JPH09501441A

JPH09501441A - 細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の処置

Info

Publication number: JPH09501441A
Application number: JP7506848A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ガーバー，マイケル
Original assignee: ソマトジェン，インコーポレイテッド
Priority date: 1993-08-13
Filing date: 1994-08-09
Publication date: 1997-02-10
Also published as: AU7011098A; IS4198A; NO960545L; CA2167716A1; NO960545D0; WO1995005167A2; US5750132A; EP0784983A2; EP0784983A3; WO1995005167A3; EP0717619A1; AU7194694A

Abstract

(57)【要約】本発明は、細胞外ヘモグロビン投与に関連した副作用の重篤度および頻度を軽減する方法に関し、平滑筋緩和薬の投与を包含する。好ましい平滑筋緩和薬は、テルブタリンおよびニフェジピンであり、予防的処置、応答的管理処置、または応答的断続処置で投与され得る。

Description

【発明の詳細な説明】細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の処置本発明は、平滑筋弛緩薬の投与を包含する、細胞外ヘモグロビン投与に関連する副作用の重篤度および頻度を軽減する方法に関する。背景患者が血液を失うときは、通常、失った全液量を補給する必要がある。しかしながら、通常は失ったヘモグロビンのすべてを補給する必要はない。ヘモグロビン補給療法の主要な目標は、肺から末梢組識へ酸素を運搬することである。ヘモグロビンの投与はまた、血漿量の増加ならびに維持をもたらし、そして血液の粘度を減少させる。多くの容積増量用コロイドおよび晶質溶液が現在市販されているが、酸素を運搬できるものはない。この能力を有する唯一の現在の治療は、ヒト血液による輸血である。臨床上の実施にあたって、少量から中位の量の血液量を短時間に失った患者は容量の回復のみを必要とする。更に重篤な血液損失においては容量の補給および酸素運搬能の補給の両方を必要とする。大量の血液喪失のような状況においてのみ、血小板および凝固因子のような他の血液成分を補給することが必要である。以下の危険性ならびに限界が、現在ヒト血液による輸血に関連している：１)感染症の伝染の危険性（すなわち、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、非Ａ非Ｂ型肝炎、Ｂ型肝炎、エルジニア・エンテロリチカ(Yersinia enterolitica)、サイトメガロウイルス、ヒトＴ細胞白血病１型ウイルス）。２)免疫的危険性（すなわち、軽度の溶血性もしくは致命的な輸血反応、免疫抑制、移植に対する宿主反応）。３)投与前における血液型類別および交差性適合の必要。４)ボランティア提供者の有用性。５)制限された安定性（42日あるいはそれ以下の非凍結貯蔵寿命）。数多くの細胞外ヘモグロビンが酸素の送達手段および他の用途として使用されることについて提案がなされてきた。しかしながら、現在まで動物あるいはヒトにおいて試験されたすべての細胞外ヘモグロビンはある程度、多くの場合は軽いかもしくは取るに足らないものだが、副作用を有する。このような副作用あるいは不都合な作用の軽減または緩和は、いずれの治療剤を投与する際にも常に望まれる目標である。組換え型ヒトヘモグロビン(rHb1.1)は新規なヘモグロビンを基にした酸素キャリアー(HBOC)であり、その安全性ならびに効能は血液を喪失した患者において最終的に研究される。現在までrHb1.1の安全性および薬動力学は健常な成人男子について評価されてきた。 rHb1.1は遺伝子工学的に作成された無赤血球HBOCであり、しかも全血由来でなくて発酵により作られたものであるから、rHb1.1は輸血に関連する危険性ならびに制限を消滅もしくは最少にし得る。rHb1.1が容量補給の性質および酸素運搬特性を有するという事実から、rHb1.1は血液喪失の患者に対する可能性のある多能な補給液になるといえる。これはまた放射線照射または化学療法、赤血球生成および貧血、冠状動脈血管修復手術、そして鎌型赤血球貧血または組識虚血の処置のような他の臨床領域においても有用性を有し得る。rHb1.1は他の臨床領域においてもまた有用性を有し得る。投与されたrHb1.1は可溶性血漿タンパク質として循環するので、rHb1.1はコロイド浸透圧の効果を加えることにより血管内の容量を維持および拡大する可能性を有する。タンパク質のような巨大分子により加えられる浸透圧の部分は、コロイド浸透圧あるいは膨張圧である。血管内血漿の膨張圧は、間質液の膨張圧よりも高い。血漿の膨張圧は血管内空間に水を保持し従って血管内容積を維持する際の主要な力となる。この膨張圧が、血管内空間から水を排出する傾向を有する微小循環系内の流体静力学的圧力を平衡させる。膨張圧は、微小管を透過しない巨大分子のモル濃度に比例する。通常血漿膨張圧の70〜80％は血漿アルブミンによるものである。rHb1.1のコロイド浸透圧は、 Wescor 4420型コロイド浸透圧計で測定すると５％ヒト血清アルブミンの浸透圧と同程度である。アルブミンの分子量が66,500ダルトンで、そしてrHb1.1の分子量が64,600ダルトンであるから、両者のモル濃度は類似しておりそれ故に同程度の膨張圧を有する。アルブミンは一般に25gの投薬量に製剤されている。従ってr Hb1.1を25g投薬すると、25gのアルブミンを投与したのと同程度の容積拡大の特質を有することが期待される。重要な膨張効果を有することに加えて、rHb1.1はまた酸素を運搬する能力をも有する。rHb1.1に対する酸素の平衡曲線は全血のそれと類似しており、これはrH b1.1が赤血球と同様に肺で酸素を積みそして組識において酸素を降ろすことを示唆している。rHb1.1の投与は、輸血の危険性に患者を曝すことなく、出血の間に失われた酸素運搬能の一部を補給することになる。発明の要旨本発明は、平滑筋弛緩薬の投与を包含する、細胞外ヘモグロビン投与に関連する副作用の重篤度および頻度を軽減する方法に関する。本発明の１実施態様では、細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の処置は、患者または被験者を予防的に処置する方法により、この患者または被験者は、平滑筋弛緩薬、好ましくはβアドレナリン性アゴニストまたはカルシウムチャンネル阻止薬、より好ましくはテルブタリンまたはニフェジピン、最も好ましくはテルブタリンと一緒に細胞外ヘモグロビンを与えられる。本発明の別の実施態様では、細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の処置は、平滑筋弛緩薬、好ましくはニフェジピンを用いる患者または被験者の応答的管理処置(responsive regimented treatment)方法による。本発明の別の実施態様では、細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の処置は、平滑筋弛緩薬、好ましくはニフェジピンを用いる患者または被験者のを応答的断続処置(responsive intermittent treatment)方法による。本発明の別の局面は、種々の障害に対する処置として細胞外ヘモグロビンを用いる新規な方法であり、その障害は放射線照射または化学療法、赤血球生成および貧血、冠状動脈血管修復手術、そして鎌型赤血球貧血または組識虚血の処置からなる群から選択されるかまたはその群から生じる。発明の詳細な説明本発明は、細胞外ヘモグロビン投与に関連する副作用の重篤度（強度あるいは程度とも称される）および頻度を軽減する方法に関する。本発明の主題である副作用とは、胃腸(GI)の不快感に関する作用である。副作用を緩和する方法は、このような副作用を予防的ならびに応答的処置の両者を包含する。予防的処置とは、副作用の症状が始まる前、好ましくは細胞外ヘモグロビンの投与を開始する前に、この副作用の症状を処置するための薬理学的作用物質を投与することを意味する。好ましくは、予防的処置はまた細胞外ヘモグロビンの投与を開始した後で、副作用の症状を処置するための薬理学的作用物質の反復後続投薬(repeated su bsequent dosing)をも付加的に包含する。応答的処置とは、副作用の症状が始まったか、あるいは起こったかの後でのみ薬理学的作用物質を投与することを意味する。応答的処置は、断続的かまたは管理的かのいずれかで行うことができる。副作用の重篤度の軽減とは、副作用による症状の強度が有意に減少するかまたは症候群に包含される副作用の症状の数が有意に減少することを意味する。副作用の頻度の減少とは、患者群中で副作用を受けている被験者または患者の数が有意に減少することを意味する。副作用の症状の強度またはその数の有意な減少とは、一定量の細胞外ヘモグロビンを投与したときに起こる副作用の症状の強度またはその数が定量的に減少するか、あるいは副作用の症状の強度またはその数が定量的に増加せずに細胞外ヘモグロビンの投薬量の増量を認めることを意味する。副作用を受けた被験者数または患者数の有意な減少とは、測定法の誤差バーより多いが統計的に有意に少ない数の被験者または患者が、薬理学的作用物質による処置が介在した後も同強度の副作用を受けることを意味する。このような規準は、所定の研究において一定量の細胞外ヘモグロビンの投薬により被験者または患者が全く症状を受けない場合にも適用する。細胞外ヘモグロビンの供給源および投与添付の請求の範囲のために、「細胞外ヘモグロビン」は「ヘモグロビン」または「ヘモグロビン様タンパク質」を意味するが、これは１個あるいはそれ以上のヘテロ４量体を含有し、その組成は(a)２本のαグロビン様ポリペプチドおよび２本のβグロビン様ポリペプチド、(b)１本のジ-αグロビン様ポリペプチドおよび２本のβグロビン様ポリペプチド、(c)２本のαグロビン様ポリペプチドおよび１本のジ-βグロビン様ポリペプチド、(d)１本のジーαグロビン様ポリペプチドおよび１本のジ-βグロビン様ポリペプチド、(e)１本の融合α／βグロビン様ポリペプチドならびに別々のαおよびβグロビン様ポリペプチド、あるいは(f) ２本の融合α／βグロビン様ポリペプチドである。１個の４量体のポリペプチドは、別の４量体のポリペプチドと架橋または遺伝子操作によって融合し得る。もしヘモグロビンが４個以上のグロビンのサブユニットまたはドメインを含有するときは、ヘモグロビンは多量体であるといわれる。そのために用語「多量体」は、８量体ヘモグロビン（２個の４量体が結合したもの）および８量体以上のヘモグロビンを包含する。このヘモグロビンは、１個またはそれ以上のヘム補欠分子族により酸素を結合する能力を有することが好ましい。ヒトαグロビン様ドメインまたはポリペプチドは、天然のヒトαグロビンまたはαグロビンの変異体(１残基またはそれ以上の置換、欠失、または挿入によって天然配列と異なる)であるが、ヒトαグロビンとのかなりの相同性（この後に定義する）を残しており、そして依然としてβグロビンと会合し得る。βグロビン様ドメインまたはポリペプチドは類似的に定義される。ヒトαまたはβグロビンと十分相同的な動物ヘモグロビンまたはその変異体のサブユニットは、用語「ヒトαまたはβグロビン様ドメインまたはポリペプチド」により包含される。例えば、ウシヘモグロビンのサブユニットは、これらの用語の範囲内である。α- およびβ-グロビン様ポリペプチドは、「グロビン」としてまとめて称し得る。便宜のために用語「ポリペプチド」は、単一鎖または相当長いポリペプチド鎖のドメインを称し得る。好ましくは、グロビン様ドメインまたはポリペプチドはヘムを取込む能力を有する。「遺伝子融合ヘモグロビン」は、少なくとも１本の「遺伝子融合グロビン様ポリペプチド」（グロビン擬オリゴマー）を含有するヘモグロビン様タンパク質であって、後者（グロビン擬オリゴマー）は２個またはそれ以上のグロビン様ドメインを含有しているが、これらドメインは同一または異種のいずれでも良い。ジ -αグロビン様ポリペプチドは、第１のα-グロビン様ポリペプチド（ドメイン）の正常なＣ末端と第２のα-グロビン様ポリペプチド（ドメイン）の正常なＮ末端との間のペプチド結合により連結された２本のαグロビン様ポリペプチド配列（ドメイン）から本質的に成るポリペプチドである。これら２本の配列は直接に連結され得るか、あるいは１個またはそれ以上のアミノ酸から成るペプチドリンカーを介して連結され得る；用語「ペプチド結合」は両方の可能性を包含することを意図する。ジ-αグロビン様ポリペプチドは、βグロビンと一緒に折りたたみ、そしてヘムを取り込んで、機能的なヘモグロビン様タンパク質を形成する能力を有することが好ましい。ジ-βグロビン様ポリペプチドは類似的に定義される。成分ドメインの１個だけに変異があるジ-αまたはジ-βグロビン様ポリペプチドは、「非対称性」と呼ばれる。１本のαグロビン様配列が１本のβグロビン様配列とペプチド結合により連結されている「α／β-グロビン様擬２量体」を提供することもまた可能である。この「α／β-グロビン様ポリペプチド」ならびにジ-αおよびジ-βグロビン様ポリペプチドは、「擬２量体グロビン様ポリペプチド」または「ジグロビン」とまとめて称される。定義を拡大すれば、ジ-α、ジ-β、またはα／βグロビン様ポリペプチドを包含するヘモグロビン様タンパク質は「擬４量体」である。たとえジ-αヘモグロビンは２量体に解離しなくても、正常なヘモグロビンの場合より遅いけれどもやはり血流から排泄される。ポリペプチドがα（またはβ）グロビンに実質的に相同であるか否かを決めるには、配列類似性が重要な定義であるがそれだけに限定されるものではない。配列類似性は便利な算出法により決定され得るか、典型的には最良の適合を達成するために少数のギャップが導入されてしまう。好ましくは、本発明のα-グロビン様ポリペプチド（またはそのドメイン）は、野性型ヒトαグロビンと少なくとも約75％の配列同一性を有する。しかしながら、配列の同一性がより少ないポリペプチドであっても、もしそのペプチドが偶然から期待されるよりも配列の同一性が大であり、そしてまたαグロビンの特徴的な高次構造および同様の生物学的活性を有するならば、やはりαグロビンと「実質的に相同」と考えられる。比較によれば、Artemiaのヘム結合ドメインは、たとえ一次配列の同一性がわずか27 ％であってもミオグロビンと相同であると考えられている。その理由は、保存されている残基周辺のヘム結合ドメインおよび他のヘモグロビンに保存されている残基を並べると（すなわち、ヘムの接触部あるいは互いのヘリックスセグメント関係の決定に関わる）を並べると、Artemiaのドメインは古典的グロビンヘリックスＡからＨまでを有し、各々に対応するターンおよび種々の保存されたグロビンファミリー残基を有することが示唆されたからである。またセリンプロテアーゼ阻害剤の中には、わずか30％しか配列相同性がない数組のメンバーが相同であると認められたタンパク質ファミリーがある。ヒトヘモグロビンにαおよびβ鎖の両方が変化している100種類以上の変異体があることはよく知られており、そしてこの変異の多くは酸素の結合ならびにヘモグロビンの他の性質に影響を及ぼすことが知られている。ヒトαおよびβグロビン自身は84箇所に違いがある。さらに、グロビン配列中の種間の変化は広範囲にわたって研究されてきた。Dickerson，Hemoglobin Structure，Function，Evo lution and Pathology ch.3(1983)の報告によれば、1982年現在では60種の既知の脊椎動物のαグロビンはその141箇所の内23箇所が同一の残基であり、一方検討された66種の脊椎動物のβグロビンは146残基のアミノ酸の内20個が同一である。ミオグロビンもグロビンファミリーに所属するが、60種の脊椎動物のミオグロビンは153箇所の内27個のアミノ酸が不変であった。もし哺乳動物だけを考慮すると、不変のアミノ酸はαグロビンで50／141、βグロビンで51／146、そしてミオグロビンで71／153である。不変の位置は、分子の活性中心：ヘムの裂け目およびサブユニット間の接触部の周辺に群がっている。可変アミノ酸の中には、検討されたわずかの種に対してのみ共通な配列から分岐しているものがある。ヒトαグロビンと選択された他の脊椎動物のαグロビンとの違いの総数は次の通りである：すなわちアカゲザル(４)、ウシ(17)、カモノハシ(39)、ニワトリ(3 5)、ヒトゼータ(human zeta)（胎児性）(61)、コイ(71)、およびサメ(88)である。無脊椎動物のグロビンについては、分岐は、海生ヤツメウナギ(113)、軟体動物(124)、Glycera(海生アカボウフラ；marine bloodworm)(124)、およびChirono mus (ユスリカ)(131)である。対象をβグロビンファミリーに転じると、ヒトのβ グロビンと他の脊椎動物のβグロビンとの違いはアカゲザル(8)、ヒトδグロビン(10)、ウシβグロビン(25)、ウシγグロビン(33)、ヒトγグロビン(39)、ヒトε（胎児性）グロビン(36)、カモノハシ(34)、ニワトリ(45)、サメ(96)、海生ヤツメウナギ(123)、軟体動物(127)、Glycera(125)、およびChlronomus(128) である。この違いの多くは、読み違いであり得る−−可変性アミノ酸は他の機能的に等価なアミノ酸について１個のアミノ酸の「保存的置換」だけしか表示し得ない。「保存的置換」とは、グロブリン様ポリペプチド（またはドメイン）が、ヘムを取り込みそしてαおよびβグロビンサブユニットと会合して、４量体（または擬４量体）のヘモグロビン様タンパク質を形成する能力を破壊しない置換であり、好ましくは酸素を可逆的に結合する。次の資料が保存的置換（および欠失または挿入）を同定するために使用され得る： (a)ヘモグロビン変異体に関するデータ（このような変異体は100以上ある）； (b)脊椎動物(特に哺乳動物)のαグロビンおよびβグロビン間の配列変動に関するデータ； (c)脊椎動物(特に哺乳動物)のミオグロビン間の配列変動に関するデータ； (d)脊椎動物グロビンと無脊椎動物グロビンとの間の配列変動、あるいは無脊椎動物グロビン間の配列変動に関するデータ； (e)ヒトヘモグロビンおよび他の実質的に相同なタンパク質の３次元構造、ならびにこのような構造の配列変化の影響を推定するための分子モデル作製用ソフトウェアに関するデータ；および (f)相同なタンパク質ファミリー（グロビンファミリーに限定されない）のメンバー間のアミノ酸変化の頻度に関するデータ。例えばSchulzおよびSchirmer，Principles of Protein Structure (Springer-Verlag:1979)の表1-2ならびにCrei ghton，Proteins Structure and Molecular Properties(W.H.Freeman:1983)の図 3-9を参照せよ。 (a)から(d)のデータは、同系タンパク質の変動部位での許容できる変異を決定するのに最も有用であるが、このデータはまた分子のどこか他の類似部位での許容できる変異を同定する助けにもなり得る。カテゴリー(f)のデータに基づいて以下の交換群が同定され得るが、その中でのアミノ酸の置換はしばしば保存的である。 I.小さな脂肪族非極性または低極性残基−アラニン、セリン、スレオニン（プロリン、グリシン） II.負に荷電した残基およびそのアミド−アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン III.正に荷電した残基−ヒスチジン、アルギニン、リジン IV.大きな脂肪族非極性残基−メチオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、（システイン） V.大きな芳香族残基−フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンタンパク質の構造上の特異な役割のために３個の残基をかっこで囲んだ。グリシンは側鎖のない唯一の残基であり、そのため鎖に柔軟性を付与している。プロリンは鎖を堅く抑える特異な幾何学的配置を有する。システインはタンパク質を一定の折り畳み状態に保つジスルフィド結合に関係し得る。SchulzおよびSchime rは上記IおよびIIを１つにしていることに注意されたい。チロシンは、その水素結合ポテンシャルのためセリン、スレオニンなどといくらか類似性があることにも注意されたい。一般的に、あれば好ましいが必須ではない機能（すなわち酸素結合能）は、表面の残基、少なくともヘムの裂け目またはサブユニットの接触部のいずれにも関係しない残基の変異によっては影響を及ぼされそうにない。さらに、αヘリックスを連結する「ループ」、特にαヘリックスのＤループ、ならびに遊離アミノまたはカルボキシ末端は、欠失および挿入にさらに耐え得るものである。ヘモグロビンは多くの供給源から容易に入手できる。屠殺場は血液の形態で大量のヘモグロビンを産み出し、その血液は現在安価な肥料として普通に売られている。もし特定の種または品種の動物が特定の用途に殊に適したヘモグロビンを産生する場合には、それらの動物が、必要な血液を供給するため、この目的のために特に飼育され得る。また、変異ヘモグロビンを発現し得るトランスジェニック動物も作出され得る。ヒトの血液銀行は一定の使用期限後は人血を廃棄しなければならない。これも大量のヘモグロビンを産み出す。動物供給源からの抽出のほかに、所望のヘモグロビンのサブユニットをコードする遺伝子をクローニングし、適切な発現ベクターにのせ、微生物、動物または植物のような有機体、もしくは培養した動物または植物の細胞または組織に挿入し得る。これらの有機体は標準的な組換えＤＮＡ技術を用いて作出され得る。ヒトαおよびβグロビンの遺伝子は、それぞれLiebhaberら、Proc.Natl．Acad．Sc i. USA 77; 7053-7058(1980)およびMarottaら，Journal of Biological Chemist ry, 252;5040-5053(1977)によりクローニングされ配列解析された。野性型および変異型のαおよびβグロビンの発現の技術およびそれらのヘモグロビンへの組立は、米国特許第5,028,588号およびPCT/US90/02654，PCT/US91/09624、およびヨーロッパ特許出願第87116556.9号に述べられている。ヘモグロビンＡ₀は、２個のαグロビンサブユニット（α₁,α₂）および２個の βグロビンサブユニット（β₁,β₂）からなるヘテロ４量体である。α₁およびα₂ またはβ₁およびβ₂の間に配列の差異はない。酸素添加されない（「デオキシ」または「緊張」の意味の「Ｔ」）状態では、サブユニットは四面体を形成している。α₁β₁およびα₂β₂の境界面は酸素に結合する間比較的固定した状態にあるが、一方、α₁β₂およびα₂β₁の境界面にはかなりの流動性がある。酸素添加された（「オキシ」または「Ｒ」または弛緩した）状態では、サブユニット間の距離は増大している。サブユニットはファンデルワールス力、水素結合、およびデオキシHgbについては塩橋により、非共有結合的に会合している。ヘモグロビンが解離してα₁β₁およびα₂β₂２量体になることは既知であり、それは腎臓での濾過により血流から除かれる。ヘモグロビンの血管内保持は、例えば単一４量体のサブユニット内または４量体間での化学的架橋により改良された。 1990年11月15日公開の米国特許第5,028,588号，WO90/13645号および1991年11 月８日に出願された米国特許出願第789,179号で教示されているように、その中で２個の非共有結合的に会合したサブユニットが，２個の酸素結合ドメインを持つ単一の擬２量体ポリペプチドに置き換えられ、直接にまたは１個以上のアミノ酸からなるリンカーを介して結合しているような擬４量体ヘモグロビンを生成することは可能である。この擬２量体ポリペプチドは適切な融合遺伝子から発現され得る。従って、２個のαグロビン遺伝子を融合して「ジ-αグロビン」遺伝子にし得るか、または２個のβグロビン遺伝子を融合して「ジ-βグロビン」遺伝子にし得るか、またはαおよびβグロビン遺伝子を融合して「αβ」グロビン擬二量体遺伝子にし得る。これらのどの形態においても、ヘモグロビンはα₁β₁およびα₂β₂２量体への解離を防止され、従って血管内の保持時間を増す。２個以上のグロビン鎖を融合することの別の利点は、鎖の両方ではなく一方を選択的に変異させ得るということであり、このことは1991年11月８日に出願された米国特許出願第789,179号に教示されている。ヘモグロビンを薬物送達担体として用いるとき、このことにより、最終製品に等モル量の薬物およびヘモグロビンが認められるように目的の薬物に対する付着部位をひとつだけ提供することができる。またこのことにより、鎖のひとつにおいてアミノ酸を選択的にシステインに変異させ、ジスルフィド結合の部位を提供することにより８量体を生成させることができる。もうひとつのやり方はヘモグロビン分子上に多くの付着部位を設けることである。これにより結合している化学物質のより多くの量を安定化することができ、そしてひとつのヘモグロビンに結合する薬物の異なった放出速度を包含する可能性をもたらす。天然供給源から単離されたヘモグロビンは、過去に多くの技術を用いて化学修飾されてきた。これらの技術はどれもヘモグロビンの調製に用いられ得る。そのような修飾の例は、とりわけ米国特許第4,412,989号、第4,301,144号、第4,670, 417号、第4,321,259号、第4,473,563号、第4,710,488号、第4,650,786号、第4,3 36,248号、第4,598,064号、第4,600,531号、および第4,377,512号にみられる。個々のグロビン鎖は同様に半合成ヘモグロビンを合成するため修飾された形態で再構成されてきた（Luisiら、Nature 320; 555-556（1986）およびNagaiら、N ature 329; 858-860(1987)）。グロビン鎖の化学重合、グリコシル化、PEG化、リポソームまたは細胞膜内への包括のような他の修飾も考えられる。組換えＤＮＡの発現により生成されたヘモグロビンもまた容易に修飾できる。部位特異的変異誘発の標準的技術をグロビン遺伝子に適用することより（Kruse ら、Biotechniques 6; 338-339(1988)およびZollerら、Methods in Enzymology 100; 468-500(1987)が最近の例である）、得られるグロビン鎖においてアミノ酸またはアミノ酸の組合せを付加したり、欠損させたり、変化させたりし得る。修飾された部分は、例えば酸素親和性を変化させ得るか、または目的の薬物に対する付着部位を構成し得る。これにより、薬物がヘモグロビン分子と会合または結合する数および位置を変化させ得る。目的の薬物自身がポリペプチドの場合、それをグロビン鎖に付加することにより薬物-ヘモグロビン複合体を産出し得る。化学的に架橋されたヘモグロビン(1992年７月９日に公開されたWO92/11283;米国特許第4,857,636号;米国特許第5,194,590号;米国特許第5,084,558号）、または遺伝子上αサブユニットを融合した(ジ-α Hgb)またはβサブユニットを融合した(ジ-β Hgb)変異ヘモグロビンは、ハプトグロビンの結合を阻害することにより血管内の保持時間を増大し得る。ヘモグロビンまたはその断片はいずれも修飾されてヘモグロビン自体の生物活性を変化させ得る。例えば、米国特許第5,028,588号および第5,173,426号は血液の代用物としての低酸素親和性変異体の利用を教示している。そのような修飾された分子もまた、薬物に結合されて、本発明で意図される薬物−ヘモグロビン複合体を形成し得る。好ましいヘモグロビンはSGE1.1ならびに既知の擬４量体SGE1.1およびαLys 16 Cysの変異体（αD75C）であり、このことは1990年11月15日公開のWO90/13645および1991年11月８日出願の米国特許出願第789,179号に記載されている。細胞外ヘモグロビンの精製は当該分野の周知の技術を用いて達成され得る。組換えヘモグロビン精製の特に好ましい方法は、「ニッケルを含まないヘモグロビンおよびこのヘモグロビンの生成方法(Nickel Free Hemoglobin and Methods fo r Producing Such Hemoglobins)」という題名で1993年７月23日に出願された同時係属中の特許出願第08/097273号に述べられた方法を使用する。本明細書中で述べる細胞外ヘモグロビンは酸素担体、血液増量剤、または薬物送達担体として薬学的組成物中に用いられ得る。さらに、それらは細胞培養において細胞培養物への酸素の供給に（低親和性ヘモグロビン）、または酸素除去剤としてそのような細胞培養において嫌気的環境を提供するために（高親和性ヘモグロビン）、用いられ得る。高親和性ヘモグロビンはまた腫瘍のような酸素欠乏組織に酸素を送達するためにも用いられ得る（例えば、1992年11月26日公開のPC T/US92/04068およびPCT US/US92/04067）。もちろん細胞外ヘモグロビンの好ましい用途は献血者の全血の輸血に代わる血液代用物としてである。本発明は、組織、酸素欠乏組織、および細胞培養物への酸素の送達に用いるための、赤血球生成の刺激および貧血の処置のため、および他の薬物についての薬物送達担体としての薬学的組成物および製剤を提供する。本発明の組成物は、それらを必要とする哺乳類の処置に用いるための従来の固形または液体の薬学的製剤（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、注射または内服液剤）に採り入れ得る。本発明の薬学的製剤は、単独でもしくは他の活性または不活性の試剤と組み合わせて用いて、活性成分として、生理学的および／または薬学的に有効な量の本発明の細胞外ヘモグロビンを含有し得る。例えば、非経口的処置用組成物は0. 1と90との間の重量対容量％のヘモグロビンを含む無菌生理食塩液を含有し得る。４量体ヘモグロビンの好ましい細胞外ヘモグロビン溶液は、重量対容量で１％〜10％、最も好ましくは約５％のヘモグロビンを溶液中に含む。各個体に与えられる薬学的製剤の量は、0.0001μMと１mMとの間の細胞外ヘモグロビン血中濃度を与えるに十分な量である。代表的なヘモグロビンの用量は、患者の体重１Kg当たり細胞外ヘモグロビン10mgから２gである。従って、ヒト患者の代表的な用量は数gから約150gである。各剤形の個々の用量中に含まれる活性成分の単位量自身が有効量を構成する必要はないと認識される。なぜなら必要な有効量は、複数個のカプセル、錠剤、注射剤など、またはそれらの組合せを投与することにより達成され得るからである。本発明による各製剤はさらに、薬学的に許容され得るキャリア、希釈剤、充填剤、塩、当該分野で周知のその他の材料を包含する不活性構成物を含有し、それの選択は、用いる剤形、処置条件、当業者の決定に従い達成される特別の目的、およびそのような添加物の性質に依存する。本発明の薬学的組成物は、経口、エアゾール、経皮吸収、粘膜吸収、または注射のような従来のいずれもの手段で各個体に投与され得る。非経口投与が好ましく、特に静脈内または動脈内の非経口投与が好ましい。細胞外ヘモグロビンの投与は、分単位から時間単位の間で行い得る；しかしながら、通常の投与時間は患者にできるだけ早く酸素運搬物質を獲得させることで決まる。代表的な点滴速度は約100ml〜3000ml／患者／時間であり、好ましくは約1ml/kg/時間〜約300ml/kg/時間、最も好ましいのは約1ml/kg/時間〜約25ml/kg /時間である。本発明の別の局面は、種々の障害に対する処置として細胞外ヘモグロビンを用いる新規な方法であり、その障害は放射線照射または化学療法、赤血球生成および貧血、冠状動脈血管修復手術、および鎌型赤血球貧血または組織虚血の処置からなる群から選択されるかまたはその群から生じる。そのような障害の処置のために、細胞外ヘモグロビン、好ましくは組換えヘモグロビンは、そのような障害に苦しむ患者に所望の治療効果を与えるような量で投与され得る。細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の緩和細胞外ヘモグロビンを投与したときに、ある患者は一過性の軽度ないし中等度の胃腸作用を受けることが驚くべきことに観察された。これらの作用には、中上腹部の不快感、腹痛および／または消化不良を含む胃腸上部の不快感、ならびに／あるいは下腹部の痛み、鼓腸および／または下痢を含む胃腸下部の不快感が包含された。胃腸事象は代表的には点滴後１〜３時間に展開し、１から数時間持続し、そしてその間増減した。これら副作用の処置は、平滑筋弛緩の薬理作用を示す薬剤を用いることにより達成され得る。臨床医は直接または間接に平滑筋の緊張力に影響を与え得る多くの処方に精通している。そのような平滑筋弛緩薬には、β-アドレナリン性アゴニスト、カルシウムチャンネル阻止薬、有機硝酸エステル、抗コリン剤、酸化窒素合成酵素基質を含む血管拡張剤、H₁およびH₂アンタゴニスト、コルチコステロイドなどを包含する。β-アドレナリン性アゴニストは好ましくはテルブタリン（Marion Merrell Dow Inc.．Kansas City，Missouri）を包含する。カルシウムチャンネル阻止薬は好ましくはジヒドロピリジンカルシウムチャンネル阻止薬を包含し、さらに好ましくはニフェジピン（Miles Inc.，West Haven，Connecticu t; Pratt Pharmaceutical Division of Pfizer Inc.，New York,NewYork)またはニカルジピン（Syntex Inc.，Palo Alto，California）を包含し、最も好ましくはニフェジピンを包含する。有機硝酸エステルは好ましくはニトログリセリン（Sanofi Winthrope Pharmaceuticals，New York，New York;Parke-Davis Div ision of Warner Lambert Co.，Morris Plains，New Jersey）を包含する。抗コリン剤は好ましくはアトロピン（Astra Pharmaceutical Products Inc.，Westbo ro，Massachusetts; Elkins Sinn Inc.，Cherry Hill，New Jersey）を包含する。血管拡張剤は好ましくはナトリウムニトロプルシド（Roche Laboratories，Ho ffman-La Roche Inc．の１部門、Nutley，New Jersey）およびL-アルギニン（Ka bi Pharmacia，Piscataway，New Jersey）を包含する。H₁およびH₂アンタゴニストは好ましくはジフェンヒドラミン（Parke-Davis Division of Warner Lambert Co.，Morris Plains，New Jersey）およびシメチジン（SmithKline Beacham，P hiladelphia，Pennsylvania）を包含する。コルチコステロイドは好ましくは酢酸メチルプレドニゾロン（The Upjohn Company，Kalamazoo，Michigan）およびヒドロコルチゾン（Merck and Co.，Inc.，West Point，Pennsylvania）を包含する。他の平滑筋弛緩薬はグルカゴン（Eli Lilly and Co.，Indianapolis，Ind iana）およびナロキソン（Du Pont Multi-Source Products，Du Pont-Merck Pha rmaceuticals Co.，Garden City，New York）を包含する。平滑筋弛緩薬は当該分野の臨床医に既知のいずれもの許容可能な手段で投与され得る。投与経路は静脈内、皮下、舌下、バッカル錠、経口、エアゾールなどを包含する。種々の平滑筋弛緩薬は単独またはそれぞれを組み合わせて投与され得る。平滑筋弛緩薬の用量は、頓服としてもよいし、分割して数回の投与としてもよい。ときには患者の体内の活性成分を一定量に維持するため、初回は多めの用量で投与し、後少しずつ少なめの用量とすることも有効であり得る。初回の増量した用量は、細胞外ヘモグロビンの投与開始時に細胞外ヘモグロビンを投与される患者が麻酔されているときにも行い得る。そのような麻酔は外科的処置を施すときによく行われる。担当の臨床医は種々の平滑筋弛緩薬の投薬量範囲に精通しており、投薬量および処方計画は細胞外ヘモグロビンを投与される患者が受ける胃腸の副作用の重篤度によりしばしば決定される。平滑筋弛緩薬の予防的投与を用いる場合、少なくとも１回用量の平滑筋弛緩薬は、副作用の発症前に、好ましくは細胞外ヘモグロビンの投与開始前に投与される。その後は、反復投与は必要でもなく、同じ平滑筋弛緩薬を用いる必要もないが、しばしば同じ平滑筋弛緩薬の反復投与がなされる。多くの平滑筋弛緩薬が細胞外ヘモグロビンの投与と関連する副作用の重篤度および頻度を軽減する能力を有することが認められたが、いくつかの平滑筋弛緩薬についてのある投与方式および処方計画が細胞外ヘモグロビンの投与と関連する副作用の軽減により大きな効果を示し、それ故そのことは本発明の好ましい実施態様となっている。本発明にとって最も好ましい平滑筋弛緩薬はニフェジピンおよび／またはテルブタリンである。代表的な投与量および処方計画ならびに好ましい投与処方計画および量は以下の通りである：予防的処置細胞外ヘモグロビンの投与と関連する副作用の予防的処置は、細胞外ヘモグロビンの投与開始前に、単一の平滑筋弛緩薬、好ましくはテルブタリンまたはニフェジピンを患者に前もって投与することにより行われ得る。この事前投薬に次いで、細胞外ヘモグロビンの投与開始後に同じ平滑筋弛緩薬、好ましくはテルブタリンまたはニフェジピンが反復して後続投薬される。事前投薬は、細胞外ヘモグロビンの投与開始とほとんど同時から細胞外ヘモグロビンの投与開始の数時間前までのいつでも行い得る。好ましくは、事前投薬は細胞外ヘモグロビンの投与開始の10分から１時間前までに、最も好ましくは細胞外ヘモグロビンの投与開始の約30分前に行う。反復後続投薬は、平滑筋弛緩薬の最初の投与後数分毎から８時間毎までのいずれでも、好ましくは平滑筋弛緩薬の最初の投与後30 分毎から４時間毎まで、最も好ましくは平滑筋弛緩薬の最初の投与後約２時間毎に行い得る。反復後続投薬は、細胞外ヘモグロビンの投与開始の後合計最大48時間まで、好ましくは細胞外ヘモグロビンの投与開始の後合計最大24時間までで、最も好ましくは細胞外ヘモグロビンの投与開始の後約12時間で行い得る。この予防的処置に最も好ましい平滑筋弛緩薬は、テルブタリンまたはニフェジピンである。平滑筋弛緩剤を予防的処置に用いる場合、特にテルブタリンまたはニフェジピンを用いる場合、代表的に用いられるいくつかの投与方式および処方計画がある。例えば、テルブタリンは細胞外ヘモグロビンの投与開始約30分前の事前投薬において、0.05mg〜0.50mg、好ましくは0.10〜0.30mg、最も好ましくは約0.25mgの量で皮下投与され得る。反復後続投薬は、同じ量であり得、その後約２時間毎に（すなわち、最初のテルブタリン投与後２時間毎）、好ましくは合計６回のテルブタリン投薬（事前投与を含む）が与えられる。あるいは、テルブタリンは、細胞外ヘモグロビンの投与開始約30分前に始まり細胞外ヘモグロビンの投与開始後48時間まで続けて静脈内投与され得る。点滴速度は代表的には10〜25μｇ／分である。テルブタリンのもうひとつの投与方法は最初の投与は静脈内に行い、次いで皮下投与、さらに経口投与を行う。最初の静脈内投与はすぐ上で述べたように行い得、そして事前投与および反復後続投薬の一部を含み得る。皮下投与は反復後続投薬の間に行い、次いで経口投与する。テルブタリンの経口投与は、代表的には 5〜10mg p.o.(経口あたり)の量で１日４回行う。ニフェジピンを用いる場合、１〜80mgの量で、好ましくは５〜40mgの量で、更に好ましくは約10mgの量で舌下投与し得る。反復後続投与は同じ量であり得、そしてニフェジピンの最初の投与後約２時間毎に、好ましくは合計６回のニフェジピンの投薬が与えられる。テルブタリンまたはニフェジピンは予防的処置に用いるのに好ましい平滑筋弛緩薬であるが、他に多くの平滑筋弛緩薬が製造会社の推薦する投薬量および担当の臨床医の判断に従って調整された投薬量を用いて予防的処置のために用いられ得る。応答的管理処置細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用の応答的管理処置は、細胞外ヘモグロビンの投与開始後または細胞外ヘモグロビンの投与による副作用の発症後、単一の平滑筋弛緩薬、好ましくはニフェジピンの反復後続投与により行われ得る。反復後続投与は、胃腸の副作用の臨床徴候の開始後数分毎から８時間毎までのいずれでも、好ましくは胃腸の副作用の臨床徴候の開始後30分毎から４時間毎まで、最も好ましくは胃腸の副作用の臨床徴候の開始後約２時間毎に行われ得る。反復後続投与は、胃腸の副作用の臨床徴候の開始後合計最大48 時間まで、好ましくは胃腸の副作用の臨床徴候の開始後合計最大24時間まで、最も好ましくは、胃腸の副作用の臨床症状の開始後約12時間行われ得る。この応答的管理処置にとって最も好ましい平滑筋弛緩薬は、ニフェジピンである。任意の平滑筋弛緩薬が応答的管理処置に対して用いられるとき、そして特にニフェジピンが用いられるとき、代表的に使用される数種の投薬方式および処方計画がある。例えば、ニフェジピンは１〜80mg、好ましくは５〜40mg、最も好ましくは約10mgの量で舌下投与され得る。反復後続投薬は同じ量であり得、そして細胞外ヘモグロビンの投与を開始した後約２時間毎に、好ましくは合計６回のニフェジピン投薬で投与される。ニフェジピンは応答的管理処置に使用するのに好ましい平滑筋弛緩薬であるが、多くの他の平滑筋弛緩薬が、造会社の推薦する投薬量および担当の臨床医の判断に従って調整された投薬量を用いてこのような治療のために使用され得る。応答的管理処置はある平滑筋弛緩薬の使用では有効であり得るが、一般的にはこの治療方法は細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和するには有効でない。応答的断続処置．細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用に対する応答的断続処置は、単一の平滑筋弛緩薬、好ましくはニフェジピンの投薬により行われ得るが、この投薬は患者が受ける不都合な胃腸作用の重篤度のような因子を考慮して担当の臨床医によって任意に決められる。この応答的断続処置はまた、上述したような予防的処置、好ましくは事前投薬に対してテルブタリンを利用する、あるいは、事前投薬および反復後続投薬の両方に対してテルブタリンを使用する予防的処置に付加された方法として実行され得るのが好ましい。応答的断続処置は、予防的処置と併用して使用されてもされなくても、患者が副作用の徴候を細胞外ヘモグロビン投与の開始後に受けたときに利用される。例えば、テルブタリンを用いる予防的処置が実行されるいくつかの場合では、患者は細胞外ヘモグロビン投与後にまだなおある種の胃腸の不快感を受け得る。「ブレークスルー(break through)」として知られている最初の予防的処置の後に受ける副作用は、この応答的断続処置方法により短時間で処置され得る。応答的断続処置における使用にとって、好ましい平滑筋弛緩薬はニフェジピンである。代表的には１〜80mg、好ましくは５〜40mg、最も好ましいのは約10mgのニフェジピンが舌下または経口投与され得る。投薬は必要に応じて反復投与され得る。ニフェジピンは応答的断続治療に使用するのに好ましい平滑筋弛緩薬であるが、多くの他の平滑筋弛緩薬が、製造会社の推薦する投薬量および担当の臨床医の判断に従って調整された投薬量を用いてこのような治療のために使用され得る。本発明の方法は、細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用、特に胃腸の不快感に関する副作用を緩和するのに有用である。特定の実施態様に関する前述の説明は、本発明の一般的な性質を明らかにしているのでその結果、当業者は、現在の知識を適用することによって、このような特定の実施態様を一般的な概念から逸脱せずにいろいろな応用に容易に改変し、そして／あるいは適合させ得る。それゆえ、このような適合および改変は開示された実施態様と同等の意味および範囲の中に包括されるべきであり、そしてそのように意図される。本明細書中に用いられている語句および術語は、説明のためであって限定されるものではないことを理解すべきである。本明細書中に引用された参考文献のすべては、本明細書によりそれと関連した教示のために参考として援用されている。実施例以下の実施例は、本発明の特定の実施態様として提供されたものであり、本発明の範囲の限定を決して意図するものでない。実施例１赤血球輸血を必要性とする患者への細胞外ヘモグロビンの投与 rHb1.1が与えられる前に、被験者を０〜11時間断食させた。ある被験者には、 Hbを点滴する２時間前からＤ-５半濃度の生理的食塩水(D-5 half normal saline )を用いて500cc/時(cc＝ml)までの速度で水添加(hydrate)した。薬学的組成物中にヘモグロビン(rHb1.1)が５％の重量対容積比(5%W:V)で含まれている溶液を、患者に、静脈内点滴により（曝光の防止に注意しながら）、Hb1.1約25gまでの全用量が投与されるように、3.75ml/kg/時の速度で２時間まで投与した。表１は0. 18g/kgまでの用量におけるrHb1.1の胃腸作用を示す。表に見られるように、いくつかの徴候は異常な平滑筋の収縮を示した。 0.15g/kgまたはそれ以上のrHb1.1を投与された被験者のほとんどは、一過性の軽度から中等度の胃腸副作用を起こした。0.11g/kgまたはそれ以下のrHb1.1を投与された16人の患者の中で、これらの徴候の報告はわずか２例であった。胃腸の事象は典型的には点滴の１〜３時間後に起こり、そして中上腹部の不快感、腹痛および／または消化不良を含む上部胃腸の不快感、ならびに／あるいは下部腹痛、鼓腸および／または下痢を含む下部胃腸の不快感からなるものであった。腹部の検査はこの事象の間中ずっと良性であった。作用は１〜数時間続き、そしてその間作用は増減した。実施例２テルブタリンを用いる細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸の副作用の予防的処置細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の発生および／または重篤度を減らすために、テルブタリンを患者に予防的に投与した。rHb1.1が与えられる前に、被験者を約10時間断食させた。被験者には、rHb1.1を点滴する２時間前からＤ-５半濃度の生理的食塩水を用いて500cc/時の速度で水添加し、これをrHb1.1 の点滴を開始する時点では250cc/時に減速した。水添加は点滴後４時間続けた。 rHb1.1を0.15g/kg〜0.32g/kgまでの用量範囲で投与し、全用量は被験者当り約12 g〜25gという結果になった。rHb1.1を投与する30分前に、0.25mgの硫酸テルブタリンを患者に皮下投与した。毎回0.25mg量のテルブタリンを最初のテルブタリンの投与後２時間毎に皮下投与で連続投与した。合計６回用量のテルブタリンを投与した。その結果を表２に示す。テルブタリンによる予防的処置をせずに12gと14gとの間の用量のrHb1.1を与えたときに種々の重篤度レベルの徴候を受けた患者数と、テルブタリン予防法により25gまでの用量でrHb1.1を与えたとき同程度の重篤度を受けた患者数とを比較している。重篤度は２倍ものrHb1.1を投与したときでさえ、予防法により減少した。実施例３ニフェジピンを用いる細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸の副作用の管理処置細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の発生および／または重篤度を減らすために、ニフェジピンを患者に予防的に投与した。rHb1.1が与えられる前に、被験者を約10時間断食させた。被験者には、rHb1.1を点滴する２時間前からＤ-５半濃度の生理的食塩水を用いて500cc/時の速度で水添加し、これをrHb1.1 の点滴を開始する時点では250cc/時に減速した。水添加は点滴後４時間続けた。 rHb1.1を0.15g/kgで投与し、全用量は被験者当り約8.9〜12.3gという結果になった。rHb1.1を投与する30分前に、10mgのニフェジピンを患者に舌下投与した。毎回10mg量のニフェジピンを最初のニフェジピンの投与後２、４、６、９時、およびときには12時に舌下投与で連続投薬した。合計５から６回用量のニフェジピンを投与した。被験者の1/3は何の徴候もなかった。大部分の徴候は軽度と分類されたが、その応答はテルブタリンに対する応答ほど安定ではなかった。実施例４細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸の副作用の短時間応答的断続処置細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の重篤度を減らすために、種々の薬物を、胃腸の不快感の発症または再発の際に、医師により決められたように徴候が始まった後で、患者に断続的に投与した。例えば、１人の被験者は15.77g のrHb1.1が与えられた。点滴の2.5時間後にこの被験者は２mgのナロキソンを静脈注射で投与された。点滴の３時間後にこの被験者は１mgのグルカゴンを静脈注射(IV)で投与された。不快感はいくらか減少したが短時間後に増大した。その時点で被験者は1/150gのニトログリセリンが舌下投与された。この被験者は点滴の 3.5時間後に10mgのニフェジピンを舌下投与され、そして２次的な投薬として４時間後に１mgのグルカゴンを静脈内投与された。0.5mgのグルカゴンが点滴の5.5 時間後および９時間後に再び静脈内投与された。ナロキソン投薬を除いて、それぞれの処置は上部胃の不快感を減少させた。しかしながら、すべての改善は記載された他の治療法で得られたものよりも一過性であり、そして不十分であると判断された。実施例５ニフェジピンを用いる細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸の副作用の短時間応答的断続処置細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の発生および／または重篤度を減らすために、ニフェジピンを、胃腸の不快感の発症または再発の際に、医師により決められた通りに、患者に断続的に投与した。rHb1.1が与えられる前に、被験者を約10時間断食させた。被験者には、rHb1.1を点滴する２時間前から、Ｄ- ５半濃度の生理的食塩水を用いて500cc/時の速度で水添加し、これをrHb1.1の点滴を開始する時点では250cc/時に減速した。水添加は点滴後４時間続けた。rHb1 .1は0.15g/kgで投与し、全用量は被験者当り約11.3〜13.1gという結果になった。rHb1.1を投与する30分前に、10mgのニフェジピンを患者に舌下投与した。rHb1 .1の点滴後に10mgのニフェジピンを、徴候の発症または再発したときだけ、そして医師により決められたように、胃腸の不快感が軽くなるまで被験者に舌下投与した。例えば、ある被験者はニフェジピンを点滴の2.75時間後、８時間後、および11.5時間後に投与された。すべての被験者は、点滴後８時間まで、不快感が中等度のレベルに進展した徴候を受けた。実施例６テルブタリンおよびニフェジピンによる細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸の副作用の併用治療細胞外ヘモグロビンの投与に関連する胃腸作用の発生および／または重篤度を減らすために、テルブタリン硫酸塩を予防的に患者に投与し、次いでニフェジピンによる断続投薬を実施した。rHb1.1が与えられる前に、被験者を約10時間断食させた。被験者には、rHb1.1を点滴する２時間前から、Ｄ-５半濃度の生理的食塩水を用いて500cc/時の速度で水添加し、これをrHb1.1の点滴を開始する時点では250cc/時に減速した。水添加は点滴後４時間続けた。rHb1.1を0.25g/kgまたは 0.32g/kgで投与した。rHb1.1を投与する30分前に、0.25mgのテルブタリンを患者に皮下投与し、次いで最初のテルブタリン投与の後、0.25mgの用量で２時間毎に５回の追加投与を行った。各10mg量のニフェジピンの投薬を、不快感が発症または再発したときだけ医師により、そして医師が決めた通りに舌下投与した。例えば、ある被験者は点滴２時間後に１投薬を、その15分後にさらに１投薬を、そして3.25時間後に３回目の１投薬を投与した。別の被験者は、３時間目に１投薬だけ与えられた。臨床上の所見は、２種類の薬物の使用が常に示すとは限らないが、(a)この投薬処方計画はどちらかの薬物だけよりも良い結果をもたらし、そして(b)ニフェジピンはテルブタリン予防法と併用して必要に応じて投与したとき、単独投与よりも良い結果をもたらし、そして不快感をより速く解消するということであった。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年８月１４日【補正内容】（３ａ頁翻訳文） EP-A-0248150は、非ステロイド系抗炎症薬が誘発する胃腸の傷害を軽減させることに関するテルブタリンの使用を開示する。米国特許第5,043,358号は、多くの胃腸障害の処置に関する細胞保護剤としてのテルブタリンの使用を開示する。下痢の疾患の処置に関するニフェジピンの使用は、Gastroenterology,89(4),(19 85),858-866中に開示されているが、モルヒネ禁断性下痢の抑制に関するニフェジピンの使用は、Scan.J.Gastroenterology,28(2),(1993),137-144中に記載されている。下痢の処置に関するニフェジピンの有用性は、Eur.J.Pediatr.,148(b), (1989)489-495およびTurk.J.Pediatr.,34(2),1992,103-105中に開示されている。（２３頁翻訳文）応答的断続処置は、予防的処置と併用して使用されてもされなくても、患者が副作用の徴候を細胞外ヘモグロビン投与の開始後に受けたときに利用される。例えば、テルブタリンを用いる予防的処置が実行されるいくつかの場合では、患者は細胞外ヘモグロビン投与後にまだなおある種の胃腸の不快感を受け得る。「ブレークスルー(break through)」として知られている最初の予防的処置の後に受ける副作用は、この応答的断続処置方法により短時間で処置され得る。応答的断続処置における使用にとって、好ましい平滑筋弛緩薬はニフェジピンである。代表的には１〜80mg、好ましくは５〜40mg、最も好ましいのは約10mgのニフェジピンが舌下または経口投与され得る。投薬は必要に応じて反復投与され得る。ニフェジピンは応答的断続治療に使用するのに好ましい平滑筋弛緩薬であるが、多くの他の平滑筋弛緩薬が、製造会社の推薦する投薬量および担当の臨床医の判断に従って調整された投薬量を用いてこのような治療のために使用され得る。（２４頁翻訳文）実施例実施例１赤血球輸血を必要性とする患者への細胞外ヘモグロビンの投与 rHb1.1が与えられる前に、被験者を０〜11時間断食させた。ある被験者には、 Hbを点滴する２時間前からＤ-５半濃度の生理的食塩水(D-5 half normal saline )を用いて500cc/時(cc＝ml)までの速度で水添加(hydrate)した。薬学的組成物中にヘモグロビン(rHb1.1)が５％の重量対容積比(5%W:V)で含まれている溶液を、患者に、静脈内点滴により（曝光の防止に注意しながら）、Hb1.1約25gまでの全用量が投与されるように、3.75m1/kg/時の速度で２時間まで投与した。表１は0. 18g/kgまでの用量におけるrHb1.1の胃腸作用を示す。表に見られるように、いくつかの徴候は異常な平滑筋の収縮を示した。 0.15g/kgまたはそれ以上のrHb1.1を投与された被験者のほとんどは、一過性の軽度から中等度の胃腸副作用を起こした。0.11g/kgまたはそれ以下のrHb1.1を投与された16人の患者の中で、これらの徴候の報告はわずか２例であった。胃腸の事象は典型的には点滴の１〜３時間後に起こり、そして中上腹部の不快感、腹痛および／または消化不良を含む上部胃腸の不快感、ならびに／あるいは下部腹痛、鼓腸および／または下痢を含む下部胃腸の不快感からなるものであった。腹部の検査はこの事象の間中ずっと良性であった。作用は１〜数時間続き、そしてその間作用は増減した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和するための薬剤の製造のための平滑筋弛緩薬の使用。２．前記平滑筋弛緩薬が、βアドレナリン性アゴニスト、カルシウムチャンネル阻止薬、有機硝酸エステル、抗コリン薬、酸化窒素合成酵素の基質を含む血管拡張剤、H₁およびH₂アンタゴニスト、ならびにコルチコステロイドからなる群から選択される、請求項１に記載の使用。３．前記平滑筋弛緩薬がβアドレナリン性アゴニストおよびカルシウムチャンネル阻止薬からなる群から選択される、請求項２に記載の使用。４．前記平滑筋弛緩薬がテルブタリンおよびニフェジピンからなる群から選択される、請求項３に記載の使用。５．前記薬剤が１用量当り0.25mg量のテルブタリンを含有する、請求項４に記載の使用。６．前記薬剤が合計６回用量で皮下投与されるが、１回目の投薬は前記細胞外ヘモグロビンの投与の約30分前に行い、その後５回の連続投薬を約２時間毎に行う、請求項５に記載の使用。７．前記薬剤が１用量当り10mg量のニフェジピンを含有する、請求項４に記載の使用。８．前記薬剤が合計６回用量で舌下投与されるが、１回目の投薬は前記細胞外ヘモグロビンの投与の約30分前に行い、その後５回連続の投薬を約２時間毎に行う、請求項７に記載の使用。９．平滑筋弛緩薬の投与を包含する、細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１０．前記投与が予防的処置である、請求項９に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１１．前記投与が応答的処置または応答的断続処置である、請求項９に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１２．前記平滑筋弛緩薬が、βアドレナリン性アゴニスト、カルシウムチャンネル阻止薬、有機硝酸エステル、抗コリン薬、酸化窒素合成酵素の基質を含む血管拡張剤、H₁およびH₂アンタゴニスト、ならびにコルチコステロイドからなる群から選択される、請求項９に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１３．前記平滑筋弛緩薬がβアドレナリン性アゴニストおよびカルシウムチャンネル阻止薬からなる群から選択される、請求項１２に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１４．前記平滑筋弛緩薬がテルブタリンおよびニフェジピンからなる群から選択される、請求項１３に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１５．前記平滑筋弛緩薬がテルブタリンおよびニフェジピンからなる群から選択される、請求項１０に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１６．前記テルブタリンの前記投与が１用量当たり0.25mg量の皮下注射である、請求項１５に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１７．前記テルブタリンの前記投与が１用量あたり0.25mg量の合計６回用量を皮下投与により実施されるが、１回目の投薬は前記細胞外ヘモグロビンの投与の約 30分前に行い、その後５回連続の投薬を約２時間毎に行う、請求項１６に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１８．前記ニフェジピンの前記投与法が１投薬あたり10mgの舌下注射である、請求項１５に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。１９．前記ニフェジピンの前記投与が１用量あたり10mgの合計６回用量を舌下投与により実施されるが、１回目の投薬は前記細胞外ヘモグロビンの投与の約30分前に行い、その後５回連続の投薬を約２時間毎に行う、請求項１８に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。２０．前記平滑筋弛緩薬がニフェジピンである、請求項１１に記載の細胞外ヘモグロビンの投与に関連する副作用を緩和する方法。２１．放射線照射または化学療法、赤血球生成および貧血、冠状動脈血管修復手術、ならびに鎌型赤血球貧血または組識虚血の処置からなる群から選択されるかまたはその群から生じる種々の障害の処置のための細胞外ヘモグロビンの使用。２２．前記細胞外ヘモグロビンが組換え型ヘモグロビンである、請求項２１に記載の使用。２３．前記細胞外ヘモグロビンがrHb1.1である、請求項２１に記載の使用。