JPH08510236A

JPH08510236A - 局所使用のためのアシクロビル誘導体

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Publication number: JPH08510236A
Application number: JP6525361A
Authority: JP
Inventors: カールワイ．ホステトラー
Original assignee: カールワイ．ホステトラー
Priority date: 1993-05-12
Filing date: 1993-05-12
Publication date: 1996-10-29
Also published as: AU4372193A; CA2162574A1; WO1994026273A1; AU701574B2; EP0746319A4; EP0746319A1

Abstract

(57)【要約】アシクロビルモノホスフェートおよびアシクロビルジホスフェートのような抗ヘルペスヌクレオシドアナログホスフェートエステル、それはヘルペスウイルスの天然の株だけでなく耐性株、特にウイルスのチミジンキナーゼ陰性株に増加した活性を示す、を含むヘルペスウイルス感染の局所使用のための組成物。また、ヘルペス疾患の治療において組成物を局所に使用するための方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】局所使用のためのアシクロビル誘導体発明の背景１．発明の分野本発明は、皮膚ウイルス感染の局所治療に関する。それは、特にアシクロビル（acyclovir）のような抗−ヘルペス抗ウイルスヌクレオシドアナログのホスフェートエステルを含む製剤を用いた、１及び２型単純ヘルペスウイルスを含む単純ヘルペス感染の局所治療に関する。２．背景技術アシクロビル（ＡＣＶ）は、異常な不完全（非環式）糖部分を含むグアノシンの抗ウイルスヌクレオシドアナログである。ヌクレオシドアナログは、細胞中のＤＮＡ複製のプロセスを中断させ、その理由のために抗ウイルス及び抗腫瘍剤として有用である。ＡＣＶは、特にＩ及びII型の単純ヘルペスウイルス感染を治療するのに有効である。ＡＣＶは宿主細胞のチミジンキナーゼではなく、ＨＳＶチミジンキナーゼにより選択的にリン酸化されるため、細胞中でのＡＣＶの抗ヘルペスウイルス活性は、低い毒性を示す。結果として、ＨＳＶに感染した細胞のみがＡＣＶモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）を形成することができる。ＡＣＶ−ＭＰは次いで細胞性酵素により同化作用的にＡＣＶトリホスフェートに変換され、該活性剤はウイルスの複製を妨害する。（Fyfe，J．ら，J．Biol．Chem. 253:8721 -8727（1978）；Furman，P．ら，J．Virol. 32:72-77（1979）。アシクロビル抗ヘルペスウイルス活性は、組織培養細胞中の単純ヘルペスウイルスの複製を阻害することにより示された（O'Brien，W．ら，Antimicrob. Agen ts and Chemother. 34:1178-1182（1990）；それは、ＨＳＶに感染した患者がＡＣＶを経口的に投与して治療した臨床的研究においても示された（Whitley，R. ，Immunobiol．and Prophylaxis of Human Herpesvirus Infections，C．Lopez ら，（編）Plenum Press，NY 1990；及びStraus，S.，Sexually Transmitted Di seases 16（2）:107-113（1989）。アシクロビルは、粘膜及び皮膚のＨＳＶ感染の治療に選択される。局所アシクロビル治療を受けた患者はその症状の幾分かの軽減を経験するが、治癒は緩やかで不完全である（Spruance，S．ら，J．Infect．Dis. 146:85-90（1982）；およびSpruance，S．ら，Antimicrob．Agents Chemother．25，:553-555（19 84）。ヘルペスウイルス感染培養細胞にインターフェロンとともにＡＣＶを用いるか（O'Brien，W．ら，Antimicrob．Agents and Chemother. 34:1178-1182（1990））または胸腺欠損マウスのヘルペス性角膜炎の局所治療として、ＨＳＶ不活性化剤（HSV inactivator）であるＡ１１１０ＵとともにＡＣＶを用いた（Lobe，D．ら，Antiviral Research 15:87-100（1991））組み合わせ治療は、ＡＣＶのみの使用より相乗的な抗Ｉ型ヘルペスウイルス活性を示した。アシクロビルは、他のウイルス疾患、水痘（チキンポックス）の治療のための臨床試験において限定した成功と共に用いられた（Whitley，R．ら，Immunobiol ogy and Prophylaxis of Human Herpesvirus Infections ，C．Lopez（編），Ple num Press，New York（1990）pp．243-253。それはまた、ウイルスの病因が仮定された再生不良性貧血（Gomez-Almaguer D.，ら，Amer．J．of Hematology 29: 172-173（1988））及び十二指腸潰瘍（Rune，S.J．ら，Gut 31:151-152（1990））のような他の疾患の治療に用いられたが成功しなかった。アシクロビルホスフェートは、インビトロで野生型またはＨＳＶ−１感染培養細胞の実験室分離株に対する効力があるが、同じ条件下でＨＳＶのチミジンキナーゼ欠損突然変異株にほとんど或いは全く効力がないことが示された（図１及び２のデータ参照）。ＨＩＶ（ＡＩＤＳ）感染または移植拒絶反応を防止するために免疫抑制薬を摂取した移植の宿主のような免疫抑制された患者には、ＡＣＶは問題の多いヘルペスの集団発生を防止するために慢性的に与えられる。そのような治療はＨＳＶチミジンキナーゼ（９０％頻度）及びＤＮＡポリメラーゼ（１０％頻度）の突然変異を導く選択的圧力を与えることになり、次にＡＣＶ耐性ウイルス株を発生させることになる。これらのアシクロビル耐性ヘルペスウイルス株に有効な局所治療はない。発明の要約本発明によれば、ヘルペスウイルス感染による粘膜及び皮膚のヘルペス性病変の治療に有効なアシクロビルホスフェートエステル及び他の抗ヘルペス抗ウイルスヌクレオシドアナログが提供される。これらの薬剤は、意外にも、たとえそれらが培養細胞中のウイルス突然変異株に相対的に不活性であっても、チミジンキナーゼ欠損ヘルペスウイルス感染による病変に抗ウイルス作用を示す。本発明はまた、アシクロビルモノホスフェート、アシクロビルジホスフェート、アシクロビルモノホスフェートグリセロール、アシクロビルジホスフェートグリセロール、アシクロビルモノホスフェートモルホリデート、アシクロビルモノホスフェートグリセロール、アシクロビルジホスフェートグリセロール、アシクロビルモノホスフェートイソプロピリデングリセロール、アシクロビルジホスフェートイソプロピリデングリセロールまたはそれらの混合物であってもよい有効な抗ウイルス濃度のアシクロビル誘導体を局所使用に適した薬学的担体中に含む医薬製剤も提供する。ウイルスチミジンキナーゼによるリン酸化に依存する他の抗単純ヘルペスヌクレオシドも、好適な局所製剤中のそれらのホスフェートエステルとして感染患者の皮膚に適用されると高められた活性を示すであろう。本発明の他の面によれば、本発明のアシクロビルホスフェート誘導体のいずれかまたはその混合物を含む製剤を、ヒト及び他の哺乳類を含むウイルス感染動物の粘膜または皮膚病変に適用することを含むウイルス感染の局所治療方法を提供する。該方法の好適な実施態様では、動物はヘルペスウイルスで感染される。特に好適な実施態様では、該動物はアシクロビルに耐性のヘルペスウイルス株に感染している。アシクロビルに耐性のヘルペスウイルス株は、抗ウイルス剤に対する耐性がチミジンキナーゼ遺伝子の変化または欠損によるウイルス株であってもよい。本発明の他の面によれば、抗−ヘルペスヌクレオシドアナログモノホスフェートは、粘膜または皮膚のウイルス感染の治療薬の製剤中に使用される。好適な実施態様によれば、該ヌクレオシドモノホスフェートは、水溶性の塩である。他の好適な実施態様によれば、ウイルス感染は１または２型の単純ヘルペスウイルスである。本発明の他の面によれば、抗−ヘルペスヌクレオシドアナログモノホスフェートは、粘膜または皮膚のウイルス感染の治療薬の製剤中に、薬学的に許容される担体と共に使用される。好適な点において、薬学的に許容される該担体は、水性クリーム（aqueous cream）及びポリエチレングリコールからなる群から選ばれる。図面の簡単な説明図１は、Ｗｉ３８線維芽細胞中での単純ヘルペスウイルス複製に関するアシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートの比較効果を示す。図２は、インビトロでのＨＳＶ−ＤＭ．２１ＴＫ突然変異株の複製に関するアシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートの比較効果を示す。図３は、ＨＲＳ／Ｊマウス中のＴＫ−欠損型のアシクロビル耐性ＨＳＶ−１感染に関する局所のアシクロビル及びアシクロビルホスフェートエステルの比較効果を示す。図４は、ＨＲＳ／Ｊマウス中のＴＫ−変化型のアシクロビル耐性ＨＳＶ−１感染に関する局所のアシクロビル及びアシクロビルホスフェートエステルの比較効果を示す。図５は、ＨＲＳ／Ｊマウス中の野生型のアシクロビル耐性ＨＳＶ−１感染に関する局所のアシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートの比較効果を示す。図６は、ＨＲＳ／Ｊマウス中のＴＫ−変化型のアシクロビル耐性ＨＳＶ−１感染に関する局所のアシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートの比較効果を示す。発明の詳細な説明本発明は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）感染、特にＨＳＶのＡＣＶ−耐性突然変異株に対し優れた局所作用を示すアシクロビルホスフェート誘導体を提供する。アシクロビルは、プリン塩基、グアニンの９位に置換基を有し、一般名の由来である非環式糖基を有するアナログである。アシクロビルの化学名は、９−（２ −ヒドロキシエトキシメチル）−グアニンであり、以下の構造を有する：本発明のアシクロビルホスフェート誘導体は、以下のように非環式糖基の末端Ｏ−位置（O-locant）に置換基Ｒを有する：式中、該Ｒ置換基は、以下の通りである：本発明によれば、アシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）、アシクロビルジホスフェート（ＡＣＶ−ＤＰ）、アシクロビルモノホスフェートグリセロール（ＡＣＶ−ＭＰ−Ｇ）、アシクロビルジホスフェートグリセロール（ＡＣＶ −ＤＰ−Ｇ）、アシクロビルモノホスフェートモルホリデート（ＡＣＶ−ＭＰ− モルホリン）、アシクロビルモノホスフェートイソプロピリデングリセロール（ＡＣＶ−ＭＰ−ｉｓｏＰ−Ｇ）、またはアシクロビルジホスフェートイソプロピリデングリセロール（ＡＣＶ−ＤＰ−ｉｓｏＰ−Ｇ）は、単独または組み合わせて、好適な局所の医薬製剤中に調製され、ＨＳＶ−感染個体の皮膚病変に適用される。記載された該化合物、ＡＣＶ−ＭＰ、ＡＣＶ−ＤＰ、ＡＣＶ−ＤＰ−Ｇ、アシクロビルのモルホリン誘導体、およびアシクロビルのイソプロピリデングリセロール誘導体は、非−脂質、水溶性ホスフェートエステルであり、それゆえ水性基剤局所製剤中で好ましく提供される。意外にも、我々はアシクロビルのモノホスフェートが高められた局所抗−ＨＳＶ活性を示すことを発見し、他のヌクレオシドのモノホスフェート誘導体が高められた局所抗−ＨＳＶ活性を示すことを期待する。我々はまた、モノホスフェート誘導体ヌクレオシドの塩が容易に調製され、そのような塩が水性媒体、すなわちクリーム、ゲルまたは他の水性分散体中での高められた溶解性を示すことを実証した。さらに、そのような塩は、ユニーク粘膜または皮膚分散を供給するポリエチレングリコール媒体に溶解性である。同様に、他の抗単純ヘルペスヌクレオシドのモノホスフェート、ジホスフェート及び他のホスフェートエステルは、上記のように高められた局所活性を示すであろう。以下のヘルペス抗ウイルスヌクレオシドは、ホスフェートエステルのように高められた活性を示す。 1-ベータ-D-アラビノフラノシル-E-5-（2-ブロモビニル）ウラシル（ブロアビル;BV-araU）； 2'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 6'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 1-（ベータ-D-アラビノフラノシル）-5（E）-（2-ヨードビニル）ウラシル；ＳＱ３４，５１４；ＨＯＥ６０２；トリフルオロチミジン； 9-（（1,3-ジヒドロキシ-2-プロポキシ）メチル）グアニン； 5-エチル-2'-デオキシウリジン； E-5-（2-ブロモビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-（2-クロロエチル）-2'-デオキシウリジン； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードシトシン（FIAC）； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードウリジン（FIAU）；ブシクロビル（buciclovir）； 6-デオキシアシクロビル； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン； E-5-（2-ヨードビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-ビニル-1-ベータ-D-アラビノフラノシルウラシル（V-araU）； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルチミン（Ara-T）； 2'-ノル-2'デオキシグアノシン（2'NDG）； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン（ペンシクロビル（penciclovir），BRL 3912）； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルアデニン（Ara-A；ビデラビン（viderabine））これら化合物の各種ホスフェートエステルは、本質的にアシクロビルに関し以下に記載されるように調製され得る。アシクロビルホスフェートエステルの合成本発明は、アシクロビルモノ−及びジホスフェート、アシクロビルモノホスフェートモルホリデート、アシクロビルモノ−及びジホスフェートグリセロール、並びにアシクロビルモノ−及びジホスフェート１，２−イソプロピリデングリセロールの合成方法を提供するものである。アシクロビルモノホスフェートは、アシクロビルから、トオルチェン、ディー（Toorchen，D.）及びトパル、エム（Topal，M.）のカルシノジェネシス（Carci nogenesis ）4:1591-1597（1983）の方法によりモディファイされ、実施例１に例示されているヨシカワ、エム（Yoshikawa，M.）らのBull．Chem．Soc．Japan42: 3505-3508（1969）の方法に従い、調製することができる。アシクロビルジホスフェートは、他のヌクレオシドアナログの方法で、オット、ディー．ジー．（OT T,D.G.）らのAnal.Biochem.21:469-472（1967）の方法により、トリブチルアンモニウムホスフェート又はトリブチルアンモニウムピロホスフェートのいずれかをホスフェートドナーとして使用して調製できる。アシクロビルジホスフェートグリセロールの製造方法は、実施例２〜４に表されている。一般に、ヌクオシドホスフェートグリセロールは、ホスファチジルヌクレオシド類の製造方法と同様にして製造される。実施例３に記載のアプローチでは、アシクロビルホスフェートは、離脱基、例えば、モルホリンを実施例２に従い付加することにより活性化され、グリセロール−３−ホスフェートジシクロヘキシルアンモニウム塩と、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下で、縮合される。或いは、実施例４に記載のように、イソプロピリデン部分（moiety）で保護された反応性ヒドロキシル基を有するグリセロールホスフェートを、モルホリデート（morpholidate）の付加により活性化し、次いで、実施例２に記載の条件下でアシクロビルモノホスフェートと縮合させる。各種のアシル鎖（acyl chains）を含む数多くのアシクロビル−ジホスフェート−ジグリセリド（ＡＣＶ−ＤＰ−ＤＧ）が、過去において、適当なジアシルホスファチジン酸モルホリデート（ＤＡ−モルホリデート）とアシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）とを縮合することにより、製造された。該操作が実施され得る方法は、アグラノフ、ビー（Agranoff，B.）及びスオミ、ダブリュー（Suomi,W.）、B iochem.Prep. 10:47-51（1963）により記載されている。これに代えて、”リポヌクレオシド合成（Liponucleotide Synthesis）”なる名称の米国特許出願第０７／７０６，８７３号及びホング（Hong）らの英国特許出願第２，１６８，３５０号に記載されているように、ヌクレオシドモノホスフェートのモルホリデートを製造し、ホスファチジン酸と縮合させる。上記化学的方法は、一般に、本発明の化合物の製造への一般的な適用として開示されている。ときおり、反応は、開示された範囲内の各化合物に、記載されたようには適用できないかも知れない。このことが生じる化合物は、当業者により、容易に判別できる。このような全ての場合、反応は、当業者に公知の慣用されている修飾、例えば、妨害する基の適当な保護、代替的な慣用されている試薬への変更、又は反応条件の常套的な変更により、首尾良く行うことができる。或いは、本明細書又はその他の慣用されている他の反応も、対応する本発明化合物の調製に適用することができる。全ての製法において、全ての出発物質は公知であるか又は公知の出発物質から容易に調製できる。特に断らない限り、全ての部及びパーセンテージは、重量基準である。ＡＣＶ−ＭＰ、ＡＣＶ−ＤＰ、ＡＣＶ−ＭＰ−グリセロール、ＡＣＶ−ＤＰ− グリセロール、ＡＣＶ−ＭＰ−イソプロピリデングリセロール、及びＡＣＶ−ＤＰイソプロピリデングリセロールを包含する本発明のアシクロビル誘導体は、アシクロビル耐性ＨＳＶ−１感染（infections）のヘルペス性病変（herpetic le sions）を局所的に治療するのに特に有効であることが見いだされた。実施例７は、培養細胞の野生型分離株（wild type isolates）及び実験室のＨＳＶ株の感染が、アシクロビル、アシクロビルモノホスフェートを用いて同様の結果で治療され得ることを示す（実施例７；図１）。Ｗｉ３８線維芽細胞中でのこれらのウイルス感染のために、アシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートの両者は約１または２μＭ濃度の同じＩＣ₅₀を有する。しかしながら、同じ培養細胞系が、アシクロビルをアシクロビルモノホスフェートに変換するのに必要なチミジンキナーゼを欠くウイルスのアシクロビル耐性株、ＨＳＶ−ＤＭ．２１で感染されると、アシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートはウイルスプラークの数の減少に無効である（実施例７；図２）。アシクロビル耐性皮膚ＨＳＶ−１感染に関するアシクロビルホスフェートエステルの効力は、培養細胞に関する上記のインビトロデータの観点から驚くべきものである。アシクロビル耐性ＨＳＶ−１で感染されたマウスのヘルペス性病変に水性クリーム中で適用されるアシクロビルホスフェートエステルは、そのような病変数の減少において、元来のアシクロビルよりも実質的により有効である（実施例９；図３及び４）。従って、これらの結果から見ると、アシクロビル及びアシクロビルホスフェートのインビトロでの取り込みは、局所適用ローションとしてインビボよりも異なる作動様式で進行すると考えられる。ヌクレオシドアナログホスフェートの局所製剤上記の本発明のヌクレオシドアナログ誘導体は、皮膚科の使用に有用で好都合なように、当業者に公知の各種製剤中に混合することにより局所使用のために調製することができる。該ヌクレオシドアナログ誘導体は、水溶性であり、従って水溶液、油中水型エマルジョン、または水性クリームは高度に望ましい製剤である。アシクロビル及び他のヌクレオシドモノホスフェートの水溶性は、ナトリウム、カリウム、アンモニウムまたは水素のような塩の調製により高めることができる。特に好適な製剤において、有効成分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）溶剤（vehicle）中で調製される。或いは、有効成分は、賦形剤または担体としてデンプンまたはタルクのような不溶性粉末を用いて乾燥粉末製剤中で局所的に適用することもできる。該溶剤は、幾つかの局所製剤の重要な成分である。というのは、それは浸透を高め、作用の持続時間を延長し、または適用部位の要求を満たすように選択することができるからである。例えば、手のひらまたは足の裏のような身体の硬い部分に適用する製剤は、ジメチルスルホキシドプロピレングリコールまたはアゾン^TMのような浸透促進剤を含むことができる；粉末製剤は、股、肘の内側（inne r elbow）あるいは指または足先の間のような擦れ合う部分（intertriginous zo ne）に適用するのに選択することができる。該製剤はまた、活性な抗ウイルスアシクロビル誘導体の除放性を与えるように当業者に公知の各種有機ポリマーまたは他の組成物を含むように製造することができる。適当な局所製剤の多くは、全ての薬化学者に公知の処方集：Remington's Phar maceutical Sciences，第１５版、１９７５、Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania 1804 2（Chapter 87：Blaug Seymour）中に見出すことができる。これらの処方は、例えば粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、リピッド、無水吸収基剤（anhydrous absor ption base）、水中油型または油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（各種分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、カーボワックスを含む半固形混合物を含む。本発明の局所製剤中の有効成分の濃度は、約０．０１ｇｍ％〜１００ｇｍ％；好ましくは約０．１ｇｍ％〜５０ｇｍ％；最も好ましくは約１ｇｍ％〜１５ｇｍ％である。該製剤は、上記の処方集に記載されるように、当業者によく知られた皮膚の浸透及び治癒の促進を助ける他の薬剤の有効濃度をさらに含むことができる。本発明の活性なホスフェートエステルを含む局所製剤の効力は、当業者に公知の従来の試験方法を用いて評価することができる。例えば、特に迅速な方法は、 Ellis M．ら，Antimicrobial Agents and Chemotherapy 33:304-310（1989）により記載されたマウスの”口顔モデル（orofacial model）”である。該試験系では、乱切され、鼻（snout）上に接種されたＨＳＶの病原は、免疫無防備状態の宿主中の皮膚ＨＳＶ感染の疾患サイクルの妥当なモデルであるように示されてきた。該製剤は、冒された皮膚のヘルペス性病変に繰り返し；例えば１日に１回、２回、または数回適用することができ、該治療は、治癒が達成されるまで数日間にわたることができる。毒性及び刺激の発生のリスクは最小である。さらに詳述することなく、当業者であれば上記の記載を用い、本発明を最大の範囲まで利用することができると信じる。本発明は、以下の実施例を用いて以下により詳細に記載されるが、以下に記載された方法は全て本発明の範囲内の方法に適用することができ、本発明は与えられた実施例に限定されることはない。従って、以下の好適な実施態様は、単なる例示と解釈され、どのような方法においても開示の残りを限定するものではない。実施例Ｉアシクロビルヌクレオシド誘導体のリン酸化我々は以下の方法によってアシクロビルヌクレオシド誘導体を製造した。保護されていないアシクロビルは、トリメチルホスフェート（（ＣＨ₃Ｏ）₃ＰＯ）中ＰＯＣｌ₃と反応させ、本質的にヨシカワら（Yoshi kawa et al.）Tetrahedron Letters 50：5065-5068（1967）及びヨシカワエム、カトウら（Yoshikawa M.,Kato et al）Bull Chem．Soc，Japan42：3205-3208 （1967）に記載されたように行った。た。冷却した（０℃）２ＭＰＯＣｌ₃の３００−４００ｍｌのトリメチルホスフェート溶液に、反応温度を０℃〜５℃の間に一定に保ちながら、アシクロビル（１Ｍ）を攪拌しながら滴下した。反応の進行は、ＭｏｎｏＱＨＲ５／５陰イオン交換カラム（ファルマシア、ウプサラ、スウェーデン（Pharmacia，Uppsala，Sweden））を用いたＨＰＬＣによってモニターした。典型的には、５μｌの反応混合物を水酸化ナトリウム水溶液で中和し（最終ｐＨ７）、カラムに注入した。溶出は以下のようにして行った：水での洗浄、アシクロビルモノホスフェートを溶出する０．１Ｍ炭酸アンモニウムＮＨ₄ＨＣＯ₃での溶出、続いて、より高度にリン酸化された生成物を溶出する０．１−０．６ＭＮＨ₄ＨＣＯ₃直線勾配。反応は、この方法に従えば、４５〜７５分で殆ど完了し、反応生成物を加水分解し最終ｐＨ７になるよう２倍容量の水酸化ナトリウム水溶液で中和した。生成化合物の精製は、反応混合物の分析のために上記に記載した方法に従って行った。この方法によって、０．８モルのアシクロビルモノホスフェートが製造され、同じ溶出条件を用いてＱセファロースファーストフローカラム（Q Sephar ose fast flowcolimn）で精製した。収率は、水からの繰り返しの凍結乾燥後８０％〜９６％の間で変化した。展開システム１−プロパノール／２５％ＮＨ₃／Ｈ²Ｏ（容量で２０：２０：３）を用いたＴＬＣ分析（シリカ（Silica）60/F254プレート、メルク（Merck））は、単一のＵ．Ｖ．及びＰｉ陽性スポットを示した。実施例IIアシクロビル−モノホスホモルホリデートの製造アシクロビル−モノホスフェート（５ｍｍｏｌ）及びモルホリン（２０ｍｍｏｌ）をｔ−ブタノール（５０ｍｌ）に懸濁させ、緩やかな還流下加熱して、１時間以上かけてｔ−ブタノール（５０ｍｍｏｌ）に溶解したＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、２０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を還流下１２〜３６時間攪拌し、蒸発乾固した。残渣をエーテルで摩砕し、同溶媒でデカンテーションによって洗浄した。生成物をメタノール−エーテル混合物からの再結晶によって精製した。実施例III アシクロビル−モノホスホモルホリデートからのｓｎ−グリセロ−３−ジホスホ−アシクロビルの製造実施例２に記載のように製造したアシクロビルモノホスホモルホリデート（２ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン（２０ｍｌ）に溶解させ、減圧下蒸発乾固した。ピリジンへの残渣の溶解及び蒸発の過程を３回繰り返し、化合物からの僅かな水を除去した。グリセロール−３−ホスフェートジ−モノシクロヘキシルアンモニウム塩（３ｍｍｏｌ）を、乾燥した残渣に加え、混合物を２０ｍｌのピリジンに溶解させ不活性雰囲気下６０℃で１２−３６時間攪拌した。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をエーテルで滴定し（titrated）、得られた固体を、重炭酸アンモニウム（１０ｍｍｏｌから３００ｍｍｏｌ、各々５００ｍｌ）の直線勾配を用いて、ＤＥＡＥセファデックスカラム（Sephadex column）（２．５ｃｍ×３０ｃｍ）でのイオン交換クロマトグラフィーによって精製した。（ＴＬＣ及び分析用ＨＰＬＣを用いて同定した）純粋な生成物を含む画分をまとめ、凍結乾燥して表題の化合物を得た。実施例IV １，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−モノホスホモルホリデートからのｓｎ−グリセロ−３−ジホスホ−アシクロビルの製造Ａ．１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェートの製造オキシ塩化リン（２５ｍｍｏｌ）を、３０分かけて、０℃に冷却した１，２− イソプロピリデン−グリセロール（２０ｍｍｏｌ）（シグマ、セントルイス（Si gma，St．Louis）、ＭＯ）及びトリエチルアミン（１００ｍｍｏｌ）の混合物に、滴下した。混合物を１０〜９０分間０℃で攪拌後。水（１ｍｌ）を加えて反応を停止した。混合物をその後クロロホルム（５００ｍｌ）溶解させ、水で洗浄（３×１００ｍｌ）した。水洗浄溶液を集めて、クロロホルム（５０ｍｌ）で抽出して戻し凍結乾燥させた。生成物をこれ以上精製せずに続く反応のためにすぐに用いた。Ｂ．１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−モノホスホモルホリデートの製造実施例２中アシクロビルホスホモルホリデートの製造において記載された方法に従って、（Ａ）に記載の方法で製造した１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェートを、モルホリンと縮合して１，２−イソプロピリデン −ｓｎ−グリセロ−３−モノホスホモルホリデートを製造した。実施例２に記載の条件下での、中間体化合物、１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−モノホスホモルホリデートのアシクロビルモノホスフェートとの反応で、１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−モノホスホモルホリデートを得た。１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−ジホスホ−アシクロビル（１ｍｍｏｌ）を、５０〜９０％酢酸水溶液に溶解し、室温で４〜１２時間攪拌し、粗製のグリセロ−３−ジホスホ−アシクロビル生成物を上記のように精製した。実施例Ｖｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−アシクロビルの製造１，２−イソプロピリデン−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート１ｍＭ（実施例４Ｂのように製造）及びアシクロビル（１ｍＭ）を乾燥したピリジン（１０ｍｌ）及びＤＣＣ（４ｍｍｏｌ）中に懸濁させた。溶解しているピリジン（４ｍｌ）を加え、混合物を２５℃〜６０℃で１２〜７２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで滴定（titrated）した。粗製の生成物を実施例３に記載したイオン交換クロマトグラフィーで精製した。その後イソプロピリデン−保護基を、酢酸水溶液で処理することにより生成物から除去し、標題の化合物を得た。別に、標題の化合物を、縮合剤として２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロライド（ＴＰＳ−Ｃｌ）を用いて製造した。実施例VI アシクロビルジホスフェートジパルミトイルグリセロールのアルカリ加水分解によるアシクロビルホスフェートエステル混合物の製造アシクロビル−ジホスフェート−ジパルミトイルグリセロール（１ｍｍｏｌ）を、クロロホルムに溶解させ、メタノール性の水酸化ナトリウム（２，１ｍｍｏｌ）を加えた。反応を２０〜９０分間行い、その進行をＴＬＣでモニターした。反応の完了後、ダウエックス（Ｄｏｗｅｘ） −５０Ｘ−２（Ｈ＋）を反応混合物に加え、ｐＨを７に調整した。樹脂を濾過によって分離し、濾過物を凍結乾燥して粗製の生成物を実施例１に記載のように精製した。実施例VII ＨＳＶのアシクロビル−耐性ＴＫ突然変異株（ＤＭ．２１）でのアシクロビルモノホスフェートの抗ウィルス効果の欠如野生型の単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）株又はＨＳＶの突然変異株（ＤＭ．２１）に感染したＷｉ−３８線維芽細胞の分離培養物を、それぞれ、アシクロビル又はアシクロビルモノホスフェートで処理した。ＤＭ．２１突然変異株は、通常ＡＣＶをＡＣＶ−ＭＰに転換させるチミジンキナーゼ酵素を欠いており、従って、アシクロビルには耐性がある。ＨＳＶ−１での結果を図１に示し、ＨＳＶ− ＤＭ．２１での結果を図２に示す。ＩＣ₅₀は、ウィルスのプラーク形成を５０％阻害する抗ウィルス剤の濃度である。野生型分離株及び単純ヘルペスウィルスの実験室株（ＨＳＶ−１）においては、アシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートは、０．１μＭのＩＣ₅₀を有している。対照的に、本アッセイにおいて、ＨＳＶ突然変異株に対しては、アシクロビル及びアシクロビルモノホスフェートは共に、１００μＭを越えるＩＣ₅₀を有している（図２）。インビトロでのこれらの結果に基づいて、チミジンキナーゼ欠如又は他のＨＳＶ突然変異株に感染した動物に、局所的に投与しても、アシクロビルモノホスフェートが、有意な活性を示すとは、誰も予想できない。実施例VIII ＨＳＶのアシクロビル−耐性株に感染したマウスでのアシクロビルホスフェートエステルの抗ウィルス効果ＨＲＳ／Ｊタイプのマウスに、エリスエムら（Ellis，M．et al.,）Antimic robial Agents and Chemotherapy 33（3）：304−310（1989）に記載の鼻乱切法（snout scarification method）を用いて皮膚に感染させた。簡単には、１０匹のマウスの群に、２５−ゲージ（gauge）の針を用いて乱切し、次いで希釈されたウィルス中に浸した綿を先に付けた（cotton-tipped）アプリケーターで１０秒間のこすることにより、軽いエーテル麻酔下で、鼻に接種した。感染に使用したウィルスは、エリスエムら（Ellis，M．et al.,）に言及されているＴＫ欠損株（ＴＫ^D）であった。感染３時間後、動物を局所的に、上記で述べたエリス（Ellis）文献に従って、１日３回４日間、水性クリーム（ＡＣ）のアシクロビル又はアシクロビルホスフェートの製剤で処置した。結果を図３に示す。５ｇｍ％のアシクロビルを含む製剤では活性があった。対照的に、５ｇｍ％の８０％アシクロビルモノホスフェート及び他の２０％のアシクロビルホスフェートエステル（アシクロビルジホスフェート及びアシクロビルジホスフェートグリセロール）混合物を含む製剤は、数匹のマウスでのヘルペス性の病変の生じたのみで、優れた活性を示した。全ての病変は全ての群において第８日までに治癒した。上記の方法を、より毒性の株であるＴＫ−変化（altered）ＨＳＶ−１ウィルス（ＴＫ^A、Ellis上記）を用いて５日間の連続した処置によって繰り返した。ＴＫ^Dウィルスとは異なり、ＴＫ^Aは未処理のマウスにおいて致命的である。５ｇｍパーセントアシクロビルの処置は、ほとんどの動物が生存し第１４日までに実質上改善されて、適度に病変スコア（scores）を減少させた。しかしながら、同濃度でのホスフェートエステルでは、図４に示したように、全ての病変が９日後に消散し、全ての動物が生存し、病変スコアにおいて劇的な改善がみられた。実施例IX アシクロビル耐性野生型ＨＳＶ−１で感染したマウスでのアシクロビルモノホスフェートの抗ウィルス効果アシクロビル感受性野生型ＨＳＶ−１及びアシクロビル誘導体としてアシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）を含有する製剤を用いて、実施例８の方法を繰り返した。２種のクリームを処方した、１つは、水性クリーム中１４．５ミリモル／１００ｍｌで存在するＡＣＶ−ＭＰを含むもの、他方は、２２．２ミリモル／１００ｍｌで存在するアシクロビルを含むもの（共に５ｇｍ％、しかしながら、ホスフェート基の添加のため、モノホスフェート中に存在するアシクロビルのモル数は、正味のアシクロビルと比較して減少している。）である。処置を感染後２４時間で開始し、１日４回４日間続けた。１０匹の未処理のマウスは第５日までに段階４病変を生じ、第１４日までに全て死亡した（図５）。アシクロビルモノホスフェート処置動物は、病変を生じず、１０匹の動物中１０匹とも生存した（図５）。アシクロビル処置群において、数匹の動物は軽い病変を生じたが第７−９日に消散した；１０匹の動物中９匹は生存した。この研究から、野生型のＨＳＶ−１感染における病変を防ぐのに、低い投与量（１４．５ｍｍｏｌ／１００ｍｌ）でのＡＣＶ−ＭＰが、アシクロビル（２２．２ｍｍｏｌ／１００ｍｌ）よりもより効果的であることが判る。実施例Ｘアシクロビル耐性ＨＳＶ−１で感染したマウスでのアシクロビルモノホスフェートの抗ウィルス効果アシクロビル誘導体としてアシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）のみを含有する製剤を用いて、実施例８の方法を繰り返した。処置を感染後３時間で開始し、感染の日は２回、その後は１日３回第４日まで行った。図６に示すように、アシクロビル耐性（ＴＫ変化）ＨＳＶ−１に感染した動物における病変スコアを減少させるのに、１４．５ｍｍｏｌ／１００ｍｌのＡＣＶ−ＭＰが、２２．２ｍｍｏｌ／１００ｍｌのアシクロビルよりも、明らかにより効果的である。コントロール及びアシクロビル処置群において、１０匹のマウスの内８匹が実験第１４日で生存し、それに対し、アシクロビルモノホスフェート処置においては、１０匹中１０匹が生存していた。実施例ＸＩアシクロビル耐性ＨＳＶ−２で感染したモルモットのアシクロビルモノホスフェートの抗ウィルス効果我々は水性クリーム（ＡＣ）中のアシクロビルモノホスフェート（ＡＣＶ−ＭＰ）を試験し、原発性性器ヘルペス（primary genital herpes）の処置において、ポリエチレングリコール中５％アシクロビル（ＡＣＶ−ＰＥＧ）よりもより効果があるかどうか決定した。特に、ＡＣＶ−耐性ＨＳＶ−２によって起こるモルモットの性器ヘルペス感染を検討した。加えて、２種の担体システム：水性クリーム（ＡＣ）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）におけるアシクロビル処置を比較した。実験はプラセボーコントロールし、感染していない動物を各々のＡＣＶ調製物で処置し、皮膚及び膣の刺激を評価した。原発性性器感染（primary genital infection）の結果ＨＳＶ−２を備えた若い（weanling）モルモットの膣内接種は、膣道（vagi nal tract）中のウイルスの初期複製とそれに続く外部水泡病変の発生により特徴付けられる。ウイルス力価のピークは、膣道中では第１日から第３日であり、第７〜１０日までに徐々になくなった。外部水泡病変は第４日に最初に現れ、ピーク病変発病度が第６−８日であり、病変は第１５−１８日までに徐々に治癒した。動物は、変化したチミジンキナーゼを有しかつインビトロでのＡＣＶ処置に耐性のＨＳＶ−２株１２２４７で接種された。２５０−３００ｇの体重の雌のハートレイ（Hartley）ハムスター（Charles River，Kingston，NY）が、最初に膣を綿棒で掃除し膣の分泌物を除去した。１時間後に、該動物に２．４×１０⁴のプラーク形成単位（ｐｆｕ）を膣内に接種した。接種はウイルスの浸み込んだ綿棒を膣道内に挿入し、約６回、回転することにより行った。１０匹のハムスターの群が、膣内的及び外部性器皮膚上に両方とも各調製物の０．１ｍｌ（動物の処置当たり合計０．２ｍｌ）処置した。動物は、ウイルス接種後２４時間から始めて毎日３回７日間処置された。３匹の未感染動物は同じスケジュールで各調製物で処置し、局所毒性及び刺激を評価した。膣道内のＨＳＶ−２複製に関する各種処置の効力を測定するため、膣分泌物の綿棒をＨＳＶ−２接種後一次感染中の第１、３、５、７及び１０日に得た。綿棒は２．０ｍｌの培地を含む試験管中に置かれ、ボルテックスし、ＨＳＶの滴定まで−７０℃で凍結した。全てのサンプルが集められると、それらは順次解凍及び希釈され、ＨＳＶ−２の力価が微小滴定ＣＰＥアッセイ中でウサギ腎細胞を用いて測定された。我々はまた治療効力を測定するために外部性器病変の成長及び発病度を測定した。病変の発病度は、０−５＋のスコアで等級付けした。病変の存在または不在及び発病度は、ウイルス接種の後１９日間記録した。感染率、ピーク病変スコア、ピークウイルス力価、ウイルス力価−日数曲線の下の面積、およびＰＢＳプラセボ処置とＰＥＧ薬物処置、或いはＡＣプラセボ処置とＡＣ薬物処置の動物間の病変スコア−日数曲線が、マン−ホワイトニーＵランク合計試験（Mann-Whitney U rank sum test）を用いて比較した。０．０５以下のｐ−値は、有意であると考えられた。膣ウイルス複製に関するＡＣＶ調製物を用いた局所処置の効果は、表１に示される。ＡＣＶ−ＭＰ調製物（５％ＡＣＶ−ＭＰ−ＰＥＧまたは５％ＡＣＶ−ＭＰ −ＡＣ）での処置のみが曲線下のウイルス力価−日数面積（ＡＵＣ）及び平均ピークウイルス力価を有意に減少させた。病変の発生に関するＡＣＶ調製物を用いた局所試験の効果は、表IIに示される。ＡＣＶおよびＡＣＶ−ＭＰ調製物は両方とも、適当なプラセボ処置群と比較したときに、病変スコア−日数ＡＵＣを有意に変化させた。しかしながら、５％ＡＣＶ−ＭＰ−ＰＥＧによる治療のみが有意に平均ピーク病変スコアを減少させた。ＡＣＶ−耐性ＨＳＶ−２性器ヘルペス感染のハムスターモデルにおいて、ＡＣＶ−ＭＰのみが有意に膣のウイルス複製を減少させた。また、ＡＣＶ−ＭＰ−ＰＥＧ処置群は、最も低いウイルス力価−日数及び平均ピーク力価値を有していた。ＡＣＶ−ＭＰ及びＡＣＶは両方とも病変の発生を変化させた一方、ＰＥＧ中の薬物はＡＣ中のものよりも低いスコアを有していた。さらに、ＡＣＶ−ＭＰ−ＰＥＧを受けた動物は、最も低い病変スコア−日数及び平均ピーク病変スコアを有していた。さらに、該研究を通して、未感染ＡＣＶ調製物処置動物で、性器領域のいかなる刺激及びいかなる他の毒性の兆候もなかった。これらの結果は、ＨＳＶ−２性器ヘルペスの処置におけるアシクロビルモノホスフェートの強力な活性を示す。さらに、アシクロビルモノホスフェートを分散したポリエチレングリコールは、病変の処置に最良の効力を示した。実施例ＸII アシクロビルジホスフェトの活性アシクロビルジホスフェート（ＡＣＶ−ＤＰ）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸIIIアシクロビルモノホスフェートグリセロールの活性アシクロビルモノホスフェートグリセロール（ＡＣＶ−ＭＰ−Ｇ）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸIVアシクロビルジホスフェートグリセロールの活性アシクロビルジホスフェートグリセロール（ＡＣＶ−ＤＰ−グリセロール）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸＶアシクロビルモノホスフェートモルホリデートの活性アシクロビルモノホスフェートモルホリデート（ＡＣＶ−ＭＰ−モルホリデート）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸVIアシクロビルモノホスフェートイソプロピリデングリセロールの活性アシクロビルモノホスフェートイソプロピリデングリセロール（ＡＣＶ−ＭＰ −ｉｓｏＰ−Ｇ）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸVIIアシクロビルジホスフェートイソプロピリデングリセロールの活性アシクロビルジホスフェートイソプロピリデングリセロール（ＡＣＶ−ＤＰ− ｉｓｏＰ−Ｇ）のみをアシクロビル誘導体として有する製剤を用い、実施例８の手法を繰り返す。ＡＣＶのみのそれよりも優れた効力が観察される。実施例ＸVIII アシクロビルモノホスフェート及び塩の溶解性アシクロビルモノホスフェートの各種塩が、以下のようにして溶解性について試験された：２ｍｌの蒸留水を３つの１０ｍｌビーカー（各ビーカーはマグネチックスターリングバーを有する）中に各々置いた。各個々のフラスコにおいて、カリウム、ナトリウム、ナトリウム／アンモニウム、及びＨ⁺（遊離酸）から選ばれるアシクロビルモノホスフェート塩を、飽和溶液が形成されるまで加えた。各飽和塩溶液は重力濾過した。アシクロビルモノホスフェートナトリウム／アンモニウム及び遊離酸塩溶液は、ワットマン（Whatman）Ｎｏ．４濾紙で濾過し、清澄溶液を得た。カリウムおよびナトリウム塩溶液は、ワットマンＮｏ．１濾紙で濾過し、各々僅かにオパールのような光を放つ溶液を得た。各飽和塩溶液１ｍｌをピペットで予め重量測定された丸底フラスコに移し、該溶液を乾燥させた。全ての液体を蒸発した後、丸底フラスコは再度重量測定され、ミリリットル当たりに存在するアシクロビルモノホスフェート塩のミリグラム数を容易に見出した。以下の表は、アシクロビルに関して上記のように調製した各種の塩の溶解性を示す。アシクロビルモノホスフェートの塩形成を通して、溶解性は劇的に高められることは、表IIIに示される結果を考慮して認識されるであろう。他のヌクレオシドモノホスフェートも同様に高められた溶解性を示すことが期待される。このように、塩の高められた溶解性のために、アシクロビルモノホスフェートを大量に含む局所組成物を処方することが可能である。当業者に明らかであるような開示された発明の各種の修飾、改良及び応用があるであろう。本応用は、そのような実施態様をカバーすることを意図する。本発明は、ある好適な実施態様の枠組みの中で記載されたが、該開示の全範囲は、以下の請求の範囲を参照してのみ判断されることが意図される。

Claims

【特許請求の範囲】１．有効濃度の抗ヘルペスヌクレオシドアナログホスフェートエステルまたはその混合物またはその塩を、局所使用のために好適な薬学的担体中に含む薬学的製剤。２．前記ヌクレオシドアナログがアシクロビルである請求項１の製剤。３．前記ヌクレオシドアナログホスフェートエステルがアシクロビルモノホスフェートである請求項１の製剤。４．前記ヌクレオシドアナログホスフェートエステルがアシクロビルジホスフェートである請求項１の製剤。５．前記抗ヘルペスヌクレオシドアナログが 1-ベータ-D-アラビノフラノシル-E-5-（2-ブロモビニル）ウラシル； 2'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 6'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 1-（ベータ-D-アラビノフラノシル）-5（E）-（2-ヨードビニル）ウラシル；ＳＱ３４，５１４；ＨＯＥ６０２；トリフルオロチミジン； 9-（（1,3-ジヒドロキシ-2-プロポキシ）メチル）グアニン； 5-エチル-2'-デオキシウリジン； E-5-（2-ブロモビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-（2-クロロエチル）-2'-デオキシウリジン； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードシトシン（FIAC）； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードウリジン（FIAU）；ブシクロビル； 6-デオキシアシクロビル； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン； E-5-（2-ヨードビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-ビニル-1-ベータ-D-アラビノフラノシルウラシル； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルチミン； 2'-ノル-2'デオキシグアノシン； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルアデニンからなる群から選ばれる請求項１の製剤。６．前記ヌクレオシドアナログホスフェートエステルが塩の形態である請求項１〜５のいずれかの製剤。７．前記塩が、ナトリウム、カリウム、アンモニウム及び水素塩から選ばれる請求項６の製剤。８．前記薬学的担体が水性クリーム及びポリエチレングリコールからなる群から選ばれる請求項１の製剤。９．請求項１に記載の製剤をヘルペスウイルス感染動物の皮膚病変に適用することを含むヘルペスウイルス感染の局所治療方法。 10．前記ヌクレオシドアナログホスフェートエステルがアシクロビルモノホスフェートである請求項９に記載の方法。 11．前記ヌクレオシドアナログホスフェートエステルがアシクロビルジホスフェートである請求項９に記載の方法。 12．前記感染が、アシクロビル耐性のヘルペスウイルス株による請求項７の方法。 13．前記ウイルスの前記アシクロビル耐性がチミジンキナーゼをコードするウイルス遺伝子の変化または欠損による請求項１２の方法。 14．粘膜または皮膚のヘルペスウイルス感染の治療のための医薬の調製における抗ヘルペス抗ウイルスヌクレオシドアナログのホスフェートエステルの使用。 15．抗ウイルスヌクレオシドアナログがアシクロビルである請求項１４に記載の使用。 16．該抗ウイルスヌクレオシドアナログが 1-ベータ-D-アラビノフラノシル-E-5-（2-ブロモビニル）ウラシル； 2'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 6'-フルオロカルボサイクリック-2'-デオキシグアノシン； 1-（ベータ-D-アラビノフラノシル）-5（E）-（2-ヨードビニル）ウラシル；ＳＱ３４，５１４；ＨＯＥ６０２；トリフルオロチミジン； 9-（（1,3-ジヒドロキシ-2-プロポキシ）メチル）グアニン； 5-エチル-2'-デオキシウリジン； E-5-（2-ブロモビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-（2-クロロエチル）-2'-デオキシウリジン； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードシトシン（FIAC）； 1-（2-デオキシ-2-フルオロ-ベータ-D-アラビノフラノシル）-5-ヨードウリジン（FIAU）；ブシクロビル； 6-デオキシアシクロビル； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン； E-5-（2-ヨードビニル）-2'-デオキシウリジン； 5-ビニル-1-ベータ-D-アラビノフラノシルウラシル； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルチミン； 2'-ノル-2'デオキシグアノシン； 9-（4-ヒドロキシ-3-ヒドロキシメチルブト-1-イル）グアニン； 1-ベータ-D-アラビノフラノシルアデニンからなる群から選ばれる請求項１４に記載の使用。 17．該ホスフェートエステルがモノホスフェートである請求項１４〜１６のいずれかに記載の使用。 18．該ホスフェートエステルがジホスフェートである請求項１４〜１６のいずれかに記載の使用。 19．該ヌクレオシドアナログホスフェートエステルが水溶性塩の形態である請求項１４〜１８のいずれかに記載の使用。 20．該ウイルス感染が１型または２型の単純ヘルペスウイルスである請求項１４に記載の使用。