JPH10237099A

JPH10237099A - 糖脂質糖鎖レプリカペプチド

Info

Publication number: JPH10237099A
Application number: JP4231197A
Authority: JP
Inventors: Takao Taki; 孝雄瀧; Masaru Ishikawa; 大石川
Original assignee: IMMUNO JAPAN KK
Current assignee: IMMUNO JAPAN KK
Priority date: 1997-02-26
Filing date: 1997-02-26
Publication date: 1998-09-08

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明は、糖鎖をもつ糖脂質のうち、シアル
酸を含むスフィンゴ糖脂質であるガングリオシドの一
つ、ＧＤ１αに対する抗体と特異的に反応するペプチド
ペプチドを提供する。【解決手段】本発明のペプチドは、以下のアミノ酸配
列： Phe Arg Ser Asp Val Arg Phe Trp His Trp Ser Thr Pr
o Phe Met； Val Arg Val Tyr Phe Gly Phe Gly Pro Pro Pro Tyr Ph
e Gly Gly； Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Al
a Gly Arg； Arg Tyr Trp Leu Tyr Gly Asp Pro Ala Ser Phe Pro Va
l Asn His；および Ala Arg Lys Tyr Gly Thr Arg Phe Gly Leu Ile Gly Gl
y Tyr Arg；を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、糖鎖をもつ糖脂質
のうち、シアル酸を含むスフィンゴ糖脂質であるガング
リオシドの一つ、ＧＤ１αに対する抗体と特異的に反応
するペプチド及びその製造方法に関する。一つの態様に
おいて、本発明のペプチドを生物学的活性因子の受容体
分子と結合させることによって、対象となる生物学的活
性を仲介することができるリガンドを同定したり、その
特性を決定することが可能である。また、本発明は、転
移癌細胞の標的細胞への接着を妨げて癌の転移を抑制す
る医薬組成物およびその製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、糖鎖が細胞分化や細胞増殖調節等
において、生物学的に重要な役割を果たすとして注目さ
れている。しかしながら、糖鎖を化学合成するには特殊
な技術および経験を要する（Hasegawa，A．et al.，199
0，J．Carbohydr．Chem.，9，181-189；Hasegawa，A．e
t al.，1992，J．Carbohydr．Chem.，11，319-331）。
よって、糖鎖の生物学的機能を決定するためには、生理
活性物質を単離精製しなければならず、多量の原料及び
煩雑な操作が必要である。その原料を獲得するために一
般的に用いられている方法としては、生体から対象物質
を精製する方法があるが、生体から多量の生理活性物質
を調製することは困難である。一方、通常の蛋白質の場
合、発現系ベクターにｃＤＮＡを組込み、発現させる方
法が用いられるが、糖鎖を含む物質の場合には糖鎖を天
然の生理活性物質と同じ構造に発現させることは難し
い。

【０００３】例えば、大腸菌（E．coli）の外膜蛋白質
LamBに遺伝子挿入することにより約60個までのアミノ酸
残基を有するハイブリッド蛋白質を提供することができ
（Charbit A., Molla A., Saurin W., and Hofnung,
M．1988, Gene, 70：181）、このような構造体は生ワク
チンとして利用されている。しかしながら、大腸菌を宿
主として用いるこの方法では、糖鎖構造を発現させるこ
とは不可能である。

【０００４】蛋白質生物活性分子、及び低分子量分子の
同定、及び機能を明らかにするために現在用いられてい
る手法は、その対象物質に関する多大な知識を必要とす
る。従って、生物活性分子の同定を促進し、実用的な薬
剤を提供するために広い用途を有するその他の方法が熱
望されている。

【０００５】このような状況下において、「エピトープ
ライブラリー」がランダムなペプチドをコードする合成
ＤＮＡを繊維状ファージベクターの中にクローン化する
ことにより所望のペプチドを生成する方法が提案された
（Parmley，S．F．and Smith，G．P. 1988, Gene, 73：
305-318）。該方法によれば、合成ＤＮＡをコート蛋白
質であるｐIIIの遺伝子の中にクローン化すると、コー
ドされたペプチドはｐIIIの機能に有意に干渉すること
なく、ｐIIIの一部となる可能性がある。また、組換え
バクテリオファージを使用した「ファージ法」(Scott，
J．K．and Smith，G．P．1990，Science 249，386-390,
Cwirla，S．E．et al.，1990，Proc．Natl．Acad．Sc
i．USA，87，6378-6382, Devlin，J．J．et al.，199
0，Science，249，404-406)を使用して、非常に大きな
ペプチドライブラリーを構築できることが報告されてい
る。該方法においては種々のベクターが用いられうる。
合成ＤＮＡは好ましくはウイルスベクターに、より好ま
しくはバクテリオファージベクターにクローニングす
る。コードされたペプチドを発現するために好ましいベ
クターは例えばλｇｔシリーズ及び繊維状バクテリオフ
ァージベクター、特に好ましくはＭ１３もしくはｆｄで
ある。このようなランダムペプチドを発現するファージ
は、抗体により認識されるエピトープを同定する手法お
よびライブラリーから抗体を用いてファージの精製を行
う手法を提供しうる（Parmley，S．F．and Smith，G．
P. 1988, Gene, 73：305-318）。しかしながら、現在ま
でに、この手法を用いることにより有用な生物学的活性
分子を提供したという報告はない。

【０００６】また、生物学的活性分子を同定するための
組成物及びその製造法として、ランダムペプチドのライ
ブラリーの使用が開示されている（特表平５−507700
号）。該文献には、繊維状ファージの表層上でペプチド
を発現させ、10¹⁴種以上のランダムペプチドライブラリ
ーを作製する方法及び発現させた該ランダムペプチド配
列を含む蛋白質が記載されている。しかしながら、糖脂
質糖鎖の機能解明に役立つ物質に関しては、何ら記載さ
れていない。

【０００７】糖鎖の生理学的機能を研究するために、そ
の構造に類似したペプチド（レプリカペプチド）を構築
し、糖鎖の代用として研究に用いることが有用な方法の
１つに挙げられる。このようなレプリカペプチドの配列
は、繊維状ファージディスプレイライブラリーからバイ
オパンニングにより（Parmley，S．F．and Smith，G．
P.，1988，Gene，73，305-318）抗体と反応したクロー
ンのＤＮＡを抽出し、ヌクレオチド配列決定並びにアミ
ノ酸配列の推定により得ることができる。また、このよ
うにして得られた配列の一部を変更して、抗体と親和性
の高いペプチドを見いだすことも可能である。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】糖鎖糖脂質の一つであ
るＧＤ１αは、癌細胞が肝細胞に転移する際に癌細胞中
で増加しており、その糖鎖構造が細胞表面にも発現して
いることから、転移の接着分子として機能していること
が予測されている。従って、標的細胞において癌細胞と
結合する結合部位に予め他の物質を結合させることによ
り、癌細胞の転移を防ぐことができる。しかし、標的細
胞上の結合部位に選択的に結合する物質はこれまでのと
ころ見いだされていない。

【０００９】

【課題を解決する手段】本発明は、糖脂質糖鎖に対する
抗体と特異的に反応し、グリコシダーゼの活性を調節す
るペプチドに関する。より特定すれば、本発明は、シア
ル酸を含むスフィンゴ糖脂質であるガングリオシドの一
つ、ＧＤ１αに対する抗体と特異的に反応し、癌細胞が
標的細胞に接着および／または転移するのを阻害するペ
プチドに関する。

【００１０】本発明者らは、大腸菌の繊維状ファージの
ｐIIIにアミノ酸をランダムに発現させたファージディ
スプレイペプチドライブラリー（Scott，J．K．and Smi
th，G．P.，1990，Science，249，386-390）から、糖脂
質に対する抗体と反応するペプチドを有するファージを
選別し、得られたファージの特定の部位のペプチドのア
ミノ酸配列を決定することにより、本発明を完成した。

【００１１】本発明によれば、以下のアミノ酸配列： Phe Arg Ser Asp Val Arg Phe Trp His Trp Ser Thr Pr
o Phe Met（配列番号１）； Val Arg Val Tyr Phe Gly Phe Gly Pro Pro Pro Tyr Ph
e Gly Gly（配列番号２）； Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Al
a Gly Arg（配列番号３）； Arg Tyr Trp Leu Tyr Gly Asp Pro Ala Ser Phe Pro Va
l Asn His（配列番号４）；および Ala Arg Lys Tyr Gly Thr Arg Phe Gly Leu Ile Gly Gl
y Tyr Arg（配列番号５）；を有するペプチドが提供される。

【００１２】本発明者らは、本発明のペプチドが模倣し
た糖脂質は転移性癌細胞において発現しており、その糖
鎖構造は癌細胞が肝臓の標的細胞に接着する際に接着分
子として機能していることを明らかにした（Taki，T．e
t al．（投稿中））。また、本発明のペプチドが模倣し
た糖脂質は、神経機能や細胞の相互識別、分化、増殖、
老化等にも関与すると予測され、各種ホルモン等の受容
体機能も注目されている。本発明のペプチドは、糖脂質
の糖鎖構造を模倣したペプチドであり、患者に投与して
予め標的細胞の癌細胞に対する結合部位をマスクするこ
とにより、癌の転移を阻害することができ、即ち、癌の
転移を予防して治療効果を高めることができる。

【００１３】一つの態様として、本発明の配列番号１〜
５のペプチドに加えて、薬効成分を有する別のペプチド
または蛋白質を共有結合させた、一本のポリペプチド鎖
からなる医薬組成物を提供する。また、本発明のペプチ
ドのＮ末端および／またはＣ末端に、ペプチドの生物学
的活性を阻害せず且つ毒性を示さないような不活性な配
列を連結して、ポリペプチドまたは蛋白質として用いる
ことができる。当業者には理解されるとおり、そのよう
な不活性配列の付加はペプチドに安定性をもたらしう
る。

【００１４】別の態様において、本発明のペプチドを生
物学的活性因子の受容体分子と結合させることにより、
対象となる生物学的活性を仲介することができるリガン
ドを同定したり、その特性を決定することが可能であ
る。また、本発明のペプチドは、そのリガンドと結合す
る性質を利用して、医薬品を特定の部位に選択的に送達
するための医薬組成物及びその製造方法に関する。

【００１５】医薬組成物は、あらゆる投与法、例えば、
経口投与および注射等の投与経路により用いることがで
き、その剤型としては錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロ
ップ、注射剤等が挙げられるがこれらに限定されない。

【００１６】本発明のペプチドは、化学合成、または遺
伝子工学的手法を用いた微生物及び細胞等における発現
などにより製造することができる。化学合成は、例えば
固相合成法のような一般に用いられているペプチド合成
方法で行うことができ、そして、遺伝子工学的手法とし
ては、メッセンジャーRNAから逆転写酵素を用いて目的
のアミノ酸配列をコードするcDNAを合成して発現ベクタ
ーに組み込み、適当な宿主細胞、例えば大腸菌等に遺伝
子を挿入して発現させる方法がある。また、本発明のペ
プチドのアミノ酸配列において、１またはそれ以上のア
ミノ酸を付加、欠失または置換することにより、医薬の
用途においてより適したペプチドをもたらしうる。その
ような例としては、ペプチドの安定化、副作用の軽減等
が挙げられる。そのような目的には、オリゴヌクレオチ
ドを用いた部位特異的変異導入（Zoller，M．et al.，1
982，Nucl．Acids Res.，10，6487-6500）およびカセッ
ト変異誘発（Wells，J．et al.，1985，Gene，34，315-
323）等を使用することができるが、これらに限定され
ない。

【００１７】本明細書において用いられるポリペプチド
なる用語は、アミノ酸数約10〜約100のペプチドを意味
し、また蛋白質なる用語は、アミノ酸数約100以上のペ
プチドを意味し、糖鎖その他を有する複合蛋白質である
場合もある。

【００１８】

【実施例】本発明は以下の実施例により詳細に説明され
る。これらの実施例は、本発明を例示するためのもので
あり、記載された特定の態様に本発明を限定するための
ものではない。

【００１９】

【実施例１】GD1αのレプリカペプチドを含有するファージの選別 GD1αを認識するモノクローナル抗体を、Hirabayashi，
Y．et al.，1992，J．Biol．Chem.，267，12973-1297
8；Kohler，G．and Milstein，C．1975，Nature，256，
495-497の記載に従い製造し（マウスIgM型）、アビジン
化した。ストレプトアビジンを固相化したプラスチック
プレートにアビジン化したモノクローナル抗体を結合さ
せて、GD1αのモノクローナル抗体の固相化プレートを
作製した。このプレートにファージディスプレイペプチ
ドライブラリー（Scott，J．K．and Smith，G．P.，199
0，Science，249，386-390）溶液を100μl入れ、４℃で
一晩反応させた。ファージは、大腸菌繊維状ファージＭ
１３を用いた。プレートを0.5Mトリス緩衝液(pH7.5)(TB
S)で洗浄した後、0.1Mグリシン緩衝液(pH2.2)を入れて
室温で10分間静置して、抗体と結合したファージを回収
し、1Mトリス緩衝液（pH9.1）を添加し、ファージ液を
中性に戻した。セントリコン TM30（アミコン製）でフ
ァージ液を濃縮して、液量を50〜100μlとした。尚、抗
体のアビジン化およびアビジン化抗体への固相への結合
は、Oldenburg，K．R．et al.，1992，Proc．Natl．Aca
d．Sci．USA，189，5393-5397に記載されるとおりに行
った（以下の実施例も同様）。

【００２０】

【実施例２】GD1αレプリカペプチドを有するファージライブラリー
の調製ＴＢ培地（1.2％バクト−トリプトン（Bacto-trypton
e）、2.4％酵母抽出物、0.4％グリセロール、0.17M リ
ン酸二水素カリウム、0.72M リン酸一水素カリウム）中
で37℃において３時間培養した後、室温に30分静置した
大腸菌（K91-Kan（Parmley，S．F．and Smith，G．P.，
1988，Gene，73，305-318））を実施例１で得られたフ
ァージ液に滴下し、15分間感染させた。その後、予め37
℃に温めたＮＺＹ培地（１％ＮＺアミンＡ、0.5％酵母
抽出物）20mlに感染させた大腸菌液を加え、37℃で30分
間振とう培養した後、テトラサイクリン20μlを添加し
て一晩振とう培養した。その後、増殖したファージをPE
G沈殿法を用いて回収した。再び先に述べたモノクロー
ナル抗体プレートと反応させた。バイオパンニングを３
回繰り返して、GD1αのモノクローナル抗体と反応する
ファージライブラリーを得た。

【００２１】

【実施例３】ファージクローン液の調製実施例２で得られたファージを、大腸菌（K91-Kan）に
感染増殖させ、PEG沈殿法を用いてファージを回収し
た。ファージの希釈液をＮＺＹ寒天培地に塗布して培養
し、生育したうちの１コロニーを新たなＮＺＹ培地に植
菌して増殖させて、ファージクローン液を得た。

【００２２】

【実施例４】GD1αレプリカペプチドの配列の決定実施例３で得られたファージクローン液から実施例２と
同様にファージを回収し、0.15M 塩化ナトリウム水溶液
630mlに溶解した。フェノール抽出法により10μgのDNA
を抽出した。DNAシークエンサー（Applied Biosystems
373A）を用いて、得られた任意の５クローンのDNAの塩
基配列を決定してアミノ酸配列を推定したところ、それ
ぞれ以下： Phe Arg Ser Asp Val Arg Phe Trp His Trp Ser Thr Pr
o Phe Met（配列番号１）； Val Arg Val Tyr Phe Gly Phe Gly Pro Pro Pro Tyr Ph
e Gly Gly（配列番号２）； Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Al
a Gly Arg（配列番号３）； Arg Tyr Trp Leu Tyr Gly Asp Pro Ala Ser Phe Pro Va
l Asn His（配列番号４）；および Ala Arg Lys Tyr Gly Thr Arg Phe Gly Leu Ile Gly Gl
y Tyr Arg（配列番号５）；の配列を有した。

【００２３】

【実施例５】配列番号１、配列番号２、配列番号３およ
び配列番号４のアミノ酸配列を有するペプチドを固相合
成法で化学合成し（泉屋信夫ら、合成ペプチドの基礎と
実験、1985年（丸善）を参照されたい）、それぞれ25mg
ずつのペプチドを得た。それぞれを、＃ＧＤ０１，＃Ｇ
Ｄ０２，＃ＧＤ０３および＃ＧＤ０４と命名した。

【００２４】

【実施例６】実施例３で得られたGD1αレプリカペプチ
ド＃ＧＤ０１，＃ＧＤ０２，＃ＧＤ０３および＃ＧＤ０
４を発現したファージクローン液を、実施例１で用いた
GD1αのモノクローナル抗体の固相化プレートにそれぞ
れ100μlずつ入れ、ファージと抗体を４℃で一晩反応さ
せた。ファージ液を除去後、結合したファージの量を一
次抗体として抗ファージ抗体、二次抗体としてペルオキ
シダーゼ標識抗体を用いたELISA法で測定した（Engval
l，E.，et al.，1971，Immunochemistry，8，871-87
4）。その結果、図１に示すとおり、ファージクローン
は固相化したGD1αのモノクローナル抗体と強い結合を
示した。

【００２５】

【実施例７】実施例３で得られたGD1αレプリカペプチ
ド＃ＧＤ０１を発現したファージクローン液を、実施例
１で用いたGD1αのモノクローナル抗体と4℃で一晩反応
させた。対照として、GD1αのモノクローナル抗体のみ
を４℃に一晩おいた。１μg/mlのGD1α溶液をシリカゲ
ル薄層クロマトプレートにプロットし、0.08％ポリイソ
ブチルメタクリレートのヘキサン溶液にプレートを30秒
間浸した。ドライヤーで乾燥させた後、ファージクロー
ンとモノクローナル抗体の反応液または対照となるモノ
クローナル抗体を反応させ、室温に60分静置した。PBS
でプレートを洗浄し、ペルオキシダーゼ標識２次抗体反
応液を反応させた。再度、PBSで洗浄し、コニカイムノ
ステイン（コニカ製）で染色したところ、図２に示すと
おり、予めファージと反応させたモノクローナル抗体を
入れた場合には発色せず、対照は発色したことから、抗
原であるGD1αに対する抗体の結合がファージの添加に
より阻害されたことが確認された。

【００２６】

【実施例８】マウス肝類洞内皮細胞（HSE細胞）株を予
め無血清培地中で培養したものに、実施例３のGD1αレ
プリカペプチド＃ＧＤ０１を発現したファージクローン
液１mlを加え、37℃で30分間反応させた。その結果、フ
ァージクローンはHSE細胞と結合し、該ペプチドを発現
したファージクローンが癌細胞の標的細胞であるHSE細
胞と接着することが確認された。

【００２７】

【実施例９】肝臓に高転移性のマウス悪性リンパ種の一
種であるH10細胞株（1×10⁵細胞）を100μlの無血清培
地に懸濁し、実施例３のGD1αレプリカペプチド＃ＧＤ
０１を発現したファージクローン液を添加した。対照は
該ファージクローン液を添加しないものとした。これを
HSE細胞株液を入れたプレートのウェルに添加し、37℃
で60分静置した。PBSで３回洗浄後、接着したH10細胞を
顕微鏡で観察したところ、ファージクローン液を入れた
場合のみ接着が阻害され、該ペプチドを発現したファー
ジクローンが癌細胞の転移を抑制した。

【００２８】

【実施例１０】実施例５のペプチド＃ＧＤ０１を、それ
ぞれ８μg/mlの濃度になるようにメタノールに溶解し、
段階希釈してシリカゲル薄層クロマトプレートにプロッ
トした。0.08%ポリイソブチルメタクリレートのヘキサ
ン溶液にプレートを30秒間浸し、ドライヤーで乾燥させ
た後、１μg/mlのGD1αのモノクローナル抗体溶液（1%B
SAを含むPBS）と反応させ、室温に60分間静置した。プ
レートをPBSで洗浄後、２次抗体（ペルオキシダーゼ標
識抗マウスIgM抗体）を反応させた。再度、PBSで洗浄
し、コニカイムノステインで染色したところ、ペプチド
濃度依存的に反応し、本発明の合成ペプチドがGD1αの
モノクローナル抗体と反応することが確認された。

【００２９】

【実施例１１】肝臓に高転移性の癌細胞であるH10細胞
株（1×10⁵細胞）を100μlの無血清培地に懸濁し、実施
例５のペプチド＃ＧＤ０１，＃ＧＤ０２，＃ＧＤ０３お
よび＃ＧＤ０４をそれぞれ最終濃度が0.1mg/ml，0.5mg/
mlおよび2.5mg/mlとなるように加えた。対照はペプチド
を加えないものとした。これをHSE細胞株液を入れたプ
レートのウェルに添加し、37℃で60分静置した。PBSで
３回洗浄後、接着したH10細胞を顕微鏡で観察したとこ
ろ、図３のとおり、GD1αのレプリカペプチドを入れた
場合のみ接着が阻害され、本発明のペプチドが癌細胞の
転移を抑制した。

【００３０】

【配列表】

【００３１】配列番号：１配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列（＃ＧＤ０１） Phe Arg Ser Asp Val Arg Phe Trp His Trp Ser Thr Pro Phe Met １５ 10 15

【００３２】配列番号：２配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列（＃ＧＤ０２） Val Arg Val Tyr Phe Gly Phe Gly Pro Pro Pro Tyr Phe Gly Gly １５ 10 15

【００３３】配列番号：３配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列（＃ＧＤ０３） Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg １５ 10 15

【００３４】配列番号：４配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列（＃ＧＤ０４） Arg Tyr Trp Leu Tyr Gly Asp Pro Ala Ser Phe Pro Val Asn His １５ 10 15

【００３５】配列番号：５配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列（＃ＧＤ０５） Ala Arg Lys Tyr Gly Thr Arg Phe Gly Leu Ile Gly Gly Tyr Arg １５ 10 15

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ファージ（配列番号１〜４）とGD1α
のモノクローナル抗体のELISAの結果を示す。φ１〜φ
４はぞれぞれ、＃ＧＤ０１〜＃ＧＤ０４を発現したファ
ージに相当する。

【図２】図２は、ペプチド（＃ＧＤ０１および＃ＧＤ０
４）によるGD1αとモノクローナル抗体の結合阻害を示
す。GD1αは、Taki，T．et al.，1986，J．Biol．Che
m.，261，3075-3078に記載の方法により得たラット腹水
肝癌細胞（ＡＨ７９７４Ｆ細胞）単離物を示す。

【図３】図３は、ペプチド（配列番号１〜４）のH10細
胞とHSE細胞との接着阻害を示す。φ１Ｐ〜φ４Ｐはぞ
れぞれ、＃ＧＤ０１〜＃ＧＤ０４に相当する。φＮＰは
対照を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】糖脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応
し、癌細胞が標的細胞に接着および／または転移するの
を阻害するペプチド。
【請求項２】癌細胞及び標的細胞がいずれもヒト由来
である請求項１記載のペプチド。
【請求項３】糖脂質がスフィンゴ糖脂質である請求項
１記載のペプチド。
【請求項４】糖脂質がガングリオシドである請求項１
記載のペプチド。
【請求項５】糖脂質がGD1αである請求項１記載のペ
プチド。
【請求項６】配列番号１のアミノ酸配列を有する、糖
脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応するペプチド＃Ｇ
Ｄ０１。
【請求項７】配列番号２のアミノ酸配列を有する、糖
脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応するペプチド＃Ｇ
Ｄ０２。
【請求項８】配列番号３のアミノ酸配列を有する、糖
脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応するペプチド＃Ｇ
Ｄ０３。
【請求項９】配列番号４のアミノ酸配列を有する、糖
脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応するペプチド＃Ｇ
Ｄ０４。
【請求項１０】配列番号５のアミノ酸配列を有する、
糖脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反応するペプチド＃
ＧＤ０５。
【請求項１１】糖脂質糖鎖に対する抗体と特異的に反
応する活性が保たれる範囲で、１またはそれ以上のアミ
ノ酸が付加、欠失または置換されている、請求項６ない
し１０のいずれか１項記載のペプチド。
【請求項１２】請求項１ないし請求項１１のいずれか
１項記載のペプチドを化学合成法により製造する、ペプ
チドの製造方法。
【請求項１３】請求項１ないし請求項１１のいずれか
１項記載のペプチドをコードするDNAを遺伝子工学的手
法により宿主生物に組込むことにより該ペプチドを宿主
内で発現させることを特徴とする、ペプチドの製造方
法。
【請求項１４】請求項１ないし請求項１１のいずれか
１項記載のペプチドを含むポリペプチド及び蛋白質。
【請求項１５】請求項１ないし請求項１１のいずれか
１項記載のペプチドを含有する、癌の転移を抑制する医
薬組成物。
【請求項１６】請求項１５記載の医薬組成物の製造方
法。