JPH0889270A - デオキシフレノリシンの新規製造法 - Google Patents
デオキシフレノリシンの新規製造法Info
- Publication number
- JPH0889270A JPH0889270A JP7258229A JP25822995A JPH0889270A JP H0889270 A JPH0889270 A JP H0889270A JP 7258229 A JP7258229 A JP 7258229A JP 25822995 A JP25822995 A JP 25822995A JP H0889270 A JPH0889270 A JP H0889270A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- frenolicin
- deoxyfrenolicin
- broth
- under
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 デオキシフレノリシン及びフレノリシンＢの
新規製造法を提供する。 【解決手段】 好気的条件下でフレノリシンを生産しう
る微生物を含むブロスを発酵させてフレノリシンを生成
せしめ、次いでフレノリシンを同ブロス中で嫌気的条件
下にデオキシフレノリシンに変換し、そして所望により
続く回収及び精製段階の間にデオキシフレノリシンをフ
レノリシンＢに変換することからなる、デオキシフレノ
リシン及び所望によりフレノリシンＢを製造するための
方法。３種のフレノリシンのそれぞれは、特に動物に投
与するための抗生物質として有用であることが知られて
いる。
新規製造法を提供する。 【解決手段】 好気的条件下でフレノリシンを生産しう
る微生物を含むブロスを発酵させてフレノリシンを生成
せしめ、次いでフレノリシンを同ブロス中で嫌気的条件
下にデオキシフレノリシンに変換し、そして所望により
続く回収及び精製段階の間にデオキシフレノリシンをフ
レノリシンＢに変換することからなる、デオキシフレノ
リシン及び所望によりフレノリシンＢを製造するための
方法。３種のフレノリシンのそれぞれは、特に動物に投
与するための抗生物質として有用であることが知られて
いる。
Description
【０００１】本発明は既知の抗生物質、特にデオキシフ
レノリシンのフレノリシンからの、及びフレノリシンＢ
の中間デオキシフレノリシンからの新規製造法に関す
る。
レノリシンのフレノリシンからの、及びフレノリシンＢ
の中間デオキシフレノリシンからの新規製造法に関す
る。
【０００２】抗生物質活性を有する式
【０００３】
【化１】
【０００４】の化合物であるフレノリシンの生合成は、
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇ．Ａｎｎ．１９６０，７７
−８０（１９６１）において最初に報告された。フレノ
リシンはストレプトミセス・フラジアエ（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｄｉａｅ）と同定された土壌単離
物の、従来の撹拌及び曝気（ａｅｒａｔｉｏｎ）条件下
における培養により製造された。
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇ．Ａｎｎ．１９６０，７７
−８０（１９６１）において最初に報告された。フレノ
リシンはストレプトミセス・フラジアエ（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｄｉａｅ）と同定された土壌単離
物の、従来の撹拌及び曝気（ａｅｒａｔｉｏｎ）条件下
における培養により製造された。
【０００５】後に、フレノリシンが多様な試薬のいずれ
かを用いた還元により式
かを用いた還元により式
【０００６】
【化２】
【０００７】の化合物であるデオキシフレノリシンに化
学的に変換できることが報告された［Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．
８８，４１０９（１９６６）；Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．９０，
１３２５（１９６８）；及び米国特許第３，４５２，０
５１号明細書を参照］。
学的に変換できることが報告された［Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．
８８，４１０９（１９６６）；Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．９０，
１３２５（１９６８）；及び米国特許第３，４５２，０
５１号明細書を参照］。
【０００８】デオキシフレノリシンの生合成は米国特許
第４，１９９，５１４号明細書及びＪ．Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔ．３１，９５９−９６５（１９７８）において最初に
報告された。これらの文献はストレプトミセス・ロセオ
フルブス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｏｆｕ
ｌｖｕｓ）株ＡＭ−３８６７（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ．４
３５９及びＡＴＣＣ Ｎｏ．３１４７６）を含むブロス
の暴気及び好気的条件下における発酵を記載している。
そのような発酵によりフレノリシン、デオキシフレノリ
シン及びさらに別の抗生物質である式
第４，１９９，５１４号明細書及びＪ．Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔ．３１，９５９−９６５（１９７８）において最初に
報告された。これらの文献はストレプトミセス・ロセオ
フルブス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｏｆｕ
ｌｖｕｓ）株ＡＭ−３８６７（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ．４
３５９及びＡＴＣＣ Ｎｏ．３１４７６）を含むブロス
の暴気及び好気的条件下における発酵を記載している。
そのような発酵によりフレノリシン、デオキシフレノリ
シン及びさらに別の抗生物質である式
【０００９】
【化３】
【００１０】のフレノリシンＢを含む培養ブロスが製造
される。発酵の完了後、培養ブロスをバクテリア細胞と
濾液に分離する。ストレプロミセス微生物の発酵により
製造された培養ブロスの濾液を従来の方法により、例え
ばｐＨ又は温度を変えることにより（Ｂｅｌｔｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ−Ｄｏｗｎ
ｓｔｒｅａｍ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｆｏｒ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８８，ｐｐ．１７，２５，
９９及び１０５を参照）処理することができる。しかし
米国特許第４，１９９，５１４号明細書及びＪ．Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔ．３１，９５９−９６５（１９７８）に記載
されている、発酵の完了後に抗生物質を分離及び回収す
る以前の方法は５０％未満というフレノリシンＢの回収
収率を与えた。
される。発酵の完了後、培養ブロスをバクテリア細胞と
濾液に分離する。ストレプロミセス微生物の発酵により
製造された培養ブロスの濾液を従来の方法により、例え
ばｐＨ又は温度を変えることにより（Ｂｅｌｔｅｒ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ−Ｄｏｗｎ
ｓｔｒｅａｍ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｆｏｒ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８８，ｐｐ．１７，２５，
９９及び１０５を参照）処理することができる。しかし
米国特許第４，１９９，５１４号明細書及びＪ．Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔ．３１，９５９−９６５（１９７８）に記載
されている、発酵の完了後に抗生物質を分離及び回収す
る以前の方法は５０％未満というフレノリシンＢの回収
収率を与えた。
【００１１】本質的に本発明はデオキシフレノリシン、
及び所望によりその後フレノリシンＢを製造するための
方法を目的とする。該方法はブロス（栄養培地）を好気
的条件下で発酵させてフレノリシンを生成せしめること
を含み、該ブロスはフレノリシンを生産しうる微生物を
含む。次いでフレノリシンを同ブロス（微生物を含む）
において嫌気的条件下でデオキシフレノリシンに変換す
る。所望によりデオキシフレノリシンは、続く回収及び
精製段階の間にフレノリシンＢに変換される。
及び所望によりその後フレノリシンＢを製造するための
方法を目的とする。該方法はブロス（栄養培地）を好気
的条件下で発酵させてフレノリシンを生成せしめること
を含み、該ブロスはフレノリシンを生産しうる微生物を
含む。次いでフレノリシンを同ブロス（微生物を含む）
において嫌気的条件下でデオキシフレノリシンに変換す
る。所望によりデオキシフレノリシンは、続く回収及び
精製段階の間にフレノリシンＢに変換される。
【００１２】驚くべきことに、フレノリシンの製造のた
めの発酵が行われた後、酸素の不在下（嫌気的条件）及
び以前に用いた微生物（バクテリア）細胞の存在下で、
同ブロス中でこれをデオキシフレノリシンに変換する
と、フレノリシンＢの最終的収率が以前に得られた収率
より向上することが見いだされた。さらにこの方法は処
理時間、原料及び装置を節約し、回収段階を簡単にもす
る。特にこの方法は、フレノリシンの製造のための同じ
発酵装置を、フレノリシンからデオキシフレノリシンへ
の変換に用いることを可能にする。
めの発酵が行われた後、酸素の不在下（嫌気的条件）及
び以前に用いた微生物（バクテリア）細胞の存在下で、
同ブロス中でこれをデオキシフレノリシンに変換する
と、フレノリシンＢの最終的収率が以前に得られた収率
より向上することが見いだされた。さらにこの方法は処
理時間、原料及び装置を節約し、回収段階を簡単にもす
る。特にこの方法は、フレノリシンの製造のための同じ
発酵装置を、フレノリシンからデオキシフレノリシンへ
の変換に用いることを可能にする。
【００１３】従って本発明は、ａ）好気的条件下でフレ
ノリシンを生産しうる微生物を含むブロスを発酵させて
フレノリシンを生成せしめ、次いでｂ）フレノリシンを
同ブロス中で嫌気的条件下にデオキシフレノリシンに変
換し、及び所望によりｃ）続く回収及び精製段階の間に
デオキシフレノリシンをフレノリシンＢに変換すること
を特徴とするデオキシフレノリシン及び所望によりフレ
ノリシンＢを製造するための方法に関する。
ノリシンを生産しうる微生物を含むブロスを発酵させて
フレノリシンを生成せしめ、次いでｂ）フレノリシンを
同ブロス中で嫌気的条件下にデオキシフレノリシンに変
換し、及び所望によりｃ）続く回収及び精製段階の間に
デオキシフレノリシンをフレノリシンＢに変換すること
を特徴とするデオキシフレノリシン及び所望によりフレ
ノリシンＢを製造するための方法に関する。
【００１４】本発明において、化合物フレノリシンを生
産しうるいずれの微生物も用いることができる。好まし
いのは、ストレプトミセス・ロセオフルブスに突然変異
処理を行うことにより得られるストレプトミセス・ロセ
オフルブスの突然変異株である。好ましい突然変異株、
ストレプトミセス・ロセオフルブス ＡＭ−３８６７は
米国特許第４，１９９，５１４号明細書にさらに特定的
に記載されている。最も好ましい突然変異株は１９９４
年６月１５日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｒｙ
ｌａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ａ．にＡＴＣＣ Ｎｏ．５５５９８
として寄託されたストレプトミセス・ロセオフルブス突
然変異株である。本発明で用いることができる他の微生
物にはストレプトミセス・フラジアエ［Ａｎｔｉｍｉｃ
ｒｏｂ．Ａｇ．Ａｎｎ．１９６０，７７−８０（１９６
１），ＡＴＣＣ Ｎｏ．１０７４５］及びＮｏ．１９９
２１としてＡＴＣＣに寄託されたストレプトミセス・ロ
セオフルブスの突然変異株が含まれる。
産しうるいずれの微生物も用いることができる。好まし
いのは、ストレプトミセス・ロセオフルブスに突然変異
処理を行うことにより得られるストレプトミセス・ロセ
オフルブスの突然変異株である。好ましい突然変異株、
ストレプトミセス・ロセオフルブス ＡＭ−３８６７は
米国特許第４，１９９，５１４号明細書にさらに特定的
に記載されている。最も好ましい突然変異株は１９９４
年６月１５日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｔ
ｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｒｙ
ｌａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ａ．にＡＴＣＣ Ｎｏ．５５５９８
として寄託されたストレプトミセス・ロセオフルブス突
然変異株である。本発明で用いることができる他の微生
物にはストレプトミセス・フラジアエ［Ａｎｔｉｍｉｃ
ｒｏｂ．Ａｇ．Ａｎｎ．１９６０，７７−８０（１９６
１），ＡＴＣＣ Ｎｏ．１０７４５］及びＮｏ．１９９
２１としてＡＴＣＣに寄託されたストレプトミセス・ロ
セオフルブスの突然変異株が含まれる。
【００１５】微生物の調製及びフレノリシンへの実際の
発酵は、いずれの従来の方法によっても行うことができ
る。例えば微生物は凍結乾燥原料として保持することが
でき、あるいは５％のラクトース及び１０％のグリセロ
ールと共に液体窒素中で凍結することができる。凍結乾
燥原料は解凍し、無菌の脱イオン水で再水和することが
できる。培養物を系列希釈し、寒天斜面及び／又はプレ
ート上に広げ、インキュベーター中で成長させて胞子を
製造する。胞子を斜面又はプレートからこすり落とし、
Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中の播種培地に接種する
か、あるいは後の接種のために５％のラクトース及び１
０％のグリセロールと共に凍結する。播種培地は例えば
澱粉、デキストロース、Ｂａｃｔｏ トリプトン、酵母
抽出物及び炭酸カルシウムを含む。接種された播種培地
を例えば回転震盪機においてインキュベートした後、成
長した微生物を発酵のための栄養培地中に接種する。本
発明の方法の第１段階（ａ）でフレノリシンを製造する
ための典型的栄養培地は、とうもろこし油、デキストリ
ン、とうもろこし浸漬固体（ｃｏｒｎ ｓｔｅｅｐｓｏ
ｌｉｄｓ）、トウの糖蜜、蟻酸ナトリウム又はクエン酸
ナトリウム、酵母抽出物、大豆粉、硫酸マグネシウム、
一塩基性硫酸ナトリウム、炭酸カルシウム及び消泡剤、
例えばポリプロピレングリコールモノブチルエーテルを
含む。
発酵は、いずれの従来の方法によっても行うことができ
る。例えば微生物は凍結乾燥原料として保持することが
でき、あるいは５％のラクトース及び１０％のグリセロ
ールと共に液体窒素中で凍結することができる。凍結乾
燥原料は解凍し、無菌の脱イオン水で再水和することが
できる。培養物を系列希釈し、寒天斜面及び／又はプレ
ート上に広げ、インキュベーター中で成長させて胞子を
製造する。胞子を斜面又はプレートからこすり落とし、
Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中の播種培地に接種する
か、あるいは後の接種のために５％のラクトース及び１
０％のグリセロールと共に凍結する。播種培地は例えば
澱粉、デキストロース、Ｂａｃｔｏ トリプトン、酵母
抽出物及び炭酸カルシウムを含む。接種された播種培地
を例えば回転震盪機においてインキュベートした後、成
長した微生物を発酵のための栄養培地中に接種する。本
発明の方法の第１段階（ａ）でフレノリシンを製造する
ための典型的栄養培地は、とうもろこし油、デキストリ
ン、とうもろこし浸漬固体（ｃｏｒｎ ｓｔｅｅｐｓｏ
ｌｉｄｓ）、トウの糖蜜、蟻酸ナトリウム又はクエン酸
ナトリウム、酵母抽出物、大豆粉、硫酸マグネシウム、
一塩基性硫酸ナトリウム、炭酸カルシウム及び消泡剤、
例えばポリプロピレングリコールモノブチルエーテルを
含む。
【００１６】発酵温度は一般に約２５℃〜約３４℃であ
る。発酵は適した時間の後に、フレノリシンの力価（濃
度）がその最大に達したと判断される時、すなわちフレ
ノリシンの製造速度がもはや時間をかけても増加しない
時に完了する。フレノリシンの力価は例えばＨＰＬＣア
ッセイ法により決定することができる。典型的発酵時間
は約１６０〜約２４０時間である。
る。発酵は適した時間の後に、フレノリシンの力価（濃
度）がその最大に達したと判断される時、すなわちフレ
ノリシンの製造速度がもはや時間をかけても増加しない
時に完了する。フレノリシンの力価は例えばＨＰＬＣア
ッセイ法により決定することができる。典型的発酵時間
は約１６０〜約２４０時間である。
【００１７】発酵ブロスにおいてフレノリシン及び少量
のデオキシフレノリシンが形成され、堆積する。続くブ
ロスの嫌気的処理［段階ｂ）］は、フレノリシンからデ
オキシフレノリシンへのその場変換を促進する。そのよ
うな処理は、フレノリシンの力価がその最大又はおおよ
そ最大になった時点から窒素を用いてブロスから酸素を
除去することを含むのが好ましい。ブロスからの酸素の
除去に際し、及びその間、ブロスのｐＨは約７．０〜約
９．０、好ましくは約７．５〜約８．４、最も好ましく
は約７．９でなければならない。必要なら、適量のバク
テリア細胞と生理的に適合性の酸を加えることによりｐ
Ｈを約７．９に調節することができる。次いでブロスを
培地の組成及びフレノリシンの濃度に依存して約２〜約
８時間、嫌気的条件下に保持する。便宜的にＨＰＬＣア
ッセイ法により、変換の完了が確定された後に、適量の
いずれかの塩基、好ましくは水酸化ナトリウム又は水酸
化アンモニウムを加えることによりブロスのｐＨを約１
０〜約１１．５に調節し、さらに０．５〜１時間、嫌気
的条件下に保持する。ｐＨの調節は細胞活性を不活化す
るために行われる。嫌気的処理の間の発酵ブロスの温度
は、該温度が微生物を破壊する程高くなければ重要なパ
ラメーターではなく、約１５℃〜２７℃の範囲の温度が
便宜的に用いられる。この範囲の高領域において最良の
結果が得られた。
のデオキシフレノリシンが形成され、堆積する。続くブ
ロスの嫌気的処理［段階ｂ）］は、フレノリシンからデ
オキシフレノリシンへのその場変換を促進する。そのよ
うな処理は、フレノリシンの力価がその最大又はおおよ
そ最大になった時点から窒素を用いてブロスから酸素を
除去することを含むのが好ましい。ブロスからの酸素の
除去に際し、及びその間、ブロスのｐＨは約７．０〜約
９．０、好ましくは約７．５〜約８．４、最も好ましく
は約７．９でなければならない。必要なら、適量のバク
テリア細胞と生理的に適合性の酸を加えることによりｐ
Ｈを約７．９に調節することができる。次いでブロスを
培地の組成及びフレノリシンの濃度に依存して約２〜約
８時間、嫌気的条件下に保持する。便宜的にＨＰＬＣア
ッセイ法により、変換の完了が確定された後に、適量の
いずれかの塩基、好ましくは水酸化ナトリウム又は水酸
化アンモニウムを加えることによりブロスのｐＨを約１
０〜約１１．５に調節し、さらに０．５〜１時間、嫌気
的条件下に保持する。ｐＨの調節は細胞活性を不活化す
るために行われる。嫌気的処理の間の発酵ブロスの温度
は、該温度が微生物を破壊する程高くなければ重要なパ
ラメーターではなく、約１５℃〜２７℃の範囲の温度が
便宜的に用いられる。この範囲の高領域において最良の
結果が得られた。
【００１８】フレノリシンＢへの変換及びその回収のた
めの好ましい方法を下記のフローチヤート１において示
す（チヤートには好ましい溶媒が示されている）。
めの好ましい方法を下記のフローチヤート１において示
す（チヤートには好ましい溶媒が示されている）。
【００１９】
【表１】
【００２０】好ましくはＨＰＬＣアッセイ法により決定
される変換が完了した後、得られるデオキシフレノリシ
ンを発酵ブロスから分離し、集める。適量のいずれかの
酸、好ましくは硫酸又は塩酸を加えることにより発酵ブ
ロスを約２〜５．５のｐＨに調節し（１）、約３のｐＨ
において溶媒としてその約０．５〜約２倍の体積の低級
アルキルアセテート、好ましくは酢酸エチルと混合する
（２）のが好ましい。発酵ブロス全体及び溶媒混合物を
遠心して溶媒、好ましくは酢酸エチル上澄み液を得る
（３）。抽出ブロス、細胞及び固体を含む重い底相を分
離し、捨てる。残りの溶媒抽出物を次いで約１５〜２０
ｇ／ｌのデオキシフレノリシン濃度に濃縮する（４）。
される変換が完了した後、得られるデオキシフレノリシ
ンを発酵ブロスから分離し、集める。適量のいずれかの
酸、好ましくは硫酸又は塩酸を加えることにより発酵ブ
ロスを約２〜５．５のｐＨに調節し（１）、約３のｐＨ
において溶媒としてその約０．５〜約２倍の体積の低級
アルキルアセテート、好ましくは酢酸エチルと混合する
（２）のが好ましい。発酵ブロス全体及び溶媒混合物を
遠心して溶媒、好ましくは酢酸エチル上澄み液を得る
（３）。抽出ブロス、細胞及び固体を含む重い底相を分
離し、捨てる。残りの溶媒抽出物を次いで約１５〜２０
ｇ／ｌのデオキシフレノリシン濃度に濃縮する（４）。
【００２１】集められたデオキシフレノリシンを、フレ
ノリシンＢに変換する前にさらに処理して不純物を除去
する。上記の溶媒濃縮液をその約０．３〜１倍の体積の
脱イオン水で洗浄するのが好ましい（５）。好ましくは
塩基として適量の水酸化アンモニウムを加えることによ
りｐＨを約５．５〜６．３に調節し、溶媒濃縮液／水混
合物を約０．２５〜０．７５時間混合し、相分離のため
に沈降させる（６）。得られる溶媒濃縮液上澄み液を分
離し、適量のいずれかの酸、好ましくは硫酸又は塩酸を
加えることによりそのｐＨを約２．８〜３．５に調節す
る（７）。溶媒濃縮液相をその約０．１２〜０．１７倍
の体積の脱イオン水と混合してｐＨ調節を容易にするの
が適している（８）。デオキシフレノリシンを含む溶媒
濃縮液相を水相から分離し（９）、次いで水洗溶媒抽出
濃縮液を油状ペーストとなるまで、又は蒸留液が流出し
なくなるまでさらに濃縮する（１０）。
ノリシンＢに変換する前にさらに処理して不純物を除去
する。上記の溶媒濃縮液をその約０．３〜１倍の体積の
脱イオン水で洗浄するのが好ましい（５）。好ましくは
塩基として適量の水酸化アンモニウムを加えることによ
りｐＨを約５．５〜６．３に調節し、溶媒濃縮液／水混
合物を約０．２５〜０．７５時間混合し、相分離のため
に沈降させる（６）。得られる溶媒濃縮液上澄み液を分
離し、適量のいずれかの酸、好ましくは硫酸又は塩酸を
加えることによりそのｐＨを約２．８〜３．５に調節す
る（７）。溶媒濃縮液相をその約０．１２〜０．１７倍
の体積の脱イオン水と混合してｐＨ調節を容易にするの
が適している（８）。デオキシフレノリシンを含む溶媒
濃縮液相を水相から分離し（９）、次いで水洗溶媒抽出
濃縮液を油状ペーストとなるまで、又は蒸留液が流出し
なくなるまでさらに濃縮する（１０）。
【００２２】次いでデオキシフレノリシンを続く回収及
び精製段階の間にフレノリシンＢに変換し、回収及び精
製段階はデオキシフレノリシンを好ましくは大気圧より
約０．３５〜約０．７０ｋｇ／ｃｍ2の過剰圧力におい
て最高約４５℃に温めることを含む（大気圧自身は約
１．０３３ｋｇ／ｃｍ2である）。油状ペースト濃縮液
を、収穫された発酵ブロスの残留油含有量に依存してそ
の約１２〜１８倍の体積の低級アルカノール、例えばメ
タノール又はエタノール、好ましくは前者を用いて抽出
し、アルカノール抽出物中の約７〜約１２ｇ／ｌのデオ
キシフレノリシン濃度とする（１１）。アルカノール上
相を集め（１２）、適量の水酸化アンモニウムを加える
ことによりそのｐＨを約６．０〜６．２に調節し、約
０．２〜０．５時間、混合する（１３）。次いでアルカ
ノール抽出物を約３６℃〜約４５℃において、及び約５
〜１０ｐｓｉｇ［平方インチゲージ当たりのポンド、１
４．７ｐｓｉの常（大気）圧を越える過剰圧力である］
の空気圧において約９〜約１６時間温め（反応させ）、
デオキシフレノリシンをフレノリシンＢに変換する（１
４）。５〜１０ｐｓｉｇは約０．３５〜０．７０ｋｇ／
ｃｍ2に等しい。反応（変換）は、適量のいずれかの
酸、好ましくは硫酸又は塩酸を加えることによりアルカ
ノール抽出物のｐＨを約２．８〜約３．４に調節するこ
とによりクエンチする（１５）。
び精製段階の間にフレノリシンＢに変換し、回収及び精
製段階はデオキシフレノリシンを好ましくは大気圧より
約０．３５〜約０．７０ｋｇ／ｃｍ2の過剰圧力におい
て最高約４５℃に温めることを含む（大気圧自身は約
１．０３３ｋｇ／ｃｍ2である）。油状ペースト濃縮液
を、収穫された発酵ブロスの残留油含有量に依存してそ
の約１２〜１８倍の体積の低級アルカノール、例えばメ
タノール又はエタノール、好ましくは前者を用いて抽出
し、アルカノール抽出物中の約７〜約１２ｇ／ｌのデオ
キシフレノリシン濃度とする（１１）。アルカノール上
相を集め（１２）、適量の水酸化アンモニウムを加える
ことによりそのｐＨを約６．０〜６．２に調節し、約
０．２〜０．５時間、混合する（１３）。次いでアルカ
ノール抽出物を約３６℃〜約４５℃において、及び約５
〜１０ｐｓｉｇ［平方インチゲージ当たりのポンド、１
４．７ｐｓｉの常（大気）圧を越える過剰圧力である］
の空気圧において約９〜約１６時間温め（反応させ）、
デオキシフレノリシンをフレノリシンＢに変換する（１
４）。５〜１０ｐｓｉｇは約０．３５〜０．７０ｋｇ／
ｃｍ2に等しい。反応（変換）は、適量のいずれかの
酸、好ましくは硫酸又は塩酸を加えることによりアルカ
ノール抽出物のｐＨを約２．８〜約３．４に調節するこ
とによりクエンチする（１５）。
【００２３】次いでフレノリシンＢを結晶化する。アル
カノール、好ましくはメタノール抽出物を約４５〜約６
０ｇ／ｌのフレノリシンＢ濃度まで濃縮する（１６）。
得られる濃縮スラリを０℃〜４℃に約１６〜約２４時間
冷却し、スラリを濾過し、得られる湿潤ケークをｐＨが
約２の等量の冷（例えば約１〜１５℃の温度範囲、好ま
しくは約４℃）低級アルカノール、好ましくはメタノー
ルを用いて洗浄し、乾燥する（１７）。乾燥されたフレ
ノリシンＢ固体を便宜的にその約１０倍の体積の低級
（特にＣ5-10）アルカン、好ましくはｎ−ヘキサン中に
約１０〜約１５分間再スラリ化し、得られるスラリを濾
過し、得られるケークを乾燥する（１８）。アルカノー
ル母液を濃縮してフレノリシンの第２の収穫を回収する
ことができる。
カノール、好ましくはメタノール抽出物を約４５〜約６
０ｇ／ｌのフレノリシンＢ濃度まで濃縮する（１６）。
得られる濃縮スラリを０℃〜４℃に約１６〜約２４時間
冷却し、スラリを濾過し、得られる湿潤ケークをｐＨが
約２の等量の冷（例えば約１〜１５℃の温度範囲、好ま
しくは約４℃）低級アルカノール、好ましくはメタノー
ルを用いて洗浄し、乾燥する（１７）。乾燥されたフレ
ノリシンＢ固体を便宜的にその約１０倍の体積の低級
（特にＣ5-10）アルカン、好ましくはｎ−ヘキサン中に
約１０〜約１５分間再スラリ化し、得られるスラリを濾
過し、得られるケークを乾燥する（１８）。アルカノー
ル母液を濃縮してフレノリシンの第２の収穫を回収する
ことができる。
【００２４】フレノリシンＢへの変換及びその回収のた
めの代替法を下記のフローチヤート２に示す（チヤート
中には好ましい溶媒が示されている）。
めの代替法を下記のフローチヤート２に示す（チヤート
中には好ましい溶媒が示されている）。
【００２５】
【表２】
【００２６】デオキシフレノリシンをフレノリシンＢに
変換するためのこの代替法は、上記の方法の水洗段階及
びアルカノール（好ましくはメタノール）抽出段階を省
いてある。この方法は約１５〜２０ｇ／ｌのデオキシフ
レノリシン濃度を有する低級アルキルアセテート、好ま
しくは酢酸エチル抽出濃縮液を油状ペーストまで、又は
濃縮液から蒸留液が流出しなくなるまでさらに濃縮する
段階を含む（５’）。油状ペースト濃縮液をその約１〜
３倍の体積の低級アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンと
約０．２５〜０．５時間混合して油を溶解する
（６’）。デオキシフレノリシンアルカンスラリを濾過
し、得られるケークをその約２〜３倍の体積の低級（特
にＣ5-10）アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンを用いて
洗浄し、乾燥する（７’）。固体を低級アルキル、好ま
しくはエチルアセテートに再溶解し、約３０〜約５５ｇ
／ｌのデオキシフレノリシン濃度とする（８’）。適量
の水酸化アンモニウムを加えることにより溶液のｐＨを
約５．９〜約６．８に調節する（９’）。低級アルキル
アセテート溶液を約５〜約１０ｐｓｉｇのエアブランケ
ット下において、約３６℃〜約４５℃に約１６〜約３６
時間温め（反応させ）、デオキシフレノリシンをフレノ
リシンＢに変換する（１０’）。変換された溶液中のフ
レノリシンＢを濃縮して無溶媒フレノリシンＢスラリと
する（１１’）。スラリをその約１〜約２倍の体積の低
級アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンと混合し（１
２’）、濾過し、得られるケークを乾燥する（１
３’）。
変換するためのこの代替法は、上記の方法の水洗段階及
びアルカノール（好ましくはメタノール）抽出段階を省
いてある。この方法は約１５〜２０ｇ／ｌのデオキシフ
レノリシン濃度を有する低級アルキルアセテート、好ま
しくは酢酸エチル抽出濃縮液を油状ペーストまで、又は
濃縮液から蒸留液が流出しなくなるまでさらに濃縮する
段階を含む（５’）。油状ペースト濃縮液をその約１〜
３倍の体積の低級アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンと
約０．２５〜０．５時間混合して油を溶解する
（６’）。デオキシフレノリシンアルカンスラリを濾過
し、得られるケークをその約２〜３倍の体積の低級（特
にＣ5-10）アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンを用いて
洗浄し、乾燥する（７’）。固体を低級アルキル、好ま
しくはエチルアセテートに再溶解し、約３０〜約５５ｇ
／ｌのデオキシフレノリシン濃度とする（８’）。適量
の水酸化アンモニウムを加えることにより溶液のｐＨを
約５．９〜約６．８に調節する（９’）。低級アルキル
アセテート溶液を約５〜約１０ｐｓｉｇのエアブランケ
ット下において、約３６℃〜約４５℃に約１６〜約３６
時間温め（反応させ）、デオキシフレノリシンをフレノ
リシンＢに変換する（１０’）。変換された溶液中のフ
レノリシンＢを濃縮して無溶媒フレノリシンＢスラリと
する（１１’）。スラリをその約１〜約２倍の体積の低
級アルカン、好ましくはｎ−ヘキサンと混合し（１
２’）、濾過し、得られるケークを乾燥する（１
３’）。
【００２７】いずれの方法においても、乾燥されたケー
クを次いで下記のフローチヤート３に示されている通り
に再結晶するのが好ましい（チヤート中には好ましい溶
媒が示されている）。
クを次いで下記のフローチヤート３に示されている通り
に再結晶するのが好ましい（チヤート中には好ましい溶
媒が示されている）。
【００２８】
【表３】
【００２９】乾燥されたケークを便宜的に低級アルキ
ル、好ましくはエチルアセテートに周囲温度で溶解し、
約７０〜約１００ｇ／ｌの濃度とする。溶液を濾過し、
濾液を窒素中及び真空下で、便宜的に約２５〜４０℃の
温度範囲、好ましくは約３５℃で濃縮し、約２７５〜３
５０ｇ／ｌのフレノリシンＢ濃度とする。濃縮液を濾過
窒素ブランケット下で冷却し、スラリを冷条件下、便宜
的に約１〜１５℃の温度範囲、好ましくは約４℃におい
て濾過する。ケークを冷（例えば上記の温度範囲、好ま
しくは約４℃）２５／７５ｖ／ｖ％〜５０／５０ｖ／ｖ
％の低級アルキルアセテート／低級アルカン溶液で、次
いで低級アルカン溶液で洗浄する。溶媒の混合物は酢酸
エチル／ｎ−ヘキサンが好ましく、これらの５０／５０
ｖ／ｖ％混合物が最も好ましく、続いて用いられる低級
アルカンはｎ−ヘキサンが好ましい。次いでフレノリシ
ンＢ結晶を乾燥する。
ル、好ましくはエチルアセテートに周囲温度で溶解し、
約７０〜約１００ｇ／ｌの濃度とする。溶液を濾過し、
濾液を窒素中及び真空下で、便宜的に約２５〜４０℃の
温度範囲、好ましくは約３５℃で濃縮し、約２７５〜３
５０ｇ／ｌのフレノリシンＢ濃度とする。濃縮液を濾過
窒素ブランケット下で冷却し、スラリを冷条件下、便宜
的に約１〜１５℃の温度範囲、好ましくは約４℃におい
て濾過する。ケークを冷（例えば上記の温度範囲、好ま
しくは約４℃）２５／７５ｖ／ｖ％〜５０／５０ｖ／ｖ
％の低級アルキルアセテート／低級アルカン溶液で、次
いで低級アルカン溶液で洗浄する。溶媒の混合物は酢酸
エチル／ｎ−ヘキサンが好ましく、これらの５０／５０
ｖ／ｖ％混合物が最も好ましく、続いて用いられる低級
アルカンはｎ−ヘキサンが好ましい。次いでフレノリシ
ンＢ結晶を乾燥する。
【００３０】以下の実施例は本発明を例示するものであ
る。
る。
【００３１】
【実施例】フレノリシンの決定 本発明の方法の以下の実施例において、フレノリシン、
デオキシフレノリシン及びフレノリシンＢの分析のため
に以下のＨＰＬＣアッセイ法を用いた。ＨＰ１０５０シ
リーズ可変波長検出器、ポンピングシステム及びＨＰ
３３９６シリーズＩＩインテグレーターを含むＨｅｗｌ
ｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ（ＨＰ）ＨＰＬＣシステムを、
Ｃ１８ Ｇｕａｒｄ−ＰＡＫＳプレカラムを有するＷａ
ｔｅｒｓ ＨＰＬＣカラム Ｎｏｖａ−ＰａｋRＣ１８
（３．９ｘ１５０ｍｍ）と共に用いた。カラムは周囲温
度（２０〜２５℃）及び平方インチ当たり１，８００ポ
ンド（ｐｓｉ）／１２６．５ｋｇ／ｃｍ2の圧力で操作
した。可動相溶液は０．２ミクロンのフィルターを通し
て濾過され、ヘリウムを用いて脱気された６０％の２％
酢酸及び４０％のアセトニトリル（ｖ／ｖ）の混合物で
あった。
デオキシフレノリシン及びフレノリシンＢの分析のため
に以下のＨＰＬＣアッセイ法を用いた。ＨＰ１０５０シ
リーズ可変波長検出器、ポンピングシステム及びＨＰ
３３９６シリーズＩＩインテグレーターを含むＨｅｗｌ
ｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ（ＨＰ）ＨＰＬＣシステムを、
Ｃ１８ Ｇｕａｒｄ−ＰＡＫＳプレカラムを有するＷａ
ｔｅｒｓ ＨＰＬＣカラム Ｎｏｖａ−ＰａｋRＣ１８
（３．９ｘ１５０ｍｍ）と共に用いた。カラムは周囲温
度（２０〜２５℃）及び平方インチ当たり１，８００ポ
ンド（ｐｓｉ）／１２６．５ｋｇ／ｃｍ2の圧力で操作
した。可動相溶液は０．２ミクロンのフィルターを通し
て濾過され、ヘリウムを用いて脱気された６０％の２％
酢酸及び４０％のアセトニトリル（ｖ／ｖ）の混合物で
あった。
【００３２】ＨＰＬＣカラムに注入する前に発酵ブロス
試料を酸性メタノール（１：５００ＨＣｌ：メタノー
ル）で１０倍に希釈し、０．４５ミクロンのフィルター
を通して濾過した。回収及び精製法の間に採取された試
料は、ＨＰＬＣ測定の前に適した体積のメタノールで希
釈し、濾過した。試料は２ｍｌのバイアル中に調製し、
ふたをし、３５０マイクロ−ｌ／分の吸引速度（ｄｒａ
ｗ ｓｐｅｅｄ）において、ならびに２０マイクロ−ｌ
の注入体積、１．２ｍｌ／分の流量及び２７６ｎｍの検
出器波長においてＨＰＬＣカラムに自動的に注入した。
キャリブレーション曲線は精製されたフレノリシン化合
物に基づいて調製した。フレノリシン、デオキシフレノ
リシン及びフレノリシンＢの場合の保持時間は５．７、
８．１及び１１．６分であり、検出器応答因子（ｇ／ｌ
生成物濃度／ピーク面積）はそれぞれ３．４０ｘ１０Ｅ
−８、８．４７ｘ１０Ｅ−９及び９．２８ｘ１０Ｅ−９
である。
試料を酸性メタノール（１：５００ＨＣｌ：メタノー
ル）で１０倍に希釈し、０．４５ミクロンのフィルター
を通して濾過した。回収及び精製法の間に採取された試
料は、ＨＰＬＣ測定の前に適した体積のメタノールで希
釈し、濾過した。試料は２ｍｌのバイアル中に調製し、
ふたをし、３５０マイクロ−ｌ／分の吸引速度（ｄｒａ
ｗ ｓｐｅｅｄ）において、ならびに２０マイクロ−ｌ
の注入体積、１．２ｍｌ／分の流量及び２７６ｎｍの検
出器波長においてＨＰＬＣカラムに自動的に注入した。
キャリブレーション曲線は精製されたフレノリシン化合
物に基づいて調製した。フレノリシン、デオキシフレノ
リシン及びフレノリシンＢの場合の保持時間は５．７、
８．１及び１１．６分であり、検出器応答因子（ｇ／ｌ
生成物濃度／ピーク面積）はそれぞれ３．４０ｘ１０Ｅ
−８、８．４７ｘ１０Ｅ−９及び９．２８ｘ１０Ｅ−９
である。
【００３３】実施例１ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌ
ｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．にＡＴ
ＣＣ Ｎｏ．５５５９８として寄託されたストレプトミ
セス・ロセオフルブス突然変異株を発酵のための微生物
として用いた。５％のラクトース及び１０％のグリセロ
ールと共に−７０℃で凍結された５ｍｌのアリコートで
ある胞子原料を解凍し、系列希釈し、０．５ｇ／ｌの酵
母抽出物（Ａｍｂｅｒｅｘ １００３，Ｒｅｄ Ｓｔａ
ｒR，Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｆｏｏｄｓ）、０．５ｇ／
ｌのアスパラギン（Ｓｉｇｍａ）、３９ｇ／ｌのポテト
デキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ）及び１０ｇ／ｌの寒
天（Ｄｉｆｃｏ）を脱イオン水中に含む寒天プレート上
に広げ、インキュベーター中で２７℃において７日間胞
子を成長させた。５ｇ／ｌの無菌の寒天溶液を用いて胞
子をプレートからこすり落とした。約１０8の胞子を用
いて６ｌのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中の約１ｌの
播種培地に接種した。播種培地は脱イオン水中に１ｌ当
たり５ｇの酵母抽出物（Ａｍｂｅｒｅｘ １００３，Ｒ
ｅｄ ＳｔａｒR，Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｆｏｏｄ
ｓ）、５ｇのＢａｃｔｏトリプトン（Ｄｉｆｃｏ）、１
０ｇのグルコース、２０ｇのコーンスターチ（Ｅｃｌｉ
ｐｓｅRＮ，Ｓｔａｌｅｙ）及び４ｇの炭酸カルシウム
（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｃｌａｒｋ Ｄａｎｉｅｌｓ）
を含んだ。フラスコを１分当たり２２０回転（ｒｐｍ）
で運転される回転震盪機において２７℃で４８時間イン
キュベートした。播種培地中で成長した微生物の０．８
ｌを用い、４０ｌの発酵バッチに接種した。６０ｌの種
接種材料を用い、２，０００ｌの発酵槽中の１，３２５
ｌの作用体積（ｗｏｒｋｉｎｇ ｖｏｌｕｍｅ）の発酵
ブロスに接種した。ブロス（１，３２５ｌ）は最初に、
１リットル当たり５０ｇのとうもろこし油（Ｗｅｌｃ
ｈ，Ｈｏｌｍｅ ａｎｄ Ｃｌａｒｋ）、２０ｇのデキ
ストリン（Ｓｉｇｍａ ＩＶ型）、１５ｇのとうもろこ
し浸漬固体（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）、１０ｇのトウの糖蜜
（Ｍｉｄ−Ｅａｓｔｅｒｎ）、７．５ｇの蟻酸ナトリウ
ム（Ｆｉｓｈｅｒ）、３ｇの酵母抽出物（Ａｍｂｅｒｅ
ｘ１００３）、４ｇの硫酸マグネシウム五水和物（Ｆｉ
ｓｈｅｒ）、０．４４ｇの硫酸モノナトリウム五水和物
（Ｆｉｓｈｅｒ）、４ｇの炭酸カルシウム（Ｐｆｉｚｅ
ｒ）及び０．３ｍｌの消泡剤（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉ
ｄｅ，ＵＣＯＮRＬＢ−６２５，ポリプロピレングリコ
ールモノブチルエーテル）を含んだ。
ｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．にＡＴ
ＣＣ Ｎｏ．５５５９８として寄託されたストレプトミ
セス・ロセオフルブス突然変異株を発酵のための微生物
として用いた。５％のラクトース及び１０％のグリセロ
ールと共に−７０℃で凍結された５ｍｌのアリコートで
ある胞子原料を解凍し、系列希釈し、０．５ｇ／ｌの酵
母抽出物（Ａｍｂｅｒｅｘ １００３，Ｒｅｄ Ｓｔａ
ｒR，Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｆｏｏｄｓ）、０．５ｇ／
ｌのアスパラギン（Ｓｉｇｍａ）、３９ｇ／ｌのポテト
デキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ）及び１０ｇ／ｌの寒
天（Ｄｉｆｃｏ）を脱イオン水中に含む寒天プレート上
に広げ、インキュベーター中で２７℃において７日間胞
子を成長させた。５ｇ／ｌの無菌の寒天溶液を用いて胞
子をプレートからこすり落とした。約１０8の胞子を用
いて６ｌのＥｒｌｅｎｍｅｙｅｒフラスコ中の約１ｌの
播種培地に接種した。播種培地は脱イオン水中に１ｌ当
たり５ｇの酵母抽出物（Ａｍｂｅｒｅｘ １００３，Ｒ
ｅｄ ＳｔａｒR，Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｆｏｏｄ
ｓ）、５ｇのＢａｃｔｏトリプトン（Ｄｉｆｃｏ）、１
０ｇのグルコース、２０ｇのコーンスターチ（Ｅｃｌｉ
ｐｓｅRＮ，Ｓｔａｌｅｙ）及び４ｇの炭酸カルシウム
（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｃｌａｒｋ Ｄａｎｉｅｌｓ）
を含んだ。フラスコを１分当たり２２０回転（ｒｐｍ）
で運転される回転震盪機において２７℃で４８時間イン
キュベートした。播種培地中で成長した微生物の０．８
ｌを用い、４０ｌの発酵バッチに接種した。６０ｌの種
接種材料を用い、２，０００ｌの発酵槽中の１，３２５
ｌの作用体積（ｗｏｒｋｉｎｇ ｖｏｌｕｍｅ）の発酵
ブロスに接種した。ブロス（１，３２５ｌ）は最初に、
１リットル当たり５０ｇのとうもろこし油（Ｗｅｌｃ
ｈ，Ｈｏｌｍｅ ａｎｄ Ｃｌａｒｋ）、２０ｇのデキ
ストリン（Ｓｉｇｍａ ＩＶ型）、１５ｇのとうもろこ
し浸漬固体（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）、１０ｇのトウの糖蜜
（Ｍｉｄ−Ｅａｓｔｅｒｎ）、７．５ｇの蟻酸ナトリウ
ム（Ｆｉｓｈｅｒ）、３ｇの酵母抽出物（Ａｍｂｅｒｅ
ｘ１００３）、４ｇの硫酸マグネシウム五水和物（Ｆｉ
ｓｈｅｒ）、０．４４ｇの硫酸モノナトリウム五水和物
（Ｆｉｓｈｅｒ）、４ｇの炭酸カルシウム（Ｐｆｉｚｅ
ｒ）及び０．３ｍｌの消泡剤（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉ
ｄｅ，ＵＣＯＮRＬＢ−６２５，ポリプロピレングリコ
ールモノブチルエーテル）を含んだ。
【００３４】発酵は２７℃において、５ｐｓｉｇの背圧
で、撹拌を１６０〜２８０ｒｐｍに制御し、暴気を３３
６〜６７２ｌ／分に制御することにより溶解酸素を３０
％以上の保持して行われた。発酵ブロスのｐＨは制御せ
ず、６．５〜８．４と測定された。
で、撹拌を１６０〜２８０ｒｐｍに制御し、暴気を３３
６〜６７２ｌ／分に制御することにより溶解酸素を３０
％以上の保持して行われた。発酵ブロスのｐＨは制御せ
ず、６．５〜８．４と測定された。
【００３５】発酵の完了の後（１８６時間、１，３２５
ｌ、ｐＨ８．２、フレノリシン３．８ｇ／ｌ、デオキシ
フレノリシン０．１ｇ／ｌ）、発酵槽における暴気を止
め、窒素を通過させることにより発酵ブロスから酸素を
除去した。発酵槽の撹拌を２８０ｒｐｍから１００ｒｐ
ｍに低下させた。
ｌ、ｐＨ８．２、フレノリシン３．８ｇ／ｌ、デオキシ
フレノリシン０．１ｇ／ｌ）、発酵槽における暴気を止
め、窒素を通過させることにより発酵ブロスから酸素を
除去した。発酵槽の撹拌を２８０ｒｐｍから１００ｒｐ
ｍに低下させた。
【００３６】冷水を用いて発酵ブロスの温度を２７℃か
ら１０℃に低下させ、７時間保持し、フレノリシンをデ
オキシフレノリシンに変換した。変換されたブロス
（１，３２５ｌ、ｐＨ７．７、フレノリシン０．２ｇ／
ｌ、デオキシフレノリシン２．９ｇ／ｌ）を、１２．９
ｌの水酸化ナトリウム５０％水溶液を用いてｐＨ１１．
５に調節し、窒素下で３０分間混合した。次いで１４ｌ
の濃硫酸を用いてブロスのｐＨを２．５に調節し、直後
に酢酸エチル（１，３２５ｌ）を用いて３０分間抽出し
た。
ら１０℃に低下させ、７時間保持し、フレノリシンをデ
オキシフレノリシンに変換した。変換されたブロス
（１，３２５ｌ、ｐＨ７．７、フレノリシン０．２ｇ／
ｌ、デオキシフレノリシン２．９ｇ／ｌ）を、１２．９
ｌの水酸化ナトリウム５０％水溶液を用いてｐＨ１１．
５に調節し、窒素下で３０分間混合した。次いで１４ｌ
の濃硫酸を用いてブロスのｐＨを２．５に調節し、直後
に酢酸エチル（１，３２５ｌ）を用いて３０分間抽出し
た。
【００３７】発酵ブロス全体及び酢酸エチル抽出物混合
物をＷｅｓｔｆａｌｉａディスク型分離器（ｄｉｓｋ
ｔｙｐｅ ｓｅｐａｒａｔｏｒ）（Ｍｏｄｅｌ ＳＡ−
７−０６−０７６）において２８０ｌ／時の流量で遠心
した。分離された酢酸エチル抽出物（軽相、１，２９８
ｌ、ｐＨ２．７、フレノリシン０．１２ｇ／ｌ、デオキ
シフレノリシン２．９１ｇ／ｌ）をワイプト−フィルム
エバポレーター（ｗｉｐｅｄ−ｆｉｌｍ ｅｖａｐｏｒ
ａｔｏｒ）（Ａｒｔｉｓａｎ，ＢＤ４１０，ＥＶＰ−１
２２）において、５０℃、２８”真空（１．９インチ／
４８．３ｍｍ水銀の絶対圧）及び５２ｌ／時の供給流量
で濃縮した。酢酸エチル抽出濃縮液（１９０ｌ、ｐＨ
３．０、デオキシフレノリシン１９．５ｇ／ｌ、フレノ
リシン０．８３ｇ／ｌ）を９３ｌの脱イオン水で洗浄
し、濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．１に調節
し、３０分間混合した。洗浄された酢酸エチル濃縮液を
相分離により分離し、３２ｌの脱イオン水と混合し、濃
塩酸を用いてｐＨ３に調節した。
物をＷｅｓｔｆａｌｉａディスク型分離器（ｄｉｓｋ
ｔｙｐｅ ｓｅｐａｒａｔｏｒ）（Ｍｏｄｅｌ ＳＡ−
７−０６−０７６）において２８０ｌ／時の流量で遠心
した。分離された酢酸エチル抽出物（軽相、１，２９８
ｌ、ｐＨ２．７、フレノリシン０．１２ｇ／ｌ、デオキ
シフレノリシン２．９１ｇ／ｌ）をワイプト−フィルム
エバポレーター（ｗｉｐｅｄ−ｆｉｌｍ ｅｖａｐｏｒ
ａｔｏｒ）（Ａｒｔｉｓａｎ，ＢＤ４１０，ＥＶＰ−１
２２）において、５０℃、２８”真空（１．９インチ／
４８．３ｍｍ水銀の絶対圧）及び５２ｌ／時の供給流量
で濃縮した。酢酸エチル抽出濃縮液（１９０ｌ、ｐＨ
３．０、デオキシフレノリシン１９．５ｇ／ｌ、フレノ
リシン０．８３ｇ／ｌ）を９３ｌの脱イオン水で洗浄
し、濃水酸化アンモニウムを用いてｐＨを６．１に調節
し、３０分間混合した。洗浄された酢酸エチル濃縮液を
相分離により分離し、３２ｌの脱イオン水と混合し、濃
塩酸を用いてｐＨ３に調節した。
【００３８】分離され、水洗された酢酸エチル抽出濃縮
液層（２２４ｌ、ｐＨ３、デオキシフレノリシン１６．
３ｇ／ｌ）を回転蒸発器（５０ｌ、容量３０ｌ、Ｂｕｃ
ｈｉＲｏｔａｖａｐｏｒ Ｍｏｄｅｌ １８５Ｅｘ，Ｅ
ＶＰ−４５４）において４０℃及び２８”真空でさらに
濃縮し、油状ペーストとした。油状ペースト（２８ｌ）
を４３０ｌのメタノールで抽出した。分離した上相のメ
タノール抽出物（４２６ｌ、ｐＨ３．２、デオキシフレ
ノリシン８．２８ｇ／ｌ）を１Ｍの水酸化アンモニウム
を用いてｐＨ６．１に調節した。ｐＨ−調節されたメタ
ノール抽出物を１０ｐｓｉｇの空気下で３８℃に１２時
間温め（反応させ）、デオキシフレノリシンをフレノリ
シンＢに変換した。１Ｍの塩酸を用いてメタノール抽出
物をｐＨ３．０に調節することにより反応をクエンチし
た。
液層（２２４ｌ、ｐＨ３、デオキシフレノリシン１６．
３ｇ／ｌ）を回転蒸発器（５０ｌ、容量３０ｌ、Ｂｕｃ
ｈｉＲｏｔａｖａｐｏｒ Ｍｏｄｅｌ １８５Ｅｘ，Ｅ
ＶＰ−４５４）において４０℃及び２８”真空でさらに
濃縮し、油状ペーストとした。油状ペースト（２８ｌ）
を４３０ｌのメタノールで抽出した。分離した上相のメ
タノール抽出物（４２６ｌ、ｐＨ３．２、デオキシフレ
ノリシン８．２８ｇ／ｌ）を１Ｍの水酸化アンモニウム
を用いてｐＨ６．１に調節した。ｐＨ−調節されたメタ
ノール抽出物を１０ｐｓｉｇの空気下で３８℃に１２時
間温め（反応させ）、デオキシフレノリシンをフレノリ
シンＢに変換した。１Ｍの塩酸を用いてメタノール抽出
物をｐＨ３．０に調節することにより反応をクエンチし
た。
【００３９】クエンチされたメタノール抽出物（４２６
ｌ、フレノリシンＢ７．３５ｇ／ｌ、デオキシフレノリ
シン０．２ｇ／ｌ）をワイプトフィルムエバポレーター
において４５℃、２８”真空及び２０ｌ／時供給流量で
濃縮した。濃縮されたメタノール抽出物スラリ（６６
ｌ、フレノリシンＢ４６．４ｇ／ｌ）を０℃に終夜冷却
し、フレノリシンＢを結晶化し、濾過した（Ｗｈａｔｍ
ａｎ Ｎｏ．１フィルター）。湿潤フレノリシンＢケー
クを酸性化された冷メタノール（ｐＨ２）で洗浄し、３
０℃において終夜真空乾燥した（２５”；４．９インチ
／１２４．５ｍｍ水銀の絶対圧と等しい）。乾燥された
粗フレノリシンＢ固体をｎ−ヘキサン（３７ｌ）中に再
スラリ化し、油を除去して濾過した。ヘキサン−洗浄さ
れた固体を真空乾燥し、３，０６０ｇのフレノリシンＢ
を９０％の純度で得た。
ｌ、フレノリシンＢ７．３５ｇ／ｌ、デオキシフレノリ
シン０．２ｇ／ｌ）をワイプトフィルムエバポレーター
において４５℃、２８”真空及び２０ｌ／時供給流量で
濃縮した。濃縮されたメタノール抽出物スラリ（６６
ｌ、フレノリシンＢ４６．４ｇ／ｌ）を０℃に終夜冷却
し、フレノリシンＢを結晶化し、濾過した（Ｗｈａｔｍ
ａｎ Ｎｏ．１フィルター）。湿潤フレノリシンＢケー
クを酸性化された冷メタノール（ｐＨ２）で洗浄し、３
０℃において終夜真空乾燥した（２５”；４．９インチ
／１２４．５ｍｍ水銀の絶対圧と等しい）。乾燥された
粗フレノリシンＢ固体をｎ−ヘキサン（３７ｌ）中に再
スラリ化し、油を除去して濾過した。ヘキサン−洗浄さ
れた固体を真空乾燥し、３，０６０ｇのフレノリシンＢ
を９０％の純度で得た。
【００４０】フレノリシンＢの固体を酢酸エチルに溶解
し、８０ｇ／ｌの濃度とすることにより、９０％の純度
のフレノリシンＢをさらに精製した。フレノリシンＢの
酢酸エチル溶液を濾過し（Ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１フ
ィルター）、晶析装置において、窒素下及び２５”真空
下において、３５℃で濃縮し、３００ｇ／ｌのフレノリ
シンＢ濃度とした。濃縮液を２．１℃／時でプログラミ
ングされた速度において０℃に１６時間冷却した。結晶
化したフレノリシンＢを濾過し、冷（４℃）５０／５０
（ｖ／ｖ％）酢酸エチル及びｎ−ヘキサンで洗浄し、真
空下で乾燥して２，６４０ｇのフレノリシンＢを９８．
５％の純度で得た。
し、８０ｇ／ｌの濃度とすることにより、９０％の純度
のフレノリシンＢをさらに精製した。フレノリシンＢの
酢酸エチル溶液を濾過し（Ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１フ
ィルター）、晶析装置において、窒素下及び２５”真空
下において、３５℃で濃縮し、３００ｇ／ｌのフレノリ
シンＢ濃度とした。濃縮液を２．１℃／時でプログラミ
ングされた速度において０℃に１６時間冷却した。結晶
化したフレノリシンＢを濾過し、冷（４℃）５０／５０
（ｖ／ｖ％）酢酸エチル及びｎ−ヘキサンで洗浄し、真
空下で乾燥して２，６４０ｇのフレノリシンＢを９８．
５％の純度で得た。
【００４１】実施例２ ストレプトミセス・ロセオフルブス種接種材料調製、菌
糸体発酵、発酵ブロス中におけるデオキシフレノリシン
へのフレノリシン変換、酢酸エチルを用いたブロス全体
の抽出、遠心及び酢酸エチル抽出物濃縮法は、実施例１
に記載の方法と同一である。酢酸エチル抽出濃縮液（２
６ｌ、デオキシフレノリシン１９．８ｇ／ｌ、フレノリ
シン１．４ｇ／ｌ）を回転蒸発器において、４０℃及び
２８”真空（１．９インチ／４８．３ｍｍ水銀の絶対
圧）でさらに濃縮し、油状ペーストとなるまで残留酢酸
エチルを蒸留した。油状ペースト（１２ｌ、デオキシフ
レノリシン４２ｇ／ｌ）を１８ｌのｎ−ヘキサンに加
え、全体を０．５時間混合して油を溶解した。デオキシ
フレノリシン ヘキサン スラリを２５”真空下（４．
９インチ／１２４．５ｍｍ水銀の絶対圧）でＷｈａｔｍ
ａｎ濾紙を用いて濾過した。粗デオキシフレノリシンケ
ーク（８１６ｇ、純度５６％）を３ｌのｎ−ヘキサンで
洗浄し、真空炉（２５”）において３０℃で終夜乾燥し
た。合わせた濾液及びヘキサン洗浄液（３２ｌ、デオキ
シフレノリシン１．４ｇ／ｌ）は濃縮して再循環するこ
とができる。
糸体発酵、発酵ブロス中におけるデオキシフレノリシン
へのフレノリシン変換、酢酸エチルを用いたブロス全体
の抽出、遠心及び酢酸エチル抽出物濃縮法は、実施例１
に記載の方法と同一である。酢酸エチル抽出濃縮液（２
６ｌ、デオキシフレノリシン１９．８ｇ／ｌ、フレノリ
シン１．４ｇ／ｌ）を回転蒸発器において、４０℃及び
２８”真空（１．９インチ／４８．３ｍｍ水銀の絶対
圧）でさらに濃縮し、油状ペーストとなるまで残留酢酸
エチルを蒸留した。油状ペースト（１２ｌ、デオキシフ
レノリシン４２ｇ／ｌ）を１８ｌのｎ−ヘキサンに加
え、全体を０．５時間混合して油を溶解した。デオキシ
フレノリシン ヘキサン スラリを２５”真空下（４．
９インチ／１２４．５ｍｍ水銀の絶対圧）でＷｈａｔｍ
ａｎ濾紙を用いて濾過した。粗デオキシフレノリシンケ
ーク（８１６ｇ、純度５６％）を３ｌのｎ−ヘキサンで
洗浄し、真空炉（２５”）において３０℃で終夜乾燥し
た。合わせた濾液及びヘキサン洗浄液（３２ｌ、デオキ
シフレノリシン１．４ｇ／ｌ）は濃縮して再循環するこ
とができる。
【００４２】濾過され、乾燥された粗デオキシフレノリ
シン固体（８１６ｇ、純度５６％）を、４５ｇ／ｌのデ
オキシフレノリシン濃度まで酢酸エチル（１０ｌ）に再
溶解した。酢酸エチル中のデオキシフレノリシンの溶液
のｐＨを、水酸化アンモニウムを用いてｐＨ６．１に調
節した。混合し、酢酸エチルを還流させながら溶液を４
５℃に加熱し、混合容器を５〜１０ｐｓｉｇにおいて空
気でガスシールした。反応の間の溶液のｐＨは、水酸化
アンモニウムを加えて５．９〜６．１に保持した。デオ
キシフレノリシンは２４時間で９２％の変換率でフレノ
リシンＢに変換された。酢酸エチル中の変換されたフレ
ノリシンＢの溶液（９．５ｌ、フレノリシンＢ４３ｇ／
ｌ）を回転蒸発器において４０℃及び２８”真空で濃縮
し、酢酸エチルを蒸発させた。無溶媒粗フレノリシンＢ
固体スラリ（１．２ｌ）を２．４ｌのｎ−ヘキサンと混
合し、２５”真空下でＷｈａｔｍａｎ濾紙を用いて濾過
し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、３０℃で終夜真空炉（２
５”）乾燥した。フレノリシンＢ固体（４４５ｇ、純度
８７％）を実施例１に記載の方法と同一の再結晶法を用
いてさらに精製することができる。
シン固体（８１６ｇ、純度５６％）を、４５ｇ／ｌのデ
オキシフレノリシン濃度まで酢酸エチル（１０ｌ）に再
溶解した。酢酸エチル中のデオキシフレノリシンの溶液
のｐＨを、水酸化アンモニウムを用いてｐＨ６．１に調
節した。混合し、酢酸エチルを還流させながら溶液を４
５℃に加熱し、混合容器を５〜１０ｐｓｉｇにおいて空
気でガスシールした。反応の間の溶液のｐＨは、水酸化
アンモニウムを加えて５．９〜６．１に保持した。デオ
キシフレノリシンは２４時間で９２％の変換率でフレノ
リシンＢに変換された。酢酸エチル中の変換されたフレ
ノリシンＢの溶液（９．５ｌ、フレノリシンＢ４３ｇ／
ｌ）を回転蒸発器において４０℃及び２８”真空で濃縮
し、酢酸エチルを蒸発させた。無溶媒粗フレノリシンＢ
固体スラリ（１．２ｌ）を２．４ｌのｎ−ヘキサンと混
合し、２５”真空下でＷｈａｔｍａｎ濾紙を用いて濾過
し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、３０℃で終夜真空炉（２
５”）乾燥した。フレノリシンＢ固体（４４５ｇ、純度
８７％）を実施例１に記載の方法と同一の再結晶法を用
いてさらに精製することができる。
【００４３】本発明の主たる特徴及び態様は以下の通り
である。
である。
【００４４】１．ａ）好気的条件下でフレノリシンを生
産しうる微生物を含むブロスを発酵させてフレノリシン
を生成せしめ、次いでｂ）フレノリシンを同ブロス中で
嫌気的条件下にデオキシフレノリシンに変換し、そして
所望に応じてｃ）続く回収及び精製段階の間にデオキシ
フレノリシンをフレノリシンＢに変換することを特徴と
するデオキシフレノリシン及び所望に応じてフレノリシ
ンＢを製造するための方法。
産しうる微生物を含むブロスを発酵させてフレノリシン
を生成せしめ、次いでｂ）フレノリシンを同ブロス中で
嫌気的条件下にデオキシフレノリシンに変換し、そして
所望に応じてｃ）続く回収及び精製段階の間にデオキシ
フレノリシンをフレノリシンＢに変換することを特徴と
するデオキシフレノリシン及び所望に応じてフレノリシ
ンＢを製造するための方法。
【００４５】２．微生物がストレプトミセス・ロセオフ
ルブスの突然変異株である上記１項に記載の方法。
ルブスの突然変異株である上記１項に記載の方法。
【００４６】３．微生物がＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ
Ｎｏ．５５５９８として寄託されたストレプトミセス・
ロセオフルブスの突然変異株である上記１又は２項に記
載の方法。
Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ
Ｎｏ．５５５９８として寄託されたストレプトミセス・
ロセオフルブスの突然変異株である上記１又は２項に記
載の方法。
【００４７】４．段階ｂ）が、フレノリシンの力価がそ
の最大又はおおよそその最大に達した時点から窒素を用
いてブロスから酸素を除去することを含む上記１〜３項
のいずれか１つに記載の方法。
の最大又はおおよそその最大に達した時点から窒素を用
いてブロスから酸素を除去することを含む上記１〜３項
のいずれか１つに記載の方法。
【００４８】５．段階ｂ）がさらに、ブロスを約７．０
〜約９．０のｐＨにおいて嫌気的条件下に約２〜約８時
間保持することを含む上記４項に記載の方法。
〜約９．０のｐＨにおいて嫌気的条件下に約２〜約８時
間保持することを含む上記４項に記載の方法。
【００４９】６．ｐＨが約７．５〜約８．４である上記
５項に記載の方法。
５項に記載の方法。
【００５０】７．変換の完了が確定した後、適量の塩基
を添加によりブロスのｐＨを約１０〜約１１．５に調節
し、さらに０．５〜１時間、嫌気的条件下に保持する上
記４〜６項のいずれか１つに記載の方法。
を添加によりブロスのｐＨを約１０〜約１１．５に調節
し、さらに０．５〜１時間、嫌気的条件下に保持する上
記４〜６項のいずれか１つに記載の方法。
【００５１】８．段階ｃ）が、デオキシフレノリシンを
最高約４５℃の温度に加温することを含む上記１〜７項
のいずれか１つに記載の方法。
最高約４５℃の温度に加温することを含む上記１〜７項
のいずれか１つに記載の方法。
【００５２】９．加温を、大気圧を約０．３５〜約０．
７０ｋｇ／ｃｍ2越える過剰圧力において行う上記８項
に記載の方法。
７０ｋｇ／ｃｍ2越える過剰圧力において行う上記８項
に記載の方法。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 セロン・エドウイン・ハーマン アメリカ合衆国ニユージヤージイ州07405 キネロン・チルホウイードライブ18 (72)発明者 ジー−ハン・シー アメリカ合衆国ニユージヤージイ州07054 −2260パーシパニイ・グリーンブライアー ロード９ (72)発明者 ニクヒル・スレシユチヤンドラ・メータ アメリカ合衆国ニユージヤージイ州07039 リビングストン・マーテインロード89 (72)発明者 ビシユバ・ループ・ライ アメリカ合衆国ニユージヤージイ州07869 ランドルフ・スパロウロード16
Claims (3)
- 【請求項１】 ａ）好気的条件下でフレノリシンを生産
しうることができる微生物を含むブロスを発酵させてフ
レノリシンを生成せしめ、次いでｂ）フレノリシンを同
ブロス中で嫌気的条件下にデオキシフレノリシンに変換
し、そして所望に応じてｃ）続く回収及び精製段階の間
にデオキシフレノリシンをフレノリシンＢに変換するこ
とを特徴とするデオキシフレノリシン及び所望に応じて
フレノリシンＢを製造するための方法。 - 【請求項２】 微生物がＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ ＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎにＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．５５５９８として寄託されたストレプトミセス・ロ
セオフルブス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｏ
ｆｕｌｖｕｓ）の突然変異株である請求項１に記載の方
法。 - 【請求項３】 段階ｃ）が、デオキシフレノリシンを最
高約４５℃の温度に加温することを含む請求項１又は２
に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/305,625 US5593870A (en) | 1994-09-14 | 1994-09-14 | Process for producing frenolicin B |
| US305625 | 1994-09-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0889270A true JPH0889270A (ja) | 1996-04-09 |
Family
ID=23181604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7258229A Pending JPH0889270A (ja) | 1994-09-14 | 1995-09-12 | デオキシフレノリシンの新規製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5593870A (ja) |
| EP (1) | EP0702086A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0889270A (ja) |
| KR (1) | KR960010870A (ja) |
| CN (1) | CN1129740A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0806480A3 (en) * | 1996-05-07 | 1999-11-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Frenolicin gene cluster |
| CN111134129B (zh) * | 2020-01-10 | 2021-07-20 | 东北农业大学 | 福临霉素在抑制引起植物病害的病原真菌活性中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3452051A (en) * | 1967-09-01 | 1969-06-24 | American Cyanamid Co | Deoxyfrenolicins |
| JPS5814439B2 (ja) * | 1978-02-17 | 1983-03-18 | 北里研究所（社団法人） | 新規化合物フレノリシンｂおよびその製造法 |
-
1994
- 1994-09-14 US US08/305,625 patent/US5593870A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-08-30 EP EP95113582A patent/EP0702086A1/en not_active Withdrawn
- 1995-09-12 JP JP7258229A patent/JPH0889270A/ja active Pending
- 1995-09-13 CN CN95116851A patent/CN1129740A/zh active Pending
- 1995-09-13 KR KR1019950029819A patent/KR960010870A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR960010870A (ko) | 1996-04-20 |
| EP0702086A1 (en) | 1996-03-20 |
| CN1129740A (zh) | 1996-08-28 |
| US5593870A (en) | 1997-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10351817B2 (en) | Amycolatopsis sp. strain and methods of using the same for vanillin production | |
| JP4523843B2 (ja) | エポチロンｂの製造、単離および精製方法並びにエポチロンｂのｘ線結晶構造 | |
| NO136756B (ja) | ||
| JP6409133B2 (ja) | スタリマイシンを調製する方法 | |
| EP0264457B1 (en) | Process for preparing optically active cyclopropanecarboxylic acids | |
| LT3083B (en) | Novel fungal strains and use thereof in antibiotic production | |
| WO2010041269A1 (en) | Process for preparation of mycophenolic acid, its salt and ester derivatives | |
| US4874701A (en) | Preparation of coniferylaldehyde by a microorganism | |
| JP2003525052A (ja) | マイコフェノール酸の製造および精製 | |
| JPH0889270A (ja) | デオキシフレノリシンの新規製造法 | |
| EP0482908B1 (en) | Process for producing streptovaricin | |
| IE50834B1 (en) | Preparation of 2-keto-l-gulonic acid | |
| JPH0630593B2 (ja) | 糖類の発酵によりポリオ−ルを工業的規模で製造する方法 | |
| EP0043280B1 (en) | Process for preparing a macrolide | |
| EP1611244A1 (en) | Preparation of vanillin from microbial transformation media by extraction by means supercritical fluids or gases | |
| US3010878A (en) | Process for the production of eburicoic acid | |
| CN109182440B (zh) | 微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法 | |
| CA1334740C (en) | Method for polyether antibiotic recovery using lipid/antibiotic agglomerates | |
| JP3023179B2 (ja) | 立体選択的微生物還元プロセス | |
| JPH06253871A (ja) | 乳酸の製造方法 | |
| CN107974481B (zh) | 11α-羟基-18-甲基诺龙的制备方法 | |
| JP3002654B2 (ja) | 微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法 | |
| JPS637757B2 (ja) | ||
| KR100725559B1 (ko) | 스트렙토마이세스 플라비도비렌스 ｄｓｍ 14455를 이용한프라바스타틴 나트륨염의 제조 방법 | |
| WO2004003214A1 (en) | Solid state fermentation and fed batch for the production of an immunosuppressant |