JPH0912475A - 虚血−再灌流障害の予防および治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 虚血−再灌流障害予防・治療薬を提供する 【構成】 バトロキソビンを有効成分として含有するこ
とを特徴とする心筋虚血時、脳虚血時などにおける再灌
流障害の予防および治療薬

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は虚血−再灌流障害の予防
および治療薬に関する。

【０００２】

【従来の技術】虚血−再灌流障害は各種臓器の切開手術
や切除時に虚血に陥った臓器組織の血行再開後に生じる
障害の総称である。このような障害は、血管を含む臓器
移植時に血流を停止し、再開したときなどにも問題とな
る。従って、心臓、脳はもとより腎臓、肝臓、肺臓、膵
臓、消化管など多くの組織で頻繁に起こることが知られ
ている。現在、これらの虚血−再灌流障害の機序とし
て、急激な再酸素化によるエネルギー代謝の亢進や活性
酸素種の増加、過酸化脂質等が障害の原因であると考え
られているが、実際の病態においての詳細は不明であ
る。このような状況のなかで、活性酸素種を消去し、過
酸化脂質生成を抑制できれば、組織機能の低下や壊死が
防止され、組織障害をも抑止し、上記の各種疾患の予防
・治療が可能になると期待される。これまでにも活性酸
素消去剤、あるいは抗酸化剤が種々検討されてきたが、
その作用は強力とは言えず、病態の予防効果や治療効果
は十分なものではない。従って、再灌流障害の予防およ
び治療薬の開発は急務となっている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、虚血−再灌
流障害に対して有効な予防・治療薬を提供することを目
的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】先に、本発明者等はバト
ロキソビンが経皮的血管形成術（ＰＴＡ）後の再狭窄、
動脈硬化症の予防および治療に有効であることを見出
し、特許を出願した（特願平６−３２２０１１号）。本
発明者等はバトロキソビンのもつ薬理作用につき、更に
鋭意研究したところ、虚血−再灌流障害モデルにおいて
細胞障害抑制作用を有することを見出し、本発明を完成
した。本発明に係わるバトロキソビンは「Bothrops atr
ox moojeni蛇毒由来のトロンビン様酵素」であり、市販
の製剤は東菱薬品工業（株）により製造されているバト
ロキソビン製剤があげられる。本発明の虚血−再灌流障
害の予防および治療薬は、心疾患、脳血管障害、腎疾
患、肝疾患、肺疾患、膵疾患等あるいは臓器移植時にお
ける虚血−再灌流障害の予防・治療薬として使用され
る。さらに詳しくは、心筋梗塞時における心筋壊死を減
少させるため、経皮的冠動脈血栓溶解術（ＰＴＣＲ）
や、経皮的冠血管形成術（ＰＴＣＡ）が広く行われるよ
うになっている今日、術後の血流再開後に生じる新たな
心筋障害に対して有効であり、また、脳虚血性疾患にお
いて血流再開後に生じる新たな神経細胞障害に対しても
有効である。バトロキソビン（Bothrops atrox moojeni
蛇毒由来のトロンビン様酵素）製剤１ml中の成分および
分量は、次の通りである。 ───────────────────────────────── バトロキソビン（主成分） １０BU クロロブタノール（防腐剤） ３mg ゼラチン加水分解物（安定化剤） 0.１mg 塩化ナトリウム（等張化剤） ９mg 注射用蒸留水 全量１ml ───────────────────────────────── 本発明によるバトロキソビンの投与量は症状により異な
るが、一般に成人１日１回当たり、１〜２０バトロキソ
ビン単位（Batroxobin Unit,略してＢＵ）であり、な
お、症状により増減できる。これを適宜希釈し、点滴静
脈内投与、静脈内投与、動脈内投与あるいは局所投与す
ることが好ましい。ここで言うバトロキソビン単位と
は、バトロキソビンの酵素活性量を示す単位で、３７℃
で、標準ヒトクエン酸加血漿0.３mlに、バトロキソビン
溶液0.１mlを加えるとき、１9.０±0.２秒で凝固する活
性量を２ＢＵとするものである。

【０００５】バトロキソビンの急性毒性試験はマウス、
ラット、ウサギおよびイヌに静脈内投与して行った。Ｌ
Ｄ₅₀（ＢＵ／kg）は次の通りであった。 ────────────────────────────── 動 物 種 ＬＤ₅₀値（BU／kg） ────────────────────────────── マウス（ddY 系） １９２〜２１０ ラット（Wistar系） １０５〜１１０ ウサギ（NW種） ＞３００ イヌ（雑種） １９０〜２０８ ────────────────────────────── 以下に実施例を示して具体的に説明するが、本発明は実
施例により限定されるものではない。

【０００６】

【実施例１】 犬心筋再灌流モデルにおける虚血−再灌流障害のバトロ
キソビンの予防・治療効果実験方法 体重８〜１２kgの雌雄の雑種成犬１０頭に、ペントバル
ビタールナトリウム３０mg／kgを静脈内投与して麻酔
後、ただちに気管挿管し、人工呼吸を行った。第３およ
び第４肋骨間を切開して開胸した後、心膜を破り心臓を
露出させた。虚血は左冠状動脈前下行枝を周囲の組織か
ら剥離し、オクルーダーで結紮して血行を一時停止させ
た。実験中、血流停止は、冠動脈流量、心電図および左
心室圧をモニターして確認した。再灌流は引き続き結紮
を解除することにより行った。虚血−再灌流障害の評価
は以下のごとく行った。すなわち、結紮９０分後に血行
を再度開通させ、３０分後直ちに飽和塩化カリウム溶液
１０ml注入により心臓停止し、即座に左鎖骨下動脈から
リン酸緩衝液を逆行性に、心臓に灌流して洗浄した後、
狭窄部位を再度結紮し、リン酸緩衝液に溶解した２％エ
バンスブルー溶液１０mlを同様に灌流し、非虚血域を染
色した。その後心臓を摘出し、１cm厚で水平断し、リン
酸緩衝液に溶解した１％ＴＴＣ(Triphenyl Tetrazolium
Chloride)に入れ、染色した。断面上のエバンスブルー
染色陽性領域（青色：非虚血組織域）、エバンスブルー
染色陰性でＴＴＣ染色陽性領域（赤色：冠動脈虚血健常
域）、エバンスブルー染色陰性でＴＴＣ染色陰性領域
（白色：心筋梗塞域）の各領域の面積をプラニメーター
で測定し、これと、それぞれの組織の厚みから、虚血容
積および梗塞容積を求め、〔梗塞容積／虚血容積〕を百
分率で求めた。なお、バトロキソビン投与群（ｎ＝５）
では、バトロキソビン0.５ＢＵ／kgを、血流再灌流開始
３０分前に総頸動脈から投与し、対照群（ｎ＝５）で
は、同様に生理食塩水を同量投与した。

【０００７】結 果 対照群の〔梗塞容積／虚血容積〕は４７±１０％であっ
た。バトロキソビン投与群の〔梗塞容積／虚血容積〕は
２５±５％で、対照群に比べ、心筋梗塞域の壊死拡大を
有意（ｐ＜0.００５）に抑制した（表１）。したがっ
て、バトロキソビンの投与は、心筋の虚血−再灌流障害
に対し、抑制作用を示すことが認められた。

【０００８】

【表１】 表 １ ─────────────────────────────────── 検体群 例数 梗塞容積／虚血容積（％） ─────────────────────────────────── 対照 ５ ４７±１０ バトロキソビン ５ ２５±５＊＊ ─────────────────────────────────── ＊＊ｐ＜0.００５

【０００９】

【実施例２】 ラット脳虚血−再灌流モデルにおける虚血−再灌流障害
のバトロキソビンの予防・治療効果実験方法 体重約２００〜２５０ｇのWistar系雄ラット１８匹を用
い、各群６匹ずつの３群に分け、偽手術群、対照群、バ
トロキソビン投与群とした。ラットを、１０％抱水クロ
ラール（３５０mg／kg）にて麻酔後、定位手術機械に固
定し、両側翼小孔を露出し、電気熱凝固法で両側椎骨動
脈を遮断した。24時間後、同じ麻酔条件で頸部正中を切
開し、両側総頸動脈（Common Carotid Artery, CCA) を
露出し、無損傷鉗子で３０分間、脳波を監視しながらク
ランプした。脳波をとる電極は、一方は前頭鼻正中部
に、一方は頭頂部に装着しモニターした。ＣＣＡの閉鎖
を確認してから３０分後、再びクランプを外し、脳血管
灌流を６時間行った。再灌流終了後、断頭し、脳を摘出
し、ホルマリン固定した。パラフィン包埋後薄切し、海
馬を通る前額断切片を作成し、標本にヘマトキシリン−
エオシン染色を施した。光学顕微鏡下で観察し、海馬Ｃ
Ａｌ部の長さ１mm当りの正常および障害錘体細胞を算出
し、組織の障害度を評価した。バトロキソビン投与群に
は、８ＢＵ／kgを、ＣＣＡをクランプする３０分前に腹
腔内投与した。対照群には、等容量の生理食塩水を投与
した。偽手術群は、両側翼小孔を露出し、２４時間後に
ＣＣＡを露出したが、凝固もクランプも行わず、ＣＣＡ
を露出する３０分前に等容量の生理食塩水を投与した。

【００１０】結 果 偽手術群 ：光学顕微鏡による観察では、異常な所見はみ
られなかった。海馬ＣＡｌ大錐体細胞の生存率は９8.５
±1.６％であった（表２）。対照群 ：光学顕微鏡による観察では、海馬ＣＡｌ領域で
大錐体細胞の萎縮がみられ、細胞質の染色の度合いは深
かった。さらに細胞核は三角形に濃縮しており、細胞間
隙は広くなっていた。海馬ＣＡｌ大錐体細胞の生存率は
５6.４±１9.８％であった（表２）。バトロキソビン投与群 ：光学顕微鏡による観察では、海
馬ＣＡｌ領域で大錐体細胞の萎縮がみられたが、わずか
であった。細胞質の濃染もわずかであった。細胞核およ
び核小体は明瞭であった。細胞間隙も変化なかった。海
馬ＣＡｌ大錐体細胞の生存率は８7.３±5.４％で対照群
に比べて有意（ｐ＜0.０１）であった（表２）。このよ
うに、脳虚血再灌流による細胞障害は、バトロキソビン
の投与により顕著に抑制された。したがってバトロキソ
ビンは脳虚血再灌流障害に対し、抑制作用を示すことが
認められた。

【００１１】

【表２】 表 ２ バトロキソビンの脳虚血再灌流後の海馬CAl 大錐体細胞の 生存率に対する作用 ─────────────────────────────────── 処 置 ｎ 生存率（％） ─────────────────────────────────── 偽手術群 ６ ９8.５±1.６ 対照群 ６ ５6.４±１9.８＊＊ バトロキソビン投与群 ６ ８7.３±5.４＊＊＃＃ ─────────────────────────────────── 生存率は平均± S.D. で示した。 ＊＊：偽手術群と比較 ｐ＜0.０１、 ＃＃：対照群と比較 ｐ＜0.０１

【００１２】

【発明の効果】本発明のバトロキソビンは、抗血栓性の
末梢循環改善作用を有し、心筋虚血時、脳虚血時などに
おける再灌流障害の予防および治療薬として有効であ
る。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 バトロキソビンを有効成分として含有す
   ることを特徴とする虚血−再灌流障害の予防および治療
   薬。
2. 【請求項２】 虚血性心疾患に対する請求項１記載の予
   防および治療薬。
3. 【請求項３】 虚血性脳疾患に対する請求項１記載の予
   防および治療薬。