JPH067176A - アスペルギルス・テレウスの変異株によるトリオール酸（ｉ）の新規発酵 - Google Patents
アスペルギルス・テレウスの変異株によるトリオール酸（ｉ）の新規発酵Info
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- JPH067176A JPH067176A JP4144563A JP14456392A JPH067176A JP H067176 A JPH067176 A JP H067176A JP 4144563 A JP4144563 A JP 4144563A JP 14456392 A JP14456392 A JP 14456392A JP H067176 A JPH067176 A JP H067176A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ７−〔１，２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘ
キサヒドロ−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）
−ヒドロキシ−１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５
（Ｒ）−ジヒドロキシヘプタン酸（トリオールＩ）を少
くとも５．２ｇ／リットルの発酵産生し、トリオール酸
関連副産物は０．８５ｇ／リットル以下及び特にロバス
タチン０．１０mg／リットル未満しか産生しないアスペ
ルギルス・テレウスの新規株が発見された。 【効果】 主要発酵産物トリオール酸は直接的方法でそ
のラクトン形に変換されるが、それはＨＭＧ−ＣｏＡレ
ダクターゼの阻害剤であるため抗高コレステロール血症
剤として有用であり、しかもそれは他のＨＭＧ−ＣｏＡ
レダクターゼ阻害剤の製造用中間体として役立つ。夾雑
副生成物が少いため精製が容易である。
キサヒドロ−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）
−ヒドロキシ−１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５
（Ｒ）−ジヒドロキシヘプタン酸（トリオールＩ）を少
くとも５．２ｇ／リットルの発酵産生し、トリオール酸
関連副産物は０．８５ｇ／リットル以下及び特にロバス
タチン０．１０mg／リットル未満しか産生しないアスペ
ルギルス・テレウスの新規株が発見された。 【効果】 主要発酵産物トリオール酸は直接的方法でそ
のラクトン形に変換されるが、それはＨＭＧ−ＣｏＡレ
ダクターゼの阻害剤であるため抗高コレステロール血症
剤として有用であり、しかもそれは他のＨＭＧ−ＣｏＡ
レダクターゼ阻害剤の製造用中間体として役立つ。夾雑
副生成物が少いため精製が容易である。
Description
【０００１】本発明はアスペルギルス・テレウス(Asper
gillus terreus）の変異株を用いた少くとも５．２ｇ／
リットルの７−〔１，２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘ
キサヒドロ−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）
−ヒドロキシ−１（Ｓ）ナフチル〕−３（Ｒ），５
（Ｒ）−ジヒドロキシヘプタン酸（トリオール酸、Ｉ）
を生産し、かつ以下で定義されるようなトリオール酸関
連副産物の生成が０．８５ｇ／リットル以下及びロバス
タチンの生成が０．１０mg／リットル未満である新規発
酵プロセスで有用なアスペルギルス・テレウス株に関す
る。
gillus terreus）の変異株を用いた少くとも５．２ｇ／
リットルの７−〔１，２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘ
キサヒドロ−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）
−ヒドロキシ−１（Ｓ）ナフチル〕−３（Ｒ），５
（Ｒ）−ジヒドロキシヘプタン酸（トリオール酸、Ｉ）
を生産し、かつ以下で定義されるようなトリオール酸関
連副産物の生成が０．８５ｇ／リットル以下及びロバス
タチンの生成が０．１０mg／リットル未満である新規発
酵プロセスで有用なアスペルギルス・テレウス株に関す
る。
【０００２】トリオール酸（Ｉ）はコレステロール生合
成に関与する酵素３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリ
ル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−CoA)レダクターゼの阻害剤であ
る。その酵素の阻害剤として、トリオール酸は抗高コレ
ステロール血症剤として有用である。更にそれは他の抗
高コレステロール血症剤、特にポリヒドロナフチル環の
８位に様々な側鎖を有する化合物の製造用中間体として
も有用である。例えば、その部位に２，２−ジメチルブ
チリルオキシ側鎖を有するシンバスタチンは、米国特許
第４，４４４，７８４号明細書に記載された操作に従い
出発物質としてトリオール酸のラクトン体を用いて製造
できる。本発明は詳しくは、少なくとも５．２ｇ／リッ
トルのトリオール酸（Ｉ）を０．８５ｇ／リットル以下
のトリオール酸関連副産物及び０．１０mg／リットル未
満のロバスタチンと共に産生することができるアスペル
ギルス・テレウスの株ＭＦ−５５４４、ＡＴＣＣ７４０
６４及びその変異株に関する。本発明はここで開示され
たアスペルギルス・テレウス株を培養して主要発酵産物
としてトリオール酸を産生させる発酵プロセスにも関す
る。
成に関与する酵素３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリ
ル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−CoA)レダクターゼの阻害剤であ
る。その酵素の阻害剤として、トリオール酸は抗高コレ
ステロール血症剤として有用である。更にそれは他の抗
高コレステロール血症剤、特にポリヒドロナフチル環の
８位に様々な側鎖を有する化合物の製造用中間体として
も有用である。例えば、その部位に２，２−ジメチルブ
チリルオキシ側鎖を有するシンバスタチンは、米国特許
第４，４４４，７８４号明細書に記載された操作に従い
出発物質としてトリオール酸のラクトン体を用いて製造
できる。本発明は詳しくは、少なくとも５．２ｇ／リッ
トルのトリオール酸（Ｉ）を０．８５ｇ／リットル以下
のトリオール酸関連副産物及び０．１０mg／リットル未
満のロバスタチンと共に産生することができるアスペル
ギルス・テレウスの株ＭＦ−５５４４、ＡＴＣＣ７４０
６４及びその変異株に関する。本発明はここで開示され
たアスペルギルス・テレウス株を培養して主要発酵産物
としてトリオール酸を産生させる発酵プロセスにも関す
る。
【０００３】高コレステロール血症は西洋諸国における
死亡及び廃疾の筆頭原因であるアテローム性動脈硬化症
及び冠状心疾患に関する主要リスクファクターの１つと
して知られる、胆汁酸金属イオン封鎖剤は抗高コレステ
ロール血症剤として中程度に有用と思われるが、それら
は多量に、即ち一度に数グラム用いられねばならず、し
かもそれらは美味とはとても言えない。現在市販される
メバコール（ＭＥＶＡＣＯＲ・商標）（ロバスタチン）
はＨＭＧ−CoA レダクターゼ酵素を阻害してコレステロ
ール生合成を制限することにより機能する非常に活性の
強い抗高コレステロール血症剤のグループの１つであ
る。天然発酵産物メバスタチン及びロバスタチンに加え
て、それらの様々な半合成及び全合成アナログが存在す
る。例えば、８−アシル部分が２，２−ジメチルブチリ
ルオキシであるシンバスタチンはロバスタチンよりも更
に一層強力なＨＭＧ−CoA レダクターゼ阻害剤である。
シンバスタチンは一部の市場でゾコール（ＺＯＣＯＲ・
商標）として現在市販されている。ここで開示されたプ
ロセスで産生されるトリオール酸（Ｉ）は、その対応ジ
オールラクトン（II）へラクトン化されて、ポリヒドロ
ナフチル部分を有し、ＨＭＧ−CoA レダクターゼ阻害剤
として機能するシンバスタチンや他の８−エステルアナ
ログ及び誘導体の形成用の出発物質として役立つ。
死亡及び廃疾の筆頭原因であるアテローム性動脈硬化症
及び冠状心疾患に関する主要リスクファクターの１つと
して知られる、胆汁酸金属イオン封鎖剤は抗高コレステ
ロール血症剤として中程度に有用と思われるが、それら
は多量に、即ち一度に数グラム用いられねばならず、し
かもそれらは美味とはとても言えない。現在市販される
メバコール（ＭＥＶＡＣＯＲ・商標）（ロバスタチン）
はＨＭＧ−CoA レダクターゼ酵素を阻害してコレステロ
ール生合成を制限することにより機能する非常に活性の
強い抗高コレステロール血症剤のグループの１つであ
る。天然発酵産物メバスタチン及びロバスタチンに加え
て、それらの様々な半合成及び全合成アナログが存在す
る。例えば、８−アシル部分が２，２−ジメチルブチリ
ルオキシであるシンバスタチンはロバスタチンよりも更
に一層強力なＨＭＧ−CoA レダクターゼ阻害剤である。
シンバスタチンは一部の市場でゾコール（ＺＯＣＯＲ・
商標）として現在市販されている。ここで開示されたプ
ロセスで産生されるトリオール酸（Ｉ）は、その対応ジ
オールラクトン（II）へラクトン化されて、ポリヒドロ
ナフチル部分を有し、ＨＭＧ−CoA レダクターゼ阻害剤
として機能するシンバスタチンや他の８−エステルアナ
ログ及び誘導体の形成用の出発物質として役立つ。
【０００４】前記ジオールラクトン（II）はエンドーら
の公開日本特許出願第８６−１３７９８号明細書（１９
８６年）に記載されたようにモナスカス・ルバー（Mona
scusruber）の発酵により生産されている。遠藤ら、ジ
ャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J.Antibiotic
s)，第３９巻，第１６７０頁，１９８９年による更に最
近の文献では、メビノリン（ロバスタチン）及びトリオ
ール酸（Ｉ）を産生するモナスクス・ルバーの様々な株
が開示されている。更に、トリオール酸（Ｉ）及びその
対応ジオールラクトン（II）は８−（α−メチルブチリ
ルオキシ）基の化学的加水分解によりロバスタチンから
産生されている。しかしながら、アスペルギルス・テレ
ウスの培養物を用いてトリオール酸を高収率で形成し、
かつトリオール酸関連副産物の産生が最少であるような
トリオール酸（Ｉ）の産生に関しては当業界で教示又は
示唆が全くない。実際に、いずれかの微生物により最少
のトリオール酸関連副産物産生でかつトリオール酸
（Ｉ）が高収率で形成されうるという教示又は示唆は従
来技術に存在していない。注目されるように、分離困難
なこれらのトリオール酸関連副産物が非常に少量しか形
成されないことは本発明の重要な利点である。
の公開日本特許出願第８６−１３７９８号明細書（１９
８６年）に記載されたようにモナスカス・ルバー（Mona
scusruber）の発酵により生産されている。遠藤ら、ジ
ャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J.Antibiotic
s)，第３９巻，第１６７０頁，１９８９年による更に最
近の文献では、メビノリン（ロバスタチン）及びトリオ
ール酸（Ｉ）を産生するモナスクス・ルバーの様々な株
が開示されている。更に、トリオール酸（Ｉ）及びその
対応ジオールラクトン（II）は８−（α−メチルブチリ
ルオキシ）基の化学的加水分解によりロバスタチンから
産生されている。しかしながら、アスペルギルス・テレ
ウスの培養物を用いてトリオール酸を高収率で形成し、
かつトリオール酸関連副産物の産生が最少であるような
トリオール酸（Ｉ）の産生に関しては当業界で教示又は
示唆が全くない。実際に、いずれかの微生物により最少
のトリオール酸関連副産物産生でかつトリオール酸
（Ｉ）が高収率で形成されうるという教示又は示唆は従
来技術に存在していない。注目されるように、分離困難
なこれらのトリオール酸関連副産物が非常に少量しか形
成されないことは本発明の重要な利点である。
【０００５】以下本発明を詳細に説明する。本発明はア
スペルギルス・テレウスの培養物を用いた７−〔１，
２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘキサヒドロ−２
（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）−ヒドロキシ−
１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５（Ｒ）−ジヒドロ
キシヘプタン酸（トリオール酸、Ｉ）の新規発酵生産に
関する。トリオール酸（Ｉ）は更にラクトン化条件下で
その対応ジオールラクトン（II）に変換してもよい。
スペルギルス・テレウスの培養物を用いた７−〔１，
２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘキサヒドロ−２
（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）−ヒドロキシ−
１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５（Ｒ）−ジヒドロ
キシヘプタン酸（トリオール酸、Ｉ）の新規発酵生産に
関する。トリオール酸（Ｉ）は更にラクトン化条件下で
その対応ジオールラクトン（II）に変換してもよい。
【化５】 本発明は有意な量のトリオール酸（Ｉ）を産生すること
がわかったアスペルギルス・テレウスの新規株に関する
が、これはアスペルギルス・テレウスが今まで８位エス
テル側鎖を有する化合物のみを産生するとして知られて
いた事実からみて意外な発見である。
がわかったアスペルギルス・テレウスの新規株に関する
が、これはアスペルギルス・テレウスが今まで８位エス
テル側鎖を有する化合物のみを産生するとして知られて
いた事実からみて意外な発見である。
【０００６】本発明に含まれるアスペルギルス・テレウ
スの新規株は、それらが少なくとも５．２ｇ／リットル
のトリオール酸（Ｉ）を生産ししかも１ｇ／リットル以
下のトリオール酸関連副産物及び特に０．１０mg／リッ
トル未満（＜０．００２％）のロバスタチンしか産生し
ないという事実で特徴付けられる。“トリオール酸関連
副産物”という用語は、共役デセン環系のためにλmax
＝２３８nmのＵＶスペクトルを示すポリヒドロナフチル
構造を有する、（Ｉ）及び（II）以外のあらゆるＨＭＧ
−CoA レダクターゼ阻害剤を意味するとしてここでは定
義される。本発明に含まれるアスペルギルス・テレウス
の新規株が高収率でトリオール酸を産生するが少量のト
リオール酸関連副産物しか産生しない、特にロバスタチ
ンを産生しない（＜０．００２％）という事実は、この
分野における従来技術からみて予想外かつ意外である。
スの新規株は、それらが少なくとも５．２ｇ／リットル
のトリオール酸（Ｉ）を生産ししかも１ｇ／リットル以
下のトリオール酸関連副産物及び特に０．１０mg／リッ
トル未満（＜０．００２％）のロバスタチンしか産生し
ないという事実で特徴付けられる。“トリオール酸関連
副産物”という用語は、共役デセン環系のためにλmax
＝２３８nmのＵＶスペクトルを示すポリヒドロナフチル
構造を有する、（Ｉ）及び（II）以外のあらゆるＨＭＧ
−CoA レダクターゼ阻害剤を意味するとしてここでは定
義される。本発明に含まれるアスペルギルス・テレウス
の新規株が高収率でトリオール酸を産生するが少量のト
リオール酸関連副産物しか産生しない、特にロバスタチ
ンを産生しない（＜０．００２％）という事実は、この
分野における従来技術からみて予想外かつ意外である。
【０００７】トリオール酸関連副産物はトリオール酸自
体と構造上似ており、このため関係産物であるトリオー
ル酸から分離することが困難である。これらのトリオー
ル酸関連副産物が非常に少量しか形成されないことは本
発明の重要な利点である。本発明に含まれるアスペルギ
ルス・テレウスの新規株は、公けに入手しうるアスペル
ギルス・テレウスのロバスタチン産生株を変異誘発して
得ることができる。例えば、米国特許第４，２３１，９
３８号明細書は受理 No.ＡＴＣＣ２０５４１としてアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American
Type Culture Collection）に寄託されたロバスタチン
産生株ＭＦ−４８３３について記載している。このよう
な株は変異誘発、例えばＵＶ処理、ニトロソグアニジン
及びソラレン架橋変異誘発に付してよい。変異誘発の程
度は栄養要求性、即ち親株による正常代謝及び再生産に
必要な最小要素を超えた特定の生育因子を変異株が要求
すること、により決定される。別のモニターリングシス
テムでは挿入色素アクリフラビンを用いる。この色素は
１０5 胞子／プレートでまいた場合に親ロバスタチン産
生株を全く増殖させないが、変異誘発後には約３〜５コ
ロニー／プレートで増殖が起る。変異株は再単離後、プ
ールされて、更に変異誘発に付され、これら操作の反復
により、本発明が関与する株の定義内に属するアスペル
ギルス・テレウスの変異株が得られる。
体と構造上似ており、このため関係産物であるトリオー
ル酸から分離することが困難である。これらのトリオー
ル酸関連副産物が非常に少量しか形成されないことは本
発明の重要な利点である。本発明に含まれるアスペルギ
ルス・テレウスの新規株は、公けに入手しうるアスペル
ギルス・テレウスのロバスタチン産生株を変異誘発して
得ることができる。例えば、米国特許第４，２３１，９
３８号明細書は受理 No.ＡＴＣＣ２０５４１としてアメ
リカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American
Type Culture Collection）に寄託されたロバスタチン
産生株ＭＦ−４８３３について記載している。このよう
な株は変異誘発、例えばＵＶ処理、ニトロソグアニジン
及びソラレン架橋変異誘発に付してよい。変異誘発の程
度は栄養要求性、即ち親株による正常代謝及び再生産に
必要な最小要素を超えた特定の生育因子を変異株が要求
すること、により決定される。別のモニターリングシス
テムでは挿入色素アクリフラビンを用いる。この色素は
１０5 胞子／プレートでまいた場合に親ロバスタチン産
生株を全く増殖させないが、変異誘発後には約３〜５コ
ロニー／プレートで増殖が起る。変異株は再単離後、プ
ールされて、更に変異誘発に付され、これら操作の反復
により、本発明が関与する株の定義内に属するアスペル
ギルス・テレウスの変異株が得られる。
【０００８】通常は親株において過剰の有害変異の蓄積
を避けるために穏やかな変異誘発をめざす。しかしなが
ら、トリオール産生ＭＦ−５５４４変異株は強力な変異
誘発物質ニトロソグアニジンによる比較的過酷な変異誘
発後に単離された。前記変異誘発操作と実施例１の詳細
な記載を用いて、高力価のトリオール酸（Ｉ）と検出し
えない量（０．１０mg／リットル未満）のロバスタチン
及び０．８５ｇ／リットル未満のトリオール酸関連化合
物を生じるアスペルギルス・テレウスの株をつくること
ができる。
を避けるために穏やかな変異誘発をめざす。しかしなが
ら、トリオール産生ＭＦ−５５４４変異株は強力な変異
誘発物質ニトロソグアニジンによる比較的過酷な変異誘
発後に単離された。前記変異誘発操作と実施例１の詳細
な記載を用いて、高力価のトリオール酸（Ｉ）と検出し
えない量（０．１０mg／リットル未満）のロバスタチン
及び０．８５ｇ／リットル未満のトリオール酸関連化合
物を生じるアスペルギルス・テレウスの株をつくること
ができる。
【０００９】アスペルギルス・テレウスＭＦ−５５４４
は１４日間で５．９５ｇ／リットルに達するトリオール
酸を産生する。少量（０．８５ｇ／リットル未満）のト
リオール関連化合物も産生されるが、但しロバスタチン
の産生はない（０．１０mg／リットル未満）。前記変異
誘発操作及び実施例は充分に実施可能なトリオール酸
（Ｉ）の形成経路を提供する。特定株ＭＦ−５５４４は
ブダペスト条約に従いＡＴＣＣ７４０６４としてアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託され
た。この寄託は本発明の実施上最良の態様を与えるため
に行われた。アスペルギルス・テレウス株ＭＦ−５５４
４は下記の形態学的特徴を示す：
は１４日間で５．９５ｇ／リットルに達するトリオール
酸を産生する。少量（０．８５ｇ／リットル未満）のト
リオール関連化合物も産生されるが、但しロバスタチン
の産生はない（０．１０mg／リットル未満）。前記変異
誘発操作及び実施例は充分に実施可能なトリオール酸
（Ｉ）の形成経路を提供する。特定株ＭＦ−５５４４は
ブダペスト条約に従いＡＴＣＣ７４０６４としてアメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託され
た。この寄託は本発明の実施上最良の態様を与えるため
に行われた。アスペルギルス・テレウス株ＭＦ−５５４
４は下記の形態学的特徴を示す：
【００１０】コロニーは２０℃で１２時間−１２時間の
明／暗下、酵母−麦芽エキス寒天〔ディフコ(Difco) 〕
上で７日間で径１０mmに達する；３７℃では７日間で同
培地上で径３４mmに達する；２０℃、オートミール寒天
（ディフコ）上では径１２mmに達する；３７℃、オート
ミール寒天（ディフコ）上では径４５mmに達する。コロ
ニーは２０℃の増殖と比較すると３７℃では明らかに放
射状にひだ即ち褶曲が形成される。２０℃で酵母−麦芽
エキス寒天上、コロニーは深さ０．５mm以内に達し、わ
ずかに台状でビロード状〜わずかに綿毛状で鈍い光沢が
あり、端部沈降し、全縁で、端部で透明〜淡黄色状バフ
色又は淡いピンクがかったバフ色、明バフ色（Light Bu
ff）、淡オーカーバフ色（Pale Ochraceous-Buff）、淡
ピンク状シナモン色（Pale Pinkish Cinnamon)〔リジウ
ェイ，Ｒ.(Ridgway,R.),１９１２年，カラースタンダー
ド及び名称（Color Standards and Nomenclature),ワシ
ントン，Ｄ．Ｃ．による大文字化色名〕、すぐにピンク
がかったバフ色〜ピンクがかった褐色、ピンク状バフ色
（Pinkish Baff) 、明ピンクがかったシナモン色（Ligh
t Pinkish Cinnamon）、バフピンク色（Buff Pink)、シ
ナモンバフ色（Cinnamon-Buff)になり、最後に端部で濁
ピンク状タン皮色、ピンクがかったシナモン色、シナモ
ン色（Cinnamon) 、クレー色（Clay Color) 、裏面は緑
が濁黄灰色〜クリーム黄色、クリーム色（Cream Colo
r)、明バフ色（Light Buff) 、暖バフ色（Warm Buff)、
但しすぐに黄色〜オーカー色、コロニアルバフ色（Colo
nial Buff)、深コロニアルバフ色（Deep Colonial Buf
f) 、セーム革色（Chamois)、黄オーカー色（Yellow Oc
hre）であり、黄色拡散性色素がコロニーの端部から寒
天中に数mm滲出している。
明／暗下、酵母−麦芽エキス寒天〔ディフコ(Difco) 〕
上で７日間で径１０mmに達する；３７℃では７日間で同
培地上で径３４mmに達する；２０℃、オートミール寒天
（ディフコ）上では径１２mmに達する；３７℃、オート
ミール寒天（ディフコ）上では径４５mmに達する。コロ
ニーは２０℃の増殖と比較すると３７℃では明らかに放
射状にひだ即ち褶曲が形成される。２０℃で酵母−麦芽
エキス寒天上、コロニーは深さ０．５mm以内に達し、わ
ずかに台状でビロード状〜わずかに綿毛状で鈍い光沢が
あり、端部沈降し、全縁で、端部で透明〜淡黄色状バフ
色又は淡いピンクがかったバフ色、明バフ色（Light Bu
ff）、淡オーカーバフ色（Pale Ochraceous-Buff）、淡
ピンク状シナモン色（Pale Pinkish Cinnamon)〔リジウ
ェイ，Ｒ.(Ridgway,R.),１９１２年，カラースタンダー
ド及び名称（Color Standards and Nomenclature),ワシ
ントン，Ｄ．Ｃ．による大文字化色名〕、すぐにピンク
がかったバフ色〜ピンクがかった褐色、ピンク状バフ色
（Pinkish Baff) 、明ピンクがかったシナモン色（Ligh
t Pinkish Cinnamon）、バフピンク色（Buff Pink)、シ
ナモンバフ色（Cinnamon-Buff)になり、最後に端部で濁
ピンク状タン皮色、ピンクがかったシナモン色、シナモ
ン色（Cinnamon) 、クレー色（Clay Color) 、裏面は緑
が濁黄灰色〜クリーム黄色、クリーム色（Cream Colo
r)、明バフ色（Light Buff) 、暖バフ色（Warm Buff)、
但しすぐに黄色〜オーカー色、コロニアルバフ色（Colo
nial Buff)、深コロニアルバフ色（Deep Colonial Buf
f) 、セーム革色（Chamois)、黄オーカー色（Yellow Oc
hre）であり、黄色拡散性色素がコロニーの端部から寒
天中に数mm滲出している。
【００１１】分生子柄は柄足細胞から生じ、高さ１２０
〜１９０μｍ、幅４．５〜６．５μｍ、直線状又は屈曲
状で、時々不規則的にくびれ、頂嚢のすぐ下でわずかに
くびれていることが多く、厚壁で、壁は約０．５μｍ
厚、滑らかで無色である。分生子頭は分生子柱の頂部で
径５０〜１００μｍ、二段梗子で分生子産生細胞群がメ
トレ（metulae)から生じ、円柱状で、分生子鎖は経時的
にやや裂け出し、最初は白色だが、但しすぐに淡ピンク
色になり、成熟時には均一にピンクがかったバフ色であ
る。分生子産生細胞は小瓶状で、１〜５個、通常３〜４
個５〜１０個（１．５〜３μｍ）の群でメトレから生
じ、円柱状で、末端はつぼまるか、又はややひらいたカ
ラレット状である。メツラは広い円柱状〜やや棍棒状
で、周辺のメトレは上方に曲がり、６〜１０×２．５〜
４．５μｍである。頂嚢は径１０〜２６μｍで、亜球状
〜半球状であり、上部４０〜６０％がメトレでおおわれ
ている。分生子は径１．５〜４μｍ、球状〜やや球状、
滑らか、KOH 中無色で、無色接合部で鎖状に付着してい
る。菌糸は隔壁を有し、滑らかで、高度に分岐し、径１
０μｍ以内で、厚い方の菌糸は屈折率の高い内容物を含
み、古くなった内部菌糸は側部及び末端厚膜胞子（“粉
状胞子”）を産生する。厚膜胞子は出芽で生じ、豊富
で、径６〜１０μｍ、球状〜やや球状、無色で屈折率の
高い内容物を含む。ヒュール（Hulle)細胞、菌核及び閉
子嚢果は存在しない。
〜１９０μｍ、幅４．５〜６．５μｍ、直線状又は屈曲
状で、時々不規則的にくびれ、頂嚢のすぐ下でわずかに
くびれていることが多く、厚壁で、壁は約０．５μｍ
厚、滑らかで無色である。分生子頭は分生子柱の頂部で
径５０〜１００μｍ、二段梗子で分生子産生細胞群がメ
トレ（metulae)から生じ、円柱状で、分生子鎖は経時的
にやや裂け出し、最初は白色だが、但しすぐに淡ピンク
色になり、成熟時には均一にピンクがかったバフ色であ
る。分生子産生細胞は小瓶状で、１〜５個、通常３〜４
個５〜１０個（１．５〜３μｍ）の群でメトレから生
じ、円柱状で、末端はつぼまるか、又はややひらいたカ
ラレット状である。メツラは広い円柱状〜やや棍棒状
で、周辺のメトレは上方に曲がり、６〜１０×２．５〜
４．５μｍである。頂嚢は径１０〜２６μｍで、亜球状
〜半球状であり、上部４０〜６０％がメトレでおおわれ
ている。分生子は径１．５〜４μｍ、球状〜やや球状、
滑らか、KOH 中無色で、無色接合部で鎖状に付着してい
る。菌糸は隔壁を有し、滑らかで、高度に分岐し、径１
０μｍ以内で、厚い方の菌糸は屈折率の高い内容物を含
み、古くなった内部菌糸は側部及び末端厚膜胞子（“粉
状胞子”）を産生する。厚膜胞子は出芽で生じ、豊富
で、径６〜１０μｍ、球状〜やや球状、無色で屈折率の
高い内容物を含む。ヒュール（Hulle)細胞、菌核及び閉
子嚢果は存在しない。
【００１２】培地 本発明に含まれるアスペルギルス・テレウスの変異株の
発酵は他の発酵産物の産生に用いられるような水性培地
で行われる。このような培地は微生物により同化しうる
炭素源、窒素源及び無機塩を含有している。一般に、
糖、例えばラクトース、グルコース、フルクトース、マ
ルトース、スクロース、キシロース、マンニトール等の
ような炭水化物及び穀物、例えばオート麦、ライ麦、コ
ーンスターチ、コーンミール等のようなデンプンが栄養
培地中で資化性炭素源として単独で又は組合せていずれ
かで用いることができる。培地に用いられる炭水化物源
の正確な量は培地の他の成分にもよるが、一般に炭水化
物の量は通常培地の約１８〜３５重量％である。これら
の炭素源は個別的に用いても又はこのような数種の炭素
源が培地で組合されてもよい。一般に多くのタンパク質
物質が発酵プロセスで窒素源として用いられる。適切な
窒素源としては、例えば酵母加水分解産物、プライマリ
イースト、大豆ミール、綿実粉、カゼインの加水分解産
物、コーンスチープリカー、ディスティラーズソリュブ
ル又はトマトペーストがある。窒素源は単独で又は組合
せて、水性培地の約５〜６０重量％範囲の量で用いられ
る。
発酵は他の発酵産物の産生に用いられるような水性培地
で行われる。このような培地は微生物により同化しうる
炭素源、窒素源及び無機塩を含有している。一般に、
糖、例えばラクトース、グルコース、フルクトース、マ
ルトース、スクロース、キシロース、マンニトール等の
ような炭水化物及び穀物、例えばオート麦、ライ麦、コ
ーンスターチ、コーンミール等のようなデンプンが栄養
培地中で資化性炭素源として単独で又は組合せていずれ
かで用いることができる。培地に用いられる炭水化物源
の正確な量は培地の他の成分にもよるが、一般に炭水化
物の量は通常培地の約１８〜３５重量％である。これら
の炭素源は個別的に用いても又はこのような数種の炭素
源が培地で組合されてもよい。一般に多くのタンパク質
物質が発酵プロセスで窒素源として用いられる。適切な
窒素源としては、例えば酵母加水分解産物、プライマリ
イースト、大豆ミール、綿実粉、カゼインの加水分解産
物、コーンスチープリカー、ディスティラーズソリュブ
ル又はトマトペーストがある。窒素源は単独で又は組合
せて、水性培地の約５〜６０重量％範囲の量で用いられ
る。
【００１３】培地に配合できる栄養無機塩としてはナト
リウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、リン
酸、硫酸、塩化物、炭酸等のイオンを生じることができ
る常用塩がある。コバルト、マンガン、鉄及びマグネシ
ウムのような微量金属も含有される。実施例で記載され
た培地は用いてよい様々な培地の単なる例示であって、
限定するためのものではない。特に、トリオール酸産生
培地で用いられる炭素源としてはデキストロース、デキ
ストリン、オート粉、オートミール、糖蜜、クエン酸
塩、大豆油、グリセロール、麦芽エキス、タラ肝油、デ
ンプン、エタノール、イチジク、アスコルビン酸ナトリ
ウム及びラード油がある。窒素源としてはペプトン化ミ
ルク、自己消化酵母、酵母ＲＮＡ、トマトペースト、カ
ゼイン、プライマリイースト、ピーナツミール、ディス
ティラーズソリュブル、コーンスチープリカー、大豆ミ
ール、コーンミール、NZアミン、ビーフエキス、アスパ
ラギン、綿実ミール及び硫酸アンモニウムがある。主要
イオン成分はCaCO3 、KH2PO4、MgSO4 ・７H2O 及びNaCl
であり、少量の CoCl2・６H2O 及び微量のMn、Mo、Ｂ及
びCuも存在してよい。諸成分を１リットルフラスコに入
れ、容量を蒸留水で１リットルに調整する。pHは培地を
継続的に攪拌しながら４０％NaOHで７．０に調整し、pH
は１５分間かけて安定化する。培地はバッフルなしの２
５０mlフラスコ内に３０mlずつ分注し、そのまま１２１
℃で２０分間オートクレーブ処理する。次いでこれらの
フラスコを実施例１に記載する種接種原で接種する。
リウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、リン
酸、硫酸、塩化物、炭酸等のイオンを生じることができ
る常用塩がある。コバルト、マンガン、鉄及びマグネシ
ウムのような微量金属も含有される。実施例で記載され
た培地は用いてよい様々な培地の単なる例示であって、
限定するためのものではない。特に、トリオール酸産生
培地で用いられる炭素源としてはデキストロース、デキ
ストリン、オート粉、オートミール、糖蜜、クエン酸
塩、大豆油、グリセロール、麦芽エキス、タラ肝油、デ
ンプン、エタノール、イチジク、アスコルビン酸ナトリ
ウム及びラード油がある。窒素源としてはペプトン化ミ
ルク、自己消化酵母、酵母ＲＮＡ、トマトペースト、カ
ゼイン、プライマリイースト、ピーナツミール、ディス
ティラーズソリュブル、コーンスチープリカー、大豆ミ
ール、コーンミール、NZアミン、ビーフエキス、アスパ
ラギン、綿実ミール及び硫酸アンモニウムがある。主要
イオン成分はCaCO3 、KH2PO4、MgSO4 ・７H2O 及びNaCl
であり、少量の CoCl2・６H2O 及び微量のMn、Mo、Ｂ及
びCuも存在してよい。諸成分を１リットルフラスコに入
れ、容量を蒸留水で１リットルに調整する。pHは培地を
継続的に攪拌しながら４０％NaOHで７．０に調整し、pH
は１５分間かけて安定化する。培地はバッフルなしの２
５０mlフラスコ内に３０mlずつ分注し、そのまま１２１
℃で２０分間オートクレーブ処理する。次いでこれらの
フラスコを実施例１に記載する種接種原で接種する。
【００１４】発酵プロセス及び条件 好ましい実施態様では、発酵は約２０〜３７℃範囲の温
度で行われるが、しかしながら最良の結果を得るには約
２２〜３０℃の温度で発酵を行うことが好ましい。アス
ペルギルス培養物を増殖させてトリオール酸を産生する
のに適した栄養培地のpHは約６．０〜８．０である。ト
リオール酸は表面及び深部双方の培養で産生されるが、
深部状態で発酵を行うことが好ましい。小規模発酵は適
切な栄養培地にアスペルギルス培養物を接種し、産生培
地に移した後、約２８℃の一定温度で数日間シェーカー
上で進めることにより都合よく行われる。
度で行われるが、しかしながら最良の結果を得るには約
２２〜３０℃の温度で発酵を行うことが好ましい。アス
ペルギルス培養物を増殖させてトリオール酸を産生する
のに適した栄養培地のpHは約６．０〜８．０である。ト
リオール酸は表面及び深部双方の培養で産生されるが、
深部状態で発酵を行うことが好ましい。小規模発酵は適
切な栄養培地にアスペルギルス培養物を接種し、産生培
地に移した後、約２８℃の一定温度で数日間シェーカー
上で進めることにより都合よく行われる。
【００１５】発酵は１回以上の種菌展開段階を経て培地
の入った滅菌フラスコ内で開始する。種菌段階用の栄養
培地は炭素及び窒素源の適切ないかなる組合せであって
もよい。種菌フラスコは約２８℃の定温室内で２日間又
は十分増殖するまで振盪し、得られた増殖物の一部を第
二段階種菌用又は産生培地のいずれかに接種するために
用いる。中間段階種菌フラスコを用いる場合も、実質上
同様に行う、即ち最後の種菌段階のフラスコ内容物の一
部を用い産生培地に接種する。接種したフラスコは一定
温度で数日間振盪し、インキュベート期間の最後にフラ
スコの内容物を遠心又は濾過する。
の入った滅菌フラスコ内で開始する。種菌段階用の栄養
培地は炭素及び窒素源の適切ないかなる組合せであって
もよい。種菌フラスコは約２８℃の定温室内で２日間又
は十分増殖するまで振盪し、得られた増殖物の一部を第
二段階種菌用又は産生培地のいずれかに接種するために
用いる。中間段階種菌フラスコを用いる場合も、実質上
同様に行う、即ち最後の種菌段階のフラスコ内容物の一
部を用い産生培地に接種する。接種したフラスコは一定
温度で数日間振盪し、インキュベート期間の最後にフラ
スコの内容物を遠心又は濾過する。
【００１６】大規模培養の場合には、攪拌機及び発酵培
地通気手段を備えた適切なタンク内で発酵を行うことが
好ましい。この方法によれば、栄養培地はタンク内で調
製され、約１２０℃の温度で加熱することにより滅菌さ
れる。冷却後、滅菌された培地に予め増殖させた産生培
養用種菌を接種し、発酵は栄養培地を攪拌及び／又は通
気して約２８℃の温度に維持しながら一定期間、例えば
３〜１６日間にわたり続ける。このトリオール酸産生方
法は特に大量の製造に適している。
地通気手段を備えた適切なタンク内で発酵を行うことが
好ましい。この方法によれば、栄養培地はタンク内で調
製され、約１２０℃の温度で加熱することにより滅菌さ
れる。冷却後、滅菌された培地に予め増殖させた産生培
養用種菌を接種し、発酵は栄養培地を攪拌及び／又は通
気して約２８℃の温度に維持しながら一定期間、例えば
３〜１６日間にわたり続ける。このトリオール酸産生方
法は特に大量の製造に適している。
【００１７】発酵産物の単離 トリオール酸は主としてヒドロキシカルボキシレート
（開環ラクトン）形で発酵ブロス中に存在する。ＭＦ−
５５４４発酵の全ブロス抽出はロバスタチン全ブロス抽
出の場合（米国特許第４，２３１，９３８号）と同様の
操作を用いて行われるのが好ましい。ＨＰＬＣ追跡分析
では、全ブロス中に存在する夾雑物のほとんどがpH３．
５〜４．５に調整してから行う初めの酢酸イソプロピル
（ＩＰＡＣ）抽出で除去され、同時にトリオールの７０
〜７２％がこの工程で回収されることを示した。この後
に炭酸塩抽出（pH１１〜１２）を行ったが、トリオール
酸の損失は非常に少なかった。炭酸塩層の最終的ＩＰＡ
Ｃ抽出（pH３．５〜４．５）を行って有機相中にトリオ
ール酸を回収するが、収率の減少はほとんどない。
（開環ラクトン）形で発酵ブロス中に存在する。ＭＦ−
５５４４発酵の全ブロス抽出はロバスタチン全ブロス抽
出の場合（米国特許第４，２３１，９３８号）と同様の
操作を用いて行われるのが好ましい。ＨＰＬＣ追跡分析
では、全ブロス中に存在する夾雑物のほとんどがpH３．
５〜４．５に調整してから行う初めの酢酸イソプロピル
（ＩＰＡＣ）抽出で除去され、同時にトリオールの７０
〜７２％がこの工程で回収されることを示した。この後
に炭酸塩抽出（pH１１〜１２）を行ったが、トリオール
酸の損失は非常に少なかった。炭酸塩層の最終的ＩＰＡ
Ｃ抽出（pH３．５〜４．５）を行って有機相中にトリオ
ール酸を回収するが、収率の減少はほとんどない。
【００１８】ラクトン化 本発明のプロセスによるアスペルギルス・テレウス株の
発酵では主産物としてトリオール酸を生じる。トリオー
ル酸のラクトン化は標準操作、即ち加熱又は酸触媒ラク
トン化のいずれかを用いて行われる。ロバスタチン関連
化合物の酸触媒ラクトン化に関する操作は米国特許第
４，９１６，２３９号明細書に記載されている。
発酵では主産物としてトリオール酸を生じる。トリオー
ル酸のラクトン化は標準操作、即ち加熱又は酸触媒ラク
トン化のいずれかを用いて行われる。ロバスタチン関連
化合物の酸触媒ラクトン化に関する操作は米国特許第
４，９１６，２３９号明細書に記載されている。
【００１９】実施例１ ７−〔１，２，６，７，８，８ａ（Ｒ）−ヘキサヒドロ
−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）−ヒドロキ
シ−１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５（Ｒ）−ジヒ
ドロキシヘプタン酸（トリオール酸Ｉ）の製造 （ａ）ニトロソグアニド変異誘発とＨＰＬＣアッセイ 変異誘発： １）アスペルギルス・テレウスのロバスタチン産生株の
純粋培養物をＹＭＥ＋ＴＥの斜面上に画線接種し、通常
の室内ケイ光照射下２８℃で増殖させた。 ２）５〜７日間後、無菌保存原液（５％ラクトース、１
０％グリセロール、０．００５％ＮＰ・４０）２mlを各
斜面に加え、表面を滅菌白金耳で静かにこすって分生子
柄を遊離させた。 ３）胞子懸濁液を滅菌０．５mmガラスビーズ約２５個の
入ったスクリューキャップ管に移し、約１分間攪拌し
た。胞子を血球計数器でカウントし、貯蔵溶液で１×１
０8 胞子／mlに希釈した。胞子懸濁液を使用時まで−８
０℃で貯蔵した。 ４）上記胞子懸濁液１mlずつ４個のスナップキャップ遠
心管にいれ、３０００×ｇ、４℃で５分間遠心した。上
清を捨て、各胞子ペレットをボルテックスミキサーで攪
拌してリン酸緩衝液（pH７の１００mMリン酸ナトリウ
ム、０．００５％ＮＰ・４０）０．９mlに再懸濁した。 ５）３本の管に１mg／mlＮ−メチル−Ｎ−ニトロソ−
Ｎ′−ニトログアニジン０．１mlを加え、水０．１mlを
四番目に加えた。混和後、管を２８℃でインキュベート
した。コントロールは直ちに３０００ｇ、４℃で５分間
遠心した。他の３本の管も同様に各々１５，３０及び６
０分間遠心した。各遠心の直後に上清を捨て、胞子を上
記リン酸緩衝液１mlに再懸濁した。 ６）胞子の入った各管を水で１：１０4 、１：１０5 及
び１：１０6 に希釈した。各希釈液５０μｌを数枚のＹ
ＭＥ＋ＴＥプレート上にまき（２５ml／１００mmプレー
ト）、プレートを室内ケイ光燈下２８℃でインキュベー
トした。４日間後にコロニーを（計数可能な数を有する
プレートについて）カウントした。 ７）更に２日間後、元の胞子の１０〜５０％のみが生存
するように胞子を変異誘発したプレートから個々のコロ
ニーを取出した。取出されたコロニーを用いてＹＭＥ＋
ＴＥ斜面に接種し、これを前記のように増殖させた。 ８）選択した変異株を植えた斜面が胞子形成したら、胞
子懸濁液を前記のように調製し、種培地（５×１０6 胞
子／ml培地；２５０mlバッフルなしフラスコ中４０ml）
に接種した。２８時間後、種菌を発酵培地（１０％持ち
込み容量；２５０mlバッフルなしフラスコ中発酵培地３
０ml）に接種した。すべてのフラスコをニューブランス
ウィックＧ−５３（New Brunswick Ｇ−５３）シェーカ
ーで２２０rpm 、２８℃で振盪した。 ９）８日間の発酵後に１倍容量のメタノールを各フラス
コに加え、フラスコを３０分間攪拌し、内容物を静置
し、上清をトリオール及び他のブロス成分の存在に関し
てＨＰＬＣにより調べた。
−２（Ｓ），６（Ｒ）−ジメチル−８（Ｓ）−ヒドロキ
シ−１（Ｓ）−ナフチル〕−３（Ｒ），５（Ｒ）−ジヒ
ドロキシヘプタン酸（トリオール酸Ｉ）の製造 （ａ）ニトロソグアニド変異誘発とＨＰＬＣアッセイ 変異誘発： １）アスペルギルス・テレウスのロバスタチン産生株の
純粋培養物をＹＭＥ＋ＴＥの斜面上に画線接種し、通常
の室内ケイ光照射下２８℃で増殖させた。 ２）５〜７日間後、無菌保存原液（５％ラクトース、１
０％グリセロール、０．００５％ＮＰ・４０）２mlを各
斜面に加え、表面を滅菌白金耳で静かにこすって分生子
柄を遊離させた。 ３）胞子懸濁液を滅菌０．５mmガラスビーズ約２５個の
入ったスクリューキャップ管に移し、約１分間攪拌し
た。胞子を血球計数器でカウントし、貯蔵溶液で１×１
０8 胞子／mlに希釈した。胞子懸濁液を使用時まで−８
０℃で貯蔵した。 ４）上記胞子懸濁液１mlずつ４個のスナップキャップ遠
心管にいれ、３０００×ｇ、４℃で５分間遠心した。上
清を捨て、各胞子ペレットをボルテックスミキサーで攪
拌してリン酸緩衝液（pH７の１００mMリン酸ナトリウ
ム、０．００５％ＮＰ・４０）０．９mlに再懸濁した。 ５）３本の管に１mg／mlＮ−メチル−Ｎ−ニトロソ−
Ｎ′−ニトログアニジン０．１mlを加え、水０．１mlを
四番目に加えた。混和後、管を２８℃でインキュベート
した。コントロールは直ちに３０００ｇ、４℃で５分間
遠心した。他の３本の管も同様に各々１５，３０及び６
０分間遠心した。各遠心の直後に上清を捨て、胞子を上
記リン酸緩衝液１mlに再懸濁した。 ６）胞子の入った各管を水で１：１０4 、１：１０5 及
び１：１０6 に希釈した。各希釈液５０μｌを数枚のＹ
ＭＥ＋ＴＥプレート上にまき（２５ml／１００mmプレー
ト）、プレートを室内ケイ光燈下２８℃でインキュベー
トした。４日間後にコロニーを（計数可能な数を有する
プレートについて）カウントした。 ７）更に２日間後、元の胞子の１０〜５０％のみが生存
するように胞子を変異誘発したプレートから個々のコロ
ニーを取出した。取出されたコロニーを用いてＹＭＥ＋
ＴＥ斜面に接種し、これを前記のように増殖させた。 ８）選択した変異株を植えた斜面が胞子形成したら、胞
子懸濁液を前記のように調製し、種培地（５×１０6 胞
子／ml培地；２５０mlバッフルなしフラスコ中４０ml）
に接種した。２８時間後、種菌を発酵培地（１０％持ち
込み容量；２５０mlバッフルなしフラスコ中発酵培地３
０ml）に接種した。すべてのフラスコをニューブランス
ウィックＧ−５３（New Brunswick Ｇ−５３）シェーカ
ーで２２０rpm 、２８℃で振盪した。 ９）８日間の発酵後に１倍容量のメタノールを各フラス
コに加え、フラスコを３０分間攪拌し、内容物を静置
し、上清をトリオール及び他のブロス成分の存在に関し
てＨＰＬＣにより調べた。
【００２０】培養抽出物のＨＰＬＣアッセイ 抽出物はワットマン・パーティシル（Whatman Partisi
l）５Ｃ８（４．６mm×２５cm）カラム上１．５ml／min
でポンプ駆動される４５％アセトニトリル及び５５％
リン酸の均一移動相条件下ＨＰＬＣにより分析した。検
出波長は２３５nmであった。トリオール産物はトリオー
ルアンモニウム塩標準との比較でそれらの特徴的ＵＶス
ペクトル及び保持時間により同定した。
l）５Ｃ８（４．６mm×２５cm）カラム上１．５ml／min
でポンプ駆動される４５％アセトニトリル及び５５％
リン酸の均一移動相条件下ＨＰＬＣにより分析した。検
出波長は２３５nmであった。トリオール産物はトリオー
ルアンモニウム塩標準との比較でそれらの特徴的ＵＶス
ペクトル及び保持時間により同定した。
【００２１】ｂ）斜面培養物の調製 アスペルギルス・テレウスＭＦ−５５４４の培養物はキ
ャップ付ガラス管中ＹＭＥ＋ＴＥ培地（８ml）含有寒天
斜面上で培養して維持した。培養物を２７．５℃で５〜
７日間斜面上で生育させ、４℃で１か月まで貯蔵し、斜
面を種フラスコ用の接種原として用いた。ＹＭＥ＋ＴＥ
培地は下記組成を有する：
ャップ付ガラス管中ＹＭＥ＋ＴＥ培地（８ml）含有寒天
斜面上で培養して維持した。培養物を２７．５℃で５〜
７日間斜面上で生育させ、４℃で１か月まで貯蔵し、斜
面を種フラスコ用の接種原として用いた。ＹＭＥ＋ＴＥ
培地は下記組成を有する：
【表１】ＹＭＥ＋ＴＥ培地（寒天斜面） ： 酵母エキス ４．０ｇ／リットル 麦芽エキス １０．０ｇ／リットル グルコース ４．０ｇ／リットル 微量元素＃２ ５．０ｇ／リットル 寒天 ２０．０ｇ／リットル NaOHでpH７．０に調整。１２１℃で２０分間のオートク
レーブ処理。
レーブ処理。
【表２】 微量元素＃２ FeSO4 ・７H2O １０００mg／リットル MnSO4 ・H2O １０００mg／リットル CuCl2 ・２H2O ２５mg／リットル CaCl2 １００mg／リットル H3BO3 ５６mg／リットル (NH4)6Mo７０２４・４H2O １９mg／リットル ZnSO4 ・７H2O ２００mg／リットル ０．６N HCl で調整し、５℃で貯蔵 最大力価は下記成分を有する“ＨＬＣ”種培地で生育さ
せた種接種原を用いて得られた：
せた種接種原を用いて得られた：
【表３】 アルダミンpHはチャンプレイン・インダストリーズ（Ch
amplain Industries）から入手でき、ブレンドされた一
次増殖酵母及びビール酵母である。ファーマメディア
（Pharmamedia)はトレーダーズ・プロテイン・カンパニ
ー（Trader's Protein Company) から購入し、“綿実
粉”である。上記成分の各々を蒸留水に連続的に加え、
次を加える前によく溶解させた。蒸留水８００mlを最終
容量１０００mlになるまで加え、pHを４０％NaOHで７．
０に調整し、１０分間安定化させた。培地を１２１℃で
２０分間オートクレーブ処理した。滅菌後pHは６．５〜
６．６となっているべきである。
amplain Industries）から入手でき、ブレンドされた一
次増殖酵母及びビール酵母である。ファーマメディア
（Pharmamedia)はトレーダーズ・プロテイン・カンパニ
ー（Trader's Protein Company) から購入し、“綿実
粉”である。上記成分の各々を蒸留水に連続的に加え、
次を加える前によく溶解させた。蒸留水８００mlを最終
容量１０００mlになるまで加え、pHを４０％NaOHで７．
０に調整し、１０分間安定化させた。培地を１２１℃で
２０分間オートクレーブ処理した。滅菌後pHは６．５〜
６．６となっているべきである。
【００２２】ｃ）発酵による産生 種フラスコ用接種原を調製するため、寒天斜面の１本分
内容物を蒸留水又は生理食塩水（０．７％NaCl) ５mlで
かきとった。この接種原１mlをオートクレーブで滅菌し
たＨＬＣ種培地４０ml含有２５０mlバッフルなしエーレ
ンマイヤーフラスコに加えた（あるいは実施例２のよう
に、ラクトース／グリセロール胞子懸濁液１mlを用いる
こともできる）。ＨＬＣ種フラスコをロータリーシェー
カー上２２０rpm.２７．５℃で２４〜２６時間インキュ
ベートし、このフラスコの内容物１mlを滅菌ＧＰ−９産
生培地（下記参照）３０ml含有２５０mlバッフルなしエ
ーレンマイヤーフラスコに接種した。このフラスコをロ
ータリーシェーカー上２２０rpm 、２７．５℃で４〜１
４日間インキュベートした。最大トリオール酸産生は１
４日目にみられた。
内容物を蒸留水又は生理食塩水（０．７％NaCl) ５mlで
かきとった。この接種原１mlをオートクレーブで滅菌し
たＨＬＣ種培地４０ml含有２５０mlバッフルなしエーレ
ンマイヤーフラスコに加えた（あるいは実施例２のよう
に、ラクトース／グリセロール胞子懸濁液１mlを用いる
こともできる）。ＨＬＣ種フラスコをロータリーシェー
カー上２２０rpm.２７．５℃で２４〜２６時間インキュ
ベートし、このフラスコの内容物１mlを滅菌ＧＰ−９産
生培地（下記参照）３０ml含有２５０mlバッフルなしエ
ーレンマイヤーフラスコに接種した。このフラスコをロ
ータリーシェーカー上２２０rpm 、２７．５℃で４〜１
４日間インキュベートした。最大トリオール酸産生は１
４日目にみられた。
【００２３】ｄ）トリオール酸の抽出 トリオールは下記のように酢酸イソプロピル（ＩＰＡ
Ｃ）を用いた液−液抽出により発酵ブロスから回収した
（２リットル；最初ＨＰＬＣ分析により５．９８ｇ／リ
ットル）：ブロスのpHを１０％硫酸（６０ml）で４．０
〜４．５に調整し、ブロスをＩＰＡＣ（１：３４リット
ル）と混ぜ、遠心した。ＩＰＡＣ層を回収し、pH１１．
５の炭酸ナトリウム溶液（４００ml）と混ぜて非極性成
分を除去した。次いで豊富炭酸塩層（トリオール含有）
を８５％リン酸（１２ml）でpH４．０に調整後ＩＰＡＣ
（４５０ml）に逆抽出した。
Ｃ）を用いた液−液抽出により発酵ブロスから回収した
（２リットル；最初ＨＰＬＣ分析により５．９８ｇ／リ
ットル）：ブロスのpHを１０％硫酸（６０ml）で４．０
〜４．５に調整し、ブロスをＩＰＡＣ（１：３４リット
ル）と混ぜ、遠心した。ＩＰＡＣ層を回収し、pH１１．
５の炭酸ナトリウム溶液（４００ml）と混ぜて非極性成
分を除去した。次いで豊富炭酸塩層（トリオール含有）
を８５％リン酸（１２ml）でpH４．０に調整後ＩＰＡＣ
（４５０ml）に逆抽出した。
【００２４】ｅ）ラクトン化 ７０％メタンスルホン酸（ＭＳＡ）（８７μｌ；２mM）
を実施例１（ｄ）のＩＰＡＣ層に加え、溶液をその原容
量（１００ml）の〜１／５蒸発濃縮した。濃縮／ラクト
ン化の完了をＨＰＬＣ分析で確認した後、ＩＰＡＣを炭
酸ナトリウム溶液（１００ml）と混ぜて荷電種を除去し
た。ジオールラクトンは−２０℃でＩＰＡＣ層から結晶
化した。
を実施例１（ｄ）のＩＰＡＣ層に加え、溶液をその原容
量（１００ml）の〜１／５蒸発濃縮した。濃縮／ラクト
ン化の完了をＨＰＬＣ分析で確認した後、ＩＰＡＣを炭
酸ナトリウム溶液（１００ml）と混ぜて荷電種を除去し
た。ジオールラクトンは−２０℃でＩＰＡＣ層から結晶
化した。
【００２５】実施例２ 米からの凍結分生子の調製 アスペルギルス・テレウスＭＦ−５５４４培養物は凍結
胞子懸濁物として維持することができる。“アンクルベ
ン転化長粒米”（Uncle Ben's Converted LongGrain Ri
ce)２５０ｇを２８００mlエーレンマイヤーフラスコ中
において水が透明になるまで水洗した。フラスコから水
を捨て、フラスコを１２１℃で３０分間オートクレーブ
処理して滅菌した。冷却後、米含有フラスコを（かきと
りにより蒸留水又は塩水（０．７％NaCl）５mlに懸濁さ
れた）１斜面分の内容物を接種し、振盪してから２７．
５℃で１２〜１６日間インキュベートした。胞子を回収
するため、５％ラクトース／１０％グリセロール含有溶
液２５０〜５００mlを加え、フラスコを振盪し、滅菌ス
テンレススチールメッシュ通して濾液を集めた。ラクト
ース／グリセロール胞子懸濁液を−９０℃で凍結し、前
記実施例１のようにＨＬＣ種フラスコ用の接種原として
用いた。
胞子懸濁物として維持することができる。“アンクルベ
ン転化長粒米”（Uncle Ben's Converted LongGrain Ri
ce)２５０ｇを２８００mlエーレンマイヤーフラスコ中
において水が透明になるまで水洗した。フラスコから水
を捨て、フラスコを１２１℃で３０分間オートクレーブ
処理して滅菌した。冷却後、米含有フラスコを（かきと
りにより蒸留水又は塩水（０．７％NaCl）５mlに懸濁さ
れた）１斜面分の内容物を接種し、振盪してから２７．
５℃で１２〜１６日間インキュベートした。胞子を回収
するため、５％ラクトース／１０％グリセロール含有溶
液２５０〜５００mlを加え、フラスコを振盪し、滅菌ス
テンレススチールメッシュ通して濾液を集めた。ラクト
ース／グリセロール胞子懸濁液を−９０℃で凍結し、前
記実施例１のようにＨＬＣ種フラスコ用の接種原として
用いた。
【００２６】実施例３ アンモニウム塩の形成 細胞ペレット及び／又は細胞砕片を濾過又は遠心により
産生フラスコから除去した。次いでこのプロセスからの
濾液又は上清を工程１ｄで示したように抽出するか又は
濾液を用いてトリオール酸のアンモニウム塩を単離し
た。推定トリオール力価２９．８３ｇ／リットルのＩＰ
ＡＣ流（５ml）を硫酸マグネシウムで脱水し、しかる後
焼結ガラスロートで濾過した。メタノール（０．２ml）
を加え、混合液を氷浴（０℃）につけ、水酸化アンモニ
ウム：メタノール（１：３）溶液０．０３mlを加えた。
混合液にトリオールアンモニウム塩１mgを核として入
れ、３０分間エージングした。温度を−８℃に下げ、水
酸化アンモニウム：メタノール（１：３）０．０３mlを
２時間にわたり１５分間毎に加えた。得られた濃厚スラ
リーを濾過して、象牙色結晶を得た。ここで特許請求さ
れたアスペルギルス・テレウス株の培養物は式（Ｉ）の
化合物の形成にとり有害である生存汚染微生物を含まな
いとして定義される。
産生フラスコから除去した。次いでこのプロセスからの
濾液又は上清を工程１ｄで示したように抽出するか又は
濾液を用いてトリオール酸のアンモニウム塩を単離し
た。推定トリオール力価２９．８３ｇ／リットルのＩＰ
ＡＣ流（５ml）を硫酸マグネシウムで脱水し、しかる後
焼結ガラスロートで濾過した。メタノール（０．２ml）
を加え、混合液を氷浴（０℃）につけ、水酸化アンモニ
ウム：メタノール（１：３）溶液０．０３mlを加えた。
混合液にトリオールアンモニウム塩１mgを核として入
れ、３０分間エージングした。温度を−８℃に下げ、水
酸化アンモニウム：メタノール（１：３）０．０３mlを
２時間にわたり１５分間毎に加えた。得られた濃厚スラ
リーを濾過して、象牙色結晶を得た。ここで特許請求さ
れたアスペルギルス・テレウス株の培養物は式（Ｉ）の
化合物の形成にとり有害である生存汚染微生物を含まな
いとして定義される。
フロントページの続き (72)発明者 レベッカ エル．デボラ アメリカ合衆国，01810 マサチューセッ ツ，アンドーヴァー，ホワイティアー ス トリート 53 (72)発明者 アンダーソン ホング 台湾 112，台北，ペイタウ，セクション ４，チュン ヤン ノース ロード, 385 レーン 14 (72)発明者 クリストファー リーヴス アメリカ合衆国，98012 ワシントン，ミ ル クリーク，トゥウェンティファースト ドライヴ エス．イー．16307 (72)発明者 ロバート ダブリュ．スティーバー アメリカ合衆国，22801 ヴァージニア, ハリソンバーグ，マウンテンヴュー ドラ イヴ 535 (72)発明者 ヴィクター エー．ヴィンチ アメリカ合衆国，22901 ヴァージニア, シャーロッツヴィル，ロック レーン 2041
Claims (9)
- 【請求項１】 アスペルギルス・テレウス株の培養物で
あって、 上記株がアスペルギルス・テレウスのロバスタチン産生
株の変異誘発から形成され、上記培養物がロバスタチン
収率０．００２％未満の形成で下記構造の化合物： 【化１】 を形成することができる培養物。 - 【請求項２】 ロバスタチン収率０．００２％未満の形
成で下記構造（Ｉ）の化合物： 【化２】 を形成することができるＭＦ−５５４４、ＡＴＣＣ７４
０６４又はその変異株の培養物。 - 【請求項３】 構造（Ｉ）の化合物が少なくとも５．２
ｇ／リットルの力価で形成され、トリオール酸関連副産
物が０．８５ｇ／リットル以下の収率で形成される、請
求項２記載の培養物。 - 【請求項４】 培養物が生物学的に純粋な培養物であ
る、請求項１記載の培養物。 - 【請求項５】 培養物が生物学的に純粋な培養株であ
る、請求項２記載の培養物。 - 【請求項６】 培養物が生物学的に純粋な培養物であ
る、請求項３記載の培養物。 - 【請求項７】 下記構造（Ｉ）の化合物： 【化３】 の形成方法であって、 化合物（Ｉ）の形成に適した条件下で請求項１記載の微
生物を培養し、化合物を回収することからなる方法。 - 【請求項８】 下記構造（Ｉ）の化合物： 【化４】 の形成方法であって、 上記化合物の形成に適した条件下で請求項２記載の微生
物を培養し、化合物を回収することからなる方法。 - 【請求項９】 化合物（Ｉ）が少なくとも５．２ｇ／リ
ットルの力価で形成され、トリオール酸関連副産物が
０．８５ｇ／リットル以下の収率で形成される、請求項
８記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/709,950 US5250435A (en) | 1991-06-04 | 1991-06-04 | Mutant strains of Aspergillus terreus for producing 7-[1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hydro-2(S),6(R)-dimethyl-8(S)-hydroxy-1(S)-naphthyl]-3(R),5(R)-dihydroxyheptanoic acid (triol acid),I) |
| US709950 | 1991-06-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH067176A true JPH067176A (ja) | 1994-01-18 |
| JP2611088B2 JP2611088B2 (ja) | 1997-05-21 |
Family
ID=24851974
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4144563A Expired - Fee Related JP2611088B2 (ja) | 1991-06-04 | 1992-06-04 | アスペルギルス・テレウスの変異株によるトリオール酸（ｉ）の新規発酵 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5250435A (ja) |
| EP (1) | EP0517413B1 (ja) |
| JP (1) | JP2611088B2 (ja) |
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| CA (1) | CA2070148C (ja) |
| DE (1) | DE69213335T2 (ja) |
| DK (1) | DK0517413T3 (ja) |
| ES (1) | ES2091408T3 (ja) |
| GR (1) | GR3021115T3 (ja) |
| IE (1) | IE73237B1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU713487B2 (en) * | 1995-08-18 | 1999-12-02 | Smk Co., Ltd. | Connector plug for automobiles |
| AU719831B2 (en) * | 1995-08-18 | 2000-05-18 | Smk Co., Ltd. | Connector plug for automobiles |
| WO2002020453A1 (fr) | 2000-09-07 | 2002-03-14 | Kaneka Corporation | Procedes de cristallisation d'acides hydroxycarboxyliques |
| JP2010110328A (ja) | 2002-01-29 | 2010-05-20 | Immunogen Inc | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU208997B (en) * | 1992-06-17 | 1994-02-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Microbiological method for producing mevinoline |
| SI9500238A (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-28 | Krka Tovarna Zdravil | Procedure for the production of lovastatin |
| KR100234976B1 (ko) * | 1997-08-01 | 1999-12-15 | 김충환 | 세룰레닌 및 엘-메치오닌 유사체에 동시 내성을 갖는 아스퍼질 러스속 미생물 및 그를 이용한 메비놀린산의 제조방법 |
| WO2000030616A1 (en) | 1998-11-20 | 2000-06-02 | Rtp Pharma Inc. | Dispersible phospholipid stabilized microparticles |
| CA2388182A1 (en) | 1999-10-27 | 2001-05-03 | Merck & Co., Inc. | Lactonization process |
| KR100342789B1 (ko) * | 1999-10-29 | 2002-07-04 | 김용규 | 니스타틴에 내성을 갖는 아스퍼질러스속 미생물 및 그를 이용한 트리올 헵타노익산의 제조방법 |
| IL149422A0 (en) * | 1999-11-03 | 2002-11-10 | Smith Howard J & Ass Pty Ltd | Oral pharmaceutical compositions for liver therapy |
| US6849257B2 (en) | 2000-02-04 | 2005-02-01 | Children's Hospital Research Foundation | Lipid hydrolysis therapy for atherosclerosis and related diseases |
| US8586094B2 (en) | 2000-09-20 | 2013-11-19 | Jagotec Ag | Coated tablets |
| WO2002063976A1 (en) * | 2001-02-09 | 2002-08-22 | Unilever N.V. | Food product comprising soy protein and statins |
| ES2573471T3 (es) | 2002-05-09 | 2016-06-08 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | 1L1RL-1 como un marcador de enfermedades cardiovasculares |
| US20070218139A1 (en) * | 2002-12-20 | 2007-09-20 | Smith Thomas J | High Pressure Compaction For Pharmaceutical Formulations |
| EP1510208A1 (en) | 2003-08-22 | 2005-03-02 | Fournier Laboratories Ireland Limited | Pharmaceutical composition comprising a combination of metformin and statin |
| US7803838B2 (en) * | 2004-06-04 | 2010-09-28 | Forest Laboratories Holdings Limited | Compositions comprising nebivolol |
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| CA2596426A1 (en) * | 2005-01-31 | 2006-08-10 | Mylan Laboratories, Inc. | Pharmaceutical composition comprising hydroxylated nebivolol |
| AU2005332300B2 (en) | 2005-05-31 | 2011-07-07 | Mylan Laboratories, Inc. | Compositions comprising nebivolol |
| US8119358B2 (en) | 2005-10-11 | 2012-02-21 | Tethys Bioscience, Inc. | Diabetes-related biomarkers and methods of use thereof |
| EP2030025A2 (en) | 2006-06-07 | 2009-03-04 | Tethys Bioscience, Inc. | Markers associated with arteriovascular events and methods of use thereof |
| US10568860B2 (en) | 2006-08-30 | 2020-02-25 | Kowa Co., Ltd. | Pharmaceutical composition containing statin-encapsulated nanoparticle |
| DK2147315T3 (da) | 2007-04-18 | 2013-09-23 | Tethys Bioscience Inc | Diabetesrelaterede biomarkører og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| JP2013518618A (ja) | 2010-02-01 | 2013-05-23 | ザ・ホスピタル・フォー・シック・チルドレン | 再狭窄を治療および予防するための遠隔虚血コンディショニング |
| SG184353A1 (en) | 2010-03-31 | 2012-11-29 | Hospital For Sick Children | Use of remote ischemic conditioning to improve outcome after myocardial infarction |
| JP2013523349A (ja) | 2010-04-08 | 2013-06-17 | ザ・ホスピタル・フォー・シック・チルドレン | 外傷性損傷に対する遠隔虚血コンディショニングの使用 |
| PT2879666T (pt) | 2012-08-01 | 2020-05-07 | Tavakoli Zahra | Composições congeladas, de fluxo livre contendo um agente terapêutico |
| US9987233B2 (en) | 2013-03-21 | 2018-06-05 | Eupraxia Pharmaceuticals USA LLC | Injectable sustained release composition and method of using the same for treating inflammation in joints and pain associated therewith |
| TR201808237T4 (tr) | 2015-10-27 | 2018-07-23 | Eupraxia Pharmaceuticals Inc | Lokal anestetiklerin sürekli salım formülasyonları. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376863A (en) * | 1981-08-21 | 1983-03-15 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesterolemic fermentation products |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4231938A (en) * | 1979-06-15 | 1980-11-04 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US4319039A (en) * | 1979-06-15 | 1982-03-09 | Merck & Co., Inc. | Preparation of ammonium salt of hypocholesteremic fermentation product |
| US4444784A (en) * | 1980-08-05 | 1984-04-24 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic compounds |
| PT72394B (en) * | 1980-02-04 | 1982-09-06 | Merck & Co Inc | Process for preparing dihydro and tetrahydromevinoline hypocholesterolimics |
| JPS56142236A (en) * | 1980-04-08 | 1981-11-06 | Sankyo Co Ltd | Ml-236a and mb-530a derivative |
| US4420491A (en) * | 1980-05-28 | 1983-12-13 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US4387242A (en) * | 1981-08-21 | 1983-06-07 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesterolemic fermentation products and process of preparation |
| JPS6113798A (ja) * | 1984-06-28 | 1986-01-22 | Pioneer Electronic Corp | スピ−カ用振動板 |
| US4876364A (en) * | 1987-09-03 | 1989-10-24 | Merck & Co., Inc. | Hydrogenation process for the formation of 4A,5-dihydro HMG-CoA reductase inhibitors |
| US4916239A (en) * | 1988-07-19 | 1990-04-10 | Merck & Co., Inc. | Process for the lactonization of mevinic acids and analogs thereof |
-
1991
- 1991-06-04 US US07/709,950 patent/US5250435A/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-05-26 DE DE69213335T patent/DE69213335T2/de not_active Expired - Fee Related
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1996
- 1996-09-20 GR GR960402480T patent/GR3021115T3/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376863A (en) * | 1981-08-21 | 1983-03-15 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesterolemic fermentation products |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU713487B2 (en) * | 1995-08-18 | 1999-12-02 | Smk Co., Ltd. | Connector plug for automobiles |
| AU719831B2 (en) * | 1995-08-18 | 2000-05-18 | Smk Co., Ltd. | Connector plug for automobiles |
| WO2002020453A1 (fr) | 2000-09-07 | 2002-03-14 | Kaneka Corporation | Procedes de cristallisation d'acides hydroxycarboxyliques |
| JP2010110328A (ja) | 2002-01-29 | 2010-05-20 | Immunogen Inc | メイタンシノイド産生を増加する突然変異アクチノシネマ・プレチオスム（Ａｃｔｉｎｏｓｙｎｎｅｍａｐｒｅｔｉｏｓｕｍ）株 |
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| Publication number | Publication date |
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