JPH09241160A - タンパク質脱リン酸化酵素阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は新規のタンパク質脱リン酸化酵素の
阻害剤の提供を目的とする。 【構成】 式 【化１】 （式中Ｒ¹はメチル基またはＲ²と一緒に ＝ＣＨ₂ で
示される基を示し、Ｒ²は水酸基、炭素数１〜１０のア
ルコキシ基または「ハロゲン原子、ニトロオキシ基、炭
素数１〜３のアルコキシ基もしくは炭素数２〜４のアル
コキシカルボニル基」で置換された炭素数１〜１０のア
ルコキシ基を示し、Ｒ³はシアノ基、炭素数２〜１０の
アルカノイル基または、式 【化２】 で示される置換基を示す。）で示されるピロリドン誘導
体またはその生理学的に許容しうる塩を有効成分とする
タンパク質脱リン酸化酵素阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はピロリドン誘導体を有効
成分とするタンパク質脱リン酸化酵素阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】タンパク質のリン酸化、脱リン酸化は生
体機能の基本的な調節機構の一つである。このうち、タ
ンパク質のリン酸化酵素を阻害する薬剤は抗腫瘍剤とし
て数多く報告されている。しかし、同じく細胞増殖にと
って必須な役割をはたしているタンパク質脱リン酸化酵
素に対する阻害物質については、ほとんどその報告がな
されていない。タンパク質の脱リン酸化は、リン酸化と
同様に、タンパク質の働きの、いわゆる「スイッチ」の
役割をしており、生体内でのタンパク質の活性、不活性
を制御していることが近年明らかになりつつある。従っ
て、タンパク質の脱リン酸化酵素の阻害は抗腫瘍剤、免
疫抑制剤などの研究分野において、新しい作用機序であ
り、さらに特異性、有効性に優れたタンパク質脱リン酸
化酵素の阻害剤の開発が望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は新規のタンパ
ク質脱リン酸化酵素の阻害剤の提供を目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題の
解決のために鋭意検討した結果、ある種のピロリドン誘
導体が目的を達成することを見いだし本発明を完成し
た。

【０００５】すなわち本発明は式

【０００６】

【化３】

【０００７】（式中Ｒ¹はメチル基またはＲ²と一緒に
＝ＣＨ₂ で示される基を示し、Ｒ²は水酸基、炭素数１
〜１０のアルコキシ基または「ハロゲン原子、ニトロオ
キシ基、炭素数１〜３のアルコキシ基もしくは炭素数２
〜４のアルコキシカルボニル基」で置換された炭素数１
〜１０のアルコキシ基を示し、Ｒ³はシアノ基、炭素数
２〜１０のアルカノイル基または、式

【０００８】

【化４】

【０００９】で示される置換基を示す。）で示されるピ
ロリドン誘導体またはその生理学的に許容しうる塩を有
効成分とするタンパク質脱リン酸化酵素阻害剤である。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明においてハロゲン原子とは
フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を示
し、炭素数１〜３のアルコキシ基とは例えばメトキシ
基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基など
を示し、炭素数２〜４のアルコキシカルボニル基とは例
えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プ
ロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基な
どを示し、炭素数２〜１０のアルカノイル基とは例えば
アセチル基、エチルカルボニル基、ヘプチルカルボニル
基などを示す。

【００１１】本発明の脱リン酸化酵素阻害剤の有効成分
であるピロリドン誘導体は、特開平２−２４７１６６号
公報に血小板凝集阻害作用を有する化合物として記載さ
れている化合物であり、また一部の化合物はジャーナル
・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ
［Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．第８１巻、第４３５５
頁（１９５９年）］に記載の方法に準じて、２，３−ジ
オキソブタンと式

【００１２】

【化５】Ｒ³ＣＨ₂ＣＯＮＨ₂ （式中Ｒ³は前述と同義である。）で示される化合物を
縮合させて得られる化合物を、酸で処理することによっ
て合成することができる。

【００１３】酸処理するときの酸としては塩酸、臭化水
素酸、硝酸、硫酸などの鉱酸、１０−カンファースルホ
ン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸など
の有機酸などを使用することができる。また、溶媒を用
いてもよく、好ましいものとしてジオキサン、テトラヒ
ドロフラン、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシド、塩化メチレン、クロロホル
ム、アセトン、トルエン、ベンゼンなどをあげることが
できる。

【００１４】本発明化合物をタンパク質脱リン酸化酵素
阻害剤として用いるには、化合物をそのまま、または常
法に従い製剤化することにより、通常用いられる剤型で
用いることができる。

【００１５】

【発明の効果】本発明のタンパク質脱リン酸化酵素阻害
剤はタンパク質の脱リン酸化に起因する疾病に対する薬
剤、例えば抗腫瘍剤、免疫抑制剤、糖尿病治療薬などと
して有用である。

【００１６】

【実施例】以下実施例および試験例により本発明をさら
に詳細に説明する。

【００１７】実施例１ （１）２，３−ジオキソブタン（２５．６ｇ）、シアノ
アセトアミド（２５ｇ）と水（３７．５ｍｌ）の混合物
に１０％水酸化ナトリウム液（０．４５ｍｌ）を加え反
応混合物を１．５時間撹拌し、析出した結晶を濾取して
３−シアノ−５−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２−
ピロリドンを得た。

【００１８】融点１４５〜１４９℃。

【００１９】（２）（１）で得た化合物（０．７６
ｇ）、１０−カンフルスルホン酸（０．０７ｇ）、塩化
メチレン（１０ｍｌ）の混合物を室温で１６時間撹拌し
た。反応混合物に水を加え分離した塩化メチレン層を飽
和炭酸水素ナトリウム液、続いて飽和食塩水で洗浄後、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した後減圧留去した。残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：
メタノール＝９５：５）に付して３−シアノ−４−メチ
ル−５−ビニリデン−２−ピロリドン（化合物９）を得
た。

【００２０】ｍ．ｐ．２００℃以上（分解） １Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：２．４（ｓ，３Ｈ）、
５．３（ｄｄ，２Ｈ），８．４（ｂｓ，１Ｈ） ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ：１３４ ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：３１７６、２２３１、１７０
３、１６４２、１３６２、１１６７、８９５、７７１、
６８９、６５２。

【００２１】試験に用いた化合物を以下に示す。

【００２２】

【表１】

【００２３】試験例１［人細胞由来タンパク質脱リン酸
化酵素阻害作用］ 人細胞由来タンパク質脱リン酸化酵素はＶＨＲ遺伝子を
導入した大腸菌により調製した。

【００２４】当該試験は、タンパク質脱リン酸化酵素に
一連の希釈倍率の測定対象物を加え、基質としてパラニ
トロフェニルホスフェート（シグマ社製）を用い、３７
℃で３０分間反応させた。反応後１Ｎ の水酸化ナトリ
ウムを加え、生成したパラニトロフェノールの吸光度を
ＥＩＡリーダー（モデル２５５０：バイオラッド社製）
で測定し、その数値を本発明化合物の活性の有無の判定
の指標とした。

【００２５】結果 薬剤無添加時のタンパク質脱リン酸化酵素活性を１００
％としたときの、各化合物添加における５０％阻害活性
を示す。

【００２６】 ＩＣ５０値（μＭ） 化合物１ ４９ 化合物２ ２４０ 化合物３ １９６ 化合物４ ２９６ 化合物５ ７０ 化合物６ ４４ 化合物７ ２０ 化合物８ ３６ 化合物９ ２６ 試験例２［タンパク質脱リン酸化酵素ＣＤ４５阻害作
用］ タンパク質チロシン脱リン酸化酵素ＣＤ４５は培養細胞
Ｂａｌｌ−１の細胞膜より調整した。

【００２７】当該試験は、タンパク質脱リン酸化酵素に
一連の希釈倍率の測定対象物を加え、基質としてホスホ
チロシン（シグマ社製）を用い、３７℃で３０分間反応
後２５％トリクロロ酢酸で反応停止させた。反応液とａ
ｓｓａｙ ｂｕｆｆｅｒ（６Ｎ硫酸：１０％アスコルビ
ン酸：２．５％モリブデン酸アンモニウム：水＝１：
１：１：２）を３７℃で２時間インキュベートし、生成
したリンモリブデン酸の吸光度をＥＩＡリーダー（モデ
ル２５５０：バイオラッド社製）で測定して、これを本
発明化合物の活性の有無の判定の指標とした。

【００２８】結果 薬剤無添加時のタンパク質脱リン酸化酵素活性を１００
％としたとき、化合物９を添加したときの５０％阻害活
性は５２μＭであった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｄ 207/44 Ｃ０７Ｄ 207/44 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ１２Ｎ 9/99 (72)発明者 鏡園 輝美 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内 (72)発明者 佐藤 正和 東京都豊島区高田３丁目24番１号 大正製 薬株式会社内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 【化１】 （式中Ｒ¹はメチル基またはＲ²と一緒に ＝ＣＨ₂ で
   示される基を示し、Ｒ²は水酸基、炭素数１〜１０のア
   ルコキシ基または「ハロゲン原子、ニトロオキシ基、炭
   素数１〜３のアルコキシ基もしくは炭素数２〜４のアル
   コキシカルボニル基」で置換された炭素数１〜１０のア
   ルコキシ基を示し、Ｒ³はシアノ基、炭素数２〜１０の
   アルカノイル基または、式 【化２】 で示される置換基を示す。）で示されるピロリドン誘導
   体またはその生理学的に許容しうる塩を有効成分とする
   タンパク質脱リン酸化酵素阻害剤。