JPH09297138A - 免疫反応試薬及びその製造方法 - Google Patents
免疫反応試薬及びその製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】レスポンスの低下が少なく、保存安定性等に優
れ、一方で容易に製造することが可能な乾燥試薬及びそ
の製造方法を提供する。 【解決手段】一種又は二種以上の免疫活性物質及び／又
は免疫反応に関与する成分を保護成分の共存下、担体上
に単層又は多層被覆し、脱水乾燥したことを特徴とする
免疫反応試薬。
れ、一方で容易に製造することが可能な乾燥試薬及びそ
の製造方法を提供する。 【解決手段】一種又は二種以上の免疫活性物質及び／又
は免疫反応に関与する成分を保護成分の共存下、担体上
に単層又は多層被覆し、脱水乾燥したことを特徴とする
免疫反応試薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫活性物質が単
層又は多層被覆された担体及びその製造方法に関するも
のである。更に詳しくは、免疫反応を利用して例えば人
体の体液中の微量物質を定量的かつ選択的に測定する免
疫学的診断方法に用いられる試薬及びその製造方法に関
する。
層又は多層被覆された担体及びその製造方法に関するも
のである。更に詳しくは、免疫反応を利用して例えば人
体の体液中の微量物質を定量的かつ選択的に測定する免
疫学的診断方法に用いられる試薬及びその製造方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】血清や尿等の生体試料に含まれる微量物
質（例えば、インスリン、甲状腺刺激ホルモン等の甲状
腺マ−カ−、ＩｇＥ、ＨＢｓＡｇ等の感染症マ−カ−、
ＣＡ１９−９のような癌性糖鎖抗原等の癌マ−カ−等）
を検出したり、その濃度を測定する方法として、従来よ
り免疫測定法が広く用いられている。免疫測定法におけ
る抗原とそれに対応する抗体が結合する反応（抗原抗体
反応）は極めて低濃度でも生じ、しかも特異性が高い。
従って、この反応の特徴を生かすことで、抗原や抗体等
の濃度測定が可能となる。抗原抗体反応を利用した免疫
測定法として、これまで数多くの方法が開発されている
が、中でも抗原か抗体のいずれか一方を検出可能な物質
で標識（ラベル）して使用する標識免疫測定法が盛んに
実施されている。
質（例えば、インスリン、甲状腺刺激ホルモン等の甲状
腺マ−カ−、ＩｇＥ、ＨＢｓＡｇ等の感染症マ−カ−、
ＣＡ１９−９のような癌性糖鎖抗原等の癌マ−カ−等）
を検出したり、その濃度を測定する方法として、従来よ
り免疫測定法が広く用いられている。免疫測定法におけ
る抗原とそれに対応する抗体が結合する反応（抗原抗体
反応）は極めて低濃度でも生じ、しかも特異性が高い。
従って、この反応の特徴を生かすことで、抗原や抗体等
の濃度測定が可能となる。抗原抗体反応を利用した免疫
測定法として、これまで数多くの方法が開発されている
が、中でも抗原か抗体のいずれか一方を検出可能な物質
で標識（ラベル）して使用する標識免疫測定法が盛んに
実施されている。
【０００３】免疫測定法の中で現在最も普及しているの
が、酵素を標識として用いた酵素免疫測定（Enzymeimmu
noassay 、以下ＥＩＡと略す）である。ＥＩＡは、例え
ばその代表的な例としてサンドイッチ法と呼ばれる方法
について述べれば、まず第一抗体を担体（例えば磁性ビ
−ズ）に結合させ、固相の状態（固定化抗体）に、他
方、酵素と第二の抗体を結合させることによって酵素で
標識した抗体（酵素標識抗体）を準備しておき、次にこ
れら固定化抗体及び標識抗体を含む溶液に、被測定物質
即ち測定されるべき抗原を含む血清、尿等の試料を添加
し、抗原抗体反応を生じさせ、この後、測定されるべき
抗原を介して担体と結合した酵素標識抗体と結合してい
ない酵素標識抗体を分離（Ｂ／Ｆ分離）し、担体上の酵
素量を測定するのである。
が、酵素を標識として用いた酵素免疫測定（Enzymeimmu
noassay 、以下ＥＩＡと略す）である。ＥＩＡは、例え
ばその代表的な例としてサンドイッチ法と呼ばれる方法
について述べれば、まず第一抗体を担体（例えば磁性ビ
−ズ）に結合させ、固相の状態（固定化抗体）に、他
方、酵素と第二の抗体を結合させることによって酵素で
標識した抗体（酵素標識抗体）を準備しておき、次にこ
れら固定化抗体及び標識抗体を含む溶液に、被測定物質
即ち測定されるべき抗原を含む血清、尿等の試料を添加
し、抗原抗体反応を生じさせ、この後、測定されるべき
抗原を介して担体と結合した酵素標識抗体と結合してい
ない酵素標識抗体を分離（Ｂ／Ｆ分離）し、担体上の酵
素量を測定するのである。
【０００４】この際使用される担体は、例えばセルロ−
ス等のペ−パ−ディスク（特開昭61-21983号公報参照）
や毛細管含有多孔質（特開昭59-90056号、特開昭61-228
354号公報参照) 、更には磁気感応性担体等である。磁
気感応性担体とは、例えば、球状化した熱可塑性樹脂の
表面に一般に磁性体と呼ばれるフェライト等の磁気応答
性粉体を担持させ、その表面をポリマ−で被覆したもの
（特開昭61-167866 号公報参照) であるが、磁気感応性
担体を使用した場合には、振動磁界を作用させて反応液
を攪拌し、測定感度を高めることが可能である。
ス等のペ−パ−ディスク（特開昭61-21983号公報参照）
や毛細管含有多孔質（特開昭59-90056号、特開昭61-228
354号公報参照) 、更には磁気感応性担体等である。磁
気感応性担体とは、例えば、球状化した熱可塑性樹脂の
表面に一般に磁性体と呼ばれるフェライト等の磁気応答
性粉体を担持させ、その表面をポリマ−で被覆したもの
（特開昭61-167866 号公報参照) であるが、磁気感応性
担体を使用した場合には、振動磁界を作用させて反応液
を攪拌し、測定感度を高めることが可能である。
【０００５】担体上に抗体や抗原を固定化する方法とし
ては、カップリング剤を用いた化学結合による方法や各
種物理吸着による方法が一般的であり、このようにして
担体上に固定化した抗体等と酵素等を結合させた標識抗
体と共に適当な反応容器に添加した後、製剤化すること
で免疫反応試薬は製造されている。
ては、カップリング剤を用いた化学結合による方法や各
種物理吸着による方法が一般的であり、このようにして
担体上に固定化した抗体等と酵素等を結合させた標識抗
体と共に適当な反応容器に添加した後、製剤化すること
で免疫反応試薬は製造されている。
【０００６】ところで、免疫測定に必要な成分、例えば
抗体や抗原を固定化した担体と標識抗体又は標識抗原等
を含む溶液は、溶液状態のままでは一般的に保存安定性
が悪く、溶液状態では製剤とは成り得ないため、その保
存安定化のために脱水乾燥するのが一般的である。脱水
乾燥には種々の方法があるが、従来は真空凍結乾燥法が
最も安全で優れた方法とされてきた。
抗体や抗原を固定化した担体と標識抗体又は標識抗原等
を含む溶液は、溶液状態のままでは一般的に保存安定性
が悪く、溶液状態では製剤とは成り得ないため、その保
存安定化のために脱水乾燥するのが一般的である。脱水
乾燥には種々の方法があるが、従来は真空凍結乾燥法が
最も安全で優れた方法とされてきた。
【０００７】このような例として、例えばモノクロ−ナ
ル抗体とゼラチン等を含有する溶液を真空凍結乾燥する
ことによって抗原結合活性を保持した安定な製剤を製造
する技術（特開平5-65233 号公報参照）や、ＥＩＡ用の
試薬をゼラチンより成る成型用キャリヤ−マトリクック
ス内に内封させ凍結乾燥する技術（特表平 7-500417号
公報参照）等が知られている。
ル抗体とゼラチン等を含有する溶液を真空凍結乾燥する
ことによって抗原結合活性を保持した安定な製剤を製造
する技術（特開平5-65233 号公報参照）や、ＥＩＡ用の
試薬をゼラチンより成る成型用キャリヤ−マトリクック
ス内に内封させ凍結乾燥する技術（特表平 7-500417号
公報参照）等が知られている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、真空凍
結乾燥法は製造コストが高くなり、また真空凍結乾燥工
程がバッチ処理のためスケ−ルアップが難しく、凍結乾
燥機を含めた大規模な製造施設が必要となり、更に真空
凍結乾燥の対象となる溶液を容器へ分注し、凍結し、真
空乾燥し、室温へ復帰させ、真空状態を解除する等の一
連の製造工程に時間がかかる等の理由から、大量生産に
は不向きである、等の課題がある。
結乾燥法は製造コストが高くなり、また真空凍結乾燥工
程がバッチ処理のためスケ−ルアップが難しく、凍結乾
燥機を含めた大規模な製造施設が必要となり、更に真空
凍結乾燥の対象となる溶液を容器へ分注し、凍結し、真
空乾燥し、室温へ復帰させ、真空状態を解除する等の一
連の製造工程に時間がかかる等の理由から、大量生産に
は不向きである、等の課題がある。
【０００９】また、このような試薬を免疫測定装置で使
用するには、いわゆるオールインワンタイプと呼ばれ
る、反応容器に試料を添加するのみで免疫反応を生じさ
せることができるよう、反応に必要な成分の全てが製剤
化されており、脱水乾燥された成分に緩衝液等を添加し
復水した後、被検液を添加し反応を起こさせるのが好ま
しい。
用するには、いわゆるオールインワンタイプと呼ばれ
る、反応容器に試料を添加するのみで免疫反応を生じさ
せることができるよう、反応に必要な成分の全てが製剤
化されており、脱水乾燥された成分に緩衝液等を添加し
復水した後、被検液を添加し反応を起こさせるのが好ま
しい。
【００１０】オールインワンタイプの試薬は、必要成分
を溶液状態で１つの反応容器に分注し真空凍結対象物と
することで製造し得るが、溶液中に混在する各種必要成
分同士が互いに接触、混合したままの状態で製剤化され
ることになる。このため、真空凍結乾燥工程中、最初の
凍結工程で溶液の局所濃縮は完全には避けられず、接触
して存在する各種必要成分同士が作用し合って試薬性能
に悪影響する場合もある。即ち、抗原又は抗体を固定化
した担体に対し、酵素標識抗体等の非特異的な吸着が起
こり、測定の際のバックグランドの上昇による感度悪化
が起こったり、標識酵素部分と他の成分が相互作用する
ことにより、酵素活性、即ちレスポンスの低下を招き、
保存安定性に支障が出る場合もある。
を溶液状態で１つの反応容器に分注し真空凍結対象物と
することで製造し得るが、溶液中に混在する各種必要成
分同士が互いに接触、混合したままの状態で製剤化され
ることになる。このため、真空凍結乾燥工程中、最初の
凍結工程で溶液の局所濃縮は完全には避けられず、接触
して存在する各種必要成分同士が作用し合って試薬性能
に悪影響する場合もある。即ち、抗原又は抗体を固定化
した担体に対し、酵素標識抗体等の非特異的な吸着が起
こり、測定の際のバックグランドの上昇による感度悪化
が起こったり、標識酵素部分と他の成分が相互作用する
ことにより、酵素活性、即ちレスポンスの低下を招き、
保存安定性に支障が出る場合もある。
【００１１】これを回避するために、各成分同士の接触
をなるべく減らす手段として、各成分溶液毎に分注後、
凍結して、その上にさらに次の成分溶液を分注する、い
わゆる多段分注を用いる製法もあるが、製造工程が複雑
になり、時間を要することから実用的ではない。他に
も、真空凍結乾燥するために容器に固定化担体を含む溶
液等を分注する工程は、一般に長時間を要し、生産効率
を高めるのが難しいという課題がある。
をなるべく減らす手段として、各成分溶液毎に分注後、
凍結して、その上にさらに次の成分溶液を分注する、い
わゆる多段分注を用いる製法もあるが、製造工程が複雑
になり、時間を要することから実用的ではない。他に
も、真空凍結乾燥するために容器に固定化担体を含む溶
液等を分注する工程は、一般に長時間を要し、生産効率
を高めるのが難しいという課題がある。
【００１２】以上のような真空凍結乾燥法とは別に、固
相化された試薬の安定剤として牛血清アルブミンなどを
用いて、抗原や抗体を結合させた担体から成る試薬を自
然乾燥、通気乾燥、真空乾燥、凍結乾燥等によって製剤
化する方法が提案されている（特開平 5-66985号公報参
照) 。
相化された試薬の安定剤として牛血清アルブミンなどを
用いて、抗原や抗体を結合させた担体から成る試薬を自
然乾燥、通気乾燥、真空乾燥、凍結乾燥等によって製剤
化する方法が提案されている（特開平 5-66985号公報参
照) 。
【００１３】この方法は、抗体や抗原を固定化した担体
だけを脱水乾燥し、安定化させるというものであり、免
疫測定装置で使用するのに好適なオールインワンタイプ
の試薬を提供し得ないという課題がある。また、この方
法に類似した方法として、担体上に固定化された免疫活
性物質（抗体や抗原）を、安定化剤として糖類（乳糖、
ショ糖、デキストリン等）及び蛋白質（ウシ血清アルブ
ミン、水溶性ゼラチン等）を含む溶液中に浸漬し、次い
でこれを自然乾燥する方法（特開平5-41946 号公報参
照）や、磁性粒子（特開平3-115862号等参照）に結合さ
せた抗原や抗体を含む免疫反応用の試薬溶液中に、ゼラ
チンを存在させることにより安定保存を可能にする方法
（特開平5-180836号公報参照）等も知られているが、こ
れらの方法も固定化された試薬部分のみの安定化に関す
るものである。
だけを脱水乾燥し、安定化させるというものであり、免
疫測定装置で使用するのに好適なオールインワンタイプ
の試薬を提供し得ないという課題がある。また、この方
法に類似した方法として、担体上に固定化された免疫活
性物質（抗体や抗原）を、安定化剤として糖類（乳糖、
ショ糖、デキストリン等）及び蛋白質（ウシ血清アルブ
ミン、水溶性ゼラチン等）を含む溶液中に浸漬し、次い
でこれを自然乾燥する方法（特開平5-41946 号公報参
照）や、磁性粒子（特開平3-115862号等参照）に結合さ
せた抗原や抗体を含む免疫反応用の試薬溶液中に、ゼラ
チンを存在させることにより安定保存を可能にする方法
（特開平5-180836号公報参照）等も知られているが、こ
れらの方法も固定化された試薬部分のみの安定化に関す
るものである。
【００１４】前記、ゼラチンを存在させることにより安
定保存を可能にする方法では試薬が溶液状態のため凍結
して保存する必要があり、また試薬を使用する際に、凍
結物の解凍・融解操作等が必要になるなどの実用上の課
題がある。
定保存を可能にする方法では試薬が溶液状態のため凍結
して保存する必要があり、また試薬を使用する際に、凍
結物の解凍・融解操作等が必要になるなどの実用上の課
題がある。
【００１５】マイクロプレ−ト等の担体に抗体等を固定
化した後、保護剤としての各種アルブミンやゼラチン含
有水溶液で処理し乾燥させる方法（特開昭59-206716
号、特開昭61-241665 号公報参照）や診断試験用スライ
ドに感作ラテックス粒子を含むコラ−ゲン分解物、糖類
溶液を付着させた後、室温で自然乾燥する方法（特開平
1-114757 号公報）も知られているが、上記同様に免疫
反応試薬の一部分を乾燥させ安定化しただけであり、そ
の他の必要成分についてはなおも課題が残されていた。
化した後、保護剤としての各種アルブミンやゼラチン含
有水溶液で処理し乾燥させる方法（特開昭59-206716
号、特開昭61-241665 号公報参照）や診断試験用スライ
ドに感作ラテックス粒子を含むコラ−ゲン分解物、糖類
溶液を付着させた後、室温で自然乾燥する方法（特開平
1-114757 号公報）も知られているが、上記同様に免疫
反応試薬の一部分を乾燥させ安定化しただけであり、そ
の他の必要成分についてはなおも課題が残されていた。
【００１６】
【課題を解決するための手段】かかる現状を鑑み、本発
明者らは、担体、特に磁性粒子などを用いる免疫反応試
薬の製剤化について鋭意検討した結果、本発明を完成す
るに至った。本発明は、一種又は二種以上の免疫活性物
質及び／又は免疫反応に関与する成分をゼラチン等を主
成分とする保護成分の共存下、担体上に単層又は多層被
覆し、脱水乾燥したことを特徴する免疫反応試薬であ
る。また本発明は、一種又は二種以上の免疫活性物質及
び／又は免疫反応に関与する成分をゼラチン等を主成分
とする保護成分の共存下、担体上に単層又は多層被覆
し、脱水乾燥することを特徴する免疫反応試薬の製造法
である。以下、本発明を詳細に説明する。
明者らは、担体、特に磁性粒子などを用いる免疫反応試
薬の製剤化について鋭意検討した結果、本発明を完成す
るに至った。本発明は、一種又は二種以上の免疫活性物
質及び／又は免疫反応に関与する成分をゼラチン等を主
成分とする保護成分の共存下、担体上に単層又は多層被
覆し、脱水乾燥したことを特徴する免疫反応試薬であ
る。また本発明は、一種又は二種以上の免疫活性物質及
び／又は免疫反応に関与する成分をゼラチン等を主成分
とする保護成分の共存下、担体上に単層又は多層被覆
し、脱水乾燥することを特徴する免疫反応試薬の製造法
である。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】本発明は、免疫反応試薬として必要な成分
を、担体上に、できるだけ成分同士が互いに接触しない
状態で被覆し、更に真空凍結乾燥機を用いずに、大量か
つ迅速に脱水乾燥することによって試薬性能を良好に保
持したまま保存安定化するものである。
を、担体上に、できるだけ成分同士が互いに接触しない
状態で被覆し、更に真空凍結乾燥機を用いずに、大量か
つ迅速に脱水乾燥することによって試薬性能を良好に保
持したまま保存安定化するものである。
【００１８】従って本発明によれば、この必要成分を担
体上に保存安定化させ、この担体を、乾燥状態で反応容
器に迅速簡便に分注することによって最終試薬形態とし
ての製剤化を容易に可能にすることができ、これによ
り、短時間で大量安価な試薬製造が可能となり、さらに
凍結保存不要で、室温または冷蔵で長期保存が可能な安
定性に優れた試薬が提供できる。
体上に保存安定化させ、この担体を、乾燥状態で反応容
器に迅速簡便に分注することによって最終試薬形態とし
ての製剤化を容易に可能にすることができ、これによ
り、短時間で大量安価な試薬製造が可能となり、さらに
凍結保存不要で、室温または冷蔵で長期保存が可能な安
定性に優れた試薬が提供できる。
【００１９】本発明は、例えば、磁性粒子等の担体表面
に、抗体、抗原又はレクチンを固定化し、通常のブロッ
キング処理を行い、ゼラチン等を主成分とする保護液に
浸漬し、必要に応じて余分な保護液を除去した後、当該
単一層で被覆された担体を造粒機を用いる等して乾燥空
気等を給気しながら遠心流動させて脱水乾燥させるもの
である。そして本発明では、その後さらに、ゼラチン等
を主成分とする保護液に溶解した、酵素標識抗体等の免
疫反応に必要なその他の活性成分や無機塩等の免疫反応
に関与する成分を、順次、当該担体上にスプレ−コ−ト
することによって多層被覆すると同時に前記同様にして
脱水乾燥することができる。なおこの場合、各成分同士
の接触を避けるため、必要に応じて各成分層の間に隔膜
となる層を形成することも可能である。
に、抗体、抗原又はレクチンを固定化し、通常のブロッ
キング処理を行い、ゼラチン等を主成分とする保護液に
浸漬し、必要に応じて余分な保護液を除去した後、当該
単一層で被覆された担体を造粒機を用いる等して乾燥空
気等を給気しながら遠心流動させて脱水乾燥させるもの
である。そして本発明では、その後さらに、ゼラチン等
を主成分とする保護液に溶解した、酵素標識抗体等の免
疫反応に必要なその他の活性成分や無機塩等の免疫反応
に関与する成分を、順次、当該担体上にスプレ−コ−ト
することによって多層被覆すると同時に前記同様にして
脱水乾燥することができる。なおこの場合、各成分同士
の接触を避けるため、必要に応じて各成分層の間に隔膜
となる層を形成することも可能である。
【００２０】ここで無機塩等、粉体として取り扱うこと
のできる免疫反応に関与する成分は、微粉末化した後、
適当なバインダ−を使用することにより、上記同様にし
て、多層被覆した固定化用担体上に更に粉体コ−トして
被覆することができる。バインダ−としては、ゼラチン
やハイドロキシプロピルセルロ−ス（ＨＰＣ）を例示す
ることができる。また本発明では、単に無機塩等の免疫
反応に関与する成分の単一層で担体を被覆したり、この
ような免疫反応に関与する成分と免疫活性成分或いは二
種以上の免疫反応に関与する成分で担体を多層被覆した
りすることができる。
のできる免疫反応に関与する成分は、微粉末化した後、
適当なバインダ−を使用することにより、上記同様にし
て、多層被覆した固定化用担体上に更に粉体コ−トして
被覆することができる。バインダ−としては、ゼラチン
やハイドロキシプロピルセルロ−ス（ＨＰＣ）を例示す
ることができる。また本発明では、単に無機塩等の免疫
反応に関与する成分の単一層で担体を被覆したり、この
ような免疫反応に関与する成分と免疫活性成分或いは二
種以上の免疫反応に関与する成分で担体を多層被覆した
りすることができる。
【００２１】このようにして調製した免疫反応試薬は、
磁性粒子等の担体の表面に、例えば、免疫反応に必要な
成分が固定化され、更にその上に他の成分が被覆された
多層被覆した担体となる。このように本発明の担体は、
その上に抗体や標識抗体などの免疫反応に必要な免疫活
性物質の全てが被覆（固定化及び／又は被覆）されてい
ることから、必要な数の担体を適当な大きさのプラスチ
ックカップ等の反応容器中に入れて密封等するだけで、
必要成分が１個のカップ内に入った、オールインワンタ
イプの免疫反応試薬を提供することができる。この作業
は、脱水乾燥状態のビーズを、その乾燥状態を維持した
ままカップ中に分注する装置（乾式分注機）により、迅
速・簡便に最終試薬形態にすることができ、短時間で大
量に試薬製造を行うことができる。
磁性粒子等の担体の表面に、例えば、免疫反応に必要な
成分が固定化され、更にその上に他の成分が被覆された
多層被覆した担体となる。このように本発明の担体は、
その上に抗体や標識抗体などの免疫反応に必要な免疫活
性物質の全てが被覆（固定化及び／又は被覆）されてい
ることから、必要な数の担体を適当な大きさのプラスチ
ックカップ等の反応容器中に入れて密封等するだけで、
必要成分が１個のカップ内に入った、オールインワンタ
イプの免疫反応試薬を提供することができる。この作業
は、脱水乾燥状態のビーズを、その乾燥状態を維持した
ままカップ中に分注する装置（乾式分注機）により、迅
速・簡便に最終試薬形態にすることができ、短時間で大
量に試薬製造を行うことができる。
【００２２】本発明で使用する担体は、ガラス、シリカ
等の無機物質から成る粒子、各種合成高分子化合物から
成るプラスチック粒子、セルロ−ス誘導体の粒子等、免
疫測定に用いられる担体であればいかなるものであって
も制限無く使用できるが、特に球状の担体が好ましい。
例えばポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸
ビニル共重合体、ナイロン、ポリスチレン、スチレン−
ブタジエン共重合体、ポリ塩化ビニル又はこれらを主成
分とする共重合体等若しくは混合物等の、熱可塑性樹脂
製の担体が例示できる。担体の平均粒径についても特に
制限は無いが、例えば0.1 〜20ｍｍ程度ものを使用する
ことが例示できる。
等の無機物質から成る粒子、各種合成高分子化合物から
成るプラスチック粒子、セルロ−ス誘導体の粒子等、免
疫測定に用いられる担体であればいかなるものであって
も制限無く使用できるが、特に球状の担体が好ましい。
例えばポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸
ビニル共重合体、ナイロン、ポリスチレン、スチレン−
ブタジエン共重合体、ポリ塩化ビニル又はこれらを主成
分とする共重合体等若しくは混合物等の、熱可塑性樹脂
製の担体が例示できる。担体の平均粒径についても特に
制限は無いが、例えば0.1 〜20ｍｍ程度ものを使用する
ことが例示できる。
【００２３】本発明では、特に、磁気感応成分を含有す
る担体が好ましい担体として例示できる。担持される磁
気感応性成分としては、例えばマンガン・亜鉛フェライ
ト等の、いわゆるソフトフェライトや四酸価鉄を主成分
とするマグネタイト等が例示でき、その粒径は0.01〜10
μｍ程度の粉体を用いることができる。これら磁気感応
性成分は、前述の熱可塑性樹脂から成る担体の作製時に
混合して内部に含有させるか、あるいは表面に担持させ
る等すれば良く、表面に担持させる方法としては吸着に
よる方法、熱融着による方法等を例示することができ
る。
る担体が好ましい担体として例示できる。担持される磁
気感応性成分としては、例えばマンガン・亜鉛フェライ
ト等の、いわゆるソフトフェライトや四酸価鉄を主成分
とするマグネタイト等が例示でき、その粒径は0.01〜10
μｍ程度の粉体を用いることができる。これら磁気感応
性成分は、前述の熱可塑性樹脂から成る担体の作製時に
混合して内部に含有させるか、あるいは表面に担持させ
る等すれば良く、表面に担持させる方法としては吸着に
よる方法、熱融着による方法等を例示することができ
る。
【００２４】磁気感応性粉体の担体への含有量（担持
量）は、担体流動のために作用させる磁界の強度、担体
の流動性の程度により適宜決定することができるが、一
般的にはビ−ズ重量の１％〜80％、好ましくは５〜40％
程度である。
量）は、担体流動のために作用させる磁界の強度、担体
の流動性の程度により適宜決定することができるが、一
般的にはビ−ズ重量の１％〜80％、好ましくは５〜40％
程度である。
【００２５】なお本発明では、単なる鉄やステンレスの
ボ−ルのようなものを担体自体、又は担体の核として用
いることもできる。
ボ−ルのようなものを担体自体、又は担体の核として用
いることもできる。
【００２６】本発明の担体は、前述のように、免疫活性
成分を化学的又は物理的に固定化したものであることが
できる。担体上に免疫活性成分、即ち抗体、抗原又はレ
クチンを固定化する方法としては、具体的に、各種物理
吸着による方法やカップリング剤等を用いる化学結合に
よる方法等を利用できる（生化学実験法１１、東京化学
同人（１９８９）１９６〜２５１頁）。特に好ましく
は、担体の表面に化学蒸着法等によりポリパラキシリレ
ン膜を形成させ（特開平2-147861号公報参照）、この膜
表面に他の化学的処理を行うことなく抗原、抗体又はレ
クチンを吸着固定化し、表面の未吸着領域をウシ血清ア
ルブミン（以下、ＢＳＡと略す）等で塞ぐこと（以下
「ブロッキング」という）により担体への非特異的吸着
を十分に抑えた担体を用いることができる。
成分を化学的又は物理的に固定化したものであることが
できる。担体上に免疫活性成分、即ち抗体、抗原又はレ
クチンを固定化する方法としては、具体的に、各種物理
吸着による方法やカップリング剤等を用いる化学結合に
よる方法等を利用できる（生化学実験法１１、東京化学
同人（１９８９）１９６〜２５１頁）。特に好ましく
は、担体の表面に化学蒸着法等によりポリパラキシリレ
ン膜を形成させ（特開平2-147861号公報参照）、この膜
表面に他の化学的処理を行うことなく抗原、抗体又はレ
クチンを吸着固定化し、表面の未吸着領域をウシ血清ア
ルブミン（以下、ＢＳＡと略す）等で塞ぐこと（以下
「ブロッキング」という）により担体への非特異的吸着
を十分に抑えた担体を用いることができる。
【００２７】このようにして調製された担体を、ゼラチ
ン等を主成分とした、安定化のための保護液に浸漬し、
その後、必要に応じて余分に付着したゼラチン保護液等
を遠心脱水、吸引濾過等の適当な手段により除去し、遠
心流動方式の、いわゆる造粒機を用いて脱水乾燥する。
ここで、付着した余分な保護液を遠心脱水、吸引濾過等
の適当な手段を用いて除去することは、以後の造粒乾燥
装置を用いた脱水乾燥工程において担体同士の凝集等を
防止し、円滑に脱水乾燥を行うために好ましい。
ン等を主成分とした、安定化のための保護液に浸漬し、
その後、必要に応じて余分に付着したゼラチン保護液等
を遠心脱水、吸引濾過等の適当な手段により除去し、遠
心流動方式の、いわゆる造粒機を用いて脱水乾燥する。
ここで、付着した余分な保護液を遠心脱水、吸引濾過等
の適当な手段を用いて除去することは、以後の造粒乾燥
装置を用いた脱水乾燥工程において担体同士の凝集等を
防止し、円滑に脱水乾燥を行うために好ましい。
【００２８】安定化のための保護液にゼラチンを用いる
場合、アルカリ処理ゼラチン又は酸処理ゼラチンが好ま
しい。またゼラチンを主成分とする保護液は、脱水乾燥
した試薬を復水する際、速やかに再溶解し、免疫反応に
影響を与えないことが好ましいため、水に対する溶解性
に優れた水溶性ゼラチンが特に好ましい。
場合、アルカリ処理ゼラチン又は酸処理ゼラチンが好ま
しい。またゼラチンを主成分とする保護液は、脱水乾燥
した試薬を復水する際、速やかに再溶解し、免疫反応に
影響を与えないことが好ましいため、水に対する溶解性
に優れた水溶性ゼラチンが特に好ましい。
【００２９】水溶性ゼラチンは、コラ−ゲンを部分加水
分解処理し、必要に応じて精製して得ることができる。
本発明で使用するゼラチンの濃度は0.5 〜30 w/v％が好
ましいが、保護作用や経済性の面から5 〜15 w/v％が特
に好ましい。なお本発明においては、必要に応じてゼラ
チンと塩類、緩衝剤、アミノ酸類、糖類、ＢＳＡ等の蛋
白成分など他の物質を併用することができる。またこれ
らは、好ましくは中性付近にｐＨ調整された緩衝液であ
ることが好ましく、防腐剤としてアジ化ナトリウム等を
適量含有しても良い。なお、酵素標識した抗体又は抗原
を免疫活性物質として含有させる場合であって、当該酵
素の活性発現にＭｇ2+やＺｎ2+などが必要となる場合に
は、これらの塩、例えば塩化マグネシウムや塩化亜鉛等
を適量含有していても良い。ここで標識酵素は、例えば
アルカリフォスファタ−ゼ（ウシ小腸由来）、ペルオキ
シダ−ゼ（西洋ワサビ由来）、β−Ｄ−ガラクトシダ−
ゼ（大腸菌由来）等、通常の酵素免疫測定法に用いられ
るものであれば特に制限はない。また、標識用の発光物
質としてはアクリジニウム誘導体系の化学発光物質等、
発光免疫測定に用いられるものであれば制限はない。
分解処理し、必要に応じて精製して得ることができる。
本発明で使用するゼラチンの濃度は0.5 〜30 w/v％が好
ましいが、保護作用や経済性の面から5 〜15 w/v％が特
に好ましい。なお本発明においては、必要に応じてゼラ
チンと塩類、緩衝剤、アミノ酸類、糖類、ＢＳＡ等の蛋
白成分など他の物質を併用することができる。またこれ
らは、好ましくは中性付近にｐＨ調整された緩衝液であ
ることが好ましく、防腐剤としてアジ化ナトリウム等を
適量含有しても良い。なお、酵素標識した抗体又は抗原
を免疫活性物質として含有させる場合であって、当該酵
素の活性発現にＭｇ2+やＺｎ2+などが必要となる場合に
は、これらの塩、例えば塩化マグネシウムや塩化亜鉛等
を適量含有していても良い。ここで標識酵素は、例えば
アルカリフォスファタ−ゼ（ウシ小腸由来）、ペルオキ
シダ−ゼ（西洋ワサビ由来）、β−Ｄ−ガラクトシダ−
ゼ（大腸菌由来）等、通常の酵素免疫測定法に用いられ
るものであれば特に制限はない。また、標識用の発光物
質としてはアクリジニウム誘導体系の化学発光物質等、
発光免疫測定に用いられるものであれば制限はない。
【００３０】本発明で用いる免疫活性物質中、抗原又は
抗体は、測定されるべき対象物により適宜選択される。
抗原としては例えば、尿や血清等から分離抽出されたホ
ルモン等であり、更にはその分解物やその成分の合成ポ
リペプチド等である。抗体としては例えば、ハイブリド
−マを用いて細胞培養やマウス腹水から採取したモノク
ロ−ナル抗体や、抗原を各種動物に感作して得られる抗
血清を精製したポリクロ−ナル抗体又は遺伝子組換え生
物に産生させた抗体等であり、更にそれらを酵素分解し
たＦ（ａｂ´）2 、Ｆａｂ´、Ｆａｂ等である。
抗体は、測定されるべき対象物により適宜選択される。
抗原としては例えば、尿や血清等から分離抽出されたホ
ルモン等であり、更にはその分解物やその成分の合成ポ
リペプチド等である。抗体としては例えば、ハイブリド
−マを用いて細胞培養やマウス腹水から採取したモノク
ロ−ナル抗体や、抗原を各種動物に感作して得られる抗
血清を精製したポリクロ−ナル抗体又は遺伝子組換え生
物に産生させた抗体等であり、更にそれらを酵素分解し
たＦ（ａｂ´）2 、Ｆａｂ´、Ｆａｂ等である。
【００３１】抗原を用いるか抗体を用いるかは、本発明
の免疫反応用試薬をどのような測定系で用いるかにより
適宜決定される。即ち、いわゆるサンドイッチ法を採用
した抗原の測定用試薬であれば、免疫活性物質としては
当該抗原に対する固定化抗体と標識抗体等が例示でき、
いわゆる競合法を採用した抗原の測定用試薬であれば、
免疫活性物質としては当該抗原に対する固定化抗体と標
識した当該抗原等が例示できる。
の免疫反応用試薬をどのような測定系で用いるかにより
適宜決定される。即ち、いわゆるサンドイッチ法を採用
した抗原の測定用試薬であれば、免疫活性物質としては
当該抗原に対する固定化抗体と標識抗体等が例示でき、
いわゆる競合法を採用した抗原の測定用試薬であれば、
免疫活性物質としては当該抗原に対する固定化抗体と標
識した当該抗原等が例示できる。
【００３２】本発明で使用する造粒乾燥装置は、いわゆ
る転流動装置であり、市販の、例えばニュ−／マルメラ
イザ−（不二パウダル（株）製）やグラニュレックス
（フロイント産業（株）製）等の装置を用いることがで
きる。
る転流動装置であり、市販の、例えばニュ−／マルメラ
イザ−（不二パウダル（株）製）やグラニュレックス
（フロイント産業（株）製）等の装置を用いることがで
きる。
【００３３】造粒乾燥装置に担体を投入し、ビ−ズが遠
心流動状態なるような適当な回転速度でスリット板を回
転させる場合、必要に応じて攪拌羽を組み合わせて回転
させ、給気しながら脱水乾燥を行うと効率的である。給
気は乾燥空気が良いが、乾燥空気の相対湿度は好ましく
は65％以下、より好ましくは25％以下である。また、空
気に代えて、窒素ガスやアルゴンガス等の不活性ガス、
若しくはこれらの混合ガスを用いることも可能である。
給気量は造粒機に入れたビ−ズの量や給気するガスの相
対湿度、攪拌羽の回転速度、排気量等の諸条件によって
適宜決定すれば良いが、0.5 ｍ3 〜5 ｍ3 ／分程度が好
ましい。また、給気するガスの温度は4〜60℃、好まし
くは35℃以下が良い。
心流動状態なるような適当な回転速度でスリット板を回
転させる場合、必要に応じて攪拌羽を組み合わせて回転
させ、給気しながら脱水乾燥を行うと効率的である。給
気は乾燥空気が良いが、乾燥空気の相対湿度は好ましく
は65％以下、より好ましくは25％以下である。また、空
気に代えて、窒素ガスやアルゴンガス等の不活性ガス、
若しくはこれらの混合ガスを用いることも可能である。
給気量は造粒機に入れたビ−ズの量や給気するガスの相
対湿度、攪拌羽の回転速度、排気量等の諸条件によって
適宜決定すれば良いが、0.5 ｍ3 〜5 ｍ3 ／分程度が好
ましい。また、給気するガスの温度は4〜60℃、好まし
くは35℃以下が良い。
【００３４】上述のようにして調製した、免疫活性物質
又は免疫反応に関与する成分が被覆された担体上への、
更なる他の免疫活性物質や免疫反応に関与する成分の被
覆は、上記同様の造粒機を用いてスプレ−コ−トする
か、又は粉体コ−トすることにより行えば良い。スプレ
−コ−トする場合には、コ−トするための対象物であ
る、例えば酵素標識抗体等を上記同様のゼラチンを主成
分とする保護液中に入れ、空気または不活性ガス、若し
くはそれらの混合ガスを用いて造粒機中で遠心流動して
いる上記担体に対してスプレー（噴霧）することで行え
ば良い。スプレー速度等の条件は、装置の種類、調製規
模や諸条件によって適宜決定すれば良いが、例えばスプ
レ−速度はビ−ズ１ｋｇ当たり2 〜10ｍｌ／分であり、
スプレ−する液量はビ−ズ１ｋｇ当たり30〜300 ｍｌ程
度が好ましい。
又は免疫反応に関与する成分が被覆された担体上への、
更なる他の免疫活性物質や免疫反応に関与する成分の被
覆は、上記同様の造粒機を用いてスプレ−コ−トする
か、又は粉体コ−トすることにより行えば良い。スプレ
−コ−トする場合には、コ−トするための対象物であ
る、例えば酵素標識抗体等を上記同様のゼラチンを主成
分とする保護液中に入れ、空気または不活性ガス、若し
くはそれらの混合ガスを用いて造粒機中で遠心流動して
いる上記担体に対してスプレー（噴霧）することで行え
ば良い。スプレー速度等の条件は、装置の種類、調製規
模や諸条件によって適宜決定すれば良いが、例えばスプ
レ−速度はビ−ズ１ｋｇ当たり2 〜10ｍｌ／分であり、
スプレ−する液量はビ−ズ１ｋｇ当たり30〜300 ｍｌ程
度が好ましい。
【００３５】スプレ−する液の組成は免疫活性物質を含
有した水溶性ゼラチン等であるが、必要に応じてその他
の成分を含有する溶液を使用することもできる。また例
えば、抗体を固相化した担体の上に水溶性ゼラチン1 〜
30w/v ％含有水溶液をスプレ−コ−トしてゼラチン保護
膜を増加させ、その上にＢＳＡ1 〜10 w/v％及びゼラチ
ン1 〜10％w/v ％含有水溶液をスプレ−コ−トし、更に
その上に例えば酵素標識抗体をスプレーコートする等に
より、第一抗体を固定化した部分と標識した第二抗体を
コ−トした層との間にＢＳＡ含有層を形成させることも
できる。
有した水溶性ゼラチン等であるが、必要に応じてその他
の成分を含有する溶液を使用することもできる。また例
えば、抗体を固相化した担体の上に水溶性ゼラチン1 〜
30w/v ％含有水溶液をスプレ−コ−トしてゼラチン保護
膜を増加させ、その上にＢＳＡ1 〜10 w/v％及びゼラチ
ン1 〜10％w/v ％含有水溶液をスプレ−コ−トし、更に
その上に例えば酵素標識抗体をスプレーコートする等に
より、第一抗体を固定化した部分と標識した第二抗体を
コ−トした層との間にＢＳＡ含有層を形成させることも
できる。
【００３６】必要に応じて、上述のごとく固定化抗体及
び標識された第二抗体で多層被覆した担体の上に、更に
検体中の血清成分による測定妨害を低減するための各種
成分を含有した溶液をスプレ−コ−トしたり、検体中の
血清成分の免疫測定への影響を低減するための無機塩、
例えば塩化ナトリウム等を適量粉体コ−トすることが例
示できる。また、免疫測定に必要な成分で被覆した抗体
表面を免疫測定に影響しない成分で更に被覆することも
可能である。これは、最外殻に保護膜を形成させ、内部
保護や相互汚染を防止するために効果的である。
び標識された第二抗体で多層被覆した担体の上に、更に
検体中の血清成分による測定妨害を低減するための各種
成分を含有した溶液をスプレ−コ−トしたり、検体中の
血清成分の免疫測定への影響を低減するための無機塩、
例えば塩化ナトリウム等を適量粉体コ−トすることが例
示できる。また、免疫測定に必要な成分で被覆した抗体
表面を免疫測定に影響しない成分で更に被覆することも
可能である。これは、最外殻に保護膜を形成させ、内部
保護や相互汚染を防止するために効果的である。
【００３７】粉体コ−トは、まず無機塩を数〜数十ミク
ロン程度の粒子径に微粉末化し、水溶性ゼラチン5 〜20
w/v ％含有水溶液等をバインダ−として担体上に表面に
スプレ−しながら微粉末化無機塩を添加（パウダ−フィ
−ド）することにより実施できる。
ロン程度の粒子径に微粉末化し、水溶性ゼラチン5 〜20
w/v ％含有水溶液等をバインダ−として担体上に表面に
スプレ−しながら微粉末化無機塩を添加（パウダ−フィ
−ド）することにより実施できる。
【００３８】以上のようして調製した担体は、例えば密
閉性があり吸湿することがない適当なプラスチック製カ
ップ等の反応容器に適当数を入れ、乾燥空気中でシ−ル
すれば長期保存可能な製剤化が可能である。その使用時
には、サンドイッチ法の場合、カップのシ−ルを破り、
希釈溶液を用いて適当に希釈された検体（患者血清や尿
など）を一定量、カップ内に注入し、例えば、通常37℃
±1 ℃の恒温環境下、カップ内の液を攪拌しながら一定
時間反応させ、Ｂ／Ｆ分離のための洗浄操作を行い、例
えば、アルカリフォスファタ−ゼで酵素を標識として使
用した場合には発色基質である４−メチルウムベリフェ
リルフォスフェ−ト等の蛍光基質の溶液を分注し、蛍光
量の経時変化を測定し、既知濃度の検量線と比較するこ
とで検体中の測定対象物の濃度を検出し診断することに
なる。
閉性があり吸湿することがない適当なプラスチック製カ
ップ等の反応容器に適当数を入れ、乾燥空気中でシ−ル
すれば長期保存可能な製剤化が可能である。その使用時
には、サンドイッチ法の場合、カップのシ−ルを破り、
希釈溶液を用いて適当に希釈された検体（患者血清や尿
など）を一定量、カップ内に注入し、例えば、通常37℃
±1 ℃の恒温環境下、カップ内の液を攪拌しながら一定
時間反応させ、Ｂ／Ｆ分離のための洗浄操作を行い、例
えば、アルカリフォスファタ−ゼで酵素を標識として使
用した場合には発色基質である４−メチルウムベリフェ
リルフォスフェ−ト等の蛍光基質の溶液を分注し、蛍光
量の経時変化を測定し、既知濃度の検量線と比較するこ
とで検体中の測定対象物の濃度を検出し診断することに
なる。
【００３９】本発明の担体は、担体上に多層被覆する場
合、各被覆段階での中間製造物が脱水乾燥され安定化さ
れているためバルクとして管理が可能であり、製造を断
続的に行うことが可能で、製造プロセスを容易にでき
る。また本発明の担体は、プラスチック製カップ等に乾
燥した状態でスピ−ディに分注することができるため、
湿式分注に比べ分注速度ははるかに大きく、大量製造に
適する。このカップを乾燥空気中などでシ−ルするだけ
で、真空凍結乾燥法によらない風乾方式による製剤化、
即ちカップ試薬の製造が可能である。
合、各被覆段階での中間製造物が脱水乾燥され安定化さ
れているためバルクとして管理が可能であり、製造を断
続的に行うことが可能で、製造プロセスを容易にでき
る。また本発明の担体は、プラスチック製カップ等に乾
燥した状態でスピ−ディに分注することができるため、
湿式分注に比べ分注速度ははるかに大きく、大量製造に
適する。このカップを乾燥空気中などでシ−ルするだけ
で、真空凍結乾燥法によらない風乾方式による製剤化、
即ちカップ試薬の製造が可能である。
【００４０】担体そのものがバルク試薬として脱水乾燥
され保存安定化しているため、乾式分注し、カップシ−
ルする装置さえあれば、時と場所を選ばずにオールイン
ワンタイプの製剤を製造することが可能である。
され保存安定化しているため、乾式分注し、カップシ−
ルする装置さえあれば、時と場所を選ばずにオールイン
ワンタイプの製剤を製造することが可能である。
【００４１】
【発明の効果】本発明の免疫反応用試薬及びその製造方
法は、以下の如き効果を有する。（１）本発明では、抗
体又は抗原を固定化した担体を、抗原又は抗体結合活性
を安定に保持した状態で真空凍結乾燥機を用いることな
く迅速・簡便に脱水乾燥し保存安定化できる。（２）本
発明では、担体に固定化した免疫活性物質のみならず、
免疫反応試薬として必要な他の成分（例えば標識抗体又
は標識抗原）や免疫反応に関与する成分を、上記（１）
の乾燥物と同一容器中に、抗原又は抗体結合活性を安定
に保持した状態で真空凍結乾燥機を用いずに迅速・簡便
に脱水乾燥し保存安定化できる。（３）本発明では、免
疫反応試薬として必要な各成分を、互いに非接触状態で
脱水乾燥できるため、標識酵素された抗体等の担体への
非特異的吸着等が原因となるバックグランド上昇による
測定感度の悪化や当該抗体と他の成分との相互作用によ
る酵素活性、即ち、レスポンスの低下等を防ぐことがで
きる。（４）本発明では、真空凍結乾燥機ではなく造粒
乾燥装置を用いる試薬製造であるため試薬製造のスケ−
ルアップが容易であり、小規模施設で簡単、短時間且つ
低コストで性能が均一な試薬を大量生産できる。（５）
本発明では、必要成分が全て脱水乾燥され、反応容器に
安定化した状態で封入されているため、凍結保存等の必
要がなく、使用する際に解凍作業が不要で室温での流通
をも可能となる。（６）本発明では、免疫測定装置にセ
ットする反応容器等に必要成分の全てを封入されたオー
ルインワンタイプの試薬を供給できる。（７）本発明で
は、オールインワンタイプの試薬であれば、免疫測定装
置等を用いて測定する場合に、溶解液や被検液を添加す
ることにより担体に被覆された成分等が速やかに復水
し、溶液状態に戻り、免疫反応を良好に行うことができ
る。
法は、以下の如き効果を有する。（１）本発明では、抗
体又は抗原を固定化した担体を、抗原又は抗体結合活性
を安定に保持した状態で真空凍結乾燥機を用いることな
く迅速・簡便に脱水乾燥し保存安定化できる。（２）本
発明では、担体に固定化した免疫活性物質のみならず、
免疫反応試薬として必要な他の成分（例えば標識抗体又
は標識抗原）や免疫反応に関与する成分を、上記（１）
の乾燥物と同一容器中に、抗原又は抗体結合活性を安定
に保持した状態で真空凍結乾燥機を用いずに迅速・簡便
に脱水乾燥し保存安定化できる。（３）本発明では、免
疫反応試薬として必要な各成分を、互いに非接触状態で
脱水乾燥できるため、標識酵素された抗体等の担体への
非特異的吸着等が原因となるバックグランド上昇による
測定感度の悪化や当該抗体と他の成分との相互作用によ
る酵素活性、即ち、レスポンスの低下等を防ぐことがで
きる。（４）本発明では、真空凍結乾燥機ではなく造粒
乾燥装置を用いる試薬製造であるため試薬製造のスケ−
ルアップが容易であり、小規模施設で簡単、短時間且つ
低コストで性能が均一な試薬を大量生産できる。（５）
本発明では、必要成分が全て脱水乾燥され、反応容器に
安定化した状態で封入されているため、凍結保存等の必
要がなく、使用する際に解凍作業が不要で室温での流通
をも可能となる。（６）本発明では、免疫測定装置にセ
ットする反応容器等に必要成分の全てを封入されたオー
ルインワンタイプの試薬を供給できる。（７）本発明で
は、オールインワンタイプの試薬であれば、免疫測定装
置等を用いて測定する場合に、溶解液や被検液を添加す
ることにより担体に被覆された成分等が速やかに復水
し、溶液状態に戻り、免疫反応を良好に行うことができ
る。
【００４２】
【発明の実施の形態】以下、実施例により本発明を更に
具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定され
るものではない。
【００４３】実施例１ （担体の製造） エチレン−酢酸ビニル共重合体（東ソ−（株）製）に平
均粒子径約0.2 ミクロンの四三酸化鉄を成分とするマグ
ネタイト（チタン工業（株）製）を12w/w ％の割合で均
一に練り込み、ペレットにした後、球状化して平均粒径
1.5 ｍｍの磁気感応性物質を含有した球状担体を製造し
た。
均粒子径約0.2 ミクロンの四三酸化鉄を成分とするマグ
ネタイト（チタン工業（株）製）を12w/w ％の割合で均
一に練り込み、ペレットにした後、球状化して平均粒径
1.5 ｍｍの磁気感応性物質を含有した球状担体を製造し
た。
【００４４】この担体3 ｋｇに、真空蒸着装置（パラテ
ックコ−ティング社製）を用いてジクロロパラキシリレ
ン（第三化成（株）製）60ｇを化学蒸着した。以下、こ
のようにして作製した厚さ約5 ミクロンのポリモノクロ
ロパラキシリレンのコ−ティング膜層を有する球状担体
を用いて実験を行った。
ックコ−ティング社製）を用いてジクロロパラキシリレ
ン（第三化成（株）製）60ｇを化学蒸着した。以下、こ
のようにして作製した厚さ約5 ミクロンのポリモノクロ
ロパラキシリレンのコ−ティング膜層を有する球状担体
を用いて実験を行った。
【００４５】（担体への抗体の固定化）前記担体約10万
個を350 ｍｌの20ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ7.0 ）に
懸濁し、抗ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）モノクロ−ナ
ル抗体を25ｍｇを加え、25℃で3 時間振盪した。50ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）で3 回洗浄した後、1w/v
％牛血清アルブミン含有50ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
8.0 ）中に53℃で16時間懸濁し、ブロッキングを行っ
た。
個を350 ｍｌの20ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ7.0 ）に
懸濁し、抗ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）モノクロ−ナ
ル抗体を25ｍｇを加え、25℃で3 時間振盪した。50ｍＭ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）で3 回洗浄した後、1w/v
％牛血清アルブミン含有50ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ
8.0 ）中に53℃で16時間懸濁し、ブロッキングを行っ
た。
【００４６】（造粒乾燥装置を用いた本発明の担体の製
造）ブロッキングした担体約10万個を50ｍＭトリス塩酸
緩衝液（ｐＨ8.0 ）で3 回洗浄した後、10w/v ％ゼラチ
ン溶液（ｐＨ7.0 ）（新田ゼラチン（株）製の水溶性ゼ
ラチン Type U を使用）に浸漬し、25℃で30分間静置
後、遠心脱水した。このゼラチン処理した担体を造粒乾
燥装置（不二パウダル（株）製ＮＱ−ＬＡＢＯ）を用い
て脱水乾燥した。脱水乾燥の操作は、送風温度32〜35
℃、送風速度0.5ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度2
00 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧 -30ｍ
ｍＨ2 Ｏで5 分間である。
造）ブロッキングした担体約10万個を50ｍＭトリス塩酸
緩衝液（ｐＨ8.0 ）で3 回洗浄した後、10w/v ％ゼラチ
ン溶液（ｐＨ7.0 ）（新田ゼラチン（株）製の水溶性ゼ
ラチン Type U を使用）に浸漬し、25℃で30分間静置
後、遠心脱水した。このゼラチン処理した担体を造粒乾
燥装置（不二パウダル（株）製ＮＱ−ＬＡＢＯ）を用い
て脱水乾燥した。脱水乾燥の操作は、送風温度32〜35
℃、送風速度0.5ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度2
00 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧 -30ｍ
ｍＨ2 Ｏで5 分間である。
【００４７】脱水乾燥した担体に、更にゼラチンコ−ト
を行うために25w/v ％ゼラチン溶液をスプレ−コ−ト
し、脱水乾燥を約2 分間行った。スプレ−操作は、ゼラ
チン溶液15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分で約30分間
行った。その他、造粒乾燥装置の操作条件はスリット回
転板の回転速度を300 ｒｐｍに変更した以外は上記脱水
乾燥と同様である。このようにしてゼラチンコ−トした
担体にＢＳＡ含有溶液をスプレ−コ−トした後、脱水乾
燥を約2 分間行った。スプレ−操作は7w/v％ＢＳＡ含有
1w/v％ゼラチン溶液（ｐＨ7.0 ）12ｍｌをスプレ−速度
0.5 ｍｌ／分で約24分間行った。造粒乾燥装置の操作条
件は、送風温度24〜27℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリ
ット回転板の回転速度300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥
ケ−スの内部圧は -30ｍｍＨ2 Ｏである。
を行うために25w/v ％ゼラチン溶液をスプレ−コ−ト
し、脱水乾燥を約2 分間行った。スプレ−操作は、ゼラ
チン溶液15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分で約30分間
行った。その他、造粒乾燥装置の操作条件はスリット回
転板の回転速度を300 ｒｐｍに変更した以外は上記脱水
乾燥と同様である。このようにしてゼラチンコ−トした
担体にＢＳＡ含有溶液をスプレ−コ−トした後、脱水乾
燥を約2 分間行った。スプレ−操作は7w/v％ＢＳＡ含有
1w/v％ゼラチン溶液（ｐＨ7.0 ）12ｍｌをスプレ−速度
0.5 ｍｌ／分で約24分間行った。造粒乾燥装置の操作条
件は、送風温度24〜27℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリ
ット回転板の回転速度300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥
ケ−スの内部圧は -30ｍｍＨ2 Ｏである。
【００４８】ＢＳＡ含有層を被覆した担体内、約9 万個
に酵素標識抗体である、先に担体に固相化した抗体とは
異なるエピト−プを認識する抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗
体−アルカリフォスファタ−ゼ結合体（アルカリフォス
ファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体）を含有す
るゼラチン溶液をスプレ−コ−トした。この操作は濃度
100 ｍＡ（波長280 ｎｍにおける吸光度が0.1 に相当す
る濃度）のアルカリフォスファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノ
クロ−ナル抗体及び75ｍＭの塩化マグネシウム、2.5 ｍ
Ｍの塩化亜鉛を含有した12.5w/v ％ゼラチン溶液（ｐＨ
7.0 ）15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分で約30分間行
った。その他、造粒乾燥装置の操作条件は、上記ＢＳＡ
含有層形成時と同様であった。
に酵素標識抗体である、先に担体に固相化した抗体とは
異なるエピト−プを認識する抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗
体−アルカリフォスファタ−ゼ結合体（アルカリフォス
ファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体）を含有す
るゼラチン溶液をスプレ−コ−トした。この操作は濃度
100 ｍＡ（波長280 ｎｍにおける吸光度が0.1 に相当す
る濃度）のアルカリフォスファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノ
クロ−ナル抗体及び75ｍＭの塩化マグネシウム、2.5 ｍ
Ｍの塩化亜鉛を含有した12.5w/v ％ゼラチン溶液（ｐＨ
7.0 ）15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分で約30分間行
った。その他、造粒乾燥装置の操作条件は、上記ＢＳＡ
含有層形成時と同様であった。
【００４９】（ＴＳＨの酵素免疫測定）前記のようにし
て製造した担体の12個を、予め、塩化ナトリウム2 ｍ
ｇ、塩化マグネシウム150 ｎｍｏｌｅ、塩化亜鉛5 ｎｍ
ｏｌｅを添加しておいた直径10ｍｍ、高さ20ｍｍのポリ
プロピレン製カップに入れ、これに既知濃度のＴＳＨを
含む標準血清溶液 100μｌと0.01（ｗ／ｖ）％トリトン
Ｘ100 （Ｔｒｉｔｏｎ ＸＸ−100 ）50μｌとを混合し
た液を１カップ当たり150 μｌ分注し、マグネチックス
タ−ラ−を用いて37℃で40分間、担体を攪拌させながら
反応させた。
て製造した担体の12個を、予め、塩化ナトリウム2 ｍ
ｇ、塩化マグネシウム150 ｎｍｏｌｅ、塩化亜鉛5 ｎｍ
ｏｌｅを添加しておいた直径10ｍｍ、高さ20ｍｍのポリ
プロピレン製カップに入れ、これに既知濃度のＴＳＨを
含む標準血清溶液 100μｌと0.01（ｗ／ｖ）％トリトン
Ｘ100 （Ｔｒｉｔｏｎ ＸＸ−100 ）50μｌとを混合し
た液を１カップ当たり150 μｌ分注し、マグネチックス
タ−ラ−を用いて37℃で40分間、担体を攪拌させながら
反応させた。
【００５０】反応液を除去した後、0.04（ｗ／ｖ）％ツ
ィ−ン20（Ｔｗｅｅｎ20）と0.01（ｗ／ｖ）％トリトン
Ｘ100 とを含む50ｍＭ塩化ナトリウム溶液（ｐＨ6.0 ）
で10回洗浄した後、アルカリフォスファタ−ゼの基質溶
液である1 ｍＭの４−メチルウンベリフェリルリン酸
（４ＭＵＰ）溶液（ｐＨ10.0）を220 μｌを添加し、37
℃で反応させた。
ィ−ン20（Ｔｗｅｅｎ20）と0.01（ｗ／ｖ）％トリトン
Ｘ100 とを含む50ｍＭ塩化ナトリウム溶液（ｐＨ6.0 ）
で10回洗浄した後、アルカリフォスファタ−ゼの基質溶
液である1 ｍＭの４−メチルウンベリフェリルリン酸
（４ＭＵＰ）溶液（ｐＨ10.0）を220 μｌを添加し、37
℃で反応させた。
【００５１】基質溶液添加10秒後から100 秒間の、酵素
による４ＭＵＰの加水分解生成物（４ＭＵ）の生成速度
（レ−ト）を励起波長360 ｎｍ、蛍光波長450 ｎｍで測
定した。結果を第１図に示す。
による４ＭＵＰの加水分解生成物（４ＭＵ）の生成速度
（レ−ト）を励起波長360 ｎｍ、蛍光波長450 ｎｍで測
定した。結果を第１図に示す。
【００５２】図１から、本発明の担体を用いることで感
度の高い免疫測定を実施できることが分かる。ちなみに
図１においてｙ切片とその２ＳＤ（標準偏差）から計算
されるＴＳＨの最小検出感度は0.005 μIU/mｌであっ
た。
度の高い免疫測定を実施できることが分かる。ちなみに
図１においてｙ切片とその２ＳＤ（標準偏差）から計算
されるＴＳＨの最小検出感度は0.005 μIU/mｌであっ
た。
【００５３】実施例 ２ 実施例１のようにして製造した担体の12個を、予め塩化
ナトリウム2 ｍｇ、塩化マグネシウム150 ｎｍｏｌｅ、
塩化亜鉛5 ｎｍｏｌｅを加えて乾燥させておいた直径10
ｍｍ、高さ20ｍｍのポリプロピレン製カップに入れ、乾
燥空気中でシ−ルして密閉した。
ナトリウム2 ｍｇ、塩化マグネシウム150 ｎｍｏｌｅ、
塩化亜鉛5 ｎｍｏｌｅを加えて乾燥させておいた直径10
ｍｍ、高さ20ｍｍのポリプロピレン製カップに入れ、乾
燥空気中でシ−ルして密閉した。
【００５４】この密閉したカップを恒温インキュベ−タ
−に入れ、40℃で7 日間の加速劣化（苛酷）試験を行っ
た（この試験は通常、冷蔵状態で約１年以上の保存に相
当することを意味する）。また、同時に比較として4 ℃
での同様の保存安定性試験を行った。評価は一定量（50
μＩＵ／ｍｌ）のＴＳＨを含有する標準ヒト血清を用い
て実施例１と同様にして行った。冷蔵（4 ℃）保存した
場合を対照とし、保存経過日数0 日目の測定値を100 と
して、それに対する40℃で7 日間保存した場合等の測定
値の百分率（％）で残存力価（抗体活性保持率）（％）
を算出した。
−に入れ、40℃で7 日間の加速劣化（苛酷）試験を行っ
た（この試験は通常、冷蔵状態で約１年以上の保存に相
当することを意味する）。また、同時に比較として4 ℃
での同様の保存安定性試験を行った。評価は一定量（50
μＩＵ／ｍｌ）のＴＳＨを含有する標準ヒト血清を用い
て実施例１と同様にして行った。冷蔵（4 ℃）保存した
場合を対照とし、保存経過日数0 日目の測定値を100 と
して、それに対する40℃で7 日間保存した場合等の測定
値の百分率（％）で残存力価（抗体活性保持率）（％）
を算出した。
【００５５】結果を表１に示す。なお、残存力価（％）
は次式を用いて計算した。 残存力価（％）＝7 日目のレ−ト／0 日目のレ−ト×10
0 ここで保存温度4 ℃で0 日目のレ−トと保存温度40℃で
0 日目のレ−トは同じであった。また、ＴＳＨを含まな
い標準血清溶液について上記と同様の方法で測定し、評
価した。その結果、40℃、一週間の加速劣化（苛酷）試
験後も保存経過日数0 日目と比較してレ−トの増加は見
られず、バックグランドは変化がなく安定しており、酵
素標識抗体の担体への非特異的吸着の増加等は観察され
なかった。
は次式を用いて計算した。 残存力価（％）＝7 日目のレ−ト／0 日目のレ−ト×10
0 ここで保存温度4 ℃で0 日目のレ−トと保存温度40℃で
0 日目のレ−トは同じであった。また、ＴＳＨを含まな
い標準血清溶液について上記と同様の方法で測定し、評
価した。その結果、40℃、一週間の加速劣化（苛酷）試
験後も保存経過日数0 日目と比較してレ−トの増加は見
られず、バックグランドは変化がなく安定しており、酵
素標識抗体の担体への非特異的吸着の増加等は観察され
なかった。
【００５６】
【表１】
【００５７】実施例 ３ 実施例１と同様に抗体を固相化しＢＳＡでブロッキング
した担体約9 万個を、50ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.
0 ）で3 回洗浄した後、10w/v%ゼラチン溶液（ｐＨ7.0
）に浸漬処理し、遠心脱水した後、造粒乾燥装置を用
いて脱水乾燥した。脱水乾燥の条件は、送風温度26〜32
℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度
300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-1
00ｍｍＨ2 Ｏで15分間である。
した担体約9 万個を、50ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.
0 ）で3 回洗浄した後、10w/v%ゼラチン溶液（ｐＨ7.0
）に浸漬処理し、遠心脱水した後、造粒乾燥装置を用
いて脱水乾燥した。脱水乾燥の条件は、送風温度26〜32
℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度
300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-1
00ｍｍＨ2 Ｏで15分間である。
【００５８】脱水乾燥した担体にＢＳＡ含有溶液をスプ
レ−コ−トした。スプレ−操作は7w/v％ＢＳＡ及び1w/v
％ゼラチン含有5 ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）15
ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分、送風温度26〜32℃、
送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度30
0 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-100
ｍｍＨ2 Ｏである。スプレ−終了後、引き続き脱水乾燥
を約2 分間行った。
レ−コ−トした。スプレ−操作は7w/v％ＢＳＡ及び1w/v
％ゼラチン含有5 ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）15
ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分、送風温度26〜32℃、
送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度30
0 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-100
ｍｍＨ2 Ｏである。スプレ−終了後、引き続き脱水乾燥
を約2 分間行った。
【００５９】ＢＳＡ層を被覆した担体にアルカリフォス
ファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体を含有した
ゼラチン溶液をスプレ−コ−トした。この操作は、波長
280ｎｍにおける吸光度が0.1 に相当する濃度のアルカ
リフォスファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体及
び0.1 Ｍの塩化マグネシウム、8w/v％ゼラチン、2.5w/v
％ポリエチレングリコ−ル4000を含有した0.4 Ｍトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ
／分、送風温度26〜32℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリ
ット回転板の回転速度300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥
ケ−スの内部圧力は-100ｍｍＨ2 Ｏの条件で行った。ス
プレ−後、引き続き脱水乾燥を2 分間行った。 酵素標
識抗体をコ−トした担体に隔膜層を形成させるためにゼ
ラチン溶液のスプレ−コ−トした。この操作は20w/v ％
ゼラチン含有0.1 Ｍトリス塩酸緩衝液 （ｐＨ8.0 ）21
ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分、送風温度26〜32℃、
送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度300
ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-100ｍ
ｍＨ2 Ｏの条件で行った。スプレ−後、引き続き脱水乾
燥を3 分間行った。
ファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体を含有した
ゼラチン溶液をスプレ−コ−トした。この操作は、波長
280ｎｍにおける吸光度が0.1 に相当する濃度のアルカ
リフォスファタ−ゼ標識抗ＴＳＨモノクロ−ナル抗体及
び0.1 Ｍの塩化マグネシウム、8w/v％ゼラチン、2.5w/v
％ポリエチレングリコ−ル4000を含有した0.4 Ｍトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ8.0）15ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ
／分、送風温度26〜32℃、送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリ
ット回転板の回転速度300 ｒｐｍ、排気による造粒乾燥
ケ−スの内部圧力は-100ｍｍＨ2 Ｏの条件で行った。ス
プレ−後、引き続き脱水乾燥を2 分間行った。 酵素標
識抗体をコ−トした担体に隔膜層を形成させるためにゼ
ラチン溶液のスプレ−コ−トした。この操作は20w/v ％
ゼラチン含有0.1 Ｍトリス塩酸緩衝液 （ｐＨ8.0 ）21
ｍｌをスプレ−速度0.5 ｍｌ／分、送風温度26〜32℃、
送風速度0.5 ｍ3 ／分、スリット回転板の回転速度300
ｒｐｍ、排気による造粒乾燥ケ−スの内部圧力は-100ｍ
ｍＨ2 Ｏの条件で行った。スプレ−後、引き続き脱水乾
燥を3 分間行った。
【００６０】隔膜層を形成させた担体に無機塩成分とし
ての塩化ナトリウム微粉末（平均粒子径約45ミクロン）
を粉体コ−トした。この操作はバインダ−として20w/v
％ゼラチン含有0.1 Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）を
スプレ−速度3.6 ｍｌ／分で上記担体ビ−ズにスプレ−
しながら、塩化ナトリウム微粉末13ｇを約5 分間かけて
逐次添加しながら行った。造粒乾燥装置の条件は上記隔
膜層形成時と同様であった。
ての塩化ナトリウム微粉末（平均粒子径約45ミクロン）
を粉体コ−トした。この操作はバインダ−として20w/v
％ゼラチン含有0.1 Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）を
スプレ−速度3.6 ｍｌ／分で上記担体ビ−ズにスプレ−
しながら、塩化ナトリウム微粉末13ｇを約5 分間かけて
逐次添加しながら行った。造粒乾燥装置の条件は上記隔
膜層形成時と同様であった。
【００６１】実施例 ４ 実施例３のようにして製造した担体を１２個ずつ、直径
10ｍｍ、高さ20ｍｍのポリプロピレン製カップに入れ、
乾燥空気中でシ−ルすることにより密閉し、実施例２と
同様にそれぞれ4 ℃と40℃の温度で7 日間保存した。
10ｍｍ、高さ20ｍｍのポリプロピレン製カップに入れ、
乾燥空気中でシ−ルすることにより密閉し、実施例２と
同様にそれぞれ4 ℃と40℃の温度で7 日間保存した。
【００６２】結果を表２に示す。その結果、40℃、7 日
間保存した後でもバックグランドの増加がなく、保存安
定性に優れていることが分かる。
間保存した後でもバックグランドの増加がなく、保存安
定性に優れていることが分かる。
【００６３】
【表２】
【図１】図１は実施例１で製造した本発明の担体を用い
てＴＳＨの酵素免疫測定を行った時の、ＴＳＨ濃度とレ
−ト（４ＭＵの生成速度）の関係を示した図である。
てＴＳＨの酵素免疫測定を行った時の、ＴＳＨ濃度とレ
−ト（４ＭＵの生成速度）の関係を示した図である。
Claims (18)
- 【請求項１】一種又は二種以上の免疫活性物質及び／又
は免疫反応に関与する成分を保護成分の共存下、担体上
に単層又は多層被覆し、脱水乾燥したことを特徴する免
疫反応試薬。 - 【請求項２】免疫活性物質が抗原又は抗体である請求項
１の免疫反応試薬。 - 【請求項３】免疫活性物質が検出可能な物質により標識
された抗原又は抗体である請求項１の免疫反応試薬。 - 【請求項４】検出可能な物質が酵素、蛍光物質又は発光
物質である、請求項３の免疫反応試薬。 - 【請求項５】保護成分が水溶性ゼラチンであることを特
徴とする請求項１の免疫反応試薬。 - 【請求項６】担体が、ポリエチレン、ポリプロピレン、
エチレン−酢酸ビニル共重合体、ナイロン、ポリスチレ
ン、スチレン−ブタジエン共重合体、ポリ塩化ビニル又
はこれらを主成分とする共重合体からなるポリマー粒子
であることを特徴とする請求項１の免疫反応試薬。 - 【請求項７】担体が、磁性物質を含有する担体であるこ
とを特徴とする請求項１の免疫反応試薬。 - 【請求項８】一種以上の免疫活性物質を化学的又は物理
的に担持する担体上に、更に他の免疫活性物質及び／又
は免疫反応に関与する成分が被覆されていることを特徴
とする請求項１の免疫反応試薬。 - 【請求項９】一種又は二種以上の免疫活性物質及び／又
は免疫反応に関与する成分を含有するマトリクスを担体
上に単層又は多層被覆し、脱水乾燥することを特徴する
免疫反応試薬の製造法。 - 【請求項１０】免疫活性物質として抗原又は抗体を使用
する請求項９の免疫反応試薬の製造方法。 - 【請求項１１】免疫活性物質として検出可能な物質によ
り標識された抗原又は抗体を使用する請求項９の免疫反
応試薬の製造方法。 - 【請求項１２】保護成分として水溶性ゼラチンを使用す
る請求項９の免疫反応試薬の製造方法。 - 【請求項１３】担体として、ポリエチレン、ポリプロピ
レン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ナイロン、ポリ
スチレン、スチレン−ブタジエン共重合体、ポリ塩化ビ
ニル又はこれらを主成分とする共重合体からなるポリマ
−粒子を使用する請求項９の免疫反応試薬の製造方法。 - 【請求項１４】担体として磁性体を含有する担体を使用
する請求項９の免疫反応試薬の製造方法。 - 【請求項１５】一種以上の免疫活性物質を化学的又は物
理的に担持する担体上に、更に他の免疫活性物質及び／
又は免疫反応に関与する成分を被覆し、脱水乾燥するこ
とを特徴とする請求項９の免疫反応試薬の製造方法。 - 【請求項１６】造粒乾燥装置を用いて免疫活性物質を担
体上に単層又は多層被覆する請求項９の免疫反応試薬の
製造方法。 - 【請求項１７】造粒乾燥装置を用いて免疫活性物質を単
層又は多層被覆した担体を脱水乾燥する請求項９の免疫
反応試薬の製造方法。 - 【請求項１８】造粒乾燥装置が転流動装置であることを
特徴とする請求項１６又は１７の免疫反応試薬の製造方
法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11138096A JP3624543B2 (ja) | 1996-05-02 | 1996-05-02 | 免疫反応試薬及びその製造方法 |
| EP97302998A EP0805353A3 (en) | 1996-05-02 | 1997-05-01 | Immunoreaction agent and process for production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11138096A JP3624543B2 (ja) | 1996-05-02 | 1996-05-02 | 免疫反応試薬及びその製造方法 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09297138A true JPH09297138A (ja) | 1997-11-18 |
| JP3624543B2 JP3624543B2 (ja) | 2005-03-02 |
Family
ID=14559723
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11138096A Expired - Fee Related JP3624543B2 (ja) | 1996-05-02 | 1996-05-02 | 免疫反応試薬及びその製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0805353A3 (ja) |
| JP (1) | JP3624543B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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