JPH10504902A

JPH10504902A - 遊離及び複合化トリプシノーゲン−２のアッセイ

Info

Publication number: JPH10504902A
Application number: JP8508512A
Authority: JP
Inventors: ステンマン，ウルフ−ホーカン; ヘドストルーム，ヨハン
Original assignee: ステンマン，ウルフ−ホーカン
Priority date: 1994-08-26
Filing date: 1995-08-24
Publication date: 1998-05-12
Anticipated expiration: 2015-08-24
Also published as: EP0777860A1; DE69524107D1; DE69524107T2; ATE209359T1; FI943921A; DK0777860T3; FI943921A0; FI100557B; EP0777860B1; ES2168378T3; WO1996007104A1; JP3522764B2; US5976809A

Abstract

(57)【要約】本発明はサンプル中の分析物を測定するトリプシノーゲン−２に関するイムノアッセイに関し、ここで前記分析物は血清中のアルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシン−２(トリプシン−２−AAT)又は尿中のトリプシノーゲン−２のいづれかである。好適な態様に従うと、トリプシン−２−AAT 複合体又は遊離トリプシノーゲン−２は少なくとも２種類の抗体を使用する非競合法により測定する。この方法は膵臓障害、特に膵臓炎を有する患者の診断に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】遊離及び複合化トリプシノーゲン−２のアッセイ本発明は尿中の遊離トリプシノーゲン−２又は血清中のアルファ−１−抗トリプシン（トリプシン−２−AAT）とのその複合体のいづれかとしてのトリプシノーゲン−２の測定のためのイムノアッセイを提供する。本発明は更に、尿中の遊離トリプシノーゲン−２又は血清中のトリプシン−２−AAT のいづれかの測定による、膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害とを、そして他方では非膵臓系胃腸障害とを判別のための方法に関連する。発明の背景本発明の背景を明確にするために、そして特に、実施に関する追加の詳細を供するために本明細書において利用する公開物及びその他の資料は引用することで本明細書に組入れる。トリプシノーゲンは膵臓の外分泌性細胞により分泌されるセリンプロテアーゼである(Travis J and Roberts R，Biochemistry 1969；８：2884-9；Mallory P and Travis J，Biochemistry 1973；12：2847-51)。トリプシノーゲン異性酵素の２種類の主要タイプ、即ち、カチオン性トリプシノーゲンとも呼ばれているトリプシノーゲン−１、及びトリプシノーゲン−２又はアニオン性トリプシノーゲンが特性決定されている。トリプシノーゲンプロ酵素は腸内でエンテロキナーゼによりトリプシンへと活性化される。エンテロキナーゼはトリプシノーゲンのＮ末端から活性化ペプチドを外す。トリプシノーゲンは高度の配列同一性を示すが、それらは電気泳動又はイオン交換クロマトグラフィーを利用することにより電荷相違に基づいて分離される。膵臓及び膵液中のトリプシノーゲンの主要形態はトリプシノーゲン−１である（Guy COら、Biochem Biophys Res Commun 1984；125：516- 23）。健康な対象者の血清中ではトリプシノーゲン−１も主要な形態であり、一方膵臓炎を有する患者においては、トリプシノーゲンがより強く高揚する(Itkon enら、J Lab Clin Med 1990；115：712-8)。トリプシノーゲンは一定の卵巣腫瘍においても認められ、それにおいてはトリプシノーゲン−２が主要な形態である（Koivunenら、Cancer Res 1990；50：2375-8）。アルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシン−１（アルファ−１−抗トリプシンとも呼ばれる）は膵臓炎を有する患者の血清の中で認められたが（Borgstrom A and Ohlsson K，Scand J Clin Lab Invest 1984；44：381-6）、この複合体の測定が膵臓障害とその他の胃腸障害とを判別するために有用であることは見い出されていない（Borgstro mら、Scand J Clin Lab Invest 1989；49：757-62）。トリプシノーゲン−１及び−２は免疫学的に近縁するが(Kimlandら、Clin Chi m Acta 1989；184：31-46；Itkonen ら、1990)、しかしモノクローナル抗体を利用することにより（Itkonenら、1990）又はポリクローナル抗血清を吸着させることにより（Kimlandら、1989）、各トリプシノーゲン形態の特異的な測定を可能にする試薬を得ることが可能である。活性トリプシンが血流に到達すると、それは主要トリプシンインヒビターアルファ−２−マクログロブリン及びアルファ−１−抗トリプシン(AAT)により失活する。AAT は肝臓の中で合成される58キロダルトンのセリンプロテアーゼインヒビターであり、そして血液中の主要プロテアーゼインヒビターの一つである。トリプシン−１とAAT との複合体が血清中で検出可能であるが(Borgstrom and Ohl sson，1984）、アルファ−２−マクログロブリンとの複合体は抗体ベースアッセイでは測定できない(Ohlsson K，Acta Gastroenterol Belg 1988；51：3-12)。急性膵臓炎は迅速なる診断を必要とする重篤、且つ潜在的に致死性の障害である。血清又は尿中のアミラーゼの測定がこの目的のために日常的に利用されているが、これらの方法は特異性の欠如により妨げられ、そのことはその臨床的な価値を制約してしまう。それ故、その他の膵臓マーカー、例えばプロテアーゼ及びリパーゼの利用に対する関心が高まっている（Ogawaら、Nippon Geka Gakkai Za sshi（日本外科学会雑誌）1985；86：1241-4）。血清中のトリプシノーゲン−１及び−２の測定(Itkonenら、1990)並びに尿中のトリプシノーゲン−１の測定(La ke-Bukaarら、Lancet 1979；ii：878-80)が膵臓障害の診断に利用されている。本発明において、膵臓障害を有する患者は、血液中ではアルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシノーゲン−２、そして尿中では遊離トリプシノーゲン −２の非常に高揚した濃度を有することが示されている。従って、この発見は膵臓の診断において非常に有用であることが証明された。図面の簡単な説明図１はゲル濾過による検量物質中のトリプシン−２−アルファ−１−抗トリプシンの特性を示す。トリプシノーゲン−２−免疫反応の溶出を対比のために示す。矢印はIgG 及びアルブミンについての溶出位置を示している。図２は使用した検量物質によるトリプシン−２−アルファ−１−抗トリプシン複合体の免疫蛍光測定アッセイについての用量−応答曲線を示す。図３Ａは、120人の健康体コントロール、肝臓外胆管閉塞を有する11人の患者、膵臓外起源の急性腹部障害を有する34人の患者及び急性膵臓炎を有する29人の患者由来の血清サンプル中のトリプシノーゲン−２の濃度を示す。水平点線は上限対照限界を示す。図３Ｂは図３Ａと同じ患者におけるトリプシン−２−アルファ−１−抗トリプシン複合体及び血清アミラーゼの濃度を示す。図４は急性膵臓炎を有する29人の患者由来の血清中のトリプシン−２−AAT、トリプシノーゲン−２及びアミラーゼの受容者作用特性(Receiver Operating Ch arateristic)(ROC)プロットを示す。膵臓外起源の腹部障害を有する患者をコントロールグループとして利用した。一定のカットオフ点についての値を表示する。この図はトリプシン−２−AAT が膵臓炎と非膵臓系急性腹部障害との間での最良の判別能力をもつことを示した。図５は膵臓外起源の急性腹部障害を有する46人の患者及び急性膵臓炎を有する 22人の患者由来の尿サンプル中のトリプシノーゲン−２及びアミラーゼの濃度を示す。この図は尿中のトリプシノーゲン−２が最良の診断精度をもつことを示す。図６Ａ〜６Ｄは軽度の膵臓炎（Ｉ）を有する及び重度の膵臓炎（II）を有する患者由来の尿及び血清サンプル中のトリプシノーゲン−２及びアミラーゼの濃度を示す。膵臓外起源の急性腹部障害を有する患者はコントロールを担う（AC）。 HC＝健康体コントロール。水性点線は上限対照限界を示す。図７Ａ〜７Ｄは急性膵臓炎と膵臓外胃腸障害との（図７Ａ）及び重度と軽度の急性膵臓炎（図７Ｂ）との判別における様々な試験の精度を示すROC プロットを示す。発明の詳細な説明本発明の特徴は請求項１及び10〜13に示す。本発明はサンプル中の分析物の量を測定するというトリプシノーゲン−２に関するイムノアッセイに関連し、この分析物は血清中のアルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシン−２又は尿中のトリプシノーゲン−２のいづれかである。競合及び非競合アッセイ法が採用できる。好適な態様に従うと、トリプシン− ２−AAT 複合体又は遊離トリプシノーゲン−２は少なくとも２種類の抗体を使用する非競合法により測定され、ここで捕獲抗体は固相に結合している。適当なラベルは、例えば酵素、放射性同位元素、蛍光体、フォスフォレセンス又はルミネッセンスマーカー、及び肉眼で検出可能な有色粒子である。「ラベル」なる語は上記のマーカーに結合できる結合部位を包括するものと解されるであろう。本発明は更に実質的に精製されたトリプシン−２−AAT 複合体及び尿に由来する実質的に精製されたトリプシノーゲン−２の調製品に関する。更に、本発明は、血清中のトリプシン−２−AAT の濃度又は尿中のトリプシノーゲン−２の濃度の測定に基づく、膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害を、そして他方では非膵臓障害とを判別するための方法に関する。本発明は以下の非限定例により明らかとなるであろう。実施例に利用した材料を以下に紹介する：１．モノクローナル抗体モノクローナル抗体を標準の手順によりマウスにおいて作った。トリプシノーゲン−２に対する抗体の特異性を文献（Koivunenら、1990）に記載のイオン交換クロマトグラフィーにより分離したトリプシノーゲン−１及び−２を利用して分析した(Itkonenら、1990) 。２．試薬及びバッファー AAT に対するポリクローナル抗血清をDako（Glostrup，Denmark）から獲得した。免疫蛍光測定アッセイ（IFMA）のアッセイバッファーは１リットル当り５ｇの牛血清アルブミン、0.15ｇの牛グロブリン及び0.5ｇのNaN₃を含む９ｇ／ｌのN aClを有する50mMのトリス−HCl，pH7.7 (TBS)とした。洗浄溶液にはリットル当り９ｇのNaCl，0.5ｇのNaN₃及び 0.2ｇのTween 20を含ませた。増強溶液はWalla cBiochemical Laboratories(Turku，Finland)に由来した。３．サンプル血清サンプルを急性膵臓炎を有する29人の患者、肝臓外胆管閉塞を有する11人の患者及び膵臓外起源の急性腹部障害を有する34人の患者から獲得した。サンプルは、認定の24時間以内、且つ治療開始前に採取した。急性膵臓炎の診断は臨床及び実験的発見 (血清及び尿アミラーゼ並びにCRP)、ランソン基準（Ransonら、 Surg GynecolObster 1974；139：69-80）に基づく。診断は膵臓のコントラストコンピューター連動断層撮影により確認した。肝臓外胆管閉塞及びその他の膵臓外起源の急性腹部障害の診断は通常の臨床方法に基づく（臨床、実験室、超音波測定及び放射性検査、又は外科的発見）、胃及び十二指腸潰瘍、並びに食道炎及び胃炎は内視鏡により診断される。フィンニッシュ・レッド・クロス・ブラッド・バンクから獲得した 120人の血液ドナー由来の血清サンプルを対照値を樹立するために利用した。サンプルは全てアッセイするまで−20℃で保存した。４．ゲル濾過トリプシン−２−AAT 検量物質の分画をSuperdex 200 HR 10／30の１×30cmのカラム(Pharmacia，Sweden)及び溶出用のTBS バッファーを利用するゲル濾過により実施した。流速は30ml／ｈとし、そして 0.5mlの容量の画分を集めた。チューブをタンパク質分解及びチューブへの非特異的吸着を防ぐためにアプロチニン(1.0mg／ｌ)含有の50μｌのアッセイバッファーで事前充填しておいた。IgG（150kD）及びアルブミン（69kD）の溶出容量をカラムの大まかな検量のために用いた。５．アミラーゼの測定アミラーゼを自動分析器（Hitachi 705E）及びBoehringer Mannheim 由来の試薬を利用して酵素比色試験により測定した。この方法の対照値は血清で70〜 300 Ｕ／Ｌ、そして尿で60〜2000Ｕ／Ｌであった。実施例１検量物質として利用するためのトリプシン−２−アルファ−１−抗トリプシン（トリプシン−２−AAT）の調製トリプシン−２−AAT 複合体に関する検量物質を純粋ヒトAAT(Sigma Chemical Co.，St．Louis，USA)及び既述の通りに(Itkonenら、1990)急性膵臓炎を有する患者の尿から精製したトリプシン−２から調製した。トリプシノーゲン−２を37 ℃で２ｈかけて自己活性化させ、次いで20℃で16ｈTBSバッファー中の７倍過剰量のAAT とインキュベートした。このインキュベーション混合物をゲル濾過により分離し、そして画分の中のトリプシノーゲン−２及びトリプシン−２−AAT の含有量をトリプシノーゲン−２ IFMA により概算した（図１）。AAT とのインキュベーションは、アプロチニンとインキュベートしたコントロール中の含有量の６％にまでトリプシノーゲン−２成分を減少させた。トリプシノーゲン−２ IFM A とトリプシン−２−AAT との交差反応は 3.3％であった（図１）。これに基づき、トリプシン−２の94％がAAT と複合したと計算される。この調製品をトリプシン−２−AAT アッセイの検量のために用いた。検量物質は0.1，0.5，1.0，1 0 及び100μｇ／ｌの濃度においてトリプシン−２−AAT を含むように複合体をアッセイバッファーで希釈することにより調製した。実施例２トリプシノーゲン−２及びトリプシン−２−AAT の非競合免疫蛍光測定アッセイトリプシノーゲン−２を２種類のモノクローナル抗体を利用する非競合式時間分解免疫蛍光測定アッセイにより測定した(Itkonenら、1990)。血清中の対照域は18〜90μｇ／ｌであった（中央値39μｇ／ｌ）。トリプシン−２−AAT のアッセイのため、遊離トリプシノーゲン−２及びトリプシン−２−AAT 複合体の双方に反応するトリプシン−２に対するモノクローナル捕獲抗体（14F10）（Itkonenら、1990）をマイクロタイターウェル上にコーティングした。ユーロピウムキレート(Hemmilaら、Anal Biochem 1984；137：335- 43) でラベルしたAAT に対するポリクローナルウサギ抗体(Dako，Demmark を検出抗体として用いた。25μｌのサンプル及び200μｌのアッセイバッファーをコーティングを施したウェルに分注した。１時間インキュベーション後、ウェルを空にし、自動ワッシャー(DELFIA Platewash 1296-024，Wallac，Turku，Finland ) を利用して洗浄溶液で２回洗った。200μｌのアッセイバッファー中の 200ng のトレーサー抗体を加え、そして１時間にわたる更なるインキュベーションの後、ウェルを空にし、そして４回洗った。200μｌの増強溶液を加え、そして５分後、蛍光を1234 DELFIA 蛍光計（Wallac，Turku，Finland）で測定した。トリプシン−２−AAT IFMAについての用量− 応答曲線を図２に示す。このアッセイの検出限界は0.05μｇ／ｌであり、そして標準曲線は100μｇ／ｌまで直線性を有していた。120人の血液ドナー由来の血清における2.5 及び97. 5パーセンタイルを基準として決定した対照域は 2.3〜12μｇ／ｌであり、そして中央値は 4.2μｇ／ｌであった。膵臓炎の診断における血清中のトリプシン−２−AAT 及びトリプシノーゲン−２血清アッセイの臨床精度を、急性膵臓炎を有する患者、肝臓外胆管閉塞を有する患者、及び膵臓外起源の急性腹部障害を有する患者由来の血清サンプル中のトリプシン−２−AAT 、トリプシノーゲン−２及びアミラーゼの濃度を決定することにより評価した。急性膵臓炎を有する患者においては、トリプシン−２−AAT 及びトリプシノーゲン−２のレベルは非常に高揚していた。トリプシン−２−AA T の中央濃度は健康体コントロールの59倍であった。健康体コントロールのそれよりも、トリプシノーゲン−２のそれは19倍、そしてアミラーゼのそれは5.4 倍であった（表１）。急性膵臓炎を有する患者と膵臓外障害を有する者との間でトリプシン−２−AA T 値の重なりはなかった。トリプシノーゲン−２については４人の患者（14％）において重なりが認められ、そしてアミラーゼについては14人の患者（48％）において重なりが認められた（図３Ａ及び３Ｂ）。膵臓炎と非膵臓障害とを判別する様々な分析物の能力を受容者作用特性(ROC) 分析により評価した。ROC 曲線下の面積はトリプシン−２−AAT については1.00 、トリプシノーゲン−２については0.996 、そしてアミラーゼについては0.929 であり、感度及び特異性がその他の測定法よりも優れていることを示唆する（図４）。実施例３ａ）尿からのトリプシノーゲン−２の精製高濃度のトリプシノーゲン−２を含む１リットルの尿を濾過して不溶性構成分を除去し、そして濾液のpHを１mol／ｌのNaOHで7.4に調整した。その濾液を、トリプシノーゲン−２に特異的な20mgのモノクローナル抗体を臭化シアノゲン活性化Sepharose（Pharmacia，Uppsala，Sweden由来）にカップリングさせることにより調製したイムノアフィニティークロマトグラフィーに通した。抗体の特徴は記述の通りである(Itkonenら、1990)。カラムを１mol／ｌのNaClで洗浄後、それを0.1％のトリフルオロ酢酸(TFA)により溶出させた。その溶出液を更に逆相クロマトグラフィーにより、0.1％のTFA バッファー及びアセトニトリル勾配による溶出を利用して精製した。画分の含有量を280nm での吸収に基づいてタンパク質についてモニターした。得られる画分を１mol／ｌのトリスバッファーで直ちに中和した。画分中のトリプシノーゲン−２の含有量はイムノアッセイにより決定した。この方法により精製したトリプシノーゲン−２はドデシル硫酸ナトリウム電気泳動での一本のバンドにより証明される通り95％以上の純度であった。ｂ）膵臓炎の診断における尿中のトリプシノーゲン−２トリプシノーゲン−２についての尿アッセイの臨床精度は急性膵臓炎を有する 22人の患者及び膵臓外起源の急性腹部障害を有する46人の患者由来の尿サンプル中の濃度を測定することにより評価した。急性膵臓炎を有する患者において、その中央濃度は急性腹部障害を有する患者のそれの4000倍であった。アミラーゼについての対応の差は４倍にすぎなかった（表２）。急性膵臓炎を有する患者と膵臓外起源の腹部障害を有するコントロールグループとの間でトリプシノーゲン−２値の重なりはなかった。アミラーゼについては、膵臓炎を有する４人の患者のみがコントロールグループにおいて観察された最も高い値よりも高い値を有していた（図５）。実施例４血清トリプシノーゲン−２及び血清又は尿中のアミラーゼと対比させた急性膵臓炎マーカーとしての尿トリプシノーゲン−２早期診断及び急性膵臓炎（AP）の症度の評価における尿トリプシノーゲン−２の測定の臨床的用途を研究した。対照方法として血清トリプシノーゲン−２、尿アミラーゼ及び血清アミラーゼを利用した。APと診断された全部で59人の患者及び膵臓外起源の急性上腹部障害を有する42人のコントロール（AC）をヘルシンキ大学中央病院で研究した。APを有する患者はその臨床結果に応じて２つのグループに分類した：軽度AP（グループＩ、４０人の患者）及び重度AP（グループII、19人の患者）。急性腹部障害の徴候のない患者由来の尿サンプルを健康体コントロール（HC）として利用した。アミラーゼ及びトリプシノーゲンを前述の方法に従って決定した。急性膵臓炎（AP）の症例は全員が表示において高いトリプシノーゲン−２の尿濃度を有し、そして上限対照値を下まわる濃度は診断ではなかった。一方、膵臓炎を有する17人（28％）の患者が正常な尿中アミラーゼレベルを有していた。急性膵臓炎における最低のトリプシノーゲン−２値（15μｇ／ｌ）は健康体コントロールの上限対照値の1.4倍であった。APを有する患者の尿トリプシノーゲン− ２の中央濃度は上限対照限界の102倍であった。対比のため、尿アミラーゼのレベルはわずか2.0倍であり、そして血清アミラーゼのそれは上限対照限界の3.4倍であった。受容者作用特性分析(ROC)を、急性膵臓炎を有する患者（AP）と急性腹部膵臓外障害を有するコントロール（AC）とを比較するために用いた。AUC（曲線下面積）は尿中のトリプシノーゲン−２については0.980、そして尿中のアミラーゼについては0.842であった。尿中のトリプシノーゲン−２は血清中のトリプシノーゲン−２(AUC＝0.998)及び血清アミラーゼ(AUC＝0.965)と同じぐらいに良好な精度を有していた（図７Ａ参照）。 ROC分析は、尿トリプシノーゲン−２が、重度を軽度APから判別するうえで試験したマーカーのうちで最も高い精度を有すことを示し（AUC＝0.741、図７Ｂ）、そしてそれはこの観点において血清トリプシノーゲン−２よりも若干良かった。アミラーゼは重度を軽度APから判別する能力に劣り、そして尿アミラーゼのレベルは重度な障害の方が軽度な障害よりも事実上低かった（図６Ｃ）。これらの結果は、尿中のトリプシノーゲン−２が急性膵臓炎についての高い精度を有するマーカーであることを示す。急性膵臓炎を有する患者は全員高い値を有し、そしてその他の胃腸障害を有する患者のトリプシノーゲン−２についての偽陽性結果の数は尿アミラーゼについてよりも少なかった。更に、トリプシノーゲン−２のレベルは障害の症度を反映し、一方アミラーゼレベルは反映しない。従って、トリプシノーゲン−２は急性膵臓炎の診断においてその他の尿検査よりも明らかに優れ、そしてトリプシノーゲン−２についての血清検査に関しては同等である。表示のデーターから血清中のトリプシン−２−AAT 又は尿中のトリプシノーゲン−２の測定は、血清中のトリプシノーゲン−２もしくはアミラーゼ又は尿中のアミラーゼの如き現在利用されている方法よりも優れた臨床精度を提供することが明らかである。本発明の方法は、様々な態様の形態で組込まれることができ、その一部しか本明細書において開示されていないことが明らかであろう。その他の態様もあり、そして本発明の範囲を逸脱しないことが当業者に自明であろう。即ち、記載の態様は例示であり、そして限定するものと解すべきでない。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１０月１１日【補正内容】請求の範囲１．トリプシノーゲン−２の定量測定のためのイムノアッセイであって、サンプルのトリプシノーゲン−２をこのトリプシノーゲン−２に対して生起させた抗体と接触させ、そしてこの抗体を定量し、ここでこのトリプシノーゲン−２が、 −ヒト血清中のアルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシン−２（トリプシン−２−AAT ）又は −尿中のトリプシノーゲン−２、のいづれかであることを特徴とする、イムノアッセイ。２．前記分析物を含んで成るサンプルを前記分析物に対する特異性を有する捕獲抗体とインキュベートすることを特徴とする、請求項１記載の方法。３．前記サンプルのインキュベーションを競合ラベル化分析物の存在下で実施することを特徴とする、請求項２記載の方法。４．前記分析物を、前記捕獲抗体とは異なる前記分析物の部位に対する特異性を有するラベル化検出抗体とインキュベートすることを特徴とする、請求項２記載の方法。５．前記捕獲抗体が固相に結合していることを特徴とする、請求項２，３又は４記載の方法。６．前記分析物がトリプシン−２−AAT であり、前記捕獲抗体に結合したトリプシン−２−AAT 複合体を前記検出抗体とのインキュベーションの前に遊離AAT から分離させることを特徴とする、請求項５記載の方法。７．前記ラベルが酵素、放射性同位元素、蛍光体、ホスホレッセンスもしくはルミネッセンスマーカー、有色粒子、又は前記マーカーに結合できる結合性部位であることを特徴とする、請求項３〜６のいづれか１項記載の方法。８．前記捕獲抗体がトリプシノーゲン−２又はトリプシン−２に特異的であることを特徴とする、請求項２〜７のいづれか１項記載の方法。９．前記検出抗体がAAT に対して特異的であることを特徴とする、請求項６記載の方法。 10．実質的に純粋なトリプシン−２−AAT 複合体。 11．トリプシノーゲン−２が尿に由来することを特徴とする、実質的に純粋なトリプシノーゲン−２調製品。 12．膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害とを、そして他方では非膵臓障害とを判別するための方法であって、血清中のトリプシン−２−AAT の濃度を測定することを特徴とする方法。 13．膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害とを、そして他方では非膵臓障害とを判別するための方法であって、尿中のトリプシノーゲン−２の濃度を測定することを特徴とする方法。

Claims

【特許請求の範囲】１．トリプシノーゲン−２についてのイムノアッセイであって、サンプル中の分析物の量を測定することを特徴とし、ここでこの分析物が、 −血清中のアルファ−１−抗トリプシンと複合したトリプシン−２（トリプシン −２−AAT）又は −尿中のトリプシノーゲン−２、のいづれかである、イムノアッセイ。２．前記分析物を含んで成るサンプルを前記分析物に対する特異性を有する捕獲抗体とインキュベートすることを特徴とする、請求項１記載の方法。３．前記サンプルのインキュベーションを競合ラベル化分析物の存在下で実施することを特徴とする、請求項２記載の方法。４．前記分析物を、前記捕獲抗体とは異なる前記分析物の部位に対する特異性を有するラベル化検出抗体とインキュベートすることを特徴とする、請求項２記載の方法。５．前記捕獲抗体が固相に結合していることを特徴とする、請求項２，３又は４記載の方法。６．前記分析物がトリプシン−２−AAT であり、前記捕獲抗体に結合したトリプシン−２−AAT 複合体を前記検出抗体とのインキュベーションの前に遊離AAT から分離させることを特徴とする、請求項５記載の方法。７．前記ラベルが酵素、放射性同位元素、蛍光体、ホスホレッセンスもしくはルミネッセンスマーカー、有色粒子、又は前記マーカーに結合できる結合性部位であることを特徴とする、請求項３〜６のいづれか１項記載の方法。８．前記捕獲抗体がトリプシノーゲン−２又はトリプシン−２に特異的であることを特徴とする、請求項２〜７のいづれか１項記載の方法。９．前記検出抗体がAAT に対して特異的であることを特徴とする、請求項６記載の方法。 10．実質的に純粋なトリプシン−２−AAT 複合体。 11．トリプシノーゲン−２が尿に由来することを特徴とする、実質的に純粋なトリプシノーゲン−２調製品。 12．膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害とを、そして他方では非膵臓障害とを判別するための方法であって、血清中のトリプシン−２−AAT の濃度を測定することを特徴とする方法。 13．膵臓炎と、一方ではその他の膵臓障害とを、そして他方では非膵臓障害とを判別するための方法であって、尿中のトリプシノーゲン−２の濃度を測定することを特徴とする方法。