JPH09501488A - 試験を行うための方法及び装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 試験を行うため装置、特に細胞試料の様な複数の試料の試験を行う装置であって、閉鎖端と開放端を持っている容器が少なくとも一列となっている容器部材と、容器部材を所定の方向に受けるのに適したホルダーとからなることを特徴とするものである。容器部材ホルダーは、一体容器部材と顕微鏡スライドガラスとの相対的位置を決定する手段を有し、容器部材を遠心分離機で使用して、試料が顕微鏡スライドガラスに堆積する様にすることができる。容器部材の好ましい材料は、高度の透光性を有しながら、細胞、特に腫瘍細胞に実質的に付着しないものであり、幾つかの適当な材料を記述している。

Description

【発明の詳細な説明】 試験を行うための方法及び装置 本発明は、試験、特に複数の試料が試験される比較試験を行う際に使用する装 置、及び複数の試料について試験を行う方法に関するものである。 本発明の一般性を損なうものではないが、以下に本発明を、細胞培養について の試験又は検定、特に、培養期間中における各種の薬剤及び薬剤の濃度の、細胞 に対する影響を確認することを目的とする試験又は検定への適用に関して説明す る。 本発明の装置は、例えば、正常細胞並びに腫瘍状細胞への、薬剤の細胞障害効 果の評価に使用できる。分別染色細胞障害（ＤｉＳＣ）検定として知られる手法 による連続的評価のために複数の試料を処理するための公知の装置がＷＯ８９／ ０６１６２に説明されている。この装置は、培養のための第１のラックと遠心分 離のための第２のラックに保持される複数の独立した試験管を有している。この 装置は、各試験管を、最初は中の試料を培養する間第１のラック中に置く必要が あり、そしてそれから細胞遠心分離機（例えばシャンドン細胞遠心分離機）又は 同様な装置内で引き続き遠心分離するために第２のラックやホルダーに移す必要 があるため不便であることがわかる。この公知の装置には多くの欠点がある。第 １の欠点は、遠心 分離において、予想ができない割合の細胞個体群が試験管内に残留することがな く、試験管から顕微鏡のスライド上への細胞の分離が確実に行われるようにする ために、試験管を、細胞、特に腫瘍細胞が付着しないか、あるいは少なくとも付 着が少ない材質で構成しなければならないことである。典型的には、これらの試 験管はポリプロピレンで構成されているが、これは透明ではなく、単に半透明で ある。 本発明の第１の面によれば、顕微鏡検査のために１つの受け部材の上で複数の 細胞試料を作るのに使用する装置であって、それぞれが開放端と閉鎖端を持った 複数の容器を、複数の開口を有する吸収部材を介して前記受け部材に取りつける 事ができる、容器のホルダーと、前記受け部材を保持する固定手段とからなり、 前記吸収部材、ホルダー及び容器は一緒に組立体を形成し、前記容器の開放端が 吸収部材と接触すると共に、吸収部材の各開口に合致して、遠心分離の際には、 各容器の開放端と吸収部材の各開口との間の接合部の周囲で漏れを生じることな く、上澄液が吸収部材に前記開口の端部を通して吸収される様になっている装置 において、前記複数の容器は少なくとも一列の容器からなる一体容器部材として 接続され、そして各容器の内表面は少なくとも実質的に細胞の物質に付着せず、 少なくとも試料の細胞が容器からその開放端を通して遠心分離により受液手段に 転送できる様になっており、前記ホルダーは所定の向きに前記一体容器部材を受 けるのに適したものであり、前記組立体を形成する際、前記一体容器部材と前記 受け部材との相対的位置を決 定する合口部材を有している装置を提供するものである。 ＤｉＳＣ検定において使用する場合、光学的な透明性は必要なく、腫瘍細胞の 非付着性が重要である。ＤｉＳＣ検定法は、生きている腫瘍細胞と死んでいる腫 瘍細胞に対して異なった効果を有する染料を使用して試験管の中にある細胞を染 色することを含み、前記のＷＯ８９／０６１６２では多くの染料の使用に触れて おり、特に、生きている細胞には排除されるが死んでいる細胞を染色するファス トグリーン（Fast Green）及びニグロシン（Nigrosin）、又はそれらの混合物を 挙げている。遠心分離すると、余分な染料は、残りの上澄液と共に吸収部材によ って吸収され、顕微鏡のスライドガラス上に細胞の試料を残す。上記の公知文献 では、１つの顕微鏡スライドガラス上に５つの試料を堆積できる様に、５本の別 々の試験管を保持することができるホルダーを開示している。次いで細胞試料は 、可視状態とするために生きている腫瘍細胞が影響される染料によって対比染色 され、そして、死んだ腫瘍細胞と生きている腫瘍細胞の割合を、スライドガラス を顕微鏡を通して観察し、顕微鏡の格子によって決定される既定の面積内にある 細胞個体群を数えることにより評価する。基準として、アヒルの赤血球を含む内 部標準を使用し、培養後、遠心分離前に導入する。細胞の計数は骨が折れ時間が かかり、特に生体内処理用として最も有効な単一または複数の薬剤を決定するに は、一人の患者に対し６００迄の試料が必要な場合があることを考えると、そう である。 好ましくは、前記容器部材と前記ホルダーとの相対的寸法は、容器の開放端が 、容器の開放端と吸収部材との間でホルダーの支持面から充分突出する様になっ ているのが良い。 本発明の好ましい具体例として、隣接する容器は、それらを前記所定間隔の関 係で保持するウェブにより一緒に接続する。 この様な何列かの容器からなる容器部材は、複数の比較試験が必要な化学及び 医療分野における多くの目的のために使用されるのは勿論知られている。商業的 に入手可能な機器のいろいろな品目が、この目的のために標準寸法でつくられて いる。いわゆるマイクロタイタ形式は、例えば１列の全ての容器に、ある試料を ８種類の計量された量で同時注入することができる８つのノズルを持った多段出 口マイクロピペットを使用して、手動或いは自動で充填できる８個の容器を１２ 列並べた配列を含む。本発明の具体例として、例えば８個の容器の直線的配列の 一列あるいは８個の容器の直線的配列の数列のような容器配列が１つのマイクロ タイタラック支持体に装着できる寸法とするのが便利である。１つの容器部材は 、複数の行と列を持った構成とすることができるが、全体の寸法はマイクロタイ タ形式に合わせるようにする。 好ましい具体例として、前記ホルダーの支持面に、受け部材が係合可能な肩部 を形成し、容器部材に対する位置を決めることができる。この肩部或いはその他 の相対位置決め手段は容器部材を好まし く位置決めし、列の一方の端部の容器と、それが隣接する受け部材の端部との距 離が、列のもう一方の端部と、それが隣接する受け部材の端部との距離より短く なる様になる。 当技術分野で知られているその他の検定法として、細胞アデノシン三燐酸レベ ルの定量（ＡＴＰ検定）、細胞代謝（ＭＴＴ）及びフルオレセイン・ジアセテー ト（ＦＤＡ）検定がある。いずれの検定も、いろいろの濃度のいろいろな薬剤を 、検定する細胞のそれぞれの試料と接触させるように位置させるセットアップと 、典型的には２日から４日といった期間の培養と、その後、上記の検定のうちの どれかによって各薬剤及び各薬剤濃度の細胞への影響を定量することを必要とす る。ＤｉＳＣ検定では、死んだ細胞を染色し、試料を顕微鏡のスライドガラスの 方へ遠心分離し、生きている細胞を対比染色し、顕微鏡のスライドガラスの上に ある細胞を計数することにより結果を読む。その他の検定では、いろいろな試薬 を添加して蛍光又は光の選択吸収又は放射を起こさせ、機械を使用して結果を読 む。ＤｉＳＣ検定では試料の分離ができる試験管を必要としている（ＷＯ８９／ ０６１６２ に開示されている様に）のに対し、その他の検定では透光性を必要 とするので、現在では最初にどの検定を使用するかを決定しなくてはならない。 どの検定を使用するかを、培養後決定する、また幾つかの試料ではＤｉＳＣ検定 を行い、残りの試料で他の検定を行うと、より効率的になるであろう。ＭＴＴ、 ＡＴＰ、及びＦＤＡの各検定は底が透明な容器で行うのが最も良く、ＤｉＳＣ検 定では非付着性材料（例えばポリプロピレンでこれは不 透明）が必要であるが、この選択はこれまで出来なかった。 かくして上記の検定法のうち、ＡＴＰ、ＭＴＴ、及びＦＤＡの各検定は、培養 後、ＤｉＳＣ検定とは違う染料を使用して行い、結果の評価は任意の波長を持っ た光を、試料と培養を行っている容器の底壁を透過させて機械的に行われる。染 色により細胞に生じる蛍光（或る場合）、或いは吸収深さ（別の場合）を定量し て、間接的手段により細胞の計数の評価を得る。しかし、特に腫瘍細胞個体群が 全細胞個体群の中で比較的少ない割合の場合（例えば８０％未満）、ＤｉＳＣ検 定法の精度の方が高く、実際、その他の方法は腫瘍細胞濃度が低いと信頼性が無 い。しかしながら、ＡＴＰ、ＭＴＴ、及びＦＤＡの各検定は、大量の試料を分光 計やプレートリーダーといった自動機械で早く検定できるという長所がある反面 、生きている細胞による偽読みが出るという短所がある。 患者の試料における正常な細胞の腫瘍状細胞に対する割合は、評価用として試 料を最初に採取した時はいろいろであるし、この割合についての培養の影響は予 想不可能であるので、培養前に、どの種類の検定が培養後の試料に対して使用す るのに最も適していそうかを決定することは不可能である。しかしながら、培養 用の容器の選択は初めに行わなくてはならず、容器が光透過検定（ＡＴＰ，ＭＴ Ｔ，ＦＤＡ）に適したものであれは、透光性材料は細胞、特に「粘着性のある」 腫瘍細胞に付着するので、それらの容器はＤｉＳＣ検定には適しない。しかしな がら、細胞の個体数がしきい値以下であ るようなことが生じると、光測定を伴う検定の信頼性は不十分で、その結果に基 づく処理が不適当になる危険が高過ぎてそのような結果は利用出来ない。従って そのような検定は無駄になる。しかしながら、全ての研究所にＤｉＳＣ検定を行 う設備があるわけではない。光測定検定は、可能な限り行えるのが好ましく、そ のような検定は多くの病院の研究室で行うことが出来、そしてＤｉＳＣ検定に関 しては必要な時に行えるのが良い。しかしながら、この目的のためには、腫瘍細 胞個体群の割合に基づく染色を行う前に決定がなされなくてはならず、そして、 その中で培養物を培養する容器が、遠心分離に掛ければ細胞の分離が確実に行え る様なものである場合のみ可能である。この問題の解決は本発明によって初めて 可能となった。 本発明の一具体例は、それを使用して工程の第一段階を行い、第一段階を行っ た後の予備調査で、遠心分離か光透過かの方法選択を、偽結果を生じずまた信頼 性を損なわず自由に選択可能にする装置である。 検定法の選択を容易にさせる為、本発明の装置の一つの具体例では、容器の閉 鎖端を各底壁で定め、一つの容器部材の全ての容器の底壁が実質的に一つの平面 内にあり、各容器の少なくとも底壁の材料は、試料の物質に少なくとも実質的に 非付着性であり、それによって、容器内の試料が、試料と底壁の光透過を伴う光 学的手法を使用したり、或いは遠心分離により試料を容器からその開放端を通し て受液手段に転送する手法によって、検定可能になる。 各容器は、遠心分離を行う場合に吸収部材との係合用の接触面を定める周囲フ ランジを備えることができる。前記公知文献ＷＯ／８９−０６１６２で述べた様 に、遠心分離は、配列された容器の開口に合った位置にある複数の穴を持った一 個の平らな吸収部材を導入して、容器の口が相手穴の周囲に押しつけられ、遠心 分離すると、上澄液が、細胞や上澄液の漏れを生じずに、穴の端部を定めている 環状表面を通して吸収部材に吸収され得る様にして行われる。各穴の縁を通して 吸収可能な様に適当な厚さを持っていなくてはならないフィルター部材を圧縮し 過ぎない様に、各容器には好ましくは、吸収部材に対して係合するための接触面 となる周囲フランジを備える。 培養の間の細胞の接触は、生存率を高め、薬剤の影響を評価する際、偽結果を 阻止するのに優りである。ＷＯ８９／０６１６２において、培養を行う試験管は この目的のために、鋭い曲率の底壁を持っている。しかしながら、鋭い曲率は光 学的影響があり、これは光学的評価法にとって欠点であり、従って本発明の具体 例として提供する容器は、断面が曲線の底壁を持ち、底壁と側壁との間の接合部 が丸くなっているが、壁の曲率は光が底壁を通して透過するのを実質的に干渉す る程大きくは無い。 しかしながら、丸い底壁を持つということは、特に直線状配列の場合、それら を直立維持するのに何か他の手段を備えない限り、そ れらのフランジによって架台に懸垂することができるのみである。本発明の別の 具体例では、複数の容器の直線配列とし、各容器は丸い底壁を有し、この配列を 容器の開放端を上にして直立に維持する基部として作用する下部横フランジが底 壁から突出している。この基部フランジはまた、この容器の配列を遠心分離機の ホルダーに取りつける際、容器の中心線が実質的に、遠心分離機の中の配列の円 形路の半径と一致する様に位置決めする作用を行う。 光学特性を更に高めるために、容器の開放端のフランジを不透明材で形成する か、不透明材で被覆して、該配列を分光計又はプレートリーダーで使用する際、 センサーに到達する迷走光を制限することができる。 この底壁の形状は好ましいのであるが、試験の性質により好ましい場合には、 平らな壁やＶ字型の壁といったその他の形を使用しても良い。 本発明ではまた、複数の容器を配列し、各容器は片方の端部が開放され、一つ 以上の帯状に接続され、容器の少なくとも開放端をカバーするカバー手段を有し 、カバーされた容器の少なくとも一つには、次の試験で使用することができる一 つ以上の薬剤等を入れている、薬剤試験装置を含む。 本発明の上記面における好適な具体例として、容器部材は、８個 の容器又は筒を１列にして持った、又は８個の容器又は筒２列で１６個の帯状と した標準マイクロタイタ形式である。別の例として、相互に隣接する８個の筒を 多列にすることもできる。 容器は「逆さ」姿勢で遠心分離して、細胞を容器から受け部材に移動できる様 にしても良い。使用の際、液体は、その中に含まれる試料が遠心分離により受け 部材に堆積する間、側面方向で吸収材に吸収される。容器の断面は便宜上どの様 な形でも良いが、通常は円形断面であろう（この様な好ましい形状に関し以下に 記述する）。 更に、標準の９６筒プレートも、８容器１２列の容器又は「筒」配列を採用す ることにより本発明に従って形成できる。遠心分離により試料が堆積する受け部 材はこの様な配列から全ての試料を受けるに充分な大きさとすることができる。 ９６筒プレートは、もっとも安くて最も有効なものを探すために多くの薬剤を試 験するのに特に有効である。好ましくは、容器部材の筒の内径は３．５mmのオー ダーであるが、これよりも大きいか、小さいか、その他の径でも良い。過去にお いては筒の径は通常６−７mmであった。本発明ではこれは可能であるが、内径を ３−３．５mmに減らすと、上記試験を行うのに必要な細胞の数が４分の１で済む 。これは、通常は高価である薬剤の使用を最小にし、時には少量しかない任意の 細胞試料に対して行う試験の種類を最大にすることができるので重要である。 上記の受け部材は、好ましくは、試料を堆積させる顕微鏡スライ ドガラスである。吸収手段は、好ましくは、適当な形状の吸い取り紙の様な濾紙 である。固定手段は、当業界で知られる、適当に適合されたシャンドンホルダー の形式をとっても良い。 容器は、遠心分離の際、容器内の試料の細胞が全然容器に付着せず、受け部材 に移動できる様にシンジオタクチックポリプロピレン製かサスペンショングレー ドのポリスチレン製とすることができる。更に、これらの材料は十分に透明であ り、従ってＭＴＴ、ＡＴＰ、またはＦＤＡ検定に使用できる。従ってこれらの容 器はＤｉＳＣ検定のみならず、これらの検定にも使用できる。従って最も望まし い検定を培養後選択できる。 容器を滅菌し、いろいろな量及び／又はいろいろな性質の薬剤を懸濁剤又は溶 剤に懸濁または溶かして、幾つかの筒に添加し、冷凍し、液体を蒸発させ、その 後の試験の為、前作成された薬剤セット等を固体として提供することができる（ この方法は凍結乾燥として知られている）。薬剤は水媒体に可溶性であるのが好 ましい。この様な容器部材をキットの形で提供すると簡単な試験が可能となり、 例えば容器部材を１６筒形式（８個の筒を２列）とする場合、５種類の薬剤を２ 組で１０個の筒で使用し、２つの筒には薬剤を入れず負のコントロール筒とし、 ２つの筒には毒物を入れて正のコントロール筒とし、残りの２つの筒はその他の 必要な用途に使用できる。カバー手段は包み込むものでも、一つのキャップでも 、帯状の複数のキャップでも良い。 本発明の別の面では、複数の試料を比較試験する方法であって、複数の試料を 上に明示した装置のそれぞれの容器に導入するステップと、容器にある試料に対 し第１の操作を行い、第１のステップを行った後、少なくとも試料の１つの特性 を調査し、同調査の結果に基づいて、以降の１つ又は複数のステップを、容器内 の現位置の試料につき、容器の底壁を通しての光透過を伴う手法により行うか、 試料を遠心分離により容器の開放端を通して受け部材に抽出して行うかを決定す るステップとからなる試験方法を提供する。 上に明示する方法は複数の細胞試料に関する比較試験を行う際に採用できる。 この場合、この方法では、工程の第１のステップは、選定された培養条件下にお ける細胞試料の培養であり、そして前記調査は工程の以降のステップを決定する ための既定の種類の細胞の個体群の定量を含むものである。 本発明の特に有用な用途は腫瘍細胞の評価であって、この場合、細胞試料は腫 瘍細胞を含み、そして前記調査は培養段階が終了した時の細胞個体群に存在する 腫瘍細胞の割合の評価を含むものである。この細胞個体群を定量する調査は、最 初に細胞を複数の容器の開放端から、遠心分離によって顕微鏡スライドガラスの 様な受液手段に抽出し、腫瘍細胞個体群を全細胞個体群に対する割合として計数 することにより行うことができる。 次に本発明の具体例を、添付図面を参照してより詳細に説明する。 図１は、関連させて並置した２つの要素を示す、本発明の具体例の斜視図であ る。 図２は、図１の具体例の一方の要素を構成する容器部材の部分の拡大した側面 図である。 図３は、図１の具体例の、第２の要素を構成する容器ホルダーの平面図である 。 図４は示されている双方の要素が一緒に装着された状態における図１の具体例 の側面図である。 図５は、本発明の一部を構成する容器部材を、マイクロタイターラックの所定 位置にある状態で示す斜視図である。 まず図１を参照すると、示されている具体例は、夫々大まかに１２で示される 上端が開口した８個の容器又は筒を一列に持ち、大まかに１１で示される容器部 材と、大まかに１３で示され、以下に詳細に説明する容器部材１１を受けるため の容器部材ホルダーを有している。 容器部材１１は、その具体例として、サスペンショングレードのポリスチレン 又はシンジオタクチックポリプロピレンの様な適切な素材、又は、エクソンが製 造し、 ”Escorene”という商標のもとに販売されている素材、又はネステにより取引参 照記号 XB80 12DNAのもとに販売されているような他の素材により一体に形成される。こ れらの素材の特性は、細胞に対しての実質的な付着性がなく、十分に澄んで透明 であり、以下に、より詳しく説明する好適な使用法ができるものである。 容器部材１１の各容器１２は、両端が開いている、概ね円筒形で、僅かにテー パーがかかり、開放端１５と閉鎖端１６を持った管状側壁１４を有している。開 放端１５はフランジ１７により囲まれており、隣接する容器１２同士は夫々ウェ ブ１８によって接続されている。 底壁１６は僅かに丸みを帯びており、上側が凹んでいて、丸くなった角部１８ において側壁１４に接続している。各容器１２の直径は開放端１５において3.5m mのオーダーで、テーパー状側壁１４のため僅かに減少して行く。側壁における このテーパーは、容器部材が成形金型から、より容易に分離出来るようにするた めの実用的な意味しかない。隣接容器１２問の中心間距離、即ちピッチは、本具 体例では、いわゆるマイクロタイター形式の標準設備で、本発明の装置が使用で きる様に９mmである。１個の容器部材１１は８個の容器１２を有し、８ノズルマ イクロピペットから１回の操作で充填できる。この様なピペットは当業界で知ら れており広く商業的に入手可能である。 容器部材１１の一方の端部からは、フランジ１７によって定まる 平面に平行で、しかし開放端１５から容器１２の底１６方向に間隔をおいて、端 タブ１９が突出している。この端タブ１９の下部には位置決めリブ２０があり、 これとタブ１９間には、以下に詳細に説明する支持フレームとスナップ係合する ためのノッチ２１を設けている。図１から分かる様に、タブ１９には、マイクロ タイタラックのボス又はスタッドと係合して、ラック上に位置させた際に容器部 材の向きを決定するための形成凹部１０を形成している。タブ１９と反対側の端 部には、凹部１０を形成していない短めのタブ２２があり、その下部には図２に 示すようにリブ２０に形状が一致するリブがある。 容器部材１１の底部から、その容器部材の長さの横方向へ横ベースフランジ２ ３が突出しており、その両側から僅かに傾斜した延長肢２５と２６が容器１２の 底１６の下方に突出し、これにより容器１２の底１６が丸くても容器部材１１が 水平面に置かれ安定して直立していられる様に２本の平行な支持縁が形成されて いる。 丸い底壁１６を含めた容器１２の寸法は、少量の細胞試料の使用を許容し、ま た丸い底は、直径が６−８mmで平な底壁を有する従来の“筒”の場合のように細 胞試料が大きな底に拡がることを許容するということよりも、むしろ、より緊密 に結ばれる配置で細胞試料を保持できることにより、培養過程を促進する。 容器部材１１用のホルダー１３は、図１に示すように、中央の凹 部２７と本体１３の上面を定める２つの対向する上部横フランジ２８，２９を有 する長い本体を有している。本体１３の一方の端部３０において、フランジ２８ ，２９には、前記端部３０の肩を定める、夫々直立突出部３１，３２と、後述す るように位置決めスタッドとして作用する、各フランジ２８，２９上の２つの直 立スタッド３３，３４が設けられている。本体１３内において凹部２７は、本体 １３内の対称位置からずれて位置しており、他方の端部３５からと比較して一方 の端部３０からの距離の方が遠い。 凹部２７の夫々の端部には、フランジ２８，２９の上面から、凹部２７の全深 さより少ない距離だけ下方に拡がる溝３６，３７があり、そして各溝３６，３７ には、容器部材１１を凹部２７に位置決めした際に、容器部材１１の両端のリブ ２０を受けるための夫々長手方向のスロット３８，３９を設けている。分かるよ うに、容器部材１１の第１の端部の長いタブ１９は本体１３の端部３０の長い溝 ３６に嵌まるように意図され、そして短いタブ２２は短い溝３７に嵌まるように 意図されている。もし容器部材１１を逆向きで凹部２７に嵌めたとするとタブ１ ９が本体１３の端部から突出し、そして、このことは、以下に詳細に説明するよ うに、本体１３が遠心分離機用の標準リテナーに装着されるのを防ぐことができ る。従って本発明の装置は、ホルダーに対する容器部材の向きを識別する手段を 明らかに設けているわけである。 図４から分かるように、容器部材１１を凹部２７に嵌めると、容 器１２の開放端１５がフランジ２８，２９の上面から僅かに突き出すが、突出ス タッド３３，３４より先ではない。このホルダーブロックにより、シャンドン遠 心分離機リテナーのような標準遠心分離機クリップを使い、顕微鏡スライドガラ スをリテナーに取りつけ、そして適当な形状のフィルター素子を、容器部材の列 と顕微鏡スライドガラスとの間に位置させた状態において、容器部材１１を、遠 心分離機に取りつけることができる。例としてのフィルター部材と顕微鏡スライ ドガラスを図４中に参照符号４０，４１で示す。しかしながら、フィルター紙と 顕微鏡スライドガラスは本発明の装置の一部ではなく、本発明の装置が使用され る様子を示すために図示しているに過ぎない。 顕微鏡スライドガラス４１をフィルター紙４０に対して押しつけ、そしてホル ダー１３のフランジ２８，２９より下で係合してフィルター紙４０を容器１２の 開放端１５に押しつけるために、標準遠心分離機リテナーを使用することができ る。フィルター紙は、こうして、フランジ１７と顕微鏡スライドガラス４１に対 してしっかりと押しつけられ、顕微鏡スライドガラスはフランジ２８，２９の上 面とフランジ１７間で圧縮されているフィルター紙により全表面に渡って支持さ れる。しかしながらフランジ１７とフランジ２８，２９との間の表面高さの差は 、顕微鏡スライドガラスによる圧力がフィルター紙をかなり圧縮して、フィルタ ー紙が容器１２の開口の周囲を密閉して吸収材への横方向の吸収を阻止する程大 きくはないが、吸収層と、顕微鏡スライドガラス及びフランジ２８，２９の上面 の との間の漏れを阻止するに充分大きなものである。 顕微鏡スライドガラス４１と容器１２の列との相対的位置は、凹部２７と、直 立突出３１，３２によって定まる肩との間の相対的位置によって決定される。 図３を参照して分かるように、端部の容器１２と、ホルダー本体１３の端部３ ０に最も近い顕微鏡スライドガラスの端部との間の距離は、ホルダー本体１３の 他の端部３５と列の他端にある容器との間の距離より僅かに大きい。これにより 、顕微鏡スライドガラスの相対する端部の外観上の区別が明瞭であり、これを適 切な向きに位置決めできる。容器部材１１は凹部２７内に一つの向きだけに位置 決めできるのであるから、顕微鏡スライドガラス上に形成する標本の配置は予め 決定づけられ、不注意に反対にしてしまうことがない。 識別の目的のため、顕微鏡スライドガラスは、長手方向の一方の端にそって、 試料の付着に使用する範囲と重ならない領域上で、曇らせたり、または適当な目 立つ材料で塗布したりすることができる。顕微鏡スライドガラスの一方の長手方 向の縁に沿ってマーキングすることにより、１列において８個までの試料（又は ８個の２列において１６個）の位置決めに最大の長さを利用できる。 最後に、図５は大まかに４５で示す、従来のマイクロタイター形 式のフレームを図示するもので、１つの容器部材が２つの対向する突出辺間に位 置決めされて留められている状態を示している。１つのラック４５に、このよう な部材を１２個迄保持可能で、９６個の筒試料列を得ることができる。 本発明の別の具体例（図示していない）として、容器部材を８行１２列で９６ 個の筒を持つ一体ものとして形成される。また他の具体例として、例えば８個の 筒を２４列で、１９２の筒を有する列（列を標準の９mmの代りに４．５mm間隔に する）を形成するもの、１６個の筒２４列で、３８４の筒を有する列（列も列内 の筒も間隔を４．５mmとする）を形成するものも可能である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ， ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 顕微鏡検査のために、一つの受け部材上に複数の細胞試料を構成するため に使用する装置であって、夫々が開放端と閉鎖端を持った複数の容器と、複数の 開口を有する吸収部材を介して前記受け部材に取りつけ可能な、容器のホルダー と、前記受け部材を保持する固定手段とからなり、前記吸収部材、ホルダー及び 容器は一緒に組立体を形成し、前記容器の開放端が吸収部材と接触すると共に、 吸収部材の各開口に合致して、遠心分離の際には、各容器の開放端と吸収部材の 各開口との間の接合部の周囲で漏れを生じることなく、上澄液が、吸収部材に前 記開口の端部を通して吸収される様になっている装置において、前記複数の容器 は少なくとも一列の容器からなる一体容器部材として接続され、そして各容器の 内表面は少なくとも実質的に細胞の物質に付着せず、少なくとも試料の細胞が遠 心分離により容器からその開放端を通して受液手段に転送できる様になっており 、前記ホルダーは所定の向きに前記一体容器部材を受けるのに適したものであり 、前記組立体を形成する際、前記一体容器部材と前記受け部材の相対的位置を決 定する合口部材を有している事を特徴とする装置。 ２． 前記容器部材と前記ホルダーの相対的寸法は、容器の開放端がホルダーの 支持面から突出し、前記容器の開放端と受液手段との間に位置する吸収部材に夫 々の端面が十分に接触するが、容器の開放端の周囲を密封する程吸収部材を圧縮 することがない寸法であることを特徴とする請求の範囲１に記載する装置。 ３． 前記ホルダーの支持面には、前記受け部材が係合して容器部材に対する位 置を決定することのできる肩を設けていることを特徴とする請求の範囲２に記載 する装置。 ４． 吸収部材には、前記夫々の開口に加えて、ホルダーの支持面から直立する 位置決め突出部を受けるためのもう一つ別の開口を、前記夫々の開口とはずらし て設けることを特徴とする請求の範囲２又は３に記載する装置。 ５． 前記容器部材の複数の容器は、実質的に一定のピッチで間隔を置いて配置 され、前記一体容器部材と前記受け部材の相対的位置を決定する前記手段は、容 器列の一方の端にある容器と、隣接する受け部材の端との距離が、容器列の他端 の容器と、それに隣接する受け部材の端との距離よりも短いように容器部材を位 置させることを特徴とする、前記いずれかの請求の範囲に記載する装置。 ６． 複数の容器の閉鎖端は、夫々の底壁によって定められ、容器部材の複数の 容器の底壁が全て実質的に第１の平面にあり、そして各容器の少なくとも底壁は 、少なくとも実質的に透明な材質により構成され、それによって容器内の試料が 、試料と底壁を通しての光の透過を伴う光学的手法を利用したり、又は、遠心分 離による、開放端を通しての容器から受液手段への試料の転送を伴う手法を利用 して検定できることを特徴とする、前記いずれかの請求の範囲に記載する装置。 ７． 容器部材の複数の容器は、それらを前記所定の間隔関係に保持するウェブ により接続されていることを特徴とする、前記いずれかの請求の範囲に記載する 装置。 ８． 各容器の開放端は、遠心分離を行う際に吸収部材と係合する接触面を定め る周囲フランジを持っていることを特徴とする、前記いずれかの特許請求の範囲 に記載する装置。 ９． 容器部材の隣接する容器の中心間距離は実質的に４．５mmか９mmのいずれ かであることを特徴とする、前記いずれかの請求の範囲に記載する装置。 １０． 底壁の横断面は曲線状であり、底壁と側壁との間の接続部は、容器の側 壁と底壁の両方に実質的に接線になるように丸くされていることを特徴とする、 前記いずれかの請求の範囲に記載する装置。 １１． 容器部材は、当該部材を容器の開放端を上にして直立向きに保持する基 部として作用する下部横フランジと共に形成されていることを特徴とする、前記 いずれかの請求の範囲に記載する装置。 １２． 容器部材は、複数の列と行からなり、少なくとも一つの列又は行が単体 としてこの配列から分離可能であることを特徴とする、前記いずれかの特許請求 の範囲に記載する装置。 １３． フランジは不透明材で形成するか、または不透明材を塗布することを特 徴とする、請求の範囲８から１２に記載するいずれかの装置。 １４． 複数の試料を比較試験する方法であって、複数の試料を請求の範囲６の 装置の夫々の容器に導入するステップと、容器にある試料に対し第１の操作を行 い、第１のステップを行った後に少なくとも試料の１つの特性を調査するステッ プと、同調査の結果に基づいて、以降の１つ又は複数のステップを、容器内の現 位置の試料に つき、容器の底壁を通しての光透過を伴う手法により行うか、試料を遠心分離に より容器の開放端を通して受け部材に抽出して行うかを決定するステップとから なることを特徴とする試験方法。 １５． プロセスの第１のステップは、選定された培養条件下における細胞試料 の培養であり、そして前記調査は、プロセスの適切な以降のステップを決定する ための、既定の種類の細胞の個体群の定量を含むことを特徴とする、請求の範囲 １４に記載する複数の細胞試料を比較試験する方法。 １６． 細胞試料は腫瘍細胞を含み、前記調査は、培養段階が終了した時の細胞 個体群中に存在する腫瘍細胞の割合の評価を含むことを特徴とする、請求の範囲 １５の方法。 １７． 以降のステップの決定は、最初に細胞を少なくとも一つの容器、但し全 てでは無い容器の開放端から、遠心分離によって顕微鏡スライドガラス上に抽出 し、腫瘍細胞の個体群を全細胞個体群に対する割合として計数することにより行 うことを特徴とする、請求の範囲１４から１６のいずれかの方法。 １８． 残りの容器中の細胞の以降の分析は、腫瘍細胞の個体群がしきい値を越 えた時は光学的評価方法で行い、腫瘍細胞の個体群が前記しきい値以下である場 合は、細胞を顕微鏡スライドガラスに抽出して、スライドガラス上の細胞の顕微 鏡視覚検査により評価することを特徴とする、請求の範囲１７に記載する方法。