JPH09145623A - 弱発光性粒子の計算法 - Google Patents
弱発光性粒子の計算法Info
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- JPH09145623A JPH09145623A JP8171612A JP17161296A JPH09145623A JP H09145623 A JPH09145623 A JP H09145623A JP 8171612 A JP8171612 A JP 8171612A JP 17161296 A JP17161296 A JP 17161296A JP H09145623 A JPH09145623 A JP H09145623A
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-
- G—PHYSICS
- G06—COMPUTING; CALCULATING OR COUNTING
- G06M—COUNTING MECHANISMS; COUNTING OF OBJECTS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- G06M11/00—Counting of objects distributed at random, e.g. on a surface
-
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- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
-
- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
-
- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 信頼性を上げても工学的および機械的性能を
精緻にする必要はなく、低コストで実現でき、実験室外
での使用を可能にする。 【解決手段】 選択的に蛍光マーカー等による着色で印
を付けた細胞や微生物を、光子蓄積撮像機によって、低
い倍率で少なくとも１つの画像を取得する過程と、少な
くとも１つの２進画像を得るために前記低解像度の画像
の閾値サンプリングを実施する過程と、少なくとも１回
のサイズフィルタリングを実施する過程と、２進画像の
中の所与のサイズ等級に属する対象物の数Ｎを数える過
程とから成る。
精緻にする必要はなく、低コストで実現でき、実験室外
での使用を可能にする。 【解決手段】 選択的に蛍光マーカー等による着色で印
を付けた細胞や微生物を、光子蓄積撮像機によって、低
い倍率で少なくとも１つの画像を取得する過程と、少な
くとも１つの２進画像を得るために前記低解像度の画像
の閾値サンプリングを実施する過程と、少なくとも１回
のサイズフィルタリングを実施する過程と、２進画像の
中の所与のサイズ等級に属する対象物の数Ｎを数える過
程とから成る。
Description
【０００１】
【０００２】本発明は弱発光性粒子の計算法、特に数え
られる微生物と細胞に選択的に印を付ける着色された、
または蛍光マーカーによって印を付けた細胞と微生物の
計算のための方法に関するものである。
られる微生物と細胞に選択的に印を付ける着色された、
または蛍光マーカーによって印を付けた細胞と微生物の
計算のための方法に関するものである。
【０００３】
【０００４】先行技術による方法は極めて大きな倍率で
画像を取得し、輪郭認識などの、形状認識情報処理によ
ってこの画像を分析するものである。数える対象物の詳
細画像を得るために必要な高い倍率と、この対象物の極
めて低い密度の故に、標本の上の極めて多数の場を走査
し、次いで標本内の対象物の密度を演繹するために統計
解析を実施する必要がある。
画像を取得し、輪郭認識などの、形状認識情報処理によ
ってこの画像を分析するものである。数える対象物の詳
細画像を得るために必要な高い倍率と、この対象物の極
めて低い密度の故に、標本の上の極めて多数の場を走査
し、次いで標本内の対象物の密度を演繹するために統計
解析を実施する必要がある。
【０００５】自働機械の進歩は当業者の自然な傾向が、
ペトリ箱内の培地の上の培養によって形成されたコロニ
ーの肉眼による計数から膜濾過と画像処理による自動計
数の組み合わせに、次いで分析する場の数を増加させる
ためにＸ−Ｙ位置と、深度についての顕微鏡移動の自動
化に向かう、事象の個別計数の継続的な改良にあること
を示している。同じく事象の個別計数原理に基づき、流
れ細胞計数と呼ばれている別の方法は、搬送流れ内の事
象の通過を個別に数えるものである。
ペトリ箱内の培地の上の培養によって形成されたコロニ
ーの肉眼による計数から膜濾過と画像処理による自動計
数の組み合わせに、次いで分析する場の数を増加させる
ためにＸ−Ｙ位置と、深度についての顕微鏡移動の自動
化に向かう、事象の個別計数の継続的な改良にあること
を示している。同じく事象の個別計数原理に基づき、流
れ細胞計数と呼ばれている別の方法は、搬送流れ内の事
象の通過を個別に数えるものである。
【０００６】事象の単位計数は対象物の高い判別を保証
する完成された光学手段を使用しない限り不可能であ
る。通常はビデオカメラと、細密画像を得ることのでき
る、従って標本の微小部分をカバーする高倍率顕微鏡を
組み合わせる。この高性能で、従って、壊れやすい、光
学手段は、統計的に有意な数の場を走査できるように、
対物レンズに対して標本載物台を３次元に微少移動させ
ることを確実にする、高性能機械的手段に組み合わされ
る。従って、信頼性を上げれば、光学的および機械的性
能が精緻になり、コストが増加し、実験室外での使用が
難しくなることを明らかである。
する完成された光学手段を使用しない限り不可能であ
る。通常はビデオカメラと、細密画像を得ることのでき
る、従って標本の微小部分をカバーする高倍率顕微鏡を
組み合わせる。この高性能で、従って、壊れやすい、光
学手段は、統計的に有意な数の場を走査できるように、
対物レンズに対して標本載物台を３次元に微少移動させ
ることを確実にする、高性能機械的手段に組み合わされ
る。従って、信頼性を上げれば、光学的および機械的性
能が精緻になり、コストが増加し、実験室外での使用が
難しくなることを明らかである。
【０００７】
【０００８】本発明は、事象の単位計数技術を改良する
ことにあるこの方法とは全く反対に、光子蓄積撮像機に
よって低い倍率で媒体の上に固定された印を付けた微生
物と細胞の画像を取得することを提案する。低倍率は、
先行技術の単位計数装置に通常使用される顕微鏡よりも
かなり低い倍率、例えば１００未満の倍率を意味する。
ことにあるこの方法とは全く反対に、光子蓄積撮像機に
よって低い倍率で媒体の上に固定された印を付けた微生
物と細胞の画像を取得することを提案する。低倍率は、
先行技術の単位計数装置に通常使用される顕微鏡よりも
かなり低い倍率、例えば１００未満の倍率を意味する。
【０００９】
【００１０】本発明によれば、前記発光粒子の変化速度
に対して短時間の間に、光子蓄積撮像機によって、異な
る取得時間に対応する複数個の画像Ｉiを取得し、２進
画像Ｉｂiを得るためにそれぞれの画像Ｉiについて閾値
サンプリング（seuillage）を行い、少なくとも1回のサ
イズフィルタリングを実施し、発光粒子の数がＮiの最
大値に対応する、２進画像Ｉｂiのそれぞれの中の所与
のサイズ等級に属する対象物の数Ｎiが数えられる。
に対して短時間の間に、光子蓄積撮像機によって、異な
る取得時間に対応する複数個の画像Ｉiを取得し、２進
画像Ｉｂiを得るためにそれぞれの画像Ｉiについて閾値
サンプリング（seuillage）を行い、少なくとも1回のサ
イズフィルタリングを実施し、発光粒子の数がＮiの最
大値に対応する、２進画像Ｉｂiのそれぞれの中の所与
のサイズ等級に属する対象物の数Ｎiが数えられる。
【００１１】蓄積撮像機はダイナミクスが極めて大きな
信号を発生し、信号は数値処理との組み合わせで、低解
像度でも正確な結果を得ることを可能にする。特に、光
子蓄積撮像機による取得は合焦の必要性をなくし、観察
場に対して同時に、均一に作業することを可能にする。
信号を発生し、信号は数値処理との組み合わせで、低解
像度でも正確な結果を得ることを可能にする。特に、光
子蓄積撮像機による取得は合焦の必要性をなくし、観察
場に対して同時に、均一に作業することを可能にする。
【００１２】光子の蓄積と本発明による方法の実施は、
低解像度の、従って、広い場をカバーする画像について
利用可能な情報を得ることを可能にする。
低解像度の、従って、広い場をカバーする画像について
利用可能な情報を得ることを可能にする。
【００１３】例えば４倍の低い倍率で光子を数えること
はできるが、決してバクテリアを認識することはできな
い。先行技術の方法と設備の教示するところに反する、
低倍率で、低解像度の画像を取得する手段を利用するこ
とには大きな利点がある。
はできるが、決してバクテリアを認識することはできな
い。先行技術の方法と設備の教示するところに反する、
低倍率で、低解像度の画像を取得する手段を利用するこ
とには大きな利点がある。
【００１４】第１に、合焦の問題が極めて簡単になる
か、解消されてしまう。先行技術の方法では数える対象
物を通る面の上に完全に合焦を保証するために非常に複
雑な手段を使用し、所与の観察場について連続する複数
個の合焦面の走査を必要とすることが多かった。そのた
め計数時間が大幅に増加した。
か、解消されてしまう。先行技術の方法では数える対象
物を通る面の上に完全に合焦を保証するために非常に複
雑な手段を使用し、所与の観察場について連続する複数
個の合焦面の走査を必要とすることが多かった。そのた
め計数時間が大幅に増加した。
【００１５】第２に、低解像度の画像取得は、標本の広
い場、さらには標本全体の探査を可能にする。数えられ
る対象物は一般的に発生率が極めて低いので、この利点
は決定的である。なぜなら、従来技術による方法は標本
全体ではなく、統計的に代表的な場の数だけを一般的に
探査するからである。人工産物（粒子塊、標本内の不均
一な対象物の分布）のために標準偏差が大きな現象につ
いて、このような方法は、標本全体の総合的取得を可能
にする本発明による方法より劣ることに異論の余地はな
い。
い場、さらには標本全体の探査を可能にする。数えられ
る対象物は一般的に発生率が極めて低いので、この利点
は決定的である。なぜなら、従来技術による方法は標本
全体ではなく、統計的に代表的な場の数だけを一般的に
探査するからである。人工産物（粒子塊、標本内の不均
一な対象物の分布）のために標準偏差が大きな現象につ
いて、このような方法は、標本全体の総合的取得を可能
にする本発明による方法より劣ることに異論の余地はな
い。
【００１６】第３に、数値処理は主として２進画像を対
象とし、そのサイズに応じて対象物の２進画像の１つの
等級で主として構成される。それに使用されるアルゴリ
ズムは単純で、強力な計算能力や時間を必要としない
が、反対に、従来技術による方法は複雑で、計算に多く
の時間を要する形状認識と処理の重い方法を基礎として
いる。
象とし、そのサイズに応じて対象物の２進画像の１つの
等級で主として構成される。それに使用されるアルゴリ
ズムは単純で、強力な計算能力や時間を必要としない
が、反対に、従来技術による方法は複雑で、計算に多く
の時間を要する形状認識と処理の重い方法を基礎として
いる。
【００１７】第４に、低出力の蛍光励起源を使用できる
ので、マーカーをとばすことができる。この利点は重要
である、なぜなら計数作業の間のマーカーの劣化を防止
することによって、標本を保存し、あとから測定を確認
することができるからである。
ので、マーカーをとばすことができる。この利点は重要
である、なぜなら計数作業の間のマーカーの劣化を防止
することによって、標本を保存し、あとから測定を確認
することができるからである。
【００１８】第１の変型によれば、サイズフィルタリン
グは数える粒子の見かけの公称断面を越える面積を占め
る２進画像の対象物に関わるものである。
グは数える粒子の見かけの公称断面を越える面積を占め
る２進画像の対象物に関わるものである。
【００１９】第２の変型によれば、サイズフィルタリン
グは数える粒子の見かけの公称断面にほぼ等しい面積を
占める２進画像の対象物に関わるものである。
グは数える粒子の見かけの公称断面にほぼ等しい面積を
占める２進画像の対象物に関わるものである。
【００２０】特定の実施態様によれば、異なるタイプの
粒子の計数のために対象物の複数の等級を決定する。
粒子の計数のために対象物の複数の等級を決定する。
【００２１】本発明は低発光粒子の計算のための設備、
特に発光粒子の励起源と数える粒子の見かけ画像が数ピ
クセルに対応するのに十分な解像度で分析された標本の
画像を形成するのにふさわしい低倍率光学装置に組み合
わされた光子蓄積撮像機を含む、数えられる微生物と細
胞に選択的に印を付ける着色された、または蛍光マーカ
ーによって印を付けた細胞と微生物の計算法のための設
備にも関するものである。蓄積撮像機は小型計算機によ
って制御されて異なる取得時間に対応する複数個の画像
Ｉiを実現し、前記撮像機によって提供された信号は所
与の１つまたは複数個のタイプの粒子の計数を可能にす
る。
特に発光粒子の励起源と数える粒子の見かけ画像が数ピ
クセルに対応するのに十分な解像度で分析された標本の
画像を形成するのにふさわしい低倍率光学装置に組み合
わされた光子蓄積撮像機を含む、数えられる微生物と細
胞に選択的に印を付ける着色された、または蛍光マーカ
ーによって印を付けた細胞と微生物の計算法のための設
備にも関するものである。蓄積撮像機は小型計算機によ
って制御されて異なる取得時間に対応する複数個の画像
Ｉiを実現し、前記撮像機によって提供された信号は所
与の１つまたは複数個のタイプの粒子の計数を可能にす
る。
【００２２】好適には、蓄積撮像機によって発信され、
画像Ｉiのそれぞれに対応する信号は２進画像Ｉｂiを取
得し、また少なくとも１つのサイズフィルタリングと、
発光粒子の数がＮｉの最大値に対応する、２進画像Ｉｂ
ｉのそれぞれに与えられたサイズの等級に属する対象物
の数Ｎｉを減算するための閾値サンプリングを実現する
小型計算機によって処理される。
画像Ｉiのそれぞれに対応する信号は２進画像Ｉｂiを取
得し、また少なくとも１つのサイズフィルタリングと、
発光粒子の数がＮｉの最大値に対応する、２進画像Ｉｂ
ｉのそれぞれに与えられたサイズの等級に属する対象物
の数Ｎｉを減算するための閾値サンプリングを実現する
小型計算機によって処理される。
【００２３】
【００２４】好適実施態様によれば、蓄積撮像機は倍率
が４０未満の光学装置に組み合わされる。
が４０未満の光学装置に組み合わされる。
【００２５】特定の実施態様によれば、標本は光子蓄積
撮像機に組み合わされた光学装置の下を順番に走行バン
ドによって担持される。
撮像機に組み合わされた光学装置の下を順番に走行バン
ドによって担持される。
【００２６】特定の変形実施態様によれば、本発明によ
る設備は、順番に走行するバンドによって形成された標
本準備装置から成り、前記バンドは濾過層と保護フィル
ムの組み合わせによって形成され、前記バンドは数えら
れる粒子を含む液体を付着させるのに適した手段、規定
量のマーキング試薬を供給するのに適した手段、吸引手
段、次いで計数手段の下を順次通過する。
る設備は、順番に走行するバンドによって形成された標
本準備装置から成り、前記バンドは濾過層と保護フィル
ムの組み合わせによって形成され、前記バンドは数えら
れる粒子を含む液体を付着させるのに適した手段、規定
量のマーキング試薬を供給するのに適した手段、吸引手
段、次いで計数手段の下を順次通過する。
【００２７】
【００２８】本発明は付属の図面を参照して下記の説明
を読むことによって一層よく理解できるだろう：図１は
本発明による設備の第１の実施例の断面を示している。
図２は取得時間に応じた対象物の見かけサイズの変化の
グラフを示している。図３は計数法の順序の図式を示し
ている。図４は「蛍光光度」関数グラフを示している。
を読むことによって一層よく理解できるだろう：図１は
本発明による設備の第１の実施例の断面を示している。
図２は取得時間に応じた対象物の見かけサイズの変化の
グラフを示している。図３は計数法の順序の図式を示し
ている。図４は「蛍光光度」関数グラフを示している。
【００２９】図１は本発明による細胞計算設備の実施例
の、断面、概略図を示している。計算はＣＯＢＲＡ（登
録商標）の名前でＢＩＯＭＥＲＩＥＵＸ社から市販され
ている濾過モジュールなどの、使用濾過装置によって形
状が決定される濾過区域（２、３、４）の行列を有する多
孔室の膜（１）によって実施される。
の、断面、概略図を示している。計算はＣＯＢＲＡ（登
録商標）の名前でＢＩＯＭＥＲＩＥＵＸ社から市販され
ている濾過モジュールなどの、使用濾過装置によって形
状が決定される濾過区域（２、３、４）の行列を有する多
孔室の膜（１）によって実施される。
【００３０】標本の準備は濾過と着色によって既知の仕
方で行なわれる。
方で行なわれる。
【００３１】設備は、濾過物（３から５）を担持する指
標を付けた軟質媒体内に多孔膜（２）を導入することを
可能にするトラップによって開く硬質で不透明のケース
（１）を有する。この膜（２）は２本の案内レール
（６、７）の間を摺動する引き出しを形成する金属支え
上に置かれている。
標を付けた軟質媒体内に多孔膜（２）を導入することを
可能にするトラップによって開く硬質で不透明のケース
（１）を有する。この膜（２）は２本の案内レール
（６、７）の間を摺動する引き出しを形成する金属支え
上に置かれている。
【００３２】コンデンサ（９）に結び付けられた紫外線
源（８）が膜（２）を支える引き出しの下に配置されて
いる。マーカーの励起波長内の紫外線を通過させる帯域
フィルタ（１１）は紫外線源のランプ（８）と膜（２）
の間に挿入されている。金属化反射板（１２）は輻射の
一部をフィルタ（１１）に送り返す。
源（８）が膜（２）を支える引き出しの下に配置されて
いる。マーカーの励起波長内の紫外線を通過させる帯域
フィルタ（１１）は紫外線源のランプ（８）と膜（２）
の間に挿入されている。金属化反射板（１２）は輻射の
一部をフィルタ（１１）に送り返す。
【００３３】紫外線ランプの反対側で、設備は倍率が１
０程度、好適には４から４０の間の光学ブロック（１
４）に組み合わされた光子蓄積検出器（１３）を備えて
いる。
０程度、好適には４から４０の間の光学ブロック（１
４）に組み合わされた光子蓄積検出器（１３）を備えて
いる。
【００３４】光子蓄積検出器は、例えば256ビットの768
＊562ピクセルを備えている。
＊562ピクセルを備えている。
【００３５】図２は取得時間に応じた、２進画像上の対
象物の見かけサイズの変化のグラフを示している。
象物の見かけサイズの変化のグラフを示している。
【００３６】時間Ｔ１未満の取得時間について、光子蓄
積撮像機は全く、または画像２進化のために決定された
閾値未満の数の光子しか検出しない。
積撮像機は全く、または画像２進化のために決定された
閾値未満の数の光子しか検出しない。
【００３７】Ｔ１とＴ２の間の取得時間について、対象
物のサイズは取得時間Ｔにほぼ比例して増加する。この
時間帯で、対象物の出現円錐が見いだされ、尖端の２進
化画像上のその位置は発光対象物の重心にほぼ対応して
いる。
物のサイズは取得時間Ｔにほぼ比例して増加する。この
時間帯で、対象物の出現円錐が見いだされ、尖端の２進
化画像上のその位置は発光対象物の重心にほぼ対応して
いる。
【００３８】Ｔ２とＴ３の間の取得時間について、対象
物のサイズはほぼ一定のままか、微増する。光「点」の
見かけサイズは発光対象物の見かけサイズにほぼ対応す
る。以下この区域を「正規円錐」と呼ぶことにする。
物のサイズはほぼ一定のままか、微増する。光「点」の
見かけサイズは発光対象物の見かけサイズにほぼ対応す
る。以下この区域を「正規円錐」と呼ぶことにする。
【００３９】この取得時間帯は比較的長く、あらかじめ
定義したサイズの等級に入る２進化対象物の計数が標本
内の発光体の数を表している時間帯に対応している。
定義したサイズの等級に入る２進化対象物の計数が標本
内の発光体の数を表している時間帯に対応している。
【００４０】Ｔ３とＴ４の間の取得時間について、見か
けの対象物のサイズは、標本の対象物から放射される光
の拡散現象のために、急速に増加する。この時間帯内に
は急勾配の拡散円錐が見いだされる。
けの対象物のサイズは、標本の対象物から放射される光
の拡散現象のために、急速に増加する。この時間帯内に
は急勾配の拡散円錐が見いだされる。
【００４１】取得時間Ｔ４を越えると、点のサイズは急
速に増加して検出器の飽和限界値に達する。この区域は
非常に大きな取得時間について検出できる、地の明るさ
と、取得撮像機に固有のノイズ現象に対応する。
速に増加して検出器の飽和限界値に達する。この区域は
非常に大きな取得時間について検出できる、地の明るさ
と、取得撮像機に固有のノイズ現象に対応する。
【００４２】取得至適時間は光度の強さに応じて対象物
毎に変化する。しかしながら、Ｔ２とＴ３の間に含まれ
る取得時間幅は十分に大きくて、少なくとも画像Ｉｉに
ついて、明るさが極めて低い対象物の正規円錐の始めか
ら、非常に明るい対象物の正規円錐の終わりまでを含ん
でいる。
毎に変化する。しかしながら、Ｔ２とＴ３の間に含まれ
る取得時間幅は十分に大きくて、少なくとも画像Ｉｉに
ついて、明るさが極めて低い対象物の正規円錐の始めか
ら、非常に明るい対象物の正規円錐の終わりまでを含ん
でいる。
【００４３】このため、図３に模式的に示した如く、例
えば増加する、異なる時間の間に取得「一斉砲撃」を実
施する。取得時間の進行は枢要ではない。それは十分な
画像の取得に必要な時間の至適化するような幾何的進行
とすることができる。取得一斉砲撃の総時間は、観察さ
れる現象の変化、特に光度の衰弱、あるいは励起照明の
変動に照らして短くなるだろう。
えば増加する、異なる時間の間に取得「一斉砲撃」を実
施する。取得時間の進行は枢要ではない。それは十分な
画像の取得に必要な時間の至適化するような幾何的進行
とすることができる。取得一斉砲撃の総時間は、観察さ
れる現象の変化、特に光度の衰弱、あるいは励起照明の
変動に照らして短くなるだろう。
【００４４】濾過では２進化画像の数値処理を行う。サ
イズ、即ち隣接するピクセルの数が決定された関数を確
認する２進化画像の全ての対象物を減算する。
イズ、即ち隣接するピクセルの数が決定された関数を確
認する２進化画像の全ての対象物を減算する。
【００４５】この関数は例えば「Ｎピクセルを越える」
関数であり、Ｎピクセルは数えられる対象物の見かけ断
面の平均値に対応する、あるいは「Ｎ−εとＮ＋εピク
セルの間に含まれる」。
関数であり、Ｎピクセルは数えられる対象物の見かけ断
面の平均値に対応する、あるいは「Ｎ−εとＮ＋εピク
セルの間に含まれる」。
【００４６】結果は図３に模式的に示した関数によって
表され、ガウスの関数に対応している。
表され、ガウスの関数に対応している。
【００４７】それぞれの取得の後に提供された画像の処
理は実時間で、あるいは遅延して実現可能で、そのとき
それぞれの画像Ｉｉはメモリに保存され、取得一斉砲撃
の終わりに記憶された画像のそれぞれが処理される。
理は実時間で、あるいは遅延して実現可能で、そのとき
それぞれの画像Ｉｉはメモリに保存され、取得一斉砲撃
の終わりに記憶された画像のそれぞれが処理される。
【００４８】図４は対象物の明るさに応じて、取得した
画像の２進化に使用した閾値Ｖｓに達するために必要な
取得時間を表すグラフを示している。
画像の２進化に使用した閾値Ｖｓに達するために必要な
取得時間を表すグラフを示している。
【００４９】釣り鐘型の第１の区域と基底明度に対応す
る拡散部分が認められる。釣り鐘型の部分は対象物の蛍
光が小さくなったときに拡散部分の方向に移動する（灰
色のグラフ）。
る拡散部分が認められる。釣り鐘型の部分は対象物の蛍
光が小さくなったときに拡散部分の方向に移動する（灰
色のグラフ）。
【００５０】特定の変型によれば本発明は連続制御設備
に関係する。
に関係する。
【００５１】標本は、その上にフィルタを形成するフィ
ルムの第２の層が付着した、ポリエチレンなどのプラス
チック製などの支持材料の層によって形成された巻き出
されるフィルムの上に置かれる。上部の保護フィルムは
定期的に穿孔されて円盤状の濾過区域を呈する。
ルムの第２の層が付着した、ポリエチレンなどのプラス
チック製などの支持材料の層によって形成された巻き出
されるフィルムの上に置かれる。上部の保護フィルムは
定期的に穿孔されて円盤状の濾過区域を呈する。
【００５２】フィルムはロールに巻き取られる。フィル
ムは順次巻き取られて、濾過区域が標本載置手段の下、
１つまたは複数個の試薬付着手段、次いでフィルタ上の
数えられる対象物の濃縮を保証するのに適した吸引区域
の上、次いで観察区域の下を順番に通過する。支持フィ
ルムは濾過フィルムから分離されてから吸引区域を通過
する。
ムは順次巻き取られて、濾過区域が標本載置手段の下、
１つまたは複数個の試薬付着手段、次いでフィルタ上の
数えられる対象物の濃縮を保証するのに適した吸引区域
の上、次いで観察区域の下を順番に通過する。支持フィ
ルムは濾過フィルムから分離されてから吸引区域を通過
する。
【００５３】以上の如く例として記載された本発明は制
限するものではない。当業者は様々な変形を実現するこ
とができるが、それをもって本発明を逸脱することはで
きない。
限するものではない。当業者は様々な変形を実現するこ
とができるが、それをもって本発明を逸脱することはで
きない。
【００５４】
【００５５】本発明によれば、光子蓄積撮像機によっ
て、低い倍率で媒体の上に固定された印を付けた微生物
と細胞の画像を取得するので、信頼性を上げても工学的
および機械的性能を精緻にする必要はなく、低コストで
実現でき、実験室外での使用を可能にする。
て、低い倍率で媒体の上に固定された印を付けた微生物
と細胞の画像を取得するので、信頼性を上げても工学的
および機械的性能を精緻にする必要はなく、低コストで
実現でき、実験室外での使用を可能にする。
【図１】本発明による設備の第１の実施例の断面を示し
ている。
ている。
【図２】取得時間に応じた対象物の見かけサイズの変化
のグラフを示している。
のグラフを示している。
【図３】計数法の順序の図式を示している。
【図４】「蛍光光度」関数グラフを示している。
２ 多孔膜 ６ 案内レール ８ 紫外線源 ９ コンデンサ １１ 帯域フィルタ １２ 金属化反射板 １３ 光子蓄積検出器 １４ 光学ブロック
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０６Ｔ 7/00 Ｇ０６Ｆ 15/62 ３９５
Claims (10)
- 【請求項１】 弱発光性粒子の計算法、特に数えられる
微生物と細胞に選択的に印を付ける着色された、または
蛍光マーカーによって印を付けた細胞と微生物の計算の
ための方法において、光子蓄積撮像機によって低い倍率
で少なくとも１つの画像Ｉを取得する過程と、少なくと
も１つの２進画像Ｉｂを得るために前記低解像度の画像
の閾値サンプリングを実施する過程と、少なくとも１回
のサイズフィルタリングを実施する過程と、２進画像Ｉ
ｂの中の所与のサイズ等級に属する対象物の数Ｎを数え
る過程：とから成ることを特徴とする方法。 - 【請求項２】 請求項１に記載の、弱発光性粒子の計算
法、特に数えられる微生物と細胞に選択的に印を付ける
着色された、または蛍光マーカーによって印を付けた細
胞と微生物の計算のための方法において、前記発光粒子
の変化速度に対して短時間の間に、光子蓄積撮像機によ
って、異なる取得時間に対応する複数個の画像Ｉiを取
得する過程と、２進画像Ｉｂiを得るためにそれぞれの
画像Ｉiについて閾値サンプリングを実施する過程と、
少なくとも1回のサイズフィルタリングを実施する過程
と、発光粒子の数がＮiの最大値に対応する、２進画像
Ｉｂiのそれぞれの中の所与のサイズ等級に属する対象
物の数Ｎiを数える過程：とから成ることを特徴とする
方法。 - 【請求項３】 請求項２に記載の、弱発光性粒子の計算
法、特に着色された、または蛍光マーカーによって印を
付けた細胞と微生物の計算のための方法において、サイ
ズフィルタリングが数える粒子の見かけの公称断面を越
える面積を占める２進画像の対象物に関わることを特徴
とする方法。 - 【請求項４】 請求項２に記載の、弱発光性粒子の計算
法、特に着色された、または蛍光マーカーによって印を
付けた細胞と微生物の計算のための方法において、サイ
ズフィルタリングが数える粒子の見かけの公称断面にほ
ぼ等しい面積を占める２進画像の対象物に関わることを
特徴とする方法。 - 【請求項５】 前記請求項のいずれか一つに記載の、弱
発光性粒子の計算法、特に着色された、または蛍光マー
カーによって印を付けた細胞と微生物の計算のための方
法において、異なるタイプの粒子の計数のために対象物
の複数の等級を決定することを特徴とする方法。 - 【請求項６】 弱発光性粒子の計算設備、特に数えられ
る微生物と細胞に選択的に印を付ける着色された、また
は蛍光マーカーによって印を付けた細胞と微生物の計算
法のための設備において、発光粒子の励起源と数える粒
子の見かけ画像が数ピクセルに対応するのに十分な解像
度で分析された標本の画像を形成するのにふさわしい低
倍率光学装置に組み合わされた光子蓄積撮像機とから成
り、前記蓄積撮像機が小型計算機によって制御されて異
なる取得時間に対応する複数個の画像Ｉiを実現し、分
析された前記撮像機によって提供された信号が所与の１
つまたは複数個のタイプの粒子の計数を可能にすること
を特徴とする設備。 - 【請求項７】 請求項６に記載の、弱発光性粒子の計算
設備、特に数えられる微生物と細胞に選択的に印を付け
る着色された、または蛍光マーカーによって印を付けた
細胞と微生物の計算法のための設備において、蓄積撮像
機によって発信され、画像Ｉiのそれぞれに対応する信
号が２進画像Ｉｂiを取得し、また少なくとも１つのサ
イズフィルタリングと、発光粒子の数がＮｉの最大値に
対応する、２進画像Ｉｂｉのそれぞれに与えられたサイ
ズの等級に属する対象物の数Ｎｉを減算するための閾値
サンプリングを実現する小型計算機によって処理される
ことを特徴とする設備。 - 【請求項８】 請求項６または７に記載の、弱発光性粒
子の計算設備、特に数えられる微生物と細胞に選択的に
印を付ける着色された、または蛍光マーカーによって印
を付けた細胞と微生物の計算法のための設備において、
蓄積撮像機が倍率が４０未満の光学装置に組み合わされ
ることを特徴とする設備。 - 【請求項９】 請求項６から８のいずれか一つに記載
の、弱発光性粒子の計算設備、特に数えられる微生物と
細胞に選択的に印を付ける着色された、または蛍光マー
カーによって印を付けた細胞と微生物の計算法のための
設備において、標本が光子蓄積撮像機に組み合わされた
光学装置の下を順番に走行バンドによって担持されるこ
とを特徴とする設備。 - 【請求項１０】請求項９に記載の、弱発光性粒子の計算
設備、特に数えられる微生物と細胞に選択的に印を付け
る着色された、または蛍光マーカーによって印を付けた
細胞と微生物の計算法のための設備において、順番に走
行するバンドによって形成された標本準備装置から成
り、前記バンドは濾過層と保護フィルムの組み合わせに
よって形成され、前記バンドは数えられる粒子を含む液
体を付着させるのに適した手段、規定量のマーキング試
薬を供給するのに適した手段、吸引手段、次いで計数手
段の下を順次通過することを特徴とする設備。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9506923A FR2735255B1 (fr) | 1995-06-12 | 1995-06-12 | Procede de numerisation de particules faiblement luminescentes |
| FR9506923 | 1995-06-12 | ||
| US08/662,312 US5828716A (en) | 1995-06-12 | 1996-06-12 | Procedure for identifying the number of particles that are weakly luminescent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09145623A true JPH09145623A (ja) | 1997-06-06 |
Family
ID=26232019
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8171612A Pending JPH09145623A (ja) | 1995-06-12 | 1996-06-12 | 弱発光性粒子の計算法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5828716A (ja) |
| EP (1) | EP0753732B1 (ja) |
| JP (1) | JPH09145623A (ja) |
| AT (1) | ATE241006T1 (ja) |
| DE (1) | DE69628240T2 (ja) |
| DK (1) | DK0753732T3 (ja) |
| FR (1) | FR2735255B1 (ja) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6731100B1 (en) | 1997-05-05 | 2004-05-04 | Chemometec A/S | Method and a system for determination of somatic cells in milk |
| WO1998050577A1 (en) | 1997-05-05 | 1998-11-12 | Chemometec A/S | A method and a system for determination of somatic cells in milk |
| US6385272B1 (en) * | 1998-12-28 | 2002-05-07 | Sapporo Breweries Ltd. | Method of counting microorganisms and device for accomplishing the counting |
| WO2002101087A1 (en) * | 2001-06-08 | 2002-12-19 | Chemometec A/S | A method and a system for counting cells from a plurality of species |
| US6418180B1 (en) * | 2001-07-19 | 2002-07-09 | Marvin Weiss | Method and apparatus for counting objects having substantially uniform size |
| US6803208B2 (en) * | 2001-07-30 | 2004-10-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Automated epifluorescence microscopy for detection of bacterial contamination in platelets |
| CA2459320C (en) * | 2001-09-06 | 2016-07-05 | Genomic Profiling Systems, Inc. | Rapid detection of replicating cells |
| US7341841B2 (en) * | 2003-07-12 | 2008-03-11 | Accelr8 Technology Corporation | Rapid microbial detection and antimicrobial susceptibility testing |
| US20120077206A1 (en) | 2003-07-12 | 2012-03-29 | Accelr8 Technology Corporation | Rapid Microbial Detection and Antimicrobial Susceptibility Testing |
| WO2005027714A2 (en) | 2003-07-12 | 2005-03-31 | Accelr8 Technology Corporation | Sensitive and rapid biodetection |
| CA2623408C (en) | 2005-09-26 | 2014-04-01 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cassette containing growth medium |
| WO2010006616A2 (en) | 2008-07-14 | 2010-01-21 | Chemometec A/S | Method and kit for examination of cells using n-(9-acridinyl)maleimide (nam) or using 7-diethylamino-3-((4'-(iodoacetyl)amino)phenyl)-4-methylcoumarin (cpi) |
| DK2312943T3 (da) | 2008-07-14 | 2020-02-03 | Chemometec As | Fremgangsmåde til vurdering af levedygtige celler og anvendelse af N-(7-dimethylamino-4-methyl-3-coumarinyl)-maleimid (DACM) eller N-(9-acridinyl)maleimid (NAM) til vurdering af apoptose |
| FR2936252B1 (fr) | 2008-09-23 | 2010-11-05 | Millipore Corp | Dispositif pour l'analyse microbiologique. |
| FR2936251B1 (fr) * | 2008-09-23 | 2010-11-05 | Millipore Corp | Dispositif pour l'analyse microbiologique. |
| JP5685538B2 (ja) | 2008-09-24 | 2015-03-18 | ストラウス ホールディングス インコーポレイテッド | 分析物を検出するためのキットおよび装置 |
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| US10254204B2 (en) | 2011-03-07 | 2019-04-09 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Membrane-assisted purification |
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| EP4060016A1 (en) | 2012-04-16 | 2022-09-21 | Rapid Micro Biosystems, Inc. | Cell culturing device |
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| EP3278115A2 (en) | 2015-03-30 | 2018-02-07 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Instrument and system for rapid microorganism identification and antimicrobial agent susceptibility testing |
| US10253355B2 (en) | 2015-03-30 | 2019-04-09 | Accelerate Diagnostics, Inc. | Instrument and system for rapid microorganism identification and antimicrobial agent susceptibility testing |
| CN104849444B (zh) * | 2015-05-20 | 2016-11-30 | 大连海事大学 | 荧光和遮挡同时测量的细胞计数装置及方法 |
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|---|---|---|---|---|
| US5356793A (en) * | 1990-03-15 | 1994-10-18 | Nitta Gelatin Inc. | Method for testing the sensitivity of anticancer drug |
| DE69219963T2 (de) * | 1991-02-13 | 1997-10-16 | Nihon Millipore Kogyo K K | Verfahren zur bestimmung der zahl lebender mikroorganismen |
| JP3115641B2 (ja) * | 1991-04-24 | 2000-12-11 | シスメックス株式会社 | 粒子計数方法 |
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| US5426501A (en) * | 1993-01-06 | 1995-06-20 | Laser Sensor Technology, Inc. | Apparatus and method for particle analysis |
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-
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- 1995-06-12 FR FR9506923A patent/FR2735255B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
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- 1996-06-07 AT AT96401234T patent/ATE241006T1/de not_active IP Right Cessation
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- 1996-06-07 DE DE69628240T patent/DE69628240T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-07 DK DK96401234T patent/DK0753732T3/da active
- 1996-06-12 JP JP8171612A patent/JPH09145623A/ja active Pending
- 1996-06-12 US US08/662,312 patent/US5828716A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
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| US5828716A (en) | 1998-10-27 |
| EP0753732A3 (fr) | 1997-08-20 |
| FR2735255B1 (fr) | 1998-06-19 |
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| ATE241006T1 (de) | 2003-06-15 |
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| DE69628240T2 (de) | 2004-04-01 |
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