JPH10212242A - 新規血小板増多剤 - Google Patents
新規血小板増多剤Info
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- JPH10212242A JPH10212242A JP9325847A JP32584797A JPH10212242A JP H10212242 A JPH10212242 A JP H10212242A JP 9325847 A JP9325847 A JP 9325847A JP 32584797 A JP32584797 A JP 32584797A JP H10212242 A JPH10212242 A JP H10212242A
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- platelet
- increasing
- cells
- interleukin
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】真に血小板増多効果を発揮し得る血小板増多剤
及び血小板増多方法の提供。 【解決手段】インターロイキン−６レセプターを主成分
として含む血小板増多剤又はインターロイキン−６レセ
プターを主成分として含む血小板増多剤を投与する血小
板増多方法。
及び血小板増多方法の提供。 【解決手段】インターロイキン−６レセプターを主成分
として含む血小板増多剤又はインターロイキン−６レセ
プターを主成分として含む血小板増多剤を投与する血小
板増多方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、少なくともインタ
ーロイキン−６レセプターを主成分として含む新規な血
小板増多剤と、かかる血小板増多剤を投与することから
なる血小板増多方法に関するものである。
ーロイキン−６レセプターを主成分として含む新規な血
小板増多剤と、かかる血小板増多剤を投与することから
なる血小板増多方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】インターロイキン−６（以下、ＩＬ−６
と略する）は、血小板の増多作用を有するリンホカイン
である。例えば大腸菌で製造したリコンビナントヒトＩ
Ｌ−６を５μｇずつ５日間、マウスに継続して投与する
ことにより、血小板が５０〜６０％増多するとの報告が
ある（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉら、Ｂｌｏｏｄ、７４巻、１
２４１−１２４４頁、１９８９年）。また、同様のリコ
ンビナントヒトＩＬ−６を１日当たり５〜８０μｇ／ｋ
ｇずつ１４日間、サルに継続して投与することにより、
血小板が２〜３倍に増多するとの報告もある（Ａｓａｎ
ｏら、Ｂｌｏｏｄ、７５巻、１６０２−１６０５頁、１
９９０年）。
と略する）は、血小板の増多作用を有するリンホカイン
である。例えば大腸菌で製造したリコンビナントヒトＩ
Ｌ−６を５μｇずつ５日間、マウスに継続して投与する
ことにより、血小板が５０〜６０％増多するとの報告が
ある（Ｉｓｈｉｂａｓｈｉら、Ｂｌｏｏｄ、７４巻、１
２４１−１２４４頁、１９８９年）。また、同様のリコ
ンビナントヒトＩＬ−６を１日当たり５〜８０μｇ／ｋ
ｇずつ１４日間、サルに継続して投与することにより、
血小板が２〜３倍に増多するとの報告もある（Ａｓａｎ
ｏら、Ｂｌｏｏｄ、７５巻、１６０２−１６０５頁、１
９９０年）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述のような報告等に
基づき、リコンビナントヒトＩＬ−６を投与することに
よる血小板増多法やＩＬ−６からなる血小板増多剤の開
発が期待されてきたが、現時点では新しい薬剤として開
発されるに至っていない。ＩＬ−６は、標的細胞表面上
又は可溶性のＩＬ−６レセプタ−（以下、ｓＩＬ−６レ
セプターと略する）と結合し、更に標的細胞表面上のｇ
ｐ１３０蛋白質（以下、ｇｐ１３０と略する）を刺激す
ることでその生理活性を発揮する。従って、リコンビナ
ントヒトＩＬ−６を投与することにより血小板を増多さ
せるためには、最終的に血小板の生成につながる細胞
種、すなわち多能性幹細胞や巨核球等の細胞表面上に一
定数のＩＬ−６レセプタ−が存在するか、又は、血液や
体液或いは幹細胞等の培養液中にｓＩＬ−６レセプタ−
を一定濃度で存在させ、該細胞種表面上に存在するｇｐ
１３０を刺激することが必要であると考えられる。
基づき、リコンビナントヒトＩＬ−６を投与することに
よる血小板増多法やＩＬ−６からなる血小板増多剤の開
発が期待されてきたが、現時点では新しい薬剤として開
発されるに至っていない。ＩＬ−６は、標的細胞表面上
又は可溶性のＩＬ−６レセプタ−（以下、ｓＩＬ−６レ
セプターと略する）と結合し、更に標的細胞表面上のｇ
ｐ１３０蛋白質（以下、ｇｐ１３０と略する）を刺激す
ることでその生理活性を発揮する。従って、リコンビナ
ントヒトＩＬ−６を投与することにより血小板を増多さ
せるためには、最終的に血小板の生成につながる細胞
種、すなわち多能性幹細胞や巨核球等の細胞表面上に一
定数のＩＬ−６レセプタ−が存在するか、又は、血液や
体液或いは幹細胞等の培養液中にｓＩＬ−６レセプタ−
を一定濃度で存在させ、該細胞種表面上に存在するｇｐ
１３０を刺激することが必要であると考えられる。
【０００４】例えばヒトにおいて、多能性幹細胞や巨核
球等の細胞表面上に一定数のＩＬ−６レセプタ−が存在
せず、更に血液や体液中にｓＩＬ−６レセプタ−が一定
濃度存在しないとすれば、ヒトＩＬ−６の投与によりマ
ウスやサルにＩＬ−６レセプターを投与したのと同様の
血小板増多効果が表れるとは限らない。
球等の細胞表面上に一定数のＩＬ−６レセプタ−が存在
せず、更に血液や体液中にｓＩＬ−６レセプタ−が一定
濃度存在しないとすれば、ヒトＩＬ−６の投与によりマ
ウスやサルにＩＬ−６レセプターを投与したのと同様の
血小板増多効果が表れるとは限らない。
【０００５】従って本発明は、ＩＬ−６レセプタ−を投
与してｇｐ１３０を刺激することにより血小板を増多す
る血小板増多剤や血小板増多方法を提供しようとするも
のである。
与してｇｐ１３０を刺激することにより血小板を増多す
る血小板増多剤や血小板増多方法を提供しようとするも
のである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ヒト巨核
球の形成におけるＩＬ−６レセプタ−の効果について鋭
意検討した結果、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ−陽性
細胞は巨核球形成能をもたず、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レ
セプタ−陰性細胞のみが巨核球形成能を有することを見
いだした。そして本発明者らは、ＩＬ−６レセプタ−が
特にＩＬ−６存在下でトロンボポイエチン（以下、ＴＰ
Ｏと略する）、インターロイキン−３（以下、ＩＬ−３
と略する）、幹細胞因子（以下、ＳＣＦと略する）によ
る巨核球の形成能を増強することを見いだした。本発明
は、これらの新たに見い出されたＩＬ−６レセプタ−が
有する巨核球形成の増強メカニズム、即ち血小板形成能
を有する幹細胞がＩＬ−６レセプタ−を発現していない
という事実に基づきなされたものであり、ＩＬ−６レセ
プターを主成分として含む血小板増多剤又はＩＬ−６レ
セプターを主成分として含む血小板増多剤を投与する血
小板増多方法である。以下本発明を詳細に説明する。
球の形成におけるＩＬ−６レセプタ−の効果について鋭
意検討した結果、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ−陽性
細胞は巨核球形成能をもたず、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レ
セプタ−陰性細胞のみが巨核球形成能を有することを見
いだした。そして本発明者らは、ＩＬ−６レセプタ−が
特にＩＬ−６存在下でトロンボポイエチン（以下、ＴＰ
Ｏと略する）、インターロイキン−３（以下、ＩＬ−３
と略する）、幹細胞因子（以下、ＳＣＦと略する）によ
る巨核球の形成能を増強することを見いだした。本発明
は、これらの新たに見い出されたＩＬ−６レセプタ−が
有する巨核球形成の増強メカニズム、即ち血小板形成能
を有する幹細胞がＩＬ−６レセプタ−を発現していない
という事実に基づきなされたものであり、ＩＬ−６レセ
プターを主成分として含む血小板増多剤又はＩＬ−６レ
セプターを主成分として含む血小板増多剤を投与する血
小板増多方法である。以下本発明を詳細に説明する。
【０００７】ＩＬ−６レセプタ−は、膜貫通領域や細胞
内領域を有し、本来膜に存在する分子量約８万の糖蛋白
質であり、ＩＬ−６と結合するとさらに細胞膜上のｇｐ
１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。ＩＬ−６
との結合及びｇｐ１３０との結合にはその細胞外領域の
みが必要であり、膜貫通領域や細胞内領域を欠失したｓ
ＩＬ−６レセプタ−でも、膜型（全長型）のＩＬ−６レ
セプターと同様にＩＬ−６と結合した後、更にｇｐ１３
０と結合してシグナルを伝達することができる（アメリ
カ特許第５１７１８４０号公報等参照）。
内領域を有し、本来膜に存在する分子量約８万の糖蛋白
質であり、ＩＬ−６と結合するとさらに細胞膜上のｇｐ
１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。ＩＬ−６
との結合及びｇｐ１３０との結合にはその細胞外領域の
みが必要であり、膜貫通領域や細胞内領域を欠失したｓ
ＩＬ−６レセプタ−でも、膜型（全長型）のＩＬ−６レ
セプターと同様にＩＬ−６と結合した後、更にｇｐ１３
０と結合してシグナルを伝達することができる（アメリ
カ特許第５１７１８４０号公報等参照）。
【０００８】本発明において使用されるＩＬ−６レセプ
タ−としては、前記可溶性のもの（ｓＩＬ−６レセプタ
−）でも全長型のものでも良いが、より具体的に例えば
チャイニ−ズハムスタ−卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）で発現
された細胞外領域の３４４アミノ酸（Ｎ末端側１〜３４
４アミノ酸残基）から構成されるリコンビナントｓＩＬ
−６レセプタ−（Ｙａｓｕｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．、１０８巻、６７３−６７６頁、１９９０年参
照）や、ピキア酵母で発現された細胞外領域（Ｎ末端側
１１４〜３５５アミノ酸残基）を含むリコンビナントＩ
Ｌ−６レセプタ−（特開平９−１６３９８６号公報参
照）を例示することができる。
タ−としては、前記可溶性のもの（ｓＩＬ−６レセプタ
−）でも全長型のものでも良いが、より具体的に例えば
チャイニ−ズハムスタ−卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）で発現
された細胞外領域の３４４アミノ酸（Ｎ末端側１〜３４
４アミノ酸残基）から構成されるリコンビナントｓＩＬ
−６レセプタ−（Ｙａｓｕｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．、１０８巻、６７３−６７６頁、１９９０年参
照）や、ピキア酵母で発現された細胞外領域（Ｎ末端側
１１４〜３５５アミノ酸残基）を含むリコンビナントＩ
Ｌ−６レセプタ−（特開平９−１６３９８６号公報参
照）を例示することができる。
【０００９】ＩＬ−６は、分子量約３万の糖蛋白質で、
ＩＬ−６レセプタ−と結合するとさらに細胞膜上のｇｐ
１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。従って本
発明においては、ＩＬ−６レセプターに加えてＩＬ−６
を成分として含む血小板増多剤が好ましい。また本発明
の血小板増多方法についても、ＩＬ−６レセプターに加
えてＩＬ−６を成分として含む血小板増多剤を投与する
ことが好ましい。ＩＬ−６レセプタ−とＩＬ−６の両者
を含む血小板増多剤においては、ＩＬ−６のＩＬ−６レ
セプタ−に対する重量比を１０を超えない範囲、特に
０．１〜１０の範囲とすることが好ましい。
ＩＬ−６レセプタ−と結合するとさらに細胞膜上のｇｐ
１３０と結合して細胞内にシグナルを伝える。従って本
発明においては、ＩＬ−６レセプターに加えてＩＬ−６
を成分として含む血小板増多剤が好ましい。また本発明
の血小板増多方法についても、ＩＬ−６レセプターに加
えてＩＬ−６を成分として含む血小板増多剤を投与する
ことが好ましい。ＩＬ−６レセプタ−とＩＬ−６の両者
を含む血小板増多剤においては、ＩＬ−６のＩＬ−６レ
セプタ−に対する重量比を１０を超えない範囲、特に
０．１〜１０の範囲とすることが好ましい。
【００１０】本発明では、ＩＬ−６レセプタ−或いはＩ
Ｌ−６レセプタ−とＩＬ−６に、更にＴＰＯ、ＩＬ−３
又はＳＣＦから選ばれる一種以上を成分として含む血小
板増多剤が特に好ましい。また本発明では、ＩＬ−６レ
セプタ−或いはＩＬ−６レセプタ−とＩＬ−６に、更に
ＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦから選ばれる一種以上を成
分として含む血小板増多剤を投与することが特に好まし
い。ＴＰＯ等を含む特に好ましい血小板増多剤において
は、ＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦのＩＬ−６レセプタ−
に対する重量比を１０を超えない範囲、特に０．１〜１
０の範囲とすることが好ましい。
Ｌ−６レセプタ−とＩＬ−６に、更にＴＰＯ、ＩＬ−３
又はＳＣＦから選ばれる一種以上を成分として含む血小
板増多剤が特に好ましい。また本発明では、ＩＬ−６レ
セプタ−或いはＩＬ−６レセプタ−とＩＬ−６に、更に
ＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦから選ばれる一種以上を成
分として含む血小板増多剤を投与することが特に好まし
い。ＴＰＯ等を含む特に好ましい血小板増多剤において
は、ＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦのＩＬ−６レセプタ−
に対する重量比を１０を超えない範囲、特に０．１〜１
０の範囲とすることが好ましい。
【００１１】以上の通り本発明においては、ＩＬ−６レ
セプタ−に加えてＩＬ−６を成分として含む血小板増多
剤や、ＩＬ−６レセプタ−或いはＩＬ−６レセプタ−と
ＩＬ−６に、更にＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦから選ば
れる一種以上を成分として含む血小板増多剤が好ましい
が、生体内への投与により幹細胞を巨核球に分化させ、
最終的に生体内での巨核球の血小板への分化による血小
板の増多を引き起こすための血小板増多剤や血小板増多
方法においては、ＩＬ−６レセプタ−のみからなる血小
板増多剤を骨髄等の幹細胞が存在する部分に投与するの
みで血小板増多を引き起こすことが可能と考えられる。
骨髄等のＩＬ−６やＳＣＦが既に存在していると考えら
れる部位では、巨核球形成能を有するがＩＬ−６レセプ
タ−を発現していない幹細胞に対してＩＬ−６レセプタ
−を投与するのみでこれらが共存した状態、即ち本発明
の特に好ましい血小板増多剤を投与したのと同様の状態
にできるからである。これに対して例えば生体から抽出
した幹細胞を生体外で血小板に分化させるための血小板
増多剤や血小板増多方法では、ＩＬ−６や、ＩＬ−６及
びＴＰＯ等を含む血小板増多剤が効果的である。
セプタ−に加えてＩＬ−６を成分として含む血小板増多
剤や、ＩＬ−６レセプタ−或いはＩＬ−６レセプタ−と
ＩＬ−６に、更にＴＰＯ、ＩＬ−３又はＳＣＦから選ば
れる一種以上を成分として含む血小板増多剤が好ましい
が、生体内への投与により幹細胞を巨核球に分化させ、
最終的に生体内での巨核球の血小板への分化による血小
板の増多を引き起こすための血小板増多剤や血小板増多
方法においては、ＩＬ−６レセプタ−のみからなる血小
板増多剤を骨髄等の幹細胞が存在する部分に投与するの
みで血小板増多を引き起こすことが可能と考えられる。
骨髄等のＩＬ−６やＳＣＦが既に存在していると考えら
れる部位では、巨核球形成能を有するがＩＬ−６レセプ
タ−を発現していない幹細胞に対してＩＬ−６レセプタ
−を投与するのみでこれらが共存した状態、即ち本発明
の特に好ましい血小板増多剤を投与したのと同様の状態
にできるからである。これに対して例えば生体から抽出
した幹細胞を生体外で血小板に分化させるための血小板
増多剤や血小板増多方法では、ＩＬ−６や、ＩＬ−６及
びＴＰＯ等を含む血小板増多剤が効果的である。
【００１２】本発明において好適に使用されるＩＬ−６
としては、例えば、大腸菌で発現された１８４アミノ酸
から構成されるリコンビナントＩＬ−６（Ｔｏｎｏｕｃ
ｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０４巻、３０から３
３頁、１９８８年及びＹａｓｕｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１２巻、４１９〜４２４頁、１９９
０年等参照）を例示することができる。
としては、例えば、大腸菌で発現された１８４アミノ酸
から構成されるリコンビナントＩＬ−６（Ｔｏｎｏｕｃ
ｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０４巻、３０から３
３頁、１９８８年及びＹａｓｕｋａｗａら、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１２巻、４１９〜４２４頁、１９９
０年等参照）を例示することができる。
【００１３】本発明の血小板増多剤は、好ましくは非経
口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、経皮投与等に
より投与することが好ましい。投与量は、血小板の不足
症状を示す疾患の種類、患者の状態等により適宜選択さ
れるが、一般に１〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲であ
り、血小板数の増多の様子を観察しつつ継続的に投与等
すれば良い。本発明の血小板増多剤は常用の賦形剤、例
えば生理食塩水、ブドウ糖液、マンソト−ル、メチルセ
ルロ−ス、ゼラチン、ヒト血清アルブミン等の賦活剤と
混合して製剤化することができる。製剤中のＩＬ−６レ
セプタ−量は、重量比にして０．０１％程度以上である
ことが例示できるが、上限は特に制限されない。また本
発明の血小板増多剤は凍結乾燥品とすることも可能であ
り、凍結乾燥した場合には使用直前に生理食塩水、ブド
ウ糖液、リンゲル液等の等張液により再溶解すれば良
い。
口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、経皮投与等に
より投与することが好ましい。投与量は、血小板の不足
症状を示す疾患の種類、患者の状態等により適宜選択さ
れるが、一般に１〜５００μｇ／ｋｇ／日の範囲であ
り、血小板数の増多の様子を観察しつつ継続的に投与等
すれば良い。本発明の血小板増多剤は常用の賦形剤、例
えば生理食塩水、ブドウ糖液、マンソト−ル、メチルセ
ルロ−ス、ゼラチン、ヒト血清アルブミン等の賦活剤と
混合して製剤化することができる。製剤中のＩＬ−６レ
セプタ−量は、重量比にして０．０１％程度以上である
ことが例示できるが、上限は特に制限されない。また本
発明の血小板増多剤は凍結乾燥品とすることも可能であ
り、凍結乾燥した場合には使用直前に生理食塩水、ブド
ウ糖液、リンゲル液等の等張液により再溶解すれば良
い。
【００１４】
【発明の実施の形態】以下本発明をさらに詳細に説明す
るために実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定
されるものではない。
るために実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定
されるものではない。
【００１５】実施例１．巨核球の形成に対するＩＬ−６
レセプタ−の効果（その１） 骨髄細胞は、インフォ−ムドコンセントの得られた正常
成人ボランティアより腸骨穿刺により採取した。採取し
た骨髄細胞あるいは臍帯血からシリカを用いて貧食細胞
を除去した後、フィコ−ルを用いた密度勾配法により単
核細胞を集めた。これを、抗ＣＤ３４抗体が結合した磁
性ビ−ズ（商品名ダイナビ−ズ Ｍ−４５０ ＣＤ３
４、ダイナル社製）に細胞数とビ−ズ数が１：１になる
ように加え、４℃で３０分間処理した。ＣＤ３４陽性細
胞が結合したビ−ズを磁石（Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｐａｒ
ｔｉｃｌｅ Ｃｏｎｃｅｔｒａｔｏｒ、ダイナル社製）
で集め、ＣＤ３４陽性細胞をビ−ズから分離（ＤＥＴＡ
ＣＨａＢｅａｄ ＣＤ３４、ダイナル社製）し、以下の
実験に用いた。なお、セルソ−タ−を用いた解析によれ
ば、得られた画分のＣＤ３４陽性細胞の純度は８５〜９
５％であった。
レセプタ−の効果（その１） 骨髄細胞は、インフォ−ムドコンセントの得られた正常
成人ボランティアより腸骨穿刺により採取した。採取し
た骨髄細胞あるいは臍帯血からシリカを用いて貧食細胞
を除去した後、フィコ−ルを用いた密度勾配法により単
核細胞を集めた。これを、抗ＣＤ３４抗体が結合した磁
性ビ−ズ（商品名ダイナビ−ズ Ｍ−４５０ ＣＤ３
４、ダイナル社製）に細胞数とビ−ズ数が１：１になる
ように加え、４℃で３０分間処理した。ＣＤ３４陽性細
胞が結合したビ−ズを磁石（Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｐａｒ
ｔｉｃｌｅ Ｃｏｎｃｅｔｒａｔｏｒ、ダイナル社製）
で集め、ＣＤ３４陽性細胞をビ−ズから分離（ＤＥＴＡ
ＣＨａＢｅａｄ ＣＤ３４、ダイナル社製）し、以下の
実験に用いた。なお、セルソ−タ−を用いた解析によれ
ば、得られた画分のＣＤ３４陽性細胞の純度は８５〜９
５％であった。
【００１６】上記方法で得られた臍帯血由来ＣＤ３４陽
性細胞２０００個を含むα−培地（２％牛血清アルブミ
ン、１０μｇ/ ｍｌインスリン、２００μｇ/ ｍｌトラ
ンスフェリン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−
ル、４０μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社
製）、１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６、１００ｎｇ／ｍｌ
ＳＣＦ、そして０から２００ｎｇ／ｍｌのｓＩＬ−６
レセプター（Ｙａｓｕｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、１０８巻、６７３−６７６頁、１９９０年を参照
して調製））１ｍｌを２４穴プレ−トの各ウエルにまい
て、３７℃、５％ＣＯ2 、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2 の条件
で培養した。１週間後、培養液の半分を除き、細胞を集
め、このうちの巨核球の数を抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体を用
いる常法（Ｏｋｕｍｕｒａら、Ｂｌｏｏｄ、８０巻、６
４２−６４７頁、１９９２年参照）により計数した。結
果を図１に示す。
性細胞２０００個を含むα−培地（２％牛血清アルブミ
ン、１０μｇ/ ｍｌインスリン、２００μｇ/ ｍｌトラ
ンスフェリン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−
ル、４０μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社
製）、１００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６、１００ｎｇ／ｍｌ
ＳＣＦ、そして０から２００ｎｇ／ｍｌのｓＩＬ−６
レセプター（Ｙａｓｕｋａｗａら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、１０８巻、６７３−６７６頁、１９９０年を参照
して調製））１ｍｌを２４穴プレ−トの各ウエルにまい
て、３７℃、５％ＣＯ2 、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2 の条件
で培養した。１週間後、培養液の半分を除き、細胞を集
め、このうちの巨核球の数を抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体を用
いる常法（Ｏｋｕｍｕｒａら、Ｂｌｏｏｄ、８０巻、６
４２−６４７頁、１９９２年参照）により計数した。結
果を図１に示す。
【００１７】図１から明らかなように、加えたｓＩＬ−
６レセプターの濃度に依存して巨核球の数が増多した。
このことから、ＩＬ−６レセプターは、ＩＬ−６及びＳ
ＣＦ存在下で幹細胞の巨核球への分化を誘導する効果を
もつことを示す。
６レセプターの濃度に依存して巨核球の数が増多した。
このことから、ＩＬ−６レセプターは、ＩＬ−６及びＳ
ＣＦ存在下で幹細胞の巨核球への分化を誘導する効果を
もつことを示す。
【００１８】上記方法で得られた骨髄由来ＣＤ３４陽性
細胞について同様の操作を行った。その結果、上記同
様、ＩＬ−６レセプターはＩＬ−６及びＳＣＦ存在下で
骨髄由来幹細胞の巨核球への分化を誘導する効果をもつ
ことが示された。
細胞について同様の操作を行った。その結果、上記同
様、ＩＬ−６レセプターはＩＬ−６及びＳＣＦ存在下で
骨髄由来幹細胞の巨核球への分化を誘導する効果をもつ
ことが示された。
【００１９】実施例２．巨核球の形成に対するＩＬ−６
レセプタ−の効果（その２） 実施例１に記載した方法で得られたＣＤ３４陽性細胞２
０００個を含むα−培地（２％牛血清アルブミン、１０
μｇ／ｍｌインスリン、２００μｇ／ｍｌトランスフェ
リン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−ル、４０
μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社製）、そし
て以下の濃度の各種ファクタ−の組み合わせ：ＩＬ−３
は２００Ｕ／ｍｌ、ＳＣＦは１００ｎｇ／ｍｌ、ＩＬ−
６は１００ｎｇ／ｍｌ、ｓＩＬ−６レセプターは２００
ｎｇ／ｍｌ、ＴＰＯは４Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを２４穴プレ
−トの各ウエルにまき、３７℃、５％ＣＯ2 、５％
Ｏ2 、９０％Ｎ2 の条件で培養した。１週間後、培養液
の半分を除き、細胞を集め、抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体を用
いる常法により、培養１週間後の巨核球の数を求めた。
一方、培養液の半分を除いた残りの培養液には同組成の
培養液を新たに加え、更に１週間培養し、同一方法によ
り培養２週間後の巨核球の数を求めた。結果を表１に示
す。
レセプタ−の効果（その２） 実施例１に記載した方法で得られたＣＤ３４陽性細胞２
０００個を含むα−培地（２％牛血清アルブミン、１０
μｇ／ｍｌインスリン、２００μｇ／ｍｌトランスフェ
リン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−ル、４０
μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社製）、そし
て以下の濃度の各種ファクタ−の組み合わせ：ＩＬ−３
は２００Ｕ／ｍｌ、ＳＣＦは１００ｎｇ／ｍｌ、ＩＬ−
６は１００ｎｇ／ｍｌ、ｓＩＬ−６レセプターは２００
ｎｇ／ｍｌ、ＴＰＯは４Ｕ／ｍｌ）１ｍｌを２４穴プレ
−トの各ウエルにまき、３７℃、５％ＣＯ2 、５％
Ｏ2 、９０％Ｎ2 の条件で培養した。１週間後、培養液
の半分を除き、細胞を集め、抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体を用
いる常法により、培養１週間後の巨核球の数を求めた。
一方、培養液の半分を除いた残りの培養液には同組成の
培養液を新たに加え、更に１週間培養し、同一方法によ
り培養２週間後の巨核球の数を求めた。結果を表１に示
す。
【００２０】
【表１】
【００２１】表１から明らかなように、ｓＩＬ−６レセ
プター（表１ではｓＩＬ−６Ｒと記載）は、ＩＬ−６と
ＳＣＦ存在下、ＩＬ−３とＩＬ−６存在下、ＴＰＯとＩ
Ｌ−６存在下のそれぞれにおいて、巨核球の形成を誘導
することが示された。
プター（表１ではｓＩＬ−６Ｒと記載）は、ＩＬ−６と
ＳＣＦ存在下、ＩＬ−３とＩＬ−６存在下、ＴＰＯとＩ
Ｌ−６存在下のそれぞれにおいて、巨核球の形成を誘導
することが示された。
【００２２】なお表１は３回の操作により得られた結果
の平均±ＳＤ値を示し、表中の％は各培地において発生
した全細胞中の巨核球の割合を示す。また表中、＊を付
した培地は、ｓＩＬ−６レセプタ−を含まない培地での
結果と統計的に有意な差（Ｐ＜０．００５−０．０００
１）を示すものである。
の平均±ＳＤ値を示し、表中の％は各培地において発生
した全細胞中の巨核球の割合を示す。また表中、＊を付
した培地は、ｓＩＬ−６レセプタ−を含まない培地での
結果と統計的に有意な差（Ｐ＜０．００５−０．０００
１）を示すものである。
【００２３】実施例３．巨核球の形成に対するＩＬ−６
レセプタ−の効果（その３） メチルセルロ−ス法を用いた培養は、文献（Ｎｉｓｈｉ
ら、Ｂｌｏｏｄ、７６巻、１３３０頁、１９９０年、Ｔ
ａｎａｋａら、Ｂｌｏｏｄ、８０巻、１７４３頁、１９
９２年及びＫｏｉｋｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１６
８巻、８７９頁、１９８８年）に基づいて行った。
レセプタ−の効果（その３） メチルセルロ−ス法を用いた培養は、文献（Ｎｉｓｈｉ
ら、Ｂｌｏｏｄ、７６巻、１３３０頁、１９９０年、Ｔ
ａｎａｋａら、Ｂｌｏｏｄ、８０巻、１７４３頁、１９
９２年及びＫｏｉｋｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１６
８巻、８７９頁、１９８８年）に基づいて行った。
【００２４】実施例１で分画したＣＤ３４陽性細胞５０
０個を含むα−培地（０．９％メチルセルロ−ス、２％
牛血清アルブミン、３００μｇ／ｍｌトランスフェリ
ン、１６０μｇ／ｍｌレシチン（シグマ社製）、９６μ
ｇ／ｍｌコレステロ−ル（ナカライ社製）、１０μｇ／
ｍｌインスリン、５×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ
−ル、さらに実施例２において記載した濃度の各種ファ
クターを含む）１ｍｌを、直径３５ｍｍのペトリ皿にま
き、３７℃、５％ＣＯ2 、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2の条件
で培養した。培養開始１週間後及び２週間後に、顕微鏡
による観察法により、ＣＦＵ−Ｍｋ（４以上５０未満の
巨核球を含むコロニ−）数、ＢＦＲ−Ｍｋ（５０個以上
の巨核球を含むコロニ−）数、ＭＫ−ｍｉｘ（巨核球だ
けでなく、顆粒球やマクロファ−ジ等、他の種類の血球
を含むコロニー）数を計数した。結果を表２に示す。
０個を含むα−培地（０．９％メチルセルロ−ス、２％
牛血清アルブミン、３００μｇ／ｍｌトランスフェリ
ン、１６０μｇ／ｍｌレシチン（シグマ社製）、９６μ
ｇ／ｍｌコレステロ−ル（ナカライ社製）、１０μｇ／
ｍｌインスリン、５×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ
−ル、さらに実施例２において記載した濃度の各種ファ
クターを含む）１ｍｌを、直径３５ｍｍのペトリ皿にま
き、３７℃、５％ＣＯ2 、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2の条件
で培養した。培養開始１週間後及び２週間後に、顕微鏡
による観察法により、ＣＦＵ−Ｍｋ（４以上５０未満の
巨核球を含むコロニ−）数、ＢＦＲ−Ｍｋ（５０個以上
の巨核球を含むコロニ−）数、ＭＫ−ｍｉｘ（巨核球だ
けでなく、顆粒球やマクロファ−ジ等、他の種類の血球
を含むコロニー）数を計数した。結果を表２に示す。
【００２５】
【表２】
【００２６】表２から明らかなように、ｓＩＬ−６レセ
プター（表２ではｓＩＬ−６Ｒと記載）は、ＩＬ−６と
ＳＣＦ存在下、ＩＬ−３とＩＬ−６存在下、ＴＰＯとＩ
Ｌ−６存在下、ＳＣＦ、ＴＰＯ及びＩＬ−６存在下のそ
れぞれにおいて、巨核球の形成を誘導することが示され
た。なお表２は３回の操作により得られた結果の平均±
ＳＤ値を示しす。また＊を付した結果は、ｓＩＬ−６レ
セプタ−を含まない場合の結果と統計的に有意な差（Ｐ
＜０．００５−０．０００１）を示すものである。
プター（表２ではｓＩＬ−６Ｒと記載）は、ＩＬ−６と
ＳＣＦ存在下、ＩＬ−３とＩＬ−６存在下、ＴＰＯとＩ
Ｌ−６存在下、ＳＣＦ、ＴＰＯ及びＩＬ−６存在下のそ
れぞれにおいて、巨核球の形成を誘導することが示され
た。なお表２は３回の操作により得られた結果の平均±
ＳＤ値を示しす。また＊を付した結果は、ｓＩＬ−６レ
セプタ−を含まない場合の結果と統計的に有意な差（Ｐ
＜０．００５−０．０００１）を示すものである。
【００２７】実施例４．巨核球の形成に対するＩＬ−６
レセプタ−の効果（その４） 巨核球への分化能を有するＣＤ３４陽性細胞の、ＩＬ−
６レセプタ−の発現の有無を調べた。セルソ−タ−で分
画した２０００個のＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ−陽
性細胞、あるいは同数のＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ
−陰性細胞を含むα−培地（２％牛血清アルブミン、１
０μｇ／ｍｌインスリン、２００μｇ／ｍｌトランスフ
ェリン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−ル、４
０μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社製）、１
００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６、１００ｎｇ／ｍｌ ＳＣ
Ｆ、４Ｕ／ｍｌ ＴＰＯそして２００ｎｇ／ｍｌ ｓＩ
Ｌ−６レセプター）１ｍｌを２４穴プレ−トの各ウエル
にまき、３７℃、５％ＣＯ2、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2 の
条件で培養した。１週間後、培養液の半分を除き、細胞
を集め、このうちの巨核球の数を抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体
を用いる常法により計数した。結果を図２に示す。
レセプタ−の効果（その４） 巨核球への分化能を有するＣＤ３４陽性細胞の、ＩＬ−
６レセプタ−の発現の有無を調べた。セルソ−タ−で分
画した２０００個のＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ−陽
性細胞、あるいは同数のＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセプタ
−陰性細胞を含むα−培地（２％牛血清アルブミン、１
０μｇ／ｍｌインスリン、２００μｇ／ｍｌトランスフ
ェリン、１×１０-5Ｍ ２−メルカプトエタノ−ル、４
０μｇ／ｍｌ低密度リポプロテイン（シグマ社製）、１
００ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６、１００ｎｇ／ｍｌ ＳＣ
Ｆ、４Ｕ／ｍｌ ＴＰＯそして２００ｎｇ／ｍｌ ｓＩ
Ｌ−６レセプター）１ｍｌを２４穴プレ−トの各ウエル
にまき、３７℃、５％ＣＯ2、５％Ｏ2 、９０％Ｎ2 の
条件で培養した。１週間後、培養液の半分を除き、細胞
を集め、このうちの巨核球の数を抗ＩＩｂＩＩＩａ抗体
を用いる常法により計数した。結果を図２に示す。
【００２８】図２から明らかなように、ＣＤ３４陽性Ｉ
Ｌ−６レセプタ−陰性細胞は、ｓＩＬ−６レセプター
（図２ではｓＩＬ−６Ｒと記載）、ＩＬ−６及びＳＣＦ
の存在下で、またはＩＬ−６及びＴＰＯ存在下で巨核球
への分化数が増多した。一方、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レ
セプタ−陽性細胞は、同条件下で巨核球の数が増えなか
った。このことは、巨核球への分化能を有するのは、Ｉ
Ｌ−６レセプタ−陰性細胞であり、血小板の増多にはＩ
Ｌ−６レセプターが不可欠であることを示すものであ
る。
Ｌ−６レセプタ−陰性細胞は、ｓＩＬ−６レセプター
（図２ではｓＩＬ−６Ｒと記載）、ＩＬ−６及びＳＣＦ
の存在下で、またはＩＬ−６及びＴＰＯ存在下で巨核球
への分化数が増多した。一方、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６レ
セプタ−陽性細胞は、同条件下で巨核球の数が増えなか
った。このことは、巨核球への分化能を有するのは、Ｉ
Ｌ−６レセプタ−陰性細胞であり、血小板の増多にはＩ
Ｌ−６レセプターが不可欠であることを示すものであ
る。
【００２９】
【発明の効果】血小板の増多にＩＬ−６レセプターが不
可欠であるとの知見に基づきなされた本発明の血小板増
多剤及び血小板増多方法によれば、血小板の減少を伴う
疾患や、疾患の治療過程で血小板の減少が生じた患者に
対し、新規な治療方法及び治療薬を提供することが可能
になる。従って本発明の血小板増多剤等と従来の治療法
を併用することにより、癌に対する化学療法や放射線療
法の治療成績の向上が期待できる。
可欠であるとの知見に基づきなされた本発明の血小板増
多剤及び血小板増多方法によれば、血小板の減少を伴う
疾患や、疾患の治療過程で血小板の減少が生じた患者に
対し、新規な治療方法及び治療薬を提供することが可能
になる。従って本発明の血小板増多剤等と従来の治療法
を併用することにより、癌に対する化学療法や放射線療
法の治療成績の向上が期待できる。
【００３０】また本発明は、さらには人工的に血液を製
造する方法の開発等にも大きな意義を有する。
造する方法の開発等にも大きな意義を有する。
【図１】実施例１に示す方法でＣＤ３４陽性細胞を培養
したときに形成された巨核球の数（縦軸）とＩＬ−６レ
セプター濃度（横軸）の関係を示す図である。
したときに形成された巨核球の数（縦軸）とＩＬ−６レ
セプター濃度（横軸）の関係を示す図である。
【図２】実施例４に示す方法で、ＣＤ３４陽性ＩＬ−６
レセプター陽性細胞あるいはＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセ
プター陰性細胞を培養したときに形成された巨核球の数
を示す図である。図中黒いバーはＣＤ３４陽性ＩＬ−６
レセプター陰性細胞についての結果を、斜線のバーはＣ
Ｄ３４陽性ＩＬ−６レセプター陽性細胞についての結果
をそれぞれ示す。
レセプター陽性細胞あるいはＣＤ３４陽性ＩＬ−６レセ
プター陰性細胞を培養したときに形成された巨核球の数
を示す図である。図中黒いバーはＣＤ３４陽性ＩＬ−６
レセプター陰性細胞についての結果を、斜線のバーはＣ
Ｄ３４陽性ＩＬ−６レセプター陽性細胞についての結果
をそれぞれ示す。
Claims (6)
- 【請求項１】インターロイキン−６レセプターを主成分
として含む血小板増多剤。 - 【請求項２】更にインターロイキン−６を成分として含
む請求項１項の血小板増多剤。 - 【請求項３】更にトロンボポイエチン、インターロイキ
ン−３又は幹細胞因子から選ばれる一種以上を成分とし
て含む請求項１項又は２項の血小板増多剤。 - 【請求項４】インターロイキン−６レセプターを主成分
として含む血小板増多剤を投与する、血小板増多方法。 - 【請求項５】血小板増多剤が更にインターロイキン−６
を成分として含むものである請求項４項の血小板増多方
法。 - 【請求項６】血小板増多剤が更にトロンボポイエチン、
インターロイキン−３又は幹細胞因子から選ばれる一種
以上を成分として含むものである請求項４項又は５項の
血小板増多方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9325847A JPH10212242A (ja) | 1996-11-27 | 1997-11-27 | 新規血小板増多剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31664996 | 1996-11-27 | ||
| JP8-316649 | 1996-11-27 | ||
| JP9325847A JPH10212242A (ja) | 1996-11-27 | 1997-11-27 | 新規血小板増多剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10212242A true JPH10212242A (ja) | 1998-08-11 |
Family
ID=26568740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9325847A Pending JPH10212242A (ja) | 1996-11-27 | 1997-11-27 | 新規血小板増多剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10212242A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000327585A (ja) * | 1999-05-24 | 2000-11-28 | Tosoh Corp | 新規白血球増多剤 |
| JP2005529587A (ja) * | 2002-03-15 | 2005-10-06 | シェーリング コーポレイション | Ｃｄ２００レセプターを調節する方法 |
-
1997
- 1997-11-27 JP JP9325847A patent/JPH10212242A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000327585A (ja) * | 1999-05-24 | 2000-11-28 | Tosoh Corp | 新規白血球増多剤 |
| JP2005529587A (ja) * | 2002-03-15 | 2005-10-06 | シェーリング コーポレイション | Ｃｄ２００レセプターを調節する方法 |
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|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041001 |
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20071218 |
|
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|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080318 |