JPS6344730B2

JPS6344730B2 -

Info

Publication number: JPS6344730B2
Application number: JP5129283A
Authority: JP
Inventors: Noboru Kaneko; Makoto Takeishi
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1983-03-26
Filing date: 1983-03-26
Publication date: 1988-09-06
Also published as: JPS59175434A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、心筋梗塞、特に、急性心筋梗塞の治
療用薬剤及び治療用器具の開発に供する急性心筋
壊死を起した動物標本の製造方法に関する。

近年、我が国においても、心筋梗塞症による死
亡は確実に増加しており、癌、脳血管障害と共
に、現在、医学が当面する大きな課題となつてい
る。

心筋梗塞症の原因として、これまで、閉塞性血
栓が直接的原因と考えられてきたが、最近の冠動
脈造影法の普及により、臨床的に、冠閉寒の認め
られない心筋梗塞例が相次いで報告されるに及ん
で、心筋梗塞症の原因を一元的に説明することは
困難であり、どの治療方法が有効なのかさえ決定
できないのが現状である。

本発明者らは、幾多の梗塞剖検心の検索の結
果、梗塞壊死巣の中には、壊死形態、発生機序が
全く異なる二つの細胞死が存在することを認め
た。すなわち、その一は、横紋の構造的破壊を主
とし、核は、正常ないしは濃縮、ないしは消失し
ているタイプ（以下、１のタイプという。）であ
り、他の一は、横紋構造は保たれた状態で、細胞
質全体が好酸性に染色され、核は濃縮ないし消失
しているタイプ（以下、２のタイプという。）で
ある。

また、本発明者らは、心筋梗塞症の主体をなす
細胞死は、１のタイプであり、２のタイプは血栓
例の中でも、およそ、その2/3にみられるにすぎ
ないものであることを見出した。そして、１のタ
イプはその壊死の形態からみて、心筋細胞が過収
縮、過伸展により、瞬時にして破壊したものとみ
られる。

そこで、かかる急性の心筋壊死は筋収縮系と密
接に関係する細胞内カルシウム動態の問題であろ
うと考え、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、塩化カルシウム水溶液を
投与されてカルシウムセツテイングされた動物の
体内に、塩化カルシウム水溶液又はカフエイン水
溶液を投与して、該動物の心筋に急性の心筋壊死
を起させることを特徴とする急性心筋壊死を起し
た動物標本の製造方法にある。

本発明において、カルシウムセツテイング用と
しての塩化カルシウム水溶液は、その所定量を、
所定時間動物の静脈内に投与すること、すなわ
ち、２〜６％塩化カルシウム水溶液で、濃度に応
じて、1.4〜0.1ml／分、約２〜３時間注入するこ
とによつて、トリガーとしての塩化カルシウム水
溶液又はカフエイン水溶液を投与したときに心筋
梗塞を起しやすい状態にするものであり、それ自
体殆んど有害でない、すなわち毒性の少い塩化カ
ルシウムの水溶液が使用できる。

また、トリガーとしての塩化カルシウム水溶液
又はカフエイン水溶液は、投与されて、筋収縮を
増強させるように作用する。そして、塩化カルシ
ウム水溶液の場合は、カルシウムセツテイング用
の塩化カルシウム水溶液の５倍の濃度の塩化カル
シウム水溶液を用いるか、又はカルシウムセツテ
イング用の塩化カルシウム水溶液を５倍の速度で
３分間注入するのが望ましい。仮に、５倍より低
い濃度のものを長時間に亘つて注入すると細胞を
破壊し好ましくない。使用する動物としては、
兎、犬等の実験用動物が使用できるが、兎が再現
性の点で優れており、最も望ましい。例えば、犬
を使用するときは、フイラリア等により、本発明
の製造方法の途中で死亡したりするので、その点
注意しなければならない。対象動物へのカルシウ
ムセツテイング用の塩化カルシウム水溶液及びト
リガー用の塩化カルシウム水溶液及びカフエイン
水溶液の投与については、静脈内注入、腹腔内注
入に限られる。また、動物種については、例え
ば、兎及び犬については、静脈内注入が望まし
い。

動物の心筋に起る壊死の検査は、摘出した心臓
の組織標本をマツソン野口氏変法による染色又は
ハイデンハイン鉄ヘマトキシリン染色で染色し、
鏡検により、容易に行なうことができる。

本発明の製造方法による急性心筋壊死を起した
動物標本は、組織標本を作成して、教材用として
広く使用できる。

また、本発明の製造方法による急性心筋壊死を
起した動物を、麻酔から覚醒させることにより、
急性心筋壊死を起した標本動物として、その心電
図変化や血行動態の変化を観察できるので、教材
用として広く使用できる。さらに、心筋壊死を起
した場合の治療方法としての各種治療用薬剤の開
発や治療用手術器具を開発する上で広く利用でき
る。

実施例体重2.6〜3.3Kgの成熟兎、雄、を用いた。この
場合の麻酔はケタラール0.8ml筋注及びペントバ
ルビタール1.0ml静注により行つた。麻酔後、気
管内挿管し、人工呼吸器（Aika―Ｒ―60商品名）
により調節呼吸を行う。麻酔薬、特にペントバル
ビタールは、その深さにより適宜追加した。麻酔
中に、カルシウムセツテイング用として、６％塩
化カルシウム溶液20mlを適当な持続注入装置
（Precidor infusion pump Type5003商品名）
で、１分間0.11mlの速度で３時間頚静脈内注入す
る。注入終了後、直ちにトリガー用として、１％
カフエイン溶液2.5ml（カフエイン25mg）を数秒
内で静脈内に注入し、更に、３分後、１％カフエ
イン溶液5.0ml（カフエイン50mg）を同じく数秒
内で静脈内注入した。組織標本を作製する場合に
は、７分後、直ちに開胸し、心臓を摘出する。な
お、１％カフエイン溶液2.5ml（25mg）投与で死
亡した場合には、その時点で心臓を摘出する。

摘出した心臓は、ホルマリン固定後、約３mm間
隔で水平方向に切断した。各ブロツクを型の如く
に脱水、脱脂、パラフイン包埋し、厚さ３〜4um
で薄切後、組織標本を作成する。

染色は、マツソン野口氏変法、ハイデンハイン
鉄ヘマトキシリン染色が有用である。

壊死巣の鏡検測定は、ほぼ中央部の水平横断ブ
ロツクで行つた。

実験例８例中全例にｋ値最低20.9％ないし最高
54.8％の壊死発生をみた。

なお、トリガー用のカフエイン溶液を投与後、
覚醒するのを持つて、血行動態又は心電図変化な
どを観察しようとする標本に供する。

実施例２体重10〜12Kg、年令１〜２歳、雄、雑種成犬を
用いた。ケタラール２ml筋注、ペントバルビター
ル10mg／Kgで静脈麻酔し、その後麻酔の深さによ
り少量づつ適宜追加した。人工呼吸装置は
（Aika―Ｒ―60）を用いた。右大腿静脈を剥離、
結紮カニユレーシヨンし、カルシウムセツテイン
グ用塩化カルシウム並びにトリガー用の塩化カル
シウム又はカフエイン溶液注入用とした。塩化カ
ルシウム注入は、持続注入装置（Precidor
infusion pump Type5003商品名）を使用した。
カルシウムセツテイング用としては、２％塩化カ
ルシウム溶液を1.33ml／minの一定速度で２時間
注入した。トリガー用の薬剤は、カフエインの場
合には、３分間隔で、100、300mgを、塩化カルシ
ウムの場合には、6.5ml／minで３分間注入した。
組織標本を作製する場合には、７分後、心臓を摘
出して、組織標本を作成し、壊死巣を鏡検測定す
る。

兎については100％の分留りで標本が得られる
が、犬の場合は、これよりも低く80％程度であつ
た。

Claims

【特許請求の範囲】１塩化カルシウム水溶液を投与されてカルシウ
ムセツテイングされた動物の体内に、塩化カルシ
ウム水溶液又はカフエイン水溶液を投与して、該
動物の心筋に急性の心筋壊死を起させることを特
徴とする急性心筋壊死を起した動物標本の製造方
法。２動物が兎及び犬であることを特徴とする特許
請求の範囲第１項に記載の、急性心筋壊死を起し
た動物標本の製造方法。