JPH0923890A - 新規生理活性物質ｎｆ０２４１１ａおよびｂ、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】殺虫活性、殺線虫活性および抗腫瘍活性を有す
る新規生理活性物質物質の提供。 【解決手段】アクレモニウム ｓｐ．ＮＦ０２４１１株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１４９１７）の培養によって新規生理
活性物質ＮＦ０２４１１Ａ及びＢを得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規生理活性物質Ｎ
Ｆ０２４１１ＡおよびＢ、その製造法およびそれを有効
成分とする農薬、医薬あるいは動物薬、特に殺虫剤、殺
線虫剤あるいは抗腫瘍剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、殺虫剤としては、有機リン剤、カ
ーバメート剤等が使用されている。殺線虫剤としては、
メチルブロマイド、クロルピクリン等のくん蒸剤やオキ
サミル、モネンシン、ラサロシド、サリノマイシン等が
使用されている。抗腫瘍剤としては、アドリアマイシ
ン、アクチノマイシン等が使用されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来、使用されている
殺虫剤、殺線虫剤または抗腫瘍剤は効力、毒性などの点
で不十分であり、また抵抗性などの問題もあり、新しい
殺虫剤、殺線虫剤、抗腫瘍剤が求められている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】そこで発明者らは微生物
の代謝産物について種々検索した結果、アクレモニウム
属に属する一菌株が新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａ
およびＢを産生すること及び該生理活性物質が優れた殺
虫活性、殺線虫活性および抗腫瘍活性を有することを見
出した。本発明は上記知見に基づいて完成されたもので
ある。即ち本発明は新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａ
若しくはＢ又はそれら両方を有効成分とする農薬、医薬
又は動物薬特に、殺虫剤、殺線虫剤又は抗腫瘍剤に関す
るものである。

【０００５】上記新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａお
よびＢはアクレモニウム（Acremonium）属に属するＮＦ
０２４１１生産菌を培養し、新規生理活性物質ＮＦ０２
４１１ＡおよびＢを生成蓄積せしめ、この培養物より新
規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢを採取するこ
とにより得られる。

【０００６】ＮＦ０２４１１ＡおよびＢの生産菌の代表
的なものとして、土壌より分離したアクレモニウム エ
スピー ＮＦ ０２４１１（Acremonium sp. NF 02411
）株（ＦＥＲＭ Ｐ−１４９１７）が挙げられる。

【０００７】本発明における新規生理活性物質ＮＦ０２
４１１ＡおよびＢの生産菌はアクレモニウム（Acremoni
um）属に属するが、例えば、本発明者らが分離したＮＦ
０２４１１（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４９１７）菌株
は、本発明に最も有効に使用される菌株の一例である。
新規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢの生産菌の
代表的な１例は次の菌学的および生理学的性質を有す
る。

【０００８】菌学的性質 １．形態的性質 コーンミール寒天培地上で生育した本菌株の光学顕微鏡
下での形態的特徴を以下に記述する。菌糸は、無色、滑
面、隔壁を有する。分生子柄は、無色、長さは35〜112
μｍ、気生菌糸から単生もしくは２〜３本輪生状に形成
され、細長い円柱形となり直立、または湾曲する。分生
子柄基部の径は 1.2〜3.8 μｍ、表面はいぼ状粗面を呈
し、隔壁は無いか、もしくは１〜３個有する。分生子柄
頂部は先細りとなり、径は 0.9〜1.3 μｍ、表面は滑
面、先端は不明瞭なカラーを有する。分生子は、無色、
フィアロ型分生子。大きさは3.1 〜13.8×1.2 〜2.5 μ
ｍ。形は不規則で、だ円形、長だ円形、紡錘形、単細胞
または隔壁を有して２細胞となる。表面は滑面。分生子
柄先端で形成された分生子は、粘球となって先端にかた
まる。

【０００９】２．各種培地での生育 各種培地上で２５℃、７日間培養したときの生育状態を
表１に示す。本菌株は、ポテト・デキストロース寒天培
地、麦芽エキス寒天培地、オートミール寒天培地上での
生育は速く、ゆるい綿毛状の集落となり、分生子形成は
良好である。集落の表面及び裏面は白色を呈する。コー
ンミール寒天培地上での生育は気生菌糸が薄く広がりビ
ロード状の集落となるが、分生子形成は良好である。

【００１０】

【表１】 表１ 生育状態 分生子 可溶性 培地 集落形態 集落表面色調 集落裏面色調 形成 色素 集落の径 ────────────────────────────────── ホ゜テト・ 良好 白色 白色 良好 なし テ゛キストロース 綿毛状 寒天培地 57−59mm 麦芽エキス 良好 白色 白色 良好 なし 寒天培地 綿毛状 40−43mm ツアヘ゜ック やや悪い 白色 白色 やや なし 寒天培地 ヒ゛ロート゛状 不良 21−28mm コーンミール やや悪い 無色〜白色 白色 良好 なし 寒天培地 ヒ゛ロート゛状 35−38mm オートミール 良好 白色 白色 良好 なし 寒天培地 綿毛状 45−51mm

【００１１】生理学的性質 本菌株は、好気性で、麦芽エキス寒天培地において生育
pH範囲は４〜13で、至適pHは７〜９である。また、生育
至適温度は25℃付近で、37℃では生育しない。

【００１２】以上の菌学的および生理学的性状より本菌
株は、ホークスワース(D.L.Hawksworth)、サットン(B.
C.Sutton)、エーンズワース(G.C.Ainsworth) 編、「エ
ーンズワース・アンド・ビスビーズ・ディクショナリー
・オブ・ザ・ファンジャイ第７版（Ainsworth and Bisb
y's Dictinary of the Fungi, 7th ed.(1983))」に従
い、真菌門、不完全菌亜門、不完全糸状菌綱のアクレモ
ニウム（Acremonium）に属する一菌株であることが明ら
かになり本菌株をアクレモニウム エスピー ＮＦ０２
４１１（Acremonium sp. NF 02411 ）株と命名した。な
お、該当菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に
寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１４９１７として寄託されてい
る。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明の新規生理活性物質は、上
記アクレモニウム エスピーＮＦ０２４１１株を利用し
て有利に製造できる。また、一般に糸状菌は自然にまた
は人工的にその性状が変異しやすいものであり、本発明
新規生理活性物質はＮＦ０２４１１株の変異株を利用し
ても製造することができ、さらに上記に限らずアクレモ
ニウム属に属する公知の各種菌を利用することによって
も製造することができる。

【００１４】本発明により新規生理活性物質ＮＦ０２４
１１ＡおよびＢを製造するには、先ずアクレモニウム
エスピーＮＦ０２４１１株を糸状菌が利用し得る栄養物
を含有する培地で好気的に培養する。栄養源としては、
従来から糸状菌の培養に利用されている公知のものが使
用でき、例えば、炭素源としてはグルコース、フラクト
ース、グリセリン、シュクロース、デキストリン、ガラ
クトース、有機酸など単独かまたは組み合せて用いるこ
とができる。無機および有機窒素源としては塩化アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、尿素、硝酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾
燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実油カ
ス、カザミノ酸、バクトソイトン、ソリュブル・ベジタ
ブル・プロテイン、オートミールなどを単独または組み
合せて用いることができる。その他必要に応じて食塩、
炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸鉄、
硫酸亜鉛、塩化マンガン、燐酸塩などの無機塩類を加え
ることができるほか、有機物、たとえばアミノ酸類、ビ
タミン類、核酸類や無機物を適当に添加することができ
る。必要に応じてシリコン、植物油あるいは合成消泡剤
を培地に添加し発泡を防ぐことも有効である。培養法と
しては固体静地培養、液体静地培養、液体振盪培養、特
に深部攪拌培養法が最も適している。培養温度は通常２
０〜４５℃、ｐＨは弱酸性ないし微アルカリ性で培養を
行うことが望ましい。液体培養では通常１〜１２日間培
養を行うと新規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢ
物質が培養液中に生成蓄積される。培養液中の生成量が
最大に達したときに培養を停止し、培養ろ液より目的物
を単離・精製する。

【００１５】培養液からの本物質の単離・精製には一般
に微生物代謝産物をその培養液から単離するために用い
られる分離精製の方法が用いられる。例えば、培養物を
ろ過法によりろ液と菌体とに分離する。得られたろ液は
多孔性高分子樹脂に吸着させ、水−アセトンで溶出す
る。得られた水−アセトン溶液は減圧にて濃縮すること
により、新規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢを
含む粗物質を得る。粗物質はさらに精製に通常用いられ
る公知の方法、例えば、シリカゲル、アルミナ、フロリ
ジル、セファデックス等を用いるクロマトグラフィー、
あるいは多孔性高分子樹脂等を用いるクロマトグラフィ
ーを単独にまたは適宜組み合わせることにより精製す
る。精製に好適な例としてコスモシール４０Ｃ18−ＰＲ
ＥＰ（ナカライテスク社製）を用い、溶出液としてメタ
ノール−水を用いるカラムクロマトグラフィー法があげ
られる。これらの方法で得られる活性画分を濃縮乾固す
ることにより、新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよ
びＢの無色粉末を得ることができる。

【００１６】下記の理化学的性質を示す新規生理活性物
質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢ ａ）ＮＦ０２４１１Ａ １）外観；無色粉末 ２）分子量；１６３１ ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６３２．３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ １６３０．０（Ｍ−Ｈ）^- ３）溶解性； 易溶：ジメチルスルフォキシド、メタノール、クロロホ
ルム 可溶：アセトン、ブタノール、水 不溶：ｎ−ヘキサン、酢酸エチル ４）アミノ酸分析；アミノ酸分析の結果、ロイシン，グ
リシン（１：１）が存在する。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
クロロホルム−メタノール−酢酸（５００：１００：
６）の展開溶媒で0.30を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中、末端吸収を
示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図１に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトルを図２に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
定したスペクトルを図３に示す。 １０）呈色反応； 陽性：硫酸−バニリン試薬、ヨウ素 陰性：ニンヒドリン １１）塩基性、酸性、中性の区別；弱酸性 ｂ）ＮＦ０２４１１Ｂ １）外観；無色粉末 ２）分子量；１６１７ ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６１８．３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ １６１６．０（Ｍ−Ｈ）^- ３）溶解性； 易溶：ジメチルスルフォキシド、メタノール 可溶：アセトン、ブタノール、水、クロロホルム 不溶：ｎ−ヘキサン、酢酸エチル ４）アミノ酸分析；アミノ酸分析の結果、ロイシン，グ
リシン（１：１）が存在する。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
クロロホルム−メタノール−酢酸（５００：１００：
６）の展開溶媒で0.30を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中、末端吸収を
示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
たスペクトルを図４に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定し
たスペクトルを図５に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定し
たスペクトルを図６に示す。 １０）呈色反応； 陽性：硫酸−バニリン試薬、ヨウ素 陰性：ニンヒドリン １１）塩基性、酸性、中性の区別；弱酸性

【００１７】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂを殺虫剤や殺線虫剤などの農薬として使用する場合、
製剤化にあたっては何ら特別の条件を必要としない。す
なわち、農薬製造分野に於いて一般的に行われている方
法により、粉剤、粒剤、乳剤、マイクロカプセル剤など
の任意の製剤形態にして使用できる。また、製剤化の際
には補助剤として担体（希釈剤）及びその他の補助剤、
たとえば乳化剤、固着剤などを使用することができる。

【００１８】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂの農薬としての使用量は剤形、施用する方法等によっ
て変わるが、通常10アール当たり有効成分量で0.1 〜10
0g、好ましくは0.5 〜20ｇが使用される。

【００１９】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂを動物薬として使用する場合、製剤化にあたっては何
ら特別の条件を必要としない。すなわち、動物薬製造分
野に於いて一般的に行われている方法により、注射剤、
乳剤、マイクロカプセル剤などの任意の製剤形態にして
使用できる。また、製剤化の際には補助剤として担体
（希釈剤）及びその他の補助剤、たとえば展開剤、乳化
剤、固着剤などを使用することができる。

【００２０】製剤に於いて、新規生理活性物質ＮＦ０２
４１１ＡおよびＢの含量は製剤形態等により広範囲にか
えることが可能であり、一般には新規生理活性物質ＮＦ
０２４１１ＡおよびＢを0.01〜100%（重量）、好ましく
は0.10〜70% （重量）含有し、残りは通常動物薬用に使
用される担体その他補助剤からなる。

【００２１】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂの投与量は症状等により異なるが、動物一頭１日当た
り1mg〜1g程度である。連投を必要とする場合には１日
当たり使用量を抑えることが望ましい。

【００２２】例えば抗腫瘍剤などの医薬品として使用す
る場合の製剤化および投与方法は従来公知の種々の方法
が適用できる。すなわち、投与方法として注射、経口、
直腸投与などが可能である。製剤形態としては注射剤、
粉末剤、顆粒剤、錠剤、座剤などの形態がとり得る。

【００２３】製剤化の際に新規生理活性物質ＮＦ０２４
１１ＡおよびＢに悪影響を与えない限り、医薬用に用い
られる種々の補助剤、すなわち、担体やその他の助剤、
例えば安定剤、防腐剤、無痛化剤、乳化剤が必要に応じ
て使用されうる。製剤に於いて、新規生理活性物質ＮＦ
０２４１１ＡおよびＢの含量は製剤形態等により広範囲
にかえることが可能であり、一般には新規生理活性物質
ＮＦ０２４１１ＡおよびＢを0.01〜100%（重量）、好ま
しくは0.10〜70% （重量）含有し、残りは通常医薬用に
使用される担体その他補助剤からなる。

【００２４】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂの投与量は症状等により異なるが、成人１人１日当た
り0.01〜800mg 程度である。連投を必要とする場合には
１日当たり使用量を抑えることが望ましい。

【００２５】次に本発明の殺虫剤の適用できる具体的な
害虫名を挙げる。半翅目〔Hemiptera 〕からたとえばツ
マグロヨコバイ (Nephotettix cincticeps）、セジロウ
ンカ (Sogatella furcifera) 、トビイロウンカ (Nila
parvatalugens) 、ヒメトビウンカ (Laodelphaxstriate
llus) 、ホソヘリカメムシ (Riptortus clavatus) 、
ミナミアオカメムシ (Naezara viridula) 、ナシグンバ
イ(Stephanitis nashi) 、オンシツコナジラミ (Trial
eurodesvaporariorum) 、ワタアブラムシ (Aphis gossy
pii) 、モモアカアブラムシ (Myzus persicae) 、ヤノ
ネカイガラムシ (Unaspis yanonensis) 、鱗翅目〔Lepi
doptera 〕からたとえばコナガ (Plutellaxylostella)
、キンモンホソガ (Phyllonorycterringoneella) 、
ワタミガ (Promalactis inonisema) 、リンゴコカクモ
ンハマキ (Adoxophyesorana) 、マメシンクイガ (Legu
minivoraglycinivorella) 、コブノメイガ (Cnaphalocr
ocismedinalis) 、ニカメイガ (Chilo suppressalis)
、アワノメイガ (Ostriniafurnacalis) 、ヨトウガ (M
amestrabrassicae) 、アワヨトウ(Pseudaletia separa
ta) 、ハスモンヨトウ (Spodopteralitura) 、イネツト
ムシ (Parnara guttata) 、モンシロチョウ (Pieris r
apaecrucivora) などがあげられる。

【００２６】鞘翅目〔Coleoptera〕としてたとえばドウ
ガネブイブイ (Anomala cuprea) 、マメコガネ (Popill
iajaponica) 、イネゾウムシ (Echinocnemussquameus)
、イネドロオイムシ (Oulemaoryzae) 、ヒメマルカツ
オブシムシ (Anthrenus verbasci) 、コクヌスト (Tene
broides mauritanicus) 、コクゾウ (Sitophiluszeamai
s) 、ニジュウヤホシテントウ (Henosepilachnavigint
ioctopunctata) 、アズキゾウムシ (Callosobruchusch
inensis9 、マツノマダラカミキリ (Monochamusaltern
atus) 、ウリハムシ (Aulacophora femoralis) 、膜翅
目〔Hymenoptera〕としてたとえばカブラハバチ (Athal
ia rosae japonensis) 、ルリチュウレンジ (Argesimil
is) 、双翅目〔Diptera 〕としてたとえばネッタイイ
エカ (Culex pipiensia sp.)、ネッタイシマカ (Aedes
aegypti)、ダイズサヤタマバエ (Asphondylia sp.)、タ
ネバエ (Delia platura) 、イエバエ (Musca domestic
a viclna) 、ウリミバエ (Dacus cucurcitae) 、イネハ
モグリバエ (Agromyzaorrzae) などがあげられる。

【００２７】隠翅目〔Aphaniptera 〕としてヒトノミ
(Pulex irritans) 、ケオプスネズミノミ (Xenopsyllac
heopis) 、イヌノミ (Ctenocephalides canis) 、総
翅目〔Thysanoptera〕としてチャノキイロアザミウマ
(Scirtothripsdorsalls) 、ネギアザミウマ (Thripstab
aci) 、ミナミキイロアザミウマ (Thripspalmi) 、イ
ネアザミウマ (Baliothrips biformis) 、シラミ目〔An
oplura〕としてたとえばコロモジラミ (Pediculus huma
nus corporis) 、ケジラミ (Pthirus pubis) 、チャタ
テムシ目〔Psocoptera〕としてたとえばコチャタテ (Tr
ogium pulsatorium)、ヒラチャタテ (Liposcelisbostry
chophilus) 、直翅目〔Orthoptera〕としてたとえばケ
ラ (Gryllotalpa africana) 、トノサマバッタ (Locust
a migratoria) 、コバネイナゴ (Oxyayezoensis) 、チ
ャバネゴキブリ (Blattelagermanic a) 、クロゴキブリ
(Periplaneta fuliginosa) などがあげられる。

【００２８】ダニ目〔Arcarina〕としてナミハダニ (Te
tranychus urticae) 、ミカンハダニ (Panonychuscitr
i) 、ニセナミハダニ (Tetranychus cinnabarinus) 、
カンザワハダニ (Tetranychus kanzawai) 、ネダニ (Rh
izoglyphusechinopus) などがあげられる。但しこれら
に限定されるものではない。

【００２９】次に本発明の殺線虫剤の適用できる具体的
な線虫名を挙げる。ハリセンチュウ目〔Tylenchida〕た
とえばダイズシストセンチュウ（Heteroderaglycines)
、イネシストセンチュウ (Heteroderaelachista) な
どがあげられるが、これらに限定されるものではない。
その他ヘモンクス属〔Haemonchus〕たとえば胃捻転虫
(Haemonchuscontortus) をはじめとする動物およびヒ
トに寄生する線虫に対しても有用である。

【００３０】

【実施例】以下本発明の実施例を示すが、これは単なる
一例示であって何等本発明を限定するものではなく、種
々の変法が可能である。

【００３１】（１）発酵 ロータリー型振盪機用５００ml容三角フラスコにグルコ
ース１％、シュークロース２％、アジプロン（味の素社
製）２％、リン酸二水素カリウム０．１％、硫酸マグネ
シウム０．０５％、プロナールＳＴ０．０１％、硫酸鉄
・７水和物０．０００１１％、硫酸銅・５水和物０．０
００６４％、硫酸亜鉛・７水和物０．０００１５％、お
よび塩化マンガン・４水和物０．０００７９％の培地
（ｐＨ6.5）１００mlを分注し、１２０℃、２０分間オ
ートクレーブ滅菌した。これに新規生理活性物質ＮＦ０
２４１１の生産菌株（ＦＥＲＭＰ−１４９１７）の１白
金耳を接種し、２７℃、２２０回転／分、２日間振盪
し、種培養とした。

【００３２】本培養はロータリー型振盪機用５００ml容
三角フラスコにグルコース１％、シュークロース２％、
アジプロン（味の素社製）１．５％、ペプトン０．３
％、イーストエキストラクト０．２％、リン酸二水素カ
リウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、プロナ
ールＳＴ０．０１％、硫酸鉄・７水和物０．０００１１
％、硫酸銅・５水和物０．０００６４％、硫酸亜鉛・７
水和物０．０００１５％、および塩化マンガン・４水和
物０．０００７９％の培地（ｐＨ6.5）１００mlを分注
し、１２０℃、２０分間オートクレーブ滅菌したフラス
コに前記種培養液２mlを移植し、２５℃、２２０回転／
分の条件下で５日振盪培養を行った。培養液を吸引ろ過
し、菌体とろ液に分別した。

【００３３】（２）精製 得られたろ液（５Ｌ）はダイアイオンＨＰ−２０を通過
させて活性物質を吸着せしめ、アセトン−水を溶離液と
して濃度勾配法で溶出し、活性画分を得た。この溶出液
を減圧下で濃縮、凍結乾燥し、得られた粉末をメタノー
ルで抽出して２．８ｇの粗物質を得た。

【００３４】得られた粗物質をセファデックスＬＨ−２
０に供し、メタノールで溶出した。活性を示す画分を集
め減圧濃縮して１．９ｇの固形物質を得た。

【００３５】さきの固形物質をダイアイオンＣＨＰ−２
０クロマトグラフィー（１０％メタノール水〜１００％
メタノールの濃度勾配溶出法により溶出）に供し、活性
区Ａとして１９４ｍｇ、活性区Ｂとして４０８ｍｇをそ
れぞれ得た。

【００３６】活性区Ａはさらに逆相液体クロマトグラフ
ィー（コスモシール₄₀Ｃ₁₈PREP、３０％メタノール水〜
９０％メタノール水の濃度勾配溶出法により溶出）を行
い、活性画分５２ｍｇを得た。

【００３７】得られた画分はさらにトヨパールＨＷ−４
０カラムクロマトグラフィー（溶離液メタノール）を行
って、新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａを２８ｍｇ得
た。

【００３８】活性区Ｂは逆相液体クロマトグラフィー
（コスモシール₄₀Ｃ₁₈PREP、５０％メタノール水〜９０
％メタノール水の濃度勾配溶出法により溶出）に供し、
活性画分２６ｍｇを得た。

【００３９】得られた活性画分をシラン化シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（アセトンよりアセトン：メタ
ノール（１：１）の濃度勾配法により溶出）に供し、２
１ｍｇの粉末とした後、トヨパールＨＷ−４０カラムク
ロマトグラフィー（溶離液メタノール）を行い、新規生
理活性物質ＮＦ０２４１１Ｂを１４．３ｍｇ得た。

【００４０】（３）実験例 殺虫活性：新規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢ
のチカイエカ幼虫に対する殺虫活性を検討した。新規生
理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢを５０％エタノー
ル溶液で所定濃度に希釈し、供試薬剤とした。径９cmの
プラスチック容器に井水199.8ml を入れ、チカイエカ
（上尾産）幼虫２０頭を放ち、供試薬剤0.2ml をピペッ
トにて表中の濃度になるように滴下、施用した。７２時
間後に生死虫数を調査し死亡率を算出した。結果は表２
に示した。

【００４１】

【表２】 表２ ─────────────────────────── 化合物 濃度（ppm ） 死虫率（％） ────────────────────────── ＮＦ０２４１１Ａ １０ １００ １ １００ ＮＦ０２４１１Ｂ １０ １００ １ １００ ──────────────────────────

【００４２】この表に示したように、新規生理活性物質
ＮＦ０２４１１ＡおよびＢはチカイエカに対して明らか
に殺虫活性を示す。

【００４３】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａおよび
Ｂのコナガに対する殺虫活性を検討した。ＮＦ０２４１
１ＡおよびＢを５０％エタノール溶液で所定濃度に希釈
し供試薬剤とした。キャベツ葉を直径４cmのコルクボー
ラーで打ち抜き、ＮＦ０２４１１ＡおよびＢの所定濃度
希釈液に数秒間浸漬した。風乾後供試葉をプラスチック
容器に入れ、コナガ３令幼虫を５頭放飼した。放飼４日
後に生死の判定をし、死虫率を算出した。試験は４連制
で行い、結果は表３に示した。

【００４４】

【表３】 表３ ─────────────────────────── 化合物 濃度（ppm ） 死虫率（％） ────────────────────────── ＮＦ０２４１１Ａ １００ １００ １０ １００ ＮＦ０２４１１Ｂ １００ １００ １０ １００ ──────────────────────────

【００４５】この表に示したように、新規生理活性物質
ＮＦ０２４１１ＡおよびＢはコナガに対して明らかに殺
虫活性を示す。

【００４６】線虫に対する活性：新規生理活性物質ＮＦ
０２４１１Ａのサツマイモネコブセンチュウ（Meloidog
yne incognit) に対する効果を検討した。トマトに寄生
しているサツマイモネコブセンチュウを汚染土壌よりベ
ルマン法により分離し、センチュウの懸濁溶液を作成し
た。その懸濁溶液１mlに新規生理活性物質ＮＦ０２４１
１Ａの５０％エタノール溶液を所定濃度となるように１
０μｌ添加した。処理３日後に顕微鏡にて運動停止個体
を判定し、運動停止率（％）とした。結果は表４に示し
た。

【００４７】

【表４】 表４ ─────────────────────────── 化合物 濃度（ppm ） 運動停止率（％） ─────────────────────────── ＮＦ０２４１１Ａ １００ １００ １０ ５０ １ １０ ───────────────────────────

【００４８】表４に示したように、新規生理活性物質Ｎ
Ｆ０２４１１Ａは線虫に対して明らかに効果を示す。

【００４９】細胞増殖抑制活性：新規生理活性物質ＮＦ
０２４１１ＡおよびＢのヒト大腸癌細胞（ＳＷ４８０）
およびヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に対する増殖抑制
活性を検討した。ヒト大腸癌細胞を 5.0×10⁴ 個/ml 、
あるいはヒト卵巣癌細胞を 2×10⁴ 個/ml の割合で96穴
テストプレートに 200 ml 接種し、37℃、5% CO ₂ イン
キュベーター内で24時間培養した後、新規生理活性物質
ＮＦ０２４１１ＡおよびＢをそれぞれ種々の濃度で培養
液に添加した。添加72時間後、生菌数をMTT 法により測
定し、新規生理活性物質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢの種
々の濃度におけるヒト大腸癌細胞、あるいはヒト卵巣癌
細胞の増殖抑制率を求めた。結果を表５および６に示し
た。

【００５０】

【表５】

【００５１】

【表６】 表６ ─────────────────────── 化合物 ヒト卵巣癌細胞 ＩＣ₅₀（μg/ml） ──────────────────────── ＮＦ０２４１１Ａ １．９ ＮＦ０２４１１Ｂ １．９ ───────────────────────

【００５２】これらの表に示した様に、新規生理活性物
質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢはヒト大腸癌細胞（ＳＷ４
８０）およびヒト卵巣癌細胞（Ａ２７８０）に非常に強
い増殖抑制活性を有する。

【００５３】

【発明の効果】上記のように新規生理活性物質ＮＦ０２
４１１ＡおよびＢは、殺虫作用、殺線虫作用および制癌
作用を有するので、殺虫剤、殺線虫剤および制癌剤など
の農薬、動物薬または医薬として使用できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＮＦ０２４１１Ａの臭化カリウム錠剤で測定し
た赤外部吸収スペクトル

【図２】ＮＦ０２４１１Ａの重クロロホルム中（３００
ＭＨｚ）で測定した水素核磁気共鳴スペクトル

【図３】ＮＦ０２４１１Ａの重クロロホルム中（７５Ｍ
Ｈｚ）で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル

【図４】ＮＦ０２４１１Ａの臭化カリウム錠剤で測定し
た赤外部吸収スペクトル

【図５】ＮＦ０２４１１Ｂの重ＤＭＳＯ中（３００ＭＨ
ｚ）で測定した水素核磁気共鳴スペクトル

【図６】ＮＦ０２４１１Ｂの重ＤＭＳＯ中（７５ＭＨ
ｚ）で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:645）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の理化学的性質を示す新規生理活性物
   質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢ。 ａ）ＮＦ０２４１１Ａ １）外観；無色粉末 ２）分子量；１６３１ ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６３２．３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ １６３０．０（Ｍ−Ｈ）^- ３）溶解性； 易溶：ジメチルスルフォキシド、メタノール、クロロホ
   ルム 可溶：アセトン、ブタノール、水 不溶：ｎ−ヘキサン、酢酸エチル ４）アミノ酸分析；アミノ酸分析の結果、ロイシン，グ
   リシン（１：１）が存在する。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
   クロロホルム−メタノール−酢酸（５００：１００：
   ６）の展開溶媒で0.30を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中、末端吸収を
   示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
   たスペクトルを図１に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
   定したスペクトルを図２に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重クロロホルム中で測
   定したスペクトルを図３に示す。 １０）呈色反応；陽性：硫酸−バニリン試薬、ヨウ素 陰性：ニンヒドリン １１）塩基性、酸性、中性の区別；弱酸性 ｂ）ＮＦ０２４１１Ｂ １）外観；無色粉末 ２）分子量；１６１７ ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ １６１８．３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ １６１６．０（Ｍ−Ｈ）^- ３）溶解性； 易溶：ジメチルスルフォキシド、メタノール 可溶：アセトン、ブタノール、水、クロロホルム 不溶：ｎ−ヘキサン、酢酸エチル ４）アミノ酸分析；アミノ酸分析の結果、ロイシン，グ
   リシン（１：１）が存在する。 ５）シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値；
   クロロホルム−メタノール−酢酸（５００：１００：
   ６）の展開溶媒で0.30を示す。 ６）紫外部吸収スペクトル；メタノール中、末端吸収を
   示す。 ７）赤外部吸収スペクトル；臭化カリウム錠剤で測定し
   たスペクトルを図４に示す。 ８）水素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定し
   たスペクトルを図５に示す。 ９）炭素核磁気共鳴スペクトル；重ＤＭＳＯ中で測定し
   たスペクトルを図６に示す。 １０）呈色反応； 陽性：硫酸−バニリン試薬、ヨウ素 陰性：ニンヒドリン １１）塩基性、酸性、中性の区別；弱酸性
2. 【請求項２】アクレモニウム属に属し、新規生理活性物
   質ＮＦ０２４１１ＡおよびＢを生産する能力を有する微
   生物を、培地に培養し、培養物中に新規生理活性物質Ｎ
   Ｆ０２４１１ＡおよびＢを生産、蓄積せしめ、これを採
   取する事を特徴とする新規生理活性物質ＮＦ０２４１１
   ＡおよびＢの製造法。
3. 【請求項３】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａ若しく
   はＢ、又はそれら両方を有効成分として含有する農薬、
   医薬又は動物薬。
4. 【請求項４】新規生理活性物質ＮＦ０２４１１Ａ若しく
   はＢ、又はそれら両方を有効成分として含有する殺虫
   剤、殺線虫剤又は抗腫瘍剤。