JPH089636B2 - Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ／ｌａｖウイルス関連ペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、チモシンα₁のペプチド断片またはその類
似体に対する新規な抗体および抗血清を含む、後天性免
疫不全症候群（Acquired I Immune Deficiency Syndrom
e）（エイズ）（AIDS）または前エイズ（pre−AIDS）
［またエイズ関連コンプレックス（AIDS−Related Comp
lex）すなわちARCとしても知られている］を処置または
予防するためのウイルス、あるいはHTLV−III、LAV、AR
V−２または他の同様なレトロウイルスのp17 gag蛋白質
のペプチド断片に関する。本発明は、また、血液中のHT
LV−III、VAL、ARV−２などのレトロウイルスの存在を
直接検出するための診断試験に関する。

後天性免疫不全症候群（エイズ）は、ヘルバーＴ−細
胞（T₄ ⁺）およびT₄ ⁺／T⁸⁺リンパ球の比の減少、日和見
的な（opportunistic）感染の発生の増加および免疫系
の漸進的機能停止によって特徴づけられる。エイズの病
因学的因子は、ヒトＴリンパ趨向性レトロウイルス、HT
LV−III（またLAVまたはARVと呼ばれる）として同定さ
れた。多くの面において、エイズの臨床的症候は、胸腺
の形成不全または低形成および、ニューモシスチス・カ
リニイ（pneumocystis carnii）の肺炎を含む、日和見
的な感染に対する感受性の増大に関連する、稀な一時免
疫不全（rare primay immunodeficiency）（PID）疾患
をもつ子供において頻繁に見られる症候群と区別できな
い。リンパ系の成熟および機能において重要な役割を演
ずる胸腺がエイズに参加する可能性は、エイズをもつ個
体またはエイズ危険群に属する個体の血液中のＴα₁様
ペプチドのレベルの増大の検出によって関係づけられ
た。次の文献を参照：ネイラー（Naylor）、P.H.ら、エ
イズについてのNYASモノグラフ（NYAS Mongraph on AID
S）、437、88（1985）；ハーシュ（Hirsh）、E.M.ら、
ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン
（New Eng. J.Med.）、308、45（1983）；ビッガー（Bi
ggar）、R.J.ら、ニュー・イングランド・ジャーナル・
オブ・メディシン（New Eng. J.Med.）、309、49（198
3）；クレス（Kress）J.K.ら、アナルス・オブ・イン
ターナル・メディシン（Annal.Int.Med.）、100、178
（1984）；ケスラー（Kessler）、C.M.ら、ブリティッ
シュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー（Brit.J.Hemat
ology）、58、325（1984）。

Ｔα₁は均質に精製され、そして部分的に精製された
チモシン分画５（TE5）から配列決定された最初の胸腺
ホルモンである。次の文献を参照：ゴールドステイン
（Goldstein）、A.L.ら、プロシーディングス・オブ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Proc.N
atl.Acad.Sci.）USA、74、725（1977）、米国特許第4,0
02,740号、米国特許第4,010,148号、米国特許第4,148,7
88号など。それは分子量3108の酸性ポリペプチド（pI4.
2）であり、チモシン分画５（TF5）の生物学的活性の多
くを有し、そして生体内および生体外において効力のあ
る免疫変調因子（immnomodulator）である。Ｔα₁は主
としてヘルパーＴ細胞に作用し、そして動物およびヒト
においてＴ細胞の遺伝子標識の発現を増大し、インター
ロイキン−２（IL−２）およびγ−インターフェロンを
包含する、ある数のリンホカイン類の生産を刺激し、か
つ免疫機能および腫瘍の免疫性を回復させることが発見
された。Ｔα₁は、ヘルパーＴ細胞の機能を回復させ、
そして肺癌患者の放射線治療後の生存を延長することが
示された、現在最初の生物学的応答変更因子（modifie
r）（BRM）である、シュロフ（Schulof）、R.S.ら、ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・リスポンス・モディ
ファイアーズ（J.Biol.Resp.Mod.）、4、147（1985）。
ペルハム（Pelham）らへの米国特許第4,521,407号は、
特定の子牛胸腺エキスはエイズを有する人の細胞免疫系
を刺激できることを開示している。

子供におけるエイズとPIDとの間の臨床的類似性が与
えられると、Ｔα₁レベルはエイズおよびエイズ関連コ
ンプレックス（ARC）をもつ患者において抑制されるで
あろうことが期待された。Ｔα₁は米国特許第4,264,571
号および米国特許第4,339,427号に記載されるようにし
てラジオイムノアッセイによって測定できる。驚くべき
ことには、ウェルおよびARCをもつ患者からの血液の検
査は、Ｔα₁の著しく増大したレベルを示した。例え
ば、カポジ肉腫をもつ72の個体のうち44（60％）および
ニューモシスチス・カリニイ（pneumocystis carnii）
の肺炎をもつ22の個体のうち12（54％）は、正常の個体
の平均から２標準偏差より上のＴα₁レベルを有した。
引続く研究において、同性愛者および両性愛者、静脈内
薬物濫用者、ハイチ人、およびリンパ腺症をもつ同性愛
者を含有する、エイズの患者の全国的規模のサンプリン
グについて、最初の発見が確証された。

Ｔα₁の上昇を説明するために、３つの可能な代替現
象（alternatives）が提案された:1）生物学的活性なペ
プチドのレベルを増大させるヘルパーＴ細胞の欠乏、す
なわち、示端器（end−organ）の疾患;2）胸腺上皮細胞
へのウイルスの侵入、および引続くホルモンの生産およ
び／または処理についての制御の損失；または３）「エ
イズ」ウイルスに関連する生物学的に不活性であるが、
免疫学的に交差反応性の蛋白質の存在。ネイラー（Nayl
or）P.H.ら、エイズ（AIDS）（アラン R.リス、ニュー
ヨーク）（1985）（265ページ）に報告されているよう
に、エイズについて危険な状態にある同性愛者の血液中
のＴα₁様ペプチドの、それ以上の化学的および免疫学
的な特性づけは、この異常に増加したペプチドが交差反
応性の分子でありうること、および、事実、真正のＴα
₁がしばしば有意に減少することを示している。

Ｔα₁の交差反応性の物質を同定するために、本発明
者はコンピューターによって助けられる分析を用いて相
同ペプチド類について範囲の広い分析を開始した。ナシ
ョナル・バイオロジカル・リサーチ・ファンデイション
（National Biological Research Foundation）、米国
ワシントン州、の配列バンク（sequence bank）におけ
る3,500以上の蛋白質配列、入手可能なHTLV−III/LAVの
カタログおよびナショナル・キャンサー・インチチュー
ト（Naitional Cancer Institute）（NCI）におけるロ
バート・ガロ（Robert Gallo）博士の実験室からの他の
レトロウイルスの分離物を使用した。他の胸腺ホルモル
類またはリンホカイン類との有意の相同性は発見されな
かったが、予期されざることには、HTLV−III/LAVおよ
びARV−２のＴα₁およびgag［コア（core）］蛋白質（p
17）は、それらの一次配列の18アミノ酸領域（Ｔα₁上
の位置11〜28およびp17gag蛋白質上の位置92〜109）に
おいて44％〜50％の相同性を共有することが発見され
た。

現在、HTLV−III/LAV/ARV遺伝子およびその生産物
（すなわち、蛋白質および／または糖蛋白質）によって
誘発される疾患に対するワクチンを開発するための、本
質的にすべての継続中の研究の細心の計画は、エンベロ
ープ遺伝子、envに集中されてきた。例えば、次の文献
を参照：フィッシンガー（Fischinger）、P.J.ら、「ヒ
トＴ細胞リンパ趨行性レトロウイルス類（HTLV−Ｉ、−
II、−III）により誘発された病気に対するワクチンに
ついての現在の状態および細心の計画（Current Status
and Strategies for Vaccines against Diseases Indu
ced by Human T−Cell Lymphotropic Retroviruses（HT
LV−Ｉ、−II、−III）」癌の研究（Cancer Researc
h）、45、4694s−4699s（1985年９月）;L.デイビス（Da
vis）、「エイズのワクチンの研究：有望な蛋白質（AID
S Vaccine Research:Promising Protein）」、サイエン
ス・ニューズ（Science News）、129、10、151ページ
（1986年３月）。多分、この細心な計画は、エンベロー
プ蛋白質（すなわち、外側の被膜）が抗体の生産に導く
体の免疫系によって「認識」されうるであろう抗原部位
をきっと提供するであろうという従来の知識に基づいて
いる。

しかしながら、例えば、フィッシンガー（Fischinge
r）らが指摘するように、env遺伝子および対応するenv
蛋白質における種々のHTLV−III/LAVのうちで観察され
る広範な異質性および抗原の変動のために、これらの免
疫原を使用するワクチンの開発はかなりの困難に直面す
ることが予測され、そして多分徒労であろう。

対照的に、HTLV−III/LAVのgagコア蛋白質は、明らか
には免疫系の防御に「暴露」されていないが、非常によ
り高度に観察され、水溶液突然変異および遺伝的ドリフ
ト（genetic drift）にされされる程度が極めて少な
い。

本発明は、HTLV−III/LAVのgag蛋白質部分に共通の抗
原決定基は特異的エピトープ、チモシンα₁と高度の相
同性を有することがわかったエピトープ、に対して向け
られた抗体で容易に殺されるという非常に驚くべき発見
に基づく。

ロバート（Robert）C.ガロ（Gallo）らは、米国特許
第4,520,113号において、エイズおよびARCの状態をもつ
患者の血清中のHTLV−IIIに対する抗体の血清学的検出
のための診断試験を記載している。現在広く実施されて
いるこのような診断手順は、誤った結果に導く種々の欠
陥に悩まされる。詳しくは、HTLV−III/LAVウイルスに
対する抗体の存在を決定する診断試験は、誤った陰性ま
たは陽性の結果を生じうる次の欠点を有する。エイズの
ウイルスにさらされるある患者は、不十分な免疫応答を
有し、そして抗体を生産しないことがある。ある患者は
最近さらされたが、なんらかの量または検出可能な量の
抗体をまだ生産しないことがある（エイズに対する抗体
は検出可能なレベルで生産されるまでに８週までの期間
を要する）。血清中に抗体を有するある患者は、彼らの
系中に残留する抗体をもたないことがある。こうして、
「誤った陽性」の結果は後者の場合において与えられ、
これに対して「誤った陰性」の結果は２つの前者の場合
において示唆されるであろう。

したがって、明らかなように、エイズのウイルスの存
在を直接にあるいは間接に検出する診断試験は、エイズ
にさらされている患者あるいはエイズにかかる高い危険
なカテゴリーにある患者の早期の検出および診断のため
に極めて重要である。

したがって、本発明の目的は、HTLV−III/LAV、ARVま
たは後天性免疫不全症候群（エイズ）に関連する他の同
様なレトロウイルスを中和するとき有効な抗体の形成を
誘導できる安全なワクチンを提供することである。

本発明の関連する目的は、エイズの発現について危険
な状態にある個体あるいはエイズのウイルスにさらされ
た個体に、HTLV−III/LAV、ARVまたは他のエイズのウイ
ルスの複製を遮断できる特異的中和性抗体の形成を引き
出す免疫原抗原物質を投与することによって、前記個体
を免疫化する方法を提供することである。

免疫原抗原物質のチモシンα₁、あるいはHTLV−III/L
AV/ARV蛋白質と共通のエピトープを共有する他の新規な
ペプチドを利用するか、あるいはチモシンα₁の位置11
〜28におけるアミノ酸配列、またはこのようなペプチド
の断片、類似体またはポリマーと相同性を共有するエイ
ズのウイルスのp17gag蛋白質のペプチドを利用する、こ
のような安全ワクチンおよび活性な免疫化法を提供する
ことである。

本発明の他の目的は、抗Ｔα₁血清、そのIgGに富んだ
調製物、あるいはHTLV−III/LAVのgag蛋白質と共通のエ
ピトープを共有する他のペプチドまたは類似体に対する
抗血清、あるいはHTLV−III/LAVウイルスそれ自体のgag
領域から誘導されたコア蛋白質断片に対する抗血清を使
用する、HTLV−III/LAVの複製を遮断できる抗血清を提
供することである。

本発明の他の関連する目的は、新規なチモシンα₁ペ
プチド断片およびその類似体および／またはHTLV−III/
LAVウイルスのgag領域から誘導されたコア蛋白質断片を
提供することである。

本発明のなお他の目的は、新規なペプチドのいずれか
を免疫原担体物質に結合することによって、新規な免疫
原を提供することである。

本発明のさらになお他の目的は、エイズおよび／また
はエイズ関連コンプレックス（ARC）の処置および予防
において使用するための、ペプチド、断片および／また
はエピトープに対して特異的な新規な抗体、およびこの
ような新規な抗体、またはこのような抗体を含有する抗
血清、または抗Ｔα₁抗血清、またはIgGに富んだその調
製物を使用する、エイズに対する受動免疫化を提供する
ことである。

本発明のほかの目的は、エイズのウイルスの存在また
は不存在の直接の血清学的検出を実施できる診断法およ
びキットを提供することである。

本発明のこれらの目的および他の目的は、以下の詳細
な説明および好ましい実施態様を参照しかつ添付図面の
助けにより明らかとなるであろう。そして、本発明のこ
れらの目的および他の目的は、本発明の１つの面に関連
して、エイズのウイルスにさらされた個体、エイズにつ
いて危険な状態にある個体、あるいはエイズに感染した
個体に、エイズ関連レトロウイルスのコア蛋白質のgag
領域の少なくとも約位置92から少なくとも約位置109に
延長するアミノ酸配列において共通のエピトープをエイ
ズ関連レトウイルスと共有する天然または合成のペプチ
ドの治療的に有効量を投与し、こうして前記個体を誘発
してエイズのウイルスを中和できる抗体を生産させるこ
とを特徴とする後天性免疫不全症候群（エイズ）に関連
するウイルス血症を減少する方法によって達成される。

あるいは、本発明は、エイズに悩む個体、エイズに感
染した個体、あるいはエイズについて危険な状態である
個体に、チモシンα₁あるいはエイズ関連レトロウイル
スのgag領域の少なくとも約位置92から少なくとも約位
置109に延長するアミノ酸配列において共通のエピトー
プをエイズ関連レトロウイルスイルスと共有する他のペ
プチドに対してレイズされた抗体の投与することを含ん
でなり、前記抗体はエイズ関連レトロウイルスイルスを
中和できることを特徴とする前記個体において受動免疫
化を誘発する方法を提供する。

エイズのウイルスを中和できる抗体を形成するための
抗原として使用できる合成ペプチドの例は、 式（Ｉ） A₀−Ile−X₁−X₂−Lys− （Ｉ） Asp−X₃−Lys−Glu−X₄ −X₅−X₆−X₇−X₈−Glu− Glu−X₉−X₁₀−Asn・CO OH 式中、X₁〜X₁₀は、独立に、アミノ酸であり、そしてA
₀はNH₂または約６までのアミノ酸のアミノ酸配列であ
る、 を有するチモシンα₁のペプチド断片またはその類似
体、またはその塩、エステル、エーテルまたはアミド、
あるいは少なくともアミノ酸配列92〜109を含みかつ式
（II） Ａ−Ile−Y₁−Y₂−Lys− （II） Asp−Thr−Lys−Glu− Ala−Leu−Y₃−Lys−Ｉ le−Glu−Glu−Glu−Ｇ In−Asn−Ｂ 式中、 Y₁はAspまたはGluであり、 Y₂はValまたはIleであり、 Y₃はGluまたはAspであり、 ＡはNH₂または約10アミノ酸までのアミノ酸配列であ
り、そして ＢはCOOHまたは約10アミノ酸までのアミノ酸配列であ
り、ペプチドは合計約40までのアミノ酸、好ましくは36
までのアミノ酸、ことに好ましくは約30までのアミノ酸
を有する、 を有する、HTLV−III/LAV/ARVのp17gag蛋白質のペプチ
ド断片である。

本発明による特に好ましいポリペプチドは、 式 Tyr−A₁−Val−His−Gln−Ａ rg−Ile−Asp−Val−Lys−Ａ sp−Thr−Lys−Glu−Alu−Ｌ cu−A₂−Lys−Ile−Glu−Gl ｕ−Glu−Gln−Asn−Lys−Se ｒ−Lys−Lys−Lys−Ala 式中、A₁はCysまたはSerであり、そして A₂はAspまたはGluである、 によって表わされるアミノ酸配列を有する、位置86−11
5におけるHTLV−III/ARVウイルスのトリコンタペプチド
断片またはその[Ser]⁸⁷類似体；およびその¹²⁵I誘導体
である。

現在ヒトＴ細胞リンパ趨行性種およびいく種類からの
関連種、例えば、ネコ、ウシ、ウサギなどを包含するこ
とが知られているレトロウイルスの族は、保護の内側蛋
白質被膜（コア蛋白質）内に包まれている一本鎖RNAを
含有することによって特徴づけられ、そして含まれたRN
A鎖は次に外側蛋白質被膜（エンベロープ蛋白質）内に
含有されている。RNAゲノムは、コア（gag）蛋白質の遺
伝情報を指定する［gag］遺伝子およびエンベロープ（e
nv）蛋白質（または糖蛋白質）の遺伝情報を指定する
［env］遺伝子を含む。エンベロープ蛋白質は、ウイル
スが宿主細胞の表面へ結合する機構の原因であることは
明らかであり、かつウイルスの一番外側の層として「可
視」であるので、細胞の免疫系による認識のための候補
でありかつ抗体による攻撃にされる可能性が最も多いウ
イルスの抗原決定基すなわちエピトープはエンベロープ
蛋白質上に存在することが一般に期待される。しかしな
がら、不都合なことには、HTLV−III/LAVウイルスのenv
遺伝子はかなりの異質性および信号の変動を示し、そし
て今日まで、env蛋白質に対して向けられた有効なワク
チンが発見されていないが、この分野において広範な研
究が進行している。

HTLV−III/LAVのenv遺伝子の異質性および抗原の変動
と対照的に、gag遺伝子、それゆえgag（コア）蛋白質は
非常にいっそう保存されるように見える。したがって、
コア蛋白質に対して特異的な抗体はエイズを起こすウイ
ルスの非常に広いスペクトルに対して有効であることが
期待されるであろう。

本発明は、今回、後天性免疫不全症候群（エイズ）に
関連する、HTLV−III/LAVおよびARV−２レトロウイルス
のコア蛋白質に対して特異的な抗体を提供することに成
功した。簡単に述べると、エイズ、およびエイズ関連コ
プレックス（ARC）の原因となるレトロウイルスの異な
るが関連する族のすべては、ここでおよび特許請求の範
囲において、エイズのウイルスと集合的に呼ぶ。

チモシンα₁およびHTLV−IIIおよびARVのウイルスの1
8アミノ酸配列にわたって高度（約50％）の相同性が存
在することが、エイズの患者のチモシンα₁（Ｔα₁）の
レベルの増大の観察に促されて、発見された。チモシン
α₁はアミノ酸配列を有する： Ac−Ser−Asp−Ala−Ala−Ｖ al−Asp−Thr−Ser−Ser−Ｓ er−Glu−Ile−Thr−Thr−Ｌ ys−Asp−Leu−Lys−Glu−Ｌ ys−Lys−Glu−Val−Val−Ｇ lu−Glu−Ala−Glu−Asn−Ｃ OOH HTLV−III/LAVおよびARV−２のgag遺伝子は、512アミ
ノ酸を含有する４つのgag蛋白質、それぞれ、ほぼ17,00
0、24,000、7,000および9,000の分子量を有する、gagp1
7、gagp24、gagp7およびgagp9の遺伝情報を指定する。
チモシンα₁の主要配列、およびp17gag蛋白質を比較す
ると、下に示すように、チモシンα₁上の位置11および2
8と、gag蛋白質上の位置92および109との間の18アミノ
酸領域の44％〜55％の相同性が示される： この異常に高い相同性に基づいて、エイズのウイルス
を中和するチモシンα₁に対する抗体（abTα₁）の能力
を検出するために前記抗体を評価した。この評価は、H9
許容細胞系中のHTLV−III/LAVの複製を阻害する前記抗
体の能力を測定することによって実施した。チモシンα
₁で免疫化したウサギの血清中のHTLV−III/LAVに対する
抗体を中和する抗体の存在を検出するために、P.S.サリ
ン（Sarin）ら、バイオケルミカル・ファーマコロジー
（Biochem.Pharmacol.）、34、4075（1985）に記載され
ているようなH9細胞中のHTLV−III/LAV複製系を使用し
た。

簡単に述べると、H9細胞の感染は、培地中の逆転写酵
素（RT）の活性を測定し、そしてHTLV−III/LAVのp15お
よびp24の発現について間接免疫蛍光アッセイを使用す
ることによって監視する。免疫蛍光アッセイはメタノー
ル：アセトン（1:1）中で固定した細胞について実施
し、そしてHTLV−III/LAVのp15およびp24に対するモノ
クローナル抗体を使用する。抗体処理を実施したおよび
実施しないHTLV−III/LAV感染細胞をトキソプラスモシ
スのスライド（toxoplasmosis Slide）上に固定する。
メタノール：アセトン（1:1）で室温において30分間固
定した後、スライドは使用するまで−20℃において密閉
プラスチック袋中に貯蔵する。モノクローナル抗体を反
復実験のウェル（well）に添加し、加湿室内で１時間室
温においてインキュベーションし、そして0.25％のトリ
トンＸ−100を含有するPBSで２時間洗浄する。次いで、
細胞をフルオレセイン（FITC）接合マウスIgGに対する
ヤギ抗血清（Capell Labs）に対して１時間暴露し、そ
して0.25％のトリトンＸ−100を含有するPBSで一夜洗浄
する。スライドを50％のグリセロールで取付け、そして
細胞の蛍光をツァイス（Zeiss）蛍光顕微鏡で観測す
る。

ウサギにおいて調製したＴα₁に対する異種抗血清の1
0の異なるロットの分析は、HTLV−III/LAVに対する中和
性抗体の存在を確立する（表１）。Ｔα₁に対する抗血
清は、チモシンα₁についてのラジオイムノアッセイに
関連して米国特許第4,264,571号中に記載されるように
して調製した。簡単に述べると、合成Ｔα₁はグルタル
アルデヒドを介してキーホール笠貝ヘモシアニン（keyh
ole limpet hemocyanin）（KLH）（1:1重量）にカップ
リングして、100μg/mlのＴα₁の最終濃度を得る。この
接合体をフロインド完全アジュバントと混合（1mlおよ
び1ml）し、そしてニュージーランドの白ウサギにいく
つかの部位において皮内投与する。ウサギに１週の間隔
で６週（２〜４月）間促進注射（フロインド完全アジュ
バント中100μｇのＴα₁）をする。１月の休止後、載台
の力価が達成されるまで動物に毎月促進注射をする。す
べての場合において、RTは有意に阻害される（53±３
％）が、1:20の稀釈で使用した粗製抗血清のいくつか
は、H9に対する多少の細胞特性を示しおよび／またはp1
5およびp24の発現を阻害できなかった。したがって、Ｔ
α₁抗血清の４ロットを選択し、そしてそれらの各々に
ついて、免疫グロブリン（IgG）に富んだ調製物を調製
して、抗ウイルス活性がIgGによって仲介されることを
確証した。IgGに富んだ調製物は硫酸アンモニウム（40
％）の沈殿によって調製する。遠心後、沈殿をPBS中に
溶解し、そしてPBSに対して24時間透析する。次いで、
各ロットを0.8ミクロンのミリボアフィルターで濾過す
る。硫酸アンモニウムの沈殿の代わりに、あるいはそれ
に加えて、抗血清は他の慣用の手段、例えば、スタフ
（staph）−Ａ精製、HPLC精製などによって濃縮するこ
とができる。

表２に要約するように、Ｔα₁に対する抗血清の濃縮
したIgG調製物はHTLV−III/LAVの中和において高度に有
効である；それらはウイルス蛋白質p15およびp24の発現
およびRTの活性を阻害し、そしてH9細胞に対して細胞傷
害性ではない。Ｔα₁に対して免疫化したウサギからの
抗血清は、同様に中和活性を示すARCおよびエイズをも
つ患者の血清と同等にエイズのウイルスの中和において
有効である。Ｔα₁およびHTLV−III/LAVのgag蛋白質に
おける共通のエピトープに向けられた抗血清またはIgG
に富んだ調製物は、生体外のこのウイルスの中和におい
Ｔ高度に有効であるばかりでなく、かつまたエイズをも
つ患者から得られたある血清中に存在する抗中和性抗体
と比較してすぐれる。

表１に対する凡例 ＊H9細胞のHTLV−III/LAV感染:H9細胞をポリブレン（２
μg/ml）で37℃において30分間処理し、洗浄してポリブ
レンを除去し、そして４×10⁵のH9細胞につき２×10⁸HT
LV−III/LAVウイルス粒子で感染させる。中和性抗体の
アッセイのため、血清を56℃で30分間熱不活性化し、そ
して0.45μｍのフィルターで濾過する。適当に希釈した
抗体を、24ウェルの平らな底の板（2ml）中でHTLV−III
/LAV（500ウイルス粒子／細胞）と混合する。この板を
４℃で１時間そして20℃で15分間インキュベーションす
る。H9細胞をウェルに添加して、５×10⁵細胞/mlの最終
濃度を得る。培養物は37℃および５％のCO₂において96
時間インキュベーションする。この期間後、生きている
細胞をトリパンブルーの存在下に計数する。細胞の懸濁
液を500×ｇで10分間遠心する。上澄みを逆転写酵素の
アッセイのために処理し、そして細胞をトキソプラスモ
シスのスライド上に取付け、メタノール：アセトン（1:
1）中で固定し、そして、P.S.サリン（Sarin）ら、バイ
オケルミカル・ファーマコロジー（Biochem.Pharmaco
l.）、34、4075（1985）に記載されているようにして、
HTLV−III/LAV、p15およびp24に対するモノクローナル
抗体を使用して分析する。

＊H9細胞:H9細胞をプロベイン（２μg/ml）で37℃にお
いて30分観処理し、洗浄してプロブレンを除去し、そし
て２×10⁸のHTLV−III/LAVウイルス粒子/4×10⁵のH9細
胞で感染させる。培養物を感染後４日目に分析する。中
和性抗体のアッセイを表１に記載するように実施する。

＊＊IgGに富んだ血清は硫酸アンモニウムの沈殿によっ
て調製する。精製前の抗Ｔα₁のロットは活性について
試験する。

便宜上、H9細胞についての表２におけるデータを第１
図にプロットする。第１図から容易に明らかなように、
抗Ｔα₁抗体はエイズのウイルスの中和において高度に
有効である。さらに、このデータから結論されるよう
に、ウイルスのゲノムのこのエピトープ領域（gag蛋白
質の位置92〜109）はエイズのウイルスの複製にとって
極めて重要である。

したがって、本発明はエイズの予防または処理のため
の抗血清を提供し、ここで１つの実施態様において、チ
モシンα₁に対する抗体、あるいは位置11または28にお
ける少なくとも共通のエピトープ領域を含む、チモシン
α₁のペプチド断片または類似体に対する抗体、あるい
は少なくとも約位置92から少なくとも約位置109を含
む、HTLV−III/VALまたはARV−２のp17gag蛋白質の共通
のエピトープに対する抗体を投与に基づく（すなわち受
動免疫化）。別の実施態様において、これらのペプチド
のいずれもワクチンを提供し、このワクチンは、エイズ
のウイルスにさらされた個体、エイズについて危険な状
態にある個体、またはエイズに感染した個体に投与した
とき、個体の免疫系を誘発して、ペプチドに対して特異
的でありかつエイズのウイルスの調製を阻害するとき有
効である抗体を生産させる。

次の式（Ｉ）： A₀−Ile−X₁−X₂−Lys− （１） Asp−X₃−Lys−Glu−X₄ −X₅−X₆−X₇−X₈−Glu− Glu−X₉−X₁₀−Asn・COOH 式中、 A₀はNH₂または１〜約６のアミノ酸のアミノ酸配列で
あり、そして X₁〜X₁₀は、独立に、天然に産出するアミノ酸であ
る、 で表わされるチモシンα₁のＣ−末端におけるペプチ
ド断片またはその類似体あるいはその塩、エステル、エ
ーテルまたはアミド、および次の式（II）： Ａ−Ile−Y₁−Y₂−Lys− （II） Asp−Thr−Lys−Glu− Ala−Leu−Y₃−Lys−Ｉ le−Glu−Glu−Glu−Ｇ ln−Asn−Ｂ 式中、 Y₁はAspまたはGluであり、 Y₂はValまたはIleであり、 Y₃はGluまたはAspであり、 ＡはNH₂または約10アミノ酸までのアミノ酸配列であ
り、そして ＢはCOOHまたは約10アミノ酸までのアミノ酸配列であ
り、ペプチドは合計約40より多くないアミノ酸を有す
る、 で表わされるgagコア蛋白質の少なくとも約92〜約109
の位置における抗原領域のペプチド断片は、それら自
体、新規な組成物でありそして式（Ｉ）および（II）の
ペプチドに対する抗体は、また、新規な組成物であり、
同様にこれらの抗体またはペプチドを含有する抗血清お
よびワクチンも新規である。

式（Ｉ）のペプチドにおいて、Ｘ（X₁〜X₁₀）は天然
に産出するアミノ酸、すなわち、次のもののいずれであ
ることもできる：アラニン（Ala）、アルギニン（Ar
g）、アスパラギン（Asn）、アスパラギン酸（Asp）、
システイン（Cys）、グルタミン（Gln）、グルタミン酸
（Glu）、グリシン（Gly）、ヒスチジン（His）、イソ
ロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、リジンン（Ly
s）、メチオニン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、
プロリン（Pro）、セリン（Ser）、スレオニン（Th
r）、トリプトファン（Trp）、チロシン（Tyr）および
バリン（Val）。同様に、A₀が１以上のアミノ酸を表わ
すとき、それはこれらのアミノ酸の任意の組み合わせか
らなることができ、あるいはA₀はチモシンα₁のＮ−末
端上のIleに隣接するアミノ酸配列、すなわち、Glu、Se
r−Glu、Ser−Ser−Glu、Thr−Ser−Ser−Glu、Asp−Th
r−Ser−Ser−Glu、Val−Asp−Thr−Ser−Ser−Gluなど
であることができる。

X₁がThrであり、X₂がThrであり、X₃がLeuであり、X₄
がLysであり、X₅がLysであり、X₆がGluであり、ＸがVal
であり、X₈がValであり、X₉がAlaであり、そしてX₁₀がG
luであるとき、式（Ｉ）のペプチドはチモシンα₁のC₁₁
〜C₂₈末端に相当し、そして式（Ｉ）−1: A₀−Ile−Thr−Thr− （Ｉ）−１ Lys−Asp−Leu−Lys −Glu−Lys−Lys−Gl ｕ−Val−Val−Glu−Ｇ lu−Als−Glu−Asn− COOH を有する。

式（Ｉ）において、X₆はGluまたはAspであることがこ
とに好ましく、前者はARV−２の位置102におけるGluに
相当し、そして後者はHTLV−III/LAVの位置102における
Aspに相当する。

抗Ｔα₁抗血清はエイズのウイルスの中和において有
効であるので、アミノ酸X₁〜X₁₀、とくにX₁〜X₅およびX
7〜X10が抗体の認識のためにそれほど重要でないことが
ある。

他方において、式（Ｉ）のペプチドにおいて、X₁がAs
pであり、X₂がValであり、X₃がThrであり、X₄がAlaであ
り、X₅がLeuであり、X₆がGluであり、X₇がLysであり、X
₈がIleであり、X₉がGluであり、そしてX₁₀がGlnである
とき、式（Ｉ）−２ A₀−Ile−Asp−Val− （Ｉ）−２ Lys−Asp−Thr−Lys −Glu−Ala−Leu−Gl ｕ−Lys−Ile−Glu−Ｇ lu−Glu−Gln−Asn− COOH の得られるペプチドは、位置92〜109におけるARV−２ga
g蛋白質と同一に対応し、すなわち、100％の相同性を有
し、そしてエイズのウイルスに対してさらになおいっそ
う高度に有効な抗体を提供するであろう。

同様に、X₁がGluであり、X₂がIleであり、X₃がThrで
あり、X₄がAlaであり、X₅がLeuであり、X₆がAspであ
り、X₇がLysであり、X₈がIleであり、X₉がGluであり、
そしてX₁₀がGlnであるとき、式（Ｉ）−３ A_O−Ile−Glu−Ile− （Ｉ）−３ Lys−Asp−Thr−Lys −Glu−Ala−Leu−As ｐ−Lys−Ile−Glu−Ｇ lu−Glu−Gln−Asn− COOH の得られるペプチドは、位置92〜109におけるARV−２ga
g蛋白質と同一に対応し、そしてまたエイズのウイルス
に対して殊に有効な抗体を提供する。

なおさらに、位置92−109におけるエイズのウイルス
のコア蛋白質の抗原はウイルスの複製過程において極め
て重要であることが明らかであるが、また、１〜10アミ
ノ酸、好ましくは１〜８アミノ酸、およびことに好まし
くは１〜６アミノ酸の任意の配列を含めるようにアミノ
酸配列に一端または両端を延長して、18〜40アミノ酸、
好ましくは18〜36アミノ酸、そしてことに好ましくは18
〜30アミノ酸を有するポリペプチド23を提供することは
便利である。しかしながら、任意のアミノ酸配列より
も、式（II）のアミノ酸配列の一端または両端にエイズ
のウイルス中に存在する配列に相当するアミノ酸配列を
付加することは殊に好ましい（もちろん、ペプチド結合
により接合する−−上の同一の事柄が適用される）。

したがって、本発明のとくに好ましい実施態様におい
て、アミノ酸配列92〜109およびそのdes−87類似体を含
み、かつ式（II）−1: A¹−Ile−Y₁−Y₂−Ｌ （II）−１ ys−Asp−Thr−Lys −Glu−Ala−Leu− Y₃−Lys−Ile−Glu −Glu−Glu−Gln−Ａ sn−B¹ 式中、 Y₁、Y₂およびY₃は式（II）について上に定義した通り
であり、そして A¹は HN₂、 Arg、 Gln−Arg、 His−Gln−Arg、 Val−His−Gln−Arg、 Ser−Val−His−Gln−Arg、 Cys−Val−His−Gln−Arg、 Tyr−Ser−Val−His−Gln−Ａ rgおよび Tyr−Cys−Val−His−Gln−Arg から成る群より選択さとれる構成員であり、そして、 B₁は COOH、 Lys、 Lys−Ser、 Lys−Ser−Lys、 Lys−Ser−Lys−Lys、 Lys−Ser−Lys−Lys−Lyeおよ び Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ａ la から成る群より選択される構成員である、を有するHTLV
−III/LAV、ARV−２、または同様なエイズのウイルスの
p17gag蛋白質のオクタデカペプチド〜トリコンタペプチ
ドの断片が提供される。

一般式（Ｉ）および（II）によって表わされる本発明
のペプチドは、ペプチドを合成する普通の方法によっ
て、さらに詳しくは、次の方法を用いて、調製すること
ができる：シュローダー（Schroder）およびルブケ（Lu
bke）、ペプチド類（The Peptides）、Vol.1（1966）、
アカデミック・プレス（Academic Press）、米国ニュウ
ーヨーク、またはイズミヤ（Izumiya）ら、ペプチド類
の合成（Sythesis of Peptides）、（1975）、丸善株式
会社発行、記載されている方法、例えば、アジド法、塩
化物法、酸無水物法、混合無水物法、DCC法、活性エス
テル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル法、シアノメチルエステル法
など）、ウッドワード（Woodward）試薬Ｋを使用する方
法、酸化還元法、DCC/付加物（HONB、HOBt、HOSu）法な
ど。固相および液相の両者の合成を上の方法に適用する
ことができる。

本発明のペプチドは、通常のポリペプチドを合成する
前述の方法に従い、一般に、アミノ酸を末端のアミノ酸
に１つずつ順次に縮合させることからなる。いわゆる固
相法によって、あるいはいくつかの群に分割した断片を
末端アミノ酸にカップリングすることによって調製され
る。さらに詳しくは、例えば、固相の合成を適用させる
場合、Ｃ末端のアミノ酸を不溶性担体にそのカルボキシ
ル基を回して結合する。不溶性担体は、それが反応性カ
ルボキシル基に対する結合能力を有しかつ段階的縮合−
脱保護反応の試薬および反応条件に対して不活性である
かぎり、とくに制限されない。このような不活性担体の
例は、次のものを含有する：ハロゲノメチル樹脂、例え
ば、クロロメチル樹脂、とくにクロロメチル−ポリスチ
レン−ジビニルベンゼンポリマー、ブロモメチル樹脂な
ど、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、tert−ア
ルコキシカルボニルヒドラジド化樹脂、架橋したポリ−
Ｎ−アクリリル−ピロリジン樹脂など。例えば、Ｃ末端
アミノ酸がアミド官能基を有する式（Ｉ）、（Ｉ）−
１、（Ｉ）−２または（Ｉ）−３のポリペプチド、例え
ば、アスパラギン（Asn）、 の場合において、ベンズヒドリルアミン樹脂の支持体を
使用することが便利であり、これによってアミド官能基
を樹脂の支持体上に直接形成することができる。さら
に、とくに好ましい実施態様において、式（Ｉ）のペプ
チドおよびＣ−末端アミノ酸がアミド官能基を含む他の
ペプチドを製造する固相合成法は、1986年４月８日に提
出された、スーサン・ワング（Su−Sun Wang）の普通に
譲渡された同時継続出願第849,835号（その開示全体を
引用によってここに加える）に詳しく記載されているよ
うに、メチルベンズヒドリルアミン樹脂の支持体を使用
して実施される。

アミノ保護基を除去した後、アミノ基保護されたアミ
ノ酸を、例えば、一般式（Ｉ）によって、示した所望の
アミノ酸配列に従い、その反応性アミノ基と反応性カル
ボキシル基との縮合により、順次に結合して、順次に、
段階的に合成する。完全な配列を合成した後、ペプチド
を、例えば、HF、HBrまたは他の切離し試薬を使用し
て、不溶性担体から切離して蛋白質を生成する。

上および下の記載において、略号は標準の慣用の命名
法に従う次の意味を有する： Boc、ｔ−ブチルオキシカルボニル;Bzl、ベンジル;DC
C、ジシクロヘキシルカーボジイミド;Cbz、ベンジルオ
キシカルボニル;TFA、トリフルオロ酢酸、およびC1Z、
２−クロロベンジルオキシカルボニル。

特定の保護基を下に記載するが、同等の慣用の保護基
を利用することは当業者の技能の範囲内である。実施者
は容易に認識するように、ある一般条件は好ましくは合
成する特定のペプチドに無関係に選択される。例えば、
ペプチドの合成において使用される各カミノ酸のα−ア
ミノ基はカップリング反応の間に保護して反応性α−ア
ミノ官能を含む副反応を防止しなくてはならない。同様
に、反応性側鎖の官能基を含有するアミノ酸（例えば、
スルフヒドリル、ε−アミノ、ヒドロキシル、カルボキ
シル）について、このような官能基は、また、側鎖の基
を含有するアミノ酸の初期のカップリングの間および引
続くアミノ酸のカップリングの間の両者において保護す
ることが必要である。このような保護基はこの分野にお
いて知られている。［参照、例えば、有機化学における
保護基（Protective Group in Organic Chemistry）、
M.マクオミー（McOmie）編、プレナム・プレス（Plenum
Press）、ニューヨーク、1973］。

特定の保護基を選択するとき、次の条件を観察しなく
てはならない：α−アミノ保護基は、（１）カップリン
グ反応において使用する条件下に安定でありかつα−ア
ミノ官能を不活性としなくてはならず、そして（２）カ
ップリング反応後、側鎖の保護基を除去しないか、ある
いはペプチド断片の構造を変化しない条件下に容易に除
去できなくてはならない。側鎖の保護基は、（１）カッ
プリング反応において使用する条件下に安定でありかつ
側鎖の官能基を不活性としなくてはならず、（２）α−
アミノ類基を除去するとき使用する条件下に安定でなく
てはならず、そして（３）所望のアミノ酸配列の完結時
に、ペプチド鎖の構造、含有されるキラル中心のいずれ
かのラセミ化を変更しない反応条件下に容易に除去でき
なくてはならない。α−アミノ官能のために適当な保護
基は、次の通りである:t−ブトキシカルボニル（Bo
c）、ベンジルオキシカルボニル（Cbz）、ビフェニルイ
ソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボ
ニル、イソボルニルオキシカルボニル、1,1−ジメチル
−2,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−ニ
トロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブチルオ
キシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボ
ニルなど、ことにｔ−ブトキシカルボニル（Boc）。

カルボキシル保護基の例として、次のものを述べるこ
とができる：エステル形成基、例えば、アルキルエステ
ル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−
ブチルなどのエステル）、ベンジルエステル、ｐ−ニト
ロベンジルエステル、ｐ−メトキシベンジルエステル、
ｐ−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル
などを形成できるもの、およびヒドラジド形成基、例え
ば、カルボベンゾキシヒドラジド、ｔ−ブチルオキシカ
ルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジドなどを形成で
きるもの。

アルギニンのグアニジノ基を保護する基として、ニト
ロ、トシル（Tos）、ｐ−メトキシベンゼンスルホニ
ル、カルボベンゾキシ、イソボルニルオキシカルボニ
ル、アドマンチルオキシカルボニルなどを述べることが
できる。グアジニノ基は、また、酸（例えば、ベンゼン
スルホン酸、トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸など）と
の塩の形態で保護することができる。

スレオニンのヒドロキシル基は、例えば、既知のエス
テル化またはエーテル化によって保護することができ
る。前記エステル化のために適当な基の例として、低級
アルカノイル基（例えば、アセチル）、アロイル基（例
えば、ベンゾイル）、および炭酸から誘導される基、例
えば、ベンジルオキシカルボニル、エチルオキシカルボ
ニルなどを述べることができる。前記エーテル化に適当
な基として、ベンジル、テトラヒドロピラニル、ｔ−ブ
チルなどを述べることができる。しかしながら、スレオ
ニンのヒドロキシル基は必ずしも保護する必要はない。
メチオニンはスルホキシドの形態で保護することができ
る。特定のアミノ酸のための他の好ましい側鎖の保護基
は、次のものを包含する：チロシンについて、ベンジ
ル、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル（BrZ）、2,6
−ジクロロベンジル、イソプロピル、シクロヘキシル、
シクロペンチルおよびアセチル；ヒスチジンについて、
ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−トルエンス
ルホニル、トリチルおよび2,4−ジニトロフェニル；ト
リプトファンについて、ホルミル。

固体の樹脂の支持体へＣ−末端アミノ酸を最初にカッ
プリングするための典型的な手順として、次の指針を述
べることができる。ベンズヒドリルアミンまたはメチル
ベンズヒドリルアミンの樹脂について、Ｎ^α−Boc−ア
ミノ酸または同様に保護されたＣ−末端アミノ酸の（メ
チル）ベンズヒドリルアミン樹脂への取付けは、N,N′
−ジシクロヘキシルカーボジイミド（DCC）/1−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール（HBT）を仲介とするカップリ
ングを、溶媒、例えば、ジクロロメタンまたはDMF、好
ましくはジクロロメタン中で、約10〜50℃、好ましくは
25℃の温度において約２〜24時間、好ましくは約12時間
実施することによって実施する。クロロメチルポリスチ
レンジビニルベンゼン型の樹脂について：樹脂への取付
けは、Ｎ^α−保護アミノ酸、ことにBoc−アミノ酸を、
そのセシウム、テトラメチルアンモニウム、トリエチル
アンモニウム、4,5−ジアザビシクロ−［5.4.0］−ウン
デク−５−エンの塩または同様な塩として、エタノー
ル、アセトニトリル、N,N−ジメチルホルムアミド（DM
F）などの中で、ことにDMF中のセシウム塩として、クロ
ロメチル樹脂と、高温、例えば、約40〜60℃、好ましく
は約50℃において、例えば、約12〜48時間、好ましくは
約24時間反応させることによって実施する。

Ｎ^α−保護基の除去は、例えば、塩化メチレン中のト
リフルオロ酢酸の溶液、ジオキサンの塩化水素の溶液、
酢酸中の塩化水素の溶液、または強酸の溶液、好ましく
はジクロロメタン中の50％のトリフルオロ酢酸の溶液の
存在下にほぼ室温において実施することができる。連続
する保護されたアミノ酸のカップリングは、この分野に
おいてよく知られているように、自動化ポリペプチド合
成装置中で実施することができる。各保護されたアミノ
酸を好ましくはほぼ2.5モル以上の過剰量で導入し、そ
してカップリングはジクロロメタン、ジクロロメタン/D
MF混合物中で、ことに塩化メチレン中で室温において実
施することができる。ペプチド形成縮合反応のために有
用であることが知られている他の溶媒、例えば、ジメチ
ルスルホキシド、ピリジン、クロロホルム、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ−メチルピロ
リドンなど、ならびにそれらの混合物を使用することも
できる。

縮合／カップリング反応のための反応温度は、ペプチ
ド形成縮合反応の目的に利用であることが知られている
範囲から選択することができる。こうして、それは通常
約−40℃〜約60℃、好ましくは約−20℃〜約０℃の範囲
内であろう。カップリング剤は通常ジクロロメタン中の
DCCであるが、N,N′−ジ−イソ−カーボジイミドまたは
他のカーボジイミドの単独であるか、あるいはそれはHB
T、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、２−ヒドロキシイ
ミノ−２−シアノ酢酸エチル、他のＮ−ヒドロキシイミ
ド類芳香族オキシム類の存在下に使用できる。あるい
は、保護されたアミノ酸の活性エステル（例えば、ｐ−
ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニルなど）または
対称無水物を使用できる。

カップリング、脱保護／切離し反応およびポリペプチ
ドの誘導体の調製は、適当には、約−10℃〜＋50℃、最
も好ましくは20℃〜25℃の温度において実施する。特定
の反応についての正確な温度は、もちろん、基質、試
薬、溶媒などに依存し、すべては実施者の技能の範囲内
である。次いで、完全に保護されたポリペプチドは、次
の型のいずれか、あるいはすべてを用いる１連のクロマ
トグラフィーの工程によって精製することができる：酢
酸塩の形態の弱塩基性樹脂を使用するイオン交換；例え
ば、セファデックス（Sephadex）Ｇ−25を使用する、ゲ
ル透過クロマトグラフィー；誘導化されていないポリス
チレン−ジビニルベンゼン［例えば、アンバーライト
（Amberlite）XAD］を使用する疎水性吸着クロマトグラ
フィー；シリカゲルの吸着クロマトグラフィー；例え
ば、セファデックス（Sephadex）Ｇ−25を使用する、イ
オン交換クロマトグラフィー、または向流分布；高性能
液体クロマトグラフィー（HPLC）、ことにオクチル−ま
たはオクタデシルシリル−シリカ結合相のカラム充填を
使用する逆相HPLC。

本発明による合成ペプチドは前述の化学的調製、こと
に前述の固相のペプチトセ合成により、高い効率で、調
製することができるが、式（Ｉ）の新規なチモシンのペ
プチド断片またはその類似体、あるいは式（II）のgag
蛋白質断片またはその類似体を、この分野において現在
よく知られているように、遺伝子工学によって製造する
ことも本発明の範囲内である。こうして、適当な酵素お
よび微生物［例えば、バクテリア、例えば、大腸菌（E.
coli）］を使用して、所望のポリペプチドについて暗号
化するDNA配列を微生物のゲノム中に導入し、これによ
って微生物に問題の特定のペプチドを発現させることが
できる。

いったん特定のペプチドが得られ、そして精製される
と、それをハプテンとして使用して抗原の免疫原を調製
することができ、そしてこの抗原から、HTLV−III/LA
V、ARV−２および同様なエイズのウイルスのgagコア蛋
白質と特異的に交差反応性を有しかつエイズのウイルス
を中和する能力を有する抗体は大量にかつ安定に容易に
得ることができる。したがって、特異的抗体はチモシン
α₁に対する抗体、すなわち、エイズのウイルスの複製
を阻害剤する抗血清、について上に記載したのと同様な
方法において使用することができる。これらの抗体は、
HTLV−III/VAL、ARV−２などにおける免疫反応性蛋白質
を精製するために次のようにして使用できる。すなわ
ち、これらの抗体を、例えば、親和クロマトグラフィー
において、使用するために担体に結合し、そして結合し
た抗体を親和クロマトグラフィーにおいて利用する。特
異的抗体は、また、HTLV−III/LAV、ARV−２などの種々
の免疫学的測定における特異的抗体として使用できる。
したがって、本発明による抗体は、高い特異性をもっ
て、エイズのウイルスの血清中の存在を直接診断するた
めに有用である。

p17gag蛋白質の抗原性を表わすポリペプチド類および
それらでレイズされた抗体類は、これらの診断法におい
て使用して、それぞれ、エイズのウイルスに対する抗体
またはエイズのウイルス自体の存在を検出することがで
きる。これらのポリペプチドおよびそれらの抗体は、診
断キットにおいて、単独で、あるいは他のHTLV−III/LA
V、ARVなどの抗原および抗体のいずれかまたはすべてと
組み合わせて包装することができる。本発明のポリペプ
チドおよび抗体を単独で、あるいは他の抗原または抗体
と組み合わせて使用する、これらの方法およびキット類
は、エイズ感染キャリヤーの迅速かつ便利な同定、およ
びARCおよびエイズの病気の過程の予知を可能とするで
あろう。エイズのウイルスを検出するための典型的なラ
ジオイムノアッセイおよびエライサ（ELISA）につい
て、下に簡単に説明する。

エイズのウイルスを検出するためのラジオイムノアッ
セイ（RIA）：上のように生産されたチモシンα₁に対す
る抗体、チモシンα₁の少なくともアミノ酸、それぞ
れ、位置11、14、15、17、18、24、25および28におけ
る、イソロイシン、リジン、アスパルテート、リジン、
グルタメート、グルタメート、グルタメートおよびアス
パギンを包含する、チモシンα₁のペプチド断片または
その類似体に対する抗体、およびエイズのウイルスのp1
7gag蛋白質の少なくとも位置92〜109におけるアミノ酸
配列の抗原決定基に対する抗体を、固相、例えば、試験
管の内側に取付ける。患者の血清の試料をこの試料管に
添加し、同時に上のように生産されかつ放射性アイソト
ープ、例えば、放射性ヨウ素で標識付けされたエイズの
ウイルスのp17gag蛋白質の抗原性を表わすポリペプチド
の既知量を添加する。患者の血清中のエイズのウイルス
（gag蛋白質に関連する）は、エイズのウイルスのp17ga
g蛋白質の抗原性を表わす標識付けされたポリペプチド
と、結合した抗体との結合について競合するであろう。
過剰の液体を除去し、試験管を洗浄し、そして放射能の
量を測定する。陽性の結果、すなわち、患者の血清がエ
イズのウイルスを含有するとう結果は、試験管中に残留
する低い放射能の計数によって表される。前述の固相ラ
ジオイムノアッセイの代わりに、ある場合において、液
相ラジオイムノアッセイを実施することはいっそう便利
であろう。液相ラジオイムノアッセイの場合において、
エイズのウイルスを認識する抗体、例えば、抗Ｔα₁は
固相に取付けられるが、標識付けされた抗原物質と競合
して、患者の血清と液相において反応することができ
る。次いで、抗体−抗原の相互作用の複合体を任意の適
当な手段で検出することができる。例えば、不溶性ビー
ズに結合した第１抗体に対して反応性の第２抗体（例え
ば、第１抗体に対してであるが、異なる動物においてレ
イズされた抗抗体）を、液相から前記複合体を取り出さ
ないで使用することができる。

エイズのウイルスを検出するためのエライサ（ELIS
A）：本発明に従って調製されたチモシンα₁に対する抗
体、式（Ｉ）のペプチドに対する抗体、あるいはエイズ
のウイルスのp17gag蛋白質の位置91〜109において抗原
性を表わす式（II）のペプチドに対する抗体でマイクロ
タイタープレート（microtiter plate）を被覆し、そし
てこれに患者の血清の試料を添加する。血清中に存在す
るエイズのウイルスのp17gag蛋白質を結合した抗体と相
互作用させるインキュベーション期間が経過した後、こ
のプレートを洗浄する。酵素に結合したエイズのウイル
スに対して向けられた抗体の調製物［これはプレート上
における抗体と同一の抗体であることができる（例え
ば、いわゆる「サンドイッチ」）］を添加する。インキ
ュベーションは抗体−抗原反応を起こすことができ、次
いでプレートを再び洗浄する。その後、酵素の基質をマ
イクロタイタープレートに添加し、そして基質に酵素を
働かさせる時間の間インキュベーションし、そして最後
の調製物の吸収を測定する。大きい吸収の変化は陽性の
結果を指示する。

上に概説したラジオイムノアッセイおよびエライサの
細部が立証するように、本発明によるエイズのウイルス
のp17gag蛋白質の抗原性を表わすポリペプチドの生産
は、医学的設備および研究所において日常的にすでに用
いられている標準の技術による、エイズのウイルスおよ
びエイズのウイルスに対する抗体の検出を可能とする。

本発明のペプチドは、ラジオイムノアッセイ（RIA）
または酵素イムノアッセイ（EIA）、とくにエライサ（e
nzyme linked immunosorbent immunoassay）（ELISA）
において使用される標識付けされた抗原として、放射性
物質、例えば、¹²⁵I、¹³¹I、³H（トリチウム）、¹⁴Cな
ど；種々の酵素試薬、例えば、ペルオキシダーゼ（PO
X）、キモトリプシノゲン、プロカルボキシペプチダー
ゼ、グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲ
ナーゼ、アミラーゼ、ホスホリラーゼ、Ｄ−Ｎアーゼ、
Ｐ−Ｎアーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコース−６
−ホスフェートデジドロゲナーゼ、オルニチンデカルボ
キシラーゼなどをそれに導入することによって利用する
ことができる。上の放射性物質の導入は普通の方法で実
施できる。例えば、放射性ヨウ素の導入は、酸化的ヨウ
素化法により、クロラミンＴ［W,M.ハンター（Hunter）
およびF.C.グリーンウッド（Greenwood）、ネイチャー
（Nature）、194、495（1962）、バイオケミカル・ジャ
ーナル（Biochem.J.）、89、144（1963）を使用して、
あるいはバイオケミカル・ジャーナル（Biochem.j.）、
133、529（1973）に記載されているようにボルテン−ハ
ンター（Bolten−Hunter）試薬（¹²⁵I−ヨウ素化ｐ−ヒ
ドロキシフェニルプロピオン酸Ｎ−ヒドロキシ−スクシ
ンイミドエステル）を使用することによって実施するこ
とができる。米国特許第4,264,571号における実施例２
などを参照。

さらに詳しくは、この方法は適当な溶媒、例えば、0.
2モルのリン酸塩緩衝液（pH7.4）中でクロラミンＴの存
在下にほぼ室温において約10〜30秒間実施することがで
きる。ペプチド、放射性ヨウ素125およびクロラミンＴ
は、チロシンの１分子につき１原子の放射性ヨウ素を導
入するとき、ペプチド中に含有されるチロシンの１ナノ
モルにつき、約1mCiの放射性ヨウ素および10〜100ナノ
モルのクロラミンＴの比で使用し、そしてチロシンの１
分子につき２原子の放射性ヨウ素を導入するとき、ペプ
チド中に含有されるチロシンの１ナノモルにつき、約2m
Ciの放射性ヨウ素および10〜100ナノモルのクロラミン
Ｔの比で使用する。このようにして調製された放射性ヨ
ウ素標識ペプチドは、反応混合物から、慣用の分離技
術、例えば、抽出、分配、カラムクロマトグラフィー、
透析などによって単離しかつ精製することができる。こ
のようにして得られたペプチドは、必要に応じて、凍結
乾燥後、貯蔵することができる。

あるいは、A¹がTyr−Cys−Val−His−Gln−Argまたは
Tyr−Ser−Val−His−Gln−Argである式（II）−１のペ
プチドについて、¹²⁵IはＮ−末端Tyr中に、例えば、米
国特許第4,339,427号の実施例3bに記載される手順によ
り、直接に組込むことができる。

酵素試薬の導入は、既知の方法により、例えば、次の
文献に記載される普通のカップリング反応によって実施
することができる：例えば、B.F.エルランガー（Erlang
er）ら、Acta Endocrinol.Suppl.、168、206（1972）、
およびM.H.カロール（Karol）ら、プロシーディングス
・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ
（Proc.Natl.Acad.Sci.）USA、57、713（1976）など。
すなわち、ペプチドおよび酵素は、pH4〜６の緩衝液、
例えば、１ミリモルの酢酸塩緩衝液（pH4.4）中で酸化
剤、例えば、NaIO₄の存在下に室温で２〜５時間反応さ
せ、次いでNaBH₄などで還元する。酵素はペプチドの１
モルにつき１〜３モルの量で使用できる。酸化剤はペプ
チドの１モルにつき約100〜約300モルの量で使用し、そ
して還元剤は酸化剤の１モルにつき約１〜約２モルの量
で使用することが好ましい。こうして得られた酵素標識
付けペプチドは、放射性ヨウ素標識付けペプチドの場合
において使用した方法に類似する方法で単離し、精製
し、そして貯蔵することができる。

ポリペプチド、すなわち、約50より少ないアミノ酸を
含有するペプチド、は一般に対応する抗体を直接引き出
さないであろう。この理由で、ポリペプチドの抗原を、
ハプテンとして、ハプテン−担体、以後「免疫原担体物
質」と呼ぶ、にカップリングまたは接合し、これによっ
て容易に回収できるために十分に高い力価で特異的抗体
の生産を引き出すことが通常実施されている。それにも
かかわらず、ある種のHTLV−III/LAVenv蛋白質を包含す
る、ある種のポリペプチドの抗原は非常に強い抗原性を
有し、そして免疫系を直接誘発して特異的抗体を生産さ
せることができる。（不都合なことには、今日まで、こ
のような抗env抗体のいずれもエイズのウイルスを中和
することができない。これは、多分、env蛋白質の特定
の抗原がウイルスの複製のために要求されないからであ
ろう。）本発明において、免疫原担体物質にカップリン
グしたチモシンα₁またはgagペプチド（断片および類似
体を包含する）をハプテンとして使用することが一般に
好ましいが、また、とくに少なくとも約26アミノ酸をも
つペプチドについて、ペプチドをワクチンとして、ある
いは特異的抗体の生産において免疫原抗原として、なら
びに、もちろん、本発明の診断の面において直接使用す
ることは、本発明の範囲内である。なおさらに、式
（Ｉ）または式（II）の新規なペプチドのいずれかを、
そのポリマー、例えば、二量体、三量体またはオリゴマ
ーの形態で、すなわち、合成ペプチドのアミノ酸を含有
する反復配列として利用することは本発明の範囲内に入
る。こうして、反復配列が「担体」および「免疫原担体
物質」の両者としてはたらくように、合成ペプチドを重
合して２以上の反復単位の鎖を構成することができる。

以後、本発明のペプチドをハプテンとして使用して免
疫原抗原を生産する方法を詳述する。

ハプテンとして本発明のペプチドを使用し、そしてこ
のペプチドを適当な免疫原担体物質とハプテン−担体結
合剤の存在下に反応させることによって、前述の抗原を
調製する。この場合において、抗原の調製において普通
に用いられる高分子量を有する天然および合成の蛋白質
を、ハプテンへ結合すべき担体として広く使用できる。
さらに、より小さいペプチドまたは分子、例えば、ツフ
シン（tufsin）（テトラペプチド）、ツフシンの類似
体、およびムラミルジペプチド、およびそれらの類似体
は、等しくよく「免疫原担体物質」として作用できる。

ここで使用するとき、用語「免疫原担体物質」は、宿
主動物において免疫原応答を独立に引き出す性質を有し
かつポリペプチドへ共有結合できる物質を包含すること
を意味し、この共有結合は、ポリペプチド中のカルボキ
シル、アミノまたはヒドロキシル基と免疫原担体物質上
の対応する基との間のペプチドまたはエステル結合の形
成を介して形成さるか、あるいは普通の二官能性連結基
を介する結合によって形成される。このような担体の例
は、次のものを包含する：動物の血清のアルブミン、例
えば、ウマ血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ウサ
ギ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、ヒツジ血清ア
ルブミン、など；動物の血清のグロブリン、例えば、ウ
マ血清グロブリン、ウシ血清グロブリン、ウサギ血清グ
ロブリン、ヒト血清グロブリン、ヒツジ血清グロブリ
ン、など；動物の甲状腺グロブリン、例えば、ウマ甲状
腺グロブリン、ウシ甲状腺グロブリン、ウサギ甲状腺グ
ロブリン、ヒト甲状腺グロブリン、ヒツジ甲状腺グロブ
リン、など；動物のヘモグロブリン、例えば、ウマヘモ
グロブリン、ウシヘモグロブリン、ウサギヘモグロブリ
ン、ヒトヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリン、な
ど；動物のヘモシアニン、例えば、キーホール笠貝ヘモ
シアニン（Keyholelimpet hemocyanin）（KLH）、な
ど；カイチュウ（ascaris）から抽出した蛋白質［カイ
チュウ抽出物、日本特許出願（OPI）第16,414/81号、ジ
ャーナル・オブ・イムノロジー（J.Immunol.）、111、2
60−268（1973）、同上、122、302−308（1979）、同
上、98、893−900（1967）およびアメリカン・ジャーナ
ル・オブ・フィジオロジー（Am.J.Physiol.）、199、57
5−578（1960）に記載されているもの、またはそれらの
精製された生成物）；ポリリジン、ポリグルタミン酸、
リジン−グルタミン酸コポリマー、リジンまたはオルニ
チンを含有するコポリマーなど。最近、ワクチンは免疫
原担体物質としてジフテリアのトキソイドまたは破傷風
のトキソイドを使用して製造され［参照、レポウ（Lepo
w）、M.L.ら、伝染病の雑誌（J. of Infectious Deseas
es）、Vol.150、No.3、402−406ページ（1984）；およ
びコウエン・ベウベリー（Coen Beuvery）、E.ら、感染
および免疫性（Infect.Immun.）、40、39−45ページ（1
983年４月）］そしてこれらのトキソイド物質を、ま
た、ここで使用することができる。他の適当な担体は、
例えば、米国特許第4,575,495号に開示されており、ワ
クチン、有機ポリマーを包含する。

ハプテン−担体結合物質として、抗原の調製に普通に
使用されているものを広く用いることができる。これら
の結合剤の特定の例は、次のものを包含する：チロシ
ン、ヒスチジン、トリプトファンなどについてジアゾニ
ウム化合物、例えば、ビスジアゾ化ベンジジン（BDB）
など；アミノ基とアミノ基との架橋のために脂肪族ジア
ルデヒド、例えば、C₂−C₇アルカナール、例えば、グリ
オキサール、マロンジアルデヒド、グルタルアルデヒ
ド、スクシンアルデヒド、アジポアルデヒドなど；チオ
ール基とチオール基との架橋のためにジマレイミド化合
物、例えば、N,N′−ｏ−フェニレンジマレイミド、N,
N′−ｍ−フェニレンジマレイミドなど；アミノ基とチ
オール基との架橋のためにマレイミドカルボキシル−Ｎ
−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば、メタマ
レイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル、４−（マレイミドメチル）−シクロヘキサン−
１−カルボキシ−Ｎ′−ヒドロキシスクシンイミドエス
テルなど；アミノ基とカルボキシル基とからアミド結合
が形成される普通のペプチド結合形成反応において使用
される物質、例えば、カーボジイミドのような脱水剤お
よび縮合剤、例えば、N,N−ジシクロヘキシルカーボジ
イミド、Ｎ−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノカーボジイ
ミド、１−エチル−３−ジイソプロピルアミノカーボジ
イミド、１−シクロヘキシル−３−（２−モリホリニル
−４−エチル）カーボジイミドなど。上のハプテン−担
体結合剤として、また、ジアゾニウムアリールカルボン
酸、例えば、ｐ−ジアゾニウムフェニル酢酸などを、普
通のペプチド結合形成剤、例えば、脱水剤および縮合剤
と組み合わせて使用することが可能である。

チモシンα₁またはそのペプチド断片またはその類似
体を免疫原担体物質へ共有カップリング（covalent cou
pling）することは、この分野においてよく知られた方
法で実施することができる。こうして、例えば、直接の
共有カップリングのために、カーボジイミド、最も好ま
しくはジシクロヘキシルカーボジイミドまたは１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カーボジイミ
ドをカップリング剤として利用することが可能である。
このような直接カップリングにおいて、この工程のため
に、わずかに酸性の反応媒質、例えば、約３〜6.5の範
囲、最も好ましくは約４〜6.5の範囲のpHを有する媒質
を利用することが望ましい。

中性またはアルカリ性である式（Ｉ）または式（II）
のペプチドをハプテンとして使用する抗原の調製のため
のカップリング反応は、同様な方法であるが、pH7〜10
の水溶液または普通の緩衝液中において、好ましくはpH
8〜９の緩衝液中において、約０℃〜40℃、好ましくは
ほぼ室温において実施することができる。この反応は一
般に約１〜約24時間以内、好ましくは３〜５時間以内で
完結する。上の方法において使用できる緩衝液の代表的
な例は、次のものを包含する： 0.2モルの水酸化ナトリウム−0.2モルのほう酸−0.2
モルの塩化カリウムの緩衝液； 0.2モルの炭酸ナトリウム−0.2モルのホウ酸−0.2モル
の塩化カリウムの緩衝液； 0.05モルの酒石酸ナトリウム−0.2モルのホウ酸−0.05
モルの塩化ナトリウムの緩衝液； 0.1モルのリン酸二水素カリウム−0.05モルの四ホウ
酸ナトリウムの緩衝液。

上において、ハプテン、ハプテン−担体結合剤および
担体の比は適当に決定されるが、担体はハプテンの重量
の約１〜約６倍、好ましくは約１〜約５倍の量で使用
し、そしてハプテン−担体結合剤はハプテンのモルの約
５〜約10倍で使用することが好ましい。上の反応によ
り、担体はハプテンにハプテン−担体結合剤を介して結
合して、ペプチド−担体複合体から構成された所望の抗
原が得られる。

反応の完結後、このようにして得られた抗原は、透析
法、ゲル過法、分別沈殿法などによって容易に単離し
かつ精製することができる。

このようにして得られた抗原は、蛋白質の１モルにつ
き平均５〜60モルのペプチドをそれに対して結合し、そ
して前記抗原に対して高い特異性を有する抗体の引続く
調製を可能とする。とくに、ペプチドの１モルにつき、
平均、５〜20モル、好ましくは８〜15モルの量でペプチ
ドが結合した抗体は、より高い特異性を有し、かつ高い
活性および感受性を有する抗体の調製を可能とするの
で、好ましい。

抗原を使用する抗体の調製は、前述の抗原を、好まし
くはアジュバントを使用して、哺乳動物に投与し、こう
して所望の抗体を生体内で生産し、そして前記抗体を集
めることによって実施される。改良された力価は、ある
期間にわたる反復注射によって得ることができる。

抗体の調製に提供される哺乳動物に対して特定の制限
は存在しないが、一般にウサギまたはモルモットを使用
することが好ましいが、ウマ、ヤギ、ブタ、ラット、ウ
シ、ヒツジなどを使用することもできる。抗体の導入に
おいて、上に記載した抗体の明確に限定された量を生理
的食塩水で適当な濃度に希釈し、そして得られた希釈液
を完全フロインドアジュバントと混合して懸濁液を調製
する。この懸濁液を哺乳動物に投与する。例えば、前述
の懸濁液をウサギに皮内投与する（抗原の量として0.1
〜5mg/回（time））。

次いで、この懸濁液を２週毎に２〜10か月、好ましくは
４〜６か月にわたって投与して免疫化を実施する。抗体
の収集は、最後の投与から１〜２週の経過後、免疫化動
物から血液を熱め、血液を遠心し、そして血液から血清
を分離することによって実施する。この手順に従い、エ
イズのウイルスの抗原決定基、とくに位置92〜109にお
けるp17gagコア蛋白質と選択的に複合化する抗体を集
め、そしてエイズに対して危険な状態にある患者（例え
ば、同性愛者、ハイチ人、静脈内薬物使用者など）、エ
イズのウイルスにさらされた患者、またはエイズまたは
ARCの症状に悩む患者を免疫化するための抗血清として
使用することができる。あるいは、抗体は、ラジオイム
ノアッセイ、エライサなどを利用して、HTLV−III/LA
V、ARV−２およびエイズを起こしうる同様なヒト白血病
レトロウイルスをアッセイするために使用できる。例え
ば、血清学的アッセイにおいて使用するとき、本発明の
抗体は、ラジオイムノアッセイにおける使用のために放
射性アイソトープで、あるいは普通に使用される酵素ま
たは蛍光性物質で標識付けし、そしてエライサ、蛍光イ
ムノアッセイ（FIA）などにおいて使用することができ
る。さらに、本発明の抗体は普通の固定化剤と反応させ
ることによって固定化することができる。

したがって、本発明は、エイズのウイルスを中和する
ために強力なワクチンを提供する、抗原性チモシンα₁
のペプチド、およびp17gagペプチド、それらの断片およ
び類似体を包含する、を提供する。したがって、本発明
のワクチンは、エイズに対して危険な状態にある患者、
またはエイズのウイルスにさらされた患者を免疫化する
ために、あるいはエイズ関連コンプレックスをもつ患者
または臨床的に明白なエイズをもつ患者を処置するため
に使用することができる。

本発明の方法においてワクチンとして使用するとき、
ワクチンは注射により、筋肉内に、非経口的に、経口的
に、あるいは皮下に最も便利に宿主に対して投与するこ
とができる。宿主に対して許容されることができ、そし
て宿主に対して悪い副作用を有さずかつワクチンに悪影
響を及ぼさない、普通の液体または固体の賦形剤のいず
れを使用することもできる。生理学的pH、例えば、pH6.
8〜7.2、好ましくはpH7のリン酸塩緩衝化食塩水溶液
を、担体として、単独で、あるいは適当なアジュバント
と組み合わせて使用することができる。免疫原抗原の濃
度は、一般に約0.25〜1ml、例えば、約0.2mlの体積の溶
媒中の、約50〜200μg/注射、例えば、約100μg/注射の
範囲内で変化することができる。初期の注射後、多数回
の注射を必要することがあり、そして多数回の注射を行
なうとき、約２〜約14日、例えば、約７日の間隔でそれ
を行なうことができる。

免疫原性抗原のチモシンα₁または式（Ｉ）および（I
I）の関連するペプチドを宿主に投与する、前述の活性
免疫化の代替法として、通常宿主以外の異なる種におい
てレイズされた、本発明の抗エイズのウイルス抗体を直
接投与することがも可能であるが、宿主と同一の種の異
なる個体においてレイズされた抗体を使用することもで
きる。このような受動免疫化の場合において、抗血清、
活性免疫化法について記載したのと、一般に同一の適用
モードおよび同一の型の担体および同一またはより高い
投与割合を使用することもできる。例えば、抗体が静脈
内注射によりゆっくり（例えば、約６時間で）投与され
るかぎり、1.5g程度に多いネズミモノクローナル抗体を
不都合な毒性を与えないで投与することができる。

本発明の範囲内のなお他の別の実施態様は、式（Ｉ）
および（II）のペプチドの１つまたはチモシンα₁に対
するモノクローナル抗体に対してレイズされた抗イディ
オタイプ抗体に基づくワクチンおよび免疫化法である。
モノクローナル抗体に対してレイズされた抗免疫グロブ
リン血清は、「抗イディオタイプ」血清と定義され、そ
して引き出し性抗体の可変領域を認識し、そして結合部
位に対して向けられている。結合部位に対して向けられ
たこの抗イディオタイプ抗体は、事実、もとの抗原のた
めの基質であることができる。したがって、この機構を
使用して、古典的な免疫化プロトコールを介するのと同
等であるか、あるいあそれより高い効率で、免疫化し、
そしてチモシンα₁またはそのペプチド断片またはその
類似体あるいはgagペプチドおよび断片および類似体に
対する抗体をレイズすることが可能である。

チモシンα₁のペプチドに対する抗体のHTLV−III/LAV
ウイルス蛋白質に対する特異性の測度として、競合ラジ
オイムノアッセを前述の米国特許第4,264,571号および
米国特許第4,339,427号（それらの開示を引用によって
ここに加える）に一般に記載されているように実施し
た。ロウスチャ−（Rouscher）ネズミ白血病レトロウイ
ルス（RLV）ではない、HTLVーIII/LAV蛋白質は、競合ラ
ジオイムノアッセイにおいてＴα₁を置換できることが
発見された。結果を表２に示す。HTLV−III/LAVはＴα₁
抗血清に対して直線の投与応答線を示し、これに対して
RLV分離物はＴα₁抗血清と交差反応性ではない。これら
の結果が立証するように、大量の免疫反応性Ｔα₁様物
質がHTLV−III/LAV中に存在するが、RLV分離物中には存
在せず、これによりHTLV−III/LAVおよびＴα₁における
相同配列がRLV中に存在しないことが確証される。

チモシンα₁に対する抗体およびヒトレトロウイルスH
TLV−III/LAVおよび同様なエイズ関連レトロウイルスに
対する本発明の他の新規な抗体の特異性をさらに立証す
るために、他のレトロウイルスのＴα₁に対する交差反
応性を競合ラジオイムノアッセイによって決定した。結
果を第３図に示す。ネコ白血病レトロウイルス（FeL
V）、サル肉腫レトロウイルス（SSV）、テナガザル（gi
bbon ape）白血病レトロウイルス（GALV）またはネズミ
白血病レトロウイルス（RVL）のいずれも有意の交差反
応性を示さなかった。

実施例１ この実施例は、本発明による新規なペプチドの１つ、
すなわち、式 Tyr−Ser−Val−His−Gln− Arg−Ile−Asp−Val−Lys− Asp−Thr−Lys−Glu−Ala− Leu−Glu−Lys−Ile−Glu− Glu−Glu−Gln−Asn−Lys− Ser−Lys−Lys−Lys−Ala を有する、HTLV−III/LAVのp17gagコア蛋白質の位置8
6−115に相当するトリコンタペプチドの[Ser]⁸⁷類似体
を製造するための、固相ペプチド合成を説明する。

Boc−Ala−OCH₂−C₆H₄−樹脂（2g,1.0ミリモル）（サ
イクル１）を、ペプチド合成容器（150ml）中に入れ、
そして20体積の次の溶媒および／または試薬で、各サイ
クル２〜30について次の順序において処理する： （１）40％のトリフルオロ酢酸（TFA）で予備洗浄す
る； （２）40％のトリフルオロ酢酸（TFA）とともに28分間
撹拌する； （３）ジクロロメタン、CH₂Cl₂、で３回洗浄する； （４）10％のトリエチルアミン（TEA）で予備洗浄す
る。

（５）10％のTEAとともに５分間撹拌する； （６）CH₂Cl₂で３回洗浄する； （７）Boc−Lys（C1Z）−OH（1.25g、３ミリモル）（サ
イクル２）およびジシクロヘキシルカーボジイミド（0.
618g、３ミリモル）とともに120分間撹拌する； （８）各々CH₂Cl₂、50％のイソプロパノールおよびCH₂C
l₂で３回洗浄する。カップリングが完了したとき、反応
をニンヒドリン反応によって試験する。カップリングが
不完全である場合、工程（７）および（８）を反復す
る。

カップリングが完結したとき、次のように、工程
（７）において保護された（Boc）アミノ酸の各々を使
用して、工程（１）〜（８）を実施することによって、
次のサイクルおよび引続くサイクル３〜30を実施する： サイクル3:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル4:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル5:Boc−Ser（Bzl）−OH（0.89g）； サイクル6:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル7:Boc−Asn−OH（0.70g）＋１−ヒドロキシ
ベンズトリアジド（１−hydrixy benxtriazde）（HBT）
（0.92g）； サイクル8:Boc−Gln−OH（0.74g）＋HBT（0.92g）； サイクル9:Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01g）； サイクル10:Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01g）； サイクル11:Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01g）； サイクル12:Boc−Ile−OH（0.72g）； サイクル13:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル14:Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01g）； サイクル15:Boc−Leu−OH（0.75g; サイクル16:Boc−Ala−OH（0.57g）； サイクル17:Boc−Glu（OBzl）−OH（1.01g）； サイクル18:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル19:Boc−Thr（Bzl）−OH（0.93g）； サイクル20:Boc−Asp（OBzl）−OH（0.97g）； サイクル21:Boc−Lys（ClZ）−OH（1.25g）； サイクル22:Boc−Val−OH（0.65g）； サイクル23:Boc−Asp（OBzl）−OH（0.97g）； サイクル24:Boc−Ile−OH（0.72g）； サイクル25:Boc−Arg（Tos）−OH（1.29g）； サイクル26:Boc−Gln−OH（0.74g）＋HBT（0.92g）； サイクル27:Boc−His（Tos）−OH（1.23g）； サイクル28:Boc−Val−OH（0.65g）； サイクル29:Boc−Ser（Bzl）−OH（0.89g）； サイクル30:Boc−Try（BrZ）−OH（1.49g）。

この手順に従い、乾燥基準で、6.18gの30アミノ酸樹
脂が得られる。

保護されたペプチド樹脂の一部（3.5g）を、ほぼ15ml
の無水HFで０℃において5mlのアニソールの存在下に45
分間処理する。過剰の酸を蒸発させ、そして得られた切
離されかつ脱保護された粗製ペプチドを乾燥エーテルで
簡単に洗浄し、そして150mlの２％の酢酸アンモニウム
中に抽出する。このペプチド溶液を約40mlに濃縮し、そ
して濃縮したペプチド溶液をセファデックス（Sephade
x）Ｇ−10カラム（2.6×90cm）のクロマトグフィーにか
け、0.1モルの酢酸で溶離し、そして280nmにおいて監視
する。

主要なペプチドの分画をプールしそして50mlに濃縮し
た。凍結乾燥後、1.09gの実質的に純粋な生成物（高性
能液体クロマトグラフィー（HPLC）により決定して）が
得られる。

実施例２ ラジオイムノセッセイ このアッセイの作業範囲に適する濃度（0.5〜37.5ng/
100μｌ）の合成チモシンα₁の原溶液を、ラジオイムノ
アッセイ緩衝液中で調製し、そして10℃において凍結す
る。ラジオイムノアッセイ緩衝液（RIAB）はリン酸塩緩
衝液（pH＝7.4、0.01モルのリン酸ナトリウムおよび0.1
5モルのNaCl）であり、これに0.05％（w/v）のNaN₃、0.
01ミリモルのEDTAおよび0.5％のウシ血清アルブミン（5
0g/l）を添加する。0.5/〜37.5ng/100μｌの合成チモシ
ンα₁を含有する９つの標準を、原溶液から調製し、そ
して必要に応じて使用するために４℃において凍結す
る。未知の試料は５〜20μl/アッセイの血清を必要と
し、そして食塩水溶液を添加して100μｌの試料を得
る。すべての管をRIABで400μｌの最終体積にする。原
抗血清の50μｌのアリコート（1/200の希釈）を各管に
添加する。希釈はトレーサーの20〜25％の結合および1/
2000の最終希釈を与える。非特異性は、特異的抗チモシ
ンα₁抗血清以外のすべてのアッセイ試薬を含有する管
を処理することによって評価する。管を渦形成し、そし
て４℃で24時間インキュベーションする。結合したトレ
ーサーの分離は、KYNAR（ポリマーに結合したヤギ抗ウ
サギIgG）の添加により実施する。渦形成および室温に
おける15分間のインキュベーション後、４℃において15
分間1500×ｇで遠心することによって、免疫沈殿物を沈
殿させる。上澄みを扱い取り、廃棄し、そして免疫沈殿
物中の放射能を自動化ガンマ分光高度計［ベックマン・
ガンマ（Beckman Gamma）4000］で測定する。標準およ
び未知についての計数／分は、非特異的バックグラウン
ド、通常放射能の５％、非特異的バックグラウンドにつ
いて補正し、そして競合抗原を導入しない（Bo）反応管
についての補正された計数／分で割る。データはベック
マン・システムDP5500で分析し、このシステムは;log線
量（ｘ軸）対観測された計数をプロットし、そしてデー
タを４つのパラメーターの数学的方法を使用して計算
し、ここで線量−応答曲線は次によって記載される： ここでＹ＝応答、ｘ＝濃度、Ａ＝応答（ｘ＝０のと
き）、Ｂ＝傾斜係数、ｃ＝ＡとＢとの間の半分の応答に
相当する線量、そしてＤ＝無限濃度についての応答。

実施例３ エライサ（enzyme linked immuno sorbent
assay）（ELISA） アッセイの作業範囲に適する濃度、すなわち、100〜3
200pg/mlの間の６投与レベル、においてリン酸塩緩衝化
食塩水溶液中の合成Ｔα₁の原溶液を調製し、そのアリ
コートを取り、−20℃で貯蔵し、そして標準曲線の作成
のため１回溶融する。エライサ緩衝液はリン酸塩緩衝化
食塩水溶液、8.0gのNaCl、0.2gのNaCl、0.2gのKH₂PO₄、
1.15gのNa₂HPO₄および0.2gのKClであり、これに１リッ
トルの蒸留水pH7.4中の0.75mlのツイーン20および0.2g
のNaN₃を添加する。合成Ｔα₁の標準溶液（5000μｌ）
または未知の試料（25μｌ）を、12×75mmの試験管に添
加する。次いで、緩衝液、250μｌ、を未知の試料に添
加し、そして原抗血清の1:2500希釈物の500μｌをすべ
ての管の添加する。管を渦形成し、パラフィルム（para
film）で密閉し、そして４℃において一夜インキュベー
ションする。コスター（Costar）の平底マイクロタイタ
ープレートのウェル（well）を、ダルベッコ（Dulbecc
o）のリン酸塩緩衝化食塩水溶液［10×、ギブコ（GIBC
O）、米国ニューヨーク州グランドアイランド］中の50n
g/mlのＴα₁溶液の100μl/ウェルを添加することによっ
て合成Ｔα₁で被覆し、そして37℃で一夜インキュベー
ションする。このプレートをPBS/ツイーンで洗浄し、そ
して200μl/ウェルのウマ血清で遮断する。100μｌの各
抗体−抗原溶液をウェルに添加し、そして４℃で一夜イ
ンキュベーションする。プレートを洗浄し、そしてPBS
−ツイーン中のビオチン標識抗ウサギ抗体の1/1000希釈
液の100μｌを各ウェルに添加し、そして37℃で１時間
インキュベーションする。100μｌのアビジンアルカリ
性ホスファターゼ（PBS−ツイーン中1/3000の希釈）を
添加し、そしてプレートをさらに１時間インキュベーシ
ョンする。各ウェルに100μｌのホスフェート基質（２
ペレット/10mlのジエタノールアミン緩衝液）を添加す
る。プレートを30分間にわたってインキュベーション
し、そして光学濃度（OD）を決定する。次いで、血清試
料についての値を標準について少なくともスクエアーズ
・フィット（squares fit）の計算により得る。

実施例４ モノクローナル抗体 チモシンのペプチドに対するモノクローナル抗体の生
産は、例としてＴα₁を使用して次のようにして実施で
きる。抗Ｔα₁を生産するマウスからの脾臓を、ポリエ
チレングリコールを使用してSP20/骨髄腫細胞と融合す
る。ハイポキサンチン−アミノプレリン−チミジン（HA
T）選択培地を使用して雑種クローンを生産し、そして
引続いて、クローンを、実施例２および３に記載するよ
うにしてＴα₁ に対する抗体を生産するものとして、ラジオイムノアッ
セイおよびエライサによって同定する。モノクローナル
ハイブリドーマを組織培養において維持し、そして抗チ
モシンα₁の腹水の生産のためにシナージェニック（syn
ergenic）マウスの腹腔中に継代接種する。

抗チモシンα₁抗体を得るための免疫化は次のように
して発生させる：マウスIgGに接合したＴα₁をマウス
（Balb/c）に注射する。3.5mg/mlの合成Ｔα₁を7.0mg/m
lのマウスIgG［マイルス・ラボラトリー（Miles Labora
tory）、米国インジアナ州エルクハート］および40μｌ
のグルタルアルデヒドと3.5時間混合してカップリング
を実施し、次いで食塩水溶液に対して一夜透析する。こ
の接合体を第１日目に等体積のフロインドの完全アジュ
バントと混合し、第２週目および第４週目に10μｇの接
合体Ｔα₁および不完全アジュバントで促進を与える。
第５週目にマウスを尾の静脈から放血し、そして血清を
エライサにより抗チモシンα₁について評価する。簡単
に述べると、5ngのＴα₁をマイクロタイタープレートの
各ウェル中にプレイティングし、そしてマウス血清の種
々の希釈物を添加し、そして１時間インキュベーション
する。洗浄後、アルカリ性ホスファターゼにカップリン
グした抗マウスIgGを添加し、１時間インキュベーショ
ンし、洗浄し、そして基質を添加する。融合のため脾臓
の切除の４日前に、マウスを20μｇのチモシン・IgG接
合体を腹腔内または静脈内の投与により促進する。

融合は次のように実施する：融合のための細胞（８−
アザグアニン耐性SP20骨髄腫）を、融合前、の５日間毎
日の継代培養によって対数期にする。マウスからの脾臓
を収穫し、RPMIで洗浄し、そして骨髄腫細胞（10⁸/ml）
で等体積に再懸濁する。両者の細胞を混合し、そして60
0×ｇで沈殿させる。上澄みを除去し、そして1mlの50％
のポリエチレングリコールを37℃において１分間にわた
っておだやかに添加する。細胞をさらの１分間混合し、
8mlの加温DMEMをゆつくり添加し、そして細胞を沈殿さ
せる。細胞を２×10⁶/mlで再懸濁させ、そして0.1mlを
マイクロタイタープレートの各ウェルに添加する。培地
を必要に応じて交換する（20％の胎児ウシ血清を含むRP
MI）。14日後、HT培地を使用し、そして問題のウェルを
エライサおよびラジオイムノアッセイにより抗体につい
てスクリーニングする。

次いで、陽性と試験されるウェルを、モノクローン性
が保証されうるまで、コンディショニングしたHT培地で
制限希釈する。それらをラジオイムノアッセイおよびエ
ライサの両方で再試験し、そして組織培養およびシナー
ジェニック（synergenic）マウスの腹水の両者において
維持し、雑種を得る前の１〜３週に、0.5mlのプリスタ
ンでプライミングする。腹水の収穫によって、モノクロ
ーナル抗体を濃縮するために十分な量の物質が得られ
る。

実施例５ 大腸菌（E.coli）を使用する遺伝子工学によ
るgagポリペプチドの生産 メチオニンのコドンからグルタミンのコドンに及び全
p17gag解読配列（HTLV−III/LAVまたはARVの全gag蛋白
質を生産するため）、あるいは位置92、イソロイシンの
コドン、から位置109、アスパラギンのコドン、に及ぶ
アミノ酸を暗号化する少なくともヌクレオチドにわたっ
て延長する短縮された解読配列は、雑種tryp/lacプロモ
ーター−オペレーターの制御下に大腸菌（E.coli）中で
発現することができる。次いで、ポリペプチドはIPTG、
lacオペロンの誘導物質、によって誘導することができ
る。

転写のシグナルおよび翻訳のシグナルの適当な組の導
入は、開始（例えば、メチオニン）コドンにNcol部位を
導入し、次いで特殊化された発現ベクター、例えば、PM
FZOlTetを添加することによって実施することができ、
前記発現ベクターは雑種tryp/lacプロモーター、lacオ
ペレーターおよび強いリボソーム結合配列を含み、これ
らは隣接するNcol部位におけるメチオニンが転写された
mRNAの翻訳のために最適に位置しかつ全体の解読配列が
大腸菌（E.coli）中で効率よく翻訳されるように位置す
る。

雑種Bgal−GAG融合ポリペプチドは、NH₂末端またはCO
OH末端付近においてガラクトシダーゼのための遺伝子が
挿入されたDNAの、適当な制限エンドヌクレアーゼ発生
断片の使用して生産される。フレーム構造はコロニーに
おけるgal酵素活性によって同定される。これらの蛋白
質は、親和クロマトグラフィーにより、基質類似体につ
いてのガラクトシダーゼの親和性を使用して精製され
る。

実施例６ この実施例は、ウサギにおいて血清抗体の生産を引き
出す、本発明の新規なgagポリペプチドの効率を明らか
にする。

実施例１の合成gagトリコンタペプチドを、次の手順
を用いてグルタルアルデヒドによって、キーホール笠貝
ヘモシアニン（KLH）にカップリングする。蛋白質、ト
リコンタペプチドおよびヘモシアニンの各々の等量（乾
燥重量）を、0.25モルのNaPO₄、pH7.0、緩衝液中に2mg/
mlの濃度で溶解する。等体積の蛋白質溶液を混合し、そ
して蛋白質混合物の体積の１％に等しい体積のグルタル
アルデヒド（25％の水溶液）を添加する。この反応を３
時間進行させ、その間室温において撹拌する。この反応
混合物を無菌の食塩水溶液で100μg/mlのトリコンタペ
プチドの最終濃度に希釈する。カップリングしたペプチ
ドの溶液のアリコートを取り、そして−20℃で貯蔵す
る。

室温において実施した架橋反応から生ずる生成物の混
合物を、いかなる方法においても分別または精製しな
い。KLHの接合体を無菌の正常の食塩水溶液で希釈し、
そして免疫化のために凍結して貯蔵する。

バイツカイチス（Vaitukaitis）ら、J.Clin.Endoch、3
3、988（1971）の方法に従い、フロインド完全アジュバ
ントで乳化した100μｇのポリペプチド（KLH接合体とし
て）を各ウサギの背に15〜20の皮内部位に投与すること
によって、ウサギを免疫化する。また、フロインド不完
全アジュバント中の10μg/動物のポリペプチドの促進剤
を、毎週、多皮内部位に投与する。実施例３に前述した
エライサにおいて使用可能なペプチドに対する抗体の力
価は、わずか３週の休止期間後に得られ、引続いて100
μｇの量のポリペプチドで促進し、そして各促進投与後
の７日目に各ウサギを放血した。

各ウサギからの血清をPBSで1:10に希釈し、そして実
施例３に記載するようにしてエライサのアッセイにより
評価する。最高の抗体力価を有するウサギについての結
果は第４図に示されており、ここで週１は放血前の値を
表わす。抗体の最大濃度は週４において見出される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、表２からのデータに基づく、H9細胞における
HTLV−IIIレトロウイルスの複製を阻害するチモシンα₁
に対する抗血清の能力をプロットした棒グラフである。 第２図は、ヒトレトロウイルスHTLV−III/LAVとロウシ
ャー（Rouscher）ネズミ白血病レトロウイルス（RLV）
との間の競合ラジオイムノアッセイのグラフである。 第３図は、RIAにより決定した、チモシンα₁に対する抗
血清のHTLV−III/LAV、HTLV−Ｉおよび種々のレトロウ
イルス抽出物への交差反応性を表わす棒グラフである。 第４図は、本発明の新規なgag蛋白質の１つを使用した
ワクチン接種に対するウサギにおける典型的な抗体の応
答を表わすグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｈ 33/577 Ｂ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｃ０７Ｋ 16/10 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式（II）−１ A¹−Ile−Y₁−Y₂−Lys−Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu
   −Y₃−Lys−Ile−Glu−Glu−Glu−Gln−Asn−B¹ （II）−１ 式中、 Y₁はAspまたはGluであり、 Y₂はValまたはIleであり、 Y₃はGluまたはAspであり、 A¹はＨ、Arg、Gln−Arg、His−Gln−Arg、 Val−His−Gln−Arg、Ser−Val−His−Gln−Arg、Tyr−
   Cys−Val−His−Gln−Arg、およびTyr−Ser−Val−His
   −Gln−Argからなる群より選択される構成員であり、そ
   して B¹はOH、Lys、Lys−Ser、Lys−Ser−Lys、Lys−Ser−Ly
   s−Lys、Lys−Ser−Lys−Lys−LysおよびLys−Ser−Lys
   −Lys−Lys−Alaからなる群より選択される構成員であ
   る、 を有するHIV p17 gag蛋白質のペプチド断片。
2. 【請求項２】式 Tyr−A₁−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−A
   sp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−A₂−Lys−Ile−Glu−Gl
   u−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala 式中、 A₁はCysまたはSerであり、そして A₂はAspまたはGluである、 を有するp17 gag蛋白質またはその[Ser]⁸⁷類似体の位置
   86〜115におけるHIVのトリアコンタペプチド断片である
   特許請求の範囲第１項記載のペプチド。
3. 【請求項３】A₁がCysである特許請求の範囲第２項記載
   のペプチド。
4. 【請求項４】式 Tyr−Ser−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−
   Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−Glu−Lys−Ile−Glu−
   Glu−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala を有する特許請求の範囲第２項記載のペプチド。
5. 【請求項５】免疫原担体物質へ共有結合した式（II）−
   １ A¹−Ile−Y₁−Y₂−Lys−Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu
   −Y₃−Lys−Ile−Glu−Glu−Glu−Gln−Asn−B¹ （II）−１ 式中、 Y₁はAspまたはGluであり、 Y₂はValまたはIleであり、 Y₃はGluまたはAspであり、 A¹はＨ、Arg、Gln−Arg、His−Gln−Arg、Val−His−Gl
   n−Arg、Ser−Val−His−Gln−Arg、Tyr−Cys−Val−Hi
   s−Gln−Arg、およびTyr−Ser−Val−His−Gln−Argか
   らなる群より選択される構成員であり、そして B¹はOH、Lys、Lys−Ser、Lys−Ser−Lys、Lys−Ser−Ly
   s−Lys、Lys−Ser−Lys−Lys−LysおよびLys−Ser−Lys
   −Lys−Lys−Alaからなる群より選択される構成員であ
   る、 を有するHIV p17 gag蛋白質のペプチド断片を含有する
   ことを特徴とする免疫原抗原。
6. 【請求項６】免疫原担体物質へ共有結合した式 Tyr−A₁−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−A
   sp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−A₂−Lys−Ile−Glu−Gl
   u−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala 式中、 A₁はCysまたはSerであり、そして A₂はAspまたはGluである、 を有するp17 gag蛋白質またはその[Ser]⁸⁷類似体の位置
   86〜115におけるHIVのトリアコンタペプチド断片を含有
   することを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の免疫
   原抗原。
7. 【請求項７】免疫原担体物質に結合した式 Tyr−Ser−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−
   Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−Glu−Lys−Ile−Glu−
   Glu−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala を有するペプチドを含有する特許請求の範囲第６項記載
   の免疫原抗原。
8. 【請求項８】治療的に有効量の式（II）−１ A¹−Ile−Y₁−Y₂−Lys−Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu
   −Y₃−Lys−Ile−Glu−Glu−Glu−Gln−Asn−B¹ （II）−１ 式中、 Y₁はAspまたはGluであり、 Y₂はValまたはIleであり、 Y₃はGluまたはAspであり、 A¹はＨ、Arg、Gln−Arg、His−Gln−Arg、Val−His−Gl
   n−Arg、Ser−Val−His−Gln−Arg、Tyr−Cys−Val−Hi
   s−Gln−Arg、およびTyr−Ser−Val−His−Gln−Argか
   らなる群より選択される構成員であり、そして B¹はOH、Lys、Lys−Ser、Lys−Ser−Lys、Lys−Ser−Ly
   s−Lys、Lys−Ser−Lys−Lys−LysおよびLys−Ser−Lys
   −Lys−Lys−Alaからなる群より選択される構成員であ
   る、 を有するHIV p17 gag蛋白質のペプチド断片および製薬
   学的に許容されうる担体を含有することを特徴とする後
   天性免疫不全症候群（エイズ）またはエイズ関連コンプ
   レツクス（ARC）の予防または処置において使用するた
   めのワクチン。
9. 【請求項９】治療的に有効量の式 Tyr−A₁−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−A
   sp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−A₂−Lys−Ile−Glu−Gl
   u−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala 式中、 A₁はCysまたはSerであり、そして A₂はAspまたはGluである、 を有するp17 gag蛋白質またはその[Ser]⁸⁷類似体の位置
   86〜115におけるHIVのトリアコンタペプチド断片および
   製薬学的に許容されうる担体を含有する特許請求の範囲
   第８項記載の後天性免疫不全症候群（エイズ）またはエ
   イズ関連コンプレツクス（ARC）の予防または処置にお
   いて使用するためのワクチン。
10. 【請求項１０】治療的に有効量の式 Tyr−Ser−Val−His−Gln−Arg−Ile−Asp−Val−Lys−
    Asp−Thr−Lys−Glu−Ala−Leu−Glu−Lys−Ile−Glu−
    Glu−Glu−Gln−Asn−Lys−Ser−Lys−Lys−Lys−Ala を有するペプチドおよび製薬学的に許容されうる担体を
    含有する特許請求の範囲第８項記載の後天性免疫不全症
    候群（エイズ）またはエイズ関連コンプレツクス（AR
    C）の予防または処置において使用するためのワクチ
    ン。