JPH0892157A - プルプロガリン誘導体 - Google Patents
プルプロガリン誘導体Info
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- JPH0892157A JPH0892157A JP7102245A JP10224595A JPH0892157A JP H0892157 A JPH0892157 A JP H0892157A JP 7102245 A JP7102245 A JP 7102245A JP 10224595 A JP10224595 A JP 10224595A JP H0892157 A JPH0892157 A JP H0892157A
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- acid
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C62/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C62/30—Unsaturated compounds
- C07C62/38—Unsaturated compounds containing keto groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】新規な、カテコールアミン−Ｏ−メチルトラン
スフェラーゼ阻害化合物を見い出すこと。 【構成】 式（Ｉ）： 【化５】 で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又
はそのエステル又はその塩、及びそれの産生能を有する
アブシディア（Absidia ）属に属する微生物を、好気性
条件下、培養培地中で培養し、該培養培地より該８−Ｏ
−メチルプルプロガリンカルボン酸を分離し、必要であ
れば、得られた化合物をそのエステル又はその塩に変換
するその製造方法。
スフェラーゼ阻害化合物を見い出すこと。 【構成】 式（Ｉ）： 【化５】 で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又
はそのエステル又はその塩、及びそれの産生能を有する
アブシディア（Absidia ）属に属する微生物を、好気性
条件下、培養培地中で培養し、該培養培地より該８−Ｏ
−メチルプルプロガリンカルボン酸を分離し、必要であ
れば、得られた化合物をそのエステル又はその塩に変換
するその製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規プルプロガリン誘
導体に関し、より詳細には、式（Ｉ）：
導体に関し、より詳細には、式（Ｉ）：
【０００２】
【化４】
【０００３】で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリン
カルボン酸、並びにそのエステル及びその塩に関する。
本発明は、又、式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリ
ンカルボン酸又はそのエステル又はその塩を含有する、
カテコ−ルアミン−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（以
降ＣＯＭＴと記載する）の阻害に有用な医薬組成物並び
に式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
又はそのエステル又はその塩を製造する方法に関する。
カルボン酸、並びにそのエステル及びその塩に関する。
本発明は、又、式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリ
ンカルボン酸又はそのエステル又はその塩を含有する、
カテコ−ルアミン−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（以
降ＣＯＭＴと記載する）の阻害に有用な医薬組成物並び
に式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
又はそのエステル又はその塩を製造する方法に関する。
【０００４】
【従来の技術】ＣＯＭＴは、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチ
オニンから、メチル基の、カテコールアミン伝達物質、
その代謝物及びＬ−ド−パのｍ−ヒドロキシ基への転移
を触媒し、それによりこれらを非活性化する酵素であ
る。ＣＯＭＴは、すべての哺乳類の各種の脳及び末梢組
織に広く分布する。細胞内では、少なくとも２種類の異
なるＣＯＭＴ異性体が存在することが証明されており、
そのうち１種類は可溶性であり、もう１種類は、膜−結
合性である。両方の形のＣＯＭＴもカテコールアミンの
Ｏ−メチル化を触媒するが、その相対的量は、各種の組
織及び種により異なる。
オニンから、メチル基の、カテコールアミン伝達物質、
その代謝物及びＬ−ド−パのｍ−ヒドロキシ基への転移
を触媒し、それによりこれらを非活性化する酵素であ
る。ＣＯＭＴは、すべての哺乳類の各種の脳及び末梢組
織に広く分布する。細胞内では、少なくとも２種類の異
なるＣＯＭＴ異性体が存在することが証明されており、
そのうち１種類は可溶性であり、もう１種類は、膜−結
合性である。両方の形のＣＯＭＴもカテコールアミンの
Ｏ−メチル化を触媒するが、その相対的量は、各種の組
織及び種により異なる。
【０００５】Ｌ−ドーパと結合した選択的ＣＯＭＴ阻害
物質、及び末梢ドーパデカルボキシラーゼ阻害物質は、
パーキンソン病のＬ−ドーパ療法においては、Ｌ−ドー
パの３−Ｏ−メチルドーパへの変換を妨げることによっ
て、Ｌ−ドーパのアベイラビリティーと有効性を改善す
ると予想されている。これまで数種のＣＯＭＴ阻害物質
が報告されているが、これらはいずれも無効であるか、
毒性を有するか、又はＣＯＭＴに対してほとんど選択性
を示さないものであった。最近、数種の新規な強力かつ
選択的ＣＯＭＴ阻害物質が開発され、現在はパーキンソ
ン氏病の治療のための臨床試験が行われている。
物質、及び末梢ドーパデカルボキシラーゼ阻害物質は、
パーキンソン病のＬ−ドーパ療法においては、Ｌ−ドー
パの３−Ｏ−メチルドーパへの変換を妨げることによっ
て、Ｌ−ドーパのアベイラビリティーと有効性を改善す
ると予想されている。これまで数種のＣＯＭＴ阻害物質
が報告されているが、これらはいずれも無効であるか、
毒性を有するか、又はＣＯＭＴに対してほとんど選択性
を示さないものであった。最近、数種の新規な強力かつ
選択的ＣＯＭＴ阻害物質が開発され、現在はパーキンソ
ン氏病の治療のための臨床試験が行われている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このような状況で、本
発明者らは、更なる新規ＣＯＭＴ阻害物質の探究を進め
てきた。このような新規化合物を発見する目的で本発明
者らは、土壌、生物などから多数の微生物を分離し、そ
れにより産生される化合物を精製し、研究を行った。そ
の結果、本発明者らは、ある種の特定の微生物が、強力
かつ選択的ＣＯＭＴ阻害活性を有する新規化合物を産生
することを発見し、本発明を完成した。
発明者らは、更なる新規ＣＯＭＴ阻害物質の探究を進め
てきた。このような新規化合物を発見する目的で本発明
者らは、土壌、生物などから多数の微生物を分離し、そ
れにより産生される化合物を精製し、研究を行った。そ
の結果、本発明者らは、ある種の特定の微生物が、強力
かつ選択的ＣＯＭＴ阻害活性を有する新規化合物を産生
することを発見し、本発明を完成した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】以下に述べる実施例１に
おいて記載したように、得られた式（Ｉ）の８−Ｏ−メ
チルプルプロガリンカルボン酸の物理化学的性状は、以
下のとおりである： 外観 褐色粉末 融点 ２７６−２８４℃（分解） 分子式 Ｃ13Ｈ10Ｏ7 HERI-MS(m/s) M+ 計算値 ２７８．０４２６ 測定値 ２７８．０４３０ ＵＶ λmax （ε） ＭｅＯＨ中 216(17200),285(24200,SH),299(24900), 398(7400) ＭｅＯＨ＋ＨＣｌ中 219(16900),287(23200),299(23600,SH) 400(5700) ＭｅＯＨ＋ＮａＯＨ中 230(14600),326(36600),404(4900) ＩＲ νmax （ＫＢｒ）cm-1 3360,1720,1695,1605,1480,1405,1380 1255,1010 溶解性 ＤＭＳＯ、ＭｅＯＨに可溶 Ｈ2 Ｏにわずかに溶ける 1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6 、内部標準としてＴＭＳを使用） δ 3.87(3H,s),7.05(1H,s),7.51(1H,d,J=1.5H z) 8.11(1H,d,J=1.5Hz),9.75(1H,br), 11.0(1H,br),15.23(1H,s) 13 Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6 、内部標準としてＴＭＳを使用） δ ５９．７，１１３．１，１１３．５，１１
５．２，１２６．４，１３４．１， １３
６．９，１３７．３，１５４．１，１５６．０，１５８．８，１６７．５， １８
３．２
おいて記載したように、得られた式（Ｉ）の８−Ｏ−メ
チルプルプロガリンカルボン酸の物理化学的性状は、以
下のとおりである： 外観 褐色粉末 融点 ２７６−２８４℃（分解） 分子式 Ｃ13Ｈ10Ｏ7 HERI-MS(m/s) M+ 計算値 ２７８．０４２６ 測定値 ２７８．０４３０ ＵＶ λmax （ε） ＭｅＯＨ中 216(17200),285(24200,SH),299(24900), 398(7400) ＭｅＯＨ＋ＨＣｌ中 219(16900),287(23200),299(23600,SH) 400(5700) ＭｅＯＨ＋ＮａＯＨ中 230(14600),326(36600),404(4900) ＩＲ νmax （ＫＢｒ）cm-1 3360,1720,1695,1605,1480,1405,1380 1255,1010 溶解性 ＤＭＳＯ、ＭｅＯＨに可溶 Ｈ2 Ｏにわずかに溶ける 1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6 、内部標準としてＴＭＳを使用） δ 3.87(3H,s),7.05(1H,s),7.51(1H,d,J=1.5H z) 8.11(1H,d,J=1.5Hz),9.75(1H,br), 11.0(1H,br),15.23(1H,s) 13 Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6 、内部標準としてＴＭＳを使用） δ ５９．７，１１３．１，１１３．５，１１
５．２，１２６．４，１３４．１， １３
６．９，１３７．３，１５４．１，１５６．０，１５８．８，１６７．５， １８
３．２
【０００８】本発明により提供される方法によると、式
（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又は
そのエステル又はその塩は、式（Ｉ）の８−Ｏ−メチル
プルプロガリンカルボン酸の産生能を有するアブシディ
ア（Ａｂｓｉｄｉａ ）属に属する微生物を、好気性条
件下、培養培地中で培養し、該培養培地より式（Ｉ）の
該８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を分離し、
必要であれば、得られた化合物をそのエステル又はその
塩に変換することによって製造することができる。
（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又は
そのエステル又はその塩は、式（Ｉ）の８−Ｏ−メチル
プルプロガリンカルボン酸の産生能を有するアブシディ
ア（Ａｂｓｉｄｉａ ）属に属する微生物を、好気性条
件下、培養培地中で培養し、該培養培地より式（Ｉ）の
該８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を分離し、
必要であれば、得られた化合物をそのエステル又はその
塩に変換することによって製造することができる。
【０００９】本発明の微生物は、式（Ｉ）の８−Ｏ−メ
チルプルプロガリンカルボン酸の産生能を有する、Absi
dia 属に属するいかなる菌株（変種を含む）であっても
よい。特に好ましい菌株は、アブシディア種（Absidia
sp. ）NR7184及びその変種である。Absidia sp. NR7184
は、米国カリフォルニア、マリポーサで採取された土壌
試料より分離され、Absidia 属に属する菌株であると同
定された。
チルプルプロガリンカルボン酸の産生能を有する、Absi
dia 属に属するいかなる菌株（変種を含む）であっても
よい。特に好ましい菌株は、アブシディア種（Absidia
sp. ）NR7184及びその変種である。Absidia sp. NR7184
は、米国カリフォルニア、マリポーサで採取された土壌
試料より分離され、Absidia 属に属する菌株であると同
定された。
【００１０】Absidia sp.NR7184 と命名された菌株は、
ブダペスト条約に基づき、１９９４年３月１０日に日本
の工業技術院生命工学工業技術研究所に、以下のように
寄託された。 Absidia sp. NR7184 (FERM BP-4599)
ブダペスト条約に基づき、１９９４年３月１０日に日本
の工業技術院生命工学工業技術研究所に、以下のように
寄託された。 Absidia sp. NR7184 (FERM BP-4599)
【００１１】Absidia sp. NR7184(FERM BP-4599)の培養
特性、分類学的特性及び形態学的特性は、以下のとおり
である。
特性、分類学的特性及び形態学的特性は、以下のとおり
である。
【００１２】分類学的特性 分類学的特性に関する研究は、Zycha et al. "Mucorale
s, eine Beschreibungaller Gattungen und Arten dies
e Pilzgruppe. Verlag von J. Cramer, Lehre, pp 355
(1969)" 、O'Donnel "Zygomycetes in culture. Univ
ersity of Georgian, Athens, pp257 (1979)"及び Gams
et al. "Compendium of soil fungi,Vol. 1, Academic
Press, London, pp 7-15 )1980"に従って行った。
s, eine Beschreibungaller Gattungen und Arten dies
e Pilzgruppe. Verlag von J. Cramer, Lehre, pp 355
(1969)" 、O'Donnel "Zygomycetes in culture. Univ
ersity of Georgian, Athens, pp257 (1979)"及び Gams
et al. "Compendium of soil fungi,Vol. 1, Academic
Press, London, pp 7-15 )1980"に従って行った。
【００１３】コロニーは白色であり、麦芽エキス寒天培
地で速やかに成長し、絨毛状の外観を呈した。匍伏糸
は、仮根から生じた。胞子嚢柄は、匍伏糸に沿って形成
されたが、仮根の基部からは形成されなかった。多数の
胞子嚢胞子を有する西洋梨型の胞子嚢が、柱軸を伴った
ロート形のアポフィシスにより支持されており、胞子嚢
壁は、成熟後も短い杯状構造のカラーのままでいた。胞
子嚢胞子は、微細で、滑らかな壁を有し、球状から卵状
であった。
地で速やかに成長し、絨毛状の外観を呈した。匍伏糸
は、仮根から生じた。胞子嚢柄は、匍伏糸に沿って形成
されたが、仮根の基部からは形成されなかった。多数の
胞子嚢胞子を有する西洋梨型の胞子嚢が、柱軸を伴った
ロート形のアポフィシスにより支持されており、胞子嚢
壁は、成熟後も短い杯状構造のカラーのままでいた。胞
子嚢胞子は、微細で、滑らかな壁を有し、球状から卵状
であった。
【００１４】胞子嚢は、異なるアポフィシスを有する西
洋梨の形状をしており、末端が、匍伏糸に沿って生じた
胞子嚢柄上に支持されていた。これらの際立った特徴に
基づき、本菌株は、ZygomycotinaのMucoraceae中、Absi
dia 属に含まれることが容易に認められた。従って、本
株は、Absidia sp. NR7184であると同定された。
洋梨の形状をしており、末端が、匍伏糸に沿って生じた
胞子嚢柄上に支持されていた。これらの際立った特徴に
基づき、本菌株は、ZygomycotinaのMucoraceae中、Absi
dia 属に含まれることが容易に認められた。従って、本
株は、Absidia sp. NR7184であると同定された。
【００１５】本発明により提供される方法による培養
は、培養される微生物によって利用可能な通常の栄養素
を含む培養培地中で行う。炭素源としては、例えばグル
コース、ショ糖、デンプン、グリセロール、糖蜜、デキ
ストリン及びその混合物が挙げられる。窒素源として
は、例えば、大豆ミール、綿実ミール、肉エキス、ペプ
トン、乾燥酵母、酵母エキス、コーンスティープリカ
ー、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム及びその混合物
が挙げられる。更に又、本培養培地には、微生物の成長
を促進し、８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸の
産生を増大させるために、その他の有機又は無機物質を
加えることができ、このような物質の例としては、例え
ば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸塩などの無
機塩が挙げられる。
は、培養される微生物によって利用可能な通常の栄養素
を含む培養培地中で行う。炭素源としては、例えばグル
コース、ショ糖、デンプン、グリセロール、糖蜜、デキ
ストリン及びその混合物が挙げられる。窒素源として
は、例えば、大豆ミール、綿実ミール、肉エキス、ペプ
トン、乾燥酵母、酵母エキス、コーンスティープリカ
ー、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム及びその混合物
が挙げられる。更に又、本培養培地には、微生物の成長
を促進し、８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸の
産生を増大させるために、その他の有機又は無機物質を
加えることができ、このような物質の例としては、例え
ば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸塩などの無
機塩が挙げられる。
【００１６】培養は、好気性条件下、水性培地中、好ま
しくは液内発酵により行う。培養は、２０℃から３５℃
の温度で適切に行われ、最適温度は、２７℃である。培
養は、好ましくはpH３〜９で行う。培養時間は、培養を
行う条件によって異なる。一般的には、５０〜２００時
間培養を行えば十分である。
しくは液内発酵により行う。培養は、２０℃から３５℃
の温度で適切に行われ、最適温度は、２７℃である。培
養は、好ましくはpH３〜９で行う。培養時間は、培養を
行う条件によって異なる。一般的には、５０〜２００時
間培養を行えば十分である。
【００１７】８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
は、それ自体公知の方法によって、発酵ブロスから分離
することができる。例えば、菌糸体は、遠心分離又はろ
過により、発酵ブロスから分離することができ、８−Ｏ
−メチルプルプロガリンカルボン酸は、アルカノール、
例えばｎ−ブタノール、及びエステル、例えば酢酸エチ
ル、酢酸ブチルなどの水非混和性有機溶媒によるろ液か
ら抽出することができる。一方、分離された菌糸体に含
まれる８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸は、例
えば、水性アセトン又は水性メタノールなどの溶媒によ
り菌糸体を抽出し、溶媒を除去し、そして残渣を水非混
和性有機溶媒により更に抽出することによって得ること
ができる。このようにして得られた溶媒相を、硫酸ナト
リウムなどの脱水剤により乾燥し、減圧下で濃縮する。
得られる８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸粗生
成物は、抽出法、分配法、沈降法、カラムクロマトグラ
フィー法（吸着剤としてシリカゲル、逆相シリカゲル、
酸化アルミニウム、DiaionHP-21などを使用）又は分子
ふるい法を用いて精製することができる。それぞれの活
性物質は、分離用ＨＰＬＣ法により得ることができる。
は、それ自体公知の方法によって、発酵ブロスから分離
することができる。例えば、菌糸体は、遠心分離又はろ
過により、発酵ブロスから分離することができ、８−Ｏ
−メチルプルプロガリンカルボン酸は、アルカノール、
例えばｎ−ブタノール、及びエステル、例えば酢酸エチ
ル、酢酸ブチルなどの水非混和性有機溶媒によるろ液か
ら抽出することができる。一方、分離された菌糸体に含
まれる８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸は、例
えば、水性アセトン又は水性メタノールなどの溶媒によ
り菌糸体を抽出し、溶媒を除去し、そして残渣を水非混
和性有機溶媒により更に抽出することによって得ること
ができる。このようにして得られた溶媒相を、硫酸ナト
リウムなどの脱水剤により乾燥し、減圧下で濃縮する。
得られる８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸粗生
成物は、抽出法、分配法、沈降法、カラムクロマトグラ
フィー法（吸着剤としてシリカゲル、逆相シリカゲル、
酸化アルミニウム、DiaionHP-21などを使用）又は分子
ふるい法を用いて精製することができる。それぞれの活
性物質は、分離用ＨＰＬＣ法により得ることができる。
【００１８】８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
は、遊離酸として分離されるが、遊離８−Ｏ−メチルプ
ルプロガリンカルボン酸は必要であれば、ナトリウム
塩、カリウム塩及びカルシウム塩などの各種の製薬学的
に許容しうる塩に従来の方法により変換することができ
る。８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸は、又、
必要であれば、低級アルキルエステルなどのエステル、
例えばエチル又はメチルエステルに、従来の方法で変換
することもできる。
は、遊離酸として分離されるが、遊離８−Ｏ−メチルプ
ルプロガリンカルボン酸は必要であれば、ナトリウム
塩、カリウム塩及びカルシウム塩などの各種の製薬学的
に許容しうる塩に従来の方法により変換することができ
る。８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸は、又、
必要であれば、低級アルキルエステルなどのエステル、
例えばエチル又はメチルエステルに、従来の方法で変換
することもできる。
【００１９】式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリン
カルボン酸のＣＯＭＴ阻害活性は、以下のように測定し
た。
カルボン酸のＣＯＭＴ阻害活性は、以下のように測定し
た。
【００２０】ミニシンチレーションバイアル中の測定用
混合物（１２０μl ）にはＫ−ＰＯ4 緩衝液６８mM（pH
８．０）、ＭｇＣｌ2 １０mM、ジチオトレイトール２．
２mM、アデノシンデアミナーゼ７．８U/ml、ＥＧＴＡ５
mM、１，２−ジヒドロキシベンゼン１００μM 、Ｓ−ア
デノシル−Ｌ−〔メチル−3 Ｈ〕メチオニン１８３μM
（７３Ci/mol、Amersham社製）及びヒト肝酵素を含ませ
た。
混合物（１２０μl ）にはＫ−ＰＯ4 緩衝液６８mM（pH
８．０）、ＭｇＣｌ2 １０mM、ジチオトレイトール２．
２mM、アデノシンデアミナーゼ７．８U/ml、ＥＧＴＡ５
mM、１，２−ジヒドロキシベンゼン１００μM 、Ｓ−ア
デノシル−Ｌ−〔メチル−3 Ｈ〕メチオニン１８３μM
（７３Ci/mol、Amersham社製）及びヒト肝酵素を含ませ
た。
【００２１】標準測定においては、阻害物質５μl を保
温混合物に加え、ヒト肝より調製した粗酵素（８．３μ
g タンパク質）の補給により、反応を開始させた。３７
℃で３０分間保温した後、バイアルを氷水中に浸して反
応を停止させた。１M グアイアコールＨＣｌの１００μ
l を加え、試料を、ヘキサン／トルエン（４：１）のシ
ンチレーションカクテル２mlにより抽出した。Ｏ−3 Ｈ
−メチル化物の放射活性を、液体シンチレーションカウ
ンター（LSC1100, Aloka）により測定した。
温混合物に加え、ヒト肝より調製した粗酵素（８．３μ
g タンパク質）の補給により、反応を開始させた。３７
℃で３０分間保温した後、バイアルを氷水中に浸して反
応を停止させた。１M グアイアコールＨＣｌの１００μ
l を加え、試料を、ヘキサン／トルエン（４：１）のシ
ンチレーションカクテル２mlにより抽出した。Ｏ−3 Ｈ
−メチル化物の放射活性を、液体シンチレーションカウ
ンター（LSC1100, Aloka）により測定した。
【００２２】８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
及び参考化合物の阻害活性を、以下の表に示した。
及び参考化合物の阻害活性を、以下の表に示した。
【００２３】
【表１】
【００２４】８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸
の急性毒性は、観察されなかった。
の急性毒性は、観察されなかった。
【００２５】本発明により提供される新規８−Ｏ−メチ
ルプルプロガリンカルボン酸並びにその塩及びそのエス
テルは、これらを、例えばゼラチン、アラビアゴム、乳
糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植
物油、ポリアルキレングリコールなどの、経口投与に適
した有機又は無機非活性担体物質と混合して含む単位投
与量医薬製剤の形の薬物として有用である。単位投与量
医薬製剤は、固剤の形、例えば錠剤、被覆錠、糖衣錠又
はハードゼラチン若しくはソフトゼラチンカプセル、又
は液剤の形、例えば溶液、シロップ若しくは懸濁剤とす
ることができる。
ルプルプロガリンカルボン酸並びにその塩及びそのエス
テルは、これらを、例えばゼラチン、アラビアゴム、乳
糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植
物油、ポリアルキレングリコールなどの、経口投与に適
した有機又は無機非活性担体物質と混合して含む単位投
与量医薬製剤の形の薬物として有用である。単位投与量
医薬製剤は、固剤の形、例えば錠剤、被覆錠、糖衣錠又
はハードゼラチン若しくはソフトゼラチンカプセル、又
は液剤の形、例えば溶液、シロップ若しくは懸濁剤とす
ることができる。
【００２６】投与単位は、活性成分１０〜２００mgを含
むことができる。成人の１日当たりの投与量は、１０〜
４００mgとすることができ、当業界の通常の技術者によ
って決定されるそれぞれの要件に応じて変動することが
できる。
むことができる。成人の１日当たりの投与量は、１０〜
４００mgとすることができ、当業界の通常の技術者によ
って決定されるそれぞれの要件に応じて変動することが
できる。
【００２７】
【実施例】以下の実施例により、本発明を更に説明す
る。
る。
【００２８】実施例１ −８０℃で保存されていたAbsidia sp. NR7184 (FERM-B
P No. 4599) の保存培養液の一部（１００μl ）を、グ
ルコース２％、馬鈴薯デンプン２％、トーストソヤ２
％、酵母エキス０．５％、ＮａＣｌ ０．２５％、Ｚｎ
ＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００５％、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
０．０００５％、ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2Ｏ ０．０００
５、ＣａＣＯ3 ０．３２％及びNissan disfoam CA-115
０．０３％からなる培地１００mlを含む５００ml三角フ
ラスコに接種した。重炭酸カルシウムの添加前に、培地
のpHを７．０に調節した。この種培養液をロータリー振
盪機で２２０rpm 、２７℃で３日間振盪した。次に２ml
ずつを、同じ培地を含む５００mlフラスコ５０個に移
し、更に６日間同一条件でインキュベートした。
P No. 4599) の保存培養液の一部（１００μl ）を、グ
ルコース２％、馬鈴薯デンプン２％、トーストソヤ２
％、酵母エキス０．５％、ＮａＣｌ ０．２５％、Ｚｎ
ＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ０．００５％、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ
０．０００５％、ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2Ｏ ０．０００
５、ＣａＣＯ3 ０．３２％及びNissan disfoam CA-115
０．０３％からなる培地１００mlを含む５００ml三角フ
ラスコに接種した。重炭酸カルシウムの添加前に、培地
のpHを７．０に調節した。この種培養液をロータリー振
盪機で２２０rpm 、２７℃で３日間振盪した。次に２ml
ずつを、同じ培地を含む５００mlフラスコ５０個に移
し、更に６日間同一条件でインキュベートした。
【００２９】培養ブロス（１０リットル）をろ過により
分離してろ液とし、菌糸体を遠心分離により分離した。
培養ろ液（６．１リットル）をpH２のブタノール（６．
１リットル）により抽出した。菌糸体のケーキをエタノ
ール２．５リットルにより抽出した。菌糸体ケーキの除
去後、エタノール抽出物を減圧下で濃縮乾固し、水（２
リットル）に溶解した。水溶液をpH２のブタノール（２
リットル）により抽出した。両方のブタノール抽出液を
合わせ、減圧下で濃縮した。濃縮物を（３２．０ｇ）を
水（１リットル）に溶解し、溶離剤として水とアセトン
を用い、DiaionHP-21（１００ml）によるカラムクロマ
トグラフィー（Mitsubishi Chemical Industries Ltd.
）に付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃縮した。
濃縮物を、溶離剤としてメタノールを用い、Sephadex L
H-20（１リットル）（Pharmacia ）によるカラムクロマ
トグラフィーに付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃
縮した。濃縮物を水に（３０ml）に溶解し、溶離剤とし
て水及びメタノールを用い、Bond elute C18（Varian S
ample Preparation Products）によるカラムクロマトグ
ラフィーに付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃縮乾
固した。８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を、
以下の条件下で分離用ＨＰＬＣにより精製し、次にpH２
の酢酸エチルによる抽出を行った；カラム：Capcellpak
C18（２０×２５０mm）、溶媒：メタノール−０．１M
水性ＮａＨ2 ＰＯ4 ＝１：１（pH２．２）；流速：１０
ml/ 分；検出：ＵＶ２６０nm。８−Ｏ−メチルプルプロ
ガリンカルボン酸（１４mg）が、褐色非晶定形粉末とし
て得た。以下の実施例は、本発明によって提供される８
−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を含む医薬製剤
を示すものである。
分離してろ液とし、菌糸体を遠心分離により分離した。
培養ろ液（６．１リットル）をpH２のブタノール（６．
１リットル）により抽出した。菌糸体のケーキをエタノ
ール２．５リットルにより抽出した。菌糸体ケーキの除
去後、エタノール抽出物を減圧下で濃縮乾固し、水（２
リットル）に溶解した。水溶液をpH２のブタノール（２
リットル）により抽出した。両方のブタノール抽出液を
合わせ、減圧下で濃縮した。濃縮物を（３２．０ｇ）を
水（１リットル）に溶解し、溶離剤として水とアセトン
を用い、DiaionHP-21（１００ml）によるカラムクロマ
トグラフィー（Mitsubishi Chemical Industries Ltd.
）に付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃縮した。
濃縮物を、溶離剤としてメタノールを用い、Sephadex L
H-20（１リットル）（Pharmacia ）によるカラムクロマ
トグラフィーに付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃
縮した。濃縮物を水に（３０ml）に溶解し、溶離剤とし
て水及びメタノールを用い、Bond elute C18（Varian S
ample Preparation Products）によるカラムクロマトグ
ラフィーに付した。活性分画を合わせ、減圧下で濃縮乾
固した。８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を、
以下の条件下で分離用ＨＰＬＣにより精製し、次にpH２
の酢酸エチルによる抽出を行った；カラム：Capcellpak
C18（２０×２５０mm）、溶媒：メタノール−０．１M
水性ＮａＨ2 ＰＯ4 ＝１：１（pH２．２）；流速：１０
ml/ 分；検出：ＵＶ２６０nm。８−Ｏ−メチルプルプロ
ガリンカルボン酸（１４mg）が、褐色非晶定形粉末とし
て得た。以下の実施例は、本発明によって提供される８
−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を含む医薬製剤
を示すものである。
【００３０】実施例２ 以下の成分をそれぞれ含む錠剤を、それ自体公知の方法
により製造した。 ８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸 １００mg デンプン ２６mg カルボキシメチルセルロースカルシウム １５mg 結晶セルロース ２０mg ステアリン酸マグネシウム ４mg １６５ｍｇ
により製造した。 ８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸 １００mg デンプン ２６mg カルボキシメチルセルロースカルシウム １５mg 結晶セルロース ２０mg ステアリン酸マグネシウム ４mg １６５ｍｇ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 7/42 Ｃ１２Ｒ 1:65） (72)発明者 竹花 有紀 神奈川県藤沢市大鋸1001−９ 加賀ハイツ Ｃ−101
Claims (5)
- 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又
はそのエステル又はその塩。 - 【請求項２】 治療上有効量の式（Ｉ）： 【化２】 で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸又
はそのエステル又はその塩及び治療的に非活性である担
体からなる医薬組成物。 - 【請求項３】 式（Ｉ）： 【化３】 で示される８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を
製造する方法であって、式（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプル
プロガリンカルボン酸の産生能を有するアブシディア
（Absidia ）属に属する微生物を、好気性条件下、培養
培地中で培養し、該培養培地より該８−Ｏ−メチルプル
プロガリンカルボン酸を分離し、必要であれば、得られ
た化合物をそのエステル又はその塩に変換することを特
徴とする方法。 - 【請求項４】 微生物が、アブシディア種（Absidia s
p. ）NR7184（FERM-BP 4599）である請求項３記載の式
（Ｉ）の８−Ｏ−メチルプルプロガリンカルボン酸を製
造する方法。 - 【請求項５】 アブシディア種（Absidia sp. ）NR7184
(FERM BP-4599）。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP94106823 | 1994-05-02 | ||
| CH94106823.1 | 1994-05-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0892157A true JPH0892157A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=8215904
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7102245A Pending JPH0892157A (ja) | 1994-05-02 | 1995-04-26 | プルプロガリン誘導体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5650439A (ja) |
| JP (1) | JPH0892157A (ja) |
| DE (1) | DE19515650A1 (ja) |
| FR (1) | FR2719308B1 (ja) |
| IT (1) | IT1273610B (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI20001593A (fi) | 2000-07-03 | 2002-01-04 | Orion Yhtymo Oyj | Comt-entsyymiõ inhiboivaa aktiivisuutta omaavia kumariinijohdannaisia |
| FI20002044A0 (fi) | 2000-09-15 | 2000-09-15 | Orion Yhtymae Oyj | Comt-entsyymiä estäviä naftaleenijohdannaisia |
| KR102040230B1 (ko) * | 2017-09-25 | 2019-11-04 | 제주대학교 산학협력단 | 푸르푸로갈린을 포함하는, 활성산소종, 자외선 또는 미세먼지에 대한 피부 보호용 화장료 조성물 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2770545A (en) * | 1953-10-02 | 1956-11-13 | Universal Oil Prod Co | Stabilization of organic compounds |
| JPH01501791A (ja) * | 1986-11-19 | 1989-06-22 | ケメックス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド | 薬理学的に活性な化合物およびそれらの混合物、有機組成物および金属塩類 |
| JPH06507610A (ja) * | 1991-05-16 | 1994-09-01 | ウー，タイ−ウィン | 酸化防止剤及び細胞保護剤として有用なプルプロガリンを含む医薬用組成物 |
-
1995
- 1995-04-26 JP JP7102245A patent/JPH0892157A/ja active Pending
- 1995-04-27 US US08/429,457 patent/US5650439A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-28 DE DE19515650A patent/DE19515650A1/de not_active Withdrawn
- 1995-04-28 IT ITMI950865A patent/IT1273610B/it active IP Right Grant
- 1995-05-02 FR FR9505217A patent/FR2719308B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-02-13 US US08/800,140 patent/US5814512A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2719308A1 (fr) | 1995-11-03 |
| DE19515650A1 (de) | 1995-11-09 |
| US5650439A (en) | 1997-07-22 |
| FR2719308B1 (fr) | 1997-08-22 |
| ITMI950865A0 (it) | 1995-04-28 |
| ITMI950865A1 (it) | 1996-10-28 |
| US5814512A (en) | 1998-09-29 |
| IT1273610B (it) | 1997-07-08 |
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