JPH09227600A - ポリペプチド主鎖を有する糖鎖高分子及びその包接化合物 - Google Patents
ポリペプチド主鎖を有する糖鎖高分子及びその包接化合物Info
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- JPH09227600A JPH09227600A JP2974596A JP2974596A JPH09227600A JP H09227600 A JPH09227600 A JP H09227600A JP 2974596 A JP2974596 A JP 2974596A JP 2974596 A JP2974596 A JP 2974596A JP H09227600 A JPH09227600 A JP H09227600A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生分解性を持ち、塩基性残基を持たないポリ
ペプチドにオリゴ糖を導入した新規な糖鎖高分子を提供
する。 【解決手段】 グルタミン酸やアスパラギン酸等のカル
ボン酸残基を持つポリペプチドを主鎖とし、その主鎖に
アミド結合を介してラクトース等のオリゴ糖を結合して
なる糖鎖高分子。このオリゴ糖は、疎水性基を介して前
記ポリペプチド主鎖に結合してもよい。
ペプチドにオリゴ糖を導入した新規な糖鎖高分子を提供
する。 【解決手段】 グルタミン酸やアスパラギン酸等のカル
ボン酸残基を持つポリペプチドを主鎖とし、その主鎖に
アミド結合を介してラクトース等のオリゴ糖を結合して
なる糖鎖高分子。このオリゴ糖は、疎水性基を介して前
記ポリペプチド主鎖に結合してもよい。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、糖鎖高分子に関
し、中でも、生分解性、臓器、器官または細胞特異性、
水溶性及び薬剤包接機能を向上させた糖鎖高分子に関す
る。
し、中でも、生分解性、臓器、器官または細胞特異性、
水溶性及び薬剤包接機能を向上させた糖鎖高分子に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】特異な立体構造を有し、その立体構造の
中で豊富な極性部位と疎水性部位とが均衡している糖分
子は、生体の認識機構に深く関わっているほか、植物の
細胞壁やカニの甲羅などの生体骨格を構成する材料など
に用いられている。本発明者等は、このような糖分子の
機能に着目し、ポリビニル系高分子に糖分子を導入した
糖鎖高分子を合成し、精力的に研究を行ってきた（例え
ば、由良洋文、赤池敏宏、「細胞培養」、第１９巻、３
１７−３２２頁、１９９３年）。
中で豊富な極性部位と疎水性部位とが均衡している糖分
子は、生体の認識機構に深く関わっているほか、植物の
細胞壁やカニの甲羅などの生体骨格を構成する材料など
に用いられている。本発明者等は、このような糖分子の
機能に着目し、ポリビニル系高分子に糖分子を導入した
糖鎖高分子を合成し、精力的に研究を行ってきた（例え
ば、由良洋文、赤池敏宏、「細胞培養」、第１９巻、３
１７−３２２頁、１９９３年）。
【０００３】さらに本発明者等は、これらの糖鎖高分子
を、例えば医療・医薬等の高度な安全性が要求される分
野に用いることにも鑑み、酵素（プロテアーゼ）の作用
で生分解されうるポリペプチドを主鎖とする糖鎖高分子
を想起するに至った。
を、例えば医療・医薬等の高度な安全性が要求される分
野に用いることにも鑑み、酵素（プロテアーゼ）の作用
で生分解されうるポリペプチドを主鎖とする糖鎖高分子
を想起するに至った。
【０００４】しかしながら、このポリペプチドにアミン
類などの塩基性残基が存在すると、この塩基性残基が細
胞等と非特異的相互作用をし、糖による特異的相互作用
が生かされない可能性があった。
類などの塩基性残基が存在すると、この塩基性残基が細
胞等と非特異的相互作用をし、糖による特異的相互作用
が生かされない可能性があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】即ち、これまでに、塩
基性残基を持たないポリペプチドを主鎖とし、その主鎖
にオリゴ糖を導入した糖鎖高分子の例はなかった。そこ
で本発明は、生分解性を持ち、塩基性残基を持たないポ
リペプチドにオリゴ糖を導入した新規な糖鎖高分子を提
供することを目的とする。
基性残基を持たないポリペプチドを主鎖とし、その主鎖
にオリゴ糖を導入した糖鎖高分子の例はなかった。そこ
で本発明は、生分解性を持ち、塩基性残基を持たないポ
リペプチドにオリゴ糖を導入した新規な糖鎖高分子を提
供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、カルボキシル
残基を持つポリペプチドに、末端アミノ基を有するオリ
ゴ糖分子をアミド結合させることによりポリペプチド主
鎖に糖分子をペンダントさせた形の糖鎖高分子からな
る。このオリゴ糖分子は、フェニル基等の疎水性基を介
してポリペプチド主鎖に結合させてもよい。
残基を持つポリペプチドに、末端アミノ基を有するオリ
ゴ糖分子をアミド結合させることによりポリペプチド主
鎖に糖分子をペンダントさせた形の糖鎖高分子からな
る。このオリゴ糖分子は、フェニル基等の疎水性基を介
してポリペプチド主鎖に結合させてもよい。
【０００７】さらに本発明は、上記の糖鎖高分子に導入
されたオリゴ糖と特異的に相互作用する器官、組織また
は細胞に対して有効に作用する薬剤を、該糖鎖高分子に
包接させた包接化合物を含む。
されたオリゴ糖と特異的に相互作用する器官、組織また
は細胞に対して有効に作用する薬剤を、該糖鎖高分子に
包接させた包接化合物を含む。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の糖鎖高分子は、カルボン
酸残基を持ち、アミノ基などの塩基性残基を持たないポ
リペプチドを主鎖とし、その主鎖にオリゴ糖分子をアミ
ド結合を介してペンダントさせた基本構造を持つ。
酸残基を持ち、アミノ基などの塩基性残基を持たないポ
リペプチドを主鎖とし、その主鎖にオリゴ糖分子をアミ
ド結合を介してペンダントさせた基本構造を持つ。
【０００９】本発明の第１の実施態様は、カルボキシル
残基を有するポリグルタミン酸やポリアスパラギン酸等
に、末端にアミノ基を導入したオリゴ糖をアミド結合さ
せた糖鎖高分子である。このような糖鎖高分子の具体例
として、下記式（１）で表される糖鎖高分子を挙げるこ
とができる。
残基を有するポリグルタミン酸やポリアスパラギン酸等
に、末端にアミノ基を導入したオリゴ糖をアミド結合さ
せた糖鎖高分子である。このような糖鎖高分子の具体例
として、下記式（１）で表される糖鎖高分子を挙げるこ
とができる。
【００１０】
【化４】
【００１１】これは、ポリグルタミン酸からなる主鎖の
カルボキシル基に、末端にアミノ基を持つラクトース構
造をペンダントさせた糖鎖高分子（以下ＰＧｌｕ-ＬＡ
と略記する）である。
カルボキシル基に、末端にアミノ基を持つラクトース構
造をペンダントさせた糖鎖高分子（以下ＰＧｌｕ-ＬＡ
と略記する）である。
【００１２】本発明の第２の実施態様は、前記オリゴ糖
分子が、疎水性基を介してポリペプチド主鎖に結合して
いる。このような糖鎖高分子の具体例として、下記式
（２）及び（３）で表される糖鎖高分子を挙げることが
できる。
分子が、疎水性基を介してポリペプチド主鎖に結合して
いる。このような糖鎖高分子の具体例として、下記式
（２）及び（３）で表される糖鎖高分子を挙げることが
できる。
【００１３】
【化５】
【００１４】
【化６】
【００１５】上記式（２）は、ポリグルタミン酸からな
る主鎖のカルボキシル基に、ｐ−キシレンジアミンを介
してラクトースをペンダントさせた糖鎖高分子（以下Ｐ
Ｇｌｕ-Ｘｙ-ＬＡと略記する）であり、式（３）は、主
鎖としてポリアスパラギン酸を用いた糖鎖高分子（以下
ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡと略記する）である。
る主鎖のカルボキシル基に、ｐ−キシレンジアミンを介
してラクトースをペンダントさせた糖鎖高分子（以下Ｐ
Ｇｌｕ-Ｘｙ-ＬＡと略記する）であり、式（３）は、主
鎖としてポリアスパラギン酸を用いた糖鎖高分子（以下
ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡと略記する）である。
【００１６】これらの糖鎖高分子は、およそ次のように
して合成することができる。式（１）で表されるＰＧｌ
ｕ-ＬＡの場合、まず下記反応式に従って、ラクトース
の１位のＯＨ基をアミノ基に変換してβ−ラクトシルア
ミンとする。
して合成することができる。式（１）で表されるＰＧｌ
ｕ-ＬＡの場合、まず下記反応式に従って、ラクトース
の１位のＯＨ基をアミノ基に変換してβ−ラクトシルア
ミンとする。
【００１７】
【化７】
【００１８】次いで、このβ−ラクトシルアミンを、別
に用意したポリグルタミン酸にカップリングさせて上記
式（１）のＰＧｌｕ-ＬＡを得る。
に用意したポリグルタミン酸にカップリングさせて上記
式（１）のＰＧｌｕ-ＬＡを得る。
【００１９】式（２）で表されるＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡを
合成するには、ラクトースの１位をラクトン化し、この
ラクトースラクトンとｐ−キシレンジアミンとを、下記
式に従って反応させて、１−アミノメチル−４−ベンジ
ル［Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ
−グルコンアミド］（以下Ｘｙ-ＬＡと略記）とする。
合成するには、ラクトースの１位をラクトン化し、この
ラクトースラクトンとｐ−キシレンジアミンとを、下記
式に従って反応させて、１−アミノメチル−４−ベンジ
ル［Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｄ
−グルコンアミド］（以下Ｘｙ-ＬＡと略記）とする。
【００２０】
【化８】
【００２１】このＸｙ-ＬＡを、別に用意したポリグル
タミン酸にカップリングして、ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡを得
る。
タミン酸にカップリングして、ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡを得
る。
【００２２】式（３）で表されるＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡ
は、ポリグルタミン酸の代わりにポリアスパラギン酸を
用い、上記ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡの合成と同様にＸｙ-Ｌ
Ａをカップリングさせて得ることができる。
は、ポリグルタミン酸の代わりにポリアスパラギン酸を
用い、上記ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡの合成と同様にＸｙ-Ｌ
Ａをカップリングさせて得ることができる。
【００２３】本発明の糖鎖高分子の主鎖として用いられ
るポリペプチドは、塩基性残基を持たず、カルボキシル
残基を有するポリペプチドであればよい。中でも、ポリ
グルタミン酸、ポリアスパラギン酸、あるいはそれらの
組み合わせが好ましい。
るポリペプチドは、塩基性残基を持たず、カルボキシル
残基を有するポリペプチドであればよい。中でも、ポリ
グルタミン酸、ポリアスパラギン酸、あるいはそれらの
組み合わせが好ましい。
【００２４】本発明の糖鎖高分子に用いられるオリゴ糖
は、ラクトース（ＬＡ）、マルトース（ＭＡ）、マンノ
ビオース（Ｍａｎ）等の２糖類を含む任意のオリゴ糖、
あるいは、それらのカルボキシメチル化物、Ｎ−アセチ
ル化物などの誘導体を含み、その目的によって適宜選択
される。
は、ラクトース（ＬＡ）、マルトース（ＭＡ）、マンノ
ビオース（Ｍａｎ）等の２糖類を含む任意のオリゴ糖、
あるいは、それらのカルボキシメチル化物、Ｎ−アセチ
ル化物などの誘導体を含み、その目的によって適宜選択
される。
【００２５】ポリペプチドとオリゴ糖に間に導入される
疎水性基としては、フェニル基、アルキル基、アリール
基等の疎水性炭化水素基であって、両末端に活性アミノ
基を持つものが好適に用いられる。
疎水性基としては、フェニル基、アルキル基、アリール
基等の疎水性炭化水素基であって、両末端に活性アミノ
基を持つものが好適に用いられる。
【００２６】次に、本発明の包接化合物について説明す
る。本発明の包接化合物は、糖鎖高分子と、それに包接
される機能性物質とからなり、糖鎖高分子に含まれるオ
リゴ糖の細胞もしくは臓器特異的な性質と、機能性物質
の機能とを合わせ持っている。この機能性物質が難溶性
または不溶性物質である場合は、糖鎖高分子主鎖に対す
る脂溶性相互作用を利用して包接させてもよいし、機能
性物質がアミノ基等の塩基性基を有している場合には、
糖鎖高分子のカルボキシル残基に共有結合させて包接し
てもよい。
る。本発明の包接化合物は、糖鎖高分子と、それに包接
される機能性物質とからなり、糖鎖高分子に含まれるオ
リゴ糖の細胞もしくは臓器特異的な性質と、機能性物質
の機能とを合わせ持っている。この機能性物質が難溶性
または不溶性物質である場合は、糖鎖高分子主鎖に対す
る脂溶性相互作用を利用して包接させてもよいし、機能
性物質がアミノ基等の塩基性基を有している場合には、
糖鎖高分子のカルボキシル残基に共有結合させて包接し
てもよい。
【００２７】本発明の包接化合物の一実施態様として、
上述した糖鎖高分子と、それに包接される脂溶性治療薬
とからなる包接化合物を挙げることができる。この包接
化合物は、糖鎖高分子に導入されたオリゴ糖の、生体内
器官、組織、あるいは細胞に対する特異的親和性を利用
している。
上述した糖鎖高分子と、それに包接される脂溶性治療薬
とからなる包接化合物を挙げることができる。この包接
化合物は、糖鎖高分子に導入されたオリゴ糖の、生体内
器官、組織、あるいは細胞に対する特異的親和性を利用
している。
【００２８】例えば、上記式（１）のＰＧｌｕ-ＬＡに
導入されたラクトースは、肝実質細胞表面にあるレセプ
ターに特異的に認識される。従って、肝治療薬をＰＧｌ
ｕ-ＬＡに包接させた包接化合物は、肝実質細胞とラク
トースとの特異的親和性に基づいて肝臓まで選択的に輸
送されるので、他の器官や組織に影響を与えずに肝治療
を行うことができる。
導入されたラクトースは、肝実質細胞表面にあるレセプ
ターに特異的に認識される。従って、肝治療薬をＰＧｌ
ｕ-ＬＡに包接させた包接化合物は、肝実質細胞とラク
トースとの特異的親和性に基づいて肝臓まで選択的に輸
送されるので、他の器官や組織に影響を与えずに肝治療
を行うことができる。
【００２９】包接化合物として用いる場合、主鎖をなす
ポリペプチドとしては、通常分子量１万以上、好ましく
は５万以上のものが利用できるが、さらに高分子量のも
のを用いることも可能である。この包接化合物にあって
は、包接される薬剤の大きさにもよるが、２分子または
それ以上の糖鎖高分子が薬剤を包接することもある。
ポリペプチドとしては、通常分子量１万以上、好ましく
は５万以上のものが利用できるが、さらに高分子量のも
のを用いることも可能である。この包接化合物にあって
は、包接される薬剤の大きさにもよるが、２分子または
それ以上の糖鎖高分子が薬剤を包接することもある。
【００３０】本発明の包接化合物は、溶液法、混練法等
の方法によって調製することができる。溶液法の場合、
糖鎖高分子の水溶液に、脂溶性治療薬を、そのままある
いは水またはアルコールなどの水に可溶な溶媒に溶解ま
たは懸濁して添加し、撹拌する。
の方法によって調製することができる。溶液法の場合、
糖鎖高分子の水溶液に、脂溶性治療薬を、そのままある
いは水またはアルコールなどの水に可溶な溶媒に溶解ま
たは懸濁して添加し、撹拌する。
【００３１】一般的に、糖鎖高分子の濃度は、１．０×
１０-5から１．０×１０-3Ｍとし、包接される治療薬の
濃度は、１．０×１０-6から１．０×１０-4Ｍとすれ
ば、良好な包接化が達成されるが、用いる治療薬の大き
さや性質によって、これ以外の濃度でも包接化合物を形
成することができる。
１０-5から１．０×１０-3Ｍとし、包接される治療薬の
濃度は、１．０×１０-6から１．０×１０-4Ｍとすれ
ば、良好な包接化が達成されるが、用いる治療薬の大き
さや性質によって、これ以外の濃度でも包接化合物を形
成することができる。
【００３２】混練法の場合、糖鎖高分子に少量の水を加
えてペースト状とし、そこに治療薬を加えて混練するこ
とによって包接化合物を調製する。この包接化合物は、
必要に応じて溶媒洗浄などを行い、さらに精製すること
もできる。
えてペースト状とし、そこに治療薬を加えて混練するこ
とによって包接化合物を調製する。この包接化合物は、
必要に応じて溶媒洗浄などを行い、さらに精製すること
もできる。
【００３３】また、上記式（２）及び（３）で表される
ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ及びＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡのように、
ポリペプチド主鎖とオリゴ糖との間に疎水性基を介在さ
せることにより、脂溶性薬剤の包接能力をさらに向上さ
せることができて好ましい。
ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ及びＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡのように、
ポリペプチド主鎖とオリゴ糖との間に疎水性基を介在さ
せることにより、脂溶性薬剤の包接能力をさらに向上さ
せることができて好ましい。
【００３４】この包接化合物に用いる糖鎖高分子のオリ
ゴ糖種類は、利用しようとする特異性によって選択す
る。例えば、肝実質細胞との特異性を利用する場合は、
ラクトースやマンノビオース（Ｍａｎ）、肝非実質細胞
では、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、血
清組織では、Ｍａｎ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｎ−アセチルマン
ノビオース（ＭａｎＮＡｃ）、リンパ組織では、Ｍａｎ
ＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃを選択するのが好ましい。このよ
うなオリゴ糖の特異性を利用することによって、好適な
ドラッグ・デリバリー・システム（ＤＤＳ）が構築され
る。
ゴ糖種類は、利用しようとする特異性によって選択す
る。例えば、肝実質細胞との特異性を利用する場合は、
ラクトースやマンノビオース（Ｍａｎ）、肝非実質細胞
では、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、血
清組織では、Ｍａｎ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｎ−アセチルマン
ノビオース（ＭａｎＮＡｃ）、リンパ組織では、Ｍａｎ
ＮＡｃ、ＧｌｃＮＡｃを選択するのが好ましい。このよ
うなオリゴ糖の特異性を利用することによって、好適な
ドラッグ・デリバリー・システム（ＤＤＳ）が構築され
る。
【００３５】本発明の糖鎖高分子は、上述した包接化合
物によるＤＤＳの他にも、オリゴ糖の特異性や主鎖の性
質を利用した、細胞診断用マーカー、細胞培養基材など
にも好適に応用されることは言うまでもない。
物によるＤＤＳの他にも、オリゴ糖の特異性や主鎖の性
質を利用した、細胞診断用マーカー、細胞培養基材など
にも好適に応用されることは言うまでもない。
【００３６】
【発明の効果】本発明の糖鎖高分子は、生分解可能なポ
リペプチドを主鎖とするので、生体内において分解され
安全である。また、糖鎖高分子に導入されたオリゴ糖の
特異的親和性により、例えば、特定の細胞に薬剤を特異
的に輸送して作用させるＤＤＳにも用いることができ
る。さらに、ポリペプチド主鎖とオリゴ糖との間に疎水
性基を導入することにより、塩基性基を有する物質の
他、特に脂溶性の高い薬剤を包接する能力が向上する。
リペプチドを主鎖とするので、生体内において分解され
安全である。また、糖鎖高分子に導入されたオリゴ糖の
特異的親和性により、例えば、特定の細胞に薬剤を特異
的に輸送して作用させるＤＤＳにも用いることができ
る。さらに、ポリペプチド主鎖とオリゴ糖との間に疎水
性基を導入することにより、塩基性基を有する物質の
他、特に脂溶性の高い薬剤を包接する能力が向上する。
【００３７】以下に実施例を挙げ、本発明の糖鎖高分子
をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に
限定されるものではない。
をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に
限定されるものではない。
実施例１：ＰＧｌｕ-ＬＡの合成 （１）β−ラクトシルアミンの調整 ラクトース１水和物１ｇを水５０ｍＬに溶解させ、炭酸
水素アンモニウムを飽和させながら、３７℃で７日間撹
拌した。反応終了後、水１５０ｍＬを加えて減圧濃縮す
る操作を繰り返して過剰の炭酸水素アンモニウムを除去
し、β−ラクトシルアミンを粉末として得た。
水素アンモニウムを飽和させながら、３７℃で７日間撹
拌した。反応終了後、水１５０ｍＬを加えて減圧濃縮す
る操作を繰り返して過剰の炭酸水素アンモニウムを除去
し、β−ラクトシルアミンを粉末として得た。
【００３８】（２）ポリグルタミン酸６０ｍｇを、ジメ
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１ｍＬに溶解させた。カ
ップリング剤として、（ベンゾトリアゾール−１−イロ
キシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＢＯＰ）６６３ｍｇ及び１−ヒド
ロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）６８ｍｇを用
い、これらを３ｍＬのＤＭＳＯに溶解した溶液を添加し
て室温で１０分間撹拌した。次いで、（１）で得たβ−
ラクトシルアミン０．６１ｇをＤＭＳＯ１ｍＬに溶解し
た溶液を加え、室温で５時間撹拌した。その後、反応液
をゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル：Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ Ｇ−２５）により生成し、凍結乾燥してＰＧｌｕ-Ｌ
Ａを得た。このＰＧｌｕ-ＬＡの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を図１に示す。糖鎖置換度はＮＭＲにより決定した（３
０％）。
チルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１ｍＬに溶解させた。カ
ップリング剤として、（ベンゾトリアゾール−１−イロ
キシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＢＯＰ）６６３ｍｇ及び１−ヒド
ロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）６８ｍｇを用
い、これらを３ｍＬのＤＭＳＯに溶解した溶液を添加し
て室温で１０分間撹拌した。次いで、（１）で得たβ−
ラクトシルアミン０．６１ｇをＤＭＳＯ１ｍＬに溶解し
た溶液を加え、室温で５時間撹拌した。その後、反応液
をゲル濾過クロマトグラフィー（ゲル：Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ Ｇ−２５）により生成し、凍結乾燥してＰＧｌｕ-Ｌ
Ａを得た。このＰＧｌｕ-ＬＡの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を図１に示す。糖鎖置換度はＮＭＲにより決定した（３
０％）。
【００３９】実施例２：ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡの合成 （１）ラクトースのラクトン化 ラクトースを蒸留水に分散させてメタノールで希釈す
る。その希釈した分散液を、加温したヨウ素のメタノー
ル溶液に加え、撹拌した後、水酸化カリウム／メタノー
ル溶液をヨウ素の色が消失するまで徐々に添加する。引
き続き、反応液を氷冷し、析出した沈殿を濾取する。沈
殿を洗浄し再結晶することにより酸カリウム塩を得る。
得られたカリウム塩を、イオン交換樹脂に通すことによ
り酸型とし、その酸型の分画にメタノールを加えて減圧
濃縮して結晶を得る。その結晶を少量のメタノールに溶
かし、さらにエーテルを加えて沈殿させるという操作を
数回繰り返した後、減圧乾固してラクトースラクトンを
得た。
る。その希釈した分散液を、加温したヨウ素のメタノー
ル溶液に加え、撹拌した後、水酸化カリウム／メタノー
ル溶液をヨウ素の色が消失するまで徐々に添加する。引
き続き、反応液を氷冷し、析出した沈殿を濾取する。沈
殿を洗浄し再結晶することにより酸カリウム塩を得る。
得られたカリウム塩を、イオン交換樹脂に通すことによ
り酸型とし、その酸型の分画にメタノールを加えて減圧
濃縮して結晶を得る。その結晶を少量のメタノールに溶
かし、さらにエーテルを加えて沈殿させるという操作を
数回繰り返した後、減圧乾固してラクトースラクトンを
得た。
【００４０】（２）Ｘｙ-ＬＡの合成 前記ラクトースラクトン１０ｇをメタノール２０ｍＬに
溶解し、これにｐ−キシレンジアミン３．７８ｇを添加
し、還流下４時間反応させた。沈殿を濾別した後、溶媒
を留去した。残渣をメタノールと少量のエタノールから
再結晶して、１０ｇのＸｙ-ＬＡを得た。このＸｙ-ＬＡ
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図２に示す。
溶解し、これにｐ−キシレンジアミン３．７８ｇを添加
し、還流下４時間反応させた。沈殿を濾別した後、溶媒
を留去した。残渣をメタノールと少量のエタノールから
再結晶して、１０ｇのＸｙ-ＬＡを得た。このＸｙ-ＬＡ
の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図２に示す。
【００４１】（３）ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡの合成 ポリグルタミン酸１ｇをＴＥＭＥＤ緩衝液５０ｍＬに溶
解し、ＷＳＣ２．２ｇを加えて１時間撹拌した後、２．
７ｇのＸｙ-ＬＡを加えて、１日ごとにＷＳＣを２．２
ｇを添加しながら、室温で３日間反応させた。反応終了
後、純水３０Ｌに対して透析を行い、凍結乾燥後して１
ｇのＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡを得た。このＰＧｌｕ-Ｘｙ-Ｌ
Ａの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図３に示す。糖鎖置換度
はＮＭＲにより決定した（２６％）。
解し、ＷＳＣ２．２ｇを加えて１時間撹拌した後、２．
７ｇのＸｙ-ＬＡを加えて、１日ごとにＷＳＣを２．２
ｇを添加しながら、室温で３日間反応させた。反応終了
後、純水３０Ｌに対して透析を行い、凍結乾燥後して１
ｇのＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡを得た。このＰＧｌｕ-Ｘｙ-Ｌ
Ａの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図３に示す。糖鎖置換度
はＮＭＲにより決定した（２６％）。
【００４２】実施例３：ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡの合成 ポリグルタミン酸に換えてポリアスパラギン酸を用いた
以外は、実施例２と同様にしてＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡを得
た。このＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を図４に示す。糖鎖置換度はＮＭＲにより決定した（２
９％）。
以外は、実施例２と同様にしてＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡを得
た。このＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡの1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を図４に示す。糖鎖置換度はＮＭＲにより決定した（２
９％）。
【００４３】実施例４：包接化合物 上記式（１）で表されるＰＧｌｕ-ＬＡの８．７×１０
-4Ｍ水溶液を調製した。この水溶液３．０ｍＬに、ブロ
モフェノールブルー（ＢＰＢ）水溶液（１．０×１０-3
Ｍ）を所定量添加して、各水溶液のＢＰＢ濃度が、３．
３×１０-6Ｍ、６．６×１０-6Ｍ、９．９×１０-6Ｍ、
１．３×１０-5Ｍ、１．６５×１０-5Ｍとなるよう５種
類の溶液を調製して撹拌機で混合した。
-4Ｍ水溶液を調製した。この水溶液３．０ｍＬに、ブロ
モフェノールブルー（ＢＰＢ）水溶液（１．０×１０-3
Ｍ）を所定量添加して、各水溶液のＢＰＢ濃度が、３．
３×１０-6Ｍ、６．６×１０-6Ｍ、９．９×１０-6Ｍ、
１．３×１０-5Ｍ、１．６５×１０-5Ｍとなるよう５種
類の溶液を調製して撹拌機で混合した。
【００４４】上記各濃度の溶液につき、下記条件で差ス
ペクトルを測定した。測定に際しては、試料側セルに
は、上記各溶液３ｍＬを、対称側セルには、ＰＧｌｕ-
ＬＡを添加しないＢＰＢ水溶液３ｍＬを入れた。 測定条件： 測定装置：ＵＶ−２２００（島津自動分光光度計） 測定温度：３０℃ 操作速度：６５０ｎｍ／分 スリット幅：２．０ｎｍ
ペクトルを測定した。測定に際しては、試料側セルに
は、上記各溶液３ｍＬを、対称側セルには、ＰＧｌｕ-
ＬＡを添加しないＢＰＢ水溶液３ｍＬを入れた。 測定条件： 測定装置：ＵＶ−２２００（島津自動分光光度計） 測定温度：３０℃ 操作速度：６５０ｎｍ／分 スリット幅：２．０ｎｍ
【００４５】ＢＰＢ各濃度の差スペクトルを図５に示
す。図中、ａはＢＰＢ無添加、ｂからｇは、各々３．３
×１０-6Ｍ、６．６×１０-6Ｍ、９．９×１０-6Ｍ、
１．３×１０-5Ｍ、１．６５×１０-5ＭのＢＰＢ濃度の
溶液での結果を表している。図から明らかなように、Ｂ
ＰＢの濃度に応じて６００ｎｍ付近のＵＶ吸収値が変化
している。このことから、ＢＰＢがＰＧｌｕ-ＬＡに包
接されていることは明らかである。
す。図中、ａはＢＰＢ無添加、ｂからｇは、各々３．３
×１０-6Ｍ、６．６×１０-6Ｍ、９．９×１０-6Ｍ、
１．３×１０-5Ｍ、１．６５×１０-5ＭのＢＰＢ濃度の
溶液での結果を表している。図から明らかなように、Ｂ
ＰＢの濃度に応じて６００ｎｍ付近のＵＶ吸収値が変化
している。このことから、ＢＰＢがＰＧｌｕ-ＬＡに包
接されていることは明らかである。
【００４６】次に、式（２）で表されるＰＧｌｕ-Ｘｙ-
ＬＡ、及び式（３）で表されるＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡを用
いて、上記と同様の測定を行った。結果を図６及び７に
各々示す。これらの図より、ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ及びＰ
Ａｓｐ-Ｘｙ-ＬＡは、明らかにＢＰＢを包接しており、
ポリペプチド主鎖と糖との間に疎水性基を導入したこれ
らの糖鎖高分子では、疎水性基のないＰＧｌｕ-ＬＡに
比較してさらに包接能が向上していることがわかる。
ＬＡ、及び式（３）で表されるＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡを用
いて、上記と同様の測定を行った。結果を図６及び７に
各々示す。これらの図より、ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ及びＰ
Ａｓｐ-Ｘｙ-ＬＡは、明らかにＢＰＢを包接しており、
ポリペプチド主鎖と糖との間に疎水性基を導入したこれ
らの糖鎖高分子では、疎水性基のないＰＧｌｕ-ＬＡに
比較してさらに包接能が向上していることがわかる。
【図１】 実施例１で合成した本発明の糖鎖高分子の一
例（ＰＧｌｕ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
例（ＰＧｌｕ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
【図２】 実施例２で合成した疎水基を持つラクトース
（Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
（Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
【図３】 実施例２で合成した本発明の糖鎖高分子の他
の例（ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を示す図である。
の例（ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペクトル
を示す図である。
【図４】 実施例３で合成した本発明の糖鎖高分子のさ
らに他の例（ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。
らに他の例（ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡ）の1Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを示す図である。
【図５】 ＰＧｌｕ-ＬＡによるＢＰＢ包接実験の結果
を示す図である。
を示す図である。
【図６】 ＰＧｌｕ-Ｘｙ-ＬＡによるＢＰＢ包接実験の
結果を示す図である。
結果を示す図である。
【図７】 ＰＡｓｐ-Ｘｙ-ＬＡによるＢＰＢ包接実験の
結果を示す図である。
結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 碓氷 泰市 静岡県静岡市小鹿３丁目４番地５ 合同宿 舎844 (72)発明者 赤池 敏宏 東京都保谷市下保谷４−15−23 (72)発明者 多和田 恵美子 岐阜県各務原市三井町５の５ (72)発明者 後藤 光昭 神奈川県川崎市中原区上小田中221 光ハ イツＢ203 (72)発明者 由良 洋文 神奈川県藤沢市湘南台５−９−１−601
Claims (7)
- 【請求項１】 カルボン酸残基を持つポリペプチドを主
鎖とし、その主鎖にアミド結合を介してオリゴ糖を結合
してなることを特徴とする糖鎖高分子。 - 【請求項２】 前記オリゴ糖が、疎水性基を介して前記
ポリペプチド主鎖に結合してなることを特徴とする請求
項１記載の糖鎖高分子。 - 【請求項３】 下記式（１）で表されることを特徴とす
る請求項１記載の糖鎖高分子。 【化１】 - 【請求項４】 下記式（２）で表されることを特徴とす
る請求項２記載の糖鎖高分子。 【化２】 - 【請求項５】 下記式（３）で表されることを特徴とす
る請求項２記載の糖鎖高分子。 【化３】 - 【請求項６】 請求項１から５のいずれかの糖鎖高分子
と機能性薬剤からなることを特徴とする包接化合物。 - 【請求項７】 前記糖鎖高分子が細胞特異性もしくは臓
器特異性を有する糖を含有し、前記機能性薬剤が難溶性
もしくは不溶性物質あるいは塩基性基を有しカルボン酸
残基を介して相互作用する物質であることを特徴とする
請求項６記載の包接化合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2974596A JPH09227600A (ja) | 1996-02-16 | 1996-02-16 | ポリペプチド主鎖を有する糖鎖高分子及びその包接化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2974596A JPH09227600A (ja) | 1996-02-16 | 1996-02-16 | ポリペプチド主鎖を有する糖鎖高分子及びその包接化合物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09227600A true JPH09227600A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=12284645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2974596A Pending JPH09227600A (ja) | 1996-02-16 | 1996-02-16 | ポリペプチド主鎖を有する糖鎖高分子及びその包接化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09227600A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6055199A (en) * | 1998-10-21 | 2000-04-25 | Mitsubishi Denki Kabushiki Kaisha | Test circuit for a semiconductor memory device and method for burn-in test |
-
1996
- 1996-02-16 JP JP2974596A patent/JPH09227600A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6055199A (en) * | 1998-10-21 | 2000-04-25 | Mitsubishi Denki Kabushiki Kaisha | Test circuit for a semiconductor memory device and method for burn-in test |
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|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050315 |
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| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20050906 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |