JP3002654B2 - 微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法 - Google Patents
微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規微生物及びそれを用
いる香料関連化合物の製造に関する。
いる香料関連化合物の製造に関する。
【０００２】
【従来の技術】式、
【化４】 のスクラレオライドは、それ自体芳香性を有するが香料
に用いられる重要な物質である式、
に用いられる重要な物質である式、
【化５】 のエーテル化合物製造における価値ある中間体として見
出された。
出された。
【０００３】米国特許第4,798,799号は、本願に関連す
る化合物について、式、
る化合物について、式、
【化６】 のジオールは、前記スクラレオライド生成における中間
体として、また前記エーテル化合物のプレカーサとして
有用であると記載している。
体として、また前記エーテル化合物のプレカーサとして
有用であると記載している。
【０００４】また、式、
【化７】 の環状エーテルは前記ジオール生成における中間体とし
て有用である旨記載されている。
て有用である旨記載されている。
【０００５】この米国特許は、微生物Hyphozyma roseon
iger ATCC 20604が、式、
iger ATCC 20604が、式、
【化８】 のスクラレオールならびに前記環状エーテルを包含する
化合物を前記ジオールに変換する能力があること、およ
び、この微生物の培養物の利用を開示している。
化合物を前記ジオールに変換する能力があること、およ
び、この微生物の培養物の利用を開示している。
【０００６】しかしながらこの先行技術には、式、
【化９】 の反応をBensingtonia ciliata, ATCC 20919を用いる特
徴的方法を通じて行うことについては何らの教示も暗示
もない。
徴的方法を通じて行うことについては何らの教示も暗示
もない。
【０００７】しかも本発明の微生物は新規なものであ
る。
る。
【０００８】
【発明の要旨】本発明は、下記微生物の生物学的に純粋
な培養に関するものである。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
な培養に関するものである。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
【０００９】他の実施例に於いて本発明は、下記微生物
に関する培養物についてのものである。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
に関する培養物についてのものである。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
【００１０】この培養物は、水性養分培地における通気
条件下で、次の構造のジオール
条件下で、次の構造のジオール
【化１０】 を次のようにして生産することができる。
【００１１】すなわち、Bensingtonia ciliata, ATCC 2
0919は、次の構造のスクラレオール[sclareol]と、
0919は、次の構造のスクラレオール[sclareol]と、
【化１１】 次の構造のエピスクラレオール[episclareol]から
【化１２】 次の構造のジオール
【化１３】 を生産することができるものである。
【００１２】さらに別の実施例では本発明は、水性養分
培地における通気条件下で、次の微生物を（個々に）培
養することによって産生される混合物にも関する。 ATCC 20919、Bensingtonia ciliata
培地における通気条件下で、次の微生物を（個々に）培
養することによって産生される混合物にも関する。 ATCC 20919、Bensingtonia ciliata
【００１３】さらに別の実施例では発明は、次の構造の
ジオールの生産方法の過程に関し、
ジオールの生産方法の過程に関し、
【化１４】 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919を、 (1) 次の構造の
スクラレオール
スクラレオール
【化１５】 および、(2) 次の構造のエピスクラレオール
【化１６】 から成る群から選択される化合物の１または２以上を有
する水性養分培地で通気条件下に培養することを特徴と
するものである。
する水性養分培地で通気条件下に培養することを特徴と
するものである。
【００１４】ATCC 20919のBensingtonia ciliataを使用
して反応をさせると次の反応を起こすことができる。
して反応をさせると次の反応を起こすことができる。
【化１７】 及び／又は
【化１８】
【００１５】使用される微生物の形態[form]は重要でな
い。微生物は、細胞およびその細胞に好適な養分溶液を
含む培養物（懸濁液）としてか、または緩衝液中に懸濁
した細胞という形態で使用することができる。細胞また
はその抽出された酵素は適当な固形支持体上に固定する
ことができ、そうすれば、これらは化合物の変換に用い
ることができる。
い。微生物は、細胞およびその細胞に好適な養分溶液を
含む培養物（懸濁液）としてか、または緩衝液中に懸濁
した細胞という形態で使用することができる。細胞また
はその抽出された酵素は適当な固形支持体上に固定する
ことができ、そうすれば、これらは化合物の変換に用い
ることができる。
【００１６】懸濁状の培養物混合物は適当な水性養分培
地への微生物の接種によって調製される。適当な養分培
地とは窒素源、無機塩、成長要素、好適な基質、および
任意的にその他の炭素源を包含するものをいう。本発明
方法の実施に好適な種類の炭素源としては、例えばグル
コース、ガラクトース、Ｌ−ソルボース、マルトース、
スクロース、セロビオース、トレハロース、Ｌ-アラビ
ノース、Ｌ−ラムノース、エタノール、グリセロール、
Ｌ−エリトリトール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、
メリビオース、ラフィノース、メレチトース、デンプ
ン、Ｄ−キシロース、Ｄ−ソルビトール、α−メチル−
Ｄ−グルコシド、乳酸、クエン酸、およびコハク酸があ
る。好適な窒素源には、例えばペプトン、肉抽出物、抽
出酵母、コーンスティープリカー、カゼイン、尿素、ア
ミノ酸のような窒素含有の有機物質、または硝酸塩、亜
硝酸塩、無機アンモニア塩のような窒素含有の無機化合
物がある。好適な無機塩には例えば、マグネシウム、カ
リウム、カルシウム、またはナトリウムのリン酸塩があ
る。上記の培地の養分は、所望により例えばビタミンＢ
群の１または２以上、及び／又はＦｅ，Ｍｏ，Ｃｕ，Ｍ
ｎ及びＢのような１または２以上の微量鉱物で補足する
ことができる。ビタミンや微量鉱物は、酵母エキスの少
量が培地に追加されるときには不要である。細菌汚染が
問題になるときは、クロロアンフェニコル[chloroamphe
nicol]またはクロロテトラサイクリンのような抗生物質
を添加することが好ましい。
地への微生物の接種によって調製される。適当な養分培
地とは窒素源、無機塩、成長要素、好適な基質、および
任意的にその他の炭素源を包含するものをいう。本発明
方法の実施に好適な種類の炭素源としては、例えばグル
コース、ガラクトース、Ｌ−ソルボース、マルトース、
スクロース、セロビオース、トレハロース、Ｌ-アラビ
ノース、Ｌ−ラムノース、エタノール、グリセロール、
Ｌ−エリトリトール、Ｄ−マンニトール、ラクトース、
メリビオース、ラフィノース、メレチトース、デンプ
ン、Ｄ−キシロース、Ｄ−ソルビトール、α−メチル−
Ｄ−グルコシド、乳酸、クエン酸、およびコハク酸があ
る。好適な窒素源には、例えばペプトン、肉抽出物、抽
出酵母、コーンスティープリカー、カゼイン、尿素、ア
ミノ酸のような窒素含有の有機物質、または硝酸塩、亜
硝酸塩、無機アンモニア塩のような窒素含有の無機化合
物がある。好適な無機塩には例えば、マグネシウム、カ
リウム、カルシウム、またはナトリウムのリン酸塩があ
る。上記の培地の養分は、所望により例えばビタミンＢ
群の１または２以上、及び／又はＦｅ，Ｍｏ，Ｃｕ，Ｍ
ｎ及びＢのような１または２以上の微量鉱物で補足する
ことができる。ビタミンや微量鉱物は、酵母エキスの少
量が培地に追加されるときには不要である。細菌汚染が
問題になるときは、クロロアンフェニコル[chloroamphe
nicol]またはクロロテトラサイクリンのような抗生物質
を添加することが好ましい。
【００１７】微生物の培養は、静置培養としてでも、あ
るいは通気条件下で深部培養（例えば、撹拌培養、発酵
器[fermentor]を用いた培養）としてでも行うことがで
きる。ものによってはｐＨ約２.５〜９.０の範囲で行な
うことができるが、好ましくは約３.０〜７.５、最適に
は約３.０〜６.５の範囲である。ｐＨ値は、塩酸、酢
酸、シュウ酸等の無機酸または有機酸を添加することに
よって調整することができ、あるいは水酸化ナトリウ
ム、水酸化アンモニウムのような塩基を添加することに
より、またはリン酸塩またはフタル酸塩のような緩衝剤
を添加することにより調整することができる。インキュ
ベーション温度は約１２℃〜約３３℃に維持されていな
ければならず、より好ましくは約１５℃〜３０℃、最適
には約１８℃〜２８℃である。
るいは通気条件下で深部培養（例えば、撹拌培養、発酵
器[fermentor]を用いた培養）としてでも行うことがで
きる。ものによってはｐＨ約２.５〜９.０の範囲で行な
うことができるが、好ましくは約３.０〜７.５、最適に
は約３.０〜６.５の範囲である。ｐＨ値は、塩酸、酢
酸、シュウ酸等の無機酸または有機酸を添加することに
よって調整することができ、あるいは水酸化ナトリウ
ム、水酸化アンモニウムのような塩基を添加することに
より、またはリン酸塩またはフタル酸塩のような緩衝剤
を添加することにより調整することができる。インキュ
ベーション温度は約１２℃〜約３３℃に維持されていな
ければならず、より好ましくは約１５℃〜３０℃、最適
には約１８℃〜２８℃である。
【００１８】本発明に係る方法は、下記構造の化合物
【化１９】 の１つ又は混合物を単一炭素源として培養着手時に養分
培地に添加することによって好適に行われる。別法とし
て、培養中か、または炭素源が枯渇されたときに、デキ
ストロースのような別の炭素源と組み合わせて基質を加
えてもよい。培地における基質濃度に対する唯一の制限
は培養物を効果的に空気にさらすことができることにあ
る。しかし基質濃度は好ましくは約０.１g／l〜約１３
０g／l、より好ましくは約０.５g／l〜１２０g／l、最
適には約２.５g／l〜約１００g／lの範囲がよい。化合
物の変換は、上記のいかなる環境下でも最適に行なわれ
得る。
培地に添加することによって好適に行われる。別法とし
て、培養中か、または炭素源が枯渇されたときに、デキ
ストロースのような別の炭素源と組み合わせて基質を加
えてもよい。培地における基質濃度に対する唯一の制限
は培養物を効果的に空気にさらすことができることにあ
る。しかし基質濃度は好ましくは約０.１g／l〜約１３
０g／l、より好ましくは約０.５g／l〜１２０g／l、最
適には約２.５g／l〜約１００g／lの範囲がよい。化合
物の変換は、上記のいかなる環境下でも最適に行なわれ
得る。
【００１９】化合物の変換の全時間（初期培養期後の）
は養分培地の組成および基質濃度に依って変ってくる。
一般に振盪フラスコを用いた培養は約１２時間〜約２６
４時間を要する。しかし、発酵器が使用されるときは培
養時間は約４８時間またはそれ以下に短縮される。
は養分培地の組成および基質濃度に依って変ってくる。
一般に振盪フラスコを用いた培養は約１２時間〜約２６
４時間を要する。しかし、発酵器が使用されるときは培
養時間は約４８時間またはそれ以下に短縮される。
【００２０】化合物の変換は培養物から単離された微生
物の細胞、または従来技術として周知の方法で細胞から
単離された抽出酵素を用いて行われる。この場合には化
合物の変換は、例えば緩衝溶液中、生理食塩溶液中、新
鮮な養分培地中、または水中といった様々な水性養分培
地で便宜的に行われる。単離された細胞または抽出され
た酵素は固形支持体上に固定されて所望の化合物の変換
が達成される。また基質の化合物の変換は、この有機体
（微生物）の突然変異体によって影響される。このよう
な突然変異体は、例えば細胞を紫外線またはＸ線、ある
いは例えばアクリジンオレンジのような公知の突然変異
誘発物質にさらすという周知の方法によって簡単に得る
ことができる。
物の細胞、または従来技術として周知の方法で細胞から
単離された抽出酵素を用いて行われる。この場合には化
合物の変換は、例えば緩衝溶液中、生理食塩溶液中、新
鮮な養分培地中、または水中といった様々な水性養分培
地で便宜的に行われる。単離された細胞または抽出され
た酵素は固形支持体上に固定されて所望の化合物の変換
が達成される。また基質の化合物の変換は、この有機体
（微生物）の突然変異体によって影響される。このよう
な突然変異体は、例えば細胞を紫外線またはＸ線、ある
いは例えばアクリジンオレンジのような公知の突然変異
誘発物質にさらすという周知の方法によって簡単に得る
ことができる。
【００２１】基質は粉末として、あるいはTWEEN 80(商
標)(ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸塩)
のような乳化剤中スラリーとして、あるいは乳化剤中の
溶液として、あるいは例えばアセトン、メタノール、エ
タノール、エチレングリコール、あるいはジオキサンの
ような親水性溶媒中の溶液として培地に添加することが
できる。表面活性剤または分散剤も基質の水性懸濁液に
添加することができるし、あるいは基質は超音波を用い
て乳化することができる。
標)(ポリオキシエチレンソルビタンモノオレイン酸塩)
のような乳化剤中スラリーとして、あるいは乳化剤中の
溶液として、あるいは例えばアセトン、メタノール、エ
タノール、エチレングリコール、あるいはジオキサンの
ような親水性溶媒中の溶液として培地に添加することが
できる。表面活性剤または分散剤も基質の水性懸濁液に
添加することができるし、あるいは基質は超音波を用い
て乳化することができる。
【００２２】シリコーン油（例えばUCON）、ポリアルキ
レングリコール誘導体、とうもろこし油、または大豆油
のような入手容易な消泡剤が発泡を抑制するのに使用で
きる。
レングリコール誘導体、とうもろこし油、または大豆油
のような入手容易な消泡剤が発泡を抑制するのに使用で
きる。
【００２３】基質の変換は、気−液クロマトグラフィ(G
LC), 薄層クロマトグラフィ(TLC),高圧液体クロマトグ
ラフィ(HPLC), 赤外スペクトル(IR)、および核磁気共鳴
(NMR)のような標準的な分析法を用いてモニターするこ
とができる。もし基質の急速な消失が観察されるときに
は、微生物の化合物変換能力を最大限にするため、もっ
とたくさんの基質をそのとき追加することができる。一
般にこの過程は、基質の大部分が培地から消失したとき
に終りにされる。
LC), 薄層クロマトグラフィ(TLC),高圧液体クロマトグ
ラフィ(HPLC), 赤外スペクトル(IR)、および核磁気共鳴
(NMR)のような標準的な分析法を用いてモニターするこ
とができる。もし基質の急速な消失が観察されるときに
は、微生物の化合物変換能力を最大限にするため、もっ
とたくさんの基質をそのとき追加することができる。一
般にこの過程は、基質の大部分が培地から消失したとき
に終りにされる。
【００２４】次いで、下記構造の化合物を水性養分培地
から回収できる。
から回収できる。
【化２０】 下記構造の化合物は、
【化２１】 米国特許第4,798,799号明細書の第8欄、第52行、第53行に
記載されているように(この言及により本明細書の一部
に組み入れるものとする)下記構造の化合物に環化され
る。
記載されているように(この言及により本明細書の一部
に組み入れるものとする)下記構造の化合物に環化され
る。
【化２２】
【００２５】次の構造の化合物の生成は
【化２３】 次の構造のジオールを再閉環することにより行われる。
【化２４】
【００２６】これは次の反応による。
【化２５】
【００２７】この再閉環反応は、好ましくは、例えば水
性水酸化カリウム、あるいは水性水酸化ナトリウムのよ
うな水性水酸化アルカリ金属という塩基性条件で行われ
る。その詳細については後述の実施例３に記載する。
性水酸化カリウム、あるいは水性水酸化ナトリウムのよ
うな水性水酸化アルカリ金属という塩基性条件で行われ
る。その詳細については後述の実施例３に記載する。
【００２８】下記構造の化合物の発酵ブイヨンからの単
離および精製は、
離および精製は、
【化２６】 ろ過、遠心、溶媒抽出、蒸留、結晶化等の従来技術によ
って行うことができる。
って行うことができる。
【００２９】下記構造の化合物は、
【化２７】 米国特許第4,798,799号の第8欄、第58〜68行、 米国特許
第4,798,799号の第9欄、第1〜2行に記載されている当業
者に周知のよく使われる環化法により、下記構造の化合
物に変換することができる。
第4,798,799号の第9欄、第1〜2行に記載されている当業
者に周知のよく使われる環化法により、下記構造の化合
物に変換することができる。
【化２８】
【００３０】本発明に使用される微生物は、様々な地理
的箇所から入手された土壌サンプルから単離された。こ
の菌株は次の受託番号下にアメリカン タイプ カルチャ
ーコレクション[ATCC]に寄託した。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
的箇所から入手された土壌サンプルから単離された。こ
の菌株は次の受託番号下にアメリカン タイプ カルチャ
ーコレクション[ATCC]に寄託した。 Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
【００３１】Bensingtonia ciliataは、セントラルビュ
ーロー ヴォー シメール カルチャーズ(CBS)で調べら
れ、CBSは当該微生物に次の名前を与えた。 Lecythophere hoffmannii (van Beijma) なぜならCBSによればこれは糸状菌だからである。
ーロー ヴォー シメール カルチャーズ(CBS)で調べら
れ、CBSは当該微生物に次の名前を与えた。 Lecythophere hoffmannii (van Beijma) なぜならCBSによればこれは糸状菌だからである。
【００３２】Bensingtonia ciliata, ATCC 20919につい
ては次のように記述されている。形態学： 酵母維持ブ
イヨン(ATCC 培地 #200)上で細胞は１細胞当り１〜３芽
を持つ球形である。固形培地で細胞は、産生された射出
胞子を有する糸状のものとなる。コロニーは、サーモン
黄褐色で、平たくて、どんよりしていているが、はっき
りした境界を持っている。コーンミール寒天(ATCC 培地
#307)上で、３週間後に真の菌糸体が観察された。
ては次のように記述されている。形態学： 酵母維持ブ
イヨン(ATCC 培地 #200)上で細胞は１細胞当り１〜３芽
を持つ球形である。固形培地で細胞は、産生された射出
胞子を有する糸状のものとなる。コロニーは、サーモン
黄褐色で、平たくて、どんよりしていているが、はっき
りした境界を持っている。コーンミール寒天(ATCC 培地
#307)上で、３週間後に真の菌糸体が観察された。
【００３３】
【表１】 生理学： 炭素固定： グルコース ＋ Ｄ−リボース − ガラクトース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ Ｌ−ソルボース ＋ Ｄ−グルコサミン ＋ マルトース ＋ エタノール 弱 スクロース ＋ エリトリトール ＋ セロビオース ＋ グリセロール ＋ トレハロース ＋ アドニトール（リビトール） 弱 ラクトース − ズルシトール（ガラクチトール） 弱 メリビオース ＋ Ｄ−マンニトール 弱 ラフィノース ＋ Ｄ−ソルビトール（グルシトール） 弱 メレチトース ＋ α−メチル−Ｄ−グルコシド 弱 イヌリン − サリシン 弱 可溶性デンプン ＋ イノシトール − Ｄ−キシロース ＋ 乳酸 − Ｌ−アラビノース ＋ クエン酸 − Ｄ−アラビノース − コハク酸 弱 ビタミンなしの成長 − 窒素同化： ＮＨ4ＮＯ3 弱 高温における増殖： ３０℃ 弱／− ３７℃ −
【００３４】分類学上の説明： Bensingtonia ciliata C.T. Ingold (後記の参考文献参
照) 線菌綱（不完全菌類）[Fungi Imperfecti] 射出胞子の菌類（勢いよくはじき飛ばされる胞子）
照) 線菌綱（不完全菌類）[Fungi Imperfecti] 射出胞子の菌類（勢いよくはじき飛ばされる胞子）
【００３５】この射出胞子は無色で、液体培地中で２×
５μ、ほとんど８×５μの卵形で、尖端が尖り基部が平
らである。射出胞子は酵母のような出芽型胞子を形成し
て発芽する。そして上記出芽型胞子は反復的に胞子形成
を繰り返しながら典型的な酵母コロニーを形成する。
５μ、ほとんど８×５μの卵形で、尖端が尖り基部が平
らである。射出胞子は酵母のような出芽型胞子を形成し
て発芽する。そして上記出芽型胞子は反復的に胞子形成
を繰り返しながら典型的な酵母コロニーを形成する。
【００３６】ある種の射出胞子は、射出胞子を産生する
短い菌糸の形成や反復的な胞子の放出を伴って発芽し、
全体的に菌糸型のコロニーとなる。
短い菌糸の形成や反復的な胞子の放出を伴って発芽し、
全体的に菌糸型のコロニーとなる。
【００３７】下記培地からの評価： ATCC培地 #307 コーンミール寒天 (Difco 0386)及び半力のコーンミール寒天 #200 酵母モルト寒天 (Difco 0712) #331 アカパンカビ[Neurospora]寒天(Difco0321) #1245 YEPD #324 モルトエキス寒天 (Difco 0024) #336 ポテトデキストロース寒天 #343 V−8ジュース寒天
【００３８】参考文献1. Ingold, C.T. (1986) Bensing
tonia ciliata Gen. et. sp. nov.,Ballistoporic Fung
us. Trans. Br. Mycol.Soc. 86(2): 325−328 参考文献2. Ingold, C.T. (1988) Bensingtonia ciliat
aに関するさらなる観察Trans. Br. Mycol. Soc. 91(1):
162−166
tonia ciliata Gen. et. sp. nov.,Ballistoporic Fung
us. Trans. Br. Mycol.Soc. 86(2): 325−328 参考文献2. Ingold, C.T. (1988) Bensingtonia ciliat
aに関するさらなる観察Trans. Br. Mycol. Soc. 91(1):
162−166
【００３９】
【実施例】以下実施例は、現時点で好適な本発明の具体
例を示すために記載されるものであって、いかなる意味
においても本発明の範囲を限定するものではない。特に
断っていない限り重量はグラム、温度は摂氏、圧力はmm
/Hgの単位で示す。
例を示すために記載されるものであって、いかなる意味
においても本発明の範囲を限定するものではない。特に
断っていない限り重量はグラム、温度は摂氏、圧力はmm
/Hgの単位で示す。
【００４０】実施例１： ジオール中間体の生成 反応：
【化２９】 および
【化３０】
【００４１】ニュージャージー州、バーネガットタウン
シップ、グリーンウッドフォレストから持ち込まれた１
０個の土壌サンプルをスクリーニングしている間に、数
個のフラスコは薄層クロマトグラフィに下記構造の化合
物に対応するスポットを示した。
シップ、グリーンウッドフォレストから持ち込まれた１
０個の土壌サンプルをスクリーニングしている間に、数
個のフラスコは薄層クロマトグラフィに下記構造の化合
物に対応するスポットを示した。
【化３１】
【００４２】次の組成の培地が調製された。 ＮＨ4ＮＯ3 ０.２％ ＫＨ2ＰＯ4 ０.１％ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０.０５％ 酵母エキス ０.２％ デキストロース １.０％
【００４３】５００mlフラスコ中に、１００mlの培地
と、スクラレオール粉末：TWEEN 80(商標)が５０：５０
の混合物１gと、が入れられた。このフラスコに、Bensi
ngtonia ciliata, ATCC 20919の分離株４００マイクロ
リットルが接種された。２５℃、１５０rpmで１週間後
に、生成した生成物が、３３０mlの酢酸エチルで抽出さ
れ、抽出物は無水硫酸ナトリウム上に乾燥された。溶媒
は回転蒸発器で除去された。残渣は温めたヘキサンと酢
酸エチル中に溶解された。その抽出物は２４時間かけて
自然蒸発されたが、そのとき下記構造の化合物の純結晶
（３５０mg）が得られた。
と、スクラレオール粉末：TWEEN 80(商標)が５０：５０
の混合物１gと、が入れられた。このフラスコに、Bensi
ngtonia ciliata, ATCC 20919の分離株４００マイクロ
リットルが接種された。２５℃、１５０rpmで１週間後
に、生成した生成物が、３３０mlの酢酸エチルで抽出さ
れ、抽出物は無水硫酸ナトリウム上に乾燥された。溶媒
は回転蒸発器で除去された。残渣は温めたヘキサンと酢
酸エチル中に溶解された。その抽出物は２４時間かけて
自然蒸発されたが、そのとき下記構造の化合物の純結晶
（３５０mg）が得られた。
【化３２】
【００４４】図１は下記構造の化合物の核磁気共鳴スペ
クトルである。
クトルである。
【化３３】
【００４５】実施例２： Bensingtonia ciliata, ATCC
20919を用いたスクラレオライドからのジオール中間体
の生成 実施例１と同一方法による実験が、次の条件で行われ
た。 微生物：Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
20919を用いたスクラレオライドからのジオール中間体
の生成 実施例１と同一方法による実験が、次の条件で行われ
た。 微生物：Bensingtonia ciliata, ATCC 20919
【００４６】培地： ＮＨ4ＮＯ3 ４０.０ｇ 抽出酵母 ４０.０ｇ ＫＨ2ＰＯ4 ２０.０ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０.０ｇ スクラレオール １６０.０ｇ TWEEN 80 ８０.０ｇ ｄ−Ｈ2Ｏ １９.０l
【００４７】発酵器パラメータ： 温度： ２５℃ 通気： ２l／分 撹拌： ３００rpm ｐＨ： ２５％のＮａＯＨで６.０に制御 期間： １５日間
【００４８】上記培地を有する発酵器が１２１℃で３０
分間滅菌され、２５℃に冷やされた。この発酵器に４８
時間増殖されたBensingtonia ciliata, ATCC 20919の
培養物１lが接種された。１５日間のインキュベーショ
ン後に基質は生成物になっていた。発酵器の内容物は４
００メッシュのふるいにかけられてろ過された。このよ
うにして得られた粗固形生成物は風乾された。１０１.
７gの生成物が得られた。
分間滅菌され、２５℃に冷やされた。この発酵器に４８
時間増殖されたBensingtonia ciliata, ATCC 20919の
培養物１lが接種された。１５日間のインキュベーショ
ン後に基質は生成物になっていた。発酵器の内容物は４
００メッシュのふるいにかけられてろ過された。このよ
うにして得られた粗固形生成物は風乾された。１０１.
７gの生成物が得られた。
【００４９】実施例３： デカヒドロ−３ａ,６,６,９
ａ−テトラメチルナフト[２−１−ｂ]フランの調製
ａ−テトラメチルナフト[２−１−ｂ]フランの調製
【化３４】 上記構造を有する化合物１.５gが、３０ml水中の水酸化
カリウム１２.０gの溶液に混合された。この混合物がヒ
ーター、撹拌装置、および還流冷却器で装備されたフラ
スコ中に入れられ３時間のあいだ８０℃で還流された。
３時間後に、生成物が蒸気温度１６２〜１６４℃、気圧
１５mm／Hg.で分別蒸留され、下記構造のかなり純粋な
化合物を得た。
カリウム１２.０gの溶液に混合された。この混合物がヒ
ーター、撹拌装置、および還流冷却器で装備されたフラ
スコ中に入れられ３時間のあいだ８０℃で還流された。
３時間後に、生成物が蒸気温度１６２〜１６４℃、気圧
１５mm／Hg.で分別蒸留され、下記構造のかなり純粋な
化合物を得た。
【化３５】
【００５０】
【図１】図１は実施例１の反応生成物の核磁気共鳴[NM
R]スペクトルである。
R]スペクトルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 ジェームス エイ モーリス アメリカ合衆国、ニュージャージー州 07719、ウォール、ウェスト コート 1406 (72)発明者 アーサー イー ダウニィ アメリカ合衆国、ニュージャージー州 07036、リンデン、モーリスタウン ロ ード 135 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 41/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】 下記構造の化合物 【化１】 及び 【化２】 の１または２を含む水性養分培地中で通気条件下に、上
記化合物の少なくとも１を変換して下記のジオール 【化３】 を回収可能な量で生産できるBensingtonia ciliata, AT
CC 20919の生物学的に純粋な培養物。 - 【請求項２】 下記構造の化合物 【化４】 及び 【化５】 の１または２を含む水性養分培地中で通気条件下に、Be
nsingtonia ciliata, ATCC 20919を培養し、上記化合物
の少なくとも１を変換して下記のジオール 【化６】 を回収可能な量で生産することを特徴とする前記ジオー
ルの製造方法。 - 【請求項３】 培養を、追加の炭素源を含む水性養分
培地中で (i) ｐＨ：約２.５〜約９.０ (ii) 温度：約１２℃〜約３３℃ (iii) 化合物濃度：約０.１g/l〜約１３０g/l の条件の下で行う請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 追加の炭素源がデキストロースである
請求項３に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23334397A JP3002654B2 (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23334397A JP3002654B2 (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20308194A Division JP2802588B2 (ja) | 1994-08-05 | 1994-08-05 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、並びにそれを用いるジオール製造方法および環状エーテル製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1084949A JPH1084949A (ja) | 1998-04-07 |
| JP3002654B2 true JP3002654B2 (ja) | 2000-01-24 |
Family
ID=16953668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23334397A Expired - Lifetime JP3002654B2 (ja) | 1997-08-14 | 1997-08-14 | 微生物の生物学的に純粋な培養物、およびそれを用いるジオール製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3002654B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8084237B2 (en) | 2006-02-24 | 2011-12-27 | Kao Corporation | Microorganism and method for producing dodecahydro-3a,6,6,9a-tetramethylnaphtho[2,1-b]furan intermediate using the novel microorganism |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5113379B2 (ja) * | 2006-02-24 | 2013-01-09 | 花王株式会社 | 新規微生物、当該新規微生物を用いたドデカヒドロ−３ａ，６，６，９ａ−テトラメチルナフト［２，１−ｂ］フラン中間体の製造方法 |
-
1997
- 1997-08-14 JP JP23334397A patent/JP3002654B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8084237B2 (en) | 2006-02-24 | 2011-12-27 | Kao Corporation | Microorganism and method for producing dodecahydro-3a,6,6,9a-tetramethylnaphtho[2,1-b]furan intermediate using the novel microorganism |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH1084949A (ja) | 1998-04-07 |
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