JPH09274036A - 糖尿病性腎症および糸球体腎炎の早期診断用キット - Google Patents
糖尿病性腎症および糸球体腎炎の早期診断用キットInfo
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- JPH09274036A JPH09274036A JP11037596A JP11037596A JPH09274036A JP H09274036 A JPH09274036 A JP H09274036A JP 11037596 A JP11037596 A JP 11037596A JP 11037596 A JP11037596 A JP 11037596A JP H09274036 A JPH09274036 A JP H09274036A
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- glomerulus
- stage
- protein
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 糖尿病性腎症やその他の糸球体腎炎の早期診
断を可能にする診断用キットを提供する。 【解決手段】 尿中のラクトフェリン(Lf)とミエロペル
オキシダーゼ(MPO) 、およびフィブロネクチン(FN)を測
定対象にする。
断を可能にする診断用キットを提供する。 【解決手段】 尿中のラクトフェリン(Lf)とミエロペル
オキシダーゼ(MPO) 、およびフィブロネクチン(FN)を測
定対象にする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、糖尿病性腎症お
よび糸球体腎炎の早期診断法に関し、特に尿中のラクト
フェリン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネク
チンを測定対象として、該項目を複合測定することによ
って、糸球体に白血球が浸潤することにより発症する糖
尿病性腎症および糸球体腎炎を早期に診断するキットに
関する。
よび糸球体腎炎の早期診断法に関し、特に尿中のラクト
フェリン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネク
チンを測定対象として、該項目を複合測定することによ
って、糸球体に白血球が浸潤することにより発症する糖
尿病性腎症および糸球体腎炎を早期に診断するキットに
関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、糖尿病性腎症は、糖尿病患者に持
続性蛋白尿（試験紙法で陽性あるいは500mg/日以上の蛋
白尿が持続）が出現した時点で診断されていた。しか
し、この時期には既に非可逆性の糸球体病変が進行して
いることも知られていた。また、このことは、その他の
原因による糸球体腎炎の診断についても同様である。近
年、尿中に微量に排泄される種々の蛋白の測定が可能と
なり、特に尿中アルブミンやトランスフェリン排泄量の
増加すなわち、微量アルブミンや微量トランスフェリン
尿が持続性蛋白尿に先行することが明らかとなった。そ
こで現時点では、微量アルブミンやトランスフェリン尿
の出現をもって腎症を診断することが一般化している。
続性蛋白尿（試験紙法で陽性あるいは500mg/日以上の蛋
白尿が持続）が出現した時点で診断されていた。しか
し、この時期には既に非可逆性の糸球体病変が進行して
いることも知られていた。また、このことは、その他の
原因による糸球体腎炎の診断についても同様である。近
年、尿中に微量に排泄される種々の蛋白の測定が可能と
なり、特に尿中アルブミンやトランスフェリン排泄量の
増加すなわち、微量アルブミンや微量トランスフェリン
尿が持続性蛋白尿に先行することが明らかとなった。そ
こで現時点では、微量アルブミンやトランスフェリン尿
の出現をもって腎症を診断することが一般化している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】糖尿病性腎症およびそ
れ以外の腎症の病期分類としては、第１期（腎症前
期）、第２期（早期腎症期）、第３期（顕性腎症期）、
第４期（腎不全期）、第５期（透析療法期）が一般的で
ある。微量アルブミンやトランスフェリン尿を呈する時
期を早期腎症期とよんでおり、病理学的には、この時期
には既に軽度から中等度のびらん性病変が存在し、結節
性病変の存在も知られている。したがって、必ずしも初
期腎症とは限らず、あくまで現在の臨床検査で診断可能
な時期と解されている。今後、微量アルブミンやトラン
スフェリン尿より早期（第１期のステージ）に生ずる異
常を検出し得る検査法の開発が期待されている。しか
し、最大の問題点は糖尿病性腎症およびその他の糸球体
腎炎の早期病変期において微量アルブミンやトランスフ
ェリン尿の発生機序が未だ明らかになっていない。した
がって、微量アルブミンやトランスフェリン尿より早期
に生ずる異常が何であるかが不明な点にある。この発明
は、この最大の問題点に着目してなされたものであっ
て、上述の従来の方法に変わる新しい検査方法によっ
て、糖尿病性腎症およびその他の糸球体腎炎を早期に診
断する方法およびその診断キットを提供することを目的
とする。
れ以外の腎症の病期分類としては、第１期（腎症前
期）、第２期（早期腎症期）、第３期（顕性腎症期）、
第４期（腎不全期）、第５期（透析療法期）が一般的で
ある。微量アルブミンやトランスフェリン尿を呈する時
期を早期腎症期とよんでおり、病理学的には、この時期
には既に軽度から中等度のびらん性病変が存在し、結節
性病変の存在も知られている。したがって、必ずしも初
期腎症とは限らず、あくまで現在の臨床検査で診断可能
な時期と解されている。今後、微量アルブミンやトラン
スフェリン尿より早期（第１期のステージ）に生ずる異
常を検出し得る検査法の開発が期待されている。しか
し、最大の問題点は糖尿病性腎症およびその他の糸球体
腎炎の早期病変期において微量アルブミンやトランスフ
ェリン尿の発生機序が未だ明らかになっていない。した
がって、微量アルブミンやトランスフェリン尿より早期
に生ずる異常が何であるかが不明な点にある。この発明
は、この最大の問題点に着目してなされたものであっ
て、上述の従来の方法に変わる新しい検査方法によっ
て、糖尿病性腎症およびその他の糸球体腎炎を早期に診
断する方法およびその診断キットを提供することを目的
とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
め、本発明では、尿中の白血球の顆粒内蛋白成分、およ
び糸球体基底膜を構成する細胞外マトリックス成分を測
定対象としている。より具体的には、尿中のラクトフェ
リン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネクチン
を測定して、糖尿病性腎症および他の糸球体腎炎の早期
診断と早期治療を可能にしている。以下、本発明に至る
経緯も含めて詳細に説明する。
め、本発明では、尿中の白血球の顆粒内蛋白成分、およ
び糸球体基底膜を構成する細胞外マトリックス成分を測
定対象としている。より具体的には、尿中のラクトフェ
リン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネクチン
を測定して、糖尿病性腎症および他の糸球体腎炎の早期
診断と早期治療を可能にしている。以下、本発明に至る
経緯も含めて詳細に説明する。
【０００５】本発明者は、糖尿病性腎症をはじめ他の糸
球体腎炎において、糸球体に白血球（特に好中球）が浸
潤することが蛋白尿発現の出発点になることを発見し、
糸球体に好中球が浸潤したことを察知する方法として、
尿中のラクトフェリンとミエロペルオキシダーゼを測定
することを既に出願している（特願平7-251939）。更な
る研究の結果、本発明者は、糸球体への好中球の浸潤を
検知することが糸球体腎炎の早期診断に有用であると認
識するとと共に、蛋白尿発現の機序として、糸球体に浸
潤した好中球が産生する活性酸素や種々の蛋白分解酵素
が糸球体の基底膜を破壊することによって、蛋白尿が発
生することを見いだした。
球体腎炎において、糸球体に白血球（特に好中球）が浸
潤することが蛋白尿発現の出発点になることを発見し、
糸球体に好中球が浸潤したことを察知する方法として、
尿中のラクトフェリンとミエロペルオキシダーゼを測定
することを既に出願している（特願平7-251939）。更な
る研究の結果、本発明者は、糸球体への好中球の浸潤を
検知することが糸球体腎炎の早期診断に有用であると認
識するとと共に、蛋白尿発現の機序として、糸球体に浸
潤した好中球が産生する活性酸素や種々の蛋白分解酵素
が糸球体の基底膜を破壊することによって、蛋白尿が発
生することを見いだした。
【０００６】糸球体基底膜の超微構造をみると、基底膜
は規則的な六角形の構造をもつ細繊維よりなる網目構造
を呈している。網目の長径はアルブミンの短径４nmより
やや小さい３nmであり、その構成成分はIV型コラーゲン
を主体とするコラーゲン成分、ラミニン、フィブロネク
チン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンであり、これらが
結合して高分子となっている。また、この基底膜は外透
明層、緻密層、内透明層の３層構造からなり、ラミニ
ン、フィブロネクチン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン
は内、外透明層に多く存在することが知られ、このため
に内、外透明層は負に荷電している。この糸球体基底膜
は、糸球体毛細血管壁のたんなる構成成分であるばかり
でなく、糸球体の透過性制御に重要な役割を果たしてい
る。血漿中の物質はその分子の特性により透過性が決定
づけられているが、なかでもその物質の分子量(size)と
荷電(charge)が重要な因子である。糸球体では、血漿中
の水、電解質のほか低分子物質は濾過されるが、アルブ
ミン分子より分子量の大きな物質は濾過されず、糸球体
毛細血管壁が血漿中の物質を分子量の違いにより、ふる
い分けていることになる(size barrier)。このsize bar
rier構造は、糸球体毛細血管壁のうち基底膜のIV型コラ
ーゲンを中心とする三次元的網目構造によるものと考え
られている。陰性荷電物質は陽性荷電物質に比べ濾過さ
れにくいことが知られている(charge barrier)。これ
は、糸球体基底膜に強力な陰性荷電物質であるヘパラン
硫酸プロテオグリカンの存在によるところが大きいと考
えられている。
は規則的な六角形の構造をもつ細繊維よりなる網目構造
を呈している。網目の長径はアルブミンの短径４nmより
やや小さい３nmであり、その構成成分はIV型コラーゲン
を主体とするコラーゲン成分、ラミニン、フィブロネク
チン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンであり、これらが
結合して高分子となっている。また、この基底膜は外透
明層、緻密層、内透明層の３層構造からなり、ラミニ
ン、フィブロネクチン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン
は内、外透明層に多く存在することが知られ、このため
に内、外透明層は負に荷電している。この糸球体基底膜
は、糸球体毛細血管壁のたんなる構成成分であるばかり
でなく、糸球体の透過性制御に重要な役割を果たしてい
る。血漿中の物質はその分子の特性により透過性が決定
づけられているが、なかでもその物質の分子量(size)と
荷電(charge)が重要な因子である。糸球体では、血漿中
の水、電解質のほか低分子物質は濾過されるが、アルブ
ミン分子より分子量の大きな物質は濾過されず、糸球体
毛細血管壁が血漿中の物質を分子量の違いにより、ふる
い分けていることになる(size barrier)。このsize bar
rier構造は、糸球体毛細血管壁のうち基底膜のIV型コラ
ーゲンを中心とする三次元的網目構造によるものと考え
られている。陰性荷電物質は陽性荷電物質に比べ濾過さ
れにくいことが知られている(charge barrier)。これ
は、糸球体基底膜に強力な陰性荷電物質であるヘパラン
硫酸プロテオグリカンの存在によるところが大きいと考
えられている。
【０００７】糸球体腎炎での蛋白尿は、上述の糸球体基
底膜の透過性制御機構の破綻が関与していると考えられ
る。そこで本発明では、糸球体基底膜の破綻の原因とな
る好中球の糸球体へ浸潤状態の把握（マーカーとしてラ
クトフェリン）とこの好中球が基底膜を破壊した結果と
して尿中に排泄される基底膜構成成分の一つであるフィ
ブロネクチンを測定することにより、尿中へまだ蛋白の
出現を見ない段階から蛋白発現に至るまでの過程を詳細
に検知することが可能となった。図１に浸潤好中球の指
標となる尿中のラクトフェリン濃度と糸球体基底損傷度
の指標である尿中フィブロネクチン濃度の関係を示す。
さらに図２に対照群（試験紙法で蛋白定性陰性、好中球
の浸潤を認めない群）との比較において、糸球体に好中
球の浸潤を認める群（試験紙法による蛋白定性試験陰
性）での糸球体基底膜損傷度と蛋白尿出現の関係を示
す。糸球体に好中球の浸潤が認められ、かつ基底膜の損
傷を伴っているにもかかわらず、尿中への蛋白排泄量は
対照群と比べて有意な増加を示さないステージが認めら
れる。この現象は基底膜損傷時に基底膜から遊離したフ
ィブロネクチン他の細胞外マトリックス成分により濾過
膜（基底膜）が一過性に目づまりを起こしていることを
示している。したがって、従来法の微量アルブミンやト
ランスフェリンを測定する検査法にとっては不利な状況
になっている。このステージの後、基底膜の破壊は急速
に進行し尿中蛋白量は急増する。以上説明したように、
尿中のラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼおよび
フィブロネクチンを測定すれば、糖尿病性腎症および他
の糸球体腎炎の早期診断が可能になり、早期治療にむす
びつく。
底膜の透過性制御機構の破綻が関与していると考えられ
る。そこで本発明では、糸球体基底膜の破綻の原因とな
る好中球の糸球体へ浸潤状態の把握（マーカーとしてラ
クトフェリン）とこの好中球が基底膜を破壊した結果と
して尿中に排泄される基底膜構成成分の一つであるフィ
ブロネクチンを測定することにより、尿中へまだ蛋白の
出現を見ない段階から蛋白発現に至るまでの過程を詳細
に検知することが可能となった。図１に浸潤好中球の指
標となる尿中のラクトフェリン濃度と糸球体基底損傷度
の指標である尿中フィブロネクチン濃度の関係を示す。
さらに図２に対照群（試験紙法で蛋白定性陰性、好中球
の浸潤を認めない群）との比較において、糸球体に好中
球の浸潤を認める群（試験紙法による蛋白定性試験陰
性）での糸球体基底膜損傷度と蛋白尿出現の関係を示
す。糸球体に好中球の浸潤が認められ、かつ基底膜の損
傷を伴っているにもかかわらず、尿中への蛋白排泄量は
対照群と比べて有意な増加を示さないステージが認めら
れる。この現象は基底膜損傷時に基底膜から遊離したフ
ィブロネクチン他の細胞外マトリックス成分により濾過
膜（基底膜）が一過性に目づまりを起こしていることを
示している。したがって、従来法の微量アルブミンやト
ランスフェリンを測定する検査法にとっては不利な状況
になっている。このステージの後、基底膜の破壊は急速
に進行し尿中蛋白量は急増する。以上説明したように、
尿中のラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼおよび
フィブロネクチンを測定すれば、糖尿病性腎症および他
の糸球体腎炎の早期診断が可能になり、早期治療にむす
びつく。
【０００８】
（Ａ）尿試料の作成 トリトンＸ−100 を 0.1％含む生理食塩水で２倍希釈し
た尿を試料とした。 （Ｂ）ELISA によるラクトフェリンの測定 （マイクロプレートへの抗体の固相化）マイクロプレー
ト(SUMILON) の各wellに抗ヒトラクトフェリン抗体(DAK
OPATTS)５μg/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を 100μl ず
つ分注し、一夜４℃放置して物理吸着させて表面に固相
化する。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法荷より、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim)を抗ヒト
ラクトフェリン抗体に酵素標識して調整する。 （尿中ラクトフェリン測定）各wellに 100μl の１％BS
A(Beehringer-Mannheim)を含むTris緩衝液(0.1mol/l pH
8.0)を分注し、次いで、50μl の尿試料を加え、混和し
た後、37℃で１時間反応させる。次に、Tween20 を0.05
％含む脱イオン水で３回洗浄する。その後、アルカリホ
スターゼ標識抗ヒトラクトフェリン抗体溶液（１％BSA
を含むトリス緩衝液) を各wellに 100μl ずつ加え混和
した後、37℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄す
る。さらに Kind-King法の基質緩衝液 100μl を各well
に加え、37℃で30分間反応させる。ここで基質緩衝液
は、Disodium Phenyl-phoshate(WAKO)0.09ｇを、炭酸緩
衝液(0.05mol/l pH10.15)100mlに溶解したものである。
次いで、 100μl の呈色液を各wellに加えて呈色させ
る。ここで呈色液は、200ml の脱イオン水 2.6ｇのホウ
酸(WAKO)を溶解させた後、0.38ｇのPotassium ferricya
nide(WAKO)を溶解させたものである。最後に、各wellの
呈色をマイクロプレート用比色計（三光純薬）を用いて
510/630nm の波長で比色し、検量線から尿中のラクトフ
ェリン濃度を算出する。
た尿を試料とした。 （Ｂ）ELISA によるラクトフェリンの測定 （マイクロプレートへの抗体の固相化）マイクロプレー
ト(SUMILON) の各wellに抗ヒトラクトフェリン抗体(DAK
OPATTS)５μg/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を 100μl ず
つ分注し、一夜４℃放置して物理吸着させて表面に固相
化する。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法荷より、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim)を抗ヒト
ラクトフェリン抗体に酵素標識して調整する。 （尿中ラクトフェリン測定）各wellに 100μl の１％BS
A(Beehringer-Mannheim)を含むTris緩衝液(0.1mol/l pH
8.0)を分注し、次いで、50μl の尿試料を加え、混和し
た後、37℃で１時間反応させる。次に、Tween20 を0.05
％含む脱イオン水で３回洗浄する。その後、アルカリホ
スターゼ標識抗ヒトラクトフェリン抗体溶液（１％BSA
を含むトリス緩衝液) を各wellに 100μl ずつ加え混和
した後、37℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄す
る。さらに Kind-King法の基質緩衝液 100μl を各well
に加え、37℃で30分間反応させる。ここで基質緩衝液
は、Disodium Phenyl-phoshate(WAKO)0.09ｇを、炭酸緩
衝液(0.05mol/l pH10.15)100mlに溶解したものである。
次いで、 100μl の呈色液を各wellに加えて呈色させ
る。ここで呈色液は、200ml の脱イオン水 2.6ｇのホウ
酸(WAKO)を溶解させた後、0.38ｇのPotassium ferricya
nide(WAKO)を溶解させたものである。最後に、各wellの
呈色をマイクロプレート用比色計（三光純薬）を用いて
510/630nm の波長で比色し、検量線から尿中のラクトフ
ェリン濃度を算出する。
【０００９】（Ｃ）ミエロペルオキシダーゼの測定 （マイクロプレートへの抗体の固相化）マイクロプレー
ト(SUMILON) の各wellに、抗ヒトミエロペルオキシダー
ゼ抗体(DAKOPATTS) ５μl/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を
100μl ずつ分注し、一夜４℃で放置して物理吸着させ
て表面に固相化する。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim)を抗ヒト
ミエロペルオキシダーゼ抗体に酵素標識して調整する。 （尿中ミエロペルオキシダーゼ測定）各wellに 100μl
の１％BSA を含むTris緩衝液を分注し、次いで50μl の
尿試料を加え、混和した後、37℃で１時間反応させる。
次に、Tween20 を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄す
る。その後、アカリホスファターゼ標識抗ヒトミエロペ
ルオキシダーゼ抗体溶液を各wellに 100μl ずつ加え混
和した後、37℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄
する。さらにKind-king 法の基質緩衝液 100μl を各we
llに加え、37℃で30分間反応させる。次いで、 100μl
の呈色液を各wellに加えて呈色させる。最後に、各well
の呈色をマイクロプレート用比色計を用いて510/630nm
の波長光で比色し、検量線から尿中のミエロペルオキシ
ダーゼ濃度を算出する。
ト(SUMILON) の各wellに、抗ヒトミエロペルオキシダー
ゼ抗体(DAKOPATTS) ５μl/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を
100μl ずつ分注し、一夜４℃で放置して物理吸着させ
て表面に固相化する。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ(Beehringer-Mannheim)を抗ヒト
ミエロペルオキシダーゼ抗体に酵素標識して調整する。 （尿中ミエロペルオキシダーゼ測定）各wellに 100μl
の１％BSA を含むTris緩衝液を分注し、次いで50μl の
尿試料を加え、混和した後、37℃で１時間反応させる。
次に、Tween20 を0.05％含む脱イオン水で３回洗浄す
る。その後、アカリホスファターゼ標識抗ヒトミエロペ
ルオキシダーゼ抗体溶液を各wellに 100μl ずつ加え混
和した後、37℃で１時間反応させ、先と同様に３回洗浄
する。さらにKind-king 法の基質緩衝液 100μl を各we
llに加え、37℃で30分間反応させる。次いで、 100μl
の呈色液を各wellに加えて呈色させる。最後に、各well
の呈色をマイクロプレート用比色計を用いて510/630nm
の波長光で比色し、検量線から尿中のミエロペルオキシ
ダーゼ濃度を算出する。
【００１０】（Ｄ）フィブロネクチンの測定 （マイクロプレートへの抗体の固相化）マイクロプレー
ト(SUMILON) の各wellに、抗ヒトフィブロネクチン抗体
（セロテック）５μl/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を 100
μl ずつ分注し、一夜４℃で放置させて表面に固相化す
る。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ（Ｂ−Ｍ社）を抗ヒトフィブロネ
クチン抗体(DAKOPATTS) に酵素標識して調整する。 （尿中フィブロネクチン測定）各wellに 100μl の１％
BSA を含むTris緩衝液を分注し、次いで、50μl の尿試
料を加え混和後、37℃で１時間反応させる。次に、Twee
n20 Wo 0.05 ％含む脱イオン水で３回洗浄する。その
後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトフィブロネクチ
ン抗体を各wellに 100μl ずつ加え混和した後、37℃で
１時間反応させ、先と同様に３回洗浄する。さらに、Ki
nd-king 法の基質緩衝液 100μl を各wellに加え、37℃
で30分間反応させる。次いで、 100μl の呈色液を各we
llに加えて呈色させる。最後に、各wellの呈色をマイク
ロプレート用比色計を用いて510/630nm で比色し、検量
線から尿中のフィブロネクチン濃度を算出する。
ト(SUMILON) の各wellに、抗ヒトフィブロネクチン抗体
（セロテック）５μl/mlを含む0.1M Tris 緩衝液を 100
μl ずつ分注し、一夜４℃で放置させて表面に固相化す
る。 （酵素標識抗体の調整）別途、過ヨウ素酸法により、ア
ルカリホスファターゼ（Ｂ−Ｍ社）を抗ヒトフィブロネ
クチン抗体(DAKOPATTS) に酵素標識して調整する。 （尿中フィブロネクチン測定）各wellに 100μl の１％
BSA を含むTris緩衝液を分注し、次いで、50μl の尿試
料を加え混和後、37℃で１時間反応させる。次に、Twee
n20 Wo 0.05 ％含む脱イオン水で３回洗浄する。その
後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトフィブロネクチ
ン抗体を各wellに 100μl ずつ加え混和した後、37℃で
１時間反応させ、先と同様に３回洗浄する。さらに、Ki
nd-king 法の基質緩衝液 100μl を各wellに加え、37℃
で30分間反応させる。次いで、 100μl の呈色液を各we
llに加えて呈色させる。最後に、各wellの呈色をマイク
ロプレート用比色計を用いて510/630nm で比色し、検量
線から尿中のフィブロネクチン濃度を算出する。
【００１１】（Ｅ）尿中ラクトフェリン、ミエロペルオ
キシダーゼ、フィブロネクチンのカットオフ値 健常人尿中のラクトフェリン濃度は31.1±36.2ng/ml で
ありカットオフ値は105ng/mlと設定した。同様にミエロ
ペルオキシダーゼ濃度は27.0±34.1であり、カットオフ
値は95ng/ml と設定した。また、フィブロネクチンは 1
10.4±61.9ng/ml であり、カットオフ値は234ng/mlとし
た。
キシダーゼ、フィブロネクチンのカットオフ値 健常人尿中のラクトフェリン濃度は31.1±36.2ng/ml で
ありカットオフ値は105ng/mlと設定した。同様にミエロ
ペルオキシダーゼ濃度は27.0±34.1であり、カットオフ
値は95ng/ml と設定した。また、フィブロネクチンは 1
10.4±61.9ng/ml であり、カットオフ値は234ng/mlとし
た。
【００１２】（Ｆ）臨床検査法としての利用例 糖尿病性腎症の病期分類での第１期（腎症前期）は現在
用いられている一般的臨床検査では、腎症の存在を診断
できない時期とされているが、本発明法では糸球体への
好中球の浸潤のステージ（腎症の発症時点）から、次い
でこれら好中球が産生する活性酸素や種々の蛋白分解酵
素の作用により、糸球体基底膜が損傷を受けるステージ
が明確に把握できる。ちなみに、この段階における従来
法の微量アルブミン法の陽性率は21.3％、微量トランス
フェリン法の陽性率は13.3％にすぎない。糖尿病性腎症
の早期診断の具体例は以下のごとくである。 糖尿病患者の尿中ラクトフェリン、ミエロペルオキシ
ダーゼを測定し、糸球体への好中球浸潤の有無を注意深
く経過観察する。（尿中ラクトフェリン濃度300ng/ml以
上、ミエロペルオキシダーゼ濃度95ng/ml 以下、または
ラクトフェリンとミエロペルオキシダーゼの濃度差が30
0ng/ml以上のラクトフェリン高値を示した場合） 糸球体への好中球の浸潤を認めたら、次いで起こる糸
球体基底膜の損傷度を尿中フィブロネクチンを測定して
経過観察する。（300ng/ml以上を示すと要注意） ここまでのステージが腎症前期に相当するので、この段
階で早期発見することにより、不可逆的病変への移行が
早期治療により防止できる。
用いられている一般的臨床検査では、腎症の存在を診断
できない時期とされているが、本発明法では糸球体への
好中球の浸潤のステージ（腎症の発症時点）から、次い
でこれら好中球が産生する活性酸素や種々の蛋白分解酵
素の作用により、糸球体基底膜が損傷を受けるステージ
が明確に把握できる。ちなみに、この段階における従来
法の微量アルブミン法の陽性率は21.3％、微量トランス
フェリン法の陽性率は13.3％にすぎない。糖尿病性腎症
の早期診断の具体例は以下のごとくである。 糖尿病患者の尿中ラクトフェリン、ミエロペルオキシ
ダーゼを測定し、糸球体への好中球浸潤の有無を注意深
く経過観察する。（尿中ラクトフェリン濃度300ng/ml以
上、ミエロペルオキシダーゼ濃度95ng/ml 以下、または
ラクトフェリンとミエロペルオキシダーゼの濃度差が30
0ng/ml以上のラクトフェリン高値を示した場合） 糸球体への好中球の浸潤を認めたら、次いで起こる糸
球体基底膜の損傷度を尿中フィブロネクチンを測定して
経過観察する。（300ng/ml以上を示すと要注意） ここまでのステージが腎症前期に相当するので、この段
階で早期発見することにより、不可逆的病変への移行が
早期治療により防止できる。
【００１３】
【発明の効果】以上説明したように、尿中のラクトフェ
リン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネクチン
を測定することにより、糖尿病性腎症やその他の糸球体
腎炎の早期診断が可能である。
リン、ミエロペルオキシダーゼおよびフィブロネクチン
を測定することにより、糖尿病性腎症やその他の糸球体
腎炎の早期診断が可能である。
【図１】尿中フィブロネクチン（ＦＮ）とラクトフェリ
ン（Ｌｆ）の相関関係を図示したものである。
ン（Ｌｆ）の相関関係を図示したものである。
【図２】各ステージにおける尿中微量蛋白濃度比較を図
示したものである。
示したものである。
Claims (3)
- 【請求項１】 尿中の白血球の顆粒内蛋白成分、および
糸球体基底膜を構成する細胞外マトリックス成分を測定
対象とすることを特徴とする糖尿病性腎症および糸球体
腎炎を早期に診断するキット。 - 【請求項２】 尿中のラクトフェリン(Lf)とミエロペル
オキシダーゼ(MPO)、およびフィブロネクチン(FN)を測
定することを特徴とする糖尿病性腎症および糸球体腎炎
の早期診断用キット。 - 【請求項３】 酵素免疫法やラテックス凝集反応、イム
ノクロマト法などの免疫学的測定法を用いることを特徴
とする請求項１または請求項２に記載の糖尿病性腎症お
よび糸球体腎炎の早期診断用キット。
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|---|---|---|---|
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