JPH1036400A - モノクローン抗体、並びに口腔用組成物及び診断・研究用基剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 口腔内のう蝕原性細菌であるストレプトコッ
カス・ミュータンスと特異的に反応するモノクロナール
抗体を得る。 【解決手段】 抗原抗体反応の容量−作用曲線がプラト
ーとなるような抗体過剰域でストレプトコッカス・ミュ
ータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）と特異的に反応して、他
のストレプトコッカス属菌であるストレプトコッカス・
ミティス、ストレプトコッカス・サリバリウス、及びス
トレプトコッカス・サンギスと反応しないことを特徴と
するモノクローン抗体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ストレプトコッカ
ス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｍｕｔ
ａｎｓ、血清型ｃ／ｅ／ｆ）と特異的に反応するモノク
ローン抗体、並びに口腔用組成物及び診断・研究用基剤
に関し、更に詳述すると、反応特異性が極めて高く、口
腔内のストレプトコッカス・ミュータンスの存否、多寡
を正確に検出することができる上に、う蝕原性細菌であ
るストレプトコッカス・ミュータンスを口腔内から特異
的に排除でき、う蝕の効果的な予防が可能となるモノク
ローン抗体、並びに該モノクローン抗体を配合した口腔
用組成物及び診断・研究用基剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来よ
り、ストレプトコッカス・ミュータンスはう蝕原性細菌
として口腔衛生の分野で注目されており、口腔内のスト
レプトコッカス・ミュータンスの存在とう蝕の発生の間
には密接な関係があることが広く知られている。

【０００３】この場合、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスはう蝕の有力な原因菌であるミュータンスレンサ球
菌群（ｍｕｔａｎｓ ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）の菌
として分類されている。現在、同群にはストレプトコッ
カス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍ
ｕｔａｎｓ、血清型ｃ／ｅ／ｆ）の他に、ストレプトコ
ッカス・クリセタス（Ｓ．ｃｒｉｃｅｔｕｓ、血清型
ａ）、ストレプトコッカス・ラッタス（Ｓ．ｒａｔｔｕ
ｓ、血清型ｂ）、ストレプトコッカス・ソブリヌス
（Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ、血清型ｄ／ｇ）、ストレプト
コッカス・ドウネイ（Ｓ．ｄｏｗｎｅｉ、血清型ｈ）、
ストレプトコッカス・フェルス（Ｓ．ｆｅｒｕｓ、血清
型ｃ）の各菌が含まれている。これらの中で、ヒト口腔
内から高頻度で分離される菌としてはストレプトコッカ
ス・ミュータンスとストレプトコッカス・ソブリヌスが
あり、中でもストレプトコッカス・ミュータンスはう蝕
の発生に深く関連することが知られている。

【０００４】このため、う蝕の発生と密接に関連するス
トレプトコッカス・ミュータンスの存否、多寡を測定す
ることによりう蝕罹患の危険性（カリエス・リスク）を
予測する提案がなされている（特開平１−２５００６７
号公報）。この提案は、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスの存否、多寡をストレプトコッカス・ミュータンス
に対するモノクローン抗体又はポリクローン抗体を用い
て検出するものであり、免疫学的測定法であるため、ス
トレプトコッカス・ミュータンスの検出に要する時間が
大幅に短縮でき、結果が判明するまでに１日以上を要す
る細菌学的培養法に比べ、迅速性に優れ、細菌学に関す
る専門的な知識や技術、特殊な設備を必要としないもの
である。

【０００５】一方、ストレプトコッカス・ミュータンス
と同じストレプトコッカス属に分類される菌が多数常在
菌として口腔内に存在していることが知られており、特
にストレプトコッカス・ミティス（Ｓ．ｍｉｔｉｓ）、
ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓ．ｓａｌｉｖａ
ｒｉｕｓ）、ストレプトコッカス・サンギス（Ｓ．ｓａ
ｎｇｕｉｓ）の３菌種は、口腔内細菌叢中の主要細菌で
ある。この場合、口腔内の部位により細菌の存在の相対
比率は異なるが、カリエス・リスク診断時の検体として
繁用される唾液については、上記３菌種で口腔内細菌叢
の５０％近くを占めている。

【０００６】また一般に、唾液１ｍｌ中の総菌数は１０
⁸個以上といわれており、上記３菌種とも唾液１ｍｌ中
に、各々１０⁸個程度のオーダーで存在するものと考え
られる（Ｇ．Ｎｉｋｉｆｏｒｕｋ著、榊 鉄也監訳、
「齲蝕１−病因論とメカニズム」、１０４〜１３６頁
（１９８７）、学建書院）。

【０００７】なお、ストレプトコッカス・ミュータンス
の総菌数は個人差が大きいため一概には言えないが、い
わゆる「う蝕ハイリスク」といわれる場合で唾液１ｍｌ
中に１０⁶個レベル、「ストレプトコッカス・ミュータ
ンスの定着に必要」といわれているレベルで同じく１０
⁴〜１０⁵個程度であると報告されている。

【０００８】この点について、武井の報告によると、ヒ
トの唾液１ｍｌ中のストレプトコッカス・ミュータンス
（この場合、正確にはミュータンスレンサ球菌群）のレ
ベルは１０⁶個のレベル以下であり、ストレプトコッカ
ス・ミュータンスの血清型分布はｃ型が最も多く、次い
でｅ型が多く、ｆ型は少なかった。また、ストレプトコ
ッカス・ソブリヌスはｄ／ｇ型ともに低い検出率であっ
た（武井 勉、大阪大学歯学雑誌、３５：９３（１９９
０））。

【０００９】従って、カリエス・リスクを正確に診断す
るためには、１０²〜１０⁴倍以上の比率で存在する上記
ストレプトコッカス属の３種の菌の中からストレプトコ
ッカス・ミュータンスのみを正確に検出することが必要
となり、ストレプトコッカス・ミュータンスに対する極
めて高い反応特異性が検出に用いる抗体に要求される。
即ち、口腔内での存在比率が高く、測定の妨害となるス
トレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サ
リバリウス、ストレプトコッカス・サンギスの３菌種に
対しては全く反応しない（測定のバックグラウンド以
下）という極めて高い反応特異性が要求される。

【００１０】この点に関して、上記特開平１−２５００
６７号公報に開示されている技術は、種特異性の高い血
清型多糖抗原に対する抗体を使用することにより上記課
題を解決している。しかしながら、血清型多糖抗原はス
トレプトコッカス・ミュータンスでは上述した通り、ｃ
／ｅ／ｆの３種類が存在するため、少なくとも３種類の
抗体を使用しなければストレプトコッカス・ミュータン
スを正確に検出することができず、操作性、迅速性に劣
るという問題点があった。

【００１１】上記問題点を解決するために、ｃ／ｅ／ｆ
各血清型に共通するエピトープに対するモノクローン抗
体を利用する試みが検討されている。例えば、ストレプ
トコッカス・ミュータンスのみに反応するモノクローン
抗体に関する技術についてはロバータ スミス等（ＲＯ
ＢＥＲＴＡ ＳＭＩＴＨ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．，４６：１６８（１９８４））が報告
しているが、この提案では他のストレプトコッカス属菌
に対する反応特異性の検討が不十分かつ不明であり、抗
原抗体反応の容量−作用曲線に関する記述もなされてい
ない。

【００１２】また、ファビエンヌ アッカーマンス等の
報告（ＦＡＢＩＥＮＮＥ ＡＣＫＥＲＭＡＮＳ，ｅｔ
ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，４９：３４４
（１９８５））に記載されている抗原抗体反応の容量−
作用曲線のプロファイルに見られるとおり、一般に抗体
の量が増加すると、本来反応性が弱い菌体でも反応応答
が出現し、検出を妨害し反応特異性に問題が生じること
が知られている。

【００１３】従って、口腔内のストレプトコッカス・ミ
ュータンスのみを、１０²〜１０⁴倍以上の比率で他のス
トレプトコッカス属の菌（特に、ストレプトコッカス・
ミティス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレ
プトコッカス・サンギス）が共存する試料の中から正確
に検出するためには、これら検出の妨害となりうる菌に
対しては、「どのような条件下でもバックグラウンド以
下の反応性しか示さない」という極めて高い反応特異性
が保証できるような抗体を使用しない限りストレプトコ
ッカス・ミュータンスの正確な検出は困難である。

【００１４】この点について公知文献を精査してみる
と、特開平２−１７７８９８号公報に開示されているモ
ノクローン抗体については、ストレプトコッカス・サリ
バリウスについてバックグラウンドをやや上回る程度の
弱い交差性が認められており、この微弱な応答がストレ
プトコッカス・ミュータンス検出の妨害となりうること
を特開平５−５７４４号公報に開示されたデータが示し
ている。即ち、１０⁷個レベルのストレプトコッカス・
サリバリウスと１０⁵個レベルのストレプトコッカス・
ミュータンスの応答性は同程度となり、実際の口腔内で
の両者の存在比はこれよりも大きい場合があり、この場
合より大きな妨害となり、誤った診断結果を下す危険性
が憂慮されている。

【００１５】従って、未だ十分な反応特異性を有し、ス
トレプトコッカス・ミュータンスと特異的に反応し、他
のストレプトコッカス属菌と反応しないモノクローン抗
体は得られておらず、その開発が望まれていた。

【００１６】本発明は、上記事情を鑑みなされたもの
で、ストレプトコッカス・ミュータンスと特異的に反応
し、他のストレプトコッカス属菌と反応しないために、
ストレプトコッカス・ミュータンスの存否、多寡の検
出、及び排除に有効なストレプトコッカス・ミュータン
スと特異的に反応するモノクローン抗体、並びに該モノ
クローン抗体を配合した口腔用組成物及び診断・研究用
基剤を提供することを目的とする。

【００１７】

【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者らは、上記目的を達成するために、ストレプトコ
ッカス・ミュータンスに対する極めて高い反応特異性を
有するモノクローン抗体を開発すべく、鋭意検討を重ね
た結果、ストレプトコッカス・ミュータンスに対するモ
ノクローン抗体を産生可能な細胞を樹立し、この細胞か
ら得られたモノクローン抗体を、モノクローン抗体過剰
域でストレプトコッカス属の菌に対する反応特異性を厳
しく解析した結果、樹立したクローン数としては少数で
はあるが、う蝕の原因菌であるストレプトコッカス・ミ
ュータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）とのみ反応し、他のス
トレプトコッカス属菌と反応しないモノクローン抗体を
見出した。

【００１８】即ち、ストレプトコッカス・ミュータンス
のｃ／ｅ／ｆ各血清型に共通するエピトープに対するモ
ノクローン抗体を産生可能な細胞を樹立し、この細胞か
ら得られたモノクローン抗体を、ストレプトコッカス・
ミュータンス菌体上の反応可能な全エピトープに抗体が
結合し、抗原抗体反応の容量−作用曲線がプラトーとな
るような高濃度に抗体が添加された過酷な条件、即ち、
本来反応性が弱い菌体でも反応応答が出現し、反応特異
性に問題が生じるようなモノクローン抗体過剰域におい
て反応特異性を解析したところ、ストレプトコッカス・
ミュータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）と高い反応性を示
し、他のストレプトコッカス属の菌、特に口腔中の存在
比率が高く測定の妨害となるストレプトコッカス・ミテ
ィス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレプト
コッカス・サンギスとは、どのような条件下でもバック
グラウンド以下の反応性しか示さないという極めて高い
反応特異性を有するモノクローン抗体が得られ、カリエ
ス・リスクの正確な診断、及びう蝕原性菌の特異的排除
が可能となり、口腔衛生分野での大きな期待に応えるこ
とができることを見出し、本発明をなすに至ったもので
ある。

【００１９】従って、本発明は、（１）抗原抗体反応の
容量−作用曲線がプラトーとなるような抗体過剰域でス
トレプトコッカス・ミュータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）
と特異的に反応して、他のストレプトコッカス属菌であ
るストレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス
・サリバリウス、及びストレプトコッカス・サンギスと
反応しないことを特徴とするモノクローン抗体、（２）
（１）記載のモノクローン抗体を産生する細胞（３）
（１）記載のモノクローン抗体を含有してなる組成物、
及び、（４）（１）記載のモノクローン抗体を含有して
なる診断・研究用基剤を提供する。

【００２０】以下、本発明につき更に詳しく説明する
と、本発明のモノクローン抗体は、抗原抗体反応の容量
−作用曲線がプラトーとなるような抗体過剰域でストレ
プトコッカス・ミュータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）と特
異的に反応して、他のストレプトコッカス属菌であるス
トレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サ
リバリウス、及びストレプトコッカス・サンギスと反応
しないことを特徴とするものである。

【００２１】ここで、本発明において「ストレプトコッ
カス・ミュータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）と特異的に反
応し、」、「他のストレプトコッカス属菌であるストレ
プトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サリバ
リウス、及びストレプトコッカス・サンギスと反応しな
い」とは、ストレプトコッカス・ミュータンス菌体上
の反応可能な全エピトープに抗体が結合した状態、即ち
抗原抗体反応の容量−作用曲線がプラトーとなるような
高濃度の抗体が添加される反応系で、他のストレプト
コッカス属菌、特にストレプトコッカス・ミティス、ス
トレプトコッカス・サリバリウス、ストレプトコッカス
・サンギスの３種類に対する反応性がバックグラウンド
以下である、という二つ条件を同時に満たすことをい
う。

【００２２】また、の抗原抗体反応の容量−作用曲線
がプラトーとなるような高濃度の抗体とは、抗体が抗原
の反応すべき全エピトープに結合し、抗体をそれ以上増
やしても吸光度が変化しない状態をいい、本発明のモノ
クローン抗体においては、抗体量が６４（＝２^-6）倍希
釈より高濃度である場合をいい、本発明モノクローン抗
体は、このような抗体過剰域において反応特異性を解析
した場合でも、ストレプトコッカス・ミュータンス（血
清型ｃ／ｅ／ｆ）とのみ特異的に反応して、他のストレ
プトコッカス属菌であるストレプトコッカス・ミティ
ス、ストレプトコッカス・サリバリウス、及びストレプ
トコッカス・サンギスと反応しないものである。

【００２３】なお、ストレプトコッカス属の菌について
は、１９８０年代以降になってもストレプトコッカス・
オラリス（Ｓ．ｏｒａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・
ゴルドニイ（Ｓ．ｇｏｒｄｏｎｉｉ）等の新しい菌種が
分離・報告されているが、本発明においては、以前より
口腔内に多数存在することが報告されているストレプト
コッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サリバリウ
ス、ストレプトコッカス・サンギスの３菌種について、
ストレプトコッカス・ミュータンスの特異的検出を妨害
するストレプトコッカス属の菌として検討した。

【００２４】本発明のモノクローン抗体は、抗原結合領
域（可変領域）の遺伝子構成が同一である細胞集団が産
生する抗体であり、クラススイッチによるクラスが異な
る抗体、遺伝子組み換え技術等の手段で調製したキメラ
抗体等も含まれる。

【００２５】更に、同一の特異性を有するモノクローン
抗体分子をペプシンで分解して得られるＦ（ａｂ’）₂
断片、パパインで分解して得られるＦａｂ断片のよう
に、抗原結合能を有する特異抗体由来のフラグメントな
どもモノクローン抗体と同様に使用することができる。

【００２６】本発明のモノクローン抗体は、ポリエチレ
ングリコールを用いた細胞融合によるハイブリドーマの
樹立（細胞融合法）の他、電気的融合法やセンダイウイ
ルス等によるハイブリドーマの樹立、遺伝子組み換えに
よる組み換え体の調製、エプシュタイン−バール（Ｅｐ
ｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルスや発ガンプロモーター
等による形質転換体の調製などによっても調製すること
ができるが、特に、細胞融合によるハイブリドーマの樹
立が好適である。

【００２７】ここで、ポリエチレングリコールを用いた
細胞融合によるハイブリドーマの樹立について更に詳し
く説明すると、抗原の調製は、ストレプトコッカス・ミ
ュータンスを培養して公知の方法により目的とするエピ
トープを有する抗原を調製する。次に、得られた抗原で
動物（馬、牛、羊、ヤギ、マウス、ニワトリ等）を免疫
するが、近交系動物が確立しているマウスを用いるのが
一般的である。具体的には、動物への免疫方法として
は、皮下注射、筋肉注射、腹腔内投与等による通常の方
法や点鼻、点眼等の方法によって行うことができる。抗
原の投与量は、所望の抗体価が得られ、かつ免疫動物に
対して悪影響を与えない量を適宜選択すればよい。な
お、必要に応じて例えばフロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）完
全アジュバント、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）不完全ア
ジュバント、水酸化アルミニウム等のアジュバントを該
抗原と共に併用してもよい。

【００２８】最終免疫後、抗体価が上昇していることを
確認し、全血採取を行い、無菌的に脾臓を取り出し、脾
細胞を得る。この脾細胞を免疫に用いた同種動物由来の
継代培養した骨髄種細胞とをポリエチレングリコールの
存在下で融合させてハイブリドーマをつくる。融合した
細胞のみ増殖できる特殊な培養条件下で培養し、限界希
釈法（リミティング・ダイリューション）という方法を
用いて目的のモノクローン抗体産生株をスクリーニング
する。このハイブリドーマは免疫動物の抗体産生細胞が
特異抗体を産生する能力と、骨髄種細胞が半永久的に増
殖するという両者の長所を有するものである。なお、本
発明のモノクローン抗体を産生する細胞としては、上記
ハイブリドーマ以外にも、遺伝子組み換え体、形質転換
体等が含まれる。

【００２９】モノクローン抗体の調製は、細胞種に適し
た方法を各々選択すれば良く、細胞培養法の他、ハイブ
リドーマ、形質転換体については、腹腔等生体内で培養
することも条件を満たせば可能である。また、モノクロ
ーン抗体の精製については、当該分野で通常行われてい
る硫安沈殿法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィ
ニティークロマトグラフィー等の各方法、及びそれらの
組み合わせにより可能となる。

【００３０】このようにして得られた本発明のモノクロ
ーン抗体の反応特異性は極めて高く、下記実施例で詳述
するように、２０％ウシ胎児血清を含有する培養上清中
にモノクローン抗体が存在するような低純度のモノクロ
ーン抗体組成物を用いても、ストレプトコッカス・ミュ
ータンスの特異的検出が可能である。従って、アフィニ
ティークロマトグラフィー精製による高純度のモノクロ
ーン抗体だけでなく、抗原抗体反応を阻害しないような
成分からなるモノクローン抗体含有組成物もストレプト
コッカス・ミュータンスの検出に有用である。更に、必
要に応じてアジ化ナトリウムのような防腐剤、プロテア
ーゼ阻害剤等を添加することも可能である。

【００３１】本発明のモノクローン抗体は、う蝕予防用
口腔用組成物、ストレプトコッカス・ミュータンス検出
用の診断・研究用基剤などの用途に好適なものである。

【００３２】う蝕予防用口腔用組成物としては、洗口
剤、うがい液、歯磨類、その他の種々の口腔用組成物の
形態に調製することができ、他の成分としては組成物の
種類に応じた公知の成分を常用量配合し得る。

【００３３】また、ストレプトコッカス・ミュータンス
検出用の診断・研究用基剤として、他の試薬と組み合わ
せて検査キット、診断用試薬、研究用試薬などに使用す
ることができる。

【００３４】この場合、検体中のストレプトコッカス・
ミュータンスを検出する方法としては、一般的な抗原抗
体反応に基づく抗原の検出方法がそのまま利用できる。
例えばオクタロニー法、免疫電気泳動法、受身赤血球凝
集反応法、菌体凝集法、ラテックス凝集法、酵素抗体法
（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂ
ｅｎｔ ａｓｓａｙ；ＥＬＩＳＡ法）などが挙げられる
が、簡便かつ迅速に検出するならばラテックス凝集法
が、原因菌の多寡を精度良く測定するならばＥＬＩＳＡ
法が好ましい。なお、ヒト披検者からの検体としては、
プラーク（歯垢）、唾液等が用いられる。検体は、その
まま本発明モノクローン抗体と反応させてもよく、適当
な前処理を行った後、モノクローン抗体と反応させても
よい。

【００３５】更に、本発明モノクローン抗体によれば、
口腔内のストレプトコッカス・ミュータンスの存否・多
寡を正確に検出、診断することができる上に、う蝕原性
細菌であるストレプトコッカス・ミュータンスと特異的
に結合する性質を利用して、モノクローン抗体を特定の
不溶性担体（例えば、ラテックス等）と結合させてお
き、この抗体結合担体と結合したストレプトコッカス・
ミュータンスを口腔内から特異的に排除することができ
るので、う蝕の効果的な予防が可能となるものである。

【００３６】

【実施例】以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明は下記実施例に制限されるものではな
い。なお、特に記述がない限り、温度は室温で操作し、
ｐＨは２０〜２５℃におけるｐＨを示す。蛋白質量は２
８０ｎｍの吸光度測定結果からその濃度を算出した。

【００３７】［実施例１］１．抗原の調製 （１）ストレプトコッカス・ミュータンス ＡＴＣＣ２
５１７５（血清型ｃ、以下、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣ
Ｃ２５１７５と記す）をＴＰＹ培地（トリプティケース
・ペプトン−フィトン−イースト抽出物培地）を用い
て、３７℃で培養して得た培養液上清に、硫酸アンモニ
ウムを６０％飽和となるように添加して得た硫安沈殿画
分を５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５；４℃）
に溶解し、同緩衝液に対して４℃で透析し、透析膜内液
を回収した。 （２）透析膜内液を上記緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−
セルロースカラムに通し、カラムを同緩衝液で洗浄後、
連続直線的イオン強度濃度勾配（０〜０．３Ｍ塩化ナト
リウム）をかけて蛋白質抗原ｃを含有する画分を得た。
同画分を硫酸アンモニウムで再度塩析して得た沈殿画分
を、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し、粗
蛋白質抗原ｃ画分とした。 （３）同画分を上記リン酸緩衝液で平衡化したセファロ
ース−６Ｂカラムを用いたゲルろ過を行い、精製蛋白質
抗原ｃ画分を得た。同画分を分子量３０，０００以上を
カットするフィルターを用いて濃縮し、凍結保存した。
更にその一部を精製水に対して透析した後、冷凍保存し
た。なお、上記精製工程における蛋白質抗原ｃの確認
は、メルカプトール存在下で熱変性させた試料をドデシ
ル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法
で分離し、１９０キロダルトンに相当する蛋白質抗原ｃ
バンドの存在を指標として行った。純度の検定も同様に
行った。

【００３８】２．マウスの免疫 （１）ＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌマウス（雄性、８週齢、
日本クレア株式会社）を用いた。１０ｍＭリン酸緩衝化
生理食塩水（ｐＨ７．４、以下、ＰＢＳと記す）を用い
て蛋白質抗原ｃ溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を調製し、同量の
Ｆｒｅｕｎｄの完全アジュバントとよく混和してエマル
ジョンを調製し、マウス腹腔内にエマルジョン０．２ｍ
ｌ（蛋白質抗原ｃとして１００μｇ）を投与した。 （２）初回免疫から２〜３週間後、Ｆｒｅｕｎｄの不完
全アジュバントを用いて同様に調製した蛋白質抗原ｃ含
有エマルジョン０．２ｍｌ（蛋白質抗原ｃとして１００
μｇ）を同様に投与した。 （３）更に、２〜３週間後、ＰＢＳを用いて蛋白質抗原
ｃ溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ）を調製し、その０．１ｍｌ
（蛋白質抗原ｃとして５０μｇ）をマウス尾静脈から投
与した。

【００３９】３．脾細胞調製（最終免疫から３日目） （１）マウスをエーテル麻酔下、眼窩静脈叢および心臓
から採血した後に瀉血し、無菌的に脾臓を摘出し、イス
コフ改変ダルベッコ培地（以下、ＩＭＤＭと記す）で数
回洗浄後、２０％ウシ胎児血清添加イスコフ改変ダルベ
ッコ培地（以下、ＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳと記す）中に
浸漬した。 （２）切開した脾臓を平ピンセットでつぶし、ステンレ
ススチール・メッシュ＃２００を通過させ、脾臓細胞懸
濁液を得た。 （３）トリパンブルー染色を行い、血球計算盤で生細胞
数を測定した。

【００４０】４．ミエローマ細胞の調製 ＢＡＬＢ／ｃマウス由来のミエローマ細胞であるＳｐ２
／０−Ａｇ１４細胞をＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳを用いて
炭酸ガス培養装置（３７℃、９５％空気＋５％ＣＯ₂）
内で培養した。細胞融合実施時、脾細胞と同様にして生
細胞数を測定した。

【００４１】５．細胞融合処理 （１）ミエローマ細胞懸濁液と脾細胞懸濁液を、生細胞
数比が１：５となるように混合し、４００×ｇで５分間
遠心分離して得た細胞塊をＩＭＤＭで再懸濁し、再度遠
心分離して細胞塊を得た。タッピングにより細胞塊を良
くほぐした。 （２）ポリエチレングリコール４０００溶液（５０ｗ／
ｗ％となるようにＩＭＤＭで溶解した溶液）１ｍｌを１
分間かけて滴下し、１分間良く混合した。 （３）１０ｍｌのＩＭＤＭを取り、１ｍｌを１分間、１
ｍｌを１分間、８ｍｌを３分間かけて滴下した後、同様
に遠心分離をし、細胞塊を回収した。 （４）ＨＡＴ選択培地（ＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳに、ヒ
ポキサンチン（Ｈ）、アミノプテリン（Ａ）、チミジン
（Ｔ）を各々、１００μＭ、０．４μＭ、１６μＭとな
るように添加した培養液）を脾細胞濃度が５×１０⁶個
／ｍｌとなるように添加し、細胞懸濁液を調製した。 （５）上記懸濁液を９６マルチウェルプレート（コーニ
ング ラボラトリー サイエンシーズ カンパニー：Ｃ
ＯＲＮＩＮＧ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２５８６０ＭＰ）に１ウェル当た
り０．１ｍｌ添加し、炭酸ガス培養装置で培養した。 （６）数日後、ＨＡＴ選択培地を適宜追加した。

【００４２】６．菌体結合プレートの調製 次の１５種類のストレプトコッカス属の菌を用いて菌体
結合プレートを調製した。Ｓ．ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５（血清型ｃ） Ｓ．ｍｕｔａｎｓ Ｉｎｇｂｒｉｔｔ （ 〃 ｃ） Ｓ．ｍｕｔａｎｓ ＭＴ７０３ （ 〃 ｅ） Ｓ．ｍｕｔａｎｓ ＯＭＺ１７５ （ 〃 ｆ） Ｓ．ｃｒｉｃｅｔｕｓ Ｅ４９ （ 〃 ａ） Ｓ．ｒａｔｔｕｓ ＡＴＣＣ１９６４５（ 〃 ｂ） Ｓ．ｆｅｒｕｓ ＡＴＣＣ３３４７７（ 〃 ｃ） Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ Ｂ１３ （ 〃 ｄ） Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ ＯＭＺ１７６ （ 〃 ｄ） Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ ６７１５ （ 〃 ｇ） Ｓ．ｄｏｗｎｅｉ ＡＴＣＣ３３７４８（ 〃 ｈ） Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ ＡＴＣＣ１０５５６ Ｓ．ｍｉｔｉｓ ＡＴＣＣ４９４５６ Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＡＴＣＣ７０７３ Ｓ．ｏｒａｌｉｓ ＡＴＣＣ３５０３７

【００４３】このうち、酵素抗体法によるクローン選択
には、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ Ｉｎｇｂｒｉｔｔ、Ｓ．ｍｕ
ｔａｎｓ ＭＴ７０３、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ ＯＭＺ１７
５、Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ Ｂ１３、Ｓ．ｓｏｂｒｉｎ
ｕｓ ６７１５、Ｓ．ｓａｎｇｕｉｓ ＡＴＣＣ１０５
５６、Ｓ．ｍｉｔｉｓ ＡＴＣＣ４９４５６、Ｓ．ｓａ
ｌｉｖａｒｉｕｓ ＡＴＣＣ７０７３、Ｓ．ｏｒａｌｉ
ｓ ＡＴＣＣ３５０３７の９種類を用いた。それ以外の
菌は、ハイブリドーマ樹立後のモノクローン抗体の特異
性検討にのみ用いた。 （１）３．７ｗ／ｖ％ブレイン ハート インフュージ
ョン（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ）培
地を用いて上記各菌を培養した後、遠心分離により菌体
を回収した。 （２）得られた菌体をＰＢＳ中に再懸濁した後、遠心分
離により菌体を回収した。この操作を３回繰り返して菌
体をＰＢＳ洗浄した後、ＰＢＳを用いて懸濁液を調製し
５５０ｎｍにおける吸光度（Ａ₅₅₀）を測定した。 （３）ＰＢＳを用いて５５０ｎｍにおける吸光度（Ａ
₅₅₀）が０．３となるような菌体懸濁液を調製した。血
液平板で生菌数を調べた結果、Ａ₅₅₀が０．３の各菌体
懸濁液は約１×１０⁹ｃｆｕ／ｍｌ（ｃｏｌｏｎｙ ｆ
ｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ／ｍｌ）に相当した。 （４）上記懸濁液を酵素抗体法用９６マルチウェルプレ
ート（コーニング コースター コーポレーション：Ｃ
ｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ，３５９０）に１ウェル当たり０．１ｍｌ添加し、４
℃で１週間静置した。 （５）ウェル表面が菌体で飽和されていることを確認し
た後にウェルの内容物を捨て、０．０５ｗ／ｖ％ツィー
ン２０（Ｔｗｅｅｎ２０）を添加したＰＢＳ（以下、洗
浄液と記す）で３回洗浄した。続いて、１ｗ／ｖ％ウシ
血清アルブミンを添加したＰＢＳでウェルを満たし、３
７℃で１時間放置してブロッキング処理を行った。ブロ
ッキング処理後のプレートは使用時まで４℃で保存し
た。７．酵素抗体法によるクローン選択 上記５．の細胞融合後、肉眼で細胞のコロニーが確認で
きたウェルについて以下の酵素抗体法を実施し、ストレ
プトコッカス・ミュータンスに対するモノクローン抗体
の存否を確認した。 （１）培養上清５０μｌを無菌的に採取し、０．１ｗ／
ｖ％ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳ（以下、希釈
液と記す）５００μｌが入っているチューブに添加して
希釈した。希釈培養上清を上記６．の９種類の各菌体結
合プレートに１ウェル当たり５０μｌ添加し、ラップを
して３７℃で１〜２時間反応させ、洗浄液で３回洗浄し
た。 （２）希釈液で１０００倍に希釈した抗マウスＩｇＧ＋
Ａ＋Ｍ（Ｈ＋Ｌ）ウサギＦ（ａｂ’）₂−アルカリ性ホ
スファターゼ標識（ザイメッド ラボラトリーズイン
ク：ＺＹＭＥＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ，ＩＮ
Ｃ．，６１−６３２２）溶液５０μｌを添加し、同様に
１時間反応させた後に洗浄した。 （３）基質溶液（０．５ｍＭ塩化マグネシウムを添加し
た１Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）中にｐ
−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム六水和物を１ｍｇ
／ｍｌとなるように溶解した溶液）１００μｌを添加
し、室温で２０分〜１時間静置した後、４０５ｎｍにお
ける吸光度を測定した。 （４）ストレプトコッカス・ミュータンス（血清型ｃ／
ｅ／ｆ）とのみ反応して発色した試料を陽性とした。陽
性ウェルの中で特に吸光度の大きいウェルから細胞を回
収し限界希釈法によるクローニングを実施した。直ちに
限界希釈法を行わない場合は、ＨＡＴ選択培地からアミ
ノプテリンのみを除いた組成の培地（以下、ＨＴ培地と
記す）をウェル当たり１滴ずつ（５０〜６０μｌ相当）
添加した。 ８．限界希釈法によるクローニング （１）７．の酵素抗体法で陽性となったウェルから細胞
を培養上清とともに回収し、細胞懸濁液中の生細胞数を
測定した。 （２）細胞を段階的に希釈し、１０細胞／ｍｌ相当の細
胞懸濁液を調製した。この懸濁液はＨＴ培地にエンドセ
リアル セル グロース サプルメント：Ｅｎｄｏｔｈ
ｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｌｅｍ
ｅｎｔ（シグマケミカル カンパニー：ＳＩＧＭＡ Ｃ
ＨＥＭＩＣＡＬ ＣＯＭＰＡＮＹ，Ｅ−２７５９）を５
０μｇ／ｍｌとなるように添加したものを用いて調製し
た。 （２）９６マルチウェルプレートに細胞懸濁液を０．１
ｍｌ／ウェル（１細胞／ウェルに相当）となるように分
注し、同様に培養した。以後、ＨＴ培地を適宜追加し
た。 （３）単一コロニーが出現したウェルの培養上清を採取
し、上記７．の酵素抗体法と同様にしてクローン選択を
行った。 （４）酵素抗体法で陽性であることを確認したウェルの
細胞について、限界希釈法を合計で連続３回繰り返し
た。３回目の限界希釈法を実施後に、陽性出現率が高い
ことを確認できたハイブリドーマについては、クローン
を樹立したと判断した。９．細胞株の保存 （１）樹立した細胞をそれぞれ、２４マルチウェルプレ
ート（ＨＴ培地１ｍｌ／ウェル）で増殖後、６マルチウ
ェルプレート（ＨＴ培地４ｍｌ／ウェル）で増殖させ、
培養上清の反応性を上記７．と同様の酵素抗体法で確認
した。この培養上清を凍結保存し、反応特異性の解析実
験に使用した。 （２）１０ｖ／ｖ％ジメチルスルフォキシドを含有する
ウシ胎児血清を用いて調製した細胞懸濁液を凍結保存用
アンプルに分注し、−１００℃まで緩やかに冷却した
後、液体窒素中で保存した。１０．反応特異性の解析（酵素抗体法） （１）ハイブリドーマの培養上清（基本組成はＨＴ培
地）を希釈液を用いて、２倍段階希釈を行い、２〜１０
２４倍（２^-1〜２^-10）希釈液を調製した。 （２）２倍段階希釈した各培養上清を上記６．の１５種
類の各菌体結合プレートの１ウェル当たり１００μｌ添
加し、ラップをして３７℃で１〜２時間反応させ、洗浄
液で３回洗浄した。対照として希釈液１００μｌを添加
し、以下同様に操作した。 （３）希釈液で１０００倍に希釈した抗マウスＩｇＧ＋
Ａ＋Ｍ（Ｈ＋Ｌ）ウサギＦ（ａｂ’）₂−アルカリ性ホ
スファターゼ標識（ザイメッド ラボラトリーズイン
ク：ＺＹＭＥＤ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ，ＩＮ
Ｃ．，６１−６３２２）１００μｌを添加し、同様に１
時間反応させた後に洗浄した。 （４）基質溶液（０．５ｍＭ塩化マグネシウムを添加し
た１Ｍジエタノールアミン緩衝液（ｐＨ９．８）中にｐ
−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム六水和物を１ｍｇ
／ｍｌとなるように溶解した溶液）を添加し、室温で１
時間放置後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。 （５）対照として用いた希釈液を添加したウェルの吸光
度をバックグラウンドと考え、各々測定した吸光度から
対照の吸光度を引いたものをネットの発色としてデータ
を処理した。 （６）この結果、目的とする反応特異性を満足するモノ
クローン抗体として、ハイブリドーマＨ０１１７が産生
するモノクローン抗体ＭＡｂ０１１７と、同じく、ハイ
ブリドーマＨ０６１１が産生するモノクローン抗体ＭＡ
ｂ０６１１を得た。

【００４４】なお、ストレプトコッカス・ミュータンス
（血清型ｃ／ｅ／ｆ）との反応の程度がより揃っている
ＭＡｂ０１１７の方が、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスの検出により適しているとの結果を得た。モノクロ
ーン抗体ＭＡｂ０１１７のストレプトコッカス属の菌と
の抗原抗体反応の容量−作用曲線を図１に示した。

【００４５】図１の横軸は、ハイブリドーマＨ０１１７
培養上清の希釈率（２^-10＝１０２４倍希釈が最低濃
度、２^-1＝２倍希釈が最高濃度）を示し、縦軸は、抗原
抗体反応の反応性を吸光度で示した。なお、吸光度のデ
ータはＳ．ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５（ストレ
プトコッカス・ミュータンスのタイプ ストレイン）に
対する２倍希釈培養上清の吸光度を１とした場合の各吸
光度を、相対比で表示した。この場合、相対比１は吸光
度１．３に相当する。

【００４６】図１の結果から、モノクローン抗体ＭＡｂ
０１１７は、ストレプトコッカス・ミュータンス（血清
型ｃ／ｅ／ｆ）に対し、６４（＝２^-6）倍希釈より高濃
度の場合、反応すべき全エピトープにモノクローン抗体
ＭＡｂ０１１７が結合して吸光度がプラトーとなってい
ることがわかった。この時、他のストレプトコッカス属
の菌に対する吸光度はバックグラウンドに相当する０を
示し、モノクローン抗体ＭＡｂ０１１７は他のストレプ
トコッカス属の菌と全く反応しないことが確認できた。１１．ＭＡｂ０１１７、ＭＡｂ０６１１のアイソタイピ
ング ハイブリドーマＨ０１１７、Ｈ０６１１の培養上清を検
体として、モノクローン抗体ＭＡｂ０１１７、ＭＡｂ０
６１１のアイソタイピングをマウスモノクローナル抗体
アイソタイピングキット（ギブコ ビー・アール・エ
ル：ＧＩＢＣＯＢＲＬ，１０１２６−０２７）を用いて
行った結果、ともにクラスはＩｇＧ₁、Ｌ鎖のタイプは
κであった。１２．ハイブリドーマの寄託 ハイブリドーマＨ０１１７は、工業技術院生命工学工業
技術研究所、特許微生物寄託センターにＭｏｕｓｅ−Ｍ
ｏｕｓｅ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｈ０１１７、受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１５６５９として寄託されている。

【００４７】［実施例２］モノクローン抗体の精製１．抗原結合アフィニティーカラムの調製 実施例１で調製した精製蛋白質抗原ｃとＣＮＢｒ−ａｃ
ｔｉｖａｔｅｄ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ（ファルマ
シア バイオテク株式会社，１７−０４３０−０１）を
用い、添付のマニュアル（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ＆ ｍ
ｅｔｈｏｄｓ）に従い、蛋白質抗原ｃ結合アフィニティ
ーカラムを調製した。

【００４８】２．マウス腹腔内でのＨ０１１７の培養、
腹水の採取 （１）ＢＡＬＢ／ｃＡ Ｊｃｌマウス（雄性、８週齢、
日本クレア株式会社）に２，６，１０，１４−テトラメ
チルペンタデカンをマウス１匹当たり０．５ｍｌ腹腔内
に投与した。 （２）３〜４週間後、ＩＭＤＭ＋２０％ＦＢＳで培養し
たハイブリドーマＨ０１１７をＰＢＳで３回洗浄し、Ｐ
ＢＳを用いて生細胞数が２×１０⁷個／ｍｌとなるよう
な細胞懸濁液を調製した。マウス１匹当たり０．５ｍｌ
の細胞懸濁液を腹腔内に投与した。 （３）腹水の貯留が認められたマウスから、経時的に腹
水を採取した。 （４）腹水に同量のＰＢＳを添加し、１０００×ｇ，２
０分間遠心分離を行い、上清を回収した。上清は直ちに
蛋白質抗原ｃ結合アフィニティーカラムによるモノクロ
ーン抗体の精製に使用した。精製が直ちにできない場合
は−２０℃で精製操作まで保存した。

【００４９】３．精製モノクローン抗体の調製 （１）腹水の上清画分を蛋白質抗原ｃ結合アフィニティ
ーカラムに通した。 （２）同カラムをＰＢＳで十分に洗浄した。 （３）０．１Ｍグリシン塩酸緩衝液（ｐＨ２．７）でモ
ノクローン抗体を溶出させた。溶出後、直ちに１／１０
容量の１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．４）で中和し、
各溶出画分の２８０ｎｍにおける吸光度（Ａ₂₈₀）を測
定した。 （４）回収したモノクローン抗体画分を４℃でＰＢＳに
対して透析し、透析膜内液をセントリカットＵ−５０
（倉敷紡績株式会社）で濃縮し、モノクローン抗体溶液
を調製した。 （５）モノクローン抗体の濃度が１０ｍｇ／ｍｌとなる
ようにＰＢＳで希釈した。なお、モノクローン抗体の濃
度は、１％溶液のＡ₂₈₀を１４として換算した。

【００５０】モノクローン抗体ＭＡｂ０６１１を産生す
るハイブリドーマＨ０６１１についても上記Ｈ０１１７
と同様に操作し、精製モノクローン抗体ＭＡｂ０６１１
を得た。

【００５１】［実施例３］標識抗体１．Ｆａｂの調製 Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ Ｆａｂ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏ
ｎ Ｋｉｔ（ピアスケミカル カンパニー：Ｐｉｅｒｃ
ｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，４４８８５）
を用いてモノクローン抗体ＭＡｂ０１１７のＦａｂを調
製した。

【００５２】２．酵素標識化 Ｉｍｍｕｎｏｐｕｒｅ Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ Ａｌｋａ
ｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔ
ｉｏｎ Ｋｉｔ（ピアス ケミカル カンパニー，３１
４９２）を用いて、アルカリホスファターゼ標識化Ｆａ
ｂを調製した。０．１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン添加
ＰＢＳを用いて、Ｆａｂとして１０μｇ／ｍｌとなるよ
うに調製した。

【００５３】［実施例４］診断用キット 下記内容からなるストレプトコッカス・ミュータンスの
検出キットを作成した。１．パラフィンペレット ２．プラスチックカップ ３．プラスチックスポイト ４．免疫反応用チューブ モノクローン抗体ＭＡｂ０６１１をコーティングしたチ
ューブ ＰＢＳを用いて、モノクローン抗体ＭＡｂ０６１１（Ｉ
ｇＧとして１０μｇ／ｍｌ）を調製し、ポリスチレン製
チューブの表面にモノクローン抗体ＭＡｂ０６１１を吸
着させた後、ウシ血清アルブミンでブロッキング処理
し、０．１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミン添加ＰＢＳで満
たしたもの。５．標識抗体溶液 実施例３で調製したもの６．基質 ｐ−ニトロフェニルリン酸二ナトリウム六水和物５６ｍ
ｇ７．基質溶解液 １ｍＭ塩化マグネシウムを含む１Ｍジエタノールアミン
緩衝液（ｐＨ９．８） ８．陽性対照 所定のｃｆｕに相当するＳ．ｍｕｔａｎｓ懸濁液 １×１０⁴ｃｆｕ／ｍｌ、１×１０⁶ｃｆｕ／ｍｌ、１×
１０⁸ｃｆｕ／ｍｌ９．洗浄液 ＰＢＳで調製した０．０５ｗ／ｖ％ポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレート溶液１０．反応停止液 ２Ｎ水酸化ナトリウム 上記キットの具体的な取扱い方法を以下に説明する（唾
液が検体の場合）。 １）測定に先立って、下記の試薬を調製する。基質に基
質溶解液１０ｍｌを添加、溶解させ、基質溶液とする。 ２）パラフィンペレットを５分間噛んだ後、唾液をプラ
スチックカップに取る。 ３）プラスチックスポイトで唾液を０．５ｍｌ取り、免
疫反応用チューブの底の部分に５滴落とし、１０分間放
置する。 ４）洗浄液で免疫反応用チューブを３回洗浄する。 ５）免疫反応用チューブに標識抗体溶液を５滴加え、１
０分間放置した後、同様に洗浄する。 ６）基質溶液を１０滴加え、よく混ぜてからそのまま放
置し、発色の程度を観察する。 ７）陽性対照に発色を認めたら反応停止液を１滴加え
る。 ８）陽性対照及び検体の発色の程度を比較し、検体中の
Ｓ．ｍｕｔａｎｓ濃度を判定する。

【００５４】 〔実施例５〕歯磨 プロピレングリコール ３．０ カルボキシメチルセルロース １．５ メチルパラベン ０．２ ブチルパラベン ０．０２ 安息香酸ナトリウム ０．１ ６０％ソルビトール液 ３０．０ サッカリンナトリウム ０．２ モノフルオロリン酸ナトリウム ０．７６ カゼイン ０．５ ショ糖モノラウリン酸エステル １．５ ラウリル硫酸ナトリウム ０．１ 香料 １．０ 色素 ０．０１ 水酸化アルミニウム ４５．０ ＭＡｂ０１１７（ＩｇＧとして１０ｍｇ／ｍｌ） ０．５精製水 残 合 計 １００ 重量部

【００５５】 〔実施例６〕洗口剤 ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油 ２．０ カラギーナン ０．０１ リン酸二ナトリウム １．３ クエン酸 ０．９ サッカリンナトリウム ０．２ フッ化ナトリウム ０．０４２ ゼラチン ２．０ ６０％ソルビトール液 １５．０ 香料 １．０ 色素 ０．０１ ＭＡｂ０１１７（ＩｇＧとして１０ｍｇ／ｍｌ） ０．０１精製水 残 合 計 １００ 重量部

【００５６】

【発明の効果】以上に説明したとおり、本発明のモノク
ローン抗体は、極めて高い反応特異性を有しており、口
腔内のう蝕原性細菌であるストレプトコッカス・ミュー
タンスを他のストレプトコッカス属の近縁種と区別して
認識できるので、ストレプトコッカス・ミュータンスの
特異的検出とその排除が可能となる。このことはう蝕発
生の予防、治療に対して有効な手段を提供し、口腔衛生
の増進に寄与し得るものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のモノクローン抗体ＭＡｂ０１１７とス
トレプトコッカス属の菌との抗原抗体反応の容量−作用
曲線を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/577 9282−4Ｂ 15/00 Ｃ //(Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗原抗体反応の容量−作用曲線がプラト
   ーとなるような抗体過剰域でストレプトコッカス・ミュ
   ータンス（血清型ｃ／ｅ／ｆ）と特異的に反応して、他
   のストレプトコッカス属菌であるストレプトコッカス・
   ミティス、ストレプトコッカス・サリバリウス、及びス
   トレプトコッカス・サンギスと反応しないことを特徴と
   するモノクローン抗体。
2. 【請求項２】 請求項１記載のモノクローン抗体を産生
   する細胞。
3. 【請求項３】 請求項１記載のモノクローン抗体を含有
   してなる口腔用組成物。
4. 【請求項４】 請求項１記載のモノクローン抗体を含有
   してなる診断・研究用基剤。