JPH09252763A - ドコサヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻類の培養法 - Google Patents
ドコサヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻類の培養法Info
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- JPH09252763A JPH09252763A JP8091769A JP9176996A JPH09252763A JP H09252763 A JPH09252763 A JP H09252763A JP 8091769 A JP8091769 A JP 8091769A JP 9176996 A JP9176996 A JP 9176996A JP H09252763 A JPH09252763 A JP H09252763A
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Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を
生産するハプト植物門に属するイソクリシス藻類を大量
生産するイソクリシス藻類の培養法に関する。 【構成】 ガラス等の透明体からなる縦型偏平水槽中の
無機液体培地に接種したイソクリシス藻体に、光照射
と、炭酸ガス含有空気を通気しつつ、第１工程として、
水槽の前後の幅広の平面の何れかの片面から光を照射し
て培養可能まで培養した後、該培養液に、第２工程とし
て、水槽の前後の幅広の両面から光を照射して、培養可
能までに培養した後、該培養液に、第３工程として、水
槽の前後の幅広の両面から光を照射して、ＰＣＶ濃度の
増加が殆ど認められないまで培養するイソクリシス藻体
の培養法。
生産するハプト植物門に属するイソクリシス藻類を大量
生産するイソクリシス藻類の培養法に関する。 【構成】 ガラス等の透明体からなる縦型偏平水槽中の
無機液体培地に接種したイソクリシス藻体に、光照射
と、炭酸ガス含有空気を通気しつつ、第１工程として、
水槽の前後の幅広の平面の何れかの片面から光を照射し
て培養可能まで培養した後、該培養液に、第２工程とし
て、水槽の前後の幅広の両面から光を照射して、培養可
能までに培養した後、該培養液に、第３工程として、水
槽の前後の幅広の両面から光を照射して、ＰＣＶ濃度の
増加が殆ど認められないまで培養するイソクリシス藻体
の培養法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ハプト植物部門に
属し、ドコサヘキサエン酸を含むイソクリシス藻体の培
養法に関する。
属し、ドコサヘキサエン酸を含むイソクリシス藻体の培
養法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、海洋微細藻類の培養において、偏
平培養フラスコ中の人工海水培地に、イソクリシス属に
属するイソクリシス・ガルバナ藻体などを接種して、２
０℃、１００〜１００００ルックスの照光下、５〜５０
℃で５〜５０日間、通気培養して藻体を得ることは特開
平４−３４６７６０号公報に開示されており、公知であ
る。
平培養フラスコ中の人工海水培地に、イソクリシス属に
属するイソクリシス・ガルバナ藻体などを接種して、２
０℃、１００〜１００００ルックスの照光下、５〜５０
℃で５〜５０日間、通気培養して藻体を得ることは特開
平４−３４６７６０号公報に開示されており、公知であ
る。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明者は、エイコサ
ペンタエン酸（ＥＰＡ）とほぼ同様な生理活性効果ある
ドコサヘキサエン酸（（以下ＤＨＡと略称）を大量生産
させるイソクリシス藻体の培養法に関する。
ペンタエン酸（ＥＰＡ）とほぼ同様な生理活性効果ある
ドコサヘキサエン酸（（以下ＤＨＡと略称）を大量生産
させるイソクリシス藻体の培養法に関する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、縦型偏平水槽
中の無機液体培地に、イソクリシス藻体を接種して、炭
酸ガス含有空気の通気下で、光照射して、イソクリシス
藻体を培養するに当たり、無機液体培地にイソクリシス
藻体を、ＰＣＶ濃度０．９〜１．７ｍｌ／l を接種し、
水槽の前・後面の何れかの片面から照度６０００〜１６
０００ｌｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度１．８〜４．９
ｍｌ／l まで培養する第１工程と、該ＰＣＶ濃度１．８
〜４．９ｍｌ／l の培養液に、水槽の前・後面の両面か
ら照度１１０００〜２１００ｌｘの光を照射して、ＰＣ
Ｖ濃度５．０〜７．０ｍｌ／l まで培養する第２工程
と、該ＰＣＶ濃度５．０〜７．０ｍｌ／l の培養液に、
水槽の前・後の両面から照度１００００〜３５０００ｌ
ｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度８．０〜８．５ｍｌ／l
まで培養する第３工程とから成ることを特徴とするドコ
サヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻体の培養法
である。
中の無機液体培地に、イソクリシス藻体を接種して、炭
酸ガス含有空気の通気下で、光照射して、イソクリシス
藻体を培養するに当たり、無機液体培地にイソクリシス
藻体を、ＰＣＶ濃度０．９〜１．７ｍｌ／l を接種し、
水槽の前・後面の何れかの片面から照度６０００〜１６
０００ｌｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度１．８〜４．９
ｍｌ／l まで培養する第１工程と、該ＰＣＶ濃度１．８
〜４．９ｍｌ／l の培養液に、水槽の前・後面の両面か
ら照度１１０００〜２１００ｌｘの光を照射して、ＰＣ
Ｖ濃度５．０〜７．０ｍｌ／l まで培養する第２工程
と、該ＰＣＶ濃度５．０〜７．０ｍｌ／l の培養液に、
水槽の前・後の両面から照度１００００〜３５０００ｌ
ｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度８．０〜８．５ｍｌ／l
まで培養する第３工程とから成ることを特徴とするドコ
サヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻体の培養法
である。
【０００５】光照射と炭酸ガス通気下で、縦型偏平水槽
中の無機液体培地に接種したイソクリシス藻体の培養す
る本発明での、第１工程において、培養開始の濃度とし
て、０．９〜１．７ｍｌ／l のＰＣＶ濃度の範囲で接種
して、片面から照度６０００〜１６０００ｌｘ範囲で光
照射して培養するのは、好適に培養できるからであり、
また、１．８〜４．９ｍｌ／l ＰＶＣ濃度範囲で培養を
止めるのは、５．０ｍｌ／l 以上の濃度となると照度不
足のためにＤＨＡ生産速度が低下するからである。よっ
て、上記の条件で培養することにより、イソクリシス藻
体を凝集、黄変させずに培養できて、第２工程の培養へ
順調に移行でき得るからである。
中の無機液体培地に接種したイソクリシス藻体の培養す
る本発明での、第１工程において、培養開始の濃度とし
て、０．９〜１．７ｍｌ／l のＰＣＶ濃度の範囲で接種
して、片面から照度６０００〜１６０００ｌｘ範囲で光
照射して培養するのは、好適に培養できるからであり、
また、１．８〜４．９ｍｌ／l ＰＶＣ濃度範囲で培養を
止めるのは、５．０ｍｌ／l 以上の濃度となると照度不
足のためにＤＨＡ生産速度が低下するからである。よっ
て、上記の条件で培養することにより、イソクリシス藻
体を凝集、黄変させずに培養できて、第２工程の培養へ
順調に移行でき得るからである。
【０００６】第１工程で培養した、１．８〜４．９ｍｌ
／１ＰＣＶ濃度の範囲の培養液を、さらに、水槽の前・
後の両面から照度１１０００〜２１０００ｌｘ範囲で光
照射する第２工程において、ＰＣＶ濃度５．０〜７．０
ｍｌ／l まで培養するのは、ＰＶＣ濃度７．０ｍｌ／l
を超えては、照度不足になるためにＤＨＡ生産速度が低
下するからである。よって、上記の条件で培養すること
により、イソクリシス藻体を凝集、黄変させずに培養で
きて、第３工程の培養へ順調に移行てき得るからであ
る。
／１ＰＣＶ濃度の範囲の培養液を、さらに、水槽の前・
後の両面から照度１１０００〜２１０００ｌｘ範囲で光
照射する第２工程において、ＰＣＶ濃度５．０〜７．０
ｍｌ／l まで培養するのは、ＰＶＣ濃度７．０ｍｌ／l
を超えては、照度不足になるためにＤＨＡ生産速度が低
下するからである。よって、上記の条件で培養すること
により、イソクリシス藻体を凝集、黄変させずに培養で
きて、第３工程の培養へ順調に移行てき得るからであ
る。
【０００７】第２工程で培養した、５．０〜７．０ｍｌ
／l ＰＣＶ濃度の範囲の培養液を、さらに、水槽の前・
後の両面から照度を１００００〜３５０００ｌｘ範囲で
光照射する第３工程において、ＰＣＶ濃度８．０〜８．
５ｍｌ／l まで培養するのは、ＰＶＣ濃度８．５ｍｌ／
l を超えて培養した培養液のＰＶＣ濃度は殆ど増加しな
い、それに伴ってＤＨＡ生産速度が低下し、また、イソ
クリシス藻体を凝集させるためでもある。
／l ＰＣＶ濃度の範囲の培養液を、さらに、水槽の前・
後の両面から照度を１００００〜３５０００ｌｘ範囲で
光照射する第３工程において、ＰＣＶ濃度８．０〜８．
５ｍｌ／l まで培養するのは、ＰＶＣ濃度８．５ｍｌ／
l を超えて培養した培養液のＰＶＣ濃度は殆ど増加しな
い、それに伴ってＤＨＡ生産速度が低下し、また、イソ
クリシス藻体を凝集させるためでもある。
【０００８】本発明での、上記条件下での第１工程〜第
３工程を通じで、温度１０〜３０℃下で培養するのは、
１０℃未満では、イソクリシス藻体濃度の増加は殆どな
く、３０℃を超えるとイソクリシス藻体は凝集し、好ま
しくないからである。また、光照射時間を１８〜２４時
間／日として、炭酸ガス０．５〜１％を含む空気を、５
〜３５ｍｌ／l の割合で通気、攪拌しつつ培養するの
は、ＤＨＡの生産量の低下を来すことなく培養できるか
らである。
３工程を通じで、温度１０〜３０℃下で培養するのは、
１０℃未満では、イソクリシス藻体濃度の増加は殆どな
く、３０℃を超えるとイソクリシス藻体は凝集し、好ま
しくないからである。また、光照射時間を１８〜２４時
間／日として、炭酸ガス０．５〜１％を含む空気を、５
〜３５ｍｌ／l の割合で通気、攪拌しつつ培養するの
は、ＤＨＡの生産量の低下を来すことなく培養できるか
らである。
【０００９】本発明での縦型偏平水槽は、厚さ３ｃｍ程
度のガラス製・アクリル製で、望ましくは、高さが１．
５〜２．５ｍ、前・後面の各幅が０．５〜２ｍ、左右側
面の各幅が７〜１７ｃｍの水槽を意味し、かつ、上端部
に形成された長方形の開口部には、周側壁に適数個の通
気孔が設けられ、先端部が閉鎖されている、炭酸ガス含
有空気の通気管が、その先端部から挿入され、また、下
端部に形成された船底形状の底部の適宜の部位には、培
養液排出管が備えられて成る縦型偏平水槽を意味する。
当該水槽の側面幅は１７ｃｍを超えると光の照射が不充
分となるので好ましくなく、さらに、挿入された通気管
から炭酸ガス含有空気が送入されると、水槽中の培地が
攪拌されるのである。よって、当該水槽は縦型偏平水槽
なので、受光面積が広く、また炭酸ガスの吸収効率が高
く、かつ、上端開口部が細長く狭いので雑菌の混入が少
なくて、微細藻類の大量培養に好適なのである。そし
て、本発明での、光照射とは、白色蛍光灯、昼色蛍光灯
または白熱灯の照射を意味する。
度のガラス製・アクリル製で、望ましくは、高さが１．
５〜２．５ｍ、前・後面の各幅が０．５〜２ｍ、左右側
面の各幅が７〜１７ｃｍの水槽を意味し、かつ、上端部
に形成された長方形の開口部には、周側壁に適数個の通
気孔が設けられ、先端部が閉鎖されている、炭酸ガス含
有空気の通気管が、その先端部から挿入され、また、下
端部に形成された船底形状の底部の適宜の部位には、培
養液排出管が備えられて成る縦型偏平水槽を意味する。
当該水槽の側面幅は１７ｃｍを超えると光の照射が不充
分となるので好ましくなく、さらに、挿入された通気管
から炭酸ガス含有空気が送入されると、水槽中の培地が
攪拌されるのである。よって、当該水槽は縦型偏平水槽
なので、受光面積が広く、また炭酸ガスの吸収効率が高
く、かつ、上端開口部が細長く狭いので雑菌の混入が少
なくて、微細藻類の大量培養に好適なのである。そし
て、本発明での、光照射とは、白色蛍光灯、昼色蛍光灯
または白熱灯の照射を意味する。
【００１０】本発明で使用するイソクリシス藻類とは、
ハプト植物部門に属するイソクリシス・ガルバナ（lsoc
hrysis galbana) 、ツノケイ藻に属するカエトセロス・
グラシリス（chaetoceros gracilis) や、クリプト植物
部門に属するクリプトモナス（cryptomonas sp.)などが
挙げられる。
ハプト植物部門に属するイソクリシス・ガルバナ（lsoc
hrysis galbana) 、ツノケイ藻に属するカエトセロス・
グラシリス（chaetoceros gracilis) や、クリプト植物
部門に属するクリプトモナス（cryptomonas sp.)などが
挙げられる。
【００１１】本発明での無機液体培地とは、培地１００
リットルに対して、ＮａＣｌが２２００〜２７００ｇ、
ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが６００〜１０００ｇ、ＮａＮＯ
3 が３０〜７０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが５０〜９０
ｇ、ＫＣｌが４０〜８０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．７〜
１．３ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが０．３〜０．７ｇ、ビタミ
ンＢ12が０．３〜０．７ｍｇ、Tiamin−ＨＣｌが４０〜
８０ｍｇ、ビオチンが０．１〜０．３ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3
が０．２８６〜２．８６ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2Ｏが
０．１８１〜１．８１ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２２
〜２２０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが８〜８０ｍｇ、
Ｎａ2 ＭｏＯ3 が２．１〜２１ｍｇの割合で含有されて
成るを含む培地を意味する。
リットルに対して、ＮａＣｌが２２００〜２７００ｇ、
ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが６００〜１０００ｇ、ＮａＮＯ
3 が３０〜７０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが５０〜９０
ｇ、ＫＣｌが４０〜８０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．７〜
１．３ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが０．３〜０．７ｇ、ビタミ
ンＢ12が０．３〜０．７ｍｇ、Tiamin−ＨＣｌが４０〜
８０ｍｇ、ビオチンが０．１〜０．３ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3
が０．２８６〜２．８６ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2Ｏが
０．１８１〜１．８１ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２２
〜２２０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが８〜８０ｍｇ、
Ｎａ2 ＭｏＯ3 が２．１〜２１ｍｇの割合で含有されて
成るを含む培地を意味する。
【００１２】
【実施例１】培地１００リットルに対して、ＮａＣｌが
２４００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが８００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が５０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが７０ｇ、ＫＣｌ
が６０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が１ｇ、ＦｅーＥＤＴＡが０．
５ｇ、ヒタミンＢ12が０．５ｍｇ、TiaminーＨＣｌが６
０ｍｇ、ビオチンが０．１ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．２８
６ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．１８１ｇ、ＺｎＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏが２２ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが８ｍ
ｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が２．１ｍｇを含む無機液体培地
（ｐＨ７．５）１００リットルを、高さ２ｍ、前・後面
の幅１ｍ、左・右側面の幅１３ｃｍのアクリル製の縦型
偏平水槽に入れ、培養温度を２５℃とし、照射時間を１
８時間／日として、炭酸ガス１％を含む空気を２０ l／
ｍｉｎ の割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中
の１００リットルの無機液体培地に、イソクリシス・ガ
ルバナを、ＰＣＶ濃度１．２ｍｌ／1 の割合で接種し、
水槽の前面の片面に、１２０００ｌｘの白色蛍光灯を照
射し、培養して、ＰＣＶ濃度が２．２ｍｌ／l となった
後、第２工程として、水槽の前・後の両面に、１５００
０ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が
５．３ｍｌ／l となった後、第３工程として、水槽の前
・後の両面に、２００００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、
培養して、ＰＣＶ濃度が８．５ｍｌ／l となった後、培
養処理を止めて、得られた培養液をシャープレス遠心分
離機（１５０００回転／分）で分別して得た藻体を蒸留
水で洗浄してから凍結乾燥して、１１７ｇの乾燥藻体を
得た。
２４００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが８００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が５０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが７０ｇ、ＫＣｌ
が６０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が１ｇ、ＦｅーＥＤＴＡが０．
５ｇ、ヒタミンＢ12が０．５ｍｇ、TiaminーＨＣｌが６
０ｍｇ、ビオチンが０．１ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．２８
６ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．１８１ｇ、ＺｎＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏが２２ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが８ｍ
ｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が２．１ｍｇを含む無機液体培地
（ｐＨ７．５）１００リットルを、高さ２ｍ、前・後面
の幅１ｍ、左・右側面の幅１３ｃｍのアクリル製の縦型
偏平水槽に入れ、培養温度を２５℃とし、照射時間を１
８時間／日として、炭酸ガス１％を含む空気を２０ l／
ｍｉｎ の割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中
の１００リットルの無機液体培地に、イソクリシス・ガ
ルバナを、ＰＣＶ濃度１．２ｍｌ／1 の割合で接種し、
水槽の前面の片面に、１２０００ｌｘの白色蛍光灯を照
射し、培養して、ＰＣＶ濃度が２．２ｍｌ／l となった
後、第２工程として、水槽の前・後の両面に、１５００
０ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が
５．３ｍｌ／l となった後、第３工程として、水槽の前
・後の両面に、２００００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、
培養して、ＰＣＶ濃度が８．５ｍｌ／l となった後、培
養処理を止めて、得られた培養液をシャープレス遠心分
離機（１５０００回転／分）で分別して得た藻体を蒸留
水で洗浄してから凍結乾燥して、１１７ｇの乾燥藻体を
得た。
【００１３】得られた乾燥藻体中のＤＨＡ量を、５％の
塩酸を含むメタノール溶媒に入れ、９５℃で３時間還流
後、ヘキサン溶媒で脂肪酸メチルエステルを抽出し、ト
リコサン酸を内部標準によるガスクロマトグラフィー分
析法で定量した結果、３．６ｇのＤＨＡを得た。
塩酸を含むメタノール溶媒に入れ、９５℃で３時間還流
後、ヘキサン溶媒で脂肪酸メチルエステルを抽出し、ト
リコサン酸を内部標準によるガスクロマトグラフィー分
析法で定量した結果、３．６ｇのＤＨＡを得た。
【００１４】
【実施例２】実施例１記載と同様に、無機液体培地１０
０リットルを水槽に入れ、かつ培養温度を２５℃、照射
時間を１８時間／日となし、炭酸ガス含有空気の通気
は、炭酸ガス１％を含む空気を２０ l／ｍｉｎの割合で
通気しつつ、第１工程として、水槽中の１００リットル
の無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナをＰＣＶ濃
度１．２ｍｌ／l の割合で接種し、水槽の片面に１４０
００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度
が２．２ｍｌ／l となった後、第２工程として、水槽の
前・後の両面に１８０００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、
培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／l となった後，第
３工程として、水槽の前・後の両面に、２００００ｌｘ
の白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が８．３
ｍｌ／l となった後、培養処理を止めて、得られた１０
０リットルの培養液から分別した培養液７０リットル
を、シャープレス遠心分離機（１５０００回転／分）で
分取した藻体を蒸留水洗浄し、凍結乾燥して７８ｇの乾
燥藻体を得た。そして、得られた乾燥藻体中のＤＨＡを
実施例１記載と同様に定量した結果、２．３ｇのＤＨＡ
を得た。
０リットルを水槽に入れ、かつ培養温度を２５℃、照射
時間を１８時間／日となし、炭酸ガス含有空気の通気
は、炭酸ガス１％を含む空気を２０ l／ｍｉｎの割合で
通気しつつ、第１工程として、水槽中の１００リットル
の無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナをＰＣＶ濃
度１．２ｍｌ／l の割合で接種し、水槽の片面に１４０
００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度
が２．２ｍｌ／l となった後、第２工程として、水槽の
前・後の両面に１８０００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、
培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／l となった後，第
３工程として、水槽の前・後の両面に、２００００ｌｘ
の白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が８．３
ｍｌ／l となった後、培養処理を止めて、得られた１０
０リットルの培養液から分別した培養液７０リットル
を、シャープレス遠心分離機（１５０００回転／分）で
分取した藻体を蒸留水洗浄し、凍結乾燥して７８ｇの乾
燥藻体を得た。そして、得られた乾燥藻体中のＤＨＡを
実施例１記載と同様に定量した結果、２．３ｇのＤＨＡ
を得た。
【００１５】また、上記培養液から７０リットル分別し
た残余の、ＰＶＣ濃度８．３ｍｌ／l の培養液３０リッ
トルに、実施例１記載の培養液を加えて、上記縦型偏平
水槽に入れて、上記実施例２の第３工程と同様に、２０
０００ｌｘの白色蛍光灯を１８時間照射しつつ培養する
ことを６回繰り返して培養した培養液をシャープレス遠
心分離機（１５０００回転／分）で得た藻体を洗浄、凍
結乾燥した乾燥藻体中のＤＨＡを定量した結果、１４ｇ
のＤＨＡを得た。
た残余の、ＰＶＣ濃度８．３ｍｌ／l の培養液３０リッ
トルに、実施例１記載の培養液を加えて、上記縦型偏平
水槽に入れて、上記実施例２の第３工程と同様に、２０
０００ｌｘの白色蛍光灯を１８時間照射しつつ培養する
ことを６回繰り返して培養した培養液をシャープレス遠
心分離機（１５０００回転／分）で得た藻体を洗浄、凍
結乾燥した乾燥藻体中のＤＨＡを定量した結果、１４ｇ
のＤＨＡを得た。
【００１６】
【実施例３】培地１００リットルに対して、ＮａＣｌが
４８００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１６００ｇ、Ｎａ
ＮＯ3 が１００ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが１４０ｇ、
ＫＣｌが１２０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が２ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴ
Ａが１ｇ、ビタミンＢ12が１ｍｇ、Tia ｍｉｎ−ＨＣｌ
が１２０ｍｇ、ビオチンが０．２ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が
０．５７２ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．３６２ｇ、
ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２２ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2
Ｏが１６ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が４．２ｍｇを含む無機
液体培地２００リットルを、高さ２ｍ、前・後面の幅２
ｍ、左・右の側面幅１３ｃｍのアクリル製の縦型偏平水
槽に入れて、培養温度を２３℃とし、照射時間を１８時
間／日として、炭酸ガス１％を含む空気を３５ 1／ｍｉ
ｎ の割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中の２
００リットルの無機液体培地に、イソクリシス・ガルバ
ナを、ＰＣＶ濃度１．１ｍｌ／l の割合で接種し、水槽
の前面片面に、１２０００ｌｘの白熱灯を照射し、培養
して、ＰＣＶ濃度が１．９ｍｌ／l となった後、第２工
程として、水槽の前・後の両面に、１５０００ｌｘの白
熱灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／l
となった後、第３工程として、水槽の前・後の両面に、
２００００ｌｘの白熱灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃
度が８．１ｍｌ／l となったとき培養処理を止めて、得
られた培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００回
転／分）で分別して得た藻体を蒸留水洗浄してから凍結
乾燥して、２３０ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻
体中のＤＨＡ量を、実施例１と同様にして、ＤＨＡを定
量した結果、７．１ｇであった。
４８００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１６００ｇ、Ｎａ
ＮＯ3 が１００ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが１４０ｇ、
ＫＣｌが１２０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が２ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴ
Ａが１ｇ、ビタミンＢ12が１ｍｇ、Tia ｍｉｎ−ＨＣｌ
が１２０ｍｇ、ビオチンが０．２ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が
０．５７２ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．３６２ｇ、
ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２２ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2
Ｏが１６ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が４．２ｍｇを含む無機
液体培地２００リットルを、高さ２ｍ、前・後面の幅２
ｍ、左・右の側面幅１３ｃｍのアクリル製の縦型偏平水
槽に入れて、培養温度を２３℃とし、照射時間を１８時
間／日として、炭酸ガス１％を含む空気を３５ 1／ｍｉ
ｎ の割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中の２
００リットルの無機液体培地に、イソクリシス・ガルバ
ナを、ＰＣＶ濃度１．１ｍｌ／l の割合で接種し、水槽
の前面片面に、１２０００ｌｘの白熱灯を照射し、培養
して、ＰＣＶ濃度が１．９ｍｌ／l となった後、第２工
程として、水槽の前・後の両面に、１５０００ｌｘの白
熱灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／l
となった後、第３工程として、水槽の前・後の両面に、
２００００ｌｘの白熱灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃
度が８．１ｍｌ／l となったとき培養処理を止めて、得
られた培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００回
転／分）で分別して得た藻体を蒸留水洗浄してから凍結
乾燥して、２３０ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻
体中のＤＨＡ量を、実施例１と同様にして、ＤＨＡを定
量した結果、７．１ｇであった。
【００１７】
【実施例４】培地１００リットルに対して、ＮａＣｌが
１２００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが４００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が２５ｇ、ＣａＣｌ2 ・２ＨＯが３５ｇ、ＫＣｌが
３０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが
０．２５ｇ、ビタミンＢ12が０．２５ｇ、チアミンーＨ
Ｃｌが３０ｍｇ、ビオチン０．０５ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が
０．１４３ｇ、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2 Ｏが０．９１ｇ、Ｚ
ｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１１ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
が４ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１．１ｍｇを含む無機液体
培地（ｐＨ７．４）５０リットルを、高さ２ｍ、前・後
面の幅０．５ｍ、左・右側面の幅１３ｃｍのアクリル製
の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を１０℃とし、照射時
間を１８時間／日で、炭酸ガス１％含有空気を２０ l／
ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中の
無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナを、ＰＣＶ濃
度１．１ｍｌ／１の割合で接種し、水槽の前面片面に１
２０００ｌｘの昼色光の蛍光灯を照射し、培養して、Ｐ
ＣＶ濃度が２．１ｍｌ／l となった後、第２工程とし
て、水槽の前・後の両面に、１５０００ｌｘの昼色光の
蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／
ｌとなった後、第３工程として、水槽の前・後の両面
に、２００００ｌｘの昼色光の蛍光灯を照射し、培養し
て、ＰＣＶ濃度が８．０ｍｌ／ｌとなったとき培養処理
を止めて、得られて培養液をシャープレス遠心分離機
（１５０００回転／分）で分別した藻体を蒸留水で洗浄
し、凍結乾燥して５８ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾
燥藻体中のＤＨＡ量を、実施例１記載と同様にして定量
した結果、１．７ｇであった。
１２００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが４００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が２５ｇ、ＣａＣｌ2 ・２ＨＯが３５ｇ、ＫＣｌが
３０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが
０．２５ｇ、ビタミンＢ12が０．２５ｇ、チアミンーＨ
Ｃｌが３０ｍｇ、ビオチン０．０５ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が
０．１４３ｇ、ＭｎＣｌ2・４Ｈ2 Ｏが０．９１ｇ、Ｚ
ｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１１ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
が４ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１．１ｍｇを含む無機液体
培地（ｐＨ７．４）５０リットルを、高さ２ｍ、前・後
面の幅０．５ｍ、左・右側面の幅１３ｃｍのアクリル製
の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を１０℃とし、照射時
間を１８時間／日で、炭酸ガス１％含有空気を２０ l／
ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工程として、水槽中の
無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナを、ＰＣＶ濃
度１．１ｍｌ／１の割合で接種し、水槽の前面片面に１
２０００ｌｘの昼色光の蛍光灯を照射し、培養して、Ｐ
ＣＶ濃度が２．１ｍｌ／l となった後、第２工程とし
て、水槽の前・後の両面に、１５０００ｌｘの昼色光の
蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．３ｍｌ／
ｌとなった後、第３工程として、水槽の前・後の両面
に、２００００ｌｘの昼色光の蛍光灯を照射し、培養し
て、ＰＣＶ濃度が８．０ｍｌ／ｌとなったとき培養処理
を止めて、得られて培養液をシャープレス遠心分離機
（１５０００回転／分）で分別した藻体を蒸留水で洗浄
し、凍結乾燥して５８ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾
燥藻体中のＤＨＡ量を、実施例１記載と同様にして定量
した結果、１．７ｇであった。
【００１８】
【実施例５】培地１００リットルに対して、ＮａＣｌが
１１００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが３００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が１５ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが２５ｇ、ＫＣｌ
が２０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．３５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡ
が０．１５ｇ、ヒタミンＢ12が０．１５ｍｇ、チアミン
−ＨＣｌが２０ｍｇ、ビオチンが０．０５ｍｇ、Ｈ3 Ｂ
Ｏ3 が０．１４３ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．９１
ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１１ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏが４ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１．１ｍｇを含む無
機液体培地（ｐＨ７．５）５０リットルを、高さ１．５
ｍ、前・後面の幅０．５ｍ左右の側面幅７ｃｍのアクリ
ル製の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を１０℃とし、照
射時間を１８時間／日として、炭酸ガス０．５を含む空
気を５ l／ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工程とし
て、水槽中の無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナ
をＰＣＶ濃度０．９ｍｌ／ｌの割合で接種し、水槽の前
面片面に、６０００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養し
て、ＰＣＶ濃度１．８ｍｌ／ｌとなった後、第２工程と
して、水槽の前・後の両面に、１１０００ｌｘの白色蛍
光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．０ｍｌ／ｌ
となった後、第３工程として、水槽の前・後の両面に、
１００００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣ
Ｖ濃度が８．０ｍｌ／ｌとなったとき培養処理を止め
て、培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００回転
／分）で分別した藻体を蒸留水で洗浄し、凍結乾燥して
５８ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻体中のＤＨＡ
量を、実施例１記載と同様にして定量した結果、１．７
ｇであった。
１１００ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが３００ｇ、ＮａＮ
Ｏ3 が１５ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが２５ｇ、ＫＣｌ
が２０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．３５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡ
が０．１５ｇ、ヒタミンＢ12が０．１５ｍｇ、チアミン
−ＨＣｌが２０ｍｇ、ビオチンが０．０５ｍｇ、Ｈ3 Ｂ
Ｏ3 が０．１４３ｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．９１
ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１１ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５
Ｈ2 Ｏが４ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１．１ｍｇを含む無
機液体培地（ｐＨ７．５）５０リットルを、高さ１．５
ｍ、前・後面の幅０．５ｍ左右の側面幅７ｃｍのアクリ
ル製の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を１０℃とし、照
射時間を１８時間／日として、炭酸ガス０．５を含む空
気を５ l／ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工程とし
て、水槽中の無機液体培地に、イソクリシス・ガルバナ
をＰＣＶ濃度０．９ｍｌ／ｌの割合で接種し、水槽の前
面片面に、６０００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養し
て、ＰＣＶ濃度１．８ｍｌ／ｌとなった後、第２工程と
して、水槽の前・後の両面に、１１０００ｌｘの白色蛍
光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度が５．０ｍｌ／ｌ
となった後、第３工程として、水槽の前・後の両面に、
１００００ｌｘの白色蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣ
Ｖ濃度が８．０ｍｌ／ｌとなったとき培養処理を止め
て、培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００回転
／分）で分別した藻体を蒸留水で洗浄し、凍結乾燥して
５８ｇの乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻体中のＤＨＡ
量を、実施例１記載と同様にして定量した結果、１．７
ｇであった。
【００１９】
【実施例６】培地５０リットルに対して、ＮａＣｌが１
３５０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2Ｏが５００ｇ、ＮａＮＯ
3 が７０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが４５ｇ、ＫＣｌが
４０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．６５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが
０．３５ｇ、ビタミンＢ12が０．３５ｍｇ、チアミン−
ＨＣｌが４０ｍｇ、ビオチンが０．１５ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ
3 が１４３０ｍｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．９１
ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2Ｏが１１０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・
５Ｈ2 Ｏが４０ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１０．５ｍｇを
含む無機液体培地（ｐＨ８．０）５０リットルを、高さ
２ｍ、前・後面の幅０．５ｍ、左右の側面幅１７ｃｍの
アクリル製の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を３０℃と
し、照射時間を２４時間／日として、炭酸ガス５％を含
む空気を、３５ l／ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工
程として、イソクリシス・ガルバナをＰＣＶ濃度１．７
ｍｌ／ｌの割合で接種し、水槽の前面片面に、２１００
０ｌｘの色光の蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度
が４．９ｍｌ／ｌとなった後、第２工程として、水槽の
前・後面の両面に、１１０００ｌｘの白色光の蛍光灯を
照射し、培養して，ＰＣＶ濃度が７．０ｍｌ／ｌとなっ
た後、第３工程として、水槽の前・後面の両面に、３５
０００ｌｘの昼白光の蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣ
Ｖ濃度が、８．５ｍｌ／ｌとなったので培養を止めて、
得られた培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００
回転／分）で分別して得た藻体を蒸留水で洗浄し、凍結
乾燥して乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻体中のＤＨＡ
量を、実施例１記載と同様にして定量した結果、１．８
ｇであった。
３５０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2Ｏが５００ｇ、ＮａＮＯ
3 が７０ｇ、ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏが４５ｇ、ＫＣｌが
４０ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 が０．６５ｇ、Ｆｅ−ＥＤＴＡが
０．３５ｇ、ビタミンＢ12が０．３５ｍｇ、チアミン−
ＨＣｌが４０ｍｇ、ビオチンが０．１５ｍｇ、Ｈ3 ＢＯ
3 が１４３０ｍｇ、ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏが０．９１
ｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2Ｏが１１０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・
５Ｈ2 Ｏが４０ｍｇ、Ｎａ2 ＭｏＯ3 が１０．５ｍｇを
含む無機液体培地（ｐＨ８．０）５０リットルを、高さ
２ｍ、前・後面の幅０．５ｍ、左右の側面幅１７ｃｍの
アクリル製の縦型偏平水槽に入れ、培養温度を３０℃と
し、照射時間を２４時間／日として、炭酸ガス５％を含
む空気を、３５ l／ｍｉｎの割合で通気しつつ、第１工
程として、イソクリシス・ガルバナをＰＣＶ濃度１．７
ｍｌ／ｌの割合で接種し、水槽の前面片面に、２１００
０ｌｘの色光の蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣＶ濃度
が４．９ｍｌ／ｌとなった後、第２工程として、水槽の
前・後面の両面に、１１０００ｌｘの白色光の蛍光灯を
照射し、培養して，ＰＣＶ濃度が７．０ｍｌ／ｌとなっ
た後、第３工程として、水槽の前・後面の両面に、３５
０００ｌｘの昼白光の蛍光灯を照射し、培養して、ＰＣ
Ｖ濃度が、８．５ｍｌ／ｌとなったので培養を止めて、
得られた培養液をシャープレス遠心分離機（１５０００
回転／分）で分別して得た藻体を蒸留水で洗浄し、凍結
乾燥して乾燥藻体を得た。得られた乾燥藻体中のＤＨＡ
量を、実施例１記載と同様にして定量した結果、１．８
ｇであった。
【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、イソクリシス藻体の大
量培養が容易にでき、かつＤＨＡを能率よく生産できる
有用な培養法が得られたのである。
量培養が容易にでき、かつＤＨＡを能率よく生産できる
有用な培養法が得られたのである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:89）
Claims (1)
- 【請求項１】 縦型偏平水槽中の無機液体培地に単細胞
藻体体を接種して、炭酸ガス含有空気を通気下で、光照
射しつつ培養する培養法において、イソクリシス藻体
を、ＰＣＶ濃度０．９〜１．７ｍｌ／l の割合で接種
し、水槽の前・後面の何れかの片面から照度６０００〜
１６０００ｌｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度１．８〜
４．９ｍｌ／l になるまで培養する第１工程と、当該Ｐ
ＣＶ濃度１．８〜４．９ｍｌ／l の培養液に、水槽の前
・後の両面から照度１１００──２１０００ｌｘの光を
照射して、ＰＣＶ濃度が５．０〜７．２ｍｌ／１になる
まで培養する第２工程と、当該ＰＣＶ濃度５．０〜７．
２ｍｌ／l の培養液に、水槽の前・後の両面から照度１
００００〜３５０００ｌｘの光を照射して、ＰＣＶ濃度
が８．０〜８．５ｍｌ／l になるまで培養する第３工程
とから成ることを特徴とするドコサヘキサエン酸を増産
させるイソクリシス藻類の培養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8091769A JPH09252763A (ja) | 1996-03-22 | 1996-03-22 | ドコサヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻類の培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8091769A JPH09252763A (ja) | 1996-03-22 | 1996-03-22 | ドコサヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻類の培養法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09252763A true JPH09252763A (ja) | 1997-09-30 |
Family
ID=14035784
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8091769A Pending JPH09252763A (ja) | 1996-03-22 | 1996-03-22 | ドコサヘキサエン酸を増産させるイソクリシス藻類の培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09252763A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11116431A (ja) * | 1997-10-13 | 1999-04-27 | Noevir Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| JP2018143108A (ja) * | 2017-03-01 | 2018-09-20 | 国立大学法人 鹿児島大学 | 微細藻類の培養方法及びデータ解析装置 |
-
1996
- 1996-03-22 JP JP8091769A patent/JPH09252763A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11116431A (ja) * | 1997-10-13 | 1999-04-27 | Noevir Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| JP2018143108A (ja) * | 2017-03-01 | 2018-09-20 | 国立大学法人 鹿児島大学 | 微細藻類の培養方法及びデータ解析装置 |
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