KR100310280B1 - 유도체화된칼시토닌 - Google Patents

Abstract

유도체화된 칼시토닌 분자, 유도체화된 칼시토닌을 함유하는 제약조성물, 및 유도체화된 칼시토닌을 이용하여 환자의 혈청 칼슘을 감소시키는 방법이 개시되었다.

이 분자는 칼시토닌을 시클릭, 폴리시클릭 또는 헤테로시클릭부와 결합시킴으로써 형성된 유도체화된 아미노 말단을 특징으로 한다. 또한 이 분자의 다중체 형태도 개시되었다.

Description

유도체화된 칼시토닌

제 1도, 제 2도 및 제 3도는 본발명의 대표적인 화합물을 이용하여 혈청 칼슘 레벨을 측정하는 분석의 결과를 나타낸다. BP₄,₄-CT (ZP-1)은 유도체화된 칼시토닌 화합물이고 SCT 는 연어 칼시토닌이다.

발명의 상세한 설명

발명의 배경

뼈는 동적조직이고, 성인 골격의 항상성은 새로운 뼈형성과 이전에 형성된 뼈의 재흡수 사이의 균형을 필요로 한다. 포유동물의 갑상선 및 흉선에 의해 분비되는 펩티드 호르몬 칼시토닌은 뼈 항상성유지에 중요한 역할을 한다. 칼시토닌은 뼈 재흡수를 매개하는 뼈 조직세포인 파골 (破骨) 세포에서 발견되는 리셉터에 결합한다.

칼시토닌은 파골세포를 고정화하여 뼈 재흡수를 억제하여 뼈에 의하여 혈청으로 방출되는 칼슘의 양을 결과적으로 감소시킨다. 이러한 뼈 재흡수의 억재는 골다공증 치료로서 칼시토닌의 사용에 의해 이용되었다.

칼시토닌은 포유동물의 갑상선 및 하등 척추동물의 새구선에서 존재한다. 공지되고 천연적으로 존재하는 칼시토닌은 모두 32- 아미노산 폴리펩티드이며 아미드화된 카르복시 말단과 1과 7 위치의 시스테인 잔기 사이의 분자내 디술피드 결합을 갖는다.

현재 골다공증 치료에는 사람 칼시토닌 보다 연어 칼시토닌이 바람직하다.

연어 칼시토닌의 세계 시장은 매년 5억 달러씩 증가한다. 연어 칼시토닌은 칼시토닌의 사람형태 보다 골 재흡수의 억제에 상당히 더 효과적이라는 것이 보여졌다.

골다공증의 치료에서 연어 칼시토닌이 사람 칼시토닌 보다 더 강력한 이유에 대해서는 몇가지 가설이 있다. 이 가설은 다음을 포함한다: (1) 연어 칼시토닌은 분해에 더 내성이 있다; (2) 연어 칼시토닌은 더 낮은 대사적 제거율(metabolic clearance rate)(MCR)을 갖는다; (3) 연어 칼시토닌은 다소 다른 형태를 가져서 골 리셉터 부위에 대한 더 큰 친화성을 나타낼 수 있다.

사람의 골다공증 치료를 위한 연어 칼시토닌 사용과 연관된 이점에도 불구하고 또한 단점도 있다. 연어 칼시토닌은 주사에 의해 투여하는데, 이것은 많은 환자들이 받아들일 수 없다고 하는 과정이다. 게다가, 일부 환자는 비-사람 칼시토닌에 대해 항체를 생성한다. 따라서, 골 재흡수의 강력한 억제제이고 덜 비싸고 투여하는데 더 편리하고 비- 면역원성인 연어, 사람 또는 다른 칼시토닌의 새로운 유사체가 필요하다.

발명의 요약

본발명의 목적은 증가된 저 (低) 칼슘혈 활성 및/또는 연장된 생체내 반감기를 갖는 새로운 칼시토닌 유도체를 제공하는 것이다.

본발명의 다른 목적은 새로운 칼시토닌 유도체를 함유하는 제약조성물, 뿐만아니라 제약조성물의 투여에 의해 환자의 혈청 칼슘을 감소시키는 방법을 제공하는 것이다.

본발명의 한 면은 하기로 구성되는 군으로 부터 선택된 화합물 및 제약학적으로 허용가능한 그것의 염을 제공하는 것이다:

여기서, R은 선택적으로 고리당 1 또는 2 고리질소원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비아릴; N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 고리헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로시클로알킬; N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비스- 헤테로시클로알킬; 또는 N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 내지 4 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로아릴이다.

본발명의 다른 면은 식 R-N-CT의 화합물을 제공하는 것인데, 여기서 CT는 사람, 연어, 뱀장어, 쥐, 돼지, 소, 양 및 닭 칼시토닌 및 생물학적으로 활성이 있는 그것의 유도체와 변이체로 구성되는 군으로 부터 선택된 칼시토닌, 또는 제약학적으로 허용가능한 그것의 염이고; N은 아미드결합이고; R은 선택적으로 고리당 1 또는 2 고리질소원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비아릴; N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 고리헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로시클로알킬; N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비스-헤테로시클로알킬; 또는 N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 내지 4 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로아릴이다.

본발명의 세번째 면은 식 X-(R-N-CT)n의 화합물을 제공하는 것인데, 여기서 X 는 전이금속의 이온이고; R은 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴기이고; CT는 사람, 연어, 뱀장어, 쥐, 돼지, 소, 양 및 닭 칼시로닌 및 생물학적 활성이 있는 그것의 유도체와 변이체로 구성되는 군으로 부터 선택된 칼시토닌이고; N 은 아미드 결합이고; n = 2 또는 3이다.

또한 이 화합물들의 제약학적으로 허용가능한 염도 제공된다.

상기에서 개시된 화합물들은 제약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 제약조성물을 생성한다. 이 조성물은 특히 환자의 혈청 칼슘을 감소시키는 데 유용하다.

발명의 상세한 개시

본발명은 새로운 유도체화된 칼시토닌 분자를 제공한다. 이 분자는 단량체 및 다중체 형태로 제공된다. 본발명의 유도체화된 칼시토닌은 현재 이용가능한 칼시토닌 보다 각종 이점을 제공하는데, 이것은 더큰 비활성, 증가된 반감기, 증가된 안정성 및/또는 감소된 면역원성을 포함한다.

본발명의 유도체화된 칼시토닌은 유도체화된 사람, 연어, 뱀장어, 쥐, 돼지, 소, 양 및 닭 칼시토닌을 포함한다. 연어 및 특히 사람 칼시토닌이 바람직하다.

칼시토닌은 천연의 야생형 분자로 부터 유도될 수 있거나 또는 생물학적 활성을 갖는 변형된 형태의 칼시토닌으로 부터 유도될 수 있다. 다양한 변형된 칼시토닌이 당업계에서 알려져 있는데, 이것은 아미노산 치환 (가령, 미국특허 4,824,936; 4,764,589; 4,663,309 및 4,658,014), 결실 (가령, 미국특허 4,820,804; 4,764,591; 4,639,511; 4,605,514 및 4,537,716)을 갖는 칼시토닌 및 D-아미노산 치환을 포함하는 칼시토닌 (미국특허 4,652,627)을 포함한다. 여기서 사용되는 용어 "생물학적으로 활성이 있는"은 골 재흡수 억제활성을 나타내는 칼시토닌을 나타낸다.

저 칼슘혈 활성 및 cAMP의 리셉터-매개 자극은 칼시토닌의 골 재흡수 억제활성의 인디케이터이다.

본발명의 분자는 선택적으로 고리당 1 또는 2 고리질소원자를 포함하는 치환된 또는 비치환된 비아릴; N, S 및 O 로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 고리 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로시클로알킬; N, S 및 O 로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비스-헤테로시클로알킬; N, S 및 O 로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 내지 4 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 헤테로아릴로 이루어진 군으로 부터 선택된 헤테로시클릭, 폴리시클릭 또는 시클릭부와 칼시토닌을 결합시킴으로써 형성된 유도체화된 아미노 말단을 특징으로 하는데, 여기서 시클릭, 폴리시클릭 또는 헤테로시클릭부는 아미드 결합을 통해서 칼시토닌의 N-말단 시스테인 잔기에 연결된다. 따라서, 본발명의 한 면은 칼시토닌을 상술한 원자단중 하나의 카르복실산과 반응시켜서 N-말단 유도체화된 칼시토닌을 생성하는 것이다.

여기서 사용되는 용어 "시클릭, 폴리시클릭, 헤테로시클릭, 헤테로시클로알킬 및 그것의 등가물" 은 고리당 3 또는 그이상의 원자를 갖는 고리구조를 표시하는데 이용된다.

일반적으로, 이 구조는 12 이상의 고리원자를 포함하는 구조가 이용될 수 있지만 고리당 9 원자 보다 더 적은 원자, 바람직하게는 고리당 5, 6 또는 7원자를 가질 것이다.

용어 비아릴, 헤테로아릴 및 그것의 등가물은 고리당 5 이상의 원자, 바람직하게는 5 내지 8 고리원자, 더 바람직하게는 고리당 5 또는 6 고리원자를 갖는 방향족 고리구조를 나타내는데 사용된다.

본발명에서 시클릭, 폴리시클릭, 및 헤테로시클릭부는 융합된 고리 기 당 2-3 고리를 포함하는 융합된 고리구조를 포함한다. 바람직한 융합된 고리구조는 하기구조를 갖는 비아릴원자단을 포함한다.

여기서 X, X₁, X₂, X₃, Y, Y₁, Y₂및 Y₃는 개별적으로 C 또는 N 이고 R'는 선형 C₁-C₈알킬, 분지된 C₁-C₁₂알킬, 니트로, 히드록실, 카르복실, 트리플루오로메틸, 카르복실아미드, 메르캅트기, 시아노, 할로, 알콕시, 에스테르 또는 H 이다.

바람직한 융합된 고리구조의 제 2그룹은 하기구조를 포함한다.

여기서 X₄및 Y₄는 개별적으로 C, N, O 또는 S이고, X₅, X₆, Y₅및 Y₆은 개별적으로 C 또는 N 이고, 및 X₄가 S 또는 O 이면 X₅는 C 이고 Y₄가 S 또는 O 이면 Y₅는 C인 것을 조건으로 하고, R'는 상기에서 정의된 것과 같다.

바람직한 융합된 고리구조의 제 3그룹은 하기구조를 갖는 헤테로시클로알킬부를 포함한다.

여기서 X는 N, O 또는 S 이고; Y 는 C 또는 N 이고; n = 1 또는 2이고; R'는 상기에서 정의된 것과 같다.

바람직한 융합된 고리구조의 제 4그룹은 하기구조를 갖는 비스-헤테로시클로알킬부를 포함한다.

여기서 X, X₁, Y 및 Y₁은 개별적으로 N, O 또는 S 이고 R'는 상기에서 정의된 것과 같다. 바람직한 융합된 고리구조의 제 5그룹은 하기구조

또는 구조

을 갖는 헤테로아릴부를 포함한다. 여기서 X는 C, O, S 또는 N이고; Y, Z 및 A는 개별적으로 C 또는 N 이고 R'는 상기에서 정의된 것과 같다.

칼시토닌 유도체의 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

여기서 X₁및 Y₁은 개별적으로 C 또는 N이고 R'는 선형 C₁-C₈알킬, 분지된 C₁-C₁₂알킬, 니트로, 히드록실, 트리플루오로메틸, 카르복실, 카르복실아미드, 메르캅트기, 시아노, 할로, 알콕시, 에스테르 또는 H이다. 이 부류의 특히 바람직한 것은 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

칼시토닌 유도체의 두번째 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

여기서 n = 1 또는 2이고, X₂는 N, O 또는 S이고, Y₂는 C 또는 N이고 R'은 상기에서 정의된 것과 같다. 이 부류의 특히 바람직한 것은 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

칼시토닌 유도체의 세번째 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의해 변형된 것을 포함한다:

여기서 X₃및 Y₃는 개별적으로 N, O 또는 S이고, R'는 상기에서 정의된 것과 같다.

이 부류의 특히 바람직한 것은 하기식의 화합물의 첨가에 의해 변형된 것을포함한다:

칼시토닌 유도체의 네번째 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

여기서 Y₄는 O, S 또는 N 이고; X₄, Z 및 A는 개별적으로 C 또는 N 이고; Y₄가 O 또는 S 이면 X₄가 N 이 아닌 것을 조건으로 하고; R' 는 상기에서 기술된 것과 같다.

이 부류의 특히 바람직한 것은 하기 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다.

칼시토닌 유도체의 다섯번째 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

여기서 X₅는 N 이고, Y₅는 C 또는 N 이고, R'는 상술한 것과 같다. 이 부류의 특히 바람직한 것은 하기 화합물의 첨가에 의하여 변형된 것을 포함한다:

칼시토닌 유도체의 여섯번째 바람직한 부류는 하기식의 화합물의 첨가에 의해 변형된 것을 포함한다:

여기서 X₅는 N 이고, Y₅는 C 또는 N이고, R'는 상술한 것과 같다.

상술한 화합물에서 R'가 CO₂H 또는 H 인 것이 특히 바람직하다.

본발명의 칼시토닌 유도체는 펩티드 합성을 위해 종래 사용되던 고체상 또는 용액상 방법에 의하여 합성할 수 있다 (예컨대, Merrifield, R.B. J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-2154 1963; Birr, C. Aspects of the Merrifield Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Heidel-berg, 1978; Carpino, L.A., Acc, Chem, Res.6:191-198, 1973; Kent S.B., Ann. Rev. Biochem. 57:957-989, 1988; Gregg et al. Int. J. Peptide Protein Res. 35:161-214, 1990; The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1, 2, 3, 5: Gross, E and Meinhofer, J. eds., Acad. Press, New York, 1979; 및 Stewart et al., Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd. ed. Pierce Chem. Co., Rockford, Il, 1984 참조; 이것은 모두 참고문헌으로 여기서 통합되었다).

고체상 방법의 이용이 바람직하다. 약술하면, N-보호된 C-말단아미노산 잔기를 디비닐벤젠 교차결합된 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드수지, 규조토/폴리아미드 (펩신 K), 제어다공유리, 셀룰로스, 폴리프로필렌막, 아크릴산-피복된 폴리에틸렌 막대등과 같은 불용성 지지체에 결합시킨다. 탈보호, 중화 (BOC 화학의 경우에는 하기참조) 및 연속적인 보호된 아미노산 유도체의 커플링의 사이클을 이용하여 아미노산 서열에 따라서 C-말단으로 부터 아미노산들을 연결시킨다. 바람직한 고체 지지체는 디비닐벤젠 교차결합된 폴리스티렌수지인데, 이것은 다양한 기능적인 형태로 상업적으로 구할수 있는 바 여기에는 클로로메틸수지, 히드록시메틸수지, 파라아세트아미도메틸수지, 벤즈히드릴아민(BHA) 수지, p-메틸벤즈히드릴아민(MBHA)수지, 옥심수지, 4-알콕시벤질 알코올수지, 4-(2', 4'-디메톡시페닐아미노메틸)-페녹시메틸수지, 2, 4- 디메톡시벤즈히드릴아민수지, 및 4-(2', 4'-디메톡시페닐-FMOC-아미노메틸)-페녹시아세트아미도노르류실-MBHA 수지(Rink 아미드 MBHA수지) 가 포함된다.

BHA, MBHA 및 Rink 아미드 MBHA 수지가 특히 바람직한데, 그것은 수지로 부터 팹티드사슬의 절단후에 직접적으로 C-말단아미드를 제공할 수 있기 때문이다.

본발명에서 사용하는데 특히 바람직한 수지는 Rink 아미드 MBHA 수지이다 (Nova Biochem, La Jolla, CA로 부터 구할 수 있다). 아미노산의 α- 아미노기에 대한 바람직한 보호기는 산에 불안정한 t-부틸옥시카르보닐(BOC) 이다. 염화메틸렌 같은 적당한 용매에서 트리플루오로아세트산(TFA) 을 이용하여 BOC 를 탈보호시킨다.

결과적인 TFA 염을 디이소프로필에틸아민(DIEA) 또는 트리에틸아민 (Et₃N) 같은 염기로 중화시킨 다음, 보호된 아미노산 유도체와 커플링시킨다. α- 아미노산의 다른 바람직한 보호기는 염기에 불안정한 9-플루오레닐메톡시카르보닐(FMOC)이다. BOC 및 FMOC기와 화학적으로 양립할 수 있는 아미노산의 측쇄 작용성을 위한 적합한 보호기는 당업계에서 잘 알려져 있다. FMOC화학을 이용할 때에는 하기의 보호된 아미노산 유도체가 바람직하다; FMOC-Cys (Trit), FMOC-Ser (But), FMOC-Asn (Trit), FMOC-Leu, FMOC-Thr (Trit), FMOC-Val, FMOC-Leu, FMOC-Gly, FMOC-Lys (Boc), FMOC-Gln (Trit), FMOC-Glu (OBut), FMOC-His (Trit), FMOC-Tyr (But), FMOC-Arg (PMC), 및 FMOC-Pro.

DIC, DCC 또는 BOP 와의 직접적인 커플링; 사전형성된 대칭 무수화합물을 통한 커플링; 펜타플루오로페닐 에스테르 같은 활성 에스테르를 통한 커플링; 또는 사전형성된 HOBt 활성 에스테르를 통한 커플링 처럼 당없계에서 공지된 각종 커플링 작용제 및 화학을 이용함으로써 아미노산 잔기들을 커플링시킬 수 있다.

히드록시벤조트리아졸(HOBt)의 존재하에서 HBTU ([2-(1H- 벤조트리아졸-1- 일), 1, 1, 3, 3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트])로의 활성화가 바람직하다.

고체상 방법은 상업적으로 구할 수 있는 펩티드 합성기 (가령, Applied Biosystems 431A등) 에서와 자동합성이 바람직하지만 수동으로 수행할 수도 있다. 전형적인 합성에서는 FMOC-Rink-아미드 MBHA 수지를 NMP 중의 20% 피페리딘으로 처리하여 FMOC기를 제거한다. 수지를 NMP 로 세척한 후, HBTU/HOBt 방법을 이용하여 수지상에 첫번째 아미노산(C- 말단 FMOC-Pro) 을 로딩한다. ABI FastMoc 프로토콜(ABI 사용자 편람 32 및 33, Applied Biosystems Inc.)에 따른 연속적인 탈보호(20% 피페리딘/NMP로) 및 커플링 사이클이 전체 펩티드 서열을 만드는데 사용된다.

N-말단 변형기를 부착시키기 전에 펩티드의 동일성 및 본래 상태는 시약 K (0.75g 결정페놀, 0.25㎖ 에탄디티올, 0.5㎖ 티오아니솔, 0.5㎖ 탈이온수, 10㎖ TFA)등으로 FMOC- 펩티드수지의 적은 부분을 절단시키는 것등에 의해 확립한다. 펩티드를 침전시키고 에테르로 세척하고, 역상 HPLC에 의해 정제하고 아미노산 분석 및 질량분광법에 의해 특정화한다.

그 다음엔 칼시토닌의 아미노말단을 유도체화한다. FMOC 화학을 이용할때에는 펩티드수지의 N-말단 FMOC기를 전형적으로는 20-30 분간 DMF 중의 20% 피페리딘으로 탈보호시킨다. 수지를 여과하고 DMF 및 DCM 으로 철저하게 세척하고 건조시킨다.

N-말단 변형 (R 기의 도입) 에 사용되는 카르복실 유도체는 펩티드합성에 사용되는 것과 동일한 활성화 과정, 카르보디이미드-매개 커플링; 혼합된 무수물; 대칭 무수물; 사전형성된 활성에스테르; 염화아실; HOBt 있는 또는 없는 BOP, PyBOP, 또는 PyBrOP- 매개 커플링; 또는 당업계에서 공지된 그것의 변화 및 개선 (예컨대, Coste et al., Tetrahedron Lett. 31: 669, 1990 및 Coste et al., Tetrahedron Lett. 31:205, 1990 참조) 등에 의하여 수지- 결합된 펩티드의 N-말단 아미노기에 커플링시킬 수 있다. 커플링은 수동적으로 또는 자동화된 방법에 의해 행할 수 있다. 특히 바람직한 방법은 먼저 그것을 실온에서 DCM 과 DMF 의 혼합물에서 HOBt 및 DIC 와 반응시켜서 카르복실산 유도체를 사전- 활성화하여 카르복실산 유도체의 HOBt 에스테르를 형성하는 것이다. 그 다음 이 혼합물을 탈보호된 펩티드-수지에 첨가하고, 실온에서 현탁액을 흔든다. 반응은 카이저 테스트에 의해 주시된다. 그 다음 수지를 여과하고, DMF와 DCM 으로 세척하고, 건조시킨다.

유도체화된 펩티드를 수지로 부터 절단하고 적당한 스캐빈저(scavenger) 를 포함하는 TFA 로 처리하여 탈보호시킨다. 시약 K 등과 같은 많은 그러한 절단시약을 사용할 수 있다. 변형된 펩티드는 여과에 의해 수지로 부터 분리하고 에테르 침전에 의해 단리한다. 추가의 정제는 겔여과 및 역상 HPLC 같은 통상적인 방법에 의해 이루어질 수 있다.

칼시토닌의 위치 1과 7의 두 시스테인 사이의 디술피드 결합은 공기 산화 또는 페리시안화칼륨이나 DMSO로의 산화(Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 113: 6657-6662, 1991)등과 같은 통상적인 방법에 따라 형성된다. 특히 바람직한 방법은 DMSO조의 산화이다.

HPLC 또는 엘만시약에 의해 모니터했을 때 산화반응이 완결된 후 펩티드를 분리하고 HPLC에 의해 정제하고 분석용 HPLC 및 질량분석에 의해 순도에 대해 분석하였다.

본발명의 다른 면으로는 다중체 칼시토닌이 제공된다. 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴기로 유도체화된 칼시토닌을 전이금속이온과 결합시켜서 착체를 형성한다.

이것과 관련하여 바람직한 칼시토닌 유도체는 비피리딘 또는 비피리딘-유사 원자단 같은 두 고리질소원자를 함유하는 선형 비시클릭 원자단의 첨가에 의해 변형된 것이다.

예컨대, 디카르복시-비피리딘으로 유도체화된 연어 칼시토닌은 Fe²⁺와 3:1 몰의 착체를 형성한다. 이것에 유용한 다른 금속은 Cr³⁺, Fe³⁺, Mn²⁺, Co²⁺, Co³⁺, Ni²⁺, Cu²⁺, Cu⁺및 Zn²⁺를 포함한다. 착체를 생성하는 바람직한 방법은 변형된 칼시토닌을 적당한 금속염 수용액으로 적정하는 것이다.

본발명에 따른 칼시토닌 유도체는 제약학적으로 허용가능한 염, 특히 유기산과 무기산의 염을 포함하는 산- 첨가 염의 형태일 수 있다. 그러한 염의 실례는 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 옥살산, 숙신산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 살리실산등과 같은 유기산의 염을 포함한다. 염기성 아미노산 잔기의 산- 첨가 염은 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 적당한 산또는 무기물로 펩티드를 처리함으로써 제조하고, 또는 적당한 산의 동결건조에 의해 직접 원하는 염을 얻을 수 있다.

본발명의 화합물은 저칼슘혈 활성을 갖고 혈청칼슘의 감소 및 골 대사의 조절을 위한 사람 및 가축의 약제로 유용하다.

본발명의 화합물은 예컨대 골다공중, 변형성골염(Paget's disease), 부갑상선 기능항진증, 골연화증, 유아의 특발성 칼슘과잉혈증 및 다른 상태의 치료에 이용할 수 있다.

또한 칼시토닌 유도체는 급성 췌장염 및 위장장애의 치료에서 위액분비를 억제하는데 이용할 수도 있다.

제약조성물은 매일 내지 매주 간격으로 투여한다. 그러한 제약조성물의 "유효량" 은 임상적으로 혈청칼슘의 상당한 감소, 골 재흡수의 억제, 위액분비의 억제 또는 기타 효과를 제공하는 양이다. 그러한 양은 부분적으로는 치료하고자 하는 특정상태, 환자의 연령, 체중, 일반 건강상태, 및 당업자에게 명백한 다른 요인들에 좌우될 것이다.

칼시토닌 유도체의 치료적으로 유효한 투여량의 농도는 징후에 따라 크게 변할 수 있으며 당업계에서 잘 알려져 있다. 예컨대, 골다공증의 치료를 위한 치료적 투여량은 일반적으로 50-150 국제단위(I.U.) 범위이다. 효능은 래트에서의 저칼슘혈 효과와 표준제제의 것을 비교함으로써 평가되고 국제단위로 표현되는데, 이것은 런던 홀리힐의 Natio-nal Institute for Biological Standards and Control에 의해 분배된 International Reference of Preparation에서 기술되었다. 상당히 증가된반감기를 갖는 화합물은 더 낮은 투여량으로 투여할 수 있다.

칼시토닌 유도체와 그것의 제약학적으로 허용가능한 염은 통상적인 방법에 따라 비경구적, 경구적 투여, 비강투여, 직장내 투여 또는 경피투여를 위한 제약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제제화된다. 제제는 추가로 하나 이상의 희석제, 충전제, 에멀션화제, 방부제, 완충제, 부형제등을 포함할 수 있고 액체, 분말, 에멀션, 좌약, 리포솜, 경피 패치, 정제등과 같은 형태로 제공될 수 있다. 당업자는 본발명의 화합물을 Remington's Pharmaceutical Science, Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990 (이것은 전체가 여기서 참고문헌으로 통합되었다) 에서 개시된 것처럼 적당한 방법으로, 허용된 관습에 따라 제제화할 수 있다.

하기의 실시예는 제한이 아닌 예시의 목적으로 주어진다.

실시예 1

A. 연어 칼시토닌의 합성:

선형 보호된 연어 칼시토닌(SCT)은 FMOC 화학 및 HOBt 및 HBTU 활성화 방법을 이용하여 Applied Biosystems, Inc. (Foster city, CA) 431A 펩티드 합성기에서의 고체상 방법에 의해 합성하였다. 0.43mM 치환체(580㎎) 의 Rink 아미드 MBHA 수지(Nova Biochem, La Jolla, CA) 를 이용하였다. 모든 커플링은 > 98.5% 이었다. 합성의 종결시 수지를 NMP 및 CH₂Cl₂로 철저하게 세척하고 건조시켰다. 수지- 결합된 FMOC-SCT의 소량(27㎎)을 탈보호시키고 2.5 시간 동안 시약 K 10㎖에서 절단시켰다. 수지를 여과하고 용액을 증발시켰다. 잔류물을 Vydac C-4 (2.2×25cm) HPLC컬럼에서 40분간 0-60% B 의 구배 (용매 A: 수중의 0.1% TFA 및 용매 B: 아세토니트릴중의 0.1% TFA)를 이용하여 크로마토그래피하여 순수한 FMOC-SCT를 얻었다. 펩티드의 잔류시간은 36.38 분이었다. 수지와 연어 칼시토닌 결합상태를 확인하기 위해 아미노산 분석 및 질량분석(ms 3656.33)에 의해 펩티드를 특정화하였다.

B. 비피리딘-변형된 칼시토닌(ZP-1 또는 BP₄,₄-CT)의 제조:

교반막대 및 건조튜브로 장치된 플라스크에서 2, 2'-비피리딘-4, 4'- 디카르복실산(0.2mM)을 CH₂Cl₂중의 5% 디이소프로필에틸아민(DIEA) 3㎖에 녹였다. N-히드록시벤조트리아졸(HOBt)(0.5mM) 및 디이소프로필카르보디이미드(DIC)(0.5mM)를 첨가하여 HOBt 디에스테르를 형성하였다; 45분간의 교반후엔 용액이 맑아져서 담황색으로 변했다.

SCT-수지(100mg) 를 DMF 중의 20% 피페리딘으로 처리하여 N-말단보호기를 제거하였다.

탈보호된 SCT-수지를 2, 2'-비피리딘 카르복실산 HOBt 디에스테르 용액에 첨가하였다.

혼합물을 하룻밤 동안 진동시켰다. 유리 NH₂기에 대한 네가티브 카이저 테스트는 커플링이 완전하다는 것을 나타냈다. SCT-수지를 DMF 및 CH₂Cl₂로 세척하였다.

비피리딘- 변형된 SCT의 환원된 형태를 시약 K로 수지로 부터 절단시키고 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 0.1% 트리플루오로아세트산을 포함하는 아세토니트릴과 물의 혼합물을 HPLC 용매로서 사용하였다. 직선구배 (20분간 20% CH₃CN/물 내지 80% CH₃CN/ 물) 을 이용하여 펩티드를 용출하였다. 주요 피크를 모아서 동결건조시켰다. 결과적인 펩티드는 먼저 5㎎/㎖의 펩티드 농도로 펩티드를 14% DMSO 함유 1% 중탄산암모늄 수용액에 녹임으로써 산화시켰다. 혼합물을 실온예서 하룻밤 유지한 후 생성물을 분리하고 역상 HPLC에 의해 정제하였다. 수득량은 15mg이었다. 질량분석 및 AAA 를 이용하여 정제한 펩티드를 특정화하였다. FAB-MS는 m/e = 3660 (MH⁺) 을 나타냈다. AAA는 Asx 2.20 (2), Glx 3.43 (3), Ser 4.16 (4), Gly 3.38 (3), His 0.98 (1), Arg 1.19 (1), Thr, 4.96 (5), Pro 2.24 (2), Tyr 1.21 (1), Val 1.00 (1), Cys 0.86 (2), Leu 4.54 (5), Lys 2.22 (2)을 나타냈다.

완충 수용액에서 칼시토닌 유도체와 그것의 Fe ( II ) 착체의 형태를 연구하는데 원편광이색성 분석을 사용하였다. 비피리딘 변형된 칼시토닌의 겉보기 분자량은 Fe ( II )의 존재 및 부재하에서 침강 평형 실험 및 겔-여과에 의해 결정하였다.

3중체 칼시토닌-Fe ( II ) 착체의 생성상수 및 해리속도는 UV 분광분석에 의해 결정하였다.

C. 니코틴산-변형된 칼시토닌(ZP-5 또는 Nic-SCT)의 제조

니코틴산 (3.7 × 10^-5mol)을 DMF 및 방울에 녹였다.

그 다음엔 DIC (3.7 × 10^-5mol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 대략 10분동안 진동시키고, 그후 탈보호된 SCT-수지를 첨가하였다. 커플링 반응은 카이저 테스트를 이용하여 주시하였다. 현탁액을 하룻밤 동안 진동시켰다.

시약 K (1.65㎖ TFA, 0.112㎖ 88% 페놀, 0.098㎖ H₂O, 0.1㎖ 티오아니솔, 0.05㎖ 에탄디티올를 Nic-SCT 수지와 혼합하여 Nic-SCT 를 수지로 부터 절단시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 2.5 시간 동안 진동시킨 다음, 혼합물을 여과하여 수지를 제거했다.

펩티드를 냉각 에테르에서 침전시키고, 원심분리에 의해 모았다. 침전물을 에테르로 3번 세척하고 대략 1시간 동안 건조기에서 건조시켰다. 건조된 펩티드를 0.5㎖ H₂O 에 녹인 다음 세파덱스 G-15 컬럼에 적용시켰다. 컬럼을 5% 아세트산으로 용출시켰다. 270nm 에서의 흡광도로 펩티드를 검출하였다. 펩티드를 포함하는 분획을 모아서 동결건조시켰다.

C₄- 분석용 컬럼(Vydac, Hesperia, CA) 을 이용하여 역상 HPLC에 의해 Nic-SCT를 분석하였다. HPLC를 270nm 에서 모니터하였다. 용리제는 1% TFA 를 함유하는 아세토니트릴 및 물이었다. 20분간의 20% 내지 80% 아세토니트릴의 직선 구배를 이용하여 Nic-SCT 를 용출시켰다. 주요 피크(55% 아세토니트릴) 를 모아서 동결건조시켰다. 펩티드의 전체 양은 대략 18mg이었다.

Nic-SCT (18㎎)를 DMSO로 산화시켜 분자내 디술피드 결합을 형성하였다. Nic-SCT의 환원된 형태의 사라짐은 엘만 시약으로 주시하였다. 초기농도는 10% DMSO 를 포함하는 완충액(2% NH₄HCO₃, pH 8.0) 에서 2mg/㎖이었다.

혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 산화된 Nic-SCT 의 HPLC는 단일 피크를 보였고, 잔류시간(59% 아세토니트릴) 은 환원된 형태의 것(55% 아세토니트릴)보다 더 길었다. 산화된 Nic-SCT 는 HPLC에 기초하여 >95% 순수한 것으로 밝혀졌다. 순수한 펩티드의 전체 양은 17㎎이었다.

D. 피콜리닐- 변형된 칼시토닌(ZP-6 또는 Pic-SCT)의 제조

Pic-SCT 는 Nic-SCT 에 대해 기술된 것과 유사한 방법에 의해 합성하였다.

상술한 대로 피콜린산 (3.7 × 10^-5mol)을 탈보호된 SCT-수지(100mg) 에 커플링시켰다.

Pic-SCT 를 상술한대로 시약 K를 이용하여 탈보호시키고 수지로 부터 절단시켰다.

Pic-SCT 는 HPLC에 의해 20분간의 20% 부터 80% 아세토니트릴까지의 직선 구배를 이용하여 정제하였다. 주요 피크(60% 아세토니트릴) 를 모아서 동결건조시켰다. 펩티드의 전체 양은 대략 20㎎이었다. 그 다음 정제한 Pic-SCT 를 Nic-SCT 에 대해 일반적으로 기술한 대로 산화시켰다. 산화된 형태의 HPLC는 단일 피크를 보였고, 잔류시간(61% 아세토니트릴)은 환원된 형태의 것과 거의 동일하였다. 산화된 Pic-SCT는 HPLC에 기초하여 90% 순수한 것으로 밝혀졌다 (17mg). Pic-SCT 를 추가적인 HPLC 전개에 의하여 더욱 정제한다.

E. 2-피라지노일- 변형된 칼시토닌(ZP-7 또는 2-Pyr-SCT)의 제조

2-Pyr-SCT 는 Nic-SCT 에 대해 기술된 것과 유사한 방법에 의해 합성하였다.

상술한 대로 2-피라니진 카르복실산 (3.7 ×10^-5mol)을 탈보호된 SCT-수지(100㎎) 에 커플링시켰다. 2-Pyr-SCT 를 상술한 대로 시약 K를 이용하여 탈보호시키고 수지로 부터 절단시켰다. 2-Pyr-SCT를 20분간의 20% 부터 80% 아세토니트릴까지의 직선 구배를 이용한 HPLC에 의하여 정제하였다. 주요 피크(59% 아세토니트릴) 를 모아서 동결건조시켰다. 펩티드의 전체 양은 대략 20㎎이었다. 그 다음 정제한 2-Pyr-SCT를 Nic-SCT 에 대해 일발적으로 기술된 대로 산화시켰다. 산화된 형태의 HPLC는 단일 피크를 보였고, 잔류시간(61% 아세토니트릴) 은 환원된 형태의 것보다 다소 더 길었다. 산화된 2-Pyr-SCT 는 HPLC에 기초하여 >95% 순수하다는 것이 밝혀졌다 (18mg).

F. 추가의 변형된 칼시토닌의 제조

2, 2'-비피리딘-5, 5'- 디카르복실산(ZP-2 또는 BP₅,₅-SCT), 4, 4'- 비페닐디카르복실산(ZP-3 또는 BPhe-SCT), 이소니페코트산(ZP-8 또는 isonip-SCT), DL-피페콜린산(ZP-9 또는 pip-SCT) 및 니페코트산(ZP-10 또는 nip-SCT) 변형된 연어 칼시토닌은 본질적으로 Nic-SCT에 대해 기술된 것과 동일한 방법에 의해 합성하였다. 화합물을 상술한 대로 HPLC에 의해 정제하고 하기에서 기술되는 것처럼 분석하였다.

실시예 2

BP₄,₄-CT의 특정화: 칼시토닌 리셉터에 결합할 수 있는 능력

유도체화된 BP₄,₄-CT 분자의 칼시토닌 리셉터에 결합할 수 있는 능력은 재조합 사람 칼시토닌 리셉터 또는 내인성 햄스터 칼시토닌 리셉터를 발현하는 포유동물 세포에서 분자의 시클릭 AMP 레벨을 증가시킬 수 있는 능력을 측정함으로써 분석하였다.

사람 칼시토닌 리셉터는 하기와 같이 제조하였다: 사람 칼시토닌 리셉터의 발현을 일으킬 수 있는 DNA 구조체를 포함하는 pHOLLEX 라고 명명된 플라스미드 (1992년 9월 1일 수탁번호 69067로 아메리칸 타입 컬춰 콜렉션 (메릴랜드 록빌리 파크론 드라이브 12301)에서 E. coli 균주 XL-1 블루 형질전환체로서 기탁됨) 를 이용하여 세포주 BHK/KZ10-20-48 (여기서 전체가 통합된 공계류중인 미국특허출원 07/954,804에서 개시됨) 을 트랜스펙션시켰다. BHK/KZ10-20-48은 루시페라제 유전자를 포함하는 플라스미드로 트랜스펙션된 BHK 세포주이며, 이 유전자의 발현은 시클릭 AMP 반응요소(CRE)에 의존적인데 이것은 시클릭 AMP 의 존재하에 하류의 코딩서열의 발현을 유발한다. 따라서 칼시토닌 리셉터와 리간드의 결합에 의한 시클릭 AMP 경로의 자극은 루시페라제 유전자의 발현을 일으킨다.

칼시토닌 리셉터 없는 백터는 네가티브 콘트롤로서 세포주 BHK/KZ10-20-48을 트렌스펙션 시키는데 사용하였다. 형질전환체는 500μg/㎖ G418-네오마이신 및 250nM 메토트렉세이트를 포함하는 선택 성장 배지(5% 혈청을 갖는 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)) 에서 생장시켰다.

내인성 햄스터 칼시토닌 리셉터를 발현하는 BHK 세포주를 상술한 CRE-유도가능 루신페라제 리셉터를 제공하기 위해 플라스미드 KZ10-20-48로 트랜스펙션시켰다. 트랜스펙션된 세포를 500μg/mL G418- 네오마이신 및 250nM 메토트렉세이트를함유하는 선택 성장 배지에서 배양하였다. 칼시토닌 리셉터를 발현하는 세포를 10^-13M 내지 10^-6M 범위의 농도의 연어 칼시토닌(SCT) 및 유도체화된 칼시토닌에 대한 CRE-결합된 루시페라제 반응의 유도에 대해서 삼중으로 분석하였다. MICROLITE 평평한 바닥의 조직배양 플레이트(Baxter Scientific Products, Chicago, IL) 를 각 웰이 선택배지 100μl 중에 2×10⁴세포를 포함하도록 확립하고, 세포를 하룻밤 생장시켰다. SCT 및 GF43을 2X 최종분석 농도로 제조하여 성장배지에서 10^-13내지 10^-6M 을 제공하였다. 3중의 샘플 웰에서 오래된 배지를 웰로 부터 제거하고 새로운 성장배지 100μl 와 각 2X 용액 100μl 를 첨가함으로써 유도가 개시되었다. 비유도 루시페라제 레벨은 10% 소태아혈청을 함유하는 DMEM 100μl 를 첨가한 3중의 웰에서 결정하였다. 루시페라제의 유도를 가능하게 하도록 37℃, 5% CO₂에서 4시간 동안 플레이트틀 배양하였다.

유도 후 배지를 제거하고 웰을 200μl/웰 PBS 로 한번 세척하였다. 세척 후 스톡세포배양물 용해시약 (루시페라제 분석 시스템, Promega Corp., Madison, WI) 의 1:5 희석물(멸균수에서) 20μl 를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 15분간 플레이트를 배양하였다.

40μl 의 루시페라제 분석기질 (루시페라제 분석시스템, Promega)을 첨가한 Labsystems Luminoskan 마이크로타이터 루미노미터(Labsystems Inc., Morton Grove, IL) 에 플레이트를 옮기고, 반응물을 3초간 혼합하고, 웰당 2초간 루시페라제 시그날을 통합하였다.

각 화합물에 대한 루시페라제의 폴드 유도는 하기와 같이 계산하였다:

분석의 결과를 표에 요약하였다.

표

이 데이타는 유도체화된 칼시토닌 ZP-1, ZP-2, ZP-5, ZP-6, ZP-7, ZP-8, ZP-9 및 ZP-10은 연어 칼시토닌과 유사한 EC50 (최대활성의 1/2)을 가지며 사람 칼시토닌 보다 더큰 활성을 갖는다는 것을 보여준다. ZP-3은 사람 칼시토닌과 유사한 효능을 갖는다.

실시예 3

혈청칼슘 레벨에 대한 BP-CT의 생체내 효과

비피리딘-칼시토닌의 생체내 생물학적 활성은 언어 칼시토닌의 작용과 비교할때 마우스에서 혈청 칼슘을 낮출 수 있는 BP₄,₄-CT 의 능력으로서 측정하였다.

6주일된 Swiss-Webster 수컷 마우스(12 내지 18 그램) 에 BP₄,₄-CT, 연어 칼시토닌 또는 비히클을 단일 피하주사로 투여하였다. 혈청 칼슘 측정을 위한 혈액 샘플은 주사후 0, 1 및 4시간 간격으로 안와동 천자로 부터 모았다. 혈청 칼슘은 Dacos Excel Analyzer (Coulter Electronics Company, Hialeah, Fla.) 를 이용하여 분석하였다.

하기 그룹의 각각에 임의로 할당된 8 마우스를 가지고 하기의 투여량으로 화합물을 투여하였다:

제 1도, 제 2도 및 제 3도는 BP₄,₄-CT 및 연어 칼시토닌의 동등량이 투여량- 의존적 방식으로 혈청칼슘 레벨을 동일하게 감소시켰다는 것을 나타낸다.

본발명의 어떤 구체예들이 예시적인 목적으로 상세히 기술되었지만, 여기서 기술된 조성물과 방법을 본발명의 정신 및 범위로 부터 벗어나지 않고 변형시킬 수있다는 것은 당업자들에게 용이하게 명백할 것이다. 따라서, 본발명은 첨부된 청구범위에 의한 것을 제외하고는 제한되지 않는다.

서열목록

(1) 일반정보:

(i) 출원인: 자이모제네틱스 인코오퍼레이티드

미합중국 워싱톤 98105 시애틀 노스이스트

루스벨트 웨이 4225

유니버시티 오브 워싱톤

미합중국 워싱톤 98105 시애틀

(ii) 발명의 명칭: 유도체화된 칼시토닌

(iii) 서열의 수: 2

(iv) 통신주소:

(A) 수신인: 자이모제네틱스 인코오퍼레이티드

(B) 거리: 엔. 이. 루스벨트 웨이 4225

(C) 도시: 시애틀

(D) 주: 워싱톤

(E) 국가: 미합중국

(F) 우편번호: 98105

(v) 컴퓨터 판독형태:

(A) 매체유형: 플로피 디스크

(B) 컴퓨터: IBM PC 호환기종

(C) 오퍼레이팅 시스템: PC-DOS/MS-DOS

(D) 소프트웨어: PatentIn Release #1.0, Version #1.25

(vi) 본 출원 데이타:

(A) 출원번호:

(B) 출원일:

(C) 분류:

(viii) 대리인 정보:

(A) 명칭: 데보라 에이. 소위스락

(B) 등록번호: 37,438

(C) 참조/ 사건번호: 92-20PC

(ix) 원격통신정보:

(A) 전화: 206-547-8080 ext 427

(B) 팩스: 206-548-2329

(2) SEQ ID NO:1에 대한 정보:

(i) 서열특성:

(A) 길이: 32 아미노산

(B) 유형: 아미노산

(D) 형태: 선형

(ix) 특징:

(A) 명칭/ 키: Modified-site

(B) 위치: 32

(D) 기타정보: / 표지 = 아미드화

/주 = "C-말단 프롤린 잔기는 아미드화됨"

(2) SEQ ID NO:2에 대한 정보:

(i) 서열특성:

(A) 길이: 32 아미노산

(B) 유형: 아미노산

(D) 형태: 선형

(ix) 특징:

(A) 명칭/ 키: Modified-site

(B) 위치: 32

(D) 기타정보: / 표지 = 아미드화

Claims (25)

1. 하기로 구성되는 군으로 부터 선택된 화합물 및 제약학적으로 허용가능한 그것의염:

   여기서 R은 선택적으로 고리당 1 또는 2 고리질소원자를 포함하는 치환된 또는 비치환된 비아릴; 또는 N, S 및 O 로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비스- 헤테로시클로알킬이다.
2. 제 1항에 있어서, R 은

   (여기서 X₁및 Y₁은 개별적으로 C 또는 N이다); 또는

   (여기서 X₃및 Y₃는 개별적으로 N, O 또는 S 이다; 상기에서 R'는 선형 C₁-C₈알킬, 분지된 C₁-C₁₂알킬, 니트로, 히드록실, 트리플루오로메틸, 카르복실, 카르복실아미드, 메르캅트기, 시아노, 할로, 알콕시, 에스테르 또는 H이다) 인 것을 특징으로 하는 화합물.
3. 제 2항에 있어서, R 은

   인 것을 특징으로 하는 화합물.
4. 제 3항에 있어서, R'가 CO₂H 또는 H 인 것을 특징으로 하는 화합물.
5. 제 1항에 있어서, R 은

   (여기서 R'은 CO₂H 또는 H이다) 인 것을 특징으로 하는 화합물.
6. 제 1항에 있어서, R 은 2 또는 3개의 고리를 포함하는 융합된 고리 구조인 것을 특징으로 하는 화합물.
7. 제 1항에 있어서, R 은 하기로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
8. 식 R-N-CT의 화합물에서, CT는 사람, 연어, 뱀장어, 쥐, 돼지, 소, 양 및 닭 칼시토닌 및 생물학적으로 활성이 있는 그것의 유도체 및 변이체로 구성되는 군으로 부터 선택되는 칼시토닌, 또는 제약학적으로 허용가능한 그것의 염이고; N 은 아미드결합이고; R 은 선택적으로 고리당 1 또는 2 고리질소원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비아릴; 또는 N, S 및 O로 구성되는 군으로 부터 선택된 고리당 1 또는 2 헤테로원자를 포함하는 치환 또는 비치환 비스- 헤테로 시클로알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
9. 제 8항에 있어서, R 은

   (여기서 X₁및 Y₁은 개별적으로 C 또는 N 이다),

   (여기서 X₃및 Y₃는 개별적으로 N, O 또는 S 이다;

   상기에서 R'는 선형 C₁-C₈알킬, 분지된 C₁-C₁₂알킬, 니트로, 히드록실, 트리플루오로메틸, 카르복실, 카르복실아미드, 메르캅트기, 시아노, 할로, 알콕시, 에스테르 또는 H이다) 인 것을 특징으로 하는 화합물.
10. 제 9항에 있어서, R 은

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
11. 제10항에 있어서, R'는 CO₂H 또는 H 인 것을 특징으로 하는 화합물.
12. 제 8항에 있어서, CT는 사람 또는 연어 칼시토닌인 것을 특징으로 하는 화합물.
13. 제10항에 있어서, R 은

    (여기서 R'는 CO₂H 또는 H 이다)

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
14. 제 8항에 있어서, R 은 2 또는 3개의 고리를 포함하는 융합된 고리구조인 것을 특징으로 하는 화합물.
15. 제 8항에 있어서, R 은 하기로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
16. 식 X-(R-N-CT)_n의 화합물 또는 제약학적으로 허용가능한 그것의 염에서, X 는 전이금속의 1가, 2가 또는 3가 이온이고; R 은 헤테로시클로알킬 또는 헤테로아릴기이고; CT는 사람, 연어, 뱀장어, 쥐, 돼지, 소, 양 및 닭 칼시토닌 및 생물학적으로 활성이 있는 그것의 유도체 및 변이체로 부터 선택된 칼시토닌이고; N 은 아미드결합이고; n = 2 또는 3인 것을 특징으로 하는 화합물.
17. 제16항에 있어서, X 는 Fe²⁺인 것을 특징으로 하는 화합물.
18. 제16항에 있어서, n = 3 인 것을 특징으로 하는 화합물.
19. 제16항에 있어서, CT는 사람 또는 연어 칼시토닌인 것을 특징으로 하는 화합물.
20. 제19항에 있어서, R 은

    (여기서 R'는 CO₂H 또는 H 이다)

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
21. 제16항에 있어서, R 은

    (여기서 R'는 CO₂H 또는 H 이다)

    인 것을 특징으로 하는 화합물.
22. 제16항에 있어서, X 는 Fe²⁺이고, R 은

    이고, CT는 사람 또는 연어 칼시토닌이고, n = 3 인 것을 특징으로 하는 화합물.
23. 제16항에 있어서, R은 하기로 구성되는 군으로 부터 선택되는 것을 특징으로하는 화합물:
24. 제16항에 있어서, R 은 2 또는 3개의 고리를 포함하는 융합된 고리 구조인 것을 특징으로 하는 화합물.
25. 제 8항에 따른 화합물과 제약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 환자의 혈청 칼슘을 감소시키는 제약조성물.