JPH09294596A - 光合成藻類によるフィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法 - Google Patents
光合成藻類によるフィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法Info
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Abstract
蛋白質および/または脂肪酸の生産量を増加させる。 【解決手段】 藍藻類、紅藻類、クリプト藻類を培養す
る際、磁場中で光照射する。
Description
ィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法に関す
る。
される青色蛋白質であるフィコシアニンのようなフィコ
ビリ蛋白質、あるいはコレステロール上昇抑制やアトピ
ー性皮膚炎の治療に有効であるプログラスタンジン前駆
体であるγ−リノレン酸に代表される脂肪酸などの有用
物質生産の方法として藻類を培養して抽出することが行
われている。また、クロレラやスピルリナなど一部の藻
類では菌体そのものを健康食品として食しており、市販
もされている。これらは、通常液体培養液中で自然光下
で培養されているが、光合成経路に着目して直接または
間接的に光合成に関与する有用物質生産の加速を試みた
例はない。
は、多数の研究例が報告されているが、明確な作用はわ
かっていない。例えばTrichomonas vaginalsに対する殺
菌作用、マウスの癌の抑制作用があり、特に骨折の治療
促進では実際に臨床において重要な役割を果たしてい
る。
の種類によって成長を促進したり、抑制したりすること
が知られている。例えば、特開平6−121668号公
報には、磁場中で微細生物を培養する方法が開示されて
おり、磁場の印加により枯草菌によるサーファクチンの
生産効率が向上すること、および大腸菌の増殖が加速さ
れることが示されている。また、菌類であるS. cerevis
iae に対する500G〜1000G の磁場では生育促進
効果が得られ、それ以上の強い磁場では抑制効果がある
ことも報告されている[高橋不二雄「磁気と生物 分子
レベルからのアプローチ」(学会出版センター)]。
以下の磁場において生育がやや促進され、580G では
抑制されている[高橋不二雄、亀崎紀行、発酵工学、vo
l. 63, No. 1,71-74(1985)]。Dunaliella salina の生
育はFe−EDTAを添加した培地において100G の
磁場印加によって増加し、β−カロチン蓄積量も増加す
る傾向があることが報告されている[Y. Yamaoka, O. T
akimura, et al., "Research in photosynthesis" Vol.
III. 87-90(1992) ]。これは蛋白質の磁気異方性、チ
ラコイド膜などの生体膜内中における蛋白質の磁場配向
性あるいはクロロフィルの磁気異方性によるものと言わ
れているが、正確なメカニズムは未だに不明である。
の生産を促進する試みが種々なされているが、前記した
フィコビリ蛋白質や脂肪酸の生産を促進した例はない。
また、磁場印加により藻類自体の生育を行った例はある
が、それから得られる有用物質の生産に磁場を利用した
例はない。
剤等として使用されるフィコシアニン等のフィコビリ蛋
白質やプログラスタンジン前駆体であるγ−リノレン酸
に代表される脂肪酸の生産を促進することができる光合
成藻類によるフィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の
生産方法を提供することである。
(1)〜(7)の特定事項によって達成される。 (1)藍藻類、紅藻類およびクリプト藻類のなかから選
択される光合成藻類を、磁場中で光照射して培養し、フ
ィコビリ蛋白質および/または脂肪酸を生産させる光合
成藻類によるフィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の
生産方法。 (2)前記光合成藻類が藍藻類のスピルリナ(Spirulin
a) である上記(1)の光合成藻類によるフィコビリ蛋
白質および/または脂肪酸の生産方法。 (3)前記光照射と前記磁場の印加を同期させる上記
(1)または(2)の光合成藻類によるフィコビリ蛋白
質および/または脂肪酸の生産方法。 (4)前記光の照度が800〜8000lux である上記
(1)〜(3)のいずれかの光合成藻類によるフィコビ
リ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法。 (5)5〜400G の磁場を印加する上記(1)〜
(4)のいずれかの光合成藻類によるフィコビリ蛋白質
および/または脂肪酸の生産方法。 (6)前記フィコビリ蛋白質がフィコシアニンである上
記(1)〜(5)のいずれかの光合成藻類によるフィコ
ビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法。 (7)前記脂肪酸がγ−リノレン酸である上記(1)〜
(6)のいずれかの光合成藻類によるフィコビリ蛋白質
および/または脂肪酸の生産方法。
て詳細に説明する。
類である藍藻類、紅藻類、クリプト藻類を培養する。こ
れにより、これらの光合成藻類によって生産されるフィ
コビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産量が向上す
る。
ィコシアニン等のフィコビリ蛋白質はクロロプラスト内
のチラコイド膜上にあり、光を受けてそのエネルギーを
クロロフィルaに伝える働きがある。このチラコイド膜
は脂肪酸、特に多不飽和脂肪酸を多く含み、きわめて流
動性に富んでいる。したがって磁場により配向性が影響
を受け、フィコシアニン等のフィコビリ蛋白質および/
または脂肪酸の含有量が増加すると考えられる。そし
て、この結果、光の利用効率が増加するために生育量が
増し、光合成活性が増すと考えられる。
藍藻類、紅藻類、クリプト藻類が挙げられ、これらの藻
類はフィコシアニン、フィコエリトリンのようなフィコ
ビリ蛋白質および/または脂肪酸を含む。
特にスピルリナ プラテンシス(Spirulina platensis)
、アナベナ(Anabena) 、ノストック(Nostoc)、フィル
ミディウム(Phormidium)、トリポセリックス(Tolypothe
rix)、ユレモ(Oscillatoria)、ジュズモ(Chaetomorpha)
等がある。
リフィリジウム(Porphyridium)、ツノマタ(Chondrus)、
アサクサノリ(Porphyra tenera) 、テングサ(Celidium)
等がある。
好ましい。このものは、もともとフィコビリ蛋白質であ
るフィコシアニンの含有量が多く、通常の光合成条件下
で、乾燥重量で1g 中100mg程度含有する。このほ
か、藍藻類のアナベナで50mg程度、ノストックで60
mg程度であり、紅藻類のコラリナで1mg程度である。紅
藻類は紅色の色素蛋白質であるフィコエリトリンを主と
して含む。
白質を0〜220mg/gを含み、フィコシアニンの含有量
は0〜200mg/g、フィコエリトリンの含有量は0〜1
00mg/gである。
飽和脂肪酸であり、具体的にはパルミチン酸、パルミト
レン酸、ステアリン酸、オレイン酸(シスおよびトラン
ス)、リノール酸、γ−リノレイン酸等が挙げられる。
であり、このなかでγ−リノレインの含有量は0〜15
mg/g程度である。
照射を磁場中で行う。この場合光照射と同時に磁場を印
加することが好ましく、光照射と磁場の印加は同期させ
ることが特に好ましい。ただし、必ずしも光照射の時期
と磁場の印加の時期とは一致させる必要がなく、光照射
の一時期に磁場を印加してもよいが、少なくとも光照射
の時期の60%以上は磁場を印加することが好ましい。
磁場の印加を光照射の一時期にて行う場合は、連続的で
あっても間欠的であってもよい。一時期にて磁場を印加
する場合は光照射の初期である方が好ましい。
には5〜700G 、よりさらには5〜600G 、特には
5〜400G であることが好ましい。このような磁場を
印加することによって、フィコビリ蛋白質および/また
は脂肪酸の生産量が増加する。これに対し、磁場の強度
が小さくなると、本発明の実効が得られず、磁場の強度
が大きくなっても効果が飽和してしまう傾向にあり、フ
ィコビリ蛋白質、脂肪酸ともに生産量の増加が望めなく
なってしまい、特にフィコシアニン等のフィコビリ蛋白
質の生産量は逆に低下しやすくなる。
れるフィコシアニンやγ−リノレン酸の生産量を増すこ
とを目的とする場合は、5〜400G であることが好ま
しい。
あっても変化させてもよいが、通常は一定である。
ルトあるいはネオジ−鉄−ボロンなどの希土類磁石など
の永久磁石、あるいは電磁石による静磁場でもよく、電
磁石による交番磁場でもよい。
一般的であるので、静磁場を用いたとしても個々の細胞
には交番磁場が印加されているものと考えられる。
行えるような条件であれば特に制限されないが、光合成
を促進するためには600〜700nmの波長領域の光を
用いることが好ましい。具体的には蛍光灯、タングステ
ンランプなど通常の光源でよく、660nm前後の発振波
長を有する発光ダイオード(LED)を光源としても効
果的である。
件にもよるが、800〜8000lux であることが好ま
しく、さらには800〜5000lux であることが好ま
しい。
蛋白質および脂肪酸の生産量が増加しやすい。これに対
し照度が低くなると光合成の進行が阻害されやすく、照
度が高くなると光合成の進行が促進されすぎて磁場の有
効利用が図れなくなってしまう。
照射することが好ましいので、上述のような光源を用い
て光照射することが好ましいが、場合によっては太陽
光、特に昼光を用いてもよい。ただし、太陽光は光合成
を抑制するような波長の光を含むこと、一定照度等の光
照射条件の制御が困難であることなどを考えると、その
使用はあまり望ましくない。
によって行えばよく、少なくとも一部分に磁場の印加を
可能にした公知の培養装置を用いて行えばよい。このよ
うな培養装置は、例えば、西澤一俊、千原光雄「藻類研
究法」共立出版(1992)、山口勝己「微細藻類の利
用」日本水産学会(1992)等に記載されている。
て、スピルリナの場合には、一般的にフィコビリ蛋白質
の生産量は10〜80%増加し、その含有量は乾燥重量
1g 当たり110〜180mgとなる。また、脂肪酸はそ
の組成に変化はないが、その生産量は全体で5〜50%
増加し、その含有量は48〜70mg/gとなる。
スピルリナの場合、フィコシアニンの生産量は40〜8
0%増加し、その含有量は140〜180mg/gとなる。
またγ−リノレイン酸の生産量は10〜50%増加し、
その含有量は50〜70mg/gとなる。
藻類を破砕後、通常の方法によって抽出すればよい。し
たがって既存の設備等をそのまま利用できるので、新た
な設備等を必要としない。このような抽出方法等につい
ては、西澤一俊、千原光雄「藻類研究法」共立出版(1
992)等に記載されている。
する。
分子細胞生物学研究所から供与)5mg(湿重量)を使用
し、30mm径200mm長さの試験管中、温度24±2
度、蛍光灯により照度1200±100lux の光照射下
で、480時間通気培養を行った。培養液は表1に示す
組成のSOT培地を用いた。永久磁石は縦15cm、横3
cm、厚さ1cmの大きさで、試験管の両側からN極とS極
を向かい合わせて装着した。試験管側面にて100G 、
350G 、400G および700Gになるように設置し
た。
を行った。
濁度(OD750 )を分光光度計(島津製作所製 SHIMAD
ZU UV-2100)で測定し、次式に従って培地1リットル当
たりの藻体の乾燥重量を求めた。
750 ×0.65
示す。
け5〜400G の磁場を印加することによって藻体の生
育量が磁場を印加しない場合に比べて促進されることが
わかる。
てフィコシアニン、クロロフィルa、β−カロチンを、
以下のようにして定量し、さらに光合成活性を評価し
た。
(90μm )を用いて集菌し、水洗後、凍結乾燥した。
この乾燥試料を約5mg精秤し、0.01Mリン酸緩衝液
(pH7.0)を5ml加え、冷暗所にて2時間放置後超音
波処理(28kHz)を施した。さらに、硫安を20%の
飽和溶液になるように加え、冷暗所にて2時間放置し
た。得られた抽出液を遠心分離(4000rpm 、10分
間)し、上澄み液を分光光度計を用いて650nm、62
0nm、565nmの吸光度A650 、A62 0 、A565 から、
次式(西澤一俊、千原光雄「藻類研究法」共立出版(1
992))を用いて乾燥試料1g 中のフィコシアニン含
有量を求めた。 フィコシアニン(mg/g)=0.198A620 −0.133A650 −0.00
19A565
ール5mlを加えて、超音波処理(28kHz )をした後、
暗所に30〜40分間放置して十分に抽出させた。抽出
液を遠心分離して上澄み液を分光光度計により665nm
の吸光度A665を測定した。次式を用いて乾燥試料1g
中のクロロフィルaの含有量を求めた。
を標準物質として検量線を作成した。すなわち、上記β
−カロチン100mgを精秤し、クロロホルムに溶解して
0.01%溶液を調製した。この溶液を0.5ml、1m
l、2ml、4ml採取し、それぞれ蒸発乾固させた後、ア
セトンを加えて精確に5mlとした。念の為シリンジフィ
ルタ(0.45μm 径)を通した後、高速液体クロマト
グラフィー(HPLC)を用いて定量した。作成した検
量線を図2に示す。高速液体クロマトグラフィーの条件
を以下に示す。
ノール,カラム温度:60℃,流速:1.5ml/min ,検知
器:JASCO UV-970(測定波長450nm)
加えて超音波処理(28kHz )した後、冷暗所にて十分
抽出させた。これを遠心分離した後、上澄み液を高速液
体クロマトグラフィーを用いて測定を行い、保持時間か
らβ−カロチンを同定し、また上記で得た検量線を用い
て定量した。乾燥試料1g 当たりのβ−カロチン含有量
を次式により求めた。
1.03×105 )/(7.703 ×104 )
量と同様に、特に400G 以下、とりわけ5〜400G
の磁場を印加することにより、磁場を印加しない場合に
比べ、増加することがわかる。これに対してクロロフィ
ルaおよびβ−カロチンの量はほとんど変化しない。
を用いて測定した。すなわち、生育定常期における細胞
懸濁液をクロロフィルa量が5μg/ml程度になるように
SOT培地で希釈し、約6mlを電解室内に入れた。印加
電圧0.6V(参照電極 Ag・AgCl)、光照度10000
lux 、25.0℃において攪拌しながら4分間測定を行
った。なお、酸素発生量は印加磁場0を100%とした
相対%の酸素発生比で示した。
(図1)およびフィコシアニン量(図3)と同様の傾向
を示し、特に400G 以下、とりわけ5〜400G の磁
場を印加することによって光合成活性が高まっているこ
とがわかる。
った。
ンタデカン酸500μg を添加した。5%塩酸−メタノ
ールによりメチルエステル化させ、n−ヘキサンで抽出
後、ガスクロマトグラフィー(SHIMADZU GC-14B島津製作
所)を用いて脂肪酸分析を行った。カラムはOV−17
(0.252mm径、30m 高さ)を使用し、インジェク
ション温度200℃、カラム温度は昇温速度5℃/minで
150℃から250℃までとした。内標準物質との保持
時間とピーク面積比から脂肪酸の定性および定量を行っ
た。
酸、ステアリン酸、cis −オレイン酸、trans −オレイ
ン酸、リノール酸、γ−リノレイン酸が検出された。こ
れらの脂肪酸の組成と印加磁場の強度との関係を図5に
示す。また、脂肪酸の総量と印加磁場の強度との関係を
図6に示す。なお、図5において、脂肪酸は総炭素数と
二重結合数とで表示し、cis はciとtrans はtrとして表
示する。
り、脂肪酸の組成に変化はみられなかったが、脂肪酸の
総量は増加することがわかる。特に400G 以下、とり
わけ5〜400G の磁場の印加で脂肪酸の総量が増加す
ることがわかる。
00G と350G で増加することから脂肪酸の総量と同
様の傾向にあることがわかる。
をこれに合わせたほかは実施例1と同様にして培養およ
び分析を行った。この結果、実施例1と同様の傾向を示
すことがわかった。
合わせたほかは実施例1と同様にして培養を行い、分析
したところ、実施例1と同様の傾向を示すことがわかっ
た。
くは光照射と同時に、特に5〜400G の比較的弱い磁
場中で培養するだけで、光合成過程に直接または間接に
関与するフィコビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産
量を増加させることができる。しかも分離精製において
従来と同様の方法が適用できるために新たな設備等は必
要としないことから、これら有用物質の生産コストを低
下させることができる。
である。
ロチン量と磁場の関係を示すグラフである。
を示すグラフである。
ある。
ある。
Claims (7)
- 【請求項1】 藍藻類、紅藻類およびクリプト藻類のな
かから選択される光合成藻類を、磁場中で光照射して培
養し、フィコビリ蛋白質および/または脂肪酸を生産さ
せる光合成藻類によるフィコビリ蛋白質および/または
脂肪酸の生産方法。 - 【請求項2】 前記光合成藻類が藍藻類のスピルリナ(S
pirulina) である請求項1の光合成藻類によるフィコビ
リ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法。 - 【請求項3】 前記光照射と前記磁場の印加を同期させ
る請求項1または2の光合成藻類によるフィコビリ蛋白
質および/または脂肪酸の生産方法。 - 【請求項4】 前記光の照度が800〜8000lux で
ある請求項1〜3のいずれかの光合成藻類によるフィコ
ビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法。 - 【請求項5】 5〜400G の磁場を印加する請求項1
〜4のいずれかの光合成藻類によるフィコビリ蛋白質お
よび/または脂肪酸の生産方法。 - 【請求項6】 前記フィコビリ蛋白質がフィコシアニン
である請求項1〜5のいずれかの光合成藻類によるフィ
コビリ蛋白質および/または脂肪酸の生産方法。 - 【請求項7】 前記脂肪酸がγ−リノレン酸である請求
項1〜6のいずれかの光合成藻類によるフィコビリ蛋白
質および/または脂肪酸の生産方法。
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- 1996-05-02 JP JP13573896A patent/JP3775855B2/ja not_active Expired - Fee Related
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