JPH09227376A - 白血病治療剤 - Google Patents
白血病治療剤Info
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- JPH09227376A JPH09227376A JP4266896A JP4266896A JPH09227376A JP H09227376 A JPH09227376 A JP H09227376A JP 4266896 A JP4266896 A JP 4266896A JP 4266896 A JP4266896 A JP 4266896A JP H09227376 A JPH09227376 A JP H09227376A
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- JP
- Japan
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- leukemia
- tretinoin
- agent
- cells
- tocopheryl
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な白血病治療剤の提供。
【解決手段】 本白血病治療剤は、トレチノイントコフ
ェリルおよび１α,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を有
効成分として成るものである。
ェリルおよび１α,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を有
効成分として成るものである。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、トレチノイントコフェ
リルおよび１α,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（以
下、「ＶＤ3」という）を有効成分とする白血病治療剤
に関する。
リルおよび１α,２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（以
下、「ＶＤ3」という）を有効成分とする白血病治療剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】わが国において、各種疾患の中で癌が死
因の第１位となっており、これに対する新規な治療方法
を早急に確立することが求められている。特に、血液の
癌である白血病に対しては、白血病細胞増殖抑制作用お
よび細胞分化誘導作用を有する薬剤を用い、その治療が
試みられてきた。
因の第１位となっており、これに対する新規な治療方法
を早急に確立することが求められている。特に、血液の
癌である白血病に対しては、白血病細胞増殖抑制作用お
よび細胞分化誘導作用を有する薬剤を用い、その治療が
試みられてきた。
【０００３】天然型レチノイドの活性体であるオールト
ランス−レチノイン酸（以下、「ＲＡ」という）はＰＭ
Ｌ／ＲＡＲα遺伝子転移を伴う急性前骨髄球性白血病患
者の９０％以上を完全に緩解させると報告されている
（New Eng．J．Med. 329：177,1993）。しかし、ＲＡは
副作用が大きく、高用量で投与すると皮膚、中枢神経
系、肝臓などに多くの障害を引き起こし、この高用量投
与による障害の克服がむしろ患者にとって課題となるこ
とすらありうる。さらには、ＲＡを継続して投与する
と、多くの組織で細胞内ＲＡ−結合蛋白のような結合蛋
白が誘導され、その結果、ＲＡの血清中の濃度が減少し
て、白血病治療の目的の達成にそぐわない結果が起こり
得ることも知られている（Blood, 82, 1949，1993年参
照）。そこで、このＲＡを他の制癌剤と組合わせて用い
るか、またはＲＡをその誘導体に転化して上記したＲＡ
の欠点を回避しようとする試みがなされている。
ランス−レチノイン酸（以下、「ＲＡ」という）はＰＭ
Ｌ／ＲＡＲα遺伝子転移を伴う急性前骨髄球性白血病患
者の９０％以上を完全に緩解させると報告されている
（New Eng．J．Med. 329：177,1993）。しかし、ＲＡは
副作用が大きく、高用量で投与すると皮膚、中枢神経
系、肝臓などに多くの障害を引き起こし、この高用量投
与による障害の克服がむしろ患者にとって課題となるこ
とすらありうる。さらには、ＲＡを継続して投与する
と、多くの組織で細胞内ＲＡ−結合蛋白のような結合蛋
白が誘導され、その結果、ＲＡの血清中の濃度が減少し
て、白血病治療の目的の達成にそぐわない結果が起こり
得ることも知られている（Blood, 82, 1949，1993年参
照）。そこで、このＲＡを他の制癌剤と組合わせて用い
るか、またはＲＡをその誘導体に転化して上記したＲＡ
の欠点を回避しようとする試みがなされている。
【０００４】一方、ＶＤ3は骨代謝改善剤として知られ
ているが、ＲＡと同様に分化誘導作用を有し、結腸癌、
乳癌および白血病由来の細胞株の分化を誘導し（Endocr
ineRev. 13, 765, 1992年参照）、制癌剤としての使用
も期待されている。しかしながら、ＶＤ3は低投与量に
おいのみ使用可能で、例えば、その血清中濃度が１０- 9
Ｍを越えると高カルシウム血症等の副作用を生じるた
め、かかる血清中のＶＤ3濃度を招来する投与量での臨
床上の使用は制限されている（Cancer Treat Rep.,69，
1399，1985年参照）。
ているが、ＲＡと同様に分化誘導作用を有し、結腸癌、
乳癌および白血病由来の細胞株の分化を誘導し（Endocr
ineRev. 13, 765, 1992年参照）、制癌剤としての使用
も期待されている。しかしながら、ＶＤ3は低投与量に
おいのみ使用可能で、例えば、その血清中濃度が１０- 9
Ｍを越えると高カルシウム血症等の副作用を生じるた
め、かかる血清中のＶＤ3濃度を招来する投与量での臨
床上の使用は制限されている（Cancer Treat Rep.,69，
1399，1985年参照）。
【０００５】このＲＡとＶＤ3の組合せの技術として、
特開平７−２６７４号公報の従来技術の欄に、両者の併
用はＨＬ−６０白血病細胞の成育阻害および分化誘導に
対し相加的な効果しか生じない旨の記載があり、同公報
に記載の発明は相乗的な効果を得るために、ＲＡおよび
ＶＤ3アナローグを含有する白血病治療剤を開示してい
る。しかし、この発明は、白血病細胞の５０％以上の生
育阻害率を達成するためのＶＤ3アナローグの血清中濃
度は１０-8Ｍ以上であることがその表１の記載から明ら
かで、かかる高濃度におけるＶＤ3アナローグの使用
は、前記した重篤な副作用が予想される所である。かか
る状況から、副作用が少なく、かつ有効な白血病治療剤
の開発が望まれていた。
特開平７−２６７４号公報の従来技術の欄に、両者の併
用はＨＬ−６０白血病細胞の成育阻害および分化誘導に
対し相加的な効果しか生じない旨の記載があり、同公報
に記載の発明は相乗的な効果を得るために、ＲＡおよび
ＶＤ3アナローグを含有する白血病治療剤を開示してい
る。しかし、この発明は、白血病細胞の５０％以上の生
育阻害率を達成するためのＶＤ3アナローグの血清中濃
度は１０-8Ｍ以上であることがその表１の記載から明ら
かで、かかる高濃度におけるＶＤ3アナローグの使用
は、前記した重篤な副作用が予想される所である。かか
る状況から、副作用が少なく、かつ有効な白血病治療剤
の開発が望まれていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】上述したように、生体
に対する副作用が少なく、白血病治療の上で有効な薬剤
が求められているが、現在までに充分に有効な薬剤は見
いだされていない。かかる状況のもとで、既知の白血病
治療剤と比べてより安全かつ有効な治療効果を有する薬
剤を得ることが課題になっている。
に対する副作用が少なく、白血病治療の上で有効な薬剤
が求められているが、現在までに充分に有効な薬剤は見
いだされていない。かかる状況のもとで、既知の白血病
治療剤と比べてより安全かつ有効な治療効果を有する薬
剤を得ることが課題になっている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究の結果、トレチノイントコフ
ェリルをＶＤ3と共に用いれば、ＶＤ3をその副作用が現
れない低用量で用いることによって、生体に対する副作
用がなく、白血病治療の上で極めて有効な薬剤が得られ
ることを見出して本発明を完成させたのである。すなわ
ち、本発明は、トレチノイントコフェリルおよびＶＤ3
を有効成分とする白血病治療剤に関する。
を解決するために鋭意研究の結果、トレチノイントコフ
ェリルをＶＤ3と共に用いれば、ＶＤ3をその副作用が現
れない低用量で用いることによって、生体に対する副作
用がなく、白血病治療の上で極めて有効な薬剤が得られ
ることを見出して本発明を完成させたのである。すなわ
ち、本発明は、トレチノイントコフェリルおよびＶＤ3
を有効成分とする白血病治療剤に関する。
【０００８】トレチノイントコフェリルはＲＡのα−ト
コフェロールエステルであるが、皮膚潰瘍の治療等に使
用されており（本出願人の出願に係る特公平５−２９０
１２号参照）、また、抗腫瘍剤としても知られている
（本出願人の出願に係る特公昭６２−３１６８７号参
照）。また、トレチノイントコフェリルはＲＡの誘導体
でありながら非常に安全性が高く、ラットで静注した際
に、１０００mg／kg以上投与しても薬剤由来の副作用を
示さないことが知られている（本出願人の出願にかかる
特公昭４９−２６６３２号参照）。
コフェロールエステルであるが、皮膚潰瘍の治療等に使
用されており（本出願人の出願に係る特公平５−２９０
１２号参照）、また、抗腫瘍剤としても知られている
（本出願人の出願に係る特公昭６２−３１６８７号参
照）。また、トレチノイントコフェリルはＲＡの誘導体
でありながら非常に安全性が高く、ラットで静注した際
に、１０００mg／kg以上投与しても薬剤由来の副作用を
示さないことが知られている（本出願人の出願にかかる
特公昭４９−２６６３２号参照）。
【０００９】トレチノイントコフェリルはそれ自体白血
病細胞の増殖を多少抑制し、白血病細胞の分化を誘導す
る作用を多少有するが、さらにこれにＶＤ3を併用する
ことにより両者は相乗的な効果を発揮し、ＶＤ3の投与
量を軽減することができ、これによりＶＤ3固有の副作
用の発現を抑制することが出来たのである。
病細胞の増殖を多少抑制し、白血病細胞の分化を誘導す
る作用を多少有するが、さらにこれにＶＤ3を併用する
ことにより両者は相乗的な効果を発揮し、ＶＤ3の投与
量を軽減することができ、これによりＶＤ3固有の副作
用の発現を抑制することが出来たのである。
【００１０】本発明の白血病治療剤の治療対象の白血病
とは、血液学的腫瘍である白血病、特に急性前骨髄球性
白血病およびリンパ腫である。
とは、血液学的腫瘍である白血病、特に急性前骨髄球性
白血病およびリンパ腫である。
【００１１】本発明のトレチノイントコフェリルおよび
ＶＤ3を有効成分とする白血病治療剤は、トレチノイン
トコフェリルとＶＤ3の併用による相乗的な効果が十分
に発揮され、しかもＶＤ3の副作用が生じない低用量、
すなわち、患者の血清中の濃度が１０-9Ｍの濃度以下の
用量で投与されることが必要である。トレチノイントコ
フェリルとＶＤ3の相乗的な効果が十分発揮されるため
の成人（体重６０kgとして）の血清中のトレチノイント
コフェリルの濃度は、１×１０-9Ｍ〜５×１０ -5Ｍであ
る。この両者の血清中の濃度を満足するための成人１日
あたりの具体的な投与量は、トレチノイントコフェリル
として好ましくは１０〜１２００mg、より好ましくは２
００〜６００mgであり、ＶＤ3として好ましくは約０.０
０５μｇ〜５μｇ、より好ましくは約０.０２５μｇ〜
０.５０μｇであり、この２者が同時に投与されること
が必要である。
ＶＤ3を有効成分とする白血病治療剤は、トレチノイン
トコフェリルとＶＤ3の併用による相乗的な効果が十分
に発揮され、しかもＶＤ3の副作用が生じない低用量、
すなわち、患者の血清中の濃度が１０-9Ｍの濃度以下の
用量で投与されることが必要である。トレチノイントコ
フェリルとＶＤ3の相乗的な効果が十分発揮されるため
の成人（体重６０kgとして）の血清中のトレチノイント
コフェリルの濃度は、１×１０-9Ｍ〜５×１０ -5Ｍであ
る。この両者の血清中の濃度を満足するための成人１日
あたりの具体的な投与量は、トレチノイントコフェリル
として好ましくは１０〜１２００mg、より好ましくは２
００〜６００mgであり、ＶＤ3として好ましくは約０.０
０５μｇ〜５μｇ、より好ましくは約０.０２５μｇ〜
０.５０μｇであり、この２者が同時に投与されること
が必要である。
【００１２】このトレチノイントコフェリルおよびＶＤ
3を有効成分とする白血病治療剤の投与方法としては、
例えば、経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投
与、直腸内投与などが挙げられるが、静脈内投与および
皮下投与等の非経口投与が好ましい。
3を有効成分とする白血病治療剤の投与方法としては、
例えば、経口投与、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投
与、直腸内投与などが挙げられるが、静脈内投与および
皮下投与等の非経口投与が好ましい。
【００１３】このトレチノイントコフェリルおよびＶＤ
3を有効成分とする白血病治療剤は、任意慣用の製剤方
法を用いて調製することができる。経口投与剤として
は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、硬カプセル剤、軟
カプセル剤、経口用液体製剤などである。非経口投与用
の剤型としては注射剤、坐剤などが挙げられる。
3を有効成分とする白血病治療剤は、任意慣用の製剤方
法を用いて調製することができる。経口投与剤として
は、例えば、錠剤、顆粒剤、粉末剤、硬カプセル剤、軟
カプセル剤、経口用液体製剤などである。非経口投与用
の剤型としては注射剤、坐剤などが挙げられる。
【００１４】これらの製剤の調製にあったては製剤化の
ための慣用の添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、
溶解剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味剤、着色剤、香
味剤、酸化防止剤などを添加して通常の方法で製造する
ことができる。これらの添加剤としては、例えばデンプ
ン、白糖、果糖、乳糖、ブドウ糖、マンニトール、ソル
ビトール、沈降性炭酸カルシウム、結晶セルロース、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストリン、ゼラチン、
アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。
ための慣用の添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、
溶解剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味剤、着色剤、香
味剤、酸化防止剤などを添加して通常の方法で製造する
ことができる。これらの添加剤としては、例えばデンプ
ン、白糖、果糖、乳糖、ブドウ糖、マンニトール、ソル
ビトール、沈降性炭酸カルシウム、結晶セルロース、カ
ルボキシメチルセルロース、デキストリン、ゼラチン、
アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース等が挙げられる。
【００１５】このトレチノイントコフェリルおよびＶＤ
3を有効成分とする白血病治療剤を液剤、注射剤として
用いるときは活性成分を慣用の希釈剤中に溶解または懸
濁して用いることができる。希釈剤としては、生理食塩
水、リンゲル液、ブドウ糖水溶液、アルコール類、脂肪
酸エステル類、グリコール類、グリセリン、脂肪酸グリ
セリド、動植物由来の油脂、パラフィン類などが含まれ
る。注射剤は、必要によりｐＨ調製剤、緩衝剤、安定化
剤、保存剤、可溶化剤などを添加し常法により調製され
る。
3を有効成分とする白血病治療剤を液剤、注射剤として
用いるときは活性成分を慣用の希釈剤中に溶解または懸
濁して用いることができる。希釈剤としては、生理食塩
水、リンゲル液、ブドウ糖水溶液、アルコール類、脂肪
酸エステル類、グリコール類、グリセリン、脂肪酸グリ
セリド、動植物由来の油脂、パラフィン類などが含まれ
る。注射剤は、必要によりｐＨ調製剤、緩衝剤、安定化
剤、保存剤、可溶化剤などを添加し常法により調製され
る。
【００１６】以下、実施例により本発明を具体的に説明
する。なお、本発明はこれらの実施例により限定される
ものではない。
する。なお、本発明はこれらの実施例により限定される
ものではない。
【００１７】
【実施例】以下の製造例、実施例で用いた薬剤、試薬等
は以下の方法により入手した。トレチノイントコフェリ
ルは特公昭４９−２６６３２号に従い合成を行なった。
ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳＯ」という）お
よびＶＤ3は和光純薬工業社製のものを用いた。ニトロ
ブルーテトラゾリウム（以下、「ＮＢＴ」という）、Ｒ
Ａ、α−トコフェロールおよびホルボール−１２−ミリ
ステート１３−アセテート（以下「ＴＰＡ」という）は
シグマ社製のものを用いた。
は以下の方法により入手した。トレチノイントコフェリ
ルは特公昭４９−２６６３２号に従い合成を行なった。
ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳＯ」という）お
よびＶＤ3は和光純薬工業社製のものを用いた。ニトロ
ブルーテトラゾリウム（以下、「ＮＢＴ」という）、Ｒ
Ａ、α−トコフェロールおよびホルボール−１２−ミリ
ステート１３−アセテート（以下「ＴＰＡ」という）は
シグマ社製のものを用いた。
【００１８】（製造例）ＲＡ９ｇとＤＬ−α−トコフェ
ロール１４ｇを無水ジオキサン１００mlに溶解し、この
溶液に、トリフルオロ酢酸無水物１０ｇを無水ジオキサ
ンに溶解した溶液を、１０℃以下で撹拌しつつ滴下し
た。滴下終了後４０℃に３時間放置し、反応物をエチル
エーテルで抽出し、この抽出液を水、稀アルカリ水溶
液、水にて順次洗浄し、エチルエーテル層を無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥後、溶媒を減圧留去し、淡黄色油状物
質２２ｇを得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー
にて精製を行い、２％エチルエーテル含有ヘキサンにて
溶出してくる黄色を示すフラクションを集め、溶媒を留
去すると、明黄色油状のＲＡのＤＬ−α−トコフェロー
ルエステル、すなわちトレチノイントコフェリル１５ｇ
を得た。
ロール１４ｇを無水ジオキサン１００mlに溶解し、この
溶液に、トリフルオロ酢酸無水物１０ｇを無水ジオキサ
ンに溶解した溶液を、１０℃以下で撹拌しつつ滴下し
た。滴下終了後４０℃に３時間放置し、反応物をエチル
エーテルで抽出し、この抽出液を水、稀アルカリ水溶
液、水にて順次洗浄し、エチルエーテル層を無水硫酸ナ
トリウムにて乾燥後、溶媒を減圧留去し、淡黄色油状物
質２２ｇを得た。これをシリカゲルクロマトグラフィー
にて精製を行い、２％エチルエーテル含有ヘキサンにて
溶出してくる黄色を示すフラクションを集め、溶媒を留
去すると、明黄色油状のＲＡのＤＬ−α−トコフェロー
ルエステル、すなわちトレチノイントコフェリル１５ｇ
を得た。
【００１９】（培養細胞および培養条件）以下に示す測
定および実施例等で用いる培養細胞として、ヒト骨髄単
球性白血病の培養細胞であるＨＬ−６０（ATCC CCL−24
0）、Ｕ９３７（ATCC CRL−1593.2）、ＭＬ−１（Leuke
mia, New York：Grune & Stratton, p.119，1982年参
照）、ＴＨＰ−１（ATCC TIB202）、Ｐ３９／ＴＳＵ〔J
pn. J. Cancer Res.（Gann),75, 1100，1984年参照〕お
よびＰ３１／ＦＵＪ〔Jpn. J. Cancer Res.（Gann),73,
735, 1982年参照〕を、５％のＣＯ2を含む湿った空気
中、３７℃で、１０％のウシ胎児血清（以下、「ＦＢ
Ｓ］という）および８０μg／mlのゲンタマイシンを添
加したＲＰＭＩ１６４０培地（ギブコ ビー・アール・
エル社製）中で、懸濁し培養したものを用いた。ＭＬ−
１はローズウエルパーク癌研究所（米国）から、Ｐ３９
／ＴＳＵおよびＰ３１／ＦＵＪ細胞は財団法人癌研究振
興財団リサーチリソースバンク（東京）から入手した。
定および実施例等で用いる培養細胞として、ヒト骨髄単
球性白血病の培養細胞であるＨＬ−６０（ATCC CCL−24
0）、Ｕ９３７（ATCC CRL−1593.2）、ＭＬ−１（Leuke
mia, New York：Grune & Stratton, p.119，1982年参
照）、ＴＨＰ−１（ATCC TIB202）、Ｐ３９／ＴＳＵ〔J
pn. J. Cancer Res.（Gann),75, 1100，1984年参照〕お
よびＰ３１／ＦＵＪ〔Jpn. J. Cancer Res.（Gann),73,
735, 1982年参照〕を、５％のＣＯ2を含む湿った空気
中、３７℃で、１０％のウシ胎児血清（以下、「ＦＢ
Ｓ］という）および８０μg／mlのゲンタマイシンを添
加したＲＰＭＩ１６４０培地（ギブコ ビー・アール・
エル社製）中で、懸濁し培養したものを用いた。ＭＬ−
１はローズウエルパーク癌研究所（米国）から、Ｐ３９
／ＴＳＵおよびＰ３１／ＦＵＪ細胞は財団法人癌研究振
興財団リサーチリソースバンク（東京）から入手した。
【００２０】（培養細胞の増殖および分化の測定）上記
の培養細胞は、培養プレート中、トレチノイントコフェ
リルおよび／またはＶＤ3を添加し、上記と同様の条件
で培養を行った。培養細胞の数はコールター エレクト
ロニクス社（Coulter Electronics社；英国）製コール
ターカウンターＺＭ型で計測した．また、トレチノイン
トコフェリルおよび／またはＶＤ3の各培養細胞の５０
％増殖阻害濃度（以下、「ＩＣ50値」という）を算出し
た。骨髄単球性白血病の培養細胞の分化誘導の指標とし
て、ＮＢＴ還元活性値を以下の方法に従い測定した。 １) ＮＢＴ試液の調製：１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１
６４０培地１００mlに、ＮＢＴ１００mgをＤＭＳＯ１ml
に溶解したものを加え、さらに１００μ／mlに調製した
ＴＰＡのＤＭＳＯ溶液１００μｌを加え、よく撹拌し、
ＮＢＴ試液とした。 ２) 培養細胞を１０mlの試験管に入れ培養細胞の数を計
測し、その後遠心分離して上清を廃棄したものに、上記
ＮＢＴ試液を１mlずつ添加する。その後、３７℃で３０
分間振とうし、５Ｎ塩酸を０.３ml添加し反応を終了さ
せた後、室温で１〜２時間放置する。室温で放置した前
記培養細胞液を遠心分離し上清を除いたのち、０.７ml
のＤＭＳＯを添加し、分光吸光度計（日立製作所社製Ｕ
−２０００）にて、５６０nmにおける吸光度を測定し、
培養細胞１０7個あたりの吸光度に換算し、これをＮＢ
Ｔ還元活性値とした。ＮＢＴ還元活性値が高くなるとい
うことは、白血病細胞の分化誘導が促進されることを意
味する。
の培養細胞は、培養プレート中、トレチノイントコフェ
リルおよび／またはＶＤ3を添加し、上記と同様の条件
で培養を行った。培養細胞の数はコールター エレクト
ロニクス社（Coulter Electronics社；英国）製コール
ターカウンターＺＭ型で計測した．また、トレチノイン
トコフェリルおよび／またはＶＤ3の各培養細胞の５０
％増殖阻害濃度（以下、「ＩＣ50値」という）を算出し
た。骨髄単球性白血病の培養細胞の分化誘導の指標とし
て、ＮＢＴ還元活性値を以下の方法に従い測定した。 １) ＮＢＴ試液の調製：１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１
６４０培地１００mlに、ＮＢＴ１００mgをＤＭＳＯ１ml
に溶解したものを加え、さらに１００μ／mlに調製した
ＴＰＡのＤＭＳＯ溶液１００μｌを加え、よく撹拌し、
ＮＢＴ試液とした。 ２) 培養細胞を１０mlの試験管に入れ培養細胞の数を計
測し、その後遠心分離して上清を廃棄したものに、上記
ＮＢＴ試液を１mlずつ添加する。その後、３７℃で３０
分間振とうし、５Ｎ塩酸を０.３ml添加し反応を終了さ
せた後、室温で１〜２時間放置する。室温で放置した前
記培養細胞液を遠心分離し上清を除いたのち、０.７ml
のＤＭＳＯを添加し、分光吸光度計（日立製作所社製Ｕ
−２０００）にて、５６０nmにおける吸光度を測定し、
培養細胞１０7個あたりの吸光度に換算し、これをＮＢ
Ｔ還元活性値とした。ＮＢＴ還元活性値が高くなるとい
うことは、白血病細胞の分化誘導が促進されることを意
味する。
【００２１】（薬剤併用効果の分析）上記の培養細胞に
対するトレチノイントコフェリルおよびＶＤ3の併用効
果を評価するためにIsobologram分析を用いた。トレチ
ノイントコフェリルおよびＶＤ3のの相互作用は、以下
に示す古典的なIsobologram式による併用係数（以下
「ＣＩ値」という）を算出することにより定量化した
（Cancer Res., 54, 3494, 1994年参照）。 ＣＩ値 ＝ (Ｄ)1／(Ｄｘ)1 ＋ (Ｄ)2／(Ｄｘ)2 ここで、(Ｄｘ)1はある効果を生み出すために必要なト
レチノイントコフェリルの用量を、(Ｄｘ)2はある効果
を生み出すために必要なＶＤ3の用量を意味し、(Ｄ)1お
よび(Ｄ)2は同じ効果を生み出す組合わせにおいて、ト
レチノイントコフェリルおよびＶＤ3の用量を意味す
る。この算出されたＣＩ値から、二つの薬剤の併用効果
は次のように評価される。 加算的（加法的すなわち相互作用なし） ＣＩ値＝１ 相乗的 ＣＩ値＜１ 拮抗的 ＣＩ値＞１
対するトレチノイントコフェリルおよびＶＤ3の併用効
果を評価するためにIsobologram分析を用いた。トレチ
ノイントコフェリルおよびＶＤ3のの相互作用は、以下
に示す古典的なIsobologram式による併用係数（以下
「ＣＩ値」という）を算出することにより定量化した
（Cancer Res., 54, 3494, 1994年参照）。 ＣＩ値 ＝ (Ｄ)1／(Ｄｘ)1 ＋ (Ｄ)2／(Ｄｘ)2 ここで、(Ｄｘ)1はある効果を生み出すために必要なト
レチノイントコフェリルの用量を、(Ｄｘ)2はある効果
を生み出すために必要なＶＤ3の用量を意味し、(Ｄ)1お
よび(Ｄ)2は同じ効果を生み出す組合わせにおいて、ト
レチノイントコフェリルおよびＶＤ3の用量を意味す
る。この算出されたＣＩ値から、二つの薬剤の併用効果
は次のように評価される。 加算的（加法的すなわち相互作用なし） ＣＩ値＝１ 相乗的 ＣＩ値＜１ 拮抗的 ＣＩ値＞１
【００２２】（統計学的評価）実験の統計学的解析はSt
udent's ｔ−検定を用いて行った。
udent's ｔ−検定を用いて行った。
【００２３】実施例 １ 培養細胞としてＨＬ−６０（２×１０5細胞／ml）を用
い、これにＶＤ3をその濃度が１０-9Ｍになるように添
加し、さらにトレチノイントコフェリルを３×１０-7Ｍ
の濃度になるように添加して４日間培養し、細胞の分化
誘導に対する効果を検討した。比較としてＶＤ3のみを
１０-9Ｍの濃度になるように添加し、トレチノイントコ
フェリルが無添加のものを同様に培養した。細胞の分化
誘導に対する効果はＮＢＴ還元活性値を測定することに
より検討した。結果を表１に示す。数値は３回の実験の
平均値である。
い、これにＶＤ3をその濃度が１０-9Ｍになるように添
加し、さらにトレチノイントコフェリルを３×１０-7Ｍ
の濃度になるように添加して４日間培養し、細胞の分化
誘導に対する効果を検討した。比較としてＶＤ3のみを
１０-9Ｍの濃度になるように添加し、トレチノイントコ
フェリルが無添加のものを同様に培養した。細胞の分化
誘導に対する効果はＮＢＴ還元活性値を測定することに
より検討した。結果を表１に示す。数値は３回の実験の
平均値である。
【００２４】
【表１】
【００２５】表１の結果から、ＶＤ3とトレチノイント
コフェリルを併用した時のＮＢＴ還元活性値は、ＶＤ3
単独の場合の２倍であり、ＨＬ−６０細胞の分化誘導が
飛躍的に促進されることがわかる。
コフェリルを併用した時のＮＢＴ還元活性値は、ＶＤ3
単独の場合の２倍であり、ＨＬ−６０細胞の分化誘導が
飛躍的に促進されることがわかる。
【００２６】実施例 ２ 培養細胞としてＵ９３７（１×１０5細胞／ml）を用
い、これにトレチノイントコフェリルを無添加、３×１
０-8Ｍまたは９×１０-8Ｍの濃度で添加したものに、Ｖ
Ｄ3を１０-9Ｍまでの各濃度で添加して４日間培養し、
細胞の増殖抑制に対する効果を検討した。結果を図１に
示す。数値は３回の実験の平均値である。 また、２×１０4細胞／mlのＵ９３７、ＨＬ−６０、Ｔ
ＨＰ−１、Ｐ３９／ＴＳＵおよびＰ３１／ＦＵＪならび
に４×１０4細胞／mlのＭＬ−１に、各種濃度のトレチ
ノイントコフェリルまたはＶＤ3を添加して６日間培養
し、トレチノイントコフェリルまたはＶＤ3の各培養細
胞のＩＣ50値を求めた。また、ＶＤ3を添加した培養細
胞に、さらに９×１０-8Ｍの濃度のトレチノイントコフ
ェリルを添加し、同様に各培養細胞のＩＣ50値を求め
た。各培養細胞に対するＩＣ50値を算出し、これらの結
果を表２に示す。表２中、ＴＴはトレチノイントコフェ
リルを、−ＴＴはトレチノイントコフェリル無添加を、
＋ＴＴは９×１０-8Ｍの濃度のトレチノイントコフェリ
ル添加を示す。また、ＣＩ値は、前記の式において(Ｄ)
1に９×１０-8Ｍを、(Ｄｘ)1にトレチノイントコフェリ
ルのＩＣ50値を、(Ｄ)2にトレチノイントコフェリル添
加におけるＶＤ3のＩＣ50値を、(Ｄｘ)2にトレチノイン
トコフェリル無添加におけるＶＤ3のＩＣ50値をあては
めて算出した。
い、これにトレチノイントコフェリルを無添加、３×１
０-8Ｍまたは９×１０-8Ｍの濃度で添加したものに、Ｖ
Ｄ3を１０-9Ｍまでの各濃度で添加して４日間培養し、
細胞の増殖抑制に対する効果を検討した。結果を図１に
示す。数値は３回の実験の平均値である。 また、２×１０4細胞／mlのＵ９３７、ＨＬ−６０、Ｔ
ＨＰ−１、Ｐ３９／ＴＳＵおよびＰ３１／ＦＵＪならび
に４×１０4細胞／mlのＭＬ−１に、各種濃度のトレチ
ノイントコフェリルまたはＶＤ3を添加して６日間培養
し、トレチノイントコフェリルまたはＶＤ3の各培養細
胞のＩＣ50値を求めた。また、ＶＤ3を添加した培養細
胞に、さらに９×１０-8Ｍの濃度のトレチノイントコフ
ェリルを添加し、同様に各培養細胞のＩＣ50値を求め
た。各培養細胞に対するＩＣ50値を算出し、これらの結
果を表２に示す。表２中、ＴＴはトレチノイントコフェ
リルを、−ＴＴはトレチノイントコフェリル無添加を、
＋ＴＴは９×１０-8Ｍの濃度のトレチノイントコフェリ
ル添加を示す。また、ＣＩ値は、前記の式において(Ｄ)
1に９×１０-8Ｍを、(Ｄｘ)1にトレチノイントコフェリ
ルのＩＣ50値を、(Ｄ)2にトレチノイントコフェリル添
加におけるＶＤ3のＩＣ50値を、(Ｄｘ)2にトレチノイン
トコフェリル無添加におけるＶＤ3のＩＣ50値をあては
めて算出した。
【００２７】
【表２】
【００２８】図１に示すとおり、トレチノイントコフェ
リル無添加のものは、ＶＤ3の濃度を変えてもほとんど
細胞の増殖を抑制しないのに対し、トレチノイントコフ
ェリルを３×１０-8Ｍまたは９×１０-8Ｍ添加してさら
にＶＤ3を濃度を変えて添加したものは、細胞の増殖を
顕著に抑制することがわかる。また、表２に示すとお
り、トレチノイントコフェリルとＶＤ3の併用は、細胞
の増殖阻害が顕著であり、たとえばＶＤ3を単独で添加
すると、Ｕ９３７細胞の６日培養後のＶＤ3のＩＣ50値
は２２.９×１０-10Ｍであるのに対し、トレチノイント
コフェリルとＶＤ3との併用では、ＶＤ3のＩＣ50濃度を
４.２６×１０-10Ｍ（トレチノイントコフェリル無添加
時の１８.６％）まで低下させ、飛躍的に細胞増殖を阻
害することがわかる。
リル無添加のものは、ＶＤ3の濃度を変えてもほとんど
細胞の増殖を抑制しないのに対し、トレチノイントコフ
ェリルを３×１０-8Ｍまたは９×１０-8Ｍ添加してさら
にＶＤ3を濃度を変えて添加したものは、細胞の増殖を
顕著に抑制することがわかる。また、表２に示すとお
り、トレチノイントコフェリルとＶＤ3の併用は、細胞
の増殖阻害が顕著であり、たとえばＶＤ3を単独で添加
すると、Ｕ９３７細胞の６日培養後のＶＤ3のＩＣ50値
は２２.９×１０-10Ｍであるのに対し、トレチノイント
コフェリルとＶＤ3との併用では、ＶＤ3のＩＣ50濃度を
４.２６×１０-10Ｍ（トレチノイントコフェリル無添加
時の１８.６％）まで低下させ、飛躍的に細胞増殖を阻
害することがわかる。
【００２９】実施例 ３ 培養細胞としてＵ９３７（１×１０5細胞／ml）を用
い、これにトレチノイントコフェリルを各種濃度で添加
し、また、ＶＤ3を無添加、または１０-9Ｍの濃度で添
加した後４日間培養し、分化誘導に対する効果をＮＢＴ
還元活性値を測定することにより検討した。結果を図２
に示す。数値は３回の実験の平均値である。図２に示す
とおり、ＶＤ3が無添加でトレチノイントコフェリルの
みを添加したものは、Ｕ９３７のＮＢＴ還元活性値はほ
とんど変化がなかった。しかし、トレチノイントコフェ
リルとＶＤ3とを併用すると、Ｕ９３７細胞のＮＢＴ還
元活性値を飛躍的に増大させることがわかる。このよう
に、ＶＤ3およびトレチノイントコフェリルを併用する
ことにより、Ｕ９３７細胞の分化誘導に対して相乗効果
が認められた。
い、これにトレチノイントコフェリルを各種濃度で添加
し、また、ＶＤ3を無添加、または１０-9Ｍの濃度で添
加した後４日間培養し、分化誘導に対する効果をＮＢＴ
還元活性値を測定することにより検討した。結果を図２
に示す。数値は３回の実験の平均値である。図２に示す
とおり、ＶＤ3が無添加でトレチノイントコフェリルの
みを添加したものは、Ｕ９３７のＮＢＴ還元活性値はほ
とんど変化がなかった。しかし、トレチノイントコフェ
リルとＶＤ3とを併用すると、Ｕ９３７細胞のＮＢＴ還
元活性値を飛躍的に増大させることがわかる。このよう
に、ＶＤ3およびトレチノイントコフェリルを併用する
ことにより、Ｕ９３７細胞の分化誘導に対して相乗効果
が認められた。
【００３０】実施例 ４ 培養細胞としてＭＬ−１、ＴＨＰ−１およびＰ３９／Ｔ
ＳＵを用い、これらの培養細胞に対するＶＤ3の分化誘
導作用を検討した。これらの培養細胞（２×１０5細胞
／ml）に各種濃度のＶＤ3を添加し、また、トレチノイ
ントコフェリルを無添加または９×１０-8Ｍの濃度で添
加し、４日間培養し、細胞の分化誘導に対する効果をＮ
ＢＴ還元活性値を測定することにより検討した。結果を
表３に示す。数値は３回の実験の平均値である。
ＳＵを用い、これらの培養細胞に対するＶＤ3の分化誘
導作用を検討した。これらの培養細胞（２×１０5細胞
／ml）に各種濃度のＶＤ3を添加し、また、トレチノイ
ントコフェリルを無添加または９×１０-8Ｍの濃度で添
加し、４日間培養し、細胞の分化誘導に対する効果をＮ
ＢＴ還元活性値を測定することにより検討した。結果を
表３に示す。数値は３回の実験の平均値である。
【００３１】
【表３】
【００３２】表３に示されるように、ＶＤ3とトレチノ
イントコフェリルとを併用すると、培養細胞のＮＢＴ還
元活性値が飛躍的に増大し、その結果、細胞の分化誘導
が飛躍的に促進されることがわかる。
イントコフェリルとを併用すると、培養細胞のＮＢＴ還
元活性値が飛躍的に増大し、その結果、細胞の分化誘導
が飛躍的に促進されることがわかる。
【００３３】製剤例 製剤例１ （経口投与用軟カプセル剤） トレチノイントコフェリル５０ｇおよびＶＤ3 ５μｇを
ヤシ油１３０ｇを混合し、均一な溶液とする。別にゼラ
チン９３ｇ、グリセリン１９ｇ、Ｄ−ソルビトール（７
０w／v％）１０ｇ、パラオキシ安息香酸エチル０.４
ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０.２ｇ及び酸化チタ
ン０.４ｇの組成物からなるゼラチン溶液を作りこれを
カプセル皮膜剤として手動式平板打抜法によりトレチノ
イントコフェリル１８０mgおよびＶＤ3 ０.０１８μｇ
を含有するソフトカプセルを製造した。
ヤシ油１３０ｇを混合し、均一な溶液とする。別にゼラ
チン９３ｇ、グリセリン１９ｇ、Ｄ−ソルビトール（７
０w／v％）１０ｇ、パラオキシ安息香酸エチル０.４
ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０.２ｇ及び酸化チタ
ン０.４ｇの組成物からなるゼラチン溶液を作りこれを
カプセル皮膜剤として手動式平板打抜法によりトレチノ
イントコフェリル１８０mgおよびＶＤ3 ０.０１８μｇ
を含有するソフトカプセルを製造した。
【００３４】製剤例２ （注射液） トレチノイントコフェリル５ｇ、ＶＤ3 ０.５μｇダイ
ズ油適量およびベンジルアルコール１ｇを混合し、さら
にダイズ油を使用して全量１００ccとする。本溶液を無
菌操作によりアンプルに２cc分注し、溶閉する。
ズ油適量およびベンジルアルコール１ｇを混合し、さら
にダイズ油を使用して全量１００ccとする。本溶液を無
菌操作によりアンプルに２cc分注し、溶閉する。
【００３５】
【発明の効果】本発明のトレチノイントコフェリルおよ
びＶＤ3を有効成分とする白血病治療剤は、極めて効果
的に白血病細胞の増殖を阻害し且つそれら細胞の分化誘
導を飛躍的に促進する。また、ＶＤ3の血清中濃度が１
０-9Ｍ以下の副作用のない安全な濃度でも白血病の治療
に有効であり、極めて有用である。
びＶＤ3を有効成分とする白血病治療剤は、極めて効果
的に白血病細胞の増殖を阻害し且つそれら細胞の分化誘
導を飛躍的に促進する。また、ＶＤ3の血清中濃度が１
０-9Ｍ以下の副作用のない安全な濃度でも白血病の治療
に有効であり、極めて有用である。
【図１】Ｕ９３７細胞に対して、ＶＤ3を単独で使用し
た場合またはトレチノイントコフェリルとＶＤ3を併用
した場合のＶＤ3の濃度と増殖率との関係を示す。図
中、−●−はＶＤ3単独使用の場合を示し、−▲−はト
レチノイントコフェリル（３×１０-8Ｍ）とＶＤ3併用
の場合を示し、−■−はトレチノイントコフェリル（９
×１０-8Ｍ）とＶＤ3併用の場合を示す。
た場合またはトレチノイントコフェリルとＶＤ3を併用
した場合のＶＤ3の濃度と増殖率との関係を示す。図
中、−●−はＶＤ3単独使用の場合を示し、−▲−はト
レチノイントコフェリル（３×１０-8Ｍ）とＶＤ3併用
の場合を示し、−■−はトレチノイントコフェリル（９
×１０-8Ｍ）とＶＤ3併用の場合を示す。
【図２】Ｕ９３７細胞に対して、ＶＤ3を単独で使用し
た場合またはトレチノイントコフェリルとＶＤ3を併用
した場合のトレチノイントコフェリル濃度とＮＢＴ還元
活性値の関係を示す。図中、−●−はＶＤ3単独使用の
場合を示し、−▲−はトレチノイントコフェリルとＶＤ
3併用の場合を示す。
た場合またはトレチノイントコフェリルとＶＤ3を併用
した場合のトレチノイントコフェリル濃度とＮＢＴ還元
活性値の関係を示す。図中、−●−はＶＤ3単独使用の
場合を示し、−▲−はトレチノイントコフェリルとＶＤ
3併用の場合を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 本間 良夫 埼玉県南埼玉郡菖蒲町菖蒲5013番地474
Claims (2)
- 【請求項１】 トレチノイントコフェリルおよび１α,
２５−ジヒドロキシビタミンＤ3を有効成分とする白血
病治療剤。 - 【請求項２】 成人１日あたりの投与量がトレチノイン
トコフェリル１０〜１２００mgおよび１α,２５−ジヒ
ドロキシビタミンＤ3 ０.０５〜５μgである請求項１記
載の白血病治療剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4266896A JPH09227376A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 白血病治療剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4266896A JPH09227376A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 白血病治療剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09227376A true JPH09227376A (ja) | 1997-09-02 |
Family
ID=12642412
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4266896A Pending JPH09227376A (ja) | 1996-02-29 | 1996-02-29 | 白血病治療剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09227376A (ja) |
-
1996
- 1996-02-29 JP JP4266896A patent/JPH09227376A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Effective date: 20061212 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Effective date: 20071016 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 |