JPH10104237A - 免疫測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法 - Google Patents
免疫測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法Info
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- JPH10104237A JPH10104237A JP27715496A JP27715496A JPH10104237A JP H10104237 A JPH10104237 A JP H10104237A JP 27715496 A JP27715496 A JP 27715496A JP 27715496 A JP27715496 A JP 27715496A JP H10104237 A JPH10104237 A JP H10104237A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/552—Glass or silica
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 従来の免疫測定法よりも短い時間で免疫測定
を行うことができ、また、用いる洗浄液や検体の量も従
来より少なくすることができる手段を提供すること。 【解決手段】 SiO2の含有量が４０〜９５重量％、Na2O
の含有量が５〜６０重量％であるガラス繊維から成る免
疫測定用担体及び免疫測定用担体に免疫活性物質を不動
化したものを用いて行う免疫測定方法を提供した。
を行うことができ、また、用いる洗浄液や検体の量も従
来より少なくすることができる手段を提供すること。 【解決手段】 SiO2の含有量が４０〜９５重量％、Na2O
の含有量が５〜６０重量％であるガラス繊維から成る免
疫測定用担体及び免疫測定用担体に免疫活性物質を不動
化したものを用いて行う免疫測定方法を提供した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫測定用担体及
びそれを用いた免疫測定方法に関する。
びそれを用いた免疫測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来より、抗原や抗体を免疫測定法によ
り測定することが広く行なわれており、中でも固相の担
体を用いる方法が広く用いられている。免疫測定法で用
いる固相担体としては、ポリスチレン製のビーズや、マ
イクロプレートのウェル等が通常用いられている。
り測定することが広く行なわれており、中でも固相の担
体を用いる方法が広く用いられている。免疫測定法で用
いる固相担体としては、ポリスチレン製のビーズや、マ
イクロプレートのウェル等が通常用いられている。
【０００３】固相の担体を用いる方法の主なもの１つと
して、サンドイッチ法による酵素免疫測定法（サンドイ
ッチＥＬＩＳＡ）がある。この方法により例えばＢ型肝
炎ウイルスに対する抗体を測定する場合、担体にＢ型肝
炎表面抗原（ＨＢｓ抗原）を固相化し、反応液に溶解し
た被検血清と反応させる。該抗原と反応しない血清の成
分と抗原抗体反応した担体に捕らえられたものを洗浄に
よって分離（Ｂ−Ｆ分離）する。その後、酵素標識、例
えば、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）標識されたヒトＩｇ
Ｇ抗体を添加し、担体に固相化した抗原と標識されたＩ
ｇＧ抗体で特異的にサンドイッチ状態を作り、特異的に
検出する。反応に関与しなかった標識抗体は、ＢＦ分離
により除去する。ＰＯＤに対する基質を添加することに
より、ＰＯＤの酵素活性に応じた発色を呈示させ、検量
線から抗体量を換算する。
して、サンドイッチ法による酵素免疫測定法（サンドイ
ッチＥＬＩＳＡ）がある。この方法により例えばＢ型肝
炎ウイルスに対する抗体を測定する場合、担体にＢ型肝
炎表面抗原（ＨＢｓ抗原）を固相化し、反応液に溶解し
た被検血清と反応させる。該抗原と反応しない血清の成
分と抗原抗体反応した担体に捕らえられたものを洗浄に
よって分離（Ｂ−Ｆ分離）する。その後、酵素標識、例
えば、パーオキシダーゼ（ＰＯＤ）標識されたヒトＩｇ
Ｇ抗体を添加し、担体に固相化した抗原と標識されたＩ
ｇＧ抗体で特異的にサンドイッチ状態を作り、特異的に
検出する。反応に関与しなかった標識抗体は、ＢＦ分離
により除去する。ＰＯＤに対する基質を添加することに
より、ＰＯＤの酵素活性に応じた発色を呈示させ、検量
線から抗体量を換算する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従来は、固相化した抗
原と血清中の抗体との反応時間はおよそ３０から１８０
分、標識抗体との反応もおよそ３０から１８０分であ
り、かなり時間がかかる。また、ＢＦ分離の際に用いる
洗浄液は１０００から１００００μｌと多量の洗浄液を
必要とする。
原と血清中の抗体との反応時間はおよそ３０から１８０
分、標識抗体との反応もおよそ３０から１８０分であ
り、かなり時間がかかる。また、ＢＦ分離の際に用いる
洗浄液は１０００から１００００μｌと多量の洗浄液を
必要とする。
【０００５】本発明の目的は、従来の免疫測定法よりも
短い時間で免疫測定を行うことができ、また、用いる洗
浄液や検体の量も従来より少なくすることができる手段
を提供することである。
短い時間で免疫測定を行うことができ、また、用いる洗
浄液や検体の量も従来より少なくすることができる手段
を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、特定の組成のガラス繊維を担体として用いる
ことにより、免疫測定法における免疫反応の時間を大幅
に短縮することができ、また、洗浄液や検体の量も従来
よりも大幅に少なくすることができることを見出し本発
明を完成した。
究の結果、特定の組成のガラス繊維を担体として用いる
ことにより、免疫測定法における免疫反応の時間を大幅
に短縮することができ、また、洗浄液や検体の量も従来
よりも大幅に少なくすることができることを見出し本発
明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、SiO2の含有量が４０
〜９５重量％、Na2Oの含有量が５〜６０重量％であるガ
ラス繊維から成る免疫測定用担体を提供する。さらに、
本発明は、本発明の免疫測定用担体に免疫活性物質を不
動化したものを用いて行う免疫測定方法を提供する。
〜９５重量％、Na2Oの含有量が５〜６０重量％であるガ
ラス繊維から成る免疫測定用担体を提供する。さらに、
本発明は、本発明の免疫測定用担体に免疫活性物質を不
動化したものを用いて行う免疫測定方法を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】上記のように、本発明の免疫測定
用担体は、ガラス繊維から成り、該ガラス繊維中のSiO2
の含有量が４０〜９５重量％、好ましくは５５〜７０重
量％、Na2Oの含有量が５〜６０重量％、好ましくは１０
〜２０重量％である。SiO2含量及びNa2O含量が上記範囲
をはずれると本発明の効果を得ることができない。
用担体は、ガラス繊維から成り、該ガラス繊維中のSiO2
の含有量が４０〜９５重量％、好ましくは５５〜７０重
量％、Na2Oの含有量が５〜６０重量％、好ましくは１０
〜２０重量％である。SiO2含量及びNa2O含量が上記範囲
をはずれると本発明の効果を得ることができない。
【０００９】本発明に用いられるガラス繊維は、SiO2と
Na2Oのみから成っていてもよいし、これら両成分以外に
他の成分を含んでいてもよい。これら他の成分の例とし
て、P2O3、Al2O3 、K2O 、CaO 及びMgO 等を挙げること
ができるが、これらに限定されるものではなく、本発明
の効果を喪失せしめないものであればこれら以外の成分
を含んでいてもよい。P2O3、Al2O3 、K2O 、CaO 及びMg
O 等の第３成分の含有量はそれぞれの成分につき０〜１
０重量％が適当である。特に好ましいガラス繊維とし
て、SiO2を５５〜７０重量％、Na2Oを１２〜１８重量
％、P2O3を５〜７重量％、Al2O3 を４〜６重量％、K2O
を０〜２重量％、CaO を５〜７重量％、MgOを２〜４重
量％含むものを例示することができる。
Na2Oのみから成っていてもよいし、これら両成分以外に
他の成分を含んでいてもよい。これら他の成分の例とし
て、P2O3、Al2O3 、K2O 、CaO 及びMgO 等を挙げること
ができるが、これらに限定されるものではなく、本発明
の効果を喪失せしめないものであればこれら以外の成分
を含んでいてもよい。P2O3、Al2O3 、K2O 、CaO 及びMg
O 等の第３成分の含有量はそれぞれの成分につき０〜１
０重量％が適当である。特に好ましいガラス繊維とし
て、SiO2を５５〜７０重量％、Na2Oを１２〜１８重量
％、P2O3を５〜７重量％、Al2O3 を４〜６重量％、K2O
を０〜２重量％、CaO を５〜７重量％、MgOを２〜４重
量％含むものを例示することができる。
【００１０】ガラス繊維の直径は特に限定されないが、
０．５〜２．０μｍが適当である。また、ガラス繊維は
どのような形態にあってもよいが、メンブレン状の形態
にあるのものが利用し易く好ましい。この場合、メンブ
レンの目付重量は特に限定されないが９０〜１３０g/m2
程度が適当であり、また、厚さも特に限定されないが
０．３mmから０．６mm程度が適当である。なお、ガラス
ファイバーメンブレンはいくつか市販されており、市販
のガラスファイバーメンブレンの中で本発明の要件を満
足するものは本発明の免疫測定用担体として用いること
ができる。
０．５〜２．０μｍが適当である。また、ガラス繊維は
どのような形態にあってもよいが、メンブレン状の形態
にあるのものが利用し易く好ましい。この場合、メンブ
レンの目付重量は特に限定されないが９０〜１３０g/m2
程度が適当であり、また、厚さも特に限定されないが
０．３mmから０．６mm程度が適当である。なお、ガラス
ファイバーメンブレンはいくつか市販されており、市販
のガラスファイバーメンブレンの中で本発明の要件を満
足するものは本発明の免疫測定用担体として用いること
ができる。
【００１１】本発明の免疫測定用担体は、固相担体を用
いて行う免疫測定を行う方法のいずれにも用いることが
でき、これを用いた免疫測定方法自体は基本的に従来と
同様である。すなわち、本発明の免疫測定用担体には、
免疫活性物質を不動化する。ここで、免疫活性物質とし
ては、抗原抗体反応を行うことができるあらゆる物質を
意味し、抗原及び抗体のみならず、それらの断片、例え
ばハプテンや抗体のFab フラグメント、F(ab')2 フラグ
メント等をも包含する。このような免疫活性物質を本発
明の免疫測定用担体に不動化したものは従来と同様、例
えばサンドイッチ法に用いることができる。
いて行う免疫測定を行う方法のいずれにも用いることが
でき、これを用いた免疫測定方法自体は基本的に従来と
同様である。すなわち、本発明の免疫測定用担体には、
免疫活性物質を不動化する。ここで、免疫活性物質とし
ては、抗原抗体反応を行うことができるあらゆる物質を
意味し、抗原及び抗体のみならず、それらの断片、例え
ばハプテンや抗体のFab フラグメント、F(ab')2 フラグ
メント等をも包含する。このような免疫活性物質を本発
明の免疫測定用担体に不動化したものは従来と同様、例
えばサンドイッチ法に用いることができる。
【００１２】サンドイッチ法に用いる場合、従来と同
様、免疫活性物質を不動化した本発明の担体を、カゼイ
ンやウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等のタンパク質でブ
ロッキング後、検体と反応させる。次いで、担体を洗浄
後、第２抗体を反応させ、洗浄後、固相に残っている第
２抗体を測定する。第２抗体の測定は、予め第２抗体を
酵素、蛍光色素、ビオチン、放射性物質等で標識してお
き、これらの標識を検出することにより行うことができ
る。
様、免疫活性物質を不動化した本発明の担体を、カゼイ
ンやウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等のタンパク質でブ
ロッキング後、検体と反応させる。次いで、担体を洗浄
後、第２抗体を反応させ、洗浄後、固相に残っている第
２抗体を測定する。第２抗体の測定は、予め第２抗体を
酵素、蛍光色素、ビオチン、放射性物質等で標識してお
き、これらの標識を検出することにより行うことができ
る。
【００１３】驚くべきことに、本発明の免疫測定用担体
を用いると、免疫測定法における抗原抗体反応、すなわ
ち、例えばサンドイッチ法の場合には、担体に不動化さ
れた免疫活性物質と検体との反応、及び検体中の測定す
べき物質と第２抗体との反応を従来よりもはるかに短い
時間で行うことができる。例えば、後述の実施例では、
これらの抗原抗体反応の時間は僅か２分間であり、従来
法の数十分の１でよい。また、洗浄液や検体の量も従来
の半分ないし１／５程度でよい。抗原抗体反応が従来法
よりもはるかに速やかに進行する理由ははっきりとはわ
からないが、免疫活性物質が担体に大量に結合されるこ
とが理由の１つではないかと推測される。また、これが
ために検体や第２抗体の担体への非特異的結合が少なく
なり、洗浄液の必要量が少なくて済み、また、測定感度
が向上して検体量が少なくて済むのではないかと推測さ
れる。
を用いると、免疫測定法における抗原抗体反応、すなわ
ち、例えばサンドイッチ法の場合には、担体に不動化さ
れた免疫活性物質と検体との反応、及び検体中の測定す
べき物質と第２抗体との反応を従来よりもはるかに短い
時間で行うことができる。例えば、後述の実施例では、
これらの抗原抗体反応の時間は僅か２分間であり、従来
法の数十分の１でよい。また、洗浄液や検体の量も従来
の半分ないし１／５程度でよい。抗原抗体反応が従来法
よりもはるかに速やかに進行する理由ははっきりとはわ
からないが、免疫活性物質が担体に大量に結合されるこ
とが理由の１つではないかと推測される。また、これが
ために検体や第２抗体の担体への非特異的結合が少なく
なり、洗浄液の必要量が少なくて済み、また、測定感度
が向上して検体量が少なくて済むのではないかと推測さ
れる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。
【００１５】実施例１ サンドイッチＥＬＩＳＡによる
抗ＨＣＶ ＮＳ５抗体の測定 免疫測定用担体として、アドバンテック社製ガラスファ
イバーメンブレンＧＡ１００を５ｍｍ四方に切断したも
のを用いた。ＧＡ１００を構成するガラス繊維の組成を
下記表１に示す。また、ＧＡ１００を構成するガラス繊
維の直径は０．８μｍ〜１．５μｍであり、目付重量は
１１０g/m2であり、厚さは０．４５ｍｍであった。
抗ＨＣＶ ＮＳ５抗体の測定 免疫測定用担体として、アドバンテック社製ガラスファ
イバーメンブレンＧＡ１００を５ｍｍ四方に切断したも
のを用いた。ＧＡ１００を構成するガラス繊維の組成を
下記表１に示す。また、ＧＡ１００を構成するガラス繊
維の直径は０．８μｍ〜１．５μｍであり、目付重量は
１１０g/m2であり、厚さは０．４５ｍｍであった。
【００１６】
【表１】
【００１７】ＨＣＶペプチド抗原ＮＳ５ｂを０．０１Ｍ
ＰＢＳ（ｐＨ７）に１０μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、
４℃で２時間インキュベートすることにより抗原を担体
に不動化した。その後、０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）
中１％カゼインを３００μｌ滴下した。以上のようにし
て抗原を固相化し、ブロッキングしたメンブレンを十條
キンバリー社製キムタオルの上に載せて以下の操作を行
った。
ＰＢＳ（ｐＨ７）に１０μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、
４℃で２時間インキュベートすることにより抗原を担体
に不動化した。その後、０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）
中１％カゼインを３００μｌ滴下した。以上のようにし
て抗原を固相化し、ブロッキングしたメンブレンを十條
キンバリー社製キムタオルの上に載せて以下の操作を行
った。
【００１８】被検血清として、ＨＣＶ ＲＮＡが陽性の
３０例を用いた。被検血清を０．５Ｍ ＮａＣｌ及び１
％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液で１００倍
希釈後、３０μｌを滴下した。室温で２分間反応後、
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有０．０１Ｍ
ＰＢＳ（ｐＨ７）を３００μｌ滴下してＢＦ分離を行な
った。１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．０
１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴下し
た。室温で２分間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０
（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を３００
μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３３％
過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミンを
含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、１分
後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロールの発色
と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと比較
し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロール
と比較して発色が陰性コントロールと同程度あるいは低
いものとした。その結果、３０例中２２例が陽性を示し
た。
３０例を用いた。被検血清を０．５Ｍ ＮａＣｌ及び１
％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液で１００倍
希釈後、３０μｌを滴下した。室温で２分間反応後、
０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有０．０１Ｍ
ＰＢＳ（ｐＨ７）を３００μｌ滴下してＢＦ分離を行な
った。１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．０
１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴下し
た。室温で２分間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０
（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を３００
μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３３％
過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミンを
含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、１分
後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロールの発色
と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと比較
し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロール
と比較して発色が陰性コントロールと同程度あるいは低
いものとした。その結果、３０例中２２例が陽性を示し
た。
【００１９】比較例１ マイクロプレートのウェルを担
体として用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗ＨＣＶ
ＮＳ５抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ抗原を０．０１Ｍ ＰＢＳ
（ｐＨ７）に溶解し、０．１μｇ／ウェルの量でＮＵＮ
Ｃ社製マイクロプレート４７３７０９のウェルに加え、
室温で１時間インキュベートすることにより固相化し
た。次いで０．０５％ゼラチンを含む０．０１Ｍ ＰＢ
Ｓ（ｐＨ７）を用いてブロッキングを行なった。
体として用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗ＨＣＶ
ＮＳ５抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ抗原を０．０１Ｍ ＰＢＳ
（ｐＨ７）に溶解し、０．１μｇ／ウェルの量でＮＵＮ
Ｃ社製マイクロプレート４７３７０９のウェルに加え、
室温で１時間インキュベートすることにより固相化し
た。次いで０．０５％ゼラチンを含む０．０１Ｍ ＰＢ
Ｓ（ｐＨ７）を用いてブロッキングを行なった。
【００２０】被検血清としては、実施例１と同じ３０例
の血清を用いた。上記マイクロプレートの各ウェルに
０．５Ｍ ＮａＣｌ及び１％ＢＳＡを含む０．０１Ｍ
ＰＢＳで１００倍に希釈した被検血清を１００μｌ加
え、室温で３０分間反応させた。三光純薬社製マイクロ
プレートウォッシャーセラウォッシャーオートIIを３０
０μｌｘ５回用いてＢＦ分離のための洗浄を行なった。
１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇＧ、０．
５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．０１ＭＰＢ
Ｓ（ｐＨ７）を１００μｌずつ各ウェルに加え、室温で
３０分間反応させた。３００μｌｘ５回洗浄を行ない、
０．０３３％過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレ
ンジアミンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを
各ウェルに添加し、１５分後に２Ｎ硫酸を１００μｌ加
えて反応を停止し、４２０ｎｍで吸光度を測定し、ＯＤ
＞０．４００を陽性と判定した。３０例中１８例が陽性
を示した。
の血清を用いた。上記マイクロプレートの各ウェルに
０．５Ｍ ＮａＣｌ及び１％ＢＳＡを含む０．０１Ｍ
ＰＢＳで１００倍に希釈した被検血清を１００μｌ加
え、室温で３０分間反応させた。三光純薬社製マイクロ
プレートウォッシャーセラウォッシャーオートIIを３０
０μｌｘ５回用いてＢＦ分離のための洗浄を行なった。
１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇＧ、０．
５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．０１ＭＰＢ
Ｓ（ｐＨ７）を１００μｌずつ各ウェルに加え、室温で
３０分間反応させた。３００μｌｘ５回洗浄を行ない、
０．０３３％過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレ
ンジアミンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを
各ウェルに添加し、１５分後に２Ｎ硫酸を１００μｌ加
えて反応を停止し、４２０ｎｍで吸光度を測定し、ＯＤ
＞０．４００を陽性と判定した。３０例中１８例が陽性
を示した。
【００２１】実施例１と比較例１を比較すると、比較例
１では、固相化した抗原と被検血清中の抗体及び担体に
結合された該抗体とＰＯＤ標識抗ヒトＩｇＧ抗体との抗
原抗体反応はいずれも３０分間であるのに対し、実施例
１ではいずれも僅かに２分間である。従って、抗原抗体
反応に要した時間は実施例１では比較例１の僅かに１５
分の１である。さらに、用いた洗浄液の量は、比較例１
ではいずれも１５００μｌ（３００μｌｘ５回）である
のに対し、実施例１では３００μｌ（３００μｌｘ１
回）又は６００μｌ（３００μｌｘ２回）であり、洗浄
回数もずっと少ない。また、用いた被検血清の希釈物の
量も、比較例１では１００μｌであるのに対し、実施例
１では３０μｌである。このように、実施例１では従来
法である比較例１に比べて抗原抗体反応に要する時間が
１５分の１と短く、洗浄に要する洗浄液の量及び回数、
並びに被検血清の量も少ないのにもかかわらず、陽性血
清が実施例１では２２例、比較例１では１８例であるか
ら、実施例１の方が測定感度が高い。
１では、固相化した抗原と被検血清中の抗体及び担体に
結合された該抗体とＰＯＤ標識抗ヒトＩｇＧ抗体との抗
原抗体反応はいずれも３０分間であるのに対し、実施例
１ではいずれも僅かに２分間である。従って、抗原抗体
反応に要した時間は実施例１では比較例１の僅かに１５
分の１である。さらに、用いた洗浄液の量は、比較例１
ではいずれも１５００μｌ（３００μｌｘ５回）である
のに対し、実施例１では３００μｌ（３００μｌｘ１
回）又は６００μｌ（３００μｌｘ２回）であり、洗浄
回数もずっと少ない。また、用いた被検血清の希釈物の
量も、比較例１では１００μｌであるのに対し、実施例
１では３０μｌである。このように、実施例１では従来
法である比較例１に比べて抗原抗体反応に要する時間が
１５分の１と短く、洗浄に要する洗浄液の量及び回数、
並びに被検血清の量も少ないのにもかかわらず、陽性血
清が実施例１では２２例、比較例１では１８例であるか
ら、実施例１の方が測定感度が高い。
【００２２】実施例２ サンドイッチＥＬＩＳＡによる
抗ＨＣＶ ＮＳ４抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用い、ＨＣ
Ｖペプチド抗原ＮＳ４を実施例１と同様に担体に不動化
して抗ＨＣＶ ＮＳ４抗体の測定を行なった。被検血清
として、ＨＣＶ ＲＮＡが陽性の血清５例を用いた。抗
原を担体に固相化するために、抗原を１０μｇ／ｍｌ
（Ａ法）又は１μｇ／ｍｌ（Ｂ法）の濃度で０．０１Ｍ
ＰＢＳ（ｐＨ７）に溶解した溶液を用い、その他は実
施例１と全く同じ方法で免疫測定を行なった。その結
果、Ａ法では５例中５例が陽性であり、Ｂ法では５例中
３例が陽性であった。
抗ＨＣＶ ＮＳ４抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用い、ＨＣ
Ｖペプチド抗原ＮＳ４を実施例１と同様に担体に不動化
して抗ＨＣＶ ＮＳ４抗体の測定を行なった。被検血清
として、ＨＣＶ ＲＮＡが陽性の血清５例を用いた。抗
原を担体に固相化するために、抗原を１０μｇ／ｍｌ
（Ａ法）又は１μｇ／ｍｌ（Ｂ法）の濃度で０．０１Ｍ
ＰＢＳ（ｐＨ７）に溶解した溶液を用い、その他は実
施例１と全く同じ方法で免疫測定を行なった。その結
果、Ａ法では５例中５例が陽性であり、Ｂ法では５例中
３例が陽性であった。
【００２３】比較例２ 本発明外のガラス繊維を担体と
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗ＨＣＶ Ｎ
Ｓ４抗体の測定 ワットマン社製ガラスファイバーメンブレンＧＦ／Ｄを
免疫測定用担体として用いることを除き、実施例２と同
じ操作を行なった。なお、ＧＦ／Ｄの化学組成はSiO2９
９％であり、目付重量は１２０g/m2であり、厚さは０．
６８ｍｍである。その結果、全て陽性を示し（陽性例５
例中５例陽性、陰性例５例中５例陽性）、Ａ法、Ｂ法と
も判定ができなかった。
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗ＨＣＶ Ｎ
Ｓ４抗体の測定 ワットマン社製ガラスファイバーメンブレンＧＦ／Ｄを
免疫測定用担体として用いることを除き、実施例２と同
じ操作を行なった。なお、ＧＦ／Ｄの化学組成はSiO2９
９％であり、目付重量は１２０g/m2であり、厚さは０．
６８ｍｍである。その結果、全て陽性を示し（陽性例５
例中５例陽性、陰性例５例中５例陽性）、Ａ法、Ｂ法と
も判定ができなかった。
【００２４】実施例３ サンドイッチＥＬＩＳＡによる
抗梅毒抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用いた。ネ
イティブ梅毒抗原（ＴＰ抗原）を０．０１Ｍ ＰＢＳ
（ｐＨ７）に１０μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、この溶液
３０μｌを担体に加え、室温で１５分間インキュベート
した。次いで、０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）中１０％
ヤギ血清１００μｌを滴下してブロッキングを行なっ
た。このようにして抗原を固相化したメンブレンを十條
キンバリー製キムタオルの上に載せて以下の操作を行な
った。
抗梅毒抗体の測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用いた。ネ
イティブ梅毒抗原（ＴＰ抗原）を０．０１Ｍ ＰＢＳ
（ｐＨ７）に１０μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、この溶液
３０μｌを担体に加え、室温で１５分間インキュベート
した。次いで、０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）中１０％
ヤギ血清１００μｌを滴下してブロッキングを行なっ
た。このようにして抗原を固相化したメンブレンを十條
キンバリー製キムタオルの上に載せて以下の操作を行な
った。
【００２５】被検血清として、ＴＰＨＡ法陽性血清１５
例、陰性血清５例を用いた。被検血清を０．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ及び１％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液
で２００倍希釈後、３０μｌを滴下した。室温で９０秒
間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を５０μｌ滴下してＢＦ
分離を行なった。１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗
ヒトＩｇＧ、０．５ＭＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴
下した。室温で９０秒間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ
２０（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を１
００μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３
３％過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミ
ンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、
３０秒後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロール
の発色と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと
比較し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロ
ールと比較して発色が陰性コントロールと同程度あるい
は低いものとした。その結果、ＴＰＨＡ法陽性血清１５
例中１５例が陽性を示し、陰性血清５例中５例が陰性を
示した。ＴＰＨＡ法に比べて著しく短時間（ＴＰＨＡ法
の測定所要時間は２時間）に判定したのにもかかわら
ず、測定感度は同等であり、迅速な測定を行なうことが
できた。
例、陰性血清５例を用いた。被検血清を０．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ及び１％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液
で２００倍希釈後、３０μｌを滴下した。室温で９０秒
間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を５０μｌ滴下してＢＦ
分離を行なった。１μｇ／ｍｌカペル社製ＰＯＤ標識抗
ヒトＩｇＧ、０．５ＭＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴
下した。室温で９０秒間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ
２０（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を１
００μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３
３％過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミ
ンを含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、
３０秒後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロール
の発色と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと
比較し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロ
ールと比較して発色が陰性コントロールと同程度あるい
は低いものとした。その結果、ＴＰＨＡ法陽性血清１５
例中１５例が陽性を示し、陰性血清５例中５例が陰性を
示した。ＴＰＨＡ法に比べて著しく短時間（ＴＰＨＡ法
の測定所要時間は２時間）に判定したのにもかかわら
ず、測定感度は同等であり、迅速な測定を行なうことが
できた。
【００２６】比較例３ 本発明外のガラス繊維を担体と
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗梅毒抗体の
測定 免疫測定用担体として比較例２で用いたものと同じもの
を用いることを除き、実施例３と全く同じ操作を行なっ
た。その結果、ＴＰＨＡ法陽性血清１５例中１５例が陽
性を示し、陰性５例中０例が陰性を示した。従って、こ
の方法では正確な判定を行なうことができなかった。
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによる抗梅毒抗体の
測定 免疫測定用担体として比較例２で用いたものと同じもの
を用いることを除き、実施例３と全く同じ操作を行なっ
た。その結果、ＴＰＨＡ法陽性血清１５例中１５例が陽
性を示し、陰性５例中０例が陰性を示した。従って、こ
の方法では正確な判定を行なうことができなかった。
【００２７】実施例４ サンドイッチＥＬＩＳＡによる
ヒトＩｇＥの測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用いた。抗
ヒトＩｇＥ抗体を０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）に１０
μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、この溶液３０μｌを担体に
加え、室温で１２０分間インキュベートした。次いで、
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）中１％カゼイン１００μ
ｌを滴下してブロッキングを行なった。このようにして
抗原を固相化したメンブレンを十條キンバリー製キムタ
オルの上に載せて以下の操作を行なった。
ヒトＩｇＥの測定 実施例１で用いたのと同じ免疫測定用担体を用いた。抗
ヒトＩｇＥ抗体を０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）に１０
μｇ／ｍｌの濃度で溶解し、この溶液３０μｌを担体に
加え、室温で１２０分間インキュベートした。次いで、
０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）中１％カゼイン１００μ
ｌを滴下してブロッキングを行なった。このようにして
抗原を固相化したメンブレンを十條キンバリー製キムタ
オルの上に載せて以下の操作を行なった。
【００２８】被検血清として、ＲＡＳＴ法陽性血清１５
例、陰性血清５例を用いた。被検血清を０．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ及び１％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液
で１０倍希釈後、３０μｌを滴下した。室温で１０分間
反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有０．
０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を５０μｌ滴下してＢＦ分離
を行なった。１μｇ／ｍｌダゴ社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩ
ｇＥ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．
０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴下し
た。室温で１０分間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０
（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を１００
μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３３％
過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミンを
含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、６０
秒後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロールの発
色と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと比較
し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロール
と比較して発色が陰性コントロールと同程度あるいは低
いものとした。その結果、ＲＡＳＴ法陽性血清１５例中
１５例が陽性を示し、陰性血清５例中５例が陰性を示し
た。ＲＡＳＴ法に比べて著しく短時間（ＲＡＳＴ法の測
定所要時間は４時間）に判定したのにもかかわらず、測
定感度は同等であり、迅速な測定を行なうことができ
た。
例、陰性血清５例を用いた。被検血清を０．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌ及び１％ＢＳＡを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液
で１０倍希釈後、３０μｌを滴下した。室温で１０分間
反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（商品名）含有０．
０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を５０μｌ滴下してＢＦ分離
を行なった。１μｇ／ｍｌダゴ社製ＰＯＤ標識抗ヒトＩ
ｇＥ、０．５Ｍ ＮａＣｌ、１％ＢＳＡを含有する０．
０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を調製後、３０μｌを滴下し
た。室温で１０分間反応後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０
（商品名）含有０．０１Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７）を１００
μｌｘ２回滴下してＢＦ分離を行なった。０．０３３％
過酸化水素、１ｍｇ／ｍｌオルトフェニレンジアミンを
含む０．１Ｍクエン酸緩衝液１００μｌを滴下し、６０
秒後に判定した。判定は陽性及び陰性コントロールの発
色と比較して行なった。陽性は陰性コントロールと比較
し、発色の度合いが強いもの、陰性は陰性コントロール
と比較して発色が陰性コントロールと同程度あるいは低
いものとした。その結果、ＲＡＳＴ法陽性血清１５例中
１５例が陽性を示し、陰性血清５例中５例が陰性を示し
た。ＲＡＳＴ法に比べて著しく短時間（ＲＡＳＴ法の測
定所要時間は４時間）に判定したのにもかかわらず、測
定感度は同等であり、迅速な測定を行なうことができ
た。
【００２９】比較例４ 本発明外のガラス繊維を担体と
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによるヒトＩｇＥの
測定 免疫測定用担体として比較例２で用いたものと同じもの
を用いることを除き、実施例４と全く同じ操作を行なっ
た。その結果、ＲＡＳＴ法陽性血清１５例中１５例が陽
性を示し、陰性５例中０例が陰性を示した。従って、こ
の方法では正確な判定を行なうことができなかった。
して用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによるヒトＩｇＥの
測定 免疫測定用担体として比較例２で用いたものと同じもの
を用いることを除き、実施例４と全く同じ操作を行なっ
た。その結果、ＲＡＳＴ法陽性血清１５例中１５例が陽
性を示し、陰性５例中０例が陰性を示した。従って、こ
の方法では正確な判定を行なうことができなかった。
【００３０】
【発明の効果】本発明により、従来の免疫測定法よりも
短い時間で免疫測定を行うことができ、また、用いる洗
浄液や検体の量も従来より少なくすることができる免疫
測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法が提供され
た。上記実施例に具体的に記載されているように、本発
明の免疫測定用担体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡに
よれば、５分程度で測定が可能になった。また、用いる
検体や洗浄液の量も従来法よりも少なくて済んだ。反応
時間が短時間で、検体や洗浄液の量も少ないにもかかわ
らず、マイクロプレートを用いた従来のＥＬＩＳＡ法よ
りも高感度に免疫測定を行なうことができた。このよう
に、本発明により、迅速で高感度な免疫測定が可能とな
った。さらに、マイクロプレートを用いる場合、プレー
トウォッシャーやプレートリーダーが必要であるが、本
発明の方法によれば特別な機器を必要とせず、非常時や
電気のない発展途上の場所でも使用することができる。
短い時間で免疫測定を行うことができ、また、用いる洗
浄液や検体の量も従来より少なくすることができる免疫
測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法が提供され
た。上記実施例に具体的に記載されているように、本発
明の免疫測定用担体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡに
よれば、５分程度で測定が可能になった。また、用いる
検体や洗浄液の量も従来法よりも少なくて済んだ。反応
時間が短時間で、検体や洗浄液の量も少ないにもかかわ
らず、マイクロプレートを用いた従来のＥＬＩＳＡ法よ
りも高感度に免疫測定を行なうことができた。このよう
に、本発明により、迅速で高感度な免疫測定が可能とな
った。さらに、マイクロプレートを用いる場合、プレー
トウォッシャーやプレートリーダーが必要であるが、本
発明の方法によれば特別な機器を必要とせず、非常時や
電気のない発展途上の場所でも使用することができる。
Claims (17)
- 【請求項１】 SiO2の含有量が４０〜９５重量％、Na2O
の含有量が５〜６０重量％であるガラス繊維から成る免
疫測定用担体。 - 【請求項２】 SiO2の含有量が５５〜７０重量％、Na2O
の含有量が１０〜２０重量％である請求項１記載の免疫
測定用担体。 - 【請求項３】 前記ガラス繊維は、P2O3を０〜１０重量
％、Al2O3 を０〜１０重量％、K2O を０〜１０重量％、
CaO を０〜１０重量％、MgO を０〜１０重量％含む請求
項１又は２記載の免疫測定用担体。 - 【請求項４】 前記ガラス繊維は、SiO2を５５〜７０重
量％、Na2Oを１２〜１８重量％、P2O3を５〜７重量％、
Al2O3 を４〜６重量％、K2O を０〜２重量％、CaO を５
〜７重量％、MgO を２〜４重量％含む請求項３記載の免
疫測定用担体。 - 【請求項５】 前記ガラス繊維の直径が０．５〜２．０
μｍである請求項１ないし４のいずれか１項記載の免疫
測定用担体。 - 【請求項６】 ガラス繊維から成るメンブレンの形態に
ある請求項１ないし５のいずれか１項に記載の免疫測定
用担体。 - 【請求項７】 前記メンブレンの目付重量が９０〜１３
０ g/m2 である請求項６記載の免疫測定用担体。 - 【請求項８】 前記メンブレンの厚さが0.3 mmから0.6
mmである請求項６又は７記載の免疫測定用担体。 - 【請求項９】 サンドイッチ法用の担体である請求項１
ないし８のいずれか１項記載の免疫測定用担体。 - 【請求項１０】 請求項１ないし９のいずれか１項記載
の免疫測定用担体に免疫活性物質を不動化したものを用
いて行う免疫測定方法。 - 【請求項１１】 サンドイッチ法により行う請求項１０
記載の方法。 - 【請求項１２】 サンドイッチＥＬＩＳＡにより行う請
求項１１記載の方法。 - 【請求項１３】 抗梅毒抗体を測定する請求項１０ない
し１２のいずれか１項記載の方法。 - 【請求項１４】 ＩｇＥを測定する請求項１０ないし１
２のいずれか１項記載の方法。 - 【請求項１５】 抗ＨＣＶ抗体を測定する請求項１０な
いし１２のいずれか１項記載の方法。 - 【請求項１６】 抗ＨＣＶ ＮＳ５抗体を測定する請求
項１５記載の方法。 - 【請求項１７】 抗ＨＣＶ ＮＳ４抗体を測定する請求
項１５記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27715496A JPH10104237A (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | 免疫測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法 |
| EP97941250A EP0881493A4 (en) | 1996-09-27 | 1997-09-26 | IMMUNOASSAY CARRIER AND IMMUNOASSAY PROCESS THEREFOR |
| PCT/JP1997/003428 WO1998013691A1 (fr) | 1996-09-27 | 1997-09-26 | Support de dosage immunologique et procede de dosage immunologique avec ce support |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27715496A JPH10104237A (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | 免疫測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10104237A true JPH10104237A (ja) | 1998-04-24 |
Family
ID=17579560
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27715496A Pending JPH10104237A (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | 免疫測定用担体及びそれを用いた免疫測定方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0881493A4 (ja) |
| JP (1) | JPH10104237A (ja) |
| WO (1) | WO1998013691A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100346163C (zh) * | 2000-02-07 | 2007-10-31 | 协和梅迪克斯株式会社 | 物质的检测方法和检测仪器 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DD214695B1 (de) * | 1983-04-19 | 1987-06-03 | Akad Wissenschaften Ddr | Festphasen-immunoassay zur bestimmung von zirkulierenden immunkomplexen |
| DD218189A1 (de) * | 1983-09-10 | 1985-01-30 | Akad Wissenschaften Ddr | Festphasen-immunoassay zur bestimmung von antigenen und antikoerpern an glasoberflaechen |
| US4748121A (en) * | 1984-11-30 | 1988-05-31 | Ppg Industries, Inc. | Porous glass fibers with immobilized biochemically active material |
| JPS61264058A (ja) * | 1985-05-17 | 1986-11-21 | Taoka Chem Co Ltd | フルオラン化合物 |
| CS258181B1 (cs) * | 1986-11-18 | 1988-07-15 | Miroslav Marek | Způsob přípravy nosičů a (mobilizovanými protilátkami pro imunochemická stanoveníZpůsob přípravy nosičů a (mobilizovanými protilátkami pro imunochemická stanovení |
| JPH0730427B2 (ja) * | 1986-12-13 | 1995-04-05 | 新日本製鐵株式会社 | 溶接性に優れた高耐食性二相ステンレス鋼 |
| DE69232906T2 (de) * | 1991-11-21 | 2004-01-15 | Common Services Agency Edinbur | Detektion des Hepatis-C Virus. |
-
1996
- 1996-09-27 JP JP27715496A patent/JPH10104237A/ja active Pending
-
1997
- 1997-09-26 WO PCT/JP1997/003428 patent/WO1998013691A1/ja not_active Application Discontinuation
- 1997-09-26 EP EP97941250A patent/EP0881493A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1998013691A1 (fr) | 1998-04-02 |
| EP0881493A1 (en) | 1998-12-02 |
| EP0881493A4 (en) | 2000-05-17 |
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