胞分類（MACS）による CD4⁺及び CD8⁺リンパ球の精製 “軟膜”からFicollグラジエントにより単離されたリンパ球を、500 μｌのPB S-アジド／１×10⁸個の細胞（Ca²⁺及びMg²⁺を有さないリン酸緩衝溶液、0.01％アジ化ナトリウム、５mMのEDTA，pH7.2）に再懸濁する。20mlのCD8 微小ビーズ／１×10⁷個の予測される細胞（マウス抗−ヒトCD8 抗体、磁気粒子により接合される、Miltenyl Bictec GmbH）の添加の後、それらを４℃で15分間インキュベートする。２mgのDTAF／１×10⁷個の予測される細胞（抗−マウスIgG，FITC 接合される、Dianura(ompany)を、４℃でさらに５分間にわたって添加する。25ml のPBS-アジド／１％BSA による希釈の後、それを再び遠心分離する（10分、1200 rpm，４℃）。上清液を捨て、細胞を２mlのPBS／１％のBSA に再懸濁し、そしてその細胞懸濁液を、磁気分離器（Miltenyl Biotec GmbH）に位置するカラムに適用する。CD8 微小球が結合される CD8⁺細胞がカラムに保持され、従ってその流れ画分は、CD8⁺細胞を除くすべてのリンパ球（約80％の CD4⁺細胞）を含む。カラムの洗浄の後、それをホルダーから取り、そして CD8⁺細胞画分をRBS-アジド／１％BSA により溶出する。流れ画分及び CD8⁺細胞画分を遠心分離し、細胞培養培地（RPMI 1640，20％FCS,２mMのグルタミン、180Ｕ／mlのIL-2）に再懸濁し、細胞計数を３×10⁶個の細胞／mlに調整し、そして細胞をPHA(９mg／ml)により刺激する。リンパ球副集団の分離の性質を、FACSにより調べる。 3.5 種々の宿主細胞に対するHIV ウィルスストックのタイトレーション PBMS, CD4⁺リンパ球及びＴ細胞リンパ腫系H9（Popuvic，M.,など.，Science 224(1984)497-500），Molt 4 クローン８(Kikukawa，R.，など.，J.Virol．57(1 986)1159-1162)，C8166，MT4及びCEM(American Tgpe Calture Collectoonから得られた)を、宿主細胞として使用した。タイトレーションは、96−ウェルプレートにおいて行われる。ａ）PBMC及び CD4⁺リンパ球でのタイトレーションウィルスストック HIV-1_SF2，HIV-1_SF33，HIV-1_SF162(Cheng-Mayen，C.，Guir oga，M.，Tung，J.W.，Dina，D．& Levy，J.A.(1990)), HIV-2_uc3及び SIV_agm( Kraus，G.，など.，Proc．Natl．Acad．Sci．USA86(1989)2892-2896; Baier，M. ，など.，J.Virol．63(1989)5119-5123)を、３段階に希釈し、そしてそれぞれ50 μｌを、100 μｌの培養培地中における、４種の独立したPBMC又は CD4⁺リンパ球培養物（個々の場合、１×10⁶個のPBMC又はCD⁴⁺リンパ球）中にピペットで移し、そして37℃で１時間インキュベートする。次に、細胞結合されていないウィルスを、培養培地により細胞を洗浄することにより除去する。培地を、感染径３，６，９及び12日で変える（個々の時点で、100 μｌの培地の除去及び添加）。６，９及び12日目からのそれぞれ個々の培養物の細胞培養上清液を、下記の試験を実施することによりそれらのウィルスを計数について試験する：ａ）逆転写酵素についての試験（Boehringer Mannheim GmbH，Germany の説明書に従って）；ｂ）p24 ・抗原ELISA(製造業者“Abbutt”の説明書に従って)；又はｃ）高い敏感性の指示細胞系の感染(Ennen，J.，など.，Proc．Natl．Acad．S ci．USA 91(1994)7207-7211)．ｂ）Ｔ細胞系H9，CEM，Molt4/8でのタイトレーションウィルスストックを３段階に希釈し、そしてそれぞれ50μｌを、個々の細胞培養物（個々の場合、Ｕ−ウェル96細胞培養プレートにおける100 μｌの培養培地において５×10⁴個の細胞）中にピペットで入れ、そして37℃で１時間インキュベートする。洗浄及び感染についての試験を、2a）に記載される方法に従って行う。PBMC培養物に比較して少ない初期細胞計数は、滴定試験の間、約250 μｌのマイクロタイタープレートの割り当てられた細胞培養体積において臨界細胞密度まで増殖するＴ細胞リンパ腫系の増殖能力によるものである。ｃ）Ｔ細胞リンパ腫系C8166 及びMT4 の滴定Ｔ細胞リンパ腫系C8166 及びMT4 を、2b）に記載される方法に従って滴定する。しかしながら、ウィルス試験は、上記試験システムを用いて行われないが、しかし、細胞培養物は光顕微鏡により評価される。ウィルス株 HIV-1_SF2，HIV-1_SF ₃₃ 及び HIV-2_uc3による感染の場合、C8166 及びMT4 細胞は、顕微鏡を用いて容易且つ急速に同定され得るウィルスの増殖により殺される。 3.6 組織培養感染性用量₅₀(TCID₅₀)の計算 TCID₅₀を、下記式に従って、Karber（Karber，G．1931．Assay for statistic al analgsis of pharmacological experiments．Arch．Exper．Path．V．Pharma kal．162，148）により公開された方法により計算する： LogTCID₅₀＝Ｌ−ｄ(ｓ−0.5)，式中、Ｌ＝最低のウィルス希釈度の対数、ｄ＝ウィルス希釈度の対数、ｓ＝ウィルス−陽性細胞培養物の合計。 3.7 ISL によるHIV 複製の阻害の試験 HIV に対するISL の効果を、Ｔ細胞リンパ腫系及び一次リンパ球において試験する。実験は、毒性及び用量発見実験により始まり、さらに、非毒性であるがしかし最大に効果的なISL 濃度の発見が実験される。それらの試験は、個々のＴ細胞系及びPBMC、並びに全PBMC及びさらに CD4⁺リンパ球について四重反復して、9 6−ウィルスマイクロタイタープレートにおいて別々に実験される。ａ）Ｔ細胞系に対してのISL を用いての用量発見及び毒性実験５×10⁴個の細胞を、ISL の種々の希釈溶液（40μｇ／ml〜0.15μｇ／ml）と共に室温で10分間インキュベートした。次に、細胞を、１で言及されるウィルスストックにより感染せしめた。それらは、個々の場合、37℃及び５％CO₂雰囲気下で１時間、感染せしめられ、そして50TCID₅₀が個々の細胞系（上記２を参照のこと）について別々に決定され、そして計算された。結合されているウィルスは、細胞を培養培地により洗浄することにより除去された。細胞を細胞培養培地に再懸濁し、そしてISL 濃度を初期濃度に調整した。いくつかの実験においては、 ISL を再び毎日、添加し、ISL 濃度の比較的一定した保持を確保した。培地を感染の後３，６，９及び12日で変え、ここで、６，９及び12日目からの細胞培養上清液を、上記試験システムを用いて、それらのウィルス含有量について定量的に試験した。これに平行して、培養物の増殖曲線をプロットし（計数細胞は、光顕微鏡によりトリパシブルーにより染色される）、これがISL の毒性に対する洞察を与える。ｂ）一次PBMCに対してのISL を用いての用量発見及び毒性実験この実験は、全体PBMC及び精製された CD4⁺トリンパ球を用いて行われた。Ｋ1 0⁶個の細胞を、上記条件下でISL と共にインキュベートし、HIV により感染せしめ、そしてその細胞培養上清液を、感染後６，９及び12日で、それらのウィルス含有量について定量的に試験した。PBMCに対するISL の毒性を、トリパンブルー染色により決定し、そして光顕微鏡により細胞を計数した。ｃ）ISL の作用の機構についての試験 ISL が、新規感染のレベルで又は持続するHIV 複製の間、その阻害効果を進行せしめるかどうかが試験された。このための実験が行われ、ここで細胞培養物におけるISL の十分に効果的な用量が１時間の感染期間の間にのみ存在した。これに平行して、一定のISL 濃度が、他の実験混合物における全体の試験期間の間、細胞培養培地においてさらに維持された。この実験は、ISL がHIV 感染又はHIV 複製を阻害するかどうか、又はそれが両レベル（図１及び２）で効果的であるかどうかの決定を可能にする。例4. 体液及び細胞培養上清液におけるISL の定性的及び定量的検出 ISL を、改変酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)により検出した。このためには、ISL に対するモノクローナル抗体を調製する。それらは、ELISA プレートのウェル上に吸着される。そのISL 含有量について試験されるべき液体がインキュベートされ、モノクローナル抗体が、固定されたISL と特異的に反応する。結合されたISL を、ペルオキシダーゼに結合される抗−ヤギ抗体を用いての色彩反応によりそれ自体可視化される、アフィニティー精製されたポリクローナル抗−IS L 抗体（ISL によりヤギを免疫化することにより得られた）により検出する。例5. ISL を生成する細胞の直接的な検出上記ISL に対するモノクローナル抗体を、患者からの細胞の場合、診断目的のために又は組織培養物における細胞のために、ISL を生成する細胞の直接的な検出に使用する。このためには、細胞をメタノールにより固定し、同時に、細胞膜を破壊し、そしてフルオレセインイソチアシアネート（FITC）によりラベルされたモノクローナル抗−ISL 抗体と共にインキュベートする。それは、蛍光活性化された細胞分類機（FACS）の助けにより評価される。

【手続補正書】【提出日】１９９７年１１月７日【補正内容】請求の範囲１．レトロウィルスに感染されていない正常なヒト血液サンプルのバフィーコートから調製される CD8⁺−消耗された末梢血液リンパ球（PBMC）におけるHIV-1 の複製をHIV 阻害アッセイにおいて阻害し、そしてｉ）配列番号１に示されるDNA 配列、又は相補的配列によりコードされ、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）〜ii）に定義された配列と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされるが、但し、配列番号３に示されるDNA 配列によりコードされるポリペプチドとは異なる単離されたポリペプチド。２．請求の範囲第１項記載のポリペプチドの原核又は真核宿主細胞における発現を確保するための核酸分子の使用方法であって、前記核酸分子の配列が、ｉ）配列番号１に示されるDNA 分子又はその相補的配列、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）又はii）に言及された配列の１つと、緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子から成る群から選択されることを特徴とする核酸分子の使用方法。３．請求の範囲第１項記載のポリペプチドにより動物を免疫化し、そしてその免疫化された動物の血清又は脾臓細胞から抗体を単離することによって得られる、請求の範囲第１項記載のポリペプチドに免疫学的に結合する抗体の、体液、特に血液、血清又は血漿における活性化された／活性化されていない CD8⁺及び／又は CD4⁺細胞の割合の決定のための使用方法。４．請求の範囲第１項記載のポリペプチドを含んで成る、感染、又は良性又は悪性増殖疾患の処置のための治療剤。５．請求の範囲第１項記載のポリペプチド、又は配列番号４のタンパク質をコードする核酸の定性的及び／又は定量的検出のための方法であって、試験されるサンプルが、ａ）配列番号１又は配列番号３に示される配列又はそれらの相補的配列を有するDNA、ｂ）ａ）からの配列の１つと緊縮条件下でハイブリダイズする核酸を含んで成る群から選択された核酸プローブと共にインキュベートされ、前記核酸プローブが前記サンプル中の核酸と共にインキュベートされ、そして前記サンプル中の核酸及び前記核酸プローブのハイブリダイゼーションが、所望により、追加の結合パートナーにより検出されることを特徴とする方法。６．ISL 活性を有するか、又は前記ISL 遺伝子の５′−未翻訳領域からのポリヌクレオチドを活性化するポリペプチドをコードする核酸分子を含んで成る遺伝子療法のための治療剤。７．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる化合物を同定するための方法であって、ａ）Ficoll−グラジエント分離により健康な血液ドナーからPBMCを単離し、磁気細胞分類により CD8⁺細胞を単離し、FACS分析により前記調製物の純度を試験し、ここで前記調製物は CD8⁺細胞の適切な刺激を確保するために、約95％の CD 8⁺細胞及び５％の非− CD8⁺汚染物を有すべきであり、１pM〜10mMの濃度範囲で、細胞培養物にISL 活性の発現の誘発のために試験される物質を添加し、細胞培養物にIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)を添加し、３日後、その培地を完全に除去し、そしてIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)と共に前記細胞を３日間、培養し、細胞を除去するために、前記細胞培養上清液を遠心分離し（×1000）、そしてそれを滅菌濾過、そしてアリコートし；ｂ）さらに、HIV−阻害アッセイにおいて前記化合物のISL を活性化する活性を調査し；ｃ）前記見出された阻害性が、前記化合物がヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化できることを示すことを含んで成る方法。８．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる核酸を同定するための方法であって、ａ）Ficoll−グラジエント分離により健康な血液ドナーからPBMCを単離し、磁気細胞分類により CD8⁺細胞を単離し、FACS分析により前記調製物の純度を試験し、ここで前記調製物は CD8⁺細胞の適切な刺激を確保するために、約95％の CD 8⁺細胞及び５％の非− CD8⁺汚染物を有すべきであり、前記 CD8⁺細胞において発現され得る前記核酸分子により前記 CD8⁺細胞をトランスフェクトし、前記トランスフェクトされた細胞の培養物にIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)を添加し、３日後、その培地を完全に除去し、そしてIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)と共に前記細胞を３日間、培養し、細胞を除去するために、前記細胞培養上清液を遠心分離し（×1000）、そしてそれを滅菌濾過し、そしてアリコートし；ｂ）さらに、HIV−阻害アッセイにおいて前記核酸のISL を活性化する活性を調査し；ｃ）前記見出された阻害性が、前記核酸分子が、前記リンパ球のトランスフェクションの後、ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化できることを示すことを含んで成る方法。９．血清及び他の体液におけるISL の濃度、又はISL を生成する CD8⁺リンパ球の数の測定方法であって、ラベル又はラベルされた抗−抗体を有する抗体を反応せしめ、ISL 又はISL-生成細胞と接触せしめ、抗原／抗体複合体を分離し、そしてそれらの濃度を前記ラベルにより決定することを特徴とする測定方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 16/24 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＹＣ１２Ｑ 1/68 33/569 ＨＧ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/569 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ベルナー，アルブレッヘトドイツ連邦共和国，デー−60323 フランクフルト，フィルステンベルガーシュトラーセ 215

Claims

【特許請求の範囲】１．レトロウィルスに感染されていない正常なヒト血液サンプルのバフィーコートから調製される CD8⁺−消耗された末梢血液リンパ球（PBMC）におけるHIV-1 の複製をHIV 阻害アッセイにおいて阻害し、そしてｉ）配列番号１に示されるDNA 配列、又は相補的配列によりコードされ、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）〜ii）に定義された配列と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされるが、但し、配列番号３に示されるDNA 配列によりコードされるポリペプチドとは異なる単離されたポリペプチド。２．配列番号１によりコードされる請求の範囲第１項記載の単離されたポリペプチド。３．コドン７がトレオニンをコードし、コドン25がセリンをコードし、コドン31がチロニンをコードし、コドン76がイソロイシンをコードし、コドン86がアラニンをコードし、コドン112 がトレオニンをコードし、コドン121 がプロリンをコードし、そして／又はコドン128 がアラニンをコードし、そして／又はコドン26が欠失している、請求の範囲第１項記載の単離されたポリペプチド。４．レトロウィルスに感染されていない正常なヒト血液サンプルのバフィーコートから調製される CD8⁺−消耗されたPBMCにおけるHIV-1 の複製をHIV 阻害アッセイにおいて阻害するポリペプチド、又はその活性フラグメントもしくは誘導体をコードし、そしてｉ）配列番号１に示されるDNA 分子又はその相補的配列、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）又はii）に言及された配列の１つと、緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子から成る群から選択されるが、但し、配列番号４のポリペプチドをコードしない単離された核酸分子。５．配列番号１に示される配列、又はコドン７がトレオニンをコードし、コドン25がセリンをコードし、コドン31がチロニンをコードし、コドン76がイソロイシンをコードし、コドン86がアラニンをコードし、コドン112 がトレオニンをコードし、コドン121 がプロリンをコードし、そして／又はコドン128 がアラニンをコードし、そして／又はコドン26が欠失している、配列を有する請求の範囲第４項記載の単離された核酸分子。６．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドの原核又は真核宿主細胞における発現を確保するための核酸分子の使用であって、前記核酸分子の配列が、ｉ）配列番号１に示されるDNA 分子又はその相補的配列、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）又はii）に言及された配列の１つと、緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子から成る群から選択されることを特徴とする核酸分子の使用。７．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドをコードし、そして形質転換された微生物又は形質転換された真核細胞において前記ポリペプチドコードの核酸を発現する、核酸を含む組換え発現ベクター。８．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドをコードするDNA によりトランスフェクトされ、そして前記タンパク質を生成する原核又は真核宿主細胞。９．E.コリ又は哺乳類細胞系である請求の範囲第８項記載の宿主細胞。 10．原核又は真核生物のトランスフェクションのための、請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドをコードする核酸分子の使用。 11．適切な宿主細胞における請求の範囲４又は５のいづれか１項記載の核酸の発現、及び前記宿主細胞又は前記宿主細胞の培養上清液からタンパク質の単離による、末梢血液リンパ球におけるHIV-1 の複製を阻害するポリペプチドの組換え生成のための方法。 12．ポリペプチドに結合する抗体の生成のための抗原又は免疫原としての請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドの使用。 13．請求の範囲１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドにより動物を免疫化し、そしてその免疫化された動物の血清又は脾臓細胞から抗体を単離することによって得られる、請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドに免疫学的に結合する抗体の、体液、特に血液、血清又は血漿における活性化された／活性化されていない CD8⁺及び／又は CD4⁺細胞の割合の決定のための使用。 14．感染、又は良性又は悪性増殖疾患の処置のための治療剤の生成のためへの請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチドの使用。 15．ウィルス感染、又は良性又は悪性増殖疾患の処置のための治療剤の生成のための、ウィルスの複製を阻害し、そして配列番号３によりコードされるポリペプチドの使用。 16．レトロウィルス感染の処置のための治療剤の生成のための請求の範囲第14 又は15項記載の使用。 17．HIV 感染の処置のための治療剤の生成のための請求の範囲第16項記載の使用。 18．ウィルスの複製を阻害し、そして配列番号３によりコードされるポリペプチド、所望により、医薬的補助物質、適合性キャリヤー物質、充填剤及び／又は添加剤を含む治療用組成物。 19．ポリペプチド、所望により、医薬的補助物質、適合性キャリヤー物質、充填剤及び／又は添加剤を含む治療用組成物であって、前記ポリペプチドが、HIV 阻害アッセイにおけるレトロウィルス感染されていない正常なヒト血液サンプルの軟膜から調製される CD8⁺−消耗された末梢血液リンパ球（PBMC）におけるHIV -1 の複製を阻害し、そして前記ポリペプチド、又はその活性フラグメント又は誘導体が、ｉ）配列番号１に示されるDNA 配列によりコードされ、 ii）配列番号１又は配列番号３と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされ、 iii）遺伝子コードの縮重が存在しない場合、ｉ）〜ii）に定義された配列と緊縮条件下でハイブリダイズするDNA 配列によりコードされるが、但し、配列番号３に示されるDNA 配列によってはコードされないことを特徴とする治療用組成物。 20．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のタンパク質、又は配列番号４のタンパク質をコードする核酸の定性的及び／又は定量的検出のための方法であって、試験されるサンプルが、ａ）配列番号１又は配列番号３に示される配列又はそれらの相補的配列を有するDNA、ｂ）ａ）からの配列の１つと緊縮条件下でハイブリダイズする核酸を含んで成る群から選択された核酸プローブと共にインキュベートされ、前記核酸プローブが前記サンプル中の核酸と共にインキュベートされ、そして前記サンプル中の核酸及び前記核酸プローブのハイブリダイゼーションが、所望により、追加の結合パートナーにより検出されることを特徴とする方法。 21．前記検出される核酸が、検出の前、増幅される請求の範囲第20項記載の方法。 22．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド、又は配列番号４のタンパク質の生成のための方法であって、相同組換えにより哺乳類細胞のゲノム中にDNA 構造体を挿入することによって、前記タンパク質のための内因性遺伝子を前記細胞において発現する段階、ここで前記DNA 構造体は、それに操作可能的に連結される場合、前記遺伝子の発現を刺激することができるDNA 調節要素を含んで成り、そしてさらに、前記ゲノムにおける領域に相同の１又は複数のDNA 標的セグメントを含んで成り、ここで前記領域は前記遺伝子内に又はその遺伝子に隣接して存在し；前記細胞を培養する段階；及び前記細胞又は細胞培養上清液から前記タンパク質を回収する段階を含んで成る方法。 23．請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド、又は配列番号４のタンパク質の生成のための方法であって、相同組換えにより哺乳類細胞のゲノム中にDNA 構造体を挿入することによって、前記タンパク質をコードする、少なくとも１つの外因性遺伝子を前記細胞において発現する段階、ここで前記DNA 構造体は、それに操作可能的に連結される場合、前記遺伝子の発現を刺激することができるDNA 調節要素及び前記タンパク質をコードするDNA 要素を含んで成り、そしてさらに、前記ゲノムにおける領域に相同の１又は複数のDNA 標的セグメントを含んで成り；前記細胞を培養する段階；及び前記細胞又は細胞上清液から前記ポリペプチドを回収する段階を含んで成る方法。 24．ISL 活性を有するか、又は前記ISL 遺伝子の５′−未翻訳領域からのポリヌクレオチドを活性化するポリペプチドをコードする核酸分子の遺伝子療法のための治療剤の調製への使用。 25．相同組換えにより哺乳類細胞のゲノム中に導入され得るDNA 構造体の良性又は悪性疾患の処理のための抗ウィルス剤又は治療剤の調製への使用であって、前記DNA 構造体が、 −それに操作可能的に連結される場合、遺伝子を調節できるDNA 調節要素、ここで前記遺伝子は請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド又は配列番号４のタンパク質をコードし、及び −前記遺伝子内又はそれに隣接して存在する、前記ゲノムにおける領域に対して相同の１又は複数のDNA 標的セグメントを含んで成り、そして前記構造体が、前記調節要素が前記タンパク質をコードする遺伝子に操作可能的に連結されるような態様で前記哺乳類細胞のゲノム中に挿入され得ることを特徴とするDNA 構造体の使用。 26．相同組換えにより哺乳類細胞のゲノム中に導入され得るDNA 構造体の、良性又は悪性疾患の処理のための抗ウィルス剤又は腫瘍治療剤の調製への使用であって、前記DNA 構造体が、 −それに操作可能的に連結される場合、遺伝子を調節できるDNA 調節要素、ここで前記遺伝子は請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド又は配列番号４のタンパク質をコードし、及び −前記構造体の挿入が適切である場合、前記ゲノムにおける領域に対して相同の１又は複数のDNA 標的セグメントを含んで成り、そして前記構造体が、前記調節セグメントが前記哺乳類細胞において前記遺伝子の発現を調節するような態様で、前記哺乳類細胞のゲノム中に挿入され得ることを特徴とするDNA 構造体の使用。 27．前記核酸分子がレトロウィルスベクター又は非ウィルスDNA である請求の範囲24〜26のいづれか１項記載の使用。 28．前記治療剤が非ウィルスDNA 又はトランスファー試薬を含む請求の範囲第 27項記載の使用。 29．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる化合物を同定するための方法であって、ａ）Ficoll−グラジエント分離により健康な血液ドナーからPBMCを単離し、磁気細胞分類により CD8⁺細胞を単離し、FACS分析により前記調製物の純度を試験し、ここで前記調製物はCD8⁺細胞の適切な刺激を確保するために、約95％の CD8⁺ 細胞及び５％の非− CD8⁺汚染物を有すべきであり、１pM〜10mMの濃度範囲で、細胞培養物にISL 活性の発現の誘発のために試験される物質を添加し、細胞培養物にIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)を添加し、３日後、その培地を完全に除去し、そしてIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)と共に前記細胞を３日間、培養し、細胞を除去するために、前記細胞培養上清液を遠心分離し（×1000）、そしてそれを滅菌濾過、そしてアリコートし；ｂ）さらに、HIV−阻害アッセイにおいて前記化合物のISL を活性化する活性を調査し；ｃ）前記見出された阻害性が、前記化合物がヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化できることを示すことを含んで成る方法。 30．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる化合物。 31．請求の範囲第29項記載の方法により同定される請求の範囲第30項記載の化合物。 32．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる核酸を同定するための方法であって、ａ）Ficoll−グラジエント分離により健康な血液ドナーからPBMCを単離し、磁気細胞分類によりCD8⁺細胞を単離し、FACS分析により前記調製物の純度を試験し、ここで前記調製物はCD8⁺細胞の適切な刺激を確保するために、約95％の CD8⁺ 細胞及び５％の非− CD8⁺汚染物を有すべきであり、前記 CD8⁺細胞において発現され得る前記核酸分子により前記 CD8⁺細胞をトランスフェクトし、前記トランスフェクトされた細胞の培養物にIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)を添加し、３日後、その培地を完全に除去し、そしてIL-2(180Ｕ／mlの細胞培養培地)と共に前記細胞を３日間、培養し、細胞を除去するために、前記細胞培養上清液を遠心分離し（×1000）、そしてそれを滅菌濾過し、そしてアリコートし；ｂ）さらに、HIV−阻害アッセイにおいて前記核酸のISL を活性化する活性を調査し；ｃ）前記見出された阻害性が、前記核酸分子が、前記リンパ球のトランスフェクションの後、ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化できることを示すことを含んで成る方法。 33．ヒト血液リンパ球においてISL 生成を活性化することができる核酸分子。 34．請求の範囲第29項記載の方法により同定される請求の範囲第33項記載の核酸分子。 35．哺乳類細胞調製物又は前記細胞調製物の上清液において、前記細胞の活性化状態の測定のために請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド又は配列番号４のタンパク質を測定するための方法。 36．哺乳類細胞調製物又は前記細胞調製物の上清液において、前記細胞集団の活性化状態の測定のために請求の範囲第１〜３のいづれか１項記載のポリペプチド又は配列番号４のタンパク質をコードする核酸又はその特徴的な部分を測定するための方法。 37．前記哺乳類細胞調製物がヒト体液、たとえば完全な血液、血清、又は血漿である請求の範囲第35又は36項記載の方法。 38．前記細胞が CD4⁺細胞である請求の範囲第35又は36項記載の方法。 39．急性又は慢性感染（たとえば、血液ドナーにおける）を検出し、又は((レトロ)ウィルス)感染（たとえば、AIDSによる）の進行をモニターするために、血清及び他の体液におけるISL の濃度、及びISL を生成する CD8⁺リンパ球の数の診断測定であって、ラベル又はラベルされた抗−抗体により供給される抗体が反応せしめられ、ISL 又はISL-生成細胞と接触せしめられ、前記抗原／抗体複合体が既知の態様で分離され、そしてそれらの濃度が前記ラベルにより決定されることを特徴とする診断測定。