JPH08505393A

JPH08505393A - 誘導体化カルシトニン

Info

Publication number: JPH08505393A
Application number: JP6516111A
Authority: JP
Inventors: ラブロー，ビレンダー; 富和佐々木
Original assignee: University of Washington
Current assignee: University of Washington
Priority date: 1992-12-31
Filing date: 1993-12-30
Publication date: 1996-06-11
Also published as: NZ261052A; KR100310280B1; EP0677062A1; AU673237B2; NO952608L; CA2153071C; FI953255A; FI953255A0; WO1994015962A3; NO952608D0; WO1994015962A2; KR960700273A; AU5962994A; CA2153071A1

Abstract

(57)【要約】誘導体化カルシトニン分子、誘導体化カルシトニンを含んで成る医薬組成物、及びその誘導体化カルシトニンを使用して患者における血清カルシウムを減少させる方法を開示する。これらの分子は、カルシトニンを環式、多環式又は複素環式部分と併合することにより形成される誘導体化されたアミノ末端を特徴とする。これらの分子のマルチマー形態も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】誘導体化カルシトニン発明の背景骨は、動的な組織であり、そして大人の骨格における恒常性は、新たな骨の形成と先に形成された骨との間の平衡を要求する。カルシトニン、すなわち、哺乳動物の甲状腺及び胸腺から分泌されるペプチド・ホルモンは、骨の恒常性の維持において重要な役割を演じている。カルシトニンは、破骨細胞、すなわち、骨再吸収を仲介する骨組織内の細胞、上にあるレセプタに結合する。カルシトニンは、その破骨細胞を固定化し、このようにその血清中へ骨により放出されるカルシウムの量における結果として生じた減少により骨再吸収を阻害する。骨再吸収のこの阻害は、骨粗しょう症のための治療としてのカルシトニンの使用により行われてきた。カルシトニンは、哺乳動物の胸腺及びより下等な脊椎動物の鯉後部（ultimobr anchial）腺内で生じる。公知の天然カルシトニンは、アミド化カルボキシ末端を、そしてその１と７位にあるシステイン残基間に分子内ジスルフィド結合もつ全32アミノ酸ポリペプチドである。現在、サケ・カルシトニンが、骨粗しょう症の治療のためにヒト・カルシトニンを超えて好まれている。サケ・カルシトニンのための全世界マーケットは、年間$500百万を超えている。サケ・カルシトニンは、カルシトニンのヒト形態よりも骨再吸収を休止することにおいてかなり有効であることが示されている。なぜサケ・カルシトニンが骨粗しょう症の治療においてヒト・カルシトニンよりも有効であるかについての幾つかの仮説が存在する。これらの仮説は：１）サケ・カルシトニンが分解に対してより抵抗性である；２）サケ・カルシトニンがより低い代謝的クリアランス速度（MCR）をもつ；３）サケ・カルシトニンが僅かに異なる立体配置をもつことができ、骨レセプタ部位についてのより高いアフィニティーをもたらす、を含む。ヒトにおける骨粗しょう症の治療のためのサケ・カルシトニンの使用に関連する利点にもかかわらず、欠点もまた存在する。サケ・カルシトニンは、注射により投与され、この方法は、多くの患者がいやがるものである。さらに、いくらかの患者は、非ヒト・カルシトニンに対する抗体を顕出する。それ故、より安価で、投与するのにより便利で且つ非免疫原性である骨再吸収の有効な阻害剤であるサケ、ヒト又は他のカルシトニンの新たなアナログが必要である。発明の要約本発明の目的は、低カルシウム血症活性を強化され、そして/又はインビボにおける半減期を延長された新規のカルシトニン誘導体を提供することである。本発明のさらなる目的は、新規のカルシトニン誘導体を含んで成る医薬組成物、並びにその医薬組成物の投与により患者における血清カルシウムを減少する方法を提供することである。１つの態様においては、本発明は、から成る群から選ばれた化合物｛ここで、Ｒが場合により環当たり１又は２の環窒素原子を含む置換又は非置換ビアリール；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の複素原子を含む置換又は非置換複素環アルキル；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の環複素原子を含む置換又は非置換bis-複素環アルキル；又はＮ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１〜４の複素原子を含む置換又は非置換複素アリールである。｝、及び医薬として許容されるそれらの塩を提供する。他の態様においては、本発明は、式R-N-CT｛式中、CTがヒト、サケ、ウナギ、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ及びニワトリのカルシトニン及び生物学的に活性な誘導体並びにそれらの変異体からなる群から選ばれたカルシトニン、又はそれらの医薬として許容される塩であり；Ｎがアミド結合であり；そしてＲが場合により環当たり１又は２の環窒素原子を含む置換又は非置換ビアリール；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の環複素原子を含む置換又は非置換複素環アルキル；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の複素原子を含む置換又は非置換bis-複素環アルキル；又はＮ，Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１〜４の複素原子を含む置換又は非置換複素アリールである。｝により表される化合物を提供する。第三の態様においては、本発明は、式X-（R-N-CT）_n｛式中、Ｘが遷移金属のイオンであり；Ｒが複素環アルキル又は複素アリール基であり；CTがヒト、サケ、ウナギ、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ及びニワトリのカルシトニン及び生物学的に活性な誘導体並びにそれらの変異体からなる群から選ばれたカルシトニン；Ｎがアミド結合であり；そしてｎ＝２又は３である。｝により表される化合物を提供する。これらの化合物の医薬として許容される塩も提供する。先に開示した化合物は、医薬組成物を製造するために医薬として許容される担体と併合される。これらの組成物は、とりわけ、患者における血清カルシウムを減少するために有用である。略号のリスト DMSO ジメチルスルホキシド BHA ベンズヒドリルアミン MBHA 4ーメチルベンズヒドリルアミン FMOC 9-フルオレニルメトキシカルボニル BOC t-ブチルオキシカルボニル Trit トリチル Bu^t t-ブチル PMC 2,2,5,7,8-ペンタルメチルクロマン-6-スルホニル BOP ベンゾトリアゾールイル-N-オキシトリスジメチルアミノホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート PyBOP ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリス-ピロリジノ・ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート PyBOrP ブロモ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート HBTU ［2-（1H-ベンゾトリアゾール-1-イル）1,1,3,3-テトラメチル・ウロニウム・ヘキサフルオロホスフェート HOBt 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール DIEA ジイソプロピルエチル・アミン Bt₃N トリエチルアミン DMF ジメチルスルホキシド HPLC 高速液体クロマトグラフィー AAA アミノ酸分析 DCM 塩化メチレン SCT サケ・カルシトニン TFA トリフルオロ酢酸 DIC ジイソルプロピル-カルボジイミド DCC ジシクロヘキシルカルボジイミド FAB-MS Fast Atom Bombardment-質量分析図面の簡単な説明図１、２及び３は、本発明の代表である化合物を使用した血清カルシウム・レベルを測定する検定の結果を表している。BP₄,₄-CT（ZP-1）は、誘導体化カルシトニン化合物であり、SCTはサケ・カルシトニンである。発明の詳細な説明本発明は、新規の誘導体化されたカルシトニン分子を提供する。これらの分子は、モノマー及びマルチマーの両方の形態で提供される。本発明の誘導体化されたカルシトニンは、より高い特異的な活性、増加された半減期、増加された安定性及び減少された免疫原性を含む、現在入手可能なカルシトニンを超える様々な利点を提供する。本発明の誘導体化カルシトニンは、誘導体化されたヒト、サケ、ウナギ、ラット、ブタ、ヒツジ及びニワトリのカルシトニンである。サケ及び、特に、ヒト・カルシトニンが好ましい。これらのカルシトニンは、生来の野性型分子から誘導されることができ、又は生物学的活性をもつカルシトニンの修飾された形態から誘導されることができる。様々な修飾されたカルシトニンが本分野において公知であり、アミノ酸の置換（例えば、米国特許第4,824,936号；第4,76 4,589号；第4,663,309号及び第4,658,014号）、欠失（例えば、米国特許第4,820 ,804号；第4,764,591号；第4,669,511号；第4,605,514号及び第4,537,716号）をもつカルシトニン並びにD-アミノ酸置換を含むカルシトニン（米国特許第4,652, 627号）を含む。用語”生物学的に活性”を、本明細書中、骨再吸収阻害活性を示すカルシトニンを意味するために使用する。低カルシウム血症活性及びcAMPのレセプタ−仲介刺激は、カルシトニンの骨再吸収阻害活性の指標である。本発明に係る分子は、カルシトニンを、場合により環当たり１又は２の環窒素原子を含む置換又は非置換ビアリール；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の環複素原子を含む置換又は非置換複素環アルキル；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の複素原子を含む置換又は非置換bi s-複素環アルキル；及びＮ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１〜４の複素原子を含む置換又は非置換複素アリールから成る群から選ばれた環式、多環式又は複素環式部分であってアミド結合を介してそのカルシトニンのＮ-末端システイン残基に結合されているものと、併合することにより形成される誘導体化されたアミノ末端を特徴とする。従って、本発明の１の態様においては、カルシトニンは、Ｎ-末端誘導体化カルシトニンを作るために上記の部分の中の１のカルボン酸と反応する。本明細書中に使用するとき、用語、環式、多環式、複素環式、複素環式アルキル及びその均等物は、環当たり３以上の原子をもつ環構造を意味するために使用される。一般的に、これらの構造は、環当たり９以下の原子、好ましくは環当たり５、６又は７原子をもつであろう。但し、12以上の環原子を含む構造を使用することもできる。用語ビアリール、複素アリール及びその均等物は、環当たり５以下の原子、好ましくは環当たり５〜８の環原子、より好ましくは５又は６の環原子をもつ芳香族環構造を意味するために使用される。本発明においては、環式、多環式、及び複素環式部分は、縮合環基当たり２〜３環を含む縮合環構造を含む。好ましい縮合環構造は、以下の構造：｛構造中、Ｘ、Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｙ、Ｙ₁、Ｙ₂及びＹ₃が個々にＣ又はＮであり、そしてＲ’が直鎖状Ｃ₁-Ｃ₈アルキル、分枝Ｃ₁-Ｃ₁₂アルキル、ニトロ、ヒドロキシ、カルボキシ、トリフルオロメチル、カルボキシアミド、スルフヒドリル、シアノ、ハロ、アルコキシ、エステル又はＨである。｝をもつビアリール部分を含む。第二群の好ましい縮合環構造は、以下の構造：｛構造中、Ｘ，及びＹ₄が個々にＣ、Ｎ、Ｏ又はＳであり、Ｘ₅、Ｘ₆、Ｙ₅、Ｙ₆ が個々にＣ又はＮである。但し、Ｘ₄がＳ又はＯであるとき、Ｘ₅はＣでなければならず、そしてＹ₄がＳ又はＯであるとき、Ｙ₅はＣでなければならず、そしてＲ ’が先に定義したものと同じである。｝を含む。第三群の好ましい縮合環構造は、以下の構造：｛構造中、ＸがＮ、Ｏ又はＳであり；ＹがＣ又はＮであり；ｎ＝１又は２；そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝をもつ複素環式アルキル部分を含む。第四群の好ましい縮合環構造は、以下の構造：｛構造中、Ｘ、Ｘ₁、Ｙ及びＹ₁が個々にＮ、Ｏ又はＳであり、そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝をもつbis-複素環式アルキル部分を含む。第五群の好ましい縮合環構造は、以下の構造：又は以下の構造：｛構造中、ＸがＣ、Ｏ、Ｓ又はＮであり；Ｙ、Ｚ及びＡが個々にＣ又はＮであり、そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝をもつ複素アリール部分を含む。カルシトニン誘導体の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、Ｘ₁及びＹ₁が個々にＣ又はＮであり、そしてＲ’が直鎖状Ｃ₁−Ｃ₈アルキル、分枝Ｃ₁−Ｃ₁₂アルキル、ニトロ、ヒドロキシ、トリフルオロメチル、カルボキシ、カルボキシアミド、スルフヒドリル、シアノ、ハロ、アルコキシ、エステル又はＨである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。このクラスの特に好ましいメンバーは、以下の化合物：の付加により修飾されたものを含む。カルシトニン誘導体の第二の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、ｎ＝１又は２；Ｘ₂がＮ、Ｏ又はＳであり；Ｙ₂がＣ又はＮであり；そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。このクラスの特に好ましいメンバーは、以下の化合物：の付加により修飾されたものを含む。カルシトニン誘導体の第三の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、Ｘ₃及びＹ₃が個々にＮ、Ｏ又はＳであり、そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。このクラスの特に好ましいメンバーは、以下の化合物：の付加により修飾されたものを含む。カルシトニン誘導体の第四の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、Ｙ₄がＯ、Ｓ又はＮであり、Ｘ₄、Ｚ及びＡが個々にＣ又はＮである。但し、Ｙ₄がＯ又はＳのときＸ₄がＮではなく；そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。このクラスの特に好ましいメンバーは、以下の化合物：の付加により修飾されたものを含む。カルシトニン誘導体の第五の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、Ｘ₅がＮであり、Ｙ₅がＣ又はＮであり、そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。このクラスの特に好ましいメンバーは、以下の化合物：の付加により修飾されたものを含む。カルシトニン誘導体の第六の好ましいクラスは、以下の式：｛式中、Ｘ₅がＮであり、Ｙ₅がＣ又はＮであり、そしてＲ’が先に定義したものと同じである。｝により表される化合物の付加により修飾されたものを含む。上記の化合物においては、式中、Ｒ’がＣＯ₂Ｈ又はＨであるものが特に好ましい。本発明に係るカルシトニン誘導体は、ペプチドの合成のために慣用に使用される固相又は溶液相の方法により合成されることができる（例えば、Merr1field， R.B．J．Amer．Chem．Soc．85：2149-2154，1963；Birr，C．Aspects of the Me rrifield Peptide Synthesis ，Springer-Verlag，Heidelberg，1978；Carpino， L.A.，Acc．Chem．Res．6:191−198，1973；Kent S．B.，Ann．Rev．Biochem．5 7:957-989，1988；Gregg et al．Int．J．Peptide ProteiｎRes．35:161-214，1 990；The Peptides，Analysis，Synthesis，Biology，Vol．1，2，3，5：Gross ，E and Meinhofer，J．eds.，Acad．Press,New York，1979；及びStewart et a l.，Solid Phase Peptide Synthesis，2nd．ed．Pierce Chem．Co.，Rockford， 11，1984；（これらを、引用により本明細書中に取り込む。）を参照のこと。）固相方法論の使用が好ましい。簡単に言えば、Ｎ-保護されたＣ-末端アミノ酸残基は、不溶性支持体、例えば、ジビニルベンゼン架橋ポリスチレン、ポリアクリルアミド樹脂、Kieselguhr/ポリアミド（ペプシンＫ）、制御細孔ガラス、セルロース、ポリプロピレン膜、アクリル酸コート・ポリエチレン棒、等に結合される。順番に保護されたアミノ酸誘導体の脱保護、中和（BOC化学の場合、下を見よ。）及びカップリングのサイクルを、そのアミノ酸配列に従ってそのＣ-末端からアミノ酸を結合するために使用する。好ましい固体支持体は、ジビニルベンゼン架橋ポリスチレン樹脂であって、これは、様々な官能化形態で商業的に入手可能なものであり、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、パラアセトアミドメチル樹脂、ベンズヒドリル・アミン（BHA）樹脂、p-メチルベンズヒドリルアミン（MBHA）樹脂、オキシム樹脂、4-アルコキシベンジル・アルコール樹脂、4-（2',4'-ジメトキシフェニルアミノメチル）-フェノキシメチル樹脂、2,4-ジメトキシベンズヒドリルアミン樹脂、及び4-（2',4'−ジメトキシフェニル-FMOC-アミノメチル）-フェノキシアセトアミドノルロイシル-MBHA樹脂（RinkアミドMBHA樹脂）を含む。BHA、MBHA及び RinkアミドMBHA樹脂が特に好ましい。なぜなら、それらは、その樹脂からのそのペプチド鎖の解裂後にC-末端アミドを直接的に提供するからである。本発明における使用のために特に好ましいのは、（NovａBiochem，La Jolla，CAから入手可能な）RinkアミドMBHA樹脂である。上記アミノ酸のα−アミノ基のための好ましい保護基は、酸に不安定なｔ-ブチルオキシカルボニル（BOC）である。BOCは、好適な溶媒、例えば、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸（TFA）を使用して脱保護される。得られたTFA塩は、塩基、例えば、ジイソプロピルエチル・アミン（DIEA）又はトリエチルアミン（Et₃N）により中和され、次にその保護されたアミノ酸誘導体により結合される。α-アミノ酸のための他の好ましい保護基は、塩基に不安定な９-フルオレニルメトキシカルボニル（FMOC）である。BOC及びFM OC基と化学的に適合性のアミノ酸の側鎖官能基のための好適な保護基は、本分野においてよく知られている。FMOC化学を使用するとき、以下の保護アミノ酸誘導体が好ましい：FMOC-Cys（Trit）、FMOC-Ser（But）、FMOC-Asn（T rit）、FMOC-Leu、FMOC-Thr（Trit）、FMOC-Val、FMOC-Leu、FMOC-Gly、FMOC-Ly s（Boc）、FMOC-Gln（Trit）、FMOC-Glu（OBut）、FMOC-His（Trit）、FMOC-Tyr （But）、FMOC-Arg（PMC）、及びFMOC-Pro。これらのアミノ酸残基は、本分野において公知の様々なカップリング剤及び化学物質を使用して、例えば、DIC、DCC 又はBOPによる直接カップリングにより；前形成対称無水物を介して；活性エステル、例えば、ペンタフルオロフェニル・エステルを介して；又は前形成HOBt活性エステルを介して、結合されることができる。ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）の存在中のHBTU（［2-（1H-ベンゾトリアゾール-1-イル）,1,1,3,3-テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロホスホネート］）による活性化が好ましい。固相法を主動で行うことができるが、商業的に入手可能なペプチド合成装置（例えば、Applied Biosystems 431A等）上の自動化合成が好ましい。典型的な合成においては、FMOC-Rink-アミドMBHA樹脂をNMP中の20％ピペリジンにより処理してそのFMOC基を除去する。その樹脂をNMPにより洗浄した後、第一アミノ酸（C -末端FMOC-Pro）をHBTU/HOBt法を使用してその樹脂上にロードする。（20％ピペリジン/NMPによる）その後の脱保護及びABI FastMocプロトコール（ABIユーザー報32及び33、Applied Biosystems Inc.）に従ったカップリング・サイクルを全ペプチド配列を構築するために使用する。 N-末端修飾基を付着する前に、ペプチドの同定及び完全性を、例えば、Reagen t K（0.75 g結晶フェノール、0.25 mlエタンジチオール、0.5mlチオアニソール、0.5ml脱イオン水、10 ml TFA）等によるFMOC-ペプチド樹脂の小部分の解裂により、確立する。ペプチドを沈殿させ、そしてエーテルにより洗浄し、逆相HPLC により精製し、そしてアミノ酸分析及び質量分析により特徴付けする。カルシトニンのアミノ末端を次に誘導体化する。FMOC化学を使用するとき、そのペプチド樹脂のN-末端FMOC基を典型的にはDMF中の20％ピペリジンにより20〜3 0分間脱保護する。樹脂を濾過し、DMF及びDCMにより完全に洗浄し、そして乾燥させる。（Ｒ基を導入するための）N−末端修飾のために使用されるべきカルボキシル誘導体は、ペプチド合成において使用される同一活性化手順、例えば、カルボジイミド-仲介カップリング；混合無水物；不斉無水物；前形成活性エステル；塩化アシル；HOBtを伴うか又は伴わないBOP、PyBOP若しくはPyBrOP-仲介カップリング；あるいは、本分野において公知のそれらの変法及び改良法（例えば、Coste et al.，Tetrahedron Lett．31: 669，1990及びCoste et al.，Tetrahe dron Lett ．31:205，1990を参照のこと。）により、その樹脂−結合ペプチドのN -末端アミノ基に結合されることができる。カップリングは、手動又は自動化手段により行われることができる。特に好ましい方法は、そのカルボン酸誘導体の HOBtエステルを作るために、室温においてDCMとDMFの混合物中でHPBtとHPBtとDI Cとそれを反応させることによりそのカルボン酸誘導体を最初に前活性化することである。この混合物を次に、脱保護されたペプチド樹脂に添加し、そしてその懸濁液を室温において振とうする。反応の後にKaiserテストを行う。次に樹脂を濾過し、DMFとDCMにより洗浄し、そして乾燥させる。誘導体化しペぺプチドを樹脂かあら解裂させ、そして適当なスキャベンジャーを含むTFAによる処理により脱保護する。多くのこのような解裂試薬、例えば、試薬Kその他を使用することができる。修飾されたペプチドをエーテル沈殿により濾過及び単離することにより樹脂から分離する。さらなる精製を慣用の方法、例えば、ゲル濾過及び逆相HPLCにより達成することができる。カルシトニンの１と７位における２つのシステインの間のジスルフィド結合を慣用の方法に従って、例えば、空気酸化又はフェリシアン化カリウム又はDMSOによる酸化により、形成する（Tam et al.J．Am．Chem．Soc．113:66 57-6662，1991）。特に好ましい方法は、DMSOによる酸化である。HPLC又はE11ma n's試薬によりモニターするとき、その酸化反応が終了した後、そのペプチドを単離し、そしてHPLCにより精製し、そして分析的HPLC及び質量分析により精製について分析する。本発明の他の態様において、マルチマー・カルシトニンを提供する。複素環式アルキル又は複素アリール基により誘導体化されたカルシトニンを、遷移金属のイオンと併合して錯体を形成する。これに関して好ましいカルシトニン誘導体は、２つの環窒素原子を含む直鎖状２環式部分、例えば、ビピリジン又はビピリジン-様部分の付加により修飾されたものである。例えば、ジカルボキシ-ビピリジンにより誘導体化されたサケ・カルシトニンは、Ｆｅ²⁺との３：１モル錯体を形成する。これに関して有用な他の金属は、Ｃｒ³⁺、Ｆｅ³⁺、Ｍｎ²⁺、Ｃｏ²⁺、Ｃｏ³⁺、Ｎｉ²⁺、Ｃｕ²⁺、Ｃｕ⁺及びＺｎ²⁺を含む。錯体の好ましい調製方法は、適当な金属塩の水溶液による修飾されたカルシトニンの滴定による。本発明に係るカルシトニン誘導体は、医薬として許容される塩、特に有機酸及び無機酸の塩を含む酸付加塩の形態にあることができる。このような塩の例は、有機酸、例えば、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、琥珀酸、リンンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、サリシル酸、等の塩を含む。塩基性アミノ酸残基の酸付加塩は、そのペプチドを、当業者によく知られた手順に従って適当な酸又は鉱物により処理することにより調製され、又は所望の塩を、その適当な酸からの凍結乾燥により直接的に得ることができる。本発明に係る化合物は、低カルシウム血症活性をもち、そして血清カルシウムの減少及び骨代謝の調節のためのヒト及び脊椎動物の医薬として有用である。本発明に係る化合物を、例えば、骨粗しょう症、パジェット病、上皮小体穴進症、骨軟化症、小児の特発性抗カルシウム血症、及び他の症状の治療において、使用することができる。本カルシトニン誘導体は、急性膵臓炎及び胃腸失調の治療における胃の分泌を阻害するために使用することもできる。医薬組成物は、毎日〜１週間の間隔で投与される。このような医薬組成物の” 有効量”は、血清カルシウムにおける臨床的に有意な減少、骨再吸収の阻害、胃の分泌の阻害又は他の効果を提供する量である。このような量は、部分的に、患者の、治療されるべき特定の症状、年齢、体重、一般的な健康、並びに当業者に自明な他の要因に依存するであろう。本カルシトニン誘導体の治療的に有効な投与量の濃度は、その指示に広く依存して変化することができ、そして本分野においてよく知られている。例えば、骨粗しょう症の治療のための治療的投与量は、一般的に50〜150国際単位（I.U.）の範囲内にある。効力は、ラットにおけるその低カルシウム血症化効果と標準的な調製物のその低カルシウム血症化効果とを比較することにより推定され、そしてNational Institute for Biological Stan dards and Control，Holly Hill，Londonにより配付されたInternational Refer ence of Preparation中に記載されたように、国際単位において表される。有意に強化された半減期をもつ化合物は、より低い濃度において投与されることができる。カルシトニン誘導体及びそれらの医薬として許容される塩は、慣用の方法に従って非経口、経口、経鼻、直腸又は経皮投与のために、医薬として許容される担体と配合される。配合物は、さらに、１以上の希釈剤、増量剤、乳化剤、保存剤、バッファー、賦形剤、等を含むことができ、そして液体、粉体、エマルジョン、座剤、リポソーム、経皮パッチ、錠剤、等のような形態で、提供されることができる。当業者は、適用なやり方で、そして許可された慣行、例えば、Remington'ｓPharmaceutical Science ，Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1990（これを、引用によりその全体として本明細書中に取り込む。）中に開示されたものに従って、本発明に係る化合物を配合することができる。以下の実施例を限定ではなく、説明のために提供する。実施例１ A. サケ・カルシトニンの合成：直鎖状の保護されたサケ・カルシトニン（SCT）を、FMOC化学及びHOBt及びHBT U活性化方法論を使用してApplied Biosystems，Inc.（Foster City，CA）431Aペプチド合成装置により合成した。0.43ｍＭ置換（580mg）によるRinkアミドMBHA 樹脂（Nova Biochem，La Jolla，CA）を使用した。すべてのカップリングは〉98 .5％であった。この合成の終わりに、樹脂をNMP及びCH₂Cl₂により十分に洗浄し、そして乾燥させた。樹脂-結合FMOC-SCTの小部分（27mg）を脱保護し、そして1 0mlの試薬Ｋ中で2.5時間にわたり解裂させた。樹脂を濾過し、そして溶液を蒸発させた。樹脂を40分間の0-60％Ｂのグラジエント（溶媒Ａ:水中0.1％TFA及び溶媒B:アセトニトリル中0.1% TFA）を使用してVydac C-4（2.2ｘ25cm）HPLCカラム上でクロマトグラフィーにかけて純粋なFMOC-SCTを提供した。このペプチドの保持時間は、36.38分であった。ペプチドをアミノ酸分析及び質量分析（ms3656.33 ）により特徴付けして樹脂へのサケ・カルシトニン結合の完全性を確立した。B.ビピリジン-修飾カルシトニン（ZP-1又はBP_4,4-CT）の調製： 2,2^'-ビピリジン-4,4^'-ジカルボン酸（0.2mM）を攪拌バー及び乾燥チューブを備えたフラスコ内でCH₂Cl₂中の5%ジイソプロピルエチルアミン（DIEA）の3ml中に溶解した。N-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）（O.5mM）及びジイソプロピルカルボジイミド（DIC）（0.5mM）を添加してHOBtジエステルを形成し；45 分間攪拌した後、溶液は清澄になり、そして僅かに黄色に変わった。SCT-樹脂（ 100mg）をDMF中の20％ピペリジンにより処理してN-末端保護基を除去した。脱保護されたSCT-樹脂を2,2'-ビピリジン・カルボン酸HOBtジエステルの溶液に添加した。この混合物を、一夜攪拌維持した。遊離NH₂基についての陰性Kaiserテストは、カップリングが完全であることを示した。このSCT-樹脂をDMF及びCH₂Cl₂ により洗浄した。ビピリジン-修飾SCTの還元形態を試薬Ｋによりその樹脂から解裂させ、そして逆相HPLCにより精製した。0.1％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリルと水の混合物をHPLC溶媒として使用した。線型グラジエント（20％CH₃CN/水〜80%CH₃CN /水20分間）をそのペプチドを溶出するために使用した。主要ピークを集め、そして凍結乾燥した。得られたペプチドを、5mg/mlのペプチド濃度において、15％ DMSOを含む１％水性重炭酸アンモニウム溶液中に最初にそのペプチドを溶解することにより酸化した。その混合物を室温において一夜放置した後、その生成物を単離し、そして逆相HPLCにより精製した。収量は15mgであった。精製されたペプチドを、質量分析及びAAAを使用して特徴付けした。FAB-MSは、m/e＝3660（MH⁺ ）を与えた。AAAは、Asx2.20（2），Glx3.43（3），Ser4.16（4），Gly3.38（3 ），His0.98（1），Arg1.19（1），Thr4.96（5），Pro 2.24（2），Tyr1.21（1 ），Val 1.00（1），Cys0.86（2），Leu4.54（5）,Lys2.22（2）を与えた。円偏光二色性分光分析を、水性バッファー溶液中のカルシトニン誘導体及びそれらのFe（II）錯体の立体配置を研究するために使用した。ビピリジン修飾カルシトニンの見かけの分子量をＦｅ（II）の存在及び非存在中ゲル濾過及び沈殿平衡実験により測定した。トリマーのカルシトニン-Ｆｅ（II）錯体の会合定数及び季離速度をＵＶ分光光度計により測定した。C.ニコチン酸−修飾カルシトニンの調製（ZP-5又はNic-SCT）ニコチン酸（3.7ｘ10^-5mol）を数滴のDMF中に溶解した。DIC（3.7ｘ10^-5mol）を次に添加した。混合物を約10分間、室温において振とうし、その後、脱保護したSCT-樹脂を添加した。カップリング反応を上記Kaiserテストを使用してその後行った。その懸濁物を一夜振とうした。 Nic-SCTを、Nic-ACT樹脂と試薬K（1.65ml TFA）0.112ml 88%フェノール、0.09 8ml H₂O、0.1mlチオアニソール、0.05mlエタンジオール）とを混合することによりその樹脂から解裂させた。反応混合物を室温において2.5時間振とうし、そして次にその混合物を濾過して樹脂を除去した。ペプチドを冷エーテル中で沈殿させ、そして遠心分離により回収した。この沈殿をエーテルにより３回洗浄し、そして約１時間デシケーター内で乾燥させた。乾燥ペプチドを0.５ml H₂O中で溶解させ、そして次にSephadex G-15カラムに適用した。このカラムを5％酢酸により溶出した。ペプチドを270nmにおける吸光により検出した。このペプチドを含む画分をプールし、そして凍結乾燥した。 Nic-SCTをC₄−分析用カラム（Vydac，Hesperia，CA）を使用して逆相HPLCにより分析した。このHPLCを270nmにおいてモニターした。溶出液は、1%TFAを含むアセトニトリル及び水であった。20分間の20％から80％までのアセトニトリルのグラジエントをNic-SCTを溶出させるために使用した。主要ピーク（55%アセトニトリル）を集め、そして凍結乾燥した。ペプチドの全量は、約18 mgであった。 Nic-SCT（18mg）をDMSOにより酸化して分子内ジスルフィド結合を形成させた。Nic-SCTの還元形態の消失の後にE11man's試薬が続いた。開始濃度は、10%DMSO を含むバッファー溶液（2%NH₄HCO₃、pH8.0）中２mg/mlであった。この混合物を一夜攪拌した。酸化されたNic-SCTのHPLCは単一ピークを示し、そしてその保持時間（59％アセトニトリル）は、その還元形態（55％アセトニトリル）のものよりも長かった。酸化されたNic-SCTは、HPLCに基づき〉95％純粋であることが判明した。純粋なペプチドの全量は、17mgであった。D.ピコリニル−修飾カルシトニン（ZP-6又はPiC-SCT）の調製 Pic-SCTをNic-SCTについて記載した手順と同様の手順により合成した。ピコリン酸（Picolinic acid）（3.7ｘ10^-5mol）を先に記載したように脱保護されたSC T-樹脂（100mg）に結合させた。Pic-SCTを脱保護し、そして先に記載したような試薬Kを使用してその樹脂から解裂させた。Pic-SCTを、20分間の20％から80％までのアセトニトリルの線型グラジエントを使用してHPLCにより精製した。主要ピーク（60％アセトニトリル）を集め、そして凍結乾燥させた。ペプチドの全量は約20mgであった。次に精製したPic-SCTをNic-SCTのために一般的に記載したように酸化した。酸化された形態のHPLCは単一ピークを示し、そしてその保持時間（ 61％アセトニトリル）は、その還元された形態のものとほとんど同じであった。酸化されたpic-SCTは、HPLCに基づき90％純粋であることが判明した（17mg）。このPic-SCTをさらに追加のHPLCランにより精製した。E．2-ピラジノイル−修飾カルシトニン（ZP-7又は2-Pyr-SCT）の調製 2-Pyr-SCTをNic-SCTについて記載した手順と同様の手順により合成した。2-ピラニジンカルボン酸（3.7ｘ10^-5mol）を先に記載したように脱保護されたSCT-樹脂（100mg）に結合させた。2-Pyr-SCTを脱保護し、そして先に記載したような試薬Ｋを使用してその樹脂から解裂させた。2-Pyr-SCTを、20分間の20％から80％までのアセトニトリルの線型グラジエントを使用してHPLCにより精製した。主要ピーク（59%アセトニトリル）を集め、そして凍結乾燥させた。ペプチドの全量は約20mgであった。次に精製した2-Pyr-SCTをNic-SCTのために一般的に記載したように酸化した。酸化された形態のHPLCは単一ピークを示し、そしてその保持時間（61%アセトニトリル）は、その還元された形態のものより僅かに長かった。酸化された2-Pyr-SCTは、HPLCに基づき〉95％純粋であることが判明した（18mg ）。F.追加の修飾されたカルシトニンの調製 2,2’-ビピリジン-5,5’-ジカルボン酸（ZP-2又はBP_5,5-SCT）、4,4’-ビフェニルジカルボン酸（ZP-3又はBPhe-SCT）、イソニペコチン酸（isonipecotic aci d）（ZP-8又はisonip-SCT）、DL-ピペコリン酸（DL-pipecolinic acid）（ZP-9 又はpip-SCT）及びニペコチン酸（nipecotic acid）（ZP-10又はnip-SCT）修飾サケ・カルシトニンをNic-SCTについて記載したものと本質的に同一の手順により合成した。これらの化合物を、先に記載したようにHPLCにより精製し、そして以下に記載するように検定した。実施例２ BP_4,4-CTについての特徴付け：カルシトニン・レセプタに結合する能力カルシトニン・レセプタに結合する誘導体化されたBP_4,4-CT分子の能力を、組換えヒト・カルシトニン・レセプタ又は内因性ハムスター・カルシトニン・レセプタのいずれかを発現する哺乳類細胞におけるサイクリックAMPのレベルを増加させるその分子の能力を測定することにより検定した。ヒト・カルシトニン・レセプタを以下にように調製した：ヒト・カルシトニン・レセプタの発現を指令することができるDNA構築物を含む（寄託番号69067の下で1992年９月１日にAmerican Type Culture Collection（12301 Parklawn Dr.， Rockville，MD）にE．colｉ株XL-1青形質転換体として寄託された）pHOLLEXと命名されたプラスミドを、同時係属中の米国特許出願逐次番号第07/954,804号（これを、引用によりその全体として本明細書中に取り込む。）中に開示されたように）細胞系BHK/KZ10-20-48をトランスフェクトするために使用した。BHK/KZI0-2 0-48は、サイクリックAMPの存在中下流のコーディング配列の発現を誘導するサイクリックAMP応答要素（CRE）にその発現が従属するところのルシフェラーゼ遺伝子を含むプラスミドによりトランスフェクトされたBHK細胞系である。従って、例えば、カルシトニン・レセプタへのリガンドの結合による、サイックリック AMP経路の剌激は、ルシフェラーゼ遺伝子の発現をもたらす。カルシトニン・レセプタをもたないベクターは、陰性対照のために細胞系BHK/ZK10-20-48をトランスフェクトするために使用された。トランスフェクト体を、500μg/ml G418-ネオマイシン及び250 nMメトトレキセートの両方を含む選択的成長培地（5％血清を含むDulbecco'ｓModified Eagle Medium（DMEM））中で成長させた。内因性ハムスター・カルシトニン・レセプタを発現するBHK細胞系を、プラスミドKZ10-20-48によりトランスフェクトして先に記載したCRE-誘導性ルシフェラーゼ・レセプタを提供した。トランスフェクトされた細胞を、500μg/ml G418-ネオマイシン及び250nMメトトレキセートの両方を含む選択的成長培地中で培養した。カルシトニン・レセプタを発現する細胞を、10^-13M〜10^-6Mのレンジ内にある濃度においてサケ・カルシトニン（SCT）及び誘導体化カルシトニンに対するCRE -結合ルシフェラーゼ応答の誘導について３連で検定した。MICROLITE平底組織培養プレート（Baxter Scientific Products，Chicago，IL）を、各ウェルが100μ lの選択培地中2ｘ10⁴細胞を含むように設定し、そして細胞を一夜成長させた。S CT及びGF43を2Xの最終検定濃度において調製して成長培地中10-¹³〜10-⁶Mを与えた。誘導を、そのウェルから古い培地を除去することにより開始させ、そして10 0μlの新たな成長培地及び100μlの３連サンプル・ウェル内のいずれかの2X溶液を添加した。非誘導ルシフェラーゼ・レベルを３連ウェル内で測定し、それに10 0μlの10％胎児ウシ血清含有DMEMを添加した。プレートを37℃、5%CO₂において４時間インキュベートしてルシフェラーゼの誘導を許容した。誘導後、培地を除去し、そしてウェルを、200μl/ウェルPBSにより１回洗浄した。洗浄後、20μl の、保存Cell Culture Lysis Reagent（Luciferase Assay System，Promega Cor p.，Madison，WI）の（滅菌水中）1:5希釈物を各ウェルに添加し、そしてプレートを室温において15分間インキュベートした。プレートを、40μlのLuciferase Assay Substrate（Luciferase Assay System，Promega）を添加したLabsystems Luminoskanマイクロタイター発光計（Labsystems Inc.，Morton Grove，IL）に移し、３秒間その反応物を混合し、そしてウェル当たり２秒間そのルシフェラーゼ・シグナルを積分した。各化合物についてのルシフェラーゼの倍誘導を以下のように計算した：検定結果を下表に要約する。これらのデータは、誘導体化カルシトニンZP-1、ZP-2、ZP-5、ZP-6、ZP-7、ZP -8、ZP-9及びZP-10が、サケ・カルシトニンと同様のEC50（半最大活性）をもち、そしてヒト・カルシトニンよりも大きな活性をもつことを示している。ZP-3は、ヒト・カルシトニンと同様の効力をもつ。実施例３血清カルシウム・レベルに対するBP-CTのインビボにおける効果インビボにおけるビピリジン−カルシトニンの生物学的活性を、サケ・カルシトニンの作用と比べてマウスにおいてより低い血清カルシウムに対するBP_4,4-CT の能力として測定した。６週齢Swiss-Webster雄マウス（12〜18グラム）に、BP₄ _,4 -CT、サケ・カルシトニン又は媒質の単一の皮下注射を与えた。血清カルシウム測定のための血液サンプルを注射後０、１及び４時間の時間間隔において眼窩洞穿剌から採取した。血清カルシウムをDacos Excel Analyzer（Coulter El ectronics Company，Hialeah，Fla.）を使用して分析した。化合物は、以下の群のそれぞれにランダムに指定された８マウスに以下の投与量において与えられた。図１、２及び３は、BP_4,4-CTとサケ・カルシトニンの等量が投与量依存のやり方で血清カルシウム・レベルを等しく減少させたことを示している。本発明の特定の態様を説明の目的のために詳細に説明してきたけれども、本明細書中に記載した組成物及び方法が本発明の本質及び範囲から外れずに修正されることができることは当業者に容易に明らかとなるであろう。従って、本発明は、添付クレーム以外によっては限定されない。配列リスト（1）一般情報: （i）出願人：ZymoGenetics，Inc. 4225 Roosevelt Way N.E. Seattle WA US 98105 University of Washington Seattle WA US 98105 （ii）発明の名称：誘導体化カルシトニン（iii）配列の数：２（iv）宛て先：（A）宛て名：ZymoGenetics，Inc. （B）街：4225 Roosevelt Way N.E. （C）市：Seattle （D）州：WA （E）国：USA （F）郵便番号：98105 （v）コンピュータ読み込み形態：（A）媒質タイプ：フロッピー・ディスク（B）コンピュータ：IBM PC互換性（C）オペレーティング・システム：PC-DOS/MS-DOS （D）ソフトウェア：PatentIn Release #1.0，Version #1.25 （vi）現出願データ：（A）出願番号：（B）出願日：（C）分類：（viii）アトーニー/エージェント情報：（A）氏名：Sawislak，Deborah A. （B）登録番号：37,438 （C）参照/書類番号：92-20PC （ix）遠距離通信情報：（A）電話：（206）547-8080内線427 （B）ファクス：（206）548-2329 （2）配列番号1についての情報：（i）配列の特徴：（A）長さ：32アミノ酸（B）タイプ：アミノ酸（D）トポロジー：直鎖状（ix）特徴：（A）名称/キー：修飾-部位（B）位置：32 （D）他の情報：/標識=アミド化 /注＝”C-末端プロリン残基がアミド化されている” （xi）配列：配列番号１：（2）配列番号２についての情報：（i）配列の特徴：（A）長さ：32アミノ酸（B）タイプ：アミノ酸（D）トポロジー：直鎖状（ix）特徴：（A）名称/キー：修飾−部位（B）位置：32 （D）他の情報：/標識=アミド化 /注＝”C-末端プロリン残基がアミド化されている” （xi）配列：配列番号２：

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ラブロー，ビレンダーアメリカ合衆国，ワシントン 98012，ミルクリーク，ワンハンドレッドシックスティサードプレースサウスイースト 2814 (72)発明者佐々木富和アメリカ合衆国，ワシントン 98109，シアトル，ヘイエスストリート＃16 762

Claims

【特許請求の範囲】１．から成る群から選ばれた化合物｛ここで、Ｒが場合により環当たり１又は２の環窒素原子を含む置換又は非置換ビアリール；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の環複素原子を含む置換又は非置換複素環アルキル；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の複素原子を含む置換又は非置換bis-複素環アルキル；又はＮ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１〜４の複素原子を含む置換又は非置換複素アリールである。｝又は医薬として許容されるそれらの塩。２．式中、Ｒが：｛式中、Ｘ₁及びＹ₁が個々にＣ又はＮである。｝；｛式中、ｎ＝１又は２；Ｘ₂がＮ、Ｏ又はＳであり；Ｙ₂がＣ又はＮである。｝；｛式中、Ｘ₃及びＹ₃が個々にＮ、Ｏ又はＳである。｝；｛式中、Ｙ₄がＯ、Ｓ又はＮであり、Ｘ４、Ｚ及びＡが個々にＣ又はＮである。但し、Ｙ₄がＯ又はＳのときＸ４がＮではない。｝；又は｛式中、Ｘ₅がＮであり、Ｙ₅がＣ又はＮである。｝であり、そしてＲ’が直鎖状Ｃ₁-Ｃ₈アルキル、分枝Ｃ₁-Ｃ₁₂アルキル、ニトロ、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、カルボキシル、カルボキシルアミド、スルフヒドリル、シアノ、ハロ、アルコキシ、エステル又はＨである、請求項１に記載の化合物。３．式中、Ｒが：である、請求項２に記載の化合物。４．式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである、請求項３に記載の化合物。５．式中、Ｒが、｛式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである。｝である、請求項１に記載の化合物。６．式中、Ｒが、２又は３環を含む縮合環構造である、請求項１に記載の化合物。７．式中、Ｒが：から成る群から選ばれている、請求項１に記載の化合物。８．式R-N-CT｛式中、CTがヒト、サケ、ウナギ、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ及びニワトリのカルシトニン及び生物学的に活性な誘導体並びにそれらの変異体からなる群から選ばれたカルシトニン、又はそれらの医薬として許容される塩であり；Ｎがアミド結合であり；そしてＲが場合により環当たり１又は２の環窒素原子を含む置換又は非置換ビアリール；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の環複素原子を含む置換又は非置換複素環アルキル；Ｎ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１又は２の複素原子を含む置換又は非置換bis-複素環アルキル；又はＮ、Ｓ及びＯから成る群から選ばれた環当たり１〜４の複素原子を含む置換又は非置換複素アリールである。｝により表される化合物。９．式中、Ｒが：｛式中、Ｘ₁及びＹ₁が個々にＣ又はＮである。｝；｛式中、ｎ＝１又は２；Ｘ₂がＮ、Ｏ又はＳであり；Ｙ２がＣ又はＮである。｝；｛式中、Ｘ₃及びＹ₃が個々にＮ、Ｏ又はＳである。｝；｛式中、Ｙ₄がＯ、Ｓ又はＮであり、Ｘ４、Ｚ及びＡが個々にＣ又はＮである。但し、Ｙ₄がＯ又はＳのときＸ₄がＮではない。｝；又は｛式中、Ｘ₅がＮであり、Ｙ₅がＣ又はＮである。｝であり、そしてＲ’が直鎖状Ｃ₁-Ｃ₈アルキル、分枝Ｃ₁-Ｃ₁₂アルキル、ニトロ、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、カルボキシル、カルボキシルアミド、スルフヒドリル、シアノ、ハロ、アルコキシ、エステル又はＨである、請求項８に記載の化合物。１０．式中、Ｒが：である、請求項９に記載の化合物。１１．式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである、請求項10に記載の化合物。１２．式中、CTが、ヒト又はサケのカルシトニンである、請求項８に記載の化合物。１３．式中、Ｒが、｛式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである。｝である、請求項10に記載の化合物。１４．式中、Ｒが、２又は３環を含む縮合環構造である、請求項８に記載の化合物。１５．式中、Ｒが：から成る群から選ばれている、請求項８に記載の化合物。１６．式X-（R-N-CT）_n｛式中、Xが遷移金属の１価、２価又は３価のイオンであり；Ｒが複素環アルキル又は複素アリール基であり；CTがヒト、サケ、ウナギ、ラット、ブタ、ウシ、ヒツジ及びニワトリのカルシトニン及び生物学的に活性な誘導体並びにそれらの変異体からなる群から選ばれたカルシトニンであり；Ｎがアミド結合であり；そしてｎ＝２又は３である。｝により表される化合物；又は医薬として許容されるその塩。１７．Ｘが、Ｆｅ²⁺である、請求項16に記載の化合物。１８．ｎ＝３である、請求項16に記載の化合物。１９．式中、CTが、ヒト又はサケのカルシトニンである、請求項16に記載の化合物。２０．式中、Ｒが、｛式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである。｝である、請求項19に記載の化合物。２１．式中、Ｒが、｛式中、Ｒ’が、ＣＯ₂Ｈ又はＨである。｝である、請求項16に記載の化合物。２２．式中、Ｘが、Fe²⁺であり、Ｒが、であり、CTが、ヒト又はサケのカルシトニンであり、そしてｎ＝３である、請求項16に記載の化合物。２３．式中、Ｒが、から成る群から選ばれている、請求項16に記載の化合物。２４．式中、Ｒが、２又は３環を含む縮合環構造である、請求項16に記載の化合物。２５．請求項８に記載の化合物及び医薬として許容される担体を含んで成る医薬組成物。２６．患者における血清カルシウムの減少方法であって、そのような患者に、請求項８に記載の化合物及び医薬として許容される担体を含んで成る医薬組成物の有効量を、投与することを含んで成る方法。