【発明の詳細な説明】
新規ヒト白血球エラスターゼ(HLE)インヒビター、
ならびに関連する薬学的組成物および使用方法
技術分野
本発明は、概してヒト白血球エラスターゼ(HLE)活性を阻害する薬剤に関し、
詳細には、特定の新規HLEインヒビターに関する。本発明はまた、高レベルのHLE
に関連する疾患状態を治療するための方法および薬学的組成物に関する。
背景
ヒト白血球エラスターゼは、身体全体に広く分散するセリンプロテアーゼであ
り、身体の正常な炎症反応の一部として、異物を分解する重要な役割を果たす。
高レベルのHLEの長期間の曝露は、疾患状態（例えば、肺気腫、成人呼吸促進症
候群(ARDS)、慢性気管支炎、嚢胞性腺維症、慢性関節リウマチ、およびアテロー
ム硬化症）の開始(onset)と関連する。例えば、A．Janoff、Am．Rev．Respir．D
is．132:417-433(1985)；J．C．Taylorら、Pulmonary Emphysema and Proteolys
is、New York：Academic Press、1987；C．-B．Laurellら、Scand．J．Clin．La
b．Invest．15:132-140(1963)；T．A．Merrittら、J．Clin．Invest．72:656-66
6(1983)；R．A．Stockleyら、Ann．N.Y．Acad．Sci．624:257-266(1991)；A．H.
Jacksonら、J．Respir．Dis．65:114-124(1984)；L．Eskerotら、Adv．Exp．Me
d．Biol．167:335-344(1984)；およびA．Janoff、Annu．Rev．Med．36:207-216(
1985)参照。上記の疾患に関連する過剰レベルのHLEは、その天然のインヒビター
であるα1-プロテアーゼインヒビター(α1-PI)の不十分な産生の結果であると考
えられている。
HLE関連疾患についてのプロテアーゼ-抗プロテアーゼ不均衡理論は、α1-PIを
固有に欠損するヒトが、気腫の促進した形態を発生するという所見から始まった
。C．-B．Laurellら、上記。タバコの煙のような周囲のオキシダントは、阻害活
性に必要不可欠なα1-PIのメチオニン残基を酸化し得ることが示された(H．Carp
ら、Proc．Natl．Acad．Sci．770:2041-2045(1982)）。生じた酸化されたα1-PI
は、
α1-PIよりも効力の規模が小さいオーダーである。HLEの走化性特性により、よ
り多くの好中球が炎症部位へ補充される。新たに補充された好中球による、より
多くのHLEの放出によって初めの不均衡が拡大する。
HLE関連疾患の治療上の処置に対する合理的なアプローチは、HLEに対する外来
から産生されるインヒビターを用いて、プロテアーゼ-抗プロテアーゼの不均衡
を再確立することである。研究者は、適切なクローニングベクターを開発し、そ
して組換え技術を用いて天然のインヒビターα1-PIを発現しており(H．P．Schne
bli、Ann．N.Y．Acad．Sci．624:212-218(1991))、そしてα1-PIを用いる増強療
法(augmentation)治療が臨床評価されている。このアプローチは、治療剤が、天
然に生じる物質であり、そしてHLEに対する天然のインヒビターである点で利点
を有するが、α1-PIのようなペプチドに用いられる費用および投与経路は、この
治療にとって余り望ましいものではない。
いくつかのアプローチが、HLEに対する低分子量のメカニズムベースのインヒ
ビターを見出すために研究されている。メカニズムベースのインヒビターは、特
定のクラスの酵素（例えば、セリンプロテアーゼ）に結合し、そして通常基質の
ようにプロセスされる化合物であるが、プロセシングの間にインヒビターは活性
部位残基と反応し、そして酵素の裂け目から徐々に放出されるか、または全く放
出されないかのいずれかである。メカニズムベースのインアクチベーター、（す
なわち、不可逆的に作用するインヒビター）は、酵素プロセシングを行うまで(u
ntil enzymatic processing)、完全に非反応性である点でアルキル化剤とは明確
に異なる。HLE作用のメカニズムは充分理解されており、スキームＩに示すよう
に、５つの主要な工程からなる。ミカエリス複合体を最初に形成した後、基質カ
ルボキシルが活性部位セリン(Ser-195)により攻撃され、四面体中間体を形成し
、そして崩壊してアシル化されたHLE中間体を形成する(Ｃ末端が切断された産物
が放出される)。加水分解により酵素が再生され、Ｎ末端が切断された産物を放
出する。一般に、HLEに対するメカニズムベースのインヒビターは、非常に安定
なm四面体中間体を形成するか、または酵素に対する別の基質として作用するか
のいずれかであるが、一方、HLEのメカニズムベースのインアクチベーターは、
耐加水分解性の、非常に安定なアシル化されたHLE中間体を形成する。
メカニズムベースのインヒビターを開発する取り組みは、２つの合理的なデザ
インストラテジーに分かれ得る：一方は、ペプチド由来のインヒビターの開発に
関するものであり、他方は、非ペプチドのインヒビターの開発に関するものであ
る。一般に、ペプチド由来のインヒビターは、天然の基質の配列に似せてデザイ
ンされ、安定なテトラヘドラルな中間体を形成するように作用する。ペプチド由
来のインヒビターの例としては、ホウ酸(boronic acid)、アルデヒド、α-ジケ
トンおよびα-ジケトンおよびα-ケトエステル、α-フルオロケトン誘導体、お
よびα-ケトベンズオキサゾール誘導体が挙げられる(D．H．Kin derら、J．Med.
Chem．28:1917-1925(1985)；C．H．Hassalら、FEBS Lett．183:201-205(1985)
；S．Mehdiら、Biochem．Biophys．Res．Commun．166:201-205(1990)；R．A．Wi
ldongerら、「α,α-ジフルオロ-β-ケトアミドによるヒト白血球エラスターゼ
のインビトロおよびインビボでの阻害」、Eleventh American Symposimu Abstra
cts、ポスター87、University of California（San Diego）にて、1989年７月９
日〜14日に公開；J．W．Skilesら、J．Med．Chem．35:641-662(1992)；およびP
．D．Edwards、J．Am．Chem．Soc．114:1854-1863(1992))。セリンプロテアーゼ
に対して特異的であって、HLEに対していくらか選択性を示す多くの非ペプチド
インヒビターが発見されている。これらの化合物は、一般的には、安定なアシル
化された酵素中間体を形成することによって、酵素を不活性化するように作用す
る。HLEの非ペプチドのメカニズムベースのインアクチベーターの例としては、
インノールラクトン、イソクマリン、セファロスポリン、アゼチジノン、および
ベンゾキサジノンが挙げられる(Copp，L．J．ら、Biochemistry 26:169-178(198
7)；Harper，J．W．ら、Biochemistry 24:7200-7213(1985)；Hernandez，M. A．
ら、J．Med．Chem．35:1121-1129(1992)；Harper，J．W．ら、Biochemistry 24:
1831-1841(1985)；Finke，P．E．ら、J．Med．Chem．35:3731-3744(1992)；Shah
，S．K．ら、J．Med．Chem．35:3745-3754(1992)；Krantz A.ら、J．Med．Chem
．33:464-479(1990))。
しかし、報告されたHLEメカニズムベースのインヒビターの大部分は、薬剤開
発(pharmaceutical development)を不適切にさせる血漿溶解性、プロテアーゼ安
定性、および／または酵素特異性に欠ける。従って、気腫および他のHLE関連疾
患を治療することにおいて効果的である新規な治療剤を発見し、開発する必要性
が残されている。
本発明は、先行技術の化合物の上記の欠点を有さない新規なクラスのHLEイン
ヒビターに関する。このインヒビターは、以下で詳細に議論されるような６位で
置換されたベンゾキサジノンである。これらの化合物の有効性は、Ｒ6での置換
が非常に不利であり、効果的なHLEインヒビターではない化合物を生じるという
当該分野における教示の点から非常に驚くべきものである(例えば、A．Krantzら
、J．Med．Chem．33:464-479(1990)参照)。この新規化合物は、HLEの効力があり
、かつ特異的なインヒビターであり、先のベンゾキサジノンインヒビターよりも
大きなバイオアベイラビリティを有するようにデザインされる。
関連技術の概観
前節で引用された刊行物に加え、以下の文献が、ベンゾキサジノンおよび／ま
たはHLEインヒビターに関連するとして重要である：
Kokuboらの米国特許第4,980,287号は、ペプチド結合点として７位のベンゾキ
サジノン環を示している。開示の構造は、以下の構造式を有する4H-3,1-ベンゾ
キサジン-4-オンである：
ここで、Ｒは水素原子またはアルキル基であって、Ａはアミノ酸残基または２個
〜３個のアミノ酸残基を有するペプチドであって、Ｙは保護基であり、そしてＸ
はアルキル、フルオロアルキル、ＯＲ'、またはＮＨＲ'であり、ここで、Ｒ'は
アルキル基である。これらの化合物は、セリンプロテアーゼ（特にヒト白血球エ
ラスターゼ）のインヒビターであると述べられている。
Krantzらの米国特許第4,657,893号は、以下の構造式を有する4H-3,1-ベンゾキ
サジン-4-オンならびにその薬学的に受容可能なエステルおよび塩を開示してい
る：
ここで、Ｒ1は水素または低級アルキルであり、Ｒ2およびＲ3はそれぞれ独立し
て、水素、ハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級チオアルキ
ル、-ＮＯ2、-Ｎ(Ｒ')2、-ＮＲ'ＣＯＲ'、-ＮＨＣＯＮ(Ｒ')2、または-ＮＨＣＯ
ＯＲ'であり、そしてＸは-ＮＨＲのような基である。
Powersの米国特許第4,847,202号は、HLEの阻害に重要であるとしてベンゾキサ
ジノン環を同定している。以下の構造式を有する一般的なセリンプロテアーゼ可
逆性インヒビターが開示されている：
ここで、ＺはＣＯ、ＳＯ、ＳＯ2、ＣＣｌ、およびＣＦからなる群から選択され
、ＹはＯ、Ｓ、およびＮＨからなる群から選択され、そしてＸはＮおよびＣＨか
らなる群から選択され、ＲはＣ1-6アルキル、フェニルを含有するＣ1-4アルキル
、およびC1-6フルオロアルキルからなる群から選択される。
Krantzらの米国特許第4,745,116号は、米国特許第4,665,070号と類似する。以
下の構造式を有する2-オキシ-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンまたはその薬学的
に受容可能な酸付加塩が開示されている：
ここで、ａは１〜４の整数であり；Ａは結合または１個〜８個の炭素原子を有す
るアルキレンであり；Ｒは水素、フェニル、イミダゾリル、または３個〜６個の
炭素原子を有するシクロアルキルであり、ここで該フェニル、イミダゾリル、ま
たはシクロアルキル環は、１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキル、-Ｎ(Ｒ1
)2、-ＮＯ2、ハロまたは１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキルチオから
なる群から独立して選択される１個〜３個の置換基によって必要に応じて置換さ
れ、そして各Ｒ'は、独立してヒドロキシ、ベンジルオキシ、１個〜６個の炭素
原子を有する低級アルキル、２個〜６個の炭素原子を有する低級アルケニル、１
個〜６個の炭素原子を有する低級アルコキシ、１個〜６個の炭素原子を有する低
級アルキルチオまたはハロ低級アルキル、ハロ、-ＮＯ2、-Ｎ(Ｒ1)2、-ＮＲ1Ｃ
Ｏ2Ｒ2、-ＮＲ1ＣＯＲ2、および-ＮＲ1Ｃ(Ｏ)Ｎ(Ｒ1)2からなる群から選択され
、ここで、各Ｒ1は、独立して水素または１個〜４個の炭素原子を有する低級ア
ルキルであるか、または一緒になってピペラジン、または環窒素上で１個〜４個
の炭素原子を有する低級アルキルまたは-ＣＨ2ＣＨ2ＯＨにより必要に応じて置
換されるピペラジン環を形成し；各Ｒ2は、独立して１個〜４個の炭素原子を有
する低級アルキル基であり、Ａは、Ｒが水素である際には、アルキレン基である
。
Dunnら、J．Heterocyclic Chem．20:779-780(1983)、およびHedstromら、Bioc
hemistry 23:1753-1759(1984)は、セリンプロテアーゼを阻害するヘテロ環構造
に関する。
Spencerら、Biochem．Biophys．Res．Commun．140:928-931(1986)は、２位の
重要性および２位の置換基の電子吸引性効果の重要性を検討し、そして6-メチル
および6-メトキシ誘導体を含む、５、６、７、および８位の置換基を有する化合
物を提案している。
Krantzら、J．Med．Chem．30:591-597(1987)は、５位の水素をアルキル基に置
換する効果を検討し、アルキルの立体障害が酵素の脱アシル化プロセスを緩慢に
する（すなわち、インヒビターがインアクチベーターとなる）ことを見出してい
る。
Steinら、Biochemistry 26:4126-4130(1987)は、HLEの効力および特異性を増
大するような方法で、２位でのアミノ酸の取り込みを記載している。
発明の要旨
従って、本発明の第一の目的は、HLEの効力があり、かつ特異的なインヒビタ
ーである新規化合物を提供することにより、当該分野の上記必要性と取り組むこ
とである。
本発明の別の目的は、セリンプロテアーゼ活性に関連する疾患状態または他の
生理学的状態を治療するための薬学的組成物を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、高レベルのHLEに関連する疾患状態または他の生
理学的状態を治療するための薬学的組成物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、動物においてセリンプロテアーゼを阻害するための
方法であって、本発明の化合物の治療的に有効な量を治療を受ける動物に投与す
る工程を包含する方法を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、高レベルのHLEに関連する疾患状態または他の生
理学的状態を治療するための方法であって、本発明の化合物の治療的に有効な量
を治療を受ける個体に投与する工程を包含する方法を提供することである。
本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴は、一部が以下の説明に示され
ており、そして一部が以下の試験を行うことにより当業者に明らかであるか、ま
たは本発明の実施により理解され得る。
第１の実施態様において、本発明は、HLEインヒビターとして有用な特定の新
規化合物に関する。この開示され、かつ請求の範囲に記載された新規化合物は、
現在、顕著なHLE阻害活性を有し、かつ容易に合成され得る。この化合物は、以
下の構造式(I)を有する4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンアナログである：
ここで、
Ｒ1は、-ＣＺ3、-ＯＲ10、-Ｓ-Ｒ11、および-ＮＲ12 2からなる群から選択され
、ここでＺはハロゲンであり、Ｒ10、Ｒ11、およびＲ12は、独立して水素および
低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、および低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ3は、独立して水素および低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ4は、水素、-(ＣＨ2)q-Ｘ、-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-ＮＨＸ、-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-Ａ
Ａ2-ＮＨＸ、-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-ＡＡ2-ＡＡ3-ＮＨＸ、-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-ＡＡ2-Ａ
Ａ3-ＡＡ4-ＮＨＸ、-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-ＡＡ2-ＡＡ3-ＡＡ4-ＡＡ5-ＮＨＸ、および
-(ＣＨ2)q-ＡＡ1-ＡＡ2-ＡＡ3-ＡＡ4-ＡＡ5-ＡＡ6-ＮＨＸからなる群から選択さ
れ、ここでｑは０または１であり、ＡＡ1、ＡＡ2、ＡＡ3、ＡＡ4、ＡＡ5、およ
びＡＡ6はアミノ酸であり、そしてＸは、水素、t-ブチルオキシカルボニル、ベ
ンジルオキシカルボニル、
および
からなる群から選択され；
ここで、Ｒ13は、独立してハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、アミノお
よびニトロからなる群から選択され、そしてｉは１から５までの範囲の整数であ
り（そしてここでＡＡ1はカルボニル基を介して示される窒素原子に結合（すな
わち、通常のペプチド結合）し、そしてＡＡ2、ＡＡ2なども同様に結合）；
Ｒ5およびＲ6は、独立して水素、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ
、第１級アミノ、アルキル置換第２級アミノ、ジアルキル置換第３級アミノ、お
よび-(ＣＯ)-Ｒ12からなる群から選択され、ここで、Ｒ12は、水素、ヒドロキシ
ル、アルキル、またはハロゲンであり；
Ｒ7は、水素および低級アルキルからなる群から選択されるか、またはｎが１
である場合は、Ｒ7およびＲ2は、必要に応じて１個〜３個のアルキル基で置換さ
れた低級アルキレンブリッジを形成し得るか、またはｍが０である場合は、Ｒ7
およびＲ3は、必要に応じて１個〜３個のアルキル基で置換された低級アルキレ
ンブリッジを形成し得；そして
Ｒ8およびＲ9は、独立して低級アルキル、単環式アリールまたは単環式アラル
キルのいずれかであり；
ｍおよびｎは、０、１、または２であり、但し、ｍとｎとの合計は２以下であ
る。
本発明はまた、薬学的に受容可能なキャリアと合わせて１つまたはそれ以上の
上記化合物を含有する薬学的組成物に関し、さらにセリンプロテアーゼを阻害す
る方法を包含し、該方法は、本発明の化合物の治療的に受容可能な量を、治療を
受ける個体に投与する工程を包含する。高レベルのHLEに関連する疾患状態また
は他の生理学的状態を治療するための方法もまた提供される。これらの治療方法
は、意図される治療結果を達成するに効果的な投与方法の文脈内で、上記の式(I
)で定義されるようなHLEインヒビターを含有する組成物の投与を包含する。好ま
しい投与方法は、エアロゾル製剤の肺への投与である。
発明の詳細な説明 定義および命名法：
本化合物、組成物および方法を開示および記載する前に、本発明は、特定の試
薬または反応条件、特定の薬学的キャリア、または特定の投与方法に限定されず
、当然、変化し得ることを理解すべきである。また、本明細書中で用いられる用
語は、特定の実施態様を記載する目的のためのみであり、限定されることは意図
されないことも理解すべきである。
本明細書および添付の請求の範囲において用いられる、単数形「ａ」、「an」
、および「the」は、文脈が明確に複数形を指示しない限り、複数形を含む。従
って、例えば、「HLEインヒビター」への言及は、HLEインヒビターの混合物を含
み、「薬学的キャリア」への言及は、２種またはそれ以上のこのようなキャリア
などの混合物を含む。
本明細書および添付の請求の範囲において、言及は、以下の意味を有すると定
義される多くの用語に対してなされる。
本明細書中で用いられる用語「アルキル」は、１個〜24個の炭素原子の分枝ま
たは非分枝飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル、エチル、n-プロピル、イ
ソプロピル、n-ブチル、イソブチル、t-ブチル、オクチル、デシル、テトラデシ
ル、ヘキサデシル、イコシル、テトラコシルなどが挙げられる。本明細書におい
て好ましいアルキル基は、１個〜12個の炭素原子を含有する。用語「低級アルキ
ル」は、１個〜６個の炭素原子、より好ましくは１個〜４個の炭素原子のアルキ
ル基を意図する。
本明細書中で用いられる用語「アルキレン」は、１個〜24個の炭素原子を含有
する二官能性飽和分枝または非分枝炭化水素鎖を意味し、例えば、メチレン（-
ＣＨ2-）、エチレン（-ＣＨ2-ＣＨ2-）、プロピレン（-ＣＨ2-ＣＨ2-ＣＨ2-）、
2-メチルプロピレン[-ＣＨ2-ＣＨ(ＣＨ3)-ＣＨ2-]、ヘキシレン[-(ＣＨ2)6-]な
どが挙げられる。「低級アルキレン」は、１個〜６個、より好ましくは１個〜４
個の炭素原子のアルキレン基を意味する。
本明細書中で用いられる用語「アルケニル」は、少なくとも１つの二重結合を
含有する２個〜24個の分枝または非分枝炭化水素基を意味し、エテニル、n-プロ
ペニル、イソプロペニル、n-ブテニル、イソブテニル、t-ブテニル、オクテニル
、デセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、イコセニル、テトラコセニルな
どが挙げられる。本明細書中において好ましいアルケニル基は、１個〜12個の炭
素原子を含有する。用語「低級アルケニル」は、１個〜６個の炭素原子、好まし
くは１個〜４個の炭素原子のアルケニル基を意図する。用語「シクロアルケニル
」は、３個〜８個、好ましくは５個または６個の炭素原子の環状アルケニル基を
意図する。
用語「アルケニレン」は、２個〜24個の炭素原子および少なくとも１つの二重
結合を含有する二官能性分枝または非分枝炭化水素鎖を意味する。「低級アルケ
ニレン」は、２個〜６個、より好ましくは２個〜５個の炭素原子のアルケニレン
基を意味する。
本明細書中で用いられる用語「アルキニル」は、少なくとも１つの三重結合を
含有する２個〜24個の炭素原子の分枝または非分枝炭化水素基を意味する。例え
ば、エチニル、n-プロピニル、イソプロピニル、n-ブチニル、イソブチニル、t-
ブチニル、オクチニル、デセニルなどが挙げられる。本明細書における好ましい
アルキニル基は、１個〜12個の炭素原子を含有する。用語「低級アルケニル」は
、１個〜６個の炭素原子、好ましくは１個〜４個の炭素原子のアルケニル基を意
図する。
本明細書中で用いられる用語「アルコキシ」は、一重の末端エーテル結合によ
り結合したアルキル基を意図する。すなわち、「アルコキシ」基は、-ＯＲ（こ
こでＲは上記で定義されたようなアルキルである）として定義され得る。「低級
アルコキシ」基は、１個〜６個、より好ましくは１個〜４個の炭素原子を含有す
るアルコキシ基を意図する。
本明細書中で用いられる用語「アリール」は、１個〜５個の芳香環を含有する
芳香族種を意味し、非置換であるか、あるいは-(ＣＨ2)x-ＮＨ2、-(ＣＨ2)x-Ｃ
ＯＯＨ、-ＮＯ2、ハロゲンおよび低級アルキル（ここで、ｘは、上記で概説した
ものを含む、０から６までの範囲の整数である）のからなる群から一般に選択さ
れる１つまたはそれ以上の置換基で置換されている。用語「アラルキル」は、ア
ルキル種およびアリール種を含有する部分であって、該部分のアルキルセグメン
トにおいて代表的には約24個未満の炭素原子、より一般的には約12個未満の炭素
原子を含有し、代表的には１個〜５個の芳香環を含有する部分を意図する。用語
「アラルキル」は、通常、アリール置換アルキル基をいうために用いられる。用
語「アラルキレン」も同様に、アルキレンとアリール種との両方を含有する部分
をいうために用いられ、代表的には、アルキレン部分に約24個未満の炭素原子、
およびアリール部分において１個〜５個の芳香族を含有する部分であって、一般
にアリール置換アルキレンである。典型的なアルキレン基は、-(ＣＨ2)j-Ａｒ（
ここで、ｊは１〜24、より好ましくは１〜６の範囲の整数であり、そしてＡｒは
単環式アリール部分である）構造を有する。
用語「アリーレン」は、二官能性芳香族部分を意味し、「単環式アリーレン」
は、フェニレン基を意味する。これらの群は、上記に概説したように、４つまで
の環置換基で置換され得る。
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを
いい、通常、有機化合物において水素原子を置換したハロ置換体に関わる。ハロ
のうち、クロロおよびフルオロが代表的に好ましい。
「必要に応じた」または「必要に応じて」は、後に記載される事象または事情
が起こり得るまたは起こり得ないこと、およびこの記載が該事象または事情が起
こる場合および該事象または事情が起こらない場合を包含することを意味する。
例えば、語句「必要に応じて置換されたアルキレン」は、アルキレン部分が置換
され得るまたは置換され得ないこと、およびこの記載が未置換アルキレンおよび
置換があるアルキレンの両方を包含することを意味する。
本明細書中で用いられる用語「インヒビター」は、可逆性酵素インヒビターお
よび不可逆性酵素インヒビター（すなわち、酵素インアクチベーター）の両方を
包含することが意図される。
本明細書中で提供されるような試薬の用語「有効量」は、非毒性であるが、HL
E活性の所望の阻害を提供するに充分な試薬の量を意味する。以下で指摘するよ
うに、必要とされる正確な量は、種、年齢、被験体の一般的な状態、HELレベル
の上昇に関連する疾患の重篤度、特定のHLEインヒビターおよびその投与様式な
どに依存して、被験体によって変化する。従って正確な「有効量」を特定するこ
とはできない。しかし、適切な有効量は、通常の実験のみを用いて当業者により
決定され得る。
薬学的キャリアなどを記載するための用語「薬学的に受容可能な」は、生物学
的にまたはその他の点で望ましくないことのない物質である。すなわち、この物
質は、選択されたHLEインヒビターと共に、任意の望ましくない生物学的な影響
を引き起こすことなく、またはこれが含まれる薬学的組成物の他の任意の成分と
共に身体に害のある相互作用することなく、個々に投与され得る。
基および置換基の位置を記載するために、以下の数字系が用いられる。
この系は、4H-3,1-ベンゾキサジノン核の番号付けを、IUPACまたはChemical Abs
tracts Serviceによって用いられる取り決めに一致させることを意図している。新規化合物
：
本明細書中で提供される新規化合物は、上記の構造式(I)によって定義される
化合物であり、ここでＲ1〜Ｒ7、ｍおよびｎは上記の定義と同様である。この属
の群の中の好ましい化合物は、
Ｒ1が-ＯＲ10（ここでＲ10は低級アルキルである）であり；
Ｒ2およびＲ3は、水素および低級アルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ4は水素、-Ｘ、-ＡＡ1-ＮＨＸ、-ＣＨ2-ＡＡ1-ＮＨＸ、-ＡＡ1-ＡＡ2-ＮＨ
Ｘ、または-ＣＨ2-ＡＡ1-ＡＡ2-ＮＨＸ（ここで、ＡＡ1およびＡＡ2は、中性で
非極性のアミノ酸（例えば、バリンおよびアラニンのようなアミノ酸）であって
、Ｘは水素、t-ブチルオキシカルボニルまたはベンジルオキシカルボニルである
）であるか、またはＲ4は
または
であり（ここで、Ｒ13およびｉは以前に定義された通りである）；
Ｒ5およびＲ6は水素であり；そして
Ｒ8およびＲ9は、水素および低級アルキルからなる群から独立して選択される
。
特定の好ましい化合物の例としては以下が挙げられる：
式(II)〜式(IV)の範囲の中で最も好ましい化合物は、Ｒ3が水素であり、そし
てＲ4がＸであるものである。
有用性および投与：
構造式(I)によって定義される本発明の化合物（その薬学的に受容可能な塩を
含む）は、セリンプロテアーゼインヒビターとして有用であり、特にHLEインヒ
ビターとして有用であり、そして薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせて、
１つまたはそれ以上の化合物からなる薬学的組成物に都合良く処方され得る。E.
W.Martin(Mack Publ.Co.、Easton PA 1990)によるRemington's Pharmaceutical
Sciences
第18版は、本発明のインヒビターを使用する処方物を調製するために
用いられ得る薬学的組成物を調製する典型的なキャリアおよび通常の方法を開示
する。
本化合物は、筋肉注射投与または腹膜注射投与などによって、経口的、非経口
的に（例えば、静脈的に）投与され得る。エアロゾル製剤による肺への投与が、
特に気腫を治療するために好ましい。投与される活性化合物の量は、当然、治療
される被験体、被験体の体重、投与方法、および処方する医師の判断に依存する
。しかし、代表的には、投与量は１用量あたり１μg〜500μgの範囲、より代表
的には１用量当たり100μg〜200μgの範囲であり、投薬は１日に１回〜３回、行
われる。
意図された投与モードに応じて、薬学的組成物は、固体形態または半固体もし
くは液体投与形態（例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁
液など）であり得、好ましくは正確な投与量の１回分の投与に適切な単位投与形
態であり得る。この組成物は、上記のように、薬学的に受容可能なキャリアと共
に選択された薬剤の有効量を含有し、そしてさらに、他の医薬、薬剤、キャリア
、アジュバント、希釈液などを含有し得る。
固体組成物について、従来の非毒性の固体キャリアとしては、例えば、薬用グ
レードのマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サ
ッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグ
ネシウムなどが挙げられる。液体の薬学的に投与可能な組成物を、例えば、賦形
剤（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール
など）中に本明細書中に記載されるような活性化合物および必要に応じて薬学的
アジュバントを、溶解工程、分散工程などによって調製し得、これにより溶液ま
たは懸濁液を形成する。所望であれば、投与されるべき薬学的組成物はまた、湿
潤剤または乳化剤、pH緩衝剤などのような少量の非毒性の補助物質（例えば、酢
酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸ナトリウ
ム、オレイン酸トリエタノールアミンなど）を含有する。このような投与形態を
調製する実際の方法は公知であるか、または当業者に自明である。例えば、上記
で引用したRemington's Pharmaceutical Sciencesを参照のこと。
経口投与について、微散剤または顆粒剤は希釈剤、分散剤、および／または表
面活性剤を含有し得、そして水中またはシロップ剤中か、乾燥状態におけるカプ
セル剤またはカシェ剤(sachets)中か、または懸濁剤を含有し得る非水性液剤中
または懸濁剤中か、結合剤および滑沢剤を含有し得る錠剤中か、あるいは水中ま
たはシロップ剤中の懸濁液中に存在し得る。所望される場合もしくは必要である
場合には、香味剤、保存剤、懸濁剤、濃縮剤、または乳化剤を含有し得る。錠剤
または顆粒剤は、好適な経口投与形態であり、そしてこれらはコートされ得る。
非経口投与は、用いられる場合、一般的に注射によって特徴付けられる。注射
可能物質は、注射前に液剤中の溶液または懸濁液に適切な液状溶液または懸濁液
、固体形態、または乳液のいずれかとして、従来の形態で調製され得る。比較的
最近修正された非経口投与に対するアプローチは、一定のレベルの用量が維持さ
れるような緩慢な放出または持続放出系の使用を包含する。例えば、米国特許第
3,710,795号を参照のこと。尚本号は、本明細書中で参考として援用される。
肺内(pulmonary)投与について、投与されるべき薬剤は、従来の噴射剤（例え
ば、テトラフルオロエタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロフルオロメタ
ンなどのようなハロ炭化水素）と一緒にされ、粉末形態に変形され、エアロゾル
製剤として投与されることが好ましい。製剤はまた、好ましくは噴射剤中の薬剤
粉末の懸濁または分散を促進し、かつ安定化させるために界面活性剤を含有する
。薬剤粉末は、通常、約0.1重量％〜10重量％の製剤を含む。固体粒子のエアロ
ゾル製剤は、典型的に治療レベルの薬剤を提供するために、上記に示すような投
薬量を有する、１またはそれ以上の単位用量で投与さる。調製のためのプロセス
：
本発明の化合物は、本明細書中の実施例の節において例示されるような、比較
的単純で、簡単な方法を用いて高収率で調製され得る。
一般的な合成経路は以下の通りである。様々な6-(ペプチジル)アミノ-5-メチ
ル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン(benoxazin)-4-オンの合成は、親化合物(6-
アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オン)の生成に依存する。
親化合物は、6-メチル-2-アミノ安息香酸（市販の化合物）を出発物質として用
いて最も効果的に調製される。6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサ
ジン-4-オンは、対応する6-ニトロ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4
-オンの水素化分解により得られ得る。この後者の物質は、5-ニトロ-6-メチル-2
-アミノ安息香酸と、ピリジン中の２当量のクロロギ酸エチルとの反応により生
成される。この反応は、１工程でベンゾキサジノン環および2-エトキシ置換基の
両方を生成する。
6-メチル-2-アミノ安息香酸のニトロ化は、モノニトロ化とジニトロ化生成物
との混合物を生成するので、穏やかにアミノ官能性を不活性化するように注意し
て、モノニトロ化生成物の収率を上げることが好ましい。アミノアシル（ＮＨＣ
ＯＲ）部分は、そのような不活性化を誘導するとして周知である。なぜなら、カ
ルボニル基は、電子密度のいくらかを窒素から求引し、そしてこれらの電子を芳
香環中に誘導するための有効性をより低下させるためである。
5-ニトロ-6-メチル-2-アミノ安息香酸は、5-ニトロ-6-メチル-2-(アシル)アミ
ノ安息香酸を加水分解すると、生成される。本発明の場合では、単一のアセチル
基(ＣＨ3ＣＯ)が、上記の不活性化を誘導するために用いられ得る。従って、加
水分解されるべき置換基は、5-ニトロ-6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸であ
り得る。この物質は、6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸のモノニトロ化を誘
導した発煙硝酸によって得られ、次いで6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸は
、市販の物質と無水酢酸との反応によって調製される。完全な合成スキームを、
スキームＩに概説し、そして以下に例示する。
キー(key)中間体（6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オ
ン）が調製されると、HLEインヒビターとしての試験に適切な様々の6-(ペプチジ
ル)アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンのアナログを作製
するための誘導化が、溶媒としてテトラヒドロフラン(THF)を有するクロロギ酸
イソブチルおよびＮ-メチルモルホリンを用いる古典的な「混合無水物」条件下
で、適切なN-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドとキー中間体とのカップリング
によって行われる。この順序を、代表的なカップリングパートナーとして、一般
化(N-tert-ブトキシカルボニル)アミノ酸を、ベンゾキサジノンとともに使用す
るスキームIIに示し、そして以下の実験の節において例示する。
類似する6-(ペプチジル)アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-
オンの合成は、まさに同一の方法では調整され得ない。なぜなら、必要な6-エチ
ル-2-アミノ安息香酸が、市販されていないからである。結果として、別の経路
が、公知のイサチン化学に基づいて開発された。
市販(Aldrich Chemical Company)の3-エチルアニリンを出発物質として用い、
トリクロロアセトアルデヒドとヒドロキシルアミンとの反応によって、3-エチル
イソニトロソアセトアニリドを生成する。この生成物を、硫酸の存在下で環化さ
せて、4-エチルイサチンと6-エチルイサチンとの分離可能な混合物を容易に生成
させ得る。純粋な4-エチルイサチンは、発煙硝酸で制御された条件下で選択的に
モノニトロ化されて、5-ニトロ-4-エチルイサチンを排他的に提供し得る。塩基
性条件下、過酸化水素との反応によって、5-ニトロ-6-エチル-2-アミノ安息香酸
が形成される。この点から、用いられる合成化学は、5-メチルベンゾキサジノン
の一連において用いられる合成化学と同一であり得る：2-エトキシ-ベンゾキサ
ジノン環を、ピリジン中のクロロギ酸エチルを使用して形成し；6-ニトロを6-ア
ミノ官能性に水素化分解し；そしてN-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドでカッ
プリングする無水物と混合する。完全な順序を、スキームIIIおよびIVに示す。
本発明のこれらの化合物（ここで、-ＮＨ-または-ＮＲ-部分は芳香環から除去
される一つの炭素原子上に存在する）の他のさらなる合成経路をスキームＶに例
示する：
本発明は、その好ましい特定の実施態様と共に記載されるが、上記の記載およ
び以下の実施例は、本発明の範囲を例示することを意図されるが、制限されるこ
とを意図しない。本発明の範囲内での他の局面、利点、および改変は本発明に属
する分野の当業者にとって自明である。実験
以下の実施例は、本発明の化合物の製造方法および使用方法の完全な開示およ
び記載を当業者に提供し、そして発明者が自らの発明であるとみなすものの範囲
を制限することを意図しない。数値（例えば、量、温度など）に関する正確性を
確保するための努力は行ったが、多少の誤差および逸脱は考慮されるべきである
。特に指示しない限り、部は重量部であり、温度は℃であり、そして圧力は大気
圧または大気圧付近である。
全ての溶媒を、HPLCグレードとして購入し、そして適切な溶媒および試薬の純
度を、通常の技術を用いて分析した。特に指示しない限り、全ての反応をアルゴ
ンの不活性雰囲気下、通常通り行った。
分析用薄層クロマトグラフィー(TLC)を、250μシリカゲルGFおよび2.5×10お
よび５×20プレート(Analtech)を用いて行った。分取TLCを、2000μシリカゲルG
F、および20×20プレートを用いて行った。NMR分析を、Varian Gemini-300 300H
z機で行い、クロロホルムのδ7.27を基準とした。FTIRスペクトルを、Perkin El
mer 1600系分光計で記録した。特定の合成結果
G．W．Rewcastleら、J．Med．Chem．30:843(1987)の手順に従い、市販の6-メ
チル-2-アミノ安息香酸をアセチル化することにより、6-メチル-2-アセチルアミ
ノ安息香酸を生成した（Theilhackerら、Annalen 669:85(1963)を参照のこと）
。引用文献におけるTheilhackerらの手順に従い、この物質をまずニトロ化し、
次いで脱アセチル化して、ます、6-ニトロ-5-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸
を生成し、次いで6-ニトロ-5-メチル-2-アミノ安息香酸を生成した。これらは両
者とも、融点およびAnnalenの研究論文(paper)の元素分析によってのみ、同定し
た。
A．Krantzら、J．Med．Chem．33：464(1990)の一般化した手順によって、ベンゾ
キサジノン環を形成することと置換基をＣ-２に配置することとを同時に行った
。ニトロ官能性の6-アミノ部分への水素化を、G．Fentonら、J．Med．Chem．32
：265(1989)の手順により成し遂げ、キー中間体(6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ
-3,1-ベンゾキサジン-4-オン)を得た。Fentonは、炭素上の５％パラジウム触媒
の使用を報告しているが、本合成においては炭素上の10％パラジウム触媒を使用
した。
5-エチルアナログについて、市販の3-エチルアニリンに、ORGANIC SYNTHESIS
、全集１巻、327頁中、C．S．MarvelおよびG．S．Hiersにより詳細に記載されて
いるような標準的なイサチン合成の手順を行った。MarvelおよびHiersは、アニ
リンを前駆体として用いたが、B．R．Bakerら、J．Org．Chem．17：164(1951)に
よるこの同様の手順により、3-エチルアニリンを用い、本合成スキームを反復し
て行った結果、約１：１の比で4-エチルイサチンと6-エチルイサチンとの混合物
を得た。Bakerらもまた、融点およびその生成物の特徴における元素分析のみを
使用した。酸化的開環により置換アントラニル酸を生成させる前に4-エチルイサ
チンをニトロ化することは、本手順に独特のものである。5-ニトロ-4-エチルイ
サチンの生成に続き、塩基性の過酸化水素を用いた5-ニトロ-6-エチル-2-アミノ
安息香酸の形成を、上記の引用文献におけるBakerにより既定された手段に従っ
て行った。入手している(in hand)アントラニル酸とともに、KrantzおよびFento
n（上記）の手順を用いて、まず6-ニトロ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサ
ジン-4-オンを生成し、次いで6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジ
ン-4-オンを生成した。
ベンゾキサジノンにカップリングしたほとんど全てのＮ-保護アミノ酸は市販
のものであった。これらには、(N-tert-ブトキシカルボニル)アラニン、(N-tert
-ブトキシカルボニル)バリン、および(N-tert-ブトキシカルボニル)β-アラニン
が挙げられる。合成を必要とする唯一のN-保護アミノ酸は、公知の(N-tert-ブト
キシカルボニル、N-メチル)β-アラニンであり、これはA．Yasuiら、Int．J．Pe
pt．Prot．Res．35：301の手順に従って、水素化ナトリウムおよびヨウ化メチル
を用いて親N-保護アミノ酸のN-メチル化により調製した。
N-保護単一アミノ酸を、6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-
4-オンまたは6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンのいず
れかと、テトラヒドロフラン溶媒中のクロロギ酸イソブチルおよびN-メチルモル
ホリンを用いる標準的な「混合無水物」の手順を用いて反応させた。
実施例１
この実施例は、スキームＩに示す合成手順を用いる、6-アミノ-5-メチル-2-エ
トキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
（ａ.）6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸の調製：
15.2ｇ(100ミリモル)の6-メチル-2-アミノ安息香酸（Aldrich Chemical Compa
ny、Inc.、Milwaukee WIから入手）の氷酢酸懸濁液(150mL)を水浴で加熱し、均
一性を促進させた。15mL(159ミリモル)の無水酢酸を添加し、そして得られた溶
液を熱水浴中で40分間維持した。ほぼ室温まで冷却し、黒ずんだ溶液を破砕した
氷の上に注いだ。すべての氷が溶融したとき、分竃した淡いベージュ色の固体を
回収し、そして空気乾燥した。16.4ｇ(収率85％)の6-メチル-2-アセチルアミノ
安息香酸を得た。
（ｂ.）5-ニトロ-6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸の調製：
35mL(833ミリモル)の90％発煙硝酸を含むビーカーを氷水浴中で冷却した。16.
4ｇ(85ミリモル)の6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸を、10分間かけて少量の
アリコートで添加した。固体は添加後すぐに溶解し、そして溶液は黒ずんだ。混
合物を冷却しながら、60分間撹拌した。破砕した氷の上に溶液を注ぎ、溶液を沈
澱させた。NMR分析により9.61ppm（出発物質を示す）、および9.83ppm（生成物
を示す）でＮＨのプロトンが観察されたので、明らかに、部分的にしか反応が終
結していないことが示された。
以下のように条件を変えて、全ての単離した物質に再びニトロ化手順を行った
：冷却浴中ではなく室温で撹拌しながら、固体を発煙硫酸に添加し、そして添
加が完了後、氷上に溶液を注ぐ前に、90分間撹拌を続けた。NMR分析により9.81p
pmでのNHプロトンのみを示すベージュ色の固体を得た。所望される場合、固体を
エタノール-水から再結晶し得る。10.3ｇ(収率51％)の5-ニトロ-6-メチル-2-ア
セチル-アミノ安息香酸を得た。
（ｃ.）5-ニトロ-6-メチル-2-アミノ安息香酸の調製：
10.2ｇ(43ミリモル)の5-ニトロ-6-メチル-2-アセチルアミノ安息香酸の2M NaO
H溶液(100mL)を２時間、加熱して還流した。得られた赤色の溶液を、ほぼ室温ま
で冷却させ、次いで氷浴中に配置したビーカーに移した。溶液を2N HClでpHがほ
ぼ４〜５までゆっくりと酸性化し、多量の黄色の固体を分離した。この全てに、
約110mLの2N HClを添加した。回収した黄色の固体を減圧下、75℃で３時間乾燥
した。4.0ｇ(収率48％)の5-ニトロ-6-メチル-2-アミノ安息香酸を得た。
（ｄ.）6-ニトロ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
4.0ｇ(20.4ミリモル)の5-ニトロ-6-メチル-2-アミノ安息香酸の乾燥ピリジン
溶液(50mL)を、不活性雰囲気下、氷水浴中で冷却した。クロロギ酸エチル(Aldri
ch)、10mL(105ミリモル)を15分間かけて滴下した。滴下後すぐに穏やかな発熱が
起こり、溶液から固体が分離した。この懸濁液を不活性雰囲気下、室温で一晩撹
拌した。約半分のピリジンを減圧下で除去し、そして残余の混合物を氷上に注い
だ。沈澱した固体を回収し、そして空気乾燥した。4.0ｇ(収率79％)の6-ニトロ-
5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを得た。
（ｅ.）6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
4.0ｇ(16ミリモル)の6-ニトロ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-
オンの酢酸エチル溶液(65mL)をパー(Parr)ボトルに移した。1.0ｇ(0.94ミリモル
)の10％ Pd／Ｃ触媒（Matheson、Coleman＆Bellより入手）を添加した。試料を
室温で、そして１atmの圧力で５時間、パーシェーカー上で水素化した。触媒を
セライトパッドを通して濾過することにより除去した。濾液を減圧下で濃縮して
、明るい黄色の固体を生成した。2.5ｇ(収率71％)の6-アミノ-5-メチル-2-エト
キシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを得た。
実施例２
6-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニル)-アミノ-5-メチル-
2-エトキシ-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製
この実施例は、スキームIIに例示される合成手順を用いる、6-(N-tert-ブチル
オキシカルボニル-β-アラニル)-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-4H-3,1-ベンゾキ
サジン-4-オンの調製を記載する。
189mg(1.0ミリモル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニン(BACHEM)
の乾燥テトラヒドロフラン(金属ナトリウムおよびベンゾフェノンから蒸留)溶液
(2.0mL)を不活性雰囲気下、-5℃まで冷却した。220μL(2.0ミリモル)のN-メチル
-モルホリン(Aldrich)および130μL(1.0ミリモル)のクロロギ酸イソブチル(Al
drich)を連続的に添加した。白色の固体をすぐに分離した。冷却浴中で、混合物
を15分間撹拌した後、221mg(1.0ミリモル)の6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1
-ベンゾキサジン-4-オンおよび９mLの乾燥テトラヒドロフランを迅速に添加した
。
得られた懸濁液を、冷却しながらさらに60分間撹拌し、次いで２日間撹拌を続
けながら室温まで加温した。酢酸エチルを添加し、そして混合物を飽和NaCl溶液
で３回抽出した。有機相をMgSO4で乾燥し、そして真空下で濃縮して黄色の固体
を得た。
塩化メチレン：酢酸エチル(３：２)を溶離液として用いるシリカゲルのカラム
クロマトグラフィー(床寸法(bed dimensions)：37cm×３cm)を行い、112mg(収率
29％)の6-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニル)-アミノ-5-メチル-2-
エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを、淡い黄色の固体として得た。
実施例３
この実施例は、スキームIIに例示される合成手順を用いる、6-(N-tert-ブチル
オキシカルボニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベ
ンゾキサジン-4-オンおよび6-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニル)-
アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
（ａ.）N-tert-ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニンの調製：
25mLの乾燥テトラヒドロフラン（金属ナトリウムおよびベンゾフェノンから蒸
留）中に溶解した1.89ｇ(10.0ミリモル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-β-
アラニンの溶液を不活性雰囲気下、氷-メタノール浴中で冷却した。ヨウ化メチ
ル、11.36ｇ(80.0ミリモル)を添加し、次いで1.60ｇ(40.1ミリモル)の水素化ナ
トリウム(鉱物オイル中の60％分散液として)を少量部分に10分間かけて添加した
。水素ガスの発生がすぐに起こり、溶液は黄色になり、そして磁気撹拌を困難に
す
る沈澱物が形成された。さらなる10mLの乾燥テトラヒドロフランを添加し、撹拌
を促進した。
この混合物を60分間冷却し続け、次いで室温まで加温し、そして不活性雰囲気
下、21時間撹拌した。黄色は消失したが、沈澱物は残存していた。この混合物を
、酢酸エチルおよび水を含むビーカーにゆっくりと移すことにより、注意深くク
エンチした。全ての固体を、この２相性の混合物中に溶解させ、この混合物を層
分離のために分液漏斗に移した。酢酸エチル層を５％NaHCO3で２回抽出し、そし
て水性の洗浄物を元の水相と一緒にした。
この水相を10％HClで注意深く酸性化し、そして新しい酢酸エチルで２回再抽
出した。有機抽出物を一緒にし、飽和NaCl溶液で１回洗浄し、MgSO4で乾燥し、
そして真空下で濃縮し、粘稠な橙色のオイルを得た。
クロロホルム：メタノール(95：５)を溶離液として用いる、シリカゲルのカラ
ムクロマトグラフィー(床寸法：20cm×３cm）を行い、1.68ｇ(収率83％)のN-ter
t-ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニンを、明るい黄色のオイルとし
て得た。
（ｂ.）6-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5
-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
以下の最終反応の混合物を用いて実施例２の手順を行った：110mg(0.54ミリモ
ル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニン、110μL(1.0ミリ
モル)のN-メチルモルホリン、70μL(0.54ミリモル)のクロロギ酸イソブチル、12
0mg(0.54ミリモル)の6-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オ
ン、および８mLの乾燥テトラヒドロフラン。この反応混合物を室温で５日間撹拌
した。
塩化メチレン：酢酸エチル(３：２)を溶離液として用いるシリカゲルのカラム
クロマトグラフィー(床寸法：22cm×３cm)を行い、58mg(収率29％)の6-(N-tert-
ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5-メチル-2-エトキシ-
3,1-ベンゾキサジン-4-オンを淡い黄色の固体として得た。
（ｃ.）6-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニル)-アミノ-5-エチル-2
-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
以下の最終反応の混合物を用いて実施例２の手順を行った：95mg(0.50ミリモ
ル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-β-アラニン、110μL(1.0ミリモル)のN-
メチルモルホリン、65μL(0.50ミリモル)のクロロギ酸イソブチル、117mg(0.50
ミリモル)の6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オン、およ
び7mLの乾燥テトラヒドロフラン。この反応混合物を室温で3.5日間撹拌した。
塩化メチレン：酢酸エチル(３：２)を溶離液として用いるシリカゲルのカラム
クロマトグラフィー(床寸法：22cm×３cm)を行い、41mg(収率20％)の6-[N-tert-
ブチルオキシカルボニル-β-アラニル]アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾ
キサジン-4-オンを淡い黄色の固体として得た。
実施例４
この実施例は、スキームIIIに例示される合成手順を用いる、6-アミノ-5-エチ
ル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
（ａ.）3-エチルイソニトロソアセトアニリドの調製：
50.0ｇ(320ミリモル)の抱水クロラール(Aldrich)、70.0ｇ(490ミリモル)の硫
酸ナトリウム、および800mLの水からなる溶液を、２リットルの丸底フラスコ中
で、室温にて撹拌した。60mLの濃塩酸と14OmLの水との混合物中に溶解した33.0
ｇ(270ミリモル)の3-エチルアニリン(Aldrich)の溶液を添加した。最後に、200m
Lの水に溶解した60.0ｇ(860ミリモル)のヒドロキシルアミン塩酸塩の溶液をフラ
スコに添加した。得られた均一な溶液を水浴中で沸騰するまで45分間加熱した。
この溶液を室温まで冷却することにより、けば立った(fluffy)固体を分離させた
。27.3ｇ(収率53％)の3-エチルイソニトロソアセトアニリドを得た。
（ｂ.）4-エチルイサチンおよび6-エチルイサチンの調製：
100mLの濃硫酸を含む250mLの丸底フラスコを、内部温度を50℃に維持した水浴
中で加熱した。17.3ｇ(90ミリモル)の3-エチルイソニトロソアセトアニリドを、
内部溶液温度を60℃〜70℃の間に制御するような速度で、少量ずつ分けて45分間
かけて添加した。添加完了後、得られた赤黒い溶液を80℃〜85℃に加温し、そし
てこの温度を75分間維持した。室温まで冷却後、溶液を破砕した氷上に注いだ。
水溶液を５回、クロロホルムで抽出した。有機抽出液を一緒にし、MgSO4で乾燥
し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。4-エチルイサチンおよび6-エチルイサチ
ンの両方の組み合わせである橙色の固体を得た。
橙色の固体を50mLの10％NaOHに溶解した。氷酢酸を、pHが約４になるまで添加
することにより、橙色で、けば立った固体が結晶化した。2.1ｇ(収率13％)の4-
エチルイサチンを得た。
この赤橙色の酢酸濾液を、濃塩酸で約１のpHまでさらに酸性化し、粉末状の橙
色の固体を得た。2.1ｇ(収率13％)の6-エチルイサチンを得た。
（ｃ.）5-ニトロ-4-エチルイサチンの調製：
15mLの90％発煙硝酸を含むビーカーを氷水浴中で冷却した。2.1ｇ(12ミリモル
)の4-エチルイサチンを５分間かけて少量ずつ添加した。得られた赤橙色の溶液
を、氷水浴中で冷却しながら５分間撹拌し、次いで室温まで加温して、そしてさ
らに10分間撹拌した。この溶液を破砕した氷上に注ぐとすぐに黄色の固体が沈澱
した。1.4ｇ(収率52％)の5-ニトロ-4-エチルイサチンを得た。
（ｄ.）5-ニトロ-6-エチル-2-アミノ安息香酸の調製：
1.0ｇ(4.5ミリモル)の5-ニトロ-4-エチルイサチンの５％NaOH溶液(8.0mL)に、
1.25mL(11ミリモル)の30％過酸化水素を10分間かけてゆっくりと添加した。穏や
かな発熱がみられた。この溶液を室温で60分間撹拌し、次いで破砕した氷上に注
いだ。この溶液を10％HClで「曇り点」まで酸性化した。この懸濁液を酢酸エチ
ルで３回抽出した。一緒にした有機抽出物を水で１回洗浄し、MgSO4で乾燥し、
そして減圧下で濃縮した。黒ずんだオイルを得、室温で放置すると赤褐色の固体
を得た。0.78ｇ(収率82％)の5-ニトロ-6-エチル-2-アミノ安息香酸を得た。
（ｅ.）6-ニトロ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
1.3ｇ(6.2ミリモル)の5-ニトロ-6-エチル-2-アミノ安息香酸の乾燥ピリジン溶
液(40mL)を不活性雰囲気下で、氷水浴中で冷却した。クロロギ酸エチル、2mL(21
ミリモル)を５分間かけて滴下した。穏やかな発熱が起こり、そして添加すると
すぐに溶液から固体が分離した。懸濁液を氷水浴中で60分間撹拌し、次いで室温
まで加温し、そして不活性雰囲気下で、一晩撹拌した。約半分のピリジンを減圧
下で除去し、そして残余の混合物を氷上に注いだ。沈澱した固体(橙褐色)を回収
し、そして空気乾燥した。0.76ｇ(収率47％)の6-ニトロ-5-エチル-2-エトキシ-3
,1-ベンゾキサジン-4-オンを得た。
（ｆ.）6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
0.75ｇ(2.8ミリモル)の6-ニトロ-5-エチル-2-エトキシ-3,l-ベンゾキサジン-4
-オンの酢酸エチル溶液(35mL)を、パーボトルに移した。0.40ｇ(0.38ミリモル）
の10％ Pd/C触媒を添加した。試料を室温および1atm圧にてパーシェーカーで３
時間水素化した。触媒をセライトパッドを通して濾過することにより除去した。
濾過物を減圧下で濃縮して、明るい黄色の固体を生成した。0.58ｇ(収率86％)の
6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを得た。
実施例５
この実施例は、スキームIVに例示されるように、6-(N-tert-ブチルオキシカル
ボニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジ
ン-4-オンの調製を例示する。
以下の最終反応混合物を用いて、実施例２の手順を行った：102mg(0.50ミリモ
ル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-N-メチル-β-アラニン、110μL(1.0ミリ
モル)のN-メチルモルホリン、65μL(0.50ミリモル)のクロロギ酸イソブチル、11
8mg(0.50ミリモル)の6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オ
ン、および6mLの乾燥テトラヒドロフラン。この反応混合物を室温で５日間撹拌
した。
塩化メチレン：酢酸エチル(３：１)を溶離液として用いるシリカゲルのカラム
クロマトグラフィー(床寸法：22cm×３cm)を行い、19mg(収率３％)の6-(N-tert-
ブチルオキシカルボニル-N-メチル-Ｂ-アラニル)-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-
3,1-ベンゾキサジン-4-オンを淡い黄色の固体として得た。
実施例６
この実施例は、スキームIIIに例示される合成手段を用いる、6-(N-4-メチルベ
ンゼンスルホニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-4H-3,1
-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
（ａ.）(N-メチル)β-アラニン、トリフルオロ酢酸塩の調製：
1.02ｇ(5.0ミリモル)の(N-tert-ブトキシカルボニル、N-メチル)β-アラニン
を含む丸底フラスコに、6mLの塩化メチレンに溶解した5mL(6.5ミリモル)のトリ
フルオロ酢酸の溶液を添加した。得られた溶液を、不活性雰囲気下で、室温にて
60分間撹拌した。この溶液を減圧下で濃縮し、そして残渣を50mLの無水ジエチル
エーテルを含むエーレンマイヤーフラスコ中に滴下して移した。室温で撹拌し、
白色の固体沈澱物を得、この沈澱物を回収し、そして空気乾燥した。0.84ｇ(収
率77％)(N-メチル)β-アラニン、トリフルオロ酢酸塩を白色固体として得た。
（ｂ.）(N-4-メチルベンゼンスルホニル、(N-メチル)β-アラニン、N,N-ジシ
クロヘキシルアミン(dicyclohexylmanine)塩の調製：
0.84ｇ(3.9ミリモル)の(N-メチル)β-アラニン、トリフルオロ酢酸塩および0.
49ｇ(4.0ミリモル)のN,N-ジメチルアミノピリジン(Aldrich)を含む丸底フラスコ
に、25mLの塩化メチレンと３mLのN,N-ジメチルホルムアミドとの混合物を添加し
た。この塩は、不溶性のままのようであった。この混合物を不活性雰囲気下、氷
水浴中で冷却した。6mL(43.0ミリモル)のトリエチルアミンを添加後、混合物を
均一にした。
15mLの塩化メチレンと２mLのN,N-ジメチルホルムアミドとの混合物中に溶解し
た0.75ｇ(3.9ミリモル)の塩化p-トルエンスルホニル(Aldrich)溶液を、この懸濁
液に滴下した。30分間で滴下を完了し、その後、冷却しながらさらに60分間撹拌
し続けた。この間、全ての固体は溶解して、無色の均一な溶液が得られた。この
溶液を室温まで加温し、そして不活性雰囲気下にて、さらに20時間撹拌した。
この溶液を10％HClでpHが約１になるまで酸性化し、そして混合後、層を分離
した。有機相をさらなる10％HClで２回、飽和NaCl溶液で３回洗浄し、MgSO4で乾
燥し、そして減圧下で濃縮して淡い黄色のオイルを得た。
このオイルを35mLの無水ジエチルエーテルに再溶解した。撹拌の間、N,N-ジシ
クロヘキシルアミン(Aldrich)を過剰に滴下した。白色固体が溶液から沈澱し、
これを回収し、そして空気乾燥した。1.24ｇ(収率73％)の(N-4-メチルベンゼン
スルホニル、(N-メチル)β-アラニン、N,N-ジシクロヘキシルアミン(DCHA)塩を
得た。
（ｃ.）6-(N-4-メチルベンゼンスルホニル-N-メチル-β-アラニル)-アミノ-5-
エチル-2-エトキシ-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
207mg(0.80ミリモル)の(N-4-メチルベンゼンスルホニル、N-メチル)β-アラニ
ン（これは、450mg(1.03ミリモル)のDCHA塩を12N HClで酸性化し、次いで酢酸エ
チルで抽出し、そして減圧下で有機相を濃縮することにより得た）、180μL(1.6
4ミリモル)のN-メチルモルホリン、105μL(0.81ミリモル)のクロロギ酸イソブチ
ル、190mg(0.81ミリモル)の6-アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン
-4-オン、および８mLの乾燥テトラヒドロフランの最終反応の混合物を用いる、
実施例２の手順を行った。この反応混合物を、室温で1.5日間撹拌した。
塩化メチレン：酢酸エチル(３：１)を溶離液として用いるシリカゲルのカラム
クロマトグラフィー（床寸法：22cm×３cm）を行い、28mg(収率７％)の6-[(N-4-
メチルベンゼンスルホニル、N-メチル)メチルベンゼンスルホニル、N-メチル)β
-アラニル]アミノ-5-エチル-2-エトキシ-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを金色様黄
色の固体として得た。
実施例７
この実施例は、スキームＶに例示される合成手順を用いる、6-[1-(N-tert-ブ
チルオキシカルボニル-L-バリル)-アミノエチル]-2-エチルオキシ-5-メチル-4H-
3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
（ａ.）メチル2-エチルオキシ-カルボニルアミノ-5-ヨード-6-メチルベンゾエ
ートの調製：
ピリジン(100mL)中の15ｇ(80ミリモル)の2-アミノ-6-メチル安息香酸塩酸塩(A
ldrich)に０℃で、17mL(177ミリモル)のクロロギ酸エチルを添加し、そして得ら
れた混合物を室温で、一晩撹拌した。反応物を減圧下で濃縮して開環生成物と閉
環生成物との混合物を得た。
残渣を50mLの水性メタノール(１：１)および20mLの酢酸に溶解させ、そして蒸
気浴で加熱して閉環生成物を開環した。この反応物を減圧下で濃縮し、次いで20
0mLのジエチルエーテルとメタノールとの混合物(４：１)中に溶解した。0.5M ジ
アゾメタンの150mL部分をこの溶液に添加し、そして得られた混合物を20分間撹
由来)を、エーテル中の10％酢酸を用いてクエンチし、そして反応物を減圧下で
濃縮した。
得られたシロップを200mLの酢酸に溶解し、14ｇ(86ミリモル)の一塩化ヨウ素(
Aldrich)を添加し、そして反応物を50℃で、２日間撹拌した。反応混合物を1.5
Ｌの氷ブラインスラッシュ(slush)に注ぎ、そしてこれをゴム状の固体が沈澱す
るまで撹拌した。残渣を塩化メチレン中に溶解させ、MgSO4で乾燥し、そしてエ
バポレートしてゴム状物にした。
塩化メチレン：ヘキサン(１：１)を溶離液として用いるシリカゲルのカラムク
ロマトグラフィー(床寸法：cm×cm)を行い、14.5ｇ(収率50％)のメチル2-エチル
オキシカルボニルアミノ-5-ヨード-6-メチルベンゾエートを得た。融点：70℃〜
71℃。TLC(塩化メチレン／ヘキサン、１：３)のＲf＝0.41。
（ｂ.）メチル2-エチルオキシカルボニル-5-(2-メチルオキシ-カルボニル-1-
メチル-エチレニル)-6-メチルベンゾエートの調製：
100mLのアセトニトリル中の14.5ｇ(40ミリモル)のメチル2-エトキシ-カルボニ
ルアミノ-5-ヨード-6-メチルベンゾエート、６ｇ(60ミリモル)のクロトン酸メチ
ル(Aldrich)、4.5ｇ(49.4ミリモル)のトリエチルアミン、180mg(0.8ミリモル)の
酢酸パラジウム(II)(Aldrich)、および980mg(3.2ミリモル)のトリ-O-トリルフォ
スフィン(Aldrich)の混合物を磁気撹拌しながら110℃〜120℃で18時間、250mL用
のガラス圧力ボンベ(glass pressure bomb)を用いて加熱した。この反応物をエ
バポレートして乾燥させ、次いで塩化メチレン中に溶解させ、濾過してパラジウ
ムを除去し、0.1N HClおよび水で連続的に洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そ
してエバポレートして乾燥させた。
クロロホルムを用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィー(床寸法：cm×c
m)を行い、次いで塩化メチレン：ヘキサンから結晶化することにより、5.0ｇ(収
率40％)のメチル2-エチルオキシカルボニル-5-(2-メチルオキシカルボニル-1-メ
チル-エチレニル)-6-メチルベンゾエートを得た。TLC(塩化メチレン)のＲf＝0.4
4。
Ｃ17Ｈ21ＮＯ6についての元素分析：
計算値：Ｃ、60.88；Ｈ、6.31；Ｎ、4.18。
実測値：Ｃ、60.97；Ｈ、6.31；Ｎ、4.32。
（ｃ.） メチル2-エチルオキシカルボニル-5-(2-メチルオキシカルボニル-1-
メチル-エチレニル)-6-メチルベンゾエートの調製：
塩化メチレン中の５ｇ(14.9ミリモル)のメチル2-エチルオキシカルボニル-5-(
2-メチルオキシカルボニル-1-メチル-エチレニル)-6-メチルベンゾエートを、-3
0℃まで冷却し、そしてオゾン化酸素ガス(ozonized oxygen gas)を、永久青色(p
ermanent blue color)が得られるまで溶液中に通した。反応物を-60℃まで冷却
し、アルゴンを流して過剰のオゾンを除去し、そして２mLのジメチルスルフィド
を添加した。反応物を-10℃まで加温し、そして１時間撹拌し、次いで室温でさ
らに１時間撹拌した。溶液をエバポレートしてガラス状の残渣を得た。
クロロホルムを用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィー(床寸法:cm×cm
)を行い、3.85ｇ(収率87％)のメチル5-アセチル-2-エチルオキシカルボニル-6-
メチルベンゾエートを得た。TLC(塩化メチレン)のＲf＝0.27。
（ｄ.）メチル5-(1-イソニトロソエチル)-2-エチルオキシ-カルボニルアミノ-
6-メチルベンゾエートの調製：
ピリジンとエタノール(１：１)との混合物(100mL)中の、3.５ｇ(12.5ミリモル
)のメチル5-アセチル-2-エチルオキシカルボニル-6-メチルベンゾエートに、3.5
ｇ(50.0ミリモル)のヒドロキシルアミン塩酸塩(Aldrich)を添加し、そして得ら
れた溶液を蒸気浴で１時間加熱した。冷却すると、ゴム状の沈澱物が形成し始め
た。混合物を250mLの飽和ブラインに注いで、沈澱を完了させた。水層をデカン
トし、沈澱したゴム状物をクロロホルム中に溶解させ、飽和ブラインで洗浄し、
MgSO4で乾燥し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥し、3.2ｇ(収率87％)のメ
チル5-(1-イソニトロソエチル)-2-エチルオキシカルボニルアミノ-6-メチルベン
ゾエートを、syn-異性体およびanti-異性体として得た。融点：85℃〜90℃。TLC
(塩化メチレン)のＲf＝0.37。
（ｅ.）メチル5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシ-カルボニルアミノ-6-メチ
ルベンゾエートの調製：
50mLの95％エタノールと1mLの酢酸との混合物中の3.0ｇ(10.2ミリモル)のメチ
ル5-(1-イソニトロソエチル)-2-エチルオキシカルボニルアミノ-6-メチルベンゾ
エートを、500mgの10％ Pd/Ｃ(MCB)および100mgの10％ Rh/Ｃ(Alfa products、T
hiokol)を添加し、そして得られた混合物を水素雰囲気下に配置し、そして９日
間振盪した。混合物を濾過し、そしてエバポレートして乾燥した。残渣をクロロ
ホルム中に溶解し、飽和重水素ナトリウム、次いで飽和ブラインで洗浄し、MgSO4
で乾燥し、濾過し、エバポレートして乾燥した。
酢酸エチルを用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィー(床寸法：cm×cm)
を行い、未反応のオキシムを溶出し、次いでメタノールにより生成物のアミンを
溶出した。このメタノール性溶液をエバポレートしてガラス状物を得、残渣をク
ロロホルム中に溶解させ、セライトを通して濾過し、そしてエバポレートして1.
3ｇ(収率45％)のメチル5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシカルボニル-6-メチ
ルベンゾエートを得た。TLC(クロロホルム／メタノール、95:5)のＲf＝0.20。
（ｆ.）5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシカルボニルアミノ-6-メチルベン
ゾエートの調製：
メチル5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシカルボニル-6-メチルベンゾエート
(1.2g；4.3ミリモル)を50mLのTHFと50mLの0.7N水酸化ナトリウムとの混合物に溶
解させ、室温で３日間撹拌した。このTHFをエバポレートし、そして水溶液を35m
Lの1N 塩酸で中和した。水溶液をエバポレートして乾燥した。残渣をDMF中に溶
解し、NaClの沈澱物を濾過し、そして生成物を、エーテルと水との混合物を用い
て沈澱させた。この沈澱物を濾過し、そして空気乾燥して510mg(収率45％)の5-(
1-アミノエチル)-2-エチルオキシカルボニルアミノ-6-メチルベンゾエートを得
た。
（ｇ.）6-[1-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-L-バリル)-アミノエチル]-2-
エチルオキシ-5-メチル-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製：
10mLの乾燥THF中の115mg(0.55ミリモルのBoc-L-バリン(BACHEM))に165μL(1.2
ミリモル)のトリエチルアミンを添加した。室温で0.5時間撹拌した後、溶液を０
℃まで冷却し、そして78μL(0.6ミリモル)のクロロギ酸イソブチルを添加した。
混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、５mLの乾燥THF中の130mg(0.5ミリモル)
の5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシカルボニルアミノ-6-メチルベンゾエート
を添加した。反応物を室温まで戻し、そして18時間撹拌した。反応物をエバポレ
ートして乾燥させ、クロロホルム中に溶解し、0.1N 塩酸、次いで飽和ブライン
により洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そしてエバポレートして乾燥させ、140
mg(収率78％)の粗中間体を得た。
この残渣を5mLのピリジンおよび1mLのトリエチルアミンを含む溶液中に溶解し
た。クロロギ酸エチル(0.5mL；4.6ミリモル)を容器に添加し、そして得られた溶
液を50℃まで２時間加熱した。混合物を50mLのブラインスラッシュ(briny slush
)に注ぎ、そしてクロロホルムの50mL部分で３回抽出した。一緒にした抽出物を0
.1N 塩酸、次いで飽和ブラインにより洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そして
エバポレートして乾燥した。
生成物を塩化メチレン／ヘキサン(１：１)で３回結晶化して45mg(収率20％)の
6-[1-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-L-バリル)-アミノエチル]-2-エチルオキ
シ-5-メチル-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの異性体Ａを得た。TLC(塩化メチレ
ン／アセトン、９：１)のＲf＝0.59。
Ｃ23Ｈ33Ｎ3Ｏ6についての元素分析：
計算値：Ｃ、61.72；Ｈ、7.43；Ｎ、9.39
実測値：Ｃ、61.47；Ｈ、7.24；Ｎ、9.20
最初の結晶化由来の母液を、分取TLCプレートに充填し、そして塩化メチレン
／ヘキサン(１：５)を用いて展開した。これを回収して10mg(4.5％)の6-[1-(N-t
ert-ブチルオキシカルボニル-L-バリル)-アミノエチル]-2-エチルオキシ-5-メチ
ル-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの異性体Ｂを得た。
実施例８
この実施例は、スキームＶに例示される合成手順を用いる、6-[1-(N-tert-ブ
チルオキシカルボニル-L-アラニル)-アミノエチル]-2-エチルオキシ-5-メチル-4
H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製を記載する。
10mLの乾燥THF中の50mg(0.27ミリモル)のN-tert-ブチルオキシカルボニル-L-
アラニン(BACHEM)に83μL(0.60ミリモル)のトリエチルアミンを添加した。室温
で0.5時間撹拌した後、この溶液を０℃まで冷却し、そして39μL(0.30ミリモル)
のクロロギ酸イソブチルを添加した。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後、５
mLの乾燥THF中の65mg(0.25ミリモル)の5-(1-アミノエチル)-2-エチルオキシカル
ボニルアミノ-6-メチルベンゾエートを溶解した。反応物を室温まで戻し、そし
て18時間撹拌した。反応物をエバポレートして乾燥させ、クロロホルム中に溶解
し、0.1N 塩酸、次いで飽和ブラインにより洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そ
してエバポレートして乾燥させ、80mg(収率73％)の粗中間体を得た。
この残渣を5mLのピリジンおよび1mLのトリエチルアミンを含む溶液中に溶解し
た。クロロギ酸エチル(0.5mL；4.6ミリモル)を容器に添加し、そして得られた溶
液を50℃まで２時間加熱した。混合物を50mLのブラインスラッシュ中に注ぎ、そ
して50mLのクロロホルムで３回抽出した。一緒にした抽出液を0.1N 塩酸、次い
で飽和ブラインにより洗浄し、MgSO4で乾燥し、濾過し、そしてエバポレートし
て乾燥させた。
クロロホルムを用いる分取TLCを行い、次いで塩化メチル／ヘキサンを用いる
結晶化を行い、21mg(20％)の6-[1-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-L-アラニル
)-アミノエチル]-2-エチルオキシ-5-メチル-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンを２
つの異性体の混合物として得た。TLC(塩化メチレン／アセトン 95：５)のＲf
＝0.33。
実施例９ 生物学的試験
材料および方法：
以下に挙げた酵素およびその基質をCalbiochemから得た。
酵素 基質
エラスターゼ(ヒト好中球)(HLE) メトキシ-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA
エラスターゼ(ブタ膵臓)(PPE) Suc-Ala-Ala-Ala-pNA
カテプシン-Ｇ(ヒト好中球)(CATH) Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA
αキモトリプシン(ウシ膵臓)(CHY) Suc-Gly-Gly-Phe-pNA
トリプシン(ウシ膵臓)(TRP) Bz-Arg-pNA
6-[1-(N-tert-ブチルオキシカルボニル-L-バリル)-アミノエチル]-2-エチルオキ
シ-5-メチル-4H-3,1-ベンゾキサジン-4-オンの調製物(「SR 12144B」)を、上記
実施例７に記載されるように調製した。緩衝液のためのPIPES、HEPES、およびBR
IJ 35をCalbiochemから得た。
以下のアッセイ条件を用いてSR 12144Bによる各酵素の阻害を測定した。
酵素-インヒビター混合物を、Steinら(Steinら、Biochemistry 26:4126-4130(
1987))により記載されたプログレスカーブ法(progress curve method)によりア
ッセイした。SR 12144Bを予めDMSOで溶解し、酵素の添加の前に緩衝液/基質溶液
に添加した。20秒間混合した後、410nMでニトロアニリンの形成を追って15分間
の時間経過を記録した。25℃に制御され、キュベットホルダーを有する分光光度
計Cary-3を用いて、各酵素について少なくとも４つのインヒビター濃度について
プログレスカーブを記録した。SR 12144Bを用いないコントロール試験を定石通
り同時に行った。15分間の測定時間よりも長い間、阻害を受けない酵素を、生成
物形成速度を一定速度に維持しながら、酵素および基質の濃度を選択し、全体の
時間経過についての擬似１次条件(pseudo first order condition)を得た。
Steinらのプログレスカーブ法を用いて、本発明の範囲内のさらなる化合物を
評価し、反応速度定数kon、koff、並びにpKiおよびHLEの他のセリンプロテアー
ゼに対する相対的な選択性を決定した。結果を表１および表２に記載する。
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(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＥＤ 9051−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 265/24
Ｃ０７Ｄ 265/24 9051−4Ｃ 265/26
265/26 9356−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 5/083 ＺＮＡ
Ｃ０７Ｋ 5/083 ＺＮＡ 9356−4Ｈ 5/103
5/103 9356−4Ｈ 14/81
14/81 9051−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/64 ＡＥＤ
(72)発明者 ライアン， ケネス ジェイ.
アメリカ合衆国 カリフォルニア 94089,
サニーベール，レイクムアー ドライブ
754