JPH083200A - Ｈｔｌｖ−ｉｉｉ／ｌａｖウイルス関連ペプチドに対する抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 式 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、Ｙ₂はＶａｌま
たはＩｌｅであり、そしてＹ₃はＧｌｕまたはＡｓｐで
ある、のアミノ酸配列を含む約４０個までのアミノ酸を
有するＨＩＶ−１のｐ１７蛋白質のペプチド断片に特異
的な抗体。 【効果】 エイズまたはエイズ関連コンプレツクスの予
防または処置、エイズウイルスの検出等のために有用で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、チモシンα₁のペプチド断片ま
たはその類似体に対する新規な抗体および抗血清を含
む、後天性免疫不全症候群（Ａcquired Ｉmmune Ｄef
iciency Ｓyndrome）（エイズ）（ＡＩＤＳ）または前
エイズ（pre−ＡＩＤＳ）［またエイズ関連コンプレッ
クス（ＡＩＤＳ−Ｒelated Ｃomplex）すなわちＡＲＣ
としても知られている］を処置または予防するためのウ
イルス、あるいはＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ−
２または他の同様なレトロウイルスのp１７gag蛋白質の
ペプチド断片に関する。本発明は、また、血液中のＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ−２などのレトロウイル
スの存在を直接検出するための診断試験に関する。

【０００２】後天性免疫不全症候群（エイズ）は、ヘル
バーＴ−細胞（Ｔ₄ ⁺）およびＴ₄ ⁺／Ｔ⁸⁺リンパ球の比の
減少、日和見的な（opportunistic）感染の発生の増加
および免疫系の漸進的機能停止によって特徴づけられ
る。エイズの病因学的因子は、ヒトＴリンパ趨向性レト
ロウイルス、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ（またＬＡＶまたはＡＲ
Ｖと呼ばれる）として同定された。多くの面において、
エイズの臨床的症候は、胸腺の形成不全または低形成お
よび、ニューモシスチス・カリニイ（pneumocystis ca
rnii）の肺炎を含む、日和見的な感染に対する感受性の
増大に関連する、稀な一次免疫不全（rare primay im
munodeficiency）（ＰＩＤ）疾患をもつ子供において頻
繁に見られる症候群と区別できない。リンパ系の成熟お
よび機能において重要な役割を演ずる胸腺がエイズに参
加する可能性は、エイズをもつ個体またはエイズ危険群
に属する個体の血液中のＴα₁様ペプチドのレベルの増
大の検出によって関係づけられた。次の文献を参照：ネ
イラー（Ｎaylor）、Ｐ．Ｈ．ら、エイズについてのＮ
ＹＡＳモノグラフ（ＮＹＡＳ Ｍongraph onＡＩＤ
Ｓ）、４３７、８８（１９８５）；ハーシュ（Ｈirs
h）、Ｅ．Ｍ．ら、ニュー・イングランド・ジャーナル
・オブ・メディシン（Ｎew Ｅng． Ｊ．Ｍed．）、３
０８、４５（１９８３）；ビッガー（Ｂiggar）、Ｒ．
Ｊ．ら、ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メ
ディシン（Ｎew Ｅng．Ｊ． Ｍed．）、３０９、４９
（１９８３）；クレス（Ｋress）Ｊ．Ｋ．ら、アナルス
・オブ・インターナル・メディシン（Ａnnal．Ｉnt．Ｍ
ed．）、１００、１７８（１９８４）；ケスラー（Ｋes
sler）、Ｃ．Ｍ．ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オ
ブ・ヘマトロジー（Ｂrit．Ｊ． Ｈematology）、５
８、３２５（１９８４）。

【０００３】Ｔα₁は均質に精製され、そして部分的に
精製されたチモシン分画５（ＴＦ５）から配列決定され
た最初の胸腺ホルモンである。次の文献を参照：ゴール
ドステイン（Ｇoldstein）、Ａ．Ｌ．ら、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエ
ンシズ（Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．）ＵＳＡ、７
４、７２５（１９７７）、米国特許第４，００２，７４
０号、米国特許第４，０１０，１４８号、米国特許第
４，１４８，７８８号など。それは分子量３１０８の酸
性ポリペプチド（pＩ４．２）であり、チモシン分画５
（ＴＦ５）の生物学的活性の多くを有し、そして生体内
および生体外において効力のある免疫変調因子（immnom
odulator）である。Ｔα₁は主としてヘルパーＴ細胞に
作用し、そして動物およびヒトにおいてＴ細胞の遺伝子
標識の発現を増大し、インターロイキン−２（ＩＬ−
２）およびγ−インターフェロンを包含する、ある数の
リンホカイン類の生産を刺激し、かつ免疫機能および腫
瘍の免疫性を回復させることが発見された。Ｔα₁は、
ヘルパーＴ細胞の機能を回復させ、そして肺癌患者の放
射線治療後の生存を延長することが示された、現在最初
の生物学的応答変更因子（modifier）（ＢＲＭ）であ
る、シュロフ（Ｓchulof）、Ｒ．Ｓ．ら、ジャーナル・
オブ・バイオロジカル・リスポンス・モディファイアー
ズ（Ｊ．Ｂiol．Ｒesp．Ｍod．）、４、１４７（１９８
５）。ペルハム（Ｐelham）らへの米国特許第４，５２
１，４０７号は、特定の子牛胸腺エキスはエイズを有す
る人の細胞免疫系を刺激できることを開示している。

【０００４】子供におけるエイズとＰＩＤとの間の臨床
的類似性が与えられると、Ｔα₁レベルはエイズおよび
エイズ関連コンプレックス（ＡＲＣ）をもつ患者におい
て抑制されるであろうことが期待された。Ｔα₁は米国
特許第４，２６４，５７１号および米国特許第４，３３
９，４２７号に記載されるようにしてラジオイムノアッ
セイによって測定できる。驚くべきことには、ウェルお
よびＡＲＣをもつ患者からの血液の検査は、Ｔα₁の著
しく増大したレベルを示した。例えば、カポジ肉腫をも
つ７２の個体のうち４４（６０％）およびニューモシス
チス・カリニイ（pneumocystis carnii）の肺炎をもつ
２２の個体のうち１２（５４％）は、正常の個体の平均
から２標準偏差より上のＴα¹レベルを有した。引続く
研究において、同性愛者および両性愛者、静脈内薬物濫
用者、ハイチ人、およびリンパ腺症をもつ同性愛者を包
含する、エイズの患者の全国的規模のサンプリングにつ
いて、最初の発見が確証された。

【０００５】Ｔα₁の上昇を説明するために、３つの可
能な代替現象（alternatives）が提案された：１）生物
学的活性なペプチドのレベルを増大させるヘルパーＴ細
胞の欠乏、すなわち、示端器（end−organ）の疾患；
２）胸腺上皮細胞へのウイルスの侵入、および引続くホ
ルモンの生産および／または処理についての制御の損
失；または３）「エイズ」ウイルスに関連する生物学的
に不活性であるが、免疫学的に交差反応性の蛋白質の存
在。ネイラー（Ｎaylor）Ｐ．Ｈ．ら、エイズ（ＡＩＤ
Ｓ）（アラン Ｒ．リス、ニューヨーク）（１９８５）
（２６５ページ）に報告されているように、エイズにつ
いて危険な状態にある同性愛者の血液中のＴα₁様ペプ
チドの、それ以上の化学的および免疫学的な特性づけ
は、この異常に増加したペプチドが交差反応性の分子で
ありうること、および、事実、真正のＴα₁がしばしば
有意に減少することを示している。

【０００６】Ｔα₁の交差反応性の物質を同定するため
に、本発明者はコンピューターによって助けられる分析
を用いて相同ペプチド類について範囲の広い分析を開始
した。ナショナル・バイオロジカル・リサーチ・ファン
デイション（Ｎational Ｂiological Ｒesearch Ｆo
undation）、米国ワシントン州、の配列バンク（sequen
ce bank）における３,５００以上の蛋白質配列、入手
可能なＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのカタログおよびナシ
ョナル・キャンサー・インスチチュート（Ｎaitional
Ｃancer Ｉnstitute）（ＮＣＩ）におけるロバート・
ガロ（ＲobertＧallo）博士の実験室からの他のレトロ
ウイルスの分離物を使用した。他の胸腺ホルモン類また
はリンホカイン類との有意の相同性は発見されなかった
が、予期されざることには、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ
およびＡＲＶ−２のＴα₁およびgag［コア（core）］蛋
白質（p１７）は、それらの一次配列の１８アミノ酸領
域（Ｔα₁上の位置１１〜２８およびp１７gag蛋白質上
の位置９２〜１０９）において４４％〜５０％の相同性
を共有することが発見された。

【０００７】現在、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ／ＡＲＶ
遺伝子およびその生産物（すなわち、蛋白質および／ま
たは糖蛋白質）によって誘発される疾患に対するワクチ
ンを開発するための、本質的にすべての継続中の研究の
細心の計画は、エンベロープ遺伝子、envに集中されて
きた。例えば、次の文献を参照：フィッシンガー（Ｆis
chinger）、Ｐ．Ｊ．ら、「ヒトＴ細胞リンパ趨行性レ
トロウイルス類（ＨＴＬＶ−Ｉ、−ＩＩ、−ＩＩＩ）に
より誘発された病気に対するワクチンについての現在の
状態および細心の計画（Ｃurrent Ｓtatus and Ｓtr
ategies for Ｖaccines against Ｄiseases Ｉndu
ced by Ｈuman Ｔ−Ｃell Ｌymphotropic Ｒetrov
iruses（ＨＴＬＶ−Ｉ、−ＩＩ、−ＩＩＩ）」癌の研究
（ＣancerＲesearch）、４５、４６９４s−４６９９s
（１９８５年９月）；Ｌ．デイビス（Ｄavis）、「エイ
ズのワクチンの研究：有望な蛋白質（ＡＩＤＳ Ｖacci
neＲesearch：Ｐromising Ｐrotein）」、サイエンス
・ニューズ（ＳcienceＮews）、１２９、１０、１５１
ページ（１９８６年３月）。多分、この細心な計画は、
エンベロープ蛋白質（すなわち、外側の被膜）が抗体の
生産に導く体の免疫系によって「認識」されうるであろ
う抗原部位をきっと提供するであろうという従来の知識
に基づいている。

【０００８】しかしながら、例えば、フィッシンガー(F
ischinger)らが指摘するように、ｅｎｖ遺伝子および対
応するｅｎｖ蛋白質における種々のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／
ＬＡＶのうちで観察される広範な異質性および抗原の変
動のために、これらの免疫原を使用するワクチンの開発
はかなりの困難に直面することが予測され、そして多分
徒労であろう。

【０００９】対照的に、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのｇ
ａｇコア蛋白質は、明らかには免疫系の防御に「暴露」
されていないが、非常により高度に観察され、水溶液突
然変異および遺伝的ドリフト(genetic drift)にさらさ
れる程度が極めて少ない。

【００１０】本発明は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのｇ
ａｇ蛋白質部分に共通の抗原決定基は特異的エピトー
プ、チモシンα₁と高度の相同性を有することがわかっ
たエピトープ、に対して向けられた抗体で容易に殺され
るという非常に驚くべき発見に基づく。

【００１１】ロバート(Robert)Ｃ．ガロ(Gallo)らは、
米国特許第４,５２０,１１３号において、エイズおよび
ＡＲＣの状態をもつ患者の血清中のＨＴＬＶ−ＩＩＩに
対する抗体の血清学的検出のための診断試験を記載して
いる。現在広く実施されているこのような診断手順は、
誤った結果に導く種々の欠陥に悩まされる。詳しくは、
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶウイルスに対する抗体の存在
を決定する診断試験は、誤った陰性または陽性の結果を
生じうる次の欠点を有する。エイズのウイルスにさらさ
れるある患者は、不十分な免疫応答を有し、そして抗体
を生産しないことがある。ある患者は最近さらされた
が、なんらかの量または検出可能な量の抗体をまだ生産
しないことがある（エイズに対する抗体は検出可能なレ
ベルで生産されるまでに８週までの期間を要する）。血
清中に抗体を有する患者は、彼らの系中に残留する抗体
をもたないことがある。こうして、「誤った陽性」の結
果は後者の場合において与えられ、これに対して「誤っ
た陰性」の結果は２つの前者の場合において示唆される
であろう。

【００１２】したがって、明らかなように、エイズのウ
イルスの存在を直接にあるいは間接に検出する診断試験
は、エイズにさらされている患者あるいはエイズにかか
る高い危険なカテゴリーにある患者の早期の検出および
診断のために極めて重要である。

【００１３】したがって、本発明の目的は、ＨＴＬＶ−
ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶまたは後天性免疫不全症候群
（エイズ）に関連する他の同様なレトロウイルスを中和
するとき有効な抗体の形成を誘導できる安全なワクチン
を提供することである。

【００１４】本発明の関連する目的は、エイズの発現に
ついて危険な状態にある個体あるいはエイズのウイルス
にさらされた個体に、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲ
Ｖまたは他のエイズのウイルスの複製を遮断できる特異
的中和性抗体の形成を引き出す免疫原抗原物質を投与す
ることによって、前記個体を免疫化する方法を提供する
ことである。

【００１５】免疫原抗原物質のチモシンα₁、あるいは
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ／ＡＲＶ蛋白質と共通のエピ
トープを共有する他の新規なペプチドを利用するか、あ
るいはチモシンα₁の位置１１〜２８におけるアミノ酸
配列、またはこのようなペプチドの断片、類似体または
ポリマーと相同性を共有するエイズのウイルスのp１７g
ag蛋白質のペプチドを利用する、このような安全ワクチ
ンおよび活性な免疫化法を提供することである。

【００１６】本発明の他の目的は、抗Ｔα₁血清、その
ＩgＧに富んだ調製物、あるいはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／Ｌ
ＡＶのgag蛋白質と共通のエピトープを共有する他のペ
プチドまたは類似体に対する抗血清、あるいはＨＴＬＶ
−ＩＩＩ／ＬＡＶウイルスそれ自体のgag領域から誘導
されたコア蛋白質断片に対する抗血清を使用する、ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶの複製を遮断できる抗血清を提供
することである。

【００１７】本発明の他の関連する目的は、新規なチモ
シンα₁ペプチド断片およびその類似体および／または
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶウイルスのgag領域から誘導
されたコア蛋白質断片を提供することである。

【００１８】本発明のなお他の目的は、新規なペプチド
のいずれかを免疫原担体物質に結合することによって、
新規な免疫原を提供することである。

【００１９】本発明のさらになお他の目的は、エイズお
よび／またはエイズ関連コンプレックス（ＡＲＣ）の処
置および予防において使用するための、ペプチド、断片
および／またはエピトープに対して特異的な新規な抗
体、およびこのような新規な抗体、またはこのような抗
体を含有する抗血清、または抗Ｔα₁抗血清、またはＩg
Ｇに富んだその調製物を使用する、エイズに対する受動
免疫化を提供することである。

【００２０】本発明のほかの目的は、エイズのウイルス
の存在または不存在の直接の血清学的検出を実施できる
診断法およびキットを提供することである。

【００２１】本発明のこれらの目的および他の目的は、
以下の詳細な説明および好ましい実施態様を参照しかつ
添付図面の助けにより明らかとなるであろう。そして、
本発明のこれらの目的および他の目的は、本発明の１つ
の面に関連して、エイズのウイルスにさらされた個体、
エイズについて危険な状態にある個体、あるいはエイズ
に感染した個体に、エイズ関連レトロウイルスのコア蛋
白質のgag領域の少なくとも約位置９２から少なくとも
約位置１０９に延長するアミノ酸配列において共通のエ
ピトープをエイズ関連レトウイルスと共有する天然また
は合成のペプチドの治療的に有効量を投与し、こうして
前記個体を誘発してエイズのウイルスを中和できる抗体
を生産させることを特徴とする後天性免疫不全症候群
（エイズ）に関連するウイルス血症を減少する方法によ
って達成される。

【００２２】あるいは、本発明は、エイズに悩む個体、
エイズに感染した個体、あるいはエイズについて危険な
状態でにある個体に、チモシンα₁あるいはエイズ関連
レトロウイルスのgag領域の少なくとも約位置９２から
少なくとも約位置１０９に延長するアミノ酸配列におい
て共通のエピトープをエイズ関連レトロウイルスイルス
と共有する他のペプチドに対してレイズされた抗体の投
与することをを含んでなり、前記抗体はエイズ関連レト
ロウイルスイルスを中和できることを特徴とする前記個
体において受動免疫化を誘発する方法を提供する。

【００２３】エイズのウイルスを中和できる抗体を形成
するための抗原として使用できる合成ペプチドの例は、
式（Ｉ） Ａ₀−Ｉle−Ｘ₁−Ｘ₂−Ｌys−Ａsp−Ｘ₃−Ｌys−Ｇlu−Ｘ₄−Ｘ₅− Ｘ₆−Ｘ₇−Ｘ₈−Ｇlu−Ｇlu−Ｘ₉−Ｘ₁₀−Ａsn・ＣＯＯＨ （Ｉ） 式中、Ｘ₁〜Ｘ₁₀は、独立に、アミノ酸であり、そして
Ａ₀はＮＨ₂または約６までのアミノ酸のアミノ酸配列で
ある、を有するチモシンα₁のペプチド断片またはその
類似体、またはその塩、エステル、エーテルまたはアミ
ド、あるいは少なくともアミノ酸配列９２〜１０９を含
みかつ式（ＩＩ） Ａ−Ｉle−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌys−Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu−Ａla−Ｌeu −Ｙ₃−Ｌys−Ｉle−Ｇlu−Ｇlu−Ｇlu−Ｇln−Ａsn−Ｂ （ＩＩ） 式中、Ｙ₁はＡspまたはＧluであり、Ｙ₂はＶalまたはＩ
leであり、Ｙ₃はＧluまたはＡspであり、ＡはＮＨ₂また
は約１０アミノ酸までのアミノ酸配列であり、そしてＢ
はＣＯＯＨまたは約１０アミノ酸までのアミノ酸配列で
あり、ペプチドは合計約４０までのアミノ酸、好ましく
は３６までのアミノ酸、ことに好ましくは約３０までの
アミノ酸を有する、を有する、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡ
Ｖ／ＡＲＶのp１７gag蛋白質のペプチド断片である。

【００２４】本発明による特に好ましいポリペプチド
は、式 Ｔyr−Ａ₁−Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａrg−Ｉle−Ａsp−Ｖa
l−Ｌys− Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu−Ａla−Ｌeu−Ａ₂−Ｌys−Ｉl
e−Ｇlu− Ｇlu−Ｇlu−Ｇln−Ａsn−Ｌys−Ｓer−Ｌys−Ｌys−Ｌ
ys−Ａla 式中、Ａ₁はＣysまたはＳerであり、そしてＡ₂はＡspま
たはＧluである、によって表わされるアミノ酸配列を有
する、位置８６〜１１５におけるＨＴＬＶ−ＩＩＩ／Ａ
ＲＶウイルスのトリコンタペプチド断片またはその［Ｓ
er］⁸⁷類似体；およびその¹²⁵Ｉ誘導体である。

【００２５】現在ヒトＴ細胞リンパ趨行性種およびいく
種類かの関連種、例えば、ネコ、ウシ、ウサギなどを包
含することが知られているレトロウイルスの族は、保護
の内側蛋白質被膜（コア蛋白質）内に包まれている一本
鎖ＲＮＡを含有することによって特徴づけられ、そして
包まれたＲＮＡ鎖は次に外側蛋白質被膜（エンベロープ
蛋白質）内に含有されている。ＲＮＡゲノムは、コア
（gag）蛋白質の遺伝情報を指定する「gag」遺伝子およ
びエンベロープ（env）蛋白質（または糖蛋白質）の遺
伝情報を指定する「env」遺伝子を含む。エンベロープ
蛋白質は、ウイルスが宿主細胞の表面へ結合する機構の
原因であることは明らかであり、かつウイルスの一番外
側の層として「可視」であるので、細胞の免疫系による
認識のための候補でありかつ抗体による攻撃にされる可
能性が最も多いウイルスの抗原決定基すなわちエピトー
プはエンベロープ蛋白質上に存在することが一般に期待
される。しかしながら、不都合なことには、ＨＴＬＶ−
ＩＩＩ／ＬＡＶウイルスのenv遺伝子はかなりの異質性
および信号の変動を示し、そして今日まで、env蛋白質
に対して向けられた有効なワクチンが発見されていない
が、この分野において広範な研究が進行している。

【００２６】ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのenv遺伝子の
異質性および抗原の変動と対照的に、gag遺伝子、それ
ゆえgag（コア）蛋白質は非常にいっそう保存されるよ
うに見える。したがって、コア蛋白質に対して特異的な
抗体はエイズを起こすウイルスの非常に広いスペクトル
に対して有効であることが期待されるであろう。

【００２７】本発明は、今回、後天性免疫不全症候群
（エイズ）に関連する、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶおよ
びＡＲＶ−２レトロウイルスのコア蛋白質に対して特異
的な抗体を提供することに成功した。簡単に述べると、
エイズ、およびエイズ関連コプレックス（ＡＲＣ）の原
因となるレトロウイルスの異なるが関連する族のすべて
は、ここでおよび特許請求の範囲において、エイズのウ
イルスと集合的に呼ぶ。

【００２８】チモシンα₁およびＨＴＬＶ−ＩＩＩおよ
びＡＲＶのウイルスの１８アミノ酸配列にわたって高度
（約５０％）の相同性が存在することが、エイズの患者
のチモシンα₁(Ｔα₁）のレベルの増大の観察に促され
て、発見された。チモシンα₁はアミノ酸配列を有す
る： Ａc−Ｓer−Ａsp−Ａla−Ａla−Ｖal−Ａsp−Ｔhr−Ｓe
r−Ｓer− Ｓer−Ｇlu−Ｉle−Ｔhr−Ｔhr−Ｌys−Ａsp−Ｌeu−Ｌ
ys−Ｇlu− Ｌys−Ｌys−Ｇlu−Ｖal−Ｖal−Ｇlu−Ｇlu−Ａla−Ｇ
lu−Ａsn− ＣＯＯＨ ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶおよびＡＲＶ−２のgag遺伝
子は、５１２アミノ酸を含有する４つのgag蛋白質、そ
れぞれ、ほぼ１７，０００、２４，０００、７，０００
および９，０００の分子量を有する、gagp１７、gagp２
４、gagp７およびgagp９の遺伝情報を指定する。チモシ
ンα₁の主要配列、およびp１７gag蛋白質を比較する
と、下に示すように、チモシンα₁上の位置１１および
２８と、gag蛋白質上の位置９２および１０９との間の
１８アミノ酸領域の４４％〜５５％の相同性が示され
る：

【００２９】

【表１】

【００３０】

【表２】

【００３１】この異常に高い相同性に基づいて、エイズ
のウイルスを中和するチモシンα₁に対する抗体（abＴ
α₁)の能力を検出するために前記抗体を評価した。この
評価は、Ｈ９許容細胞系中のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ
の複製を阻害する前記抗体の能力を測定することによっ
て実施した。チモシンα₁で免疫化したウサギの血清中
のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶに対する抗体を中和する抗
体の存在を検出するために、Ｐ．Ｓ．サリン（Ｓarin）
ら、バイオケルミカル・ファーマコロジー（Ｂiochem．
Ｐharmacol．）、３４、４０７５（１９８５）に記載さ
れているようなＨ９細胞中のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ
複製系を使用した。

【００３２】簡単に述べると、Ｈ９細胞の感染は、培地
中の逆転写酵素（ＲＴ）の活性を測定し、そしてＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ／ＬＡＶのp１５およびp２４の発現について
間接免疫蛍光アッセイを使用することによって監視す
る。免疫蛍光アッセイはメタノール：アセトン（１：
１）中で固定した細胞について実施し、そしてＨＴＬＶ
−ＩＩＩ／ＬＡＶのp１５およびp２４に対するモノクロ
ーナル抗体を使用する。抗体処理を実施したおよび実施
しないＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ感染細胞をトキソプラ
スモシスのスライド（toxoplasmosis slide）上に固定
する。メタノール：アセトン（１：１）で室温において
３０分間固定した後、スライドは使用するまで−２０℃
において密閉プラスチック袋中に貯蔵する。モノクロー
ナル抗体を反復実験のウェル（well）に添加し、加湿室
内で１時間室温においてインキュベーションし、そして
０．２５％のトリトンＸ−１００を含有するＰＢＳで２
時間洗浄する。次いで、細胞をフルオレセイン（ＦＩＴ
Ｃ）接合マウスＩgＧに対するヤギ抗血清（Ｃapell Ｌ
abs）に対して１時間暴露し、そして０．２５％のトリ
トンＸ−１００を含有するＰＢＳで一夜洗浄する。スラ
イドを５０％のグリセロールで取付け、そして細胞の蛍
光をツァイス（Ｚeiss）蛍光顕微鏡で観測する。

【００３３】ウサギにおいて調製したＴα₁に対する異
種抗血清の１０の異なるロットの分析は、ＨＴＬＶ−Ｉ
ＩＩ／ＬＡＶに対する中和性抗体の存在を確立する（表
１）。Ｔα₁に対する抗血清は、チモシンα₁についての
ラジオイムノアッセイに関連して米国特許第４，２６
４，５７１号中に記載されるようにして調製した。簡単
に述べると、合成Ｔα₁はグルタルアルデヒドを介して
キーホール笠貝ヘモシアニン（keyhole limpet hemoc
yanin）（ＫＬＨ）（１：１重量）にカップリングし
て、１００μg／mlのＴα₁の最終濃度を得る。この接合
体をフロインド完全アジュバントと混合（１ｍｌおよび
１ｍｌ）し、そしてニュージーランドの白ウサギにいく
つかの部位において皮内投与する。ウサギに１週の間隔
で６週（２〜４月）間促進注射（フロインド完全アジュ
バント中１００μgのＴα₁）をする。１月の休止後、最
大の力価が達成されるまで動物に毎月促進注射をする。
すべての場合において、ＲＴは有意に阻害される（５３
±３％）が、１：２０の希釈で使用した粗製抗血清のい
くつかは、Ｈ９に対する多少の細胞特性を示しおよび／
またはp１５およびp２４の発現を阻害できなかった。し
たがって、Ｔα₁抗血清の４ロットを選択し、そしてそ
れらの各々について、免疫グロブリン（ＩgＧ）に富ん
だ調製物を調製して、抗ウイルス活性がＩgＧによって
仲介されることを確証した。ＩgＧに富んだ調製物は硫
酸アンモニウム（４０％）の沈殿によって調製する。遠
心後、沈殿をＰＢＳ中に溶解し、そしてＰＢＳに対して
２４時間透析する。次いで、各ロットを０．８ミクロン
のミリポアフィルターで濾過する。硫酸アンモニウムの
沈殿の代わりに、あるいはそれに加えて、抗血清は他の
慣用の手段、例えば、スタフ（staph）−Ａ精製、ＨＰ
ＬＣ精製などによって濃縮することができる。

【００３４】表２に要約するように、Ｔα₁に対する抗
血清の濃縮したＩgＧ調製物はＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡ
Ｖの中和において高度に有効である；それらはウイルス
蛋白質p１５およびp２４の発現およびＲＴの活性を阻害
し、そしてＨ９細胞に対して細胞傷害性ではない。Ｔα
₁に対して免疫化したウサギからの抗血清は、同様に中
和活性を示すＡＲＣおよびエイズをもつ患者の血清と同
等にエイズのウイルスの中和において有効である。Ｔα
₁およびＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのgag蛋白質における
共通のエピトープに向けられた抗血清またはＩgＧに富
んだ調製物は、生体外のこのウイルスの中和においＴ高
度に有効であるばかりでなく、かつまたエイズをもつ患
者から得られたある血清中に存在する抗中和性抗体と比
較してすぐれる。

【００３５】

【表３】

【００３６】表１に対する凡例 ＊Ｈ９細胞のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ感染：Ｈ９細胞
をポリブレン（２μg／ml）で３７℃において３０分間
処理し、洗浄してポリブレンを除去し、そして４×１０
⁵のＨ９細胞につき２×１０⁸ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ
ウイルス粒子で感染させる。中和性抗体のアッセイのた
め、血清を５６℃で３０分間熱不活性化し、そして０.
４５μmのフィルターで濾過する。適当に希釈した抗体
を、２４ウェルの平らな底の板（２ｍｌ）中でＨＴＬＶ
−ＩＩＩ／ＬＡＶ（５００ウイルス粒子／細胞）と混合
する。この板を４℃で１時間そして２０℃で１５分間イ
ンキュベーションする。Ｈ９細胞をウェルに添加して、
５×１０⁵細胞／ｍｌの最終濃度を得る。培養物は３７
℃および５％のＣＯ₂において９６時間インキュベーシ
ョンする。この期間後、生きている細胞をトリパンブル
ーの存在下に計数する。細胞の懸濁液を５００×gで１
０分間遠心する。上澄みを逆転写酵素のアッセイのため
に処理し、そして細胞をトキソプラスモシスのスライド
上に取付け、メタノール：アセトン（１：１）中で固定
し、そして、Ｐ．Ｓ．サリン（Ｓarin）ら、バイオケル
ミカル・ファーマコロジー（Ｂiochem．Ｐharmaco
l．）、３４、４０７５（１９８５）に記載されている
ようにして、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、p１５およびp
２４に対するモノクローナル抗体を使用して分析する。

【００３７】

【表４】

【００３８】＊Ｈ９細胞：Ｈ９細胞をプロベイン（２μ
g／ml）で３７℃において３０分観処理し、洗浄してプ
ロブレンを除去し、そして２×１０⁸のＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉ／ＬＡＶウイルス粒子／４×１０⁵のＨ９細胞で感染
させる。培養物を感染後４日目に分析する。中和性抗体
のアッセイを表１に記載するように実施する。

【００３９】＊＊ＩgＧに富んだ血清は硫酸アンモニウ
ムの沈殿によって調製する。精製前の抗Ｔα₁のロット
は活性について試験する。

【００４０】便宜上、Ｈ９細胞についての表２における
データを第１図にプロットする。第１図から容易に明ら
かなように、抗Ｔα₁抗体はエイズのウイルスの中和に
おいて高度に有効である。さらに、このデータから結論
されるように、ウイルスのゲノムのこのエピトープ領域
（gag蛋白質の位置９２〜１０９）はエイズのウイルス
の複製にとって極めて重要である。

【００４１】したがって、本発明はエイズの予防または
処置のための抗血清を提供し、ここで１つの実施態様に
おいて、チモシンα₁に対する抗体、あるいは位置１１
または２８における少なくとも共通のエピトープ領域を
含む、チモシンα₁のペプチド断片または類似体に対す
る抗体、あるいは少なくとも約位置９２から少なくとも
約位置１０９を含 む、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶまた
はＡＲＶ−２のp１７gag蛋白質の共通のエピトープに対
する抗体を投与に基づく（すなわち受動免疫化）。別の
実施態様において、これらのペプチドのいずれもワクチ
ンを提供し、このワクチンは、エイズのウイルスにさら
された個体、エイズについて危険な状態にある個体、ま
たはエイズに感染した個体に投与したとき、個体の免疫
系を誘発して、ペプチドに対して特異的でありかつエイ
ズのウイルスの調製を阻害するとき有効である抗体を生
産させる。

【００４２】次の式（Ｉ）： Ａ₀−Ｉle−Ｘ₁−Ｘ₂−Ｌys−Ａsp−Ｘ₃−Ｌys−Ｇlu−Ｘ₄−Ｘ₅− Ｘ₆−Ｘ₇−Ｘ₈−Ｇlu−Ｇlu−Ｘ₉−Ｘ₁₀−Ａsn・ＣＯＯＨ （Ｉ） 式中、Ａ₀はＮＨ₂または１〜約６のアミノ酸のアミノ酸
配列であり、そしてＸ₁〜Ｘ₁₀は、独立に、天然に産出
するアミノ酸である、で表わされるチモシンα₁のＣ−
末端におけるペプチド断片またはその類似体あるいはそ
の塩、エステル、エーテルまたはアミド、および次の式
（ＩＩ）： Ａ−Ｉle−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌys−Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu−Ａla−Ｌeu −Ｙ₃−Ｌys−Ｉle−Ｇlu−Ｇlu−Ｇlu−Ｇln−Ａsn−Ｂ （II） 式中、Ｙ₁はＡspまたはＧluであり、Ｙ₂はＶalまたはＩ
leであり、Ｙ₃はＧluまたはＡspであり、ＡはＮＨ₂また
は約１０アミノ酸までのアミノ酸配列であり、そしてＢ
はＣＯＯＨまたは約１０アミノ酸までのアミノ酸配列で
あり、ペプチドは合計約４０より 多くないアミノ酸を
有する、で表わされるgagコア蛋白質の少なくとも約９
２〜約１０９の位置における抗原領域のペプチド断片
は、それら自体、新規な組成物でありそして式（Ｉ）お
よび（ＩＩ）のペプチドに対する抗体は、また、新規な
組成物であり、同様にこれらの抗体またはペプチドを含
有する抗血清およびワクチンも新規である。

【００４３】式（Ｉ）のペプチドにおいて、Ｘ（Ｘ₁〜
Ｘ₁₀）は天然に産出するアミノ酸、すなわち、次のもの
のいずれであることもできる：アラニン（Ａla）、アル
ギニン（Ａrg）、アスパラギン（Ａsn）、アスパラギン
酸（Ａsp）、システイン（Ｃys）、グルタミン（Ｇl
n）、グルタミン酸（Ｇlu）、グリシン（Ｇly）、ヒスチ
ジン(Ｈis）、イソロイシン（Ｉle）、ロイシン（Ｌe
u）、リジンン（Ｌys）、メチオニン（Ｍet）、フェニ
ルアラニン（Ｐhe）、プロリン（Ｐro）、セリン（Ｓe
r）、スレオニン（Ｔhr）、トリプトファン（Ｔrp）、
チロシン（Ｔyr）およびバリン（Ｖal）。同様に、Ａ₀
が１以上のアミノ酸を表わすとき、それはこれらのアミ
ノ酸の任意の組み合わせからなることができ、あるいは
Ａ₀はチモシンα₁のＮ−末端上のＩleに隣接するアミノ
酸配列、すなわち、Ｇlu、Ｓer−Ｇlu、Ｓer−Ｓer−Ｇ
lu、Ｔhr−Ｓer−Ｓer−Ｇlu、Ａsp−Ｔhr−Ｓer−Ｓer
−Ｇlu、Ｖal−Ａsp−Ｔhr−Ｓer−Ｓer−Ｇluなどであ
ることができる。

【００４４】Ｘ₁がＴhrであり、Ｘ₂がＴhrであり、Ｘ₃
がＬeuであり、Ｘ₄がＬysであり、Ｘ₅がＬysであり、Ｘ
₆がＧluであり、ＸがＶalであり、Ｘ₈がＶalであり、Ｘ
₉がＡlaであり、そしてＸ₁₀がＧluであるとき、式(Ｉ）
のペプチドはチモシンα₁のＣ₁₁〜Ｃ₂₈末端に相当し、
そして式（Ｉ）−１： Ａ₀−Ｉle−Ｔhr−Ｔhr−Ｌys−Ａsp−Ｌeu−Ｌys−Ｇlu− Ｌys−Ｌys−Ｇlu−Ｖal−Ｖal−Ｇlu−Ｇlu−Ａla−Ｇlu− Ａsn−ＣＯＯＨ （Ｉ）−１ を有する。

【００４５】式（Ｉ）において、Ｘ₆はＧluまたはＡsp
であることがことに好ましく、前者はＡＲＶ−２の位置
１０２におけるＧluに相当し、そして後者はＨＴＬＶ−
ＩＩＩ／ＬＡＶの位置１０２におけるＡspに相当する。

【００４６】抗Ｔα₁抗血清はエイズのウイルスの中和
において有効であるので、アミノ酸Ｘ₁〜Ｘ₁₀、とくに
Ｘ₁〜Ｘ₅およびＸ７〜Ｘ１０が抗体の認識のためにそれ
ほど重要でないことがある。

【００４７】他方において、式（Ｉ）のペプチドにおい
て、Ｘ₁がＡspであり、Ｘ₂がＶalであり、Ｘ₃がＴhrで
あり、Ｘ₄がＡlaであり、Ｘ₅がＬeuであり、Ｘ₆がＧluで
あり、Ｘ₇がＬysであり、Ｘ₈がＩleであり、Ｘ₉がＧlu
であり、そしてＸ₁₀がＧlnであるとき、式（Ｉ）−２ Ａ₀−Ｉle−Ａsp−Ｖal−Ｌys−Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu− Ａla−Ｌeu−Ｇlu−Ｌys−Ｉle−Ｇlu−Ｇlu−Ｇlu−Ｇln− Ａsn−ＣＯＯＨ （Ｉ）−２ の得られるペプチドは、位置９２〜１０９におけるＡＲ
Ｖ−２gag蛋白質と同一に対応し、すなわち、１００％
の相同性を有し、そしてエイズのウイルスに対してさら
になおいっそう高度に有効な抗体を提供するであろう。

【００４８】同様に、Ｘ₁がＧluであり、Ｘ₂がＩleであ
り、Ｘ₃がＴhrであり、Ｘ₄がＡlaであり、Ｘ₅がＬeuで
あり、Ｘ₆がＡspであり、Ｘ₇がＬysであり、Ｘ₈がＩleで
あり、Ｘ₉がＧluであり、そしてＸ₁₀がＧlnであると
き、式（Ｉ）−３ Ａ₀−Ｉle−Ｇlu−Ｉle−Ｌys−Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu− Ａla−Ｌeu−Ａsp−Ｌys−Ｉle−Ｇlu−Ｇlu−Ｇlu−Ｇln− Ａsn−ＣＯＯＨ （Ｉ）−３ の得られるペプチドは、位置９２〜１０９におけるＡＲ
Ｖ−２gag蛋白質と同一に対応し、そしてまたエイズの
ウイルスに対して殊に有効な抗体を提供する。

【００４９】なおさらに、位置９２〜１０９におけるエ
イズのウイルスのコア蛋白質の抗原はウイルスの複製過
程において極めて重要であるがことが明らかであるが、
また、１〜１０アミノ酸、好ましくは１〜８アミノ酸、
およびことに好ましくは１〜６アミノ酸の任意の配列を
含めるようにアミノ酸配列に一端または両端を延長し
て、１８〜４０アミノ酸、好ましくは１８〜３６アミノ
酸、そしてことに好ましくは１８〜３０アミノ酸を有す
るポリペプチド２３を提供することは便利である。しか
しながら、任意のアミノ酸配列よりも、式（ＩＩ）のア
ミノ酸配列の一端または両端にエイズのウイルス中に存
在する配列に相当するアミノ酸配列を付加することは殊
に好ましい（もちろん、ペプチド結合により接合する−
−上の同一の事柄が適用される）。

【００５０】したがって、本発明のとくに好ましい実施
態様において、アミノ酸配列９２〜１０９およびそのde
s−８７類似体を含み、かつ式（ＩＩ）−１： Ａ¹−Ｉle−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌys−Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu−Ａla −Ｌeu−Ｙ₃−Ｌys−Ｉle−Ｇlu−Ｇlu−Ｇlu−Ｇln−Ａsn− Ｂ¹ （ＩＩ）−１ 式中、Ｙ₁、Ｙ₂およびＹ₃は式（ＩＩ）について上に定
義した通りであり、そしてＡ¹はＮＨ₂、Ａrg、Ｇln−Ａ
rg、Ｈis−Ｇln−Ａrg、Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａrg、Ｓer
−Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａrg、Ｃys−Ｖal−Ｈis−Ｇln−
Ａrg、Ｔyr−Ｓer−Ｖal−Ｈis−Ｇln−ＡrgおよびＴyr
−Ｃys−Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａrgから成る群より選択さ
れる構成員であり、そしてＢ₁はＣＯＯＨ、Ｌys、Ｌys
−Ｓer、Ｌys−Ｓer−Ｌys、Ｌys−Ｓer−Ｌys−Ｌys、
Ｌys−Ｓer−Ｌys−Ｌys−ＬysおよびＬys−Ｓer−Ｌys
−Ｌys−Ｌys−Ａlaから成る群より選択される構成員で
ある、を有する、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶ−
２、または同様なエイズのウイルスのp１７gag蛋白質の
オクタデカペプチド〜トリコンタペプチドの断片が提供
される。

【００５１】一般式（Ｉ）および（ＩＩ）によって表わ
される本発明のペプチドは、ペプチドを合成する普通の
方法によって、さらに詳しくは、次の方法を用いて、調
製することができる：シュローダー（Ｓchroder）およ
びルブケ（Ｌubke）、ペプチド類（Ｔhe Ｐeptide
s）、Ｖol．１（１９６６）、アカデミック・プレス
（Ａcademic Ｐress）、米国ニュウーヨーク、または
イズミヤ（Ｉzumiya）ら、ペプチド類の合成（Ｓynthes
is of Ｐeptides）、（１９７５）、丸善株式会社発
行、記載されている方法、例えば、アジド法、塩化物
法、酸無水物法、混合無水物法、ＤＣＣ法、活性エステ
ル法（p−ニトロフェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル法、シアノメチルエステル法な
ど）、ウッドワード（Ｗoodward）試薬Ｋを使用する方
法、酸化還元法、ＤＣＣ／付加物（ＨＯＮＢ、ＨＯＢ
t、ＨＯＳu）法など。固相および液相の両者の合成を上
の方法に適用することができる。

【００５２】本発明のペプチドは、通常のポリペプチド
を合成する前述の方法に従い、一般に、アミノ酸を末端
のアミノ酸に１つずつ順次に縮合させることからなる、
いわゆる固相法によって、あるいはいくつかの群に分割
した断片を末端アミノ酸にカップリングすることによっ
て調製される。さらに詳しくは、例えば、固相の合成を
適合させる場合、Ｃ末端のアミノ酸を不溶性担体にその
カルボキシル基を回して結合する。不溶性担体は、それ
が反応性カルボキシル基に対する結合能力を有しかつ段
階的縮合−脱保護反応の試薬および反応条件に対して不
活性であるかぎり、とくに制限されない。このような不
溶性担体の例は、次のものを包含する：ハロゲノメチル
樹脂、例えば、クロロメチル樹脂、とくにクロロメチル
−ポリスチレン−ジビニルベンゼンポリマー、ブロモメ
チル樹脂など、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹
脂、tert−アルコキシカルボニルヒドラジド化樹脂、架
橋したポリ−Ｎ−アクリリル−ピロリジン樹脂など。例
えば、Ｃ末端アミノ酸がアミド官能基を有する式
（Ｉ）、（Ｉ）−１、（Ｉ）−２または（Ｉ）−３のポ
リペプチド、例えば、アスパラギン（Ａsn）、

【００５３】

【化１】

【００５４】の場合において、ベンズヒドリルアミン樹
脂の支持体を使用することが便利であり、これによって
アミド官能基を樹脂の支持体上に直接形成することがで
きる。さらに、とくに好ましい実施態様において、式
（Ｉ）のペプチドおよびＣ−末端アミノ酸がアミド官能
基を含む他のペプチドを製造する固相合成法は、１９８
６年４月８日に提出された、ス−サン・ワング（Ｓu−
Ｓun Ｗang）の普通に譲渡された同時継続出願第８４
９，８３５号（その開示全体を引用によってここに加え
る）に詳しく記載されているように、メチルベンズヒド
リルアミン樹脂の支持体を使用して実施される。

【００５５】アミノ保護基を除去した後、アミノ基保護
されたアミノ酸を、例えば、一般式（Ｉ）によって、示
した所望のアミノ酸配列に従い、その反応性アミノ基と
反応性カルボキシル基との縮合により、順次に結合し
て、順次に、段階的に合成する。完全な配列を合成した
後、ペプチドを、例えば、ＨＦ、ＨＢrまたは他の切離
し試薬を使用して、不溶性担体から切離して蛋白質を生
成する。

【００５６】上および下の記載において、略号は標準の
慣用の命名法に従う次の意味を有する：Ｂoc、t−ブチ
ルオキシカルボニル；Ｂzl、ベンジル；ＤＣＣ、ジシク
ロヘキシルカーボジイミド；Ｃbz、ベンジルオキシカル
ボニル；ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸、およびＣ１Ｚ、２
−クロロベンジルオキシカルボニル。

【００５７】特定の保護基を下に記載するが、同等の慣
用の保護基を利用することは当業者の技能の範囲内であ
る。実施者は容易に認識するように、ある一般条件は好
ましくは合成する特定のペプチドに無関係に選択され
る。例えば、ペプチドの合成において使用される各アミ
ノ酸のα−アミノ基はカップリング反応の間に保護して
反応性α−アミノ官能を含む副反応を防止しなくてはな
らない。同様 に、反応性側鎖の官能基を含有するアミ
ノ酸（例えば、スルフヒドリル、ε−アミノ、ヒドロキ
シル、カルボキシル）について、このような官能基は、
また、側鎖の基を含有するアミノ酸の初期のカップリン
グの間および引続くアミノ酸のカップリングの間の両者
において保護することが必要である。このような保護基
はこの分野において知られている。［参照、例えば、有
機化学における保護基（Ｐrotective Ｇroup in Ｏr
ganic Ｃhemistry）、Ｍ．マクオミー（ＭcＯmie）
編、プレナム・プレス（Ｐlenum Ｐress）、ニューヨ
ー ク、１９７３］。

【００５８】特定の保護基を選択するとき、次の条件を
観察しなくてはならない：α−アミノ保護基は、（１）
カップリング反応において使用する条件下に安定であり
かつα−アミノ官能を不活性としなくてはならず、そし
て（２）カップリング反応後、側鎖の保護基を除去しな
いか、あるいはペプチド断片の構造を変化しない条件下
に容易に除去できなくてはならない。側鎖の保護基は、
（１）カップリング反応において使用する条件下に安定
でありかつ側鎖の官能基を不活性としなくてはならず、
（２）α−アミノ頬基を除去するとき使用する条件下に
安定でなくてはならず、そして（３）所望のアミノ酸配
列の完結時に、ペプチド鎖の構造、含有されるキラル中
心のいずれかのラセミ化を変更しない反応条件下に容易
に除去できなくてはならない。α−アミノ官能のために
適当な保護基は、次の通りである：t−ブトキシカルボ
ニル(Ｂoc）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃbz）、ビ
フェニルイソプロピルオキシカルボニル、t−アミルオ
キシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、１，
１−ジメチル−２，５−ジメトキシベンジルオキシカル
ボニル、o−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ
−t−ブチルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチ
ルオキシカルボニルなど、ことにt−ブトキシカルボニ
ル（Ｂoc）。

【００５９】カルボキシル保護基の例として、次のもの
を述べることができる：エステル形成基、例えば、アル
キルエステル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブ
チル、t−ブチルなどのエステル）、ベンジルエステ
ル、p−ニトロベンジルエステル、p−メトキシベンジル
エステル、p−クロロベンジルエステル、ベンズヒドリ
ルエステルなどを形成できるもの、およびヒドラジド形
成基、例えば、カルボベンゾキシヒドラジド、t−ブチ
ルオキシカルボニルヒドラジド、トリチルヒドラジドな
どを形成できるもの。

【００６０】アルギニンのグアニジノ基を保護する基と
して、ニトロ、トシル（Ｔos）、p−メトキシベンゼン
スルホニル、カルボベンゾキシ、イソボルニルオキシカ
ルボニル、アドマンチルオキシカルボニルなどを述べる
ことができる。グアジニノ基は、また、酸（例えば、ベ
ンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、塩酸、硫酸な
ど）との塩の形態で保護することができる。

【００６１】スレオニンのヒドロキシル基は、例えば、
既知のエステル化またはエーテル化によって保護するこ
とができる。前記エステル化のために適当な基の例とし
て、低級アルカノイル基（例えば、アセチル）、アロイ
ル基（例えば、ベンゾイル）、および炭酸から誘導され
る基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、エチルオキ
シカルボニルなどを述べることができる。前記エーテル
化に適当な基として、ベンジル、テトラヒドロピラニ
ル、t−ブチルなどを述べることができる。しかしなが
ら、スレオニンのヒドロキシル基は必ずしも保護する必
要はない。メチオニンはスルホキシドの形態で保護する
ことができる。特定のアミノ酸のための他の好ましい側
鎖の保護基は、次のものを包含する：チロシンについ
て、ベンジル、o−ブロモベンジルオキシカルボニル
（ＢrＺ）、２，６−ジクロロベンジル、イソプロピ
ル、シクロヘキシル、シクロペンチルおよびアセチル；
ヒスチジンについて、ベンジル、ベンジルオキシカルボ
ニル、p−トルエンスルホニル、トリチルおよび２，４
−ジニトロフェニル；トリプトファンについて、ホルミ
ル。

【００６２】固体の樹脂の支持体へＣ−末端アミノ酸を
最初にカップリングするめたの典型的な手順として、次
の指針を述べることができる。ベンズヒドリルアミンま
たはメチルベンズヒドリルアミンの樹脂について、Ｎ^α
−Ｂoc−アミノ酸または同様に保護されたＣ−末端アミ
ノ酸の（メチル）ベンズヒドリルアミン樹脂への取付け
は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカーボジイミド（ＤＣ
Ｃ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＢＴ）を
仲介とするカップリングを、溶媒、例えば、ジクロロメ
タンまたはＤＭＦ、好ましくはジクロロメタン中で、約
１０〜５０℃、好ましくは２５℃の温度において約２〜
２４時間、好ましくは約１２時間実施することによって
実施する。クロロメチルポリスチレンジビニルベンゼン
型の樹脂について：樹脂への取付けは、Ｎ^α−保護アミ
ノ酸、ことにＢoc−アミノ酸を、そのセシウム、テトラ
メチルアンモニウム、トリエチルアンモニウム、４，５
−ジアザビシクロ−［５．４．０］−ウンデク−５−エ
ンの塩または同様な塩として、エタノール、アセトニト
リル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの
中で、ことにＤＭＦ中のセシウム塩として、クロロメチ
ル樹脂と、高温、例えば、約４０〜６０℃、好ましくは
約５０℃において、例えば、約１２〜４８時間、好まし
くは約２４時間反応させることによって実施する。

【００６３】Ｎ^α−保護基の除去は、例えば、塩化メチ
レン中のトリフルオロ酢酸の溶液、ジオキサンの塩化水
素の溶液、酢酸中の塩化水素の溶液、または強酸の溶
液、好ましくはジクロロメタン中の５０％のトリフルオ
ロ酢酸の溶液の存在下にほぼ室温において実施すること
ができる。連続する保護されたアミノ酸のカップリング
は、この分野においてよく知られているように、自動化
ポリペプチド合成装置中で実施することができる。各保
護されたアミノ酸を好ましくはほぼ２．５モル以上の過
剰量で導入し、そしてカップリングはジクロロメタン、
ジクロロメタン／ＤＭＦ混合物中で、ことに塩化メチレ
ン中で室温において実施することができる。ペプチド形
成縮合反応のために有用であることが知られている他の
溶媒、例えば、ジメチルスルホキシド、ピリジン、クロ
ロホルム、ジオキサン、テトラヒドロフラン、酢酸エチ
ル、Ｎ−メチルピロリドンなど、ならびにそれらの混合
物を使用することもできる。

【００６４】縮合／カップリング反応のための反応温度
は、ペプチド形成縮合反応の目的に有用であることが知
られいる範囲から選択することができる。こうして、そ
れは通常約−４０℃〜約６０℃、好ましくは約−２０℃
〜約０℃の範囲内であろう。カップリング剤は通常ジク
ロロメタン中のＤＣＣであるが、Ｎ，Ｎ’−ジ−イソ−
カーボジイミドまたは他のカーボジイミドの単独である
か、あるいはそれはＨＢＴ、Ｎ−ヒドロキシスクシンイ
ミド、２−ヒドロキシイミノ−２−シアノ酢酸エチル、
他のＮ−ヒドロキシイミド類芳香族オキシム類の存在下
に使用できる。あるいは、保護されたアミノ酸の活性エ
ステル（例えば、p−ニトロフェニル、ペンタフルオロ
フェニルなど）または対称無水物を使用できる。

【００６５】カップリング、脱保護／切離し反応および
ポリペプチドの誘導体の調製は、適当には、約−１０℃
〜＋５０℃、最も好ましくは２０℃〜２５℃の温度にお
いて実施する。特定の反応についての正確な温度は、も
ちろん、基質、試薬、溶媒などに依存し、すべては実施
者の技能の範囲内である。次いで、完全に保護されたポ
リペプチドは、次の型のいずれか、あるいはすべてを用
いる１連のクロマトグラフィーの工程によって精製する
ことができる：酢酸塩の形態の弱塩基性樹脂を使用する
イオン交換；例えば、セファデックス（Ｓephadex）Ｇ
−２５を使用する、ゲル透過クロマトグラフィー；誘導
化されていないポリスチレン−ジビニルベンゼン［例え
ば、アンバーライト（Ａmberlite）ＸＡＤ］を使用する
疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲルの吸着クロ
マトグラフィー；例えば、セファデックス（Ｓephade
x）Ｇ−２５を使用する、イオン交換クロマトグラフィ
ー、または向流分布；高性能液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）、ことにオクチル−またはオクタデシルシ
リル−シリカ結合相のカラム充填を使用する逆相ＨＰＬ
Ｃ。

【００６６】本発明による合成ペプチドは前述の化学的
調製、ことに前述の固相のペプチド合成により、高い効
率で、調製することができるが、式（Ｉ）の新規なチモ
シンのペプチド断片またはその類似体、あるいは式（Ｉ
Ｉ）のgag蛋白質断片またはその類似体を、この分野に
おいて現在よく知られているように、遺伝子工学によっ
て製造することも本発明の範囲内である。こうして、適
当な酵素および微生物［例えば、バクテリア、例えば、
大腸菌（Ｅ．coli）］を使用して、所望のポリペプチド
について暗号化するＤＮＡ配列を微生物のゲノム中に導
入し、これによって微生物に問題の特定のペプチドを発
現させることができる。

【００６７】いったん特定のペプチドが得られ、そして
精製されると、それをハプテンとして使用して抗原の免
疫原を調製することができ、そしてこの抗原から、ＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶ−２および同様なエイズ
のウイルスのgagコア蛋白質と特異的に交差反応性を有
しかつエイズのウイルスを中和する能力を有する抗体は
大量にかつ安定に容易に得ることができる。したがっ
て、特異的抗体はチモシンα₁に対する抗体、すなわ
ち、エイズのウイルスの複製を阻害剤する抗血清、につ
いて上に記載したのと同様な方法において使用すること
ができる。これらの抗体は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡ
Ｖ、ＡＲＶ−２などにおける免疫反応性蛋白質を精製す
るために次のようにして使用できる。すなわち、これら
の抗体を、例えば、親和クロマトグラフィーにおいて、
使用するために担体に結合し、そして結合した抗体を親
和クロマトグラフィーにおいて利用する。特異的抗体
は、また、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶ−２など
の種々の免疫学的測定における特異的抗体として使用で
きる。したがって、本発明による抗体は、高い特異性を
もって、エイズのウイルスの血清中の存在を直接診断す
るために有用である。

【００６８】p１７gag蛋白質の抗原性を表わすポリペプ
チド類およびそれらでレイズされた抗体類は、これらの
診断法において使用して、それぞれ、エイズのウイルス
に対する抗体またはエイズのウイルス自体の存在を検出
することができる。これらのポリペプチドおよびそれら
の抗体は、診断キットにおいて、単独で、あるいは他の
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶなどの抗原および抗
体のいずれかまたはすべてと組み合わせて包装すること
ができる。本発明のポリペプチドおよび抗体を単独で、
あるいは他の抗原または抗体と組み合わせて使用する、
これらの方法およびキット類は、エイズ感染キャリヤー
の迅速かつ便利な同定、およびＡＲＣおよびエイズの病
気の過程の予知を可能とするであろう。エイズのウイル
スを検出するための典型的なラジオイムノアッセイおよ
びエライサ（ＥＬＩＳＡ）について、下に簡単に説明す
る。

【００６９】エイズのウイルスを検出するためのラジオ
イムノアッセイ（ＲＩＡ）：上のように生産されたチモ
シンα₁に対する抗体、チモシンα₁の少なくともアミノ
酸、それぞれ、位置１１、１４、１５、１７、１８、２
４、２５および２８における、イソロイシン、リジン、
アスパルテート、リジン、グルタメート、グルタメー
ト、グルタメートおよびアスパギンを包含する、チモシ
ンα₁のペプチド断片またはその類似体に対する抗体、
およびエイズのウイルスのp１７gag蛋白質の少なくとも
位置９２〜１０９におけるアミノ酸配列の抗原決定基に
対する抗体を、固相、例えば、試験管の内側に取付け
る。患者の血清の試料をこの試験管に添加し、同時に上
のように生産されかつ放射性アイソトープ、例えば、放
射性ヨウ素で標識付けされたエイズのウイルスのp１７g
ag蛋白質の抗原性を表わすポリペプチドの既知量を添加
する。患者の血清中のエイズのウイルス（gag蛋白質に
関連する）は、エイズのウイルスのp１７gag蛋白質の抗
原性を表わす標識付けされたポリペプチドと、結合した
抗体との結合について競合するであろう。過剰の液体を
除去し、試験管を洗浄し、そして放射能の量を測定す
る。陽性の結果、すなわち、患者の血清がエイズのウイ
ルスを含有するとう結果は、試験管中に残留する低い放
射能の計数によって表わされる。前述の固相ラジオイム
ノアッセイの代わりに、ある場合において、液相ラジオ
イムノアッセイを実施することはいっそう便利であろ
う。液相ラジオイムノアッセイの場合において、エイズ
のウイルスを認識する抗体、例えば、抗Ｔα₁は固相に
取付けられるが、標識付けされた抗原物質と競合して、
患者の血清と液相において反応することができる。次い
で、抗体−抗原の相互作用の複合体を任意の適当な手段
で検出することができる。例えば、不溶性ビーズに結合
した第１抗体に対して反応性の第２抗体（例えば、第１
抗体に対してであるが、異なる動物においてレイズされ
た抗抗体）を、液相から前記複合体を取り出さないで使
用することができる。

【００７０】エイズのウイルスを検出するためのエライ
サ（ＥＬＩＳＡ）：本発明に従って調製されたチモシン
α₁に対する抗体、式（Ｉ）のペプチドに対する抗体、
あるいはエイズのウイルスのp１７gag蛋白質の位置９１
〜１０９において抗原性を表わす式（ＩＩ）のペプチド
に対する抗体でマイクロタイタープレート（microtiter
plate）を被覆し、そしてこれに患者の血清の試料を
添加する。血清中に存在するエイズのウイルスのp１７g
ag蛋白質を結合した抗体と相互作用させるインキュベー
ション期間が経過した後、このプレートを洗浄する。酵
素に結合したエイズのウイルスに対して向けられた抗体
の調製物［これはプレート上における抗体と同一の抗体
であることができる（例えば、いわゆる「サンドイッ
チ」）］を添加する。インキュベーションは抗体−抗原
反応を起こすことができ、次いでプレートを再び洗浄す
る。その後、酵素の基質をマイクロタイタープレートに
添加し、そして基質に酵素を働かさせる時間の間インキ
ュベーションし、そして最後の調製物の吸収を測定す
る。大きい吸収の変化は陽性の結果を指示する。

【００７１】上に概説したラジオイムノアッセイおよび
エライサの細部が立証するように、本発明によるエイズ
のウイルスのp１７gag蛋白質の抗原性を表わすポリペプ
チドの生産は、医学的設備および研究所において日常的
にすでに用いられている標準の技術による、エイズのウ
イルスおよびエイズのウイルスに対する抗体の検出を可
能とする。

【００７２】本発明のペプチドは、ラジオイムノアッセ
イ（ＲＩＡ）または酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、と
くにエライサ(enzyme linked immunosorbentimmunoas
say）（ＥＬＩＳＡ）において使用される標識付けされ
た抗原として、放射性物質、例えば、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³
Ｈ（トリチウム）、¹⁴Ｃなど；種々の酵素試薬、例え
ば、ペルオキシダーゼ（ＰＯＸ）、キモトリプシノゲ
ン、プロカルボキシペプチダーゼ、グリセルアルデヒド
−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、アミラーゼ、ホ
スホリラーゼ、Ｄ−Ｎアーゼ、Ｐ−Ｎアーゼ、β−ガラ
クトシダーゼ、グルコース−６−ホスフェートデジドロ
ゲナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどをそれに
導入することによって利用することができる。上の放射
性物質の導入は普通の方法で実施できる。例えば、放射
性ヨウ素の導入は、酸化的ヨウ素化法により、クロラミ
ンＴ［Ｗ，Ｍ．ハンター（Ｈunter）およびＦ．Ｃ．グ
リーンウッド（Ｇreenwood）、ネイチャー（Ｎatur
e）、１９４、４９５（１９６２）、バイオケミカル・
ジャーナル（Ｂiochem．Ｊ．）、８９、１４４（１９６
３）を使用して、あるいはバイオケミカル・ジャーナル
（Ｂiochem．Ｊ．）、１３３、５２９（１９７３）に記
載されているようにボルテン−ハンター（Ｂolten−Ｈu
nter）試薬（¹²⁵Ｉ−ヨウ素化p−ヒドロキシフェニルプ
ロピオン酸Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル）
を使用することによって実施することができる。米国特
許第４，２６４，５７１号における実施例２などを参
照。

【００７３】さらに詳しくは、この方法は適当な溶媒、
例えば、０．２モルのリン酸塩緩衝液（pＨ７．４）中
でクロラミンＴの存在下にほぼ室温において約１０〜３
０秒間実施することができる。ペプチド、放射性ヨウ素
１２５およびクロラミンＴは、チロシンの１分子につき
１原子の放射性ヨウ素を導入するとき、ペプチド中に含
有されるチロシンの１ナノモルにつき、約１mＣiの放射
性ヨウ素および１０〜１００ナノモルのクロラミンＴの
比で使用し、そしてチロシンの１分子につき２原子の放
射性ヨウ素を導入するとき、ペプチド中に含有されるチ
ロシンの１ナノモルにつき、約２mＣiの放射性ヨウ素お
よび１０〜１００ナノモルのクロラミンＴの比で使用す
る。このようにして調製された放射性ヨウ素標識ペプチ
ドは、反応混合物から、慣用の分離技術、例えば、抽
出、分配、カラムクロマトグラフィー、透析などによっ
て単離しかつ精製することができる。このようにして得
られたペプチドは、必要に応じて、凍結乾燥後、貯蔵す
ることができる。

【００７４】あるいは、Ａ¹がＴyr−Ｃys−Ｖal−Ｈis
−Ｇln−ＡrgまたはＴyr−Ｓer−Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａ
rgである式（ＩＩ）−１のペプチドについて、¹²⁵Ｉは
Ｎ−末端Ｔyr中に、例えば、米国特許第４，３３９，４
２７号の実施例３bに記載される手順により、直接に組
込むことができる。

【００７５】酵素試薬の導入は、既知の方法により、例
えば、次の文献に記載される普通のカップリング反応に
よって実施することができる：例えば、Ｂ．Ｆ．エルラ
ンガー（Ｅrlanger）ら、Ａcta Ｅndocrinol． Ｓupp
l．、１６８、２０６（１９７２）、およびＭ．Ｈ．カ
ロール（Ｋarol）ら、プロシーディングス・オブ・ナシ
ョナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ（Ｐroc．Ｎa
tl．Ａcad．Ｓci．）ＵＳＡ、５７、７１３（１９７
６）など。すなわち、ペプチドおよび酵素は、pＨ４〜
６の緩衝液、例えば、１ミリモルの酢酸塩緩衝液（pＨ
４．４）中で酸化剤、例えば、ＮaＩＯ₄の存在下に室温
で２〜５時間反応させ、次いでＮaＢＨ₄などで還元す
る。酵素はペプチドの１モルにつき１〜３モルの量で使
用できる。酸化剤はペプチドの１モルにつき約１００〜
約３００モルの量で使用し、そして還元剤は酸化剤の１
モルにつき約１〜約２モルの量で使用することが好まし
い。こうして得られた酵素標識付けペプチドは、放射性
ヨウ素標識付けペプチドの場合において使用した方法に
類似する方法で単離し、精製し、そして貯蔵することが
できる。

【００７６】ポリペプチド、すなわち、約５０より少な
いアミノ酸を含有するペプチド、は一般に対応する抗体
を直接引き出さないであろう。この理由で、ポリペプチ
ドの抗原を、ハプテンとして、ハプテン−担体、以後
「免疫原担体物質」と呼ぶ、にカップリングまたは接合
し、これによって容易に回収できるために十分に高い力
価で特異的抗体の生産を引き出すことが通常実施されて
いる。それにもかかわらず、ある種のＨＴＬＶ−ＩＩＩ
／ＬＡＶenv蛋白質を包含する、ある種のポリペプチド
の抗原は非常に強い抗原性を有し、そして免疫系を直接
誘発して特異的抗体を生産させることができる。（不都
合なことには、今日まで、このような抗env抗体のいず
れもエイズのウイルスを中和することができない。これ
は、多分、env蛋白質の特定の抗原がウイルスの複製の
ために要求されないからであろう。）本発明において、
免疫原担体物質にカップリングしたチモシンα₁またはg
agペプチド（断片および類似体を包含する）をハプテン
として使用することが一般に好ましいが、また、とくに
少なくとも約２６アミノ酸をもつペプチドについて、ペ
プチドをワクチンとして、あるいは特異的抗体の生産に
おいて免疫原抗原として、ならびに、もちろん、本発明
の診断の面において直接使用することは、本発明の範囲
内である。なおさらに、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の新
規なペプチドのいずれかを、そのポリマー、例えば、二
量体、三量体またはオリゴマーの形態で、すなわち、合
成ペプチドのアミノ酸を含有する反復配列として利用す
ることは本発明の範囲内に入る。こうして、反復配列が
「担体」および「免疫原担体物質」の両者としてはたら
くように、合成ペプチドを重合して２以上の反復単位の
鎖を構成することができる。

【００７７】以後、本発明のペプチドをハプテンとして
使用して免疫原抗原を生産する方法を詳述する。

【００７８】ハプテンとして本発明のペプチドを使用
し、そしてこのペプチドを適当な免疫原担体物質とハプ
テン−担体結合剤の存在下に反応させることに よっ
て、前述の抗原を調製する。この場合において、抗原の
調製において普通に用いられる高分子量を有する天然お
よび合成の蛋白質を、ハプテンへ結合すべき担体として
広く使用できる。さらに、より小さいペプチドまたは分
子、例えば、ツフシン（tufsin）（テトラペプチド）、
ツフシンの類似体、およびムラミルジペプチド、および
それらの類似体は、等しくよく「免疫原担体物質」とし
て作用できる。

【００７９】ここで使用するとき、用語「免疫原担体物
質」は、宿主動物において免疫原応答を独立に引き出す
性質を有しかつポリペプチドへ共有結合できる物質を包
含することを意味し、この共有結合は、ポリペプチド中
のカルボキシル、アミノまたはヒドロキシル基と免疫原
担体物質上の対応する基との間のペプチドまたはエステ
ル結合の形成を介して形成さるか、あるいは普通の二官
能性連結基を介する結合によって形成される。このよう
な担体の例は、次のものを包含する：動物の血清のアル
ブミン、例えば、ウマ血清アルブミン、ウシ血清アルブ
ミン、ウサギ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、ヒ
ツジ血清アルブミン、など；動物の血清のグロブリン、
例えば、ウマ血清グロブリン、ウシ血清グロブリン、ウ
サギ血清グロブリン、ヒト血清グロブリン、ヒツジ血清
グロブリン、など;動物の甲状腺グロブリン、例えば、ウ
マ甲状腺グロブリン、ウシ甲状腺グロブリン、ウサギ甲
状腺グロブリン、ヒト甲状腺グロブリン、ヒツジ甲状腺
グロブリン、など；動物のヘモグロブリン、例えば、ウ
マヘモグロブリン、ウシヘモグロブリン、ウサギヘモグ
ロブリン、ヒトヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリ
ン、など；動物のヘモシアニン、例えば、キーホール笠
貝ヘモシアニン（Ｋeyholelimpet hemocyanin）（ＫＬ
Ｈ）、など；カイチュウ（ascaris）から抽出した蛋白
質［カイチュウ抽出物、日本特許出願（ＯＰＩ）第１
６，４１４／８１号、ジャーナル・オブ・イムノロジー
（Ｊ．Ｉmmunol．）、１１１、２６０−２６８（１９７
３）、同上、１２２、３０２−３０８（１９７９）、同
上、９８、８９３−９００（１９６７）およびアメリカ
ン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａm．Ｊ．Ｐh
ysiol．）、１９９、５７５−５７８（１９６０）に記
載されているもの、またはそれらの精製された生成
物）；ポリリジン、ポリグルタミン酸、リジン−グルタ
ミン酸コポリマー、リジンまたはオルニチンを含有する
コポリマーなど。最近、ワクチンは免疫原担体物質とし
てジフテリアのトキソイドまたは破傷風のトキソイドを
使用して製造され［参照、レポウ(Ｌepow)、Ｍ．Ｌ．
ら、伝染病の雑誌（Ｊ．of Ｉnfectious Ｄesease
s）、Ｖol．１５０、Ｎo．３、４０２−４０６ページ
（１９８４）；およびコウエン・ベウベリー（Ｃoen
Ｂeuvery）、Ｅ．ら、感染および免疫性（Ｉnfect．Ｉm
mun．）、４０、３９−４５ページ（１９８３年４
月）］そしてこれらのトキソイド物質を、また、ここで
使用することができる。他の適当な担体は、例えば、米
国特許第４，５７５，４９５号に開示されており、ワク
チン、有機ポリマーを包含する。

【００８０】ハプテン−担体結合物質として、抗原の調
製に普通に使用されているものを広く用いることができ
る。これらの結合剤の特定の例は、次のものを包含す
る：チロシン、ヒスチジン、トリプトファンなどについ
てジアゾニウム化合物、例えば、ビスジアゾ化ベンジジ
ン（ＢＤＢ）など；アミノ基とアミノ基との架橋のため
に脂肪族ジアルデヒド、例えば、Ｃ₂−Ｃ₇アルカナー
ル、例えば、グリオキサール、マロンジアルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、スクシンアルデヒド、アジポアルデ
ヒドなど；チオール基とチオール基との架橋のためにジ
マレイミド化合物、例えば、Ｎ，Ｎ’−o−フェニレン
ジマレイミド、Ｎ，Ｎ’−m−フェニレンジマレイミド
など；アミノ基とチオール基との架橋のためにマレイミ
ドカルボキシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル、例えば、メタマレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステル、４−（マレイミドメチル）
−シクロヘキサン−１−カルボキシ−Ｎ’−ヒドロキシ
スクシンイミドエステルなど；アミノ基とカルボキシル
基とからアミド結合が形成される普通のペプチド結合形
成反応において使用される物質、例えば、カーボジイミ
ドのような脱水剤および縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカーボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−ジメ
チルアミノカーボジイミド、１−エチル−３−ジイソプ
ロピルアミノカーボジイミド、１−シクロヘキシル−３
−（２−モリホリニル−４−エチル）カーボジイミドな
ど。上のハプテン−担体結合剤として、また、ジアゾニ
ウムアリールカルボン酸、例えば、p−ジアゾニウムフ
ェニル酢酸などを、普通のペプチド結合形成剤、例え
ば、脱水剤および縮合剤と組み合わせて使用することが
可能である。

【００８１】チモシンα₁またはそのペプチド断片また
はその類似体を免疫原担体物質へ共有カップリング（co
valent coupling）することは、この分野においてよく
知られた方法で実施することができる。こうして、例え
ば、直接の共有カップリングのために、カーボジイミ
ド、最も好ましくはジシクロヘキシルカーボジイミドま
たは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）
カーボジイミドをカップリング剤として利用することが
可能である。このような直接カップリングにおいて、こ
の工程のために、わずかに酸性の反応媒質、例えば、約
３〜６．５の範囲、最も好ましくは約４〜６．５の範囲
のpＨを有する媒質を利用することが望ましい。

【００８２】中性またはアルカリ性である式（Ｉ）また
は式（ＩＩ）のペプチドをハプテンとして使用する抗原
の調製のためのカップリング反応は、同様な方法である
が、pＨ７〜１０の水溶液または普通の緩衝液中におい
て、好ましくはpＨ８〜９の緩衝液中において、約０℃
〜４０℃、好ましくはほぼ室温において実施することが
できる。この反応は一般に約１〜約２４時間以内、好ま
しくは３〜５時間以内で完結する。上の方法において使
用できる緩衝液の代表的な例は、次のものを包含する： ０．２モルの水酸化ナトリウム−０．２モルのホウ酸−
０．２モルの塩化カリウムの緩衝液； ０．２モルの炭酸ナトリウム−０．２モルのホウ酸−
０．２モルの塩化カリウムの緩衝液； ０．０５モルの酒石酸ナトリウム−０．２モルのホウ酸
−０．０５モルの塩化ナトリウムの緩衝液； ０．１モルのリン酸二水素カリウム−０．０５モルの四
ホウ酸ナトリウムの緩衝液。

【００８３】上において、ハプテン、ハプテン−担体結
合剤および担体の比は適当に決定されるが、担体はハプ
テンの重量の約１〜約６倍、好ましくは約１〜約５倍の
量で使用し、そしてハプテン−担体結合剤はハプテンの
モルの約５〜約１０倍で使用することが好ましい。上の
反応により、担体はハプテンにハプテン−担体結合剤を
介して結合して、ペプチド−担体複合体から構成された
所望の抗原が得られる。

【００８４】反応の完結後、このようにして得られた抗
原 は、透析法、ゲル濾過法、分別沈殿法などによって
容易に単離しかつ精製することができる。

【００８５】このようにして得られた抗原は、蛋白質の
１モルにつき平均５〜６０モルのペプチドをそれに対し
て結合し、そして前記抗原に対して高い特異性を有する
抗体の引続く調製を可能とする。とくに、ペプチドの１
モルにつき、平均、５〜２０モル、好ましくは８〜１５
モルの量でペプチドが結合した抗体は、より高い特異性
を有し、かつ高い活性および感受性を有する抗体の調製
を可能とするので、好ましい。

【００８６】抗原を使用する抗体の調製は、前述の抗原
を、好ましくはアジュバントを使用して、哺乳動物に投
与し、こうして所望の抗体を生体内で生産し、そして前
記抗体を集めることによって実施される。改良された力
価は、ある期間にわたる反復注射によって得ることがで
きる。

【００８７】抗体の調製に提供される哺乳動物に対して
特定の制限は存在しないが、一般にウサギまたはモルモ
ットを使用することが好ましいが、ウマ、ヤ ギ、ブ
タ、ラット、ウシ、ヒツジなどを使用することもでき
る。抗体の導入において、上に記載した抗体の明確に限
定された量を生理的食塩水で適当な濃度に希釈し、そし
て得られた希釈液を完全フロインドアジュバントと混合
して懸濁液を調製する。この懸濁液を哺乳動物に投与す
る。例えば、前述の懸濁液をウサギに皮内投与する（抗
原の量として０．１〜５mg／回（time））。

【００８８】次いで、この懸濁液を２週毎に２〜１０か
月、好ましくは４〜６か月にわたって投与して免疫化を
実施する。抗体の収集は、最後の投与から１〜２週の経
過後、免疫化動物から血液を集め、血液を遠心し、そし
て血液から血清を分離することによって実施する。この
手順に従い、エイズのウイルスの抗原決定基、とくに位
置９２〜１０９におけるp１７gagコア蛋白質と選択的に
複合化する抗体を集め、そしてエイズに対して危険な状
態にある患者（例えば、同性愛者、ハイチ人、静脈内薬
物使用者など）、エイズのウイルスにさらされた患者、
またはエイズまたはＡＲＣの症状に悩む患者を免疫化す
るための抗血清として使用することができる。あるい
は、抗体は、ラジオイムノアッセイ、エライサなどを利
用して、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＡＲＶ−２および
エイズを起こしうる同様なヒト白血病レトロウイルスを
アッセイするために使用できる。例えば、血清学的アッ
セイにおいて使用するとき、本発明の抗体は、ラジオイ
ムノアッセイにおける使用のために放射性アイソトープ
で、あるいは普通に使用される酵素または蛍光性物質で
標識付けし、そしてエライサ、蛍光イムノアッセイ（Ｆ
ＩＡ）などにおいて使用することができる。さらに、本
発明の抗体は普通の固定化剤と反応させることによって
固定化することができる。

【００８９】したがって、本発明は、エイズのウイルス
を中和するために強力なワクチンを提供する、抗原性チ
モシンα₁のペプチド、およびp１７gagペプチド、それ
らの断片および類似体を包含する、を提供する。したが
って、本発明のワクチンは、エイズに対して危険な状態
にある患者、またはエイズのウイルスにさらされた患者
を免疫化するために、あるいはエイズ関連コンプレック
スをもつ患者または臨床的に明白なエイズをもつ患者を
処置するために使用することができる。

【００９０】本発明の方法においてワクチンとして使用
するとき、ワクチンは注射により、筋肉内に、非経口的
に、経口的に、あるいは皮下に最も便利に宿主に対して
投与することができる。宿主に対して許容されることが
でき、そして宿主に対して悪い副作用を有さずかつワク
チンに悪影響を及ぼさない、普通の液体または固体の賦
形剤のいずれを使用することもできる。生理学的pＨ、
例えば、pＨ６．８〜７．２、好ましくはpＨ７のリン酸
塩緩衝化食塩水溶液を、担体として、単独で、あるいは
適当なアジュバントと組み合わせて使用することができ
る。免疫原抗原の濃度は、一般に約０．２５〜１ml、例
えば、約０．２mlの体積の溶媒中の、約５０〜２００μ
g／注射、例えば、約１００μg／注射の範囲内で変化す
ることができる。初期の注射後、多数回の注射を必要す
ることがあり、そして多数回の注射を行なうとき、約２
〜約１４日、例えば、約７日の間隔でそれを行なうこと
ができる。

【００９１】免疫原性抗原のチモシンα₁または式
（Ｉ）および（ＩＩ）の関連するペプチドを宿主に投与
する、前述の活性免疫化の代替法として、通常宿主以外
の異なる種においてレイズされた、本発明の抗エイズの
ウイルス抗体を直接投与することがも可能であるが、宿
主と同一の種の異なる個体においてレイズされた抗体を
使用することもできる。このような受動免疫化の場合に
おいて、抗血清、活性免疫化法について記載したのと、
一般に同一の適用モードおよび同一の型の担体および同
一またはより高い投与割合を使用することもできる。例
えば、抗体が静脈内注入によりゆっくり（例えば、約６
時間で）投与されるかぎり、１．５g程度に多いネズミ
モノクローナル抗体を不都合な毒性を与えないで投与す
ることができる。

【００９２】本発明の範囲内のなお他の別の実施態様
は、式（Ｉ）および（ＩＩ）のペプチドの１つまたはチ
モシンα₁に対するモノクローナル抗体に対してレイズ
された抗イディオタイプ抗体に基づくワクチンおよび免
疫化法である。モノクローナル抗体に対してレイズされ
た抗免疫グロブリン血清は、「抗イディオタイプ」血清
と定義され、そして引き出し性抗体の可変領域を認識
し、そして結合部位に対して向けられている。結合部位
に対して向けられたこの抗イディオタイプ抗体は、事
実、もとの抗原のための基質であることができる。した
がって、この機構を使用して、古典的な免疫化プロトコ
ールを介するのと同等であるか、あるいあそれより高い
効率で、免疫化し、そしてチモシンα₁またはそのペプ
チド断片またはその類似体あるいはgagペプチドおよび
断片および類似体に対する抗体をレイズすることが可能
である。

【００９３】チモシンα₁のペプチドに対する抗体のＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶウイルス蛋白質に対する特異性
の測度として、競合ラジオイムノアッセを前述の米国特
許第４，２６４，５７１号および米国特許第４，３３
９，４２７号（それらの開示を引用によってここに加え
る）に一般に記載されているように実施した。ロウスチ
ャー（Ｒouscher）ネズミ白血病レトロウイルス（ＲＬ
Ｖ）ではない、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ蛋白質は、競
合ラジオイムノアッセイにおいてＴα₁を置換できるこ
とが発見された。結果を表２に示す。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ
／ＬＡＶはＴα₁抗血清に対して直線の投与応答線を示
し、これに対してＲＬＶ分離物はＴα₁抗血清と交差反応
性ではない。これらの結果が立証するように、大量の免
疫反応性Ｔα₁様物質がＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ中に
存在するが、ＲＬＶ分離物中には存在せず、これにより
ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶおよびＴα₁における相同配
列がＲＬＶ中に存在しないことが確証される。

【００９４】チモシンα₁に対する抗体およびヒトレト
ロウイルスＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶおよび同様なエイ
ズ関連レトロウイルスに対する本発明の他の新規な抗体
の特異性をさらに立証するために、他のレトロウイルス
のＴα₁に対する交差反応性を競合ラジオイムノアッセ
イによって決定した。結果を第３図に示す。ネコ白血病
レトロウイルス（ＦeＬＶ）、サル肉腫レトロウイルス
（ＳＳＶ）、テナガザル（gibbon ape）白血病レトロ
ウイルス（ＧＡＬＶ）またはネズミ白血病レトロウイル
ス（ＲＶＬ）のいずれも有意の交差反応性を示さなかっ
た。

【００９５】

【実施例】実施例１ この実施例は、本発明による新規なペプチドの１つ、す
なわち、式 Ｔyr−Ｓer−Ｖal−Ｈis−Ｇln−Ａrg−Ｉle−Ａsp−Ｖ
al−Ｌys− Ａsp−Ｔhr−Ｌys−Ｇlu−Ａla−Ｌeu−Ｇlu−Ｌys−Ｉ
le−Ｇlu− Ｇlu−Ｇlu−Ｇln−Ａsn−Ｌys−Ｓer−Ｌys−Ｌys−Ｌ
ys−Ａla を有する、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶのp１７gagコア蛋
白質の位置８６〜１１５に相当するトリコンタペプチド
の［Ｓer］⁸⁷類似体を製造するための、固相ペプチド合
成を説明する。

【００９６】Ｂoc−Ａla−ＯＣＨ₂−Ｃ₆Ｈ₄−樹脂（２
g、１．０ミリモル）（サイクル１）を、ペプチド合成
容器（１５０ml）中に入れ、そして２０体積の次の溶媒
および／または試薬で、各サイクル２〜３０について次
の順序において処理する： （１）４０％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で予備洗浄
する； （２）４０％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）とともに２
８分間撹拌する； （３）ジクロロメタン、ＣＨ₂Ｃl₂、で３回洗浄する； （４）１０％のトリエチルアミン（ＴＥＡ）で予備洗浄
する。

【００９７】（５）１０％のＴＥＡとともに５分間撹拌
する； （６）ＣＨ₂Ｃl₂で３回洗浄する； （７）Ｂoc−Ｌys（Ｃ１Ｚ）−ＯＨ（１．２５g、３ミ
リモル）（サイクル２）およびジシクロヘキシルカーボ
ジイミド（０．６１８g、３ミリモル）とともに１２０
分間撹拌する； （８）各々ＣＨ₂Ｃl₂、５０％のイソプロパノールおよ
びＣＨ₂Ｃl₂で３回洗浄する。カップリングが完結した
とき、反応をニンヒドリン反応によって試験する。カッ
プリングが不完全である場合、工程（７）および（８）
を反復する。

【００９８】カップリングが完結したとき、次のよう
に、工程（７）において保護された（Ｂoc）アミノ酸の
各々を使用して、工程（１）〜（８）を実施することに
よって、次のサイクルおよび引続くサイクル３〜３０を
実施する： サイクル ３：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５
g）； サイクル ４：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５
g）； サイクル ５：Ｂoc−Ｓer（Ｂzl）−ＯＨ（０．８９
g）； サイクル ６：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５
g）； サイクル ７：Ｂoc−Ａsn−ＯＨ（０．７０g）＋１−
ヒドロキシベンズトリアジド（１−hydrixy benxtriaz
de）(ＨＢＴ）(０.９２g)； サイクル ８：Ｂoc−Ｇln−ＯＨ（０．７４g）＋ＨＢ
Ｔ（０．９２g）； サイクル ９：Ｂoc−Ｇlu（ＯＢzl）−ＯＨ（１．０１
g）； サイクル１０：Ｂoc−Ｇlu（ＯＢzl）−ＯＨ（１．０１
g）； サイクル１１：Ｂoc−Ｇlu（ＯＢzl）−ＯＨ（１．０１
g）； サイクル１２:Ｂoc−Ｉle−ＯＨ(０.７２g）； サイク
ル１３：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５g）； サイクル１４：Ｂoc−Ｇlu（ＯＢzl）−ＯＨ（１．０１
g）； サイクル１５:Ｂoc−Ｌeu−ＯＨ(０.７５g； サイクル１６：Ｂoc−Ａla−ＯＨ(０.５７g)； サイクル１７：Ｂoc−Ｇlu（ＯＢzl）−ＯＨ（１．０１
g）； サイクル１８：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５
g）； サイクル１９：Ｂoc−Ｔhr（Ｂzl）−ＯＨ（０．９３
g）； サイクル２０：Ｂoc−Ａsp（ＯＢzl）−ＯＨ（０．９７
g）； サイクル２１：Ｂoc−Ｌys（ＣlＺ）−ＯＨ（１．２５
g）； サイクル２２：Ｂoc−Ｖal−ＯＨ（０．６５g）； サイクル２３：Ｂoc−Ａsp（ＯＢzl）−ＯＨ（０．９７
g）； サイクル２４：Ｂoc−Ｉle−ＯＨ（０．７２g）； サイクル２５：Ｂoc−Ａrg（Ｔos）−ＯＨ（１．２９
g）； サイクル２６：Ｂoc−Ｇln−ＯＨ（０．７４g）＋ＨＢ
Ｔ（０．９２g）； サイクル２７：Ｂoc−Ｈis（Ｔos）−ＯＨ（１．２３
g）； サイクル２８：Ｂoc−Ｖal−ＯＨ（０．６５g）； サイクル２９：Ｂoc−Ｓer（Ｂzl）−ＯＨ（０．８９
g）； サイクル３０：Ｂoc−Ｔyr（ＢrＺ）−ＯＨ（１．４９
g）。

【００９９】この手順に従い、乾燥基準で、６．１８g
の３０アミノ酸樹脂が得られる。

【０１００】保護されたペプチド樹脂の一部（３．５g)
を、ほぼ１５mlの無水ＨＦで０℃において５mlのアニソ
ールの存在下に４５分間処理する。過剰の酸を蒸発さ
せ、そして得られた切離されかつ脱保護された粗製ペプ
チドを乾燥エーテルで簡単に洗浄し、そして１５０mlの
２％の酢酸アンモニウム中に抽出する。このペプチド溶
液を約４０mlに濃縮し、そして濃縮したペプチド溶液を
セファデックス（Ｓephadex）Ｇ−１０カラム（２．６
×９０cm）のクロマトグラフィーにかけ、０．１モルの
酢酸で溶離し、そして２８０nmにおいて監視する。

【０１０１】主要なペプチドの分画をプールしそして５
０mlに濃縮した。凍結乾燥後、１．０９gの実質的に純
粋な生成物（高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）により決定して）が得られる。

【０１０２】実施例２ ラジオイムノアッセイ このアッセイの作業範囲に適する濃度（０．５〜３７．
５ng／１００μl）の合成チモシンα₁の原溶液を、ラジ
オイムノアッセイ緩衝液中で調製し、そして１０℃にお
いて凍結する。ラジオイムノアッセイ緩衝液（ＲＩＡ
Ｂ）はリン酸塩緩衝液（pＨ＝７．４、０．０１モルの
リン酸ナトリウムおよび０．１５モルのＮaＣl）であ
り、これに０．０５％（w／v）のＮaＮ₃、０．０１ミリ
モルのＥＤＴＡおよび０．５％のウシ血清アルブミン
（５０g／l）を添加する。０．５〜３７．５ng／１００
μlの合成チモシンα₁を含有する９つの標準を、原溶液
から調製し、そして必要に応じて使用するために４℃に
おいて凍結する。未知の試料は５〜２０μl／アッセイ
の血清を必要とし、そして食塩水溶液を添加して１００
μlの試料を得る。すべての管をＲＩＡＢで４００μlの
最終体積にする。原抗血清の５０μlのアリコート（１
／２００の希釈）を各管に添加する。希釈はトレーサー
の２０〜２５％の結合および１／２０００の最終希釈を
与える。非特異性は、特異的抗チモシンα₁抗血清以外
のすべてのアッセイ試薬を含有する管を処理することに
よって評価する。管を渦形成し、そして４℃で２４時間
インキュベーションする。結合したトレーサーの分離
は、ＫＹＮＡＲ（ポリマーに結合したヤギ抗ウサギＩg
Ｇ）の添加により実施する。渦形成および室温における
１５分間のインキュベーション後、４℃において１５分
間１５００×gで遠心することによって、免疫沈殿物を
沈殿させる。上澄みを吸い取り、廃棄し、そして免疫沈
殿物中の放射能を自動化ガンマ分光高度計[ベックマン
・ガンマ（Ｂeckman Ｇamma）４０００］で測定する。
標準および未知についての計数／分は、非特異的バック
グラウンド、通常放射能の５％、非特異的バックグラウ
ンドについて補正し、そして競合抗原を導入しない（Ｂ
o）反応管についての補正された計数／分で割る。デー
タはベックマン・システムＤＰ５５００で分析し、この
システムは；log線量（x軸）対観測された計数をプロッ
トし、そしてデータを４つのパラメーターの数学的方法
を使用して計算し、ここで線量−応答曲線は次によって
記載される：

【０１０３】

【数１】

【０１０４】ここでＹ＝応答、x＝濃度、Ａ＝応答（x＝
０のとき）、Ｂ＝傾斜係数、c＝ＡとＢとの間の半分の
応答に相当する線量、そしてＤ＝無限濃度についての応
答。

【０１０５】実施例３ エライサ（enzyme linked im
munosorbent assay）（ＥＬＩＳＡ） アッセイの作業範囲に適する濃度、すなわち、１００〜
３２００pg／mlの間の６投与レベル、においてリン酸塩
緩衝化食塩水溶液中の合成Ｔα₁の原溶液を調製し、そ
のアリコートを取り、−２０℃で貯蔵し、そして標準曲
線の作成のため１回溶融する。エライサ緩衝液はリン酸
塩緩衝化食塩水溶液、８．０gのＮaＣl、０．２gのＮa
Ｃl、０．２gのＫＨ₂ＰＯ₄、１．１５gのＮa₂ＨＰＯ₄お
よび０．２gのＫＣlであり、これに１リットルの蒸留水
pＨ７．４中の０．７５mlのツイーン２０および０．２g
のＮaＮ₃を添加する。合成Ｔα₁の標準溶液（５０００
μl）または未知の試料（２５０μl）を、１２×７５mm
の試験管に添加する。次いで、緩衝液、２５０μl、を
未知の試料に添加し、そして原抗血清の１：２５００希
釈物の５００μlをすべての管に添加する。管を渦形成
し、パラフィルム（parafilm）で密閉し、そして４℃に
おいて一夜インキュベーションする。コスター（Ｃosta
r）の平底マイクロタイタープレートのウェル（well）
を、ダルベッコ（Ｄulbecco）のリン酸塩緩衝化食塩水
溶液［１０×、ギブコ（ＧＩＢＣＯ）、米国ニューヨー
ク州グランドアイランド］中の５０ng／mlのＴα₁溶液
の１００μl／ウェルを添加することによって合成Ｔα₁
で被覆し、そして３７℃で一夜インキュベーションす
る。このプレートをＰＢＳ／ツイーンで洗浄し、そして
２００μl／ウェルのウマ血清で遮断する。１００μlの
各抗体−抗原溶液をウェルに添加し、そして４℃で一夜
インキュベーションする。プレートを洗浄し、そしてＰ
ＢＳ−ツイーン中のビオチン標識抗ウサギ抗体の１／１
０００希釈液の１００μlを各ウェルに添加し、そして
３７℃で１時間インキュベーションする。１００μlの
アビジンアルカリ性ホスファターゼ（ＰＢＳ−ツイーン
中１／３０００の希釈）を添加し、そしてプレートをさ
らに１時間インキュベーションする。各ウェルに１００
μlのホスフェート基質（２ペレット／１０mlのジエタ
ノールアミン緩衝液）を添加する。プレートを３０分間
にわたってインキュベーションし、そして光学濃度（Ｏ
Ｄ）を決定する。次いで、血清試料についての値を標準
について少なくともスクエアーズ・フィット（squares
fit）の計算により得る。

【０１０６】実施例４ モノクローナル抗体 チモシンのペプチドに対するモノクローナル抗体の生産
は、例としてＴα₁を使用して次のようにして実施でき
る。抗Ｔα₁を生産するマウスからの脾臓を、ポリエチ
レングリコールを使用してＳＰ２０／骨髄腫細胞と融合
する。ハイポキサンチン−アミノプレリン−チミジン
（ＨＡＴ）選択培地を使用して雑種クローンを生産し、
そして引続いて、クローンを、実施例２および３に記載
するようにしてＴα₁に対する抗体を生産するものとし
て、ラジオイムノアッセイおよびエライサによって同定
する。モノクローナルハイブリドーマを組織培養におい
て維持し、そして抗チモシン α₁の腹水の生産のため
にシナージェニック（synergenic）マウスの腹腔中に継
代接種する。

【０１０７】抗チモシンα₁抗体を得るための免疫化は
次のようして発生させる：マウスＩgＧに接合したＴα₁
をマウス（Ｂalb／c）に注射する。３．５mg／mlの合成
Ｔα₁を７．０mg／mlのマウスＩgＧ［マイルス・ラボラ
トリー（Ｍiles Ｌaboratory）、米国インジアナ州エ
ルクハート］および４０μlのグルタルアルデヒドと
３．５時間混合してカップリングを実施し、次いで食塩
水溶液に対して一夜透析する。この接合体を第１日目に
等体積のフロインドの完全アジュバントと混合し、第２
週目および第４週目に１０μgの接合体Ｔα₁および不完
全アジュバントで促進を与える。第５週目にマウスを尾
の静脈から放血し、そして血清をエライサにより抗チモ
シンα₁について評価する。簡単に述べると、５ngのＴ
α₁をマイクロタイタープレートの各ウェル中にプレイ
ティングし、そしてマウス血清の種々の希釈物を添加
し、そして１時間インキュベーションする。洗浄後、ア
ルカリ性ホスファターゼにカップリングした抗マウスＩ
gＧを添加し、１時間インキュベーションし、洗浄し、
そして基質を添加する。融合のため脾臓の切除の４日前
に、マウスを２０μgのチモシン・ＩgＧ接合体を腹腔内
または静脈内の投与により促進する。

【０１０８】融合は次のように実施する：融合のための
細胞（８−アザグアニン耐性ＳＰ２０骨髄腫）を、融合
前、５日間毎日の継代培養によって対数期にする。マウ
スからの脾臓を収穫し、ＲＰＭＩで洗浄し、そして骨髄
腫細胞（１０⁸／ml）で等体積に再懸濁する。両者の細
胞を混合し、そして６００×gで沈殿させる。上澄みを
除去し、そして１mlの５０％のポリエチレングリコール
を３７℃において１分間にわたっておだやかに添加す
る。細胞をさらの１分間混合し、８mlの加温ＤＭＥＭを
ゆつくり添加し、そして細胞を沈殿させる。細胞を２×
１０⁶／mlで再懸濁させ、そして０．１mlをマイクロタ
イタープレートの各ウェルに添加する。培地を必要に応
じて交換する（２０％の胎児ウシ血清を含むＲＰＭ
Ｉ）。１４日後、ＨＴ培地を使用し、そして問題のウェ
ルをエライサおよびラジオイムノアッセイにより抗体に
ついてスクリーニングする。

【０１０９】次いで、陽性と試験されるウェルを、モノ
クローン性が保証されうるまで、コンディショニングし
たＨＴ培地で制限希釈する。それらをラジオイムノアッ
セイおよびエライサの両方で再試験 し、そして組織培
養およびシナージェニック（synergenic）マウスの腹水
の両者において維持し、雑種を得る前の１〜３週に、
０．５mlのプリスタンでプライミングする。腹水の収穫
によって、モノクローナル抗体を濃縮するために十分な
量の物質が得られる。

【０１１０】実施例５ 大腸菌（Ｅ． coli）を使用す
る遺伝子工学によるgagポリペプチドの生産 メチオニンのコドンからグルタミンのコドンに及ぶ全p
１７gag解読配列（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶまたはＡ
ＲＶの全gag蛋白質を生産するため）、あるいは位置９
２、イソロイシンのコドン、から位置１０９、アスパラ
ギンのコドン、に及ぶアミノ酸を暗号化する少なくとも
ヌクレオチドにわたって延長する短縮された解読配列
は、雑種tryp／lacプロモーター−オペレーターの制御
下に大腸菌（Ｅ．coli）中で発現することができる。次
いで、ポリペプチドはＩＰＴＧ、lacオペロンの誘導物
質、によって誘導することができる。

【０１１１】転写のシグナルおよび翻訳のシグナルの適
当な組の導入は、開始（例えば、メチオニン）コドンに
Ｎcol部位を導入し、次いで特殊化された発現ベクタ
ー、例えば、ＰＭＦＺＯlＴetを添加することによって
実施することができ、前記発現ベクターは雑種tryp／la
cプロモーター、lacオペレーターおよび強いリボソーム
結合配列を含み、これらは隣接するＮcol部位における
メチオニンが転写されたmＲＮＡの翻訳のために最適に
位置しかつ全体の解読配列が大腸菌（Ｅ．coli）中で効
率よく翻訳されるように位置する。

【０１１２】雑種Ｂgal−ＧＡＧ融合ポリペプチドは、
ＮＨ₂末端またはＣＯＯＨ末端付近においてガラクトシ
ダーゼのための遺伝子が挿入されたＤＮＡの、適当な制
限エンドヌクレアーゼ発生断片を使用して生産される。
フレーム構造はコロニーにおけるgal酵素活性によって
同定される。これらの蛋白質は、親和クロマトグラフィ
ーにより、基質類似体についてのガラクトシダーゼの親
和性を使用して精製される。

【０１１３】実施例６ この実施例は、ウサギにおいて血清抗体の生産を引き出
す、本発明の新規なgagポリペプチドの効率を明らかに
する。

【０１１４】実施例１の合成gagトリコンタペプチド
を、次の手順を用いてグルタルアルデヒドによって、キ
ーホール笠貝ヘモシアニン（ＫＬＨ）にカップリングす
る。蛋白質、トリコンタペプチドおよびヘモシアニンの
各々の等量（乾燥重量）を、０．２５モルのＮaＰＯ₄、
pＨ７．０、緩衝液中に２mg／mlの濃度で溶解する。等
体積の蛋白質溶液を混合し、そして蛋白質混合物の体積
の１％に等しい体積のグルタルアルデヒド（２５％の水
溶液）を添加する。この反応を３時間進行させ、その間
室温において撹拌する。この反応混合物を無菌の食塩水
溶液で１００μg／mlのトリコンタペプチドの最終濃度
に希釈する。カップリングしたペプチドの溶液のアリコ
ートを取り、そして−２０℃で貯蔵する。

【０１１５】室温において実施した架橋反応から生ずる
生成物の混合物を、いかなる方法においても分別または
精製しない。ＫＬＨの接合体を無菌の正常の食塩水溶液
で希釈し、そして免疫化のために凍結して貯蔵する。

【０１１６】バイツカイチス（Ｖaitukaitis）ら、Ｊ.
Ｃlin．Ｅndoch、３３、９８８（１９７１）の方法に従
い、フロインド完全アジュバントで乳化した１００μg
のポリペプチド（ＫＬＨ接合体として）を各ウサギの背
に１５〜２０の皮内部位に投与することによって、ウサ
ギを免疫化する。また、フロインド不完全アジュバント
中の１０μg／動物のポリペプチドの促進剤を、毎週、
多皮内部位に投与する。実施例３に前述したエライサに
おいて使用可能なペプチドに対する抗体の力価は、わず
か３週の休止期間後に得られ、引続いて１００μgの量
のポリペプチドで促進し、そして各促進投与後の７日目
に各ウサギを放血した。

【０１１７】各ウサギからの血清をＰＢＳで１：１０に
希釈し、そして実施例３に記載するようにしてエライサ
のアッセイにより評価する。最高の抗体力価を有するウ
サギについての結果は第４図に示されており、ここで週
１は放血前の値を表わす。抗体の最大濃度は週４におい
て見出される。

【図面の簡単な説明】

【図１】表２からのデータに基づく、Ｈ９細胞における
ＨＴＬＶ−ＩＩＩレトロウイルスの複製を阻害するチモ
シンα₁に対する抗血清の能力をプロットした棒グラフ
である。

【図２】ヒトレトロウイルスＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ
とロウシャー（Ｒouscher）ネズミ白血病レトロウイル
ス（ＲＬＶ）との間の競合ラジオイムノアッセイのグラ
フである。

【図３】ＲＩＡにより決定した、チモシンα₁に対する抗
血清のＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、ＨＴＬＶ−Ｉおよび
種々のレトロウイルス抽出物への交差反応性を表わす棒
グラフである。

【図４】本発明の新規なgag蛋白質の１つを使用したワ
クチン接種に対するウサギにおける典型的な抗体の応答
を表わすグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 9282−4Ｂ 21/08 9358−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｈ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ Ｓ Ｃ１２Ｎ 15/02 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
   Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
   ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、のアミノ酸配列を含
   む約４０個までのアミノ酸を有するＨＩＶ−１のｐ１７
   蛋白質のペプチド断片に特異的な抗体。
2. 【請求項２】 ペプチド断片が式 Ｔｙｒ−Ａ₁−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｉｌ
   ｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ− Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌ
   ｅｕ−Ａ₂−Ｌｙｓ− Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌ
   ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ 式中、 Ａ₁はＣｙｓまたはＳｅｒであり、そして Ａ₂はＡｓｐまたはＧｌｕである、を有するトリアコン
   タペプチドである請求項１記載の抗体。
3. 【請求項３】 治療的に有効量の式 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
   Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
   ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、のアミノ酸配列を含
   む約４０個までのアミノ酸を有するＨＩＶ−１のｐ１７
   蛋白質のペプチド断片に特異的な抗体を含有することを
   特徴とする後天性免疫不全症候群（エイズ）またはエイ
   ズ関連コンプレツクス（ＡＲＣ）の予防または処置にお
   いて使用するための抗血清。
4. 【請求項４】 式 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
   Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
   ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、のアミノ酸配列を含
   む約４０個までのアミノ酸を有するＨＩＶ−１のｐ１７
   蛋白質のペプチド断片に特異的な抗体を生産する免疫グ
   ロブリン生産性血漿細胞に不死の細胞系を融合すること
   によつて生産される上記の抗体からなるモノクローナル
   抗体。
5. 【請求項５】 抗体が式 Ｔｙｒ−Ａ₁−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｉｌ
   ｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ− Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌ
   ｅｕ−Ａ₂−Ｌｙｓ− Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌ
   ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ 式中、 Ａ₁はＣｙｓまたはＳｅｒであり、そして Ａ₂はＡｓｐまたはＧｌｕである、のトリアコンタペプ
   チドに対して特異的な抗体である請求項４記載のモノク
   ローナル抗体。
6. 【請求項６】 治療的有効量の請求項４記載のモノクロ
   ーナル抗体を含有することを特徴とするエイズまたはＡ
   ＲＣの予防または処置において有用な抗血清。
7. 【請求項７】 請求項４記載のモノクローナル抗体に対
   してレイズされた抗イデイオタイプ抗体。
8. 【請求項８】 治療的有効量の請求項７記載の抗イデイ
   オタイプ抗体および製薬学的に許容されうる担体を含有
   することを特徴とするエイズまたはＡＲＣの予防または
   処置における使用のためのワクチン。
9. 【請求項９】 式 Ｔｙｒ−Ａ₁−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｉｌ
   ｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ− Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌ
   ｅｕ−Ａ₂−Ｌｙｓ− Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌ
   ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ 式中、 Ａ₁はＣｙｓまたはＳｅｒであり、そして Ａ₂はＡｓｐまたはＧｌｕである、を有するトリアコン
   タペプチドを固相合成法により製造するにあたり、 （ａ） Ｃ−末端アラニンの反応性アミノ基を一時的に
   化学的に保護し、 （ｂ） 保護されたアラニンをそのカルボキン酸基を介
   して樹脂支持体に化学的に結合し、 （ｃ） 樹脂結合した保護されたアラニンの反応性アミ
   ノ基を化学的に脱保護し、 （ｄ） 工程（ｃ）からの樹脂結合アミノ酸を、化学的
   に保護された反応性アミノ基を有するリジンと、カツプ
   リング剤の存在下に接触させることによつて、ペプチド
   結合したリジンを介して、上記ペプチドのアミノ酸配列
   中の次のアミノ酸をカツプリングし、 （ｅ） 工程（ｄ）からのカツプリングしたリジンの反
   応性アルフアーアミノ基を化学的に脱保護し、 （ｆ） アルフアーアミノ基とアルフアー位置における
   カルボン酸基以外の他の反応性基とが化学的に保護され
   ている次のアミノ酸を使用して、工程（ｄ）および
   （ｅ）を、保護されたトリコンタペプチドの全体の配列
   が上記樹脂上に構築されるまで、下記の順序で反復する
   ことによつて合成を続け：リジン、リジン、セリン、リ
   ジン、アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸、グル
   タミン酸、グルタミン酸、イソロイシン、リジン、アス
   パラギンまたはグルタミン酸、ロイシン、アラニン、グ
   ルタミン酸、リジン、スレオニン、アスパラギン酸、リ
   ジン、バリン、アスパラギン酸、イソロイシン、アルギ
   ニン、グルタミン、ヒスチジン、バリン、システインま
   たはセリンおよびチロシン、そして （ｇ） 保護されたトリコンタペプチドを樹脂支持体か
   ら切り離し、そして保護された反応性基を脱保護する、
   ことを特徴とする前記式を有するトリアコンタペプチド
   の製造方法。
10. 【請求項１０】 ヒト患者の体液の試料を、式 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
    Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、のアミノ酸配列を含
    む約４０個までのアミノ酸を有するＨＩＶ−１のｐ１７
    蛋白質のペプチド断片に特異的なポリクローナルまたは
    モノクローナル抗体と接触させ、そして抗原−抗体複合
    体の形成をラジオイムノアツセイ、酵素結合イムノソー
    ベントアツセイまたは間接免疫蛍光アツセイにより測定
    することを特徴とするヒト患者の体液中のエイズウイル
    スの検出方法。
11. 【請求項１１】 抗原−抗体複合体の形成を測定する方
    法が放射性標識したアイソトープとして¹²⁵Ｉを用いる
    ラジオイムノアツセイである請求項１０記載の方法。
12. 【請求項１２】 抗原−抗体複合体の形成を測定する方
    法が酵素結合イムノソーベントアツセイである請求項１
    ０記載の方法。
13. 【請求項１３】 ４０個までのアミノ酸を有し且つ配列 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
    Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、からなるＨＩＶ−１
    のｐ１７蛋白質の抗原性ペプチド断片に対する抗体で被
    覆されたマルチウエルプレートを含有する区画されたエ
    ンクロージヤーと、正常な動物の抗血清および酵素、標
    識された抗−抗体抗血清および変色性指示薬を含むＥＬ
    ＩＳＡ材料とを含んでなることを特徴とするヒト体液中
    のエイズウイルスの検出のための診断試験キツト。
14. 【請求項１４】 容器、カバー、並びに該容器中の、標
    識された抗原性物質およびエイズウイルスに対する抗
    体、並びに抗体−抗原反応複合体を検出するための手段
    を含んでなり、ここで、上記抗原性物質が、４０個まで
    のアミノ酸を有し且つ配列 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
    Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、からなるＨＩＶ−１
    のｐ１７蛋白質のペプチド断片であり、そしてエイズウ
    イルスに対する抗体が、上記ペプチド断片に対する抗体
    からなる群より選択されることを特徴とするラジオイム
    ノアツセイを用いてヒト体液試料中のエイズウイルスを
    血清学的に検出するための診断キツト。
15. 【請求項１５】 該検出手段がエイズウイルスに対する
    該抗体に反応性を有する抗体からなる請求項１４記載の
    診断キツト。
16. 【請求項１６】 容器、カバー、並びに該容器中の、ブ
    ロツテイング・メンブランおよびポリアクリルアミド・
    スラブ・ゲルおよびドデシル硫酸ナトリウム、並びにさ
    らに１種または２種以上の界面活性剤、ｐＨ変更剤およ
    びブロツテイング試薬、抗体−抗原反応複合体の形成を
    検出するための検出手段、並びにヒト体液試料中に存在
    するエイズウイルスのｐ１７コア蛋白質の抗原決定基と
    交差反応する抗体源を含んでなり、該抗体が、４０個ま
    でのアミノ酸を有し且つ配列 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
    Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、からなるＨＩＶ−１
    のｐ１７蛋白質のペプチド断片に対する抗体からなる群
    より選択されることを特徴とするウエスタンブロツト法
    またはイムノブロツト法を用いてヒト体液試料中のエイ
    ズウイルスを血清学的に検出するための診断キツト。
17. 【請求項１７】 該検出手段が、第一の動物からの希釈
    された正常な抗血清および該正常な抗血清と交差反応す
    る放射性標識された抗体を含んでなる請求項１６記載の
    診断キツト。
18. 【請求項１８】 試料を、既知量の標識されたペプチド
    およびエイズウイルスまたはエイズウイルス蛋白質と選
    択的に複合するであろう抗体と混合し、生ずる抗体−抗
    原複合体を複合していない標識されたペプチドから分離
    し、該複合体中の該標識されたペプチドの結合の程度を
    測定し、そしてこの結合の程度を、既知量のエイズウイ
    ルスおよびウイルス蛋白質と一定量の該標識されたペプ
    チドおよび該抗体とを混合することによつて得られる標
    準曲線と対比することによつて上記試料中に存在するウ
    イルスまたはウイルス蛋白質の量を決定し、そして各既
    知量のエイズウイルスまたはウイルス蛋白質について結
    合の程度を決定することから、上記ペプチドが、少なく
    とも配列 Ｉｌｅ−Ｙ₁−Ｙ₂−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
    Ｇｌｕ−Ａｌａ− Ｌｅｕ−Ｙ₃−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ− 式中、 Ｙ₁はＡｓｐまたはＧｌｕであり、 Ｙ₂はＶａｌまたはＩｌｅであり、そして Ｙ₃はＧｌｕまたはＡｓｐである、からなるＨＩＶ−１
    のｐ１７蛋白質の４０個までのアミノ酸の断片を含んで
    なり、そして上記抗体が、少なくとも約位置９２ないし
    少なくとも約位置１０９を含むｐ１７ｇａｇ蛋白質の領
    域にわたつて延びるアミノ酸配列においてエイズウイル
    スと共通のエピトープを共有するペプチドに対する抗体
    からなることを特徴とする試料中のエイズウイルスまた
    はエイズウイルス蛋白質のアツセイ法。
19. 【請求項１９】 ラジオイムノアツセイを使用し、そし
    て放射性標識されたペプチドを用いる請求項１８記載の
    方法。
20. 【請求項２０】 放射性標識されたペプチドが式 Ｔｙｒ−Ａ₁−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｉｌ
    ｅ−Ａｓｐ−Ｖａｌ− Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌ
    ｅｕ−Ａ₂−Ｌｙｓ− Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｌ
    ｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ 式中、 Ａ₁はＣｙｓまたはＳｅｒであり、そして Ａ₂はＡｓｐまたはＧｌｕである、を有するトリアコン
    タペプチドである請求項１９記載の方法。
21. 【請求項２１】 抗体−抗原複合体を、エイズウイルス
    特異的抗体を誘発させた宿主動物の血清に対して免疫学
    的に反応する第二の抗体を用いる二抗体法により溶液か
    ら分離する請求項１８記載の方法。