JPH09504962A - ストレプトコッカスピオジェンスから誘導される組換えdnアーゼb - Google Patents
ストレプトコッカスピオジェンスから誘導される組換えdnアーゼbInfo
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.(i)図4に示されたステレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素 及び(ii)S.ピオジェンスDNアーゼB酵素と機能的に同等の配列をコード 化する配列からなる群から選ばれたアミノ酸配列をコード化するDNAを含有し 、そのDNAは図4のアミノ酸配列又は、S.ピオジェンスDNアーゼB酵素の アミノ末端に融合したリーダーペプチド以外のS.ピオジェンスDNアーゼB酵 素の機能的同等物をコード化しないDNAを実質的に含有しない、実質的に精製 されたDNA。 2.DNAが、さらに、S.ピオジェンスDNアーゼB酵素のアミノ末端に融合 した、リーダーペプチドをコード化するDNA配列を有する請求項1記載のDN A。 3.図3のヌクレオチド配列を有する請求項1記載のDNA。 4.適するバクテリア宿主セルと適合性のある少なくとも1個の対照配列に作用 しうるように連結した、請求項1のDNA配列を含む、ストレプトコッカス ピ オジェンス DNアーゼB酵素用の発現ベクター。 5.適するバクテリア宿主セルと適合性のある少なくとも1個の対照配列に作用 しうるように連結した、請求項3のDNA配列を含む、ストレプトコッカス ピ オジェンス DNアーゼB酵素用の発現ベクター。 6.そのストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素をコード化するD NAがバクテリオファージλからの少なくとも1つの配列に連結した請求項4の ベクター。 7.そのストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素をコ ード化するDNAがバクテリオファージλからの少なくとも1つの配列に連結し た請求項5のベクター。 8.検知できる量において、請求項4の発現ベクター内に組み込まれたDNAに よってコード化されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼBを、形質 転換バクテリア宿主セルに発現させるように、請求項4の発現ベクターで形質転 換された、バクテリア宿主セル。 9.検知できる量において、請求項5の発現ベクター内に組み込まれたDNAに よってコード化されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼBを形質転 換バクテリア宿主セルに発現させるように、請求項5の発現ベクターで形質転換 された、宿主セル。 10.図4のアミノ酸配列を有するタンパク質を含有する、実質的に精製されたS.ピオジェンス DNアーゼB酵素。 11.次の各段階 (a)請求項8のバクテリア宿主セルを培養する (b)培養したバクテリア宿主セルをDNアーゼB酵素を発現させるために使用 する、そして (c)培養したバクテリア宿主セルから、目的の酵素を精製するを有する実質的 に精製されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素の製造方法。 12.次の各段階 (a)請求項9のバクテリア宿主セルを培養する (b)培養したバクテリア宿主セルをDNアーゼB酵素を発現させるために使用 する、そして (c)培養したバクテリア宿主セルから、目的の酵素を精製する を有する実質的に精製されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵 素の製造方法。 13.請求項11の方法により調製されたストレプトコッカス ピオジェンスD NアーゼB酵素。 14.請求項12の方法により調製されたストレプトコッカス ピオジェンスD NアーゼB酵素。 15.そのアミノ末端で、リーダーペプチドと融合しており、そのリーダーペプ チドが配列 (配列番号1)を有するストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素。 16.アミノ酸配列が図4に示される、少なくとも1つの下記に示される突然変 異が起きた、アミノ酸配列を有するタンパク質の突然変異種であって、その変異 種は低減または増強されたDNアーゼB活性又は変更された別の性質を有する突 然変異種。 (a)図4の配列から1個以上のアミノ酸が削除されていること。 (b)図4の配列中に、1個以上の天然に発生するL−アミノ酸が挿入されてい ること。 (c)交互に、天然に起こるL−アミノ酸で図4のアミノ酸の少なくとも1つを 置換すること。 17.天然のS.ピオジェンスDNアーゼB酵素の抗原反応性を実質的に維持す る突然変異種である請求項16の突然変異種のタンパク質。 18.請求項3の、S.ピオジェンスDNアーゼB DNA配列の 少なくとも一部であって、別の遺伝子と融合し、その融合が検知しうるような、 請求項3の配列の性質を変更させた性質を有する転写融合体。 19.請求項3の、S.ピオジェンスDNアーゼBタンパク質配列によって、そ のためにコード化されたタンパク質の少なくとも一部であって、別のタンパク質 を融合し、その融合が請求項3の配列によってコード化されたタンパク質の性質 を検知できるような性質に変更させたもである翻訳融合体。 20.(1)ストレプトコッカスDNアーゼB酵素及び(2)そのアミノ末端に ソーダーペプチドが融合したストレプトコッカスDNアーゼB酵素以外のタンパ ク質を実質的に含有しない、マイトジエン活性を実質的に有しない精製タンパク 質である、実質的に精製された、ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼ B酵素。 21.S.ピオジェンスDNアーゼB酵素のフラクションIを含有し、S.ピオ ジェンス DNアーゼB酵素のフラクションIIを実質的に含有しない、請求項20 の実質的に精製されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素。 22.S.ピオジェンスDNアーゼB酵素のフラクションIIを含有し、S.ピオ ジェンス DNアーゼB酵素のフラクションIを実質的に含有しない請求項20の 実質的に精製されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素。 23.(a)第1溶出液を得るためにジエチルアミノエチルセルロースへの吸収 及びそれからの溶出と、 (b)第2溶出液を得るためにフェニルアガロース上で第1溶出液をクロマトグ ラフィーに付し、 (c)第3溶出液を得るためにヘパリンアガロース上で第2溶出液をクロマトグ ラフィーに付し、そして (d)実質的に精製されたDNアーゼB酵素を得るために第3溶出液をクロマト フォーカシーングに付すこと を有してなる実質的に精製されたストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼ B酵素の調製方法。 24.逆相高圧液体クロマトグラフィーにより、実質的に精製されたDNアーゼ Bをさらに精製する工程を有する請求項23の方法。 25.請求項23の方法により製造された実質的に精製されたストレプトコッカ ス ピオジェンス DNアーゼB酵素。 26.ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素のアミノ酸のアミノ 末端23をコード化するDNA配列とハイブリッド化し、その中にリーダー配列 のどのような部分も包含せず、約30%を越える不適正部を有しない一本鎖核酸 プローブ。 27.請求項13のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合する抗体。 28.請求項14のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合する抗体。 29.請求項20のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合する抗体。 30.請求項25のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合する抗体。 31.請求項13のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合するモノクローナル抗体。 32.請求項14のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼ B酵素と特異的に結合するモノクローナル抗体。 33.請求項20のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合するモノクローナル抗体。 34.請求項25のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素と特異 的に結合するモノクローナル抗体。 35.次の各段階 (a)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルをとり、 (b)試験サンプルに、請求項13のストレプトコッカスDNアーゼB酵素を、 試験サンプル中で抗DNアーゼ抗体による酵素活性の抑制が存在しないで酵素活 性を検出できるレベルを得るに十分な量だけ添加し、そして (c)酵素アッセイを行って、試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジ ェンス 抗体を検出及び/又は測定することにより、試験サンプル中のDNアーゼ B酵素の活性レベルを測定する、 を有する試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗 体を検出及び/又は測定する方法。 36.次の各段階 (a)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルをとり、 (b)試験サンプルに、請求項14のストレプトコッカスDNアーゼB酵素を、 試験サンプル中で抗DNアーゼ抗体による酵素活性の抑制が存在しないで酵素活 性を検出できるに十分な量だけ添加し、そして (c)試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンス抗体 を検出及び/又は測定することにより、試験サンプル中のDNアーゼB酵素のレ ベルを測定する、 を有する試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗 体を検出及び/又は測定する方法。 37.次の各段階 (a)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルをとり、 (b)試験サンプルに請求項20のストレプトコッカスDNアーゼB酵素を、試 験サンプル中で抗DNアーゼ抗体による酵素活性の抑制が存在しないで酵素活性 を検出しうるレベルを得るに十分な量だけ添加し、そして (c)酵素アッセイを行って、試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジ ェンス 抗体を検出及び/又は測定することにより、試験サンプル中のDNアーゼ B酵素の活性レベルを測定する、 を含んでなる試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼ B抗体を検出及び/又は測定する方法。 38.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルをとり、 (b)試験サンプルに請求項25のストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼB酵素を、試験サンプル中で抗DNアーゼB抗体による酵素活性の抑制が存在 しないで酵素活性を検出し得るレベルで生ずるのに十分な量だけ加え、そして (c)酵素アッセイを行って、試験サンプル中の抗ストレプトコッ カス ピオジェンス 抗体を検出及び/又は測定することにより、試験サンプル中 のDNアーゼB酵素の活性のレベルを測定する 各段階を含んでなる方法。 39.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項13記載のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素を 固体支持体に結合し、 (b)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルを、固体支持体に結合したストレプトコッカス ピオジェンスDN アーゼB酵素と反応させて、前記抗体を前記酵素そしてそれによって前記固体支 持体に結合させ、そして (c)固体支持体に結合した酵素を検出して、試験サンプル中の前記抗体を検出 及び/又は測定する 各工程を含んでなる方法。 40.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項14記載のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素を 固体支持体に結合し、 (b)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルを、固体支持体に結合したストレプトコッカス ピオジェンスDN アーゼB酵素と反応させて、前記抗体を前記酵素そしてそれによって前記固体支 持体に結合させ、そして (c)固体支持体に結合した酵素を検出して、試験サンプル中の前記抗体を検出 及び/又は測定する 各工程を含んでなる方法。 41.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項20記載のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素を 固体支持体に結合し、 (b)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルを、固体支持体に結合したストレプトコッカス ピオジェンスDN アーゼB酵素と反応させて、前記抗体を前記酵素そしてそれによって前記固体支 持体に結合させ、そして (c)固体支持体に結合した酵素を検出して、試験サンプル中の前記抗体を検出 及び/又は測定する 各工程を含んでなる方法。 42.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項25記載のストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB酵素を 固体支持体に結合し、 (b)抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体を含むと思われる 試験サンプルを、固体支持体に結合したストレプトコッカス ピオジェンスDN アーゼB酵素と反応させて、前記抗体を前記酵素そしてそれによって前記固体支 持体に結合させ、そして (c)固体支持体に結合した酵素を検出して、試験サンプル中の前記抗体を検出 及び/又は測定する 各工程を含んでなる方法。 43.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項13記載のDNアーゼBの緩衝溶液を調製し、 (b)DNアーゼB緩衝溶液を、抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼB抗体を含むと思われる試験サンプルと反応させ、そして (c)溶液の光吸収及び/又は光散乱の変化を観察及び/又は測定することによ ってDNアーゼBと抗DNアーゼB抗体との反応を検出する 各工程を含んでなる方法。 44.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項14記載のDNアーゼBの緩衝溶液を調製し、 (b)DNアーゼB緩衝溶液を、抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼB抗体を含むと思われる試験サンプルと反応させ、そして (c)溶液の光吸収及び/又は光散乱の変化を観察及び/又は測定することによ ってDNアーゼBと抗DNアーゼB抗体との反応を検出する 各工程を含んでなる方法。 45.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項20記載のDNアーゼBの緩衝溶液を調製し、 (b)DNアーゼB緩衝溶液を、抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼB抗体を含むと思われる試験サンプルと反応させ、そして (c)溶液の光吸収及び/又は光散乱の変化を観察及び/又は測定することによ ってDNアーゼBと抗DNアーゼB抗体との反応を検 出する 各工程を含んでなる方法。 46.試験サンプル中の抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB抗体 を検出及び/又は測定する方法であって、 (a)請求項25記載のDNアーゼBの緩衝溶液を調製し、 (b)DNアーゼB緩衝溶液を、抗ストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼB抗体を含むと思われる試験サンプルと反応させ、そして (c)溶液の光吸収及び/又は光散乱の変化を観察及び/又は測定することによ ってDNアーゼBと抗DNアーゼB抗体との反応を検出する 各工程を含んでなる方法。 47.DNアーゼB以外のタンパク質を発現するための元来ストレプトコッカス ピオジェンス DNアーゼB遺伝子に関するプロモーターを使用する方法であっ て、 (a)元来ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB遺伝子に関するプロ モーターをストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB遺伝子から分離し、 (b)前記プロモーターをDNアーゼBのための遺伝子以外のストレプトコッカ ス ピオジェンス タンパク質のための構造遺伝子に操作的に結合し、そして (c)前記構造遺伝子によってコード化されたタンパク質を発現する ことを含んでなる方法。 48.タンパク質がストレプトコッカス ピオジェンス中に発現さ れる請求項47記載の方法。 49.タンパク質がストレプトコッカス ピオジェンス以外の原核生物中に発現 される請求項48記載の方法。 50.元来ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼBに関するプロモータ ー配列から誘導された、実質的に精製されたプロモーター配列であって、配列中 に転写開始部位とバイテリアプロモーターの共通部−10及び−35部位に相同 な部位とを含んでなる配列。 51.原核生物中にタンパク質を発現するためのストレプトコッカス ピオジェ ンス DNアーゼB酵素に関するリーダーペプチドを使用する方法であって、 (1)融合されたDNAが、タンパク質のアミノ末端にリーダーペプチドが存在 する単一の読み枠によって組換えタンパク質をコードするように、配列 を有するリーダーペプチドをコードするDNAに対するタンパク質をコードする DNAを融合し、 (2)融合されたDNAを原核生物中に導入し、そして (3)組換えタンパク質が回収可能な量で生産されるように融合DNAを原核生 物中に発現させる ことを含んでなる方法。 52.原核生物が大腸菌である請求項51記載の方法。 53.原核生物がスタフィロコッカス、ストレプトコッカス及びストレプトミセ ス 種から選ばれるグラム陽性菌である請求項51記載 の方法。 54.組換えタンパク質が原核生物の培養基中に排出される請求項51記載の方 法。 55.ストレプトコッカス ピオジェンスの感染に対して哺乳動物を免疫化する 方法であって、哺乳動物に、請求項13の精製されたストレプトコッカス ピオ ジェンス DNアーゼB酵素を、ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB に特異的な抗体の生産を刺激するのに十分な量投与することを含んでなる方法。 56.ストレプトコッカス ピオジェンスの感染に対して哺乳動物を免疫化する 方法であって、哺乳動物に、請求項14の精製されたストレプトコッカス ピオ ジェンス DNアーゼB酵素を、ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB に特異的な抗体の生産を刺激するのに十分な量投与することを含んでなる方法。 57.ストレプトコッカス ピオジェンスの感染に対して哺乳動物を免疫化する 方法であって、哺乳動物に、請求項17の精製されたストレプトコッカス ピオ ジェンス 変異DNアーゼB酵素を、ストレプトコッカス ピオジェンスDNアー ゼBに特異的な抗体の生産を刺激するのに十分な量投与することを含んでなる方 法。 58.ストレプトコッカス ピオジェンスの感染に対して哺乳動物を免疫化する 方法であって、哺乳動物に、請求項20の精製されたストレプトコッカス ピオ ジェンス DNアーゼB酵素を、ストレプトコッカス ピオジェンスDNアーゼB に特異的な抗体の生産を刺激するのに十分な量投与することを含んでなる方法。 59.ストレプトコッカス ピオジェンスの感染に対して哺乳動物を免疫化する 方法であって、哺乳動物に、請求項25の精製されたストレプトコッカス ピオジェンス DNアーゼB酵素を、ストレプトコッカス ピオジェンス DNアーゼBに特異的な抗体の生産を刺激するのに十分な量投与す ることを含んでなる方法。 60.嚢胞性線維症の患者の嚢胞性線維症を治療する方法であって、 (a)請求項13の精製された酵素活性なDNアーゼB酵素のエーロゾルを生成 し、そして (b)前記エーロゾルを嚢胞性線維症の患者に患者の肺流体粘性を減少するのに 十分な量投与する ことを含んでなる方法。 61.嚢胞性線維症の患者の嚢胞性線維症を治療する方法であって、 (a)請求項14の精製された酵素活性なDNアーゼB酵素のエーロゾルを生成 し、そして (b)前記エーロゾルを嚢胞性線維症の患者に患者の肺流体粘性を減少するのに 十分な量投与する ことを含んでなる方法。 62.嚢胞性線維症の患者の嚢胞性線維症を治療する方法であって、 (a)請求項20の精製された酵素活性なDNアーゼB酵素のエーロゾルを生成 し、そして (b)前記エーロゾルを嚢胞性線維症の患者に患者の肺流体粘性を減少するのに 十分な量投与する ことを含んでなる方法。 63.嚢胞性線維症の患者の嚢胞性線維症を治療する方法であって 、 (a)請求項25の精製された酵素活性なDNアーゼB酵素のエーロゾルを生成 し、そして (b)前記エーロゾルを嚢胞性線維症の患者に患者の肺流体粘性を減少するのに 十分な量投与する ことを含んでなる方法。
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