JPH0421699A - カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、心臓病の治療薬または脳循環改善薬などの医
薬として有用な新規カルシトニン遺伝子関連ペプチド（
Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ　　ＧｅｎｅＲｅｌａｔｅｄ　　
Ｐｅｐｔｉｄｅ；以下ＣＧＲＰという）誘導体に関する
。

〔従来の技術〕

カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＯＲＰ）は、を索
動物の脳やヒトの視床下部に存在するペプチドであり、
ヒト、ラット、ニワトリ、ブタ等で知られている。ヒト
Ｃ０ＲＰ　（ｈ−ＣＣ；ＲＰ）は、式 ％式％ （式中、Ａ３はＡｓｐまたはＡｓｎを示し、Ａ２２はＶ
ａｌまたはＭｅｔを示し、Ａ２５はＡｓｎまたはＳｅｔ
を示す） で表されるアミノ酸順序を有し、またニワトリ　（ｃｈ
　ｉ　ｃｋｅｎ）ＣＧＲＰ　（ｃ−ＣＧＲＰ）はＡ３が
Ａｓｎ、１４番目ＧｌｙがＡｓｐ、１５番目ＬｅｕがＰ
ｈｅ、２３番目ＶａｌがＧｌｙに置換されたペプチドで
ある。Ｃ０ＲＰの生物学的性質については、循環器系（
Ｅｕｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍａ８　　（５）、　　２１４４
〜２１４５　　（１９８６）”）　　、骨代謝（Ｅｎｄ
ｏｃｒｉｎｏｌｏ　　ｙ、１１８（５）、４６〜５１　
　（１９８６））及びその他（Ｅｕｒ、　　Ｊ、　　Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌ、、　　１４２゜３５５〜３５Ｂ　　
（１９８７）　　；Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏ　　　ｈ　　　ｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、、　
　１５２　（１）、３８３〜３９１　　（１９８８）等
）に対する多くの作用を有することが知られている。Ｃ
０ＲＰの誘導体も多数合成されている（Ｃｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌ　１．．３４　（９）、３９１５〜
３９１８　　（１９８６）　　；Ｅｘ　　　ｅｒｉｅｎ
ｔｉａ、４３．８９０〜８９２　（１９８７）等）。ま
た、ｈ−ＣＯＲＰのＣ端断片（８−３７）の合成等につ
いての報告もある（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉ。

ｈ　　ｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、、１５２　（１）３
８３〜３９１　　（１９８８））。

〔発明が解決しようとする課題〕

ｈ−ＣＯＲＰより優れた諸性質を有する誘導体を見出す
ことは医療上有用であり、特にｈ−ｃｃＲＰより血圧低
下作用の強いペプチド誘導体を探索することは医学上重
要なことである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の点に着目してＣ０ＲＰ誘導体につ
いて種々の合成を行い、その生物活性について比較した
結果、既知のｈ−ＣＯＲＰより血圧低下作用が強いＣ０
ＲＰ誘導体を見出した。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたものであり、
その目的とするところは、Ｃ０ＲＰ誘導体を提供するも
のである。

即ち、本発明は、式 ％式％ （式中、ＸはＨまたはＨ−Ａｌａ−ＮＨ−を示し、４−
Ｆ−Ｐｈｅは４−フルオロフェニルアラニンを示す）で
表されるペプチドまたはその塩である。

本発明のペプチド〔１〕はいずれも公知のペプチド合成
の常法手段に従って合成できる。液相法によって合成す
る場合には、例えば、Ｃ末端の４フルオロフエニルアラ
ニル基のカルボキシル基をアミド基に転化し、式〔１〕
で示されるアミノ酸順序に個々の保護されたアミノ酸お
よび（または）保護された低級ペプチドを縮合し、縮合
反応の最終段階でＬ−システイニル基およびβ−メルカ
プトプロピオン酸のメルカプト基の保護基およびその他
の側鎖の官能基の保護基を酸分解により脱離し、メルカ
プト基を酸化してジスルフィド橋を形成することにより
得られる。

縮合反応自体は、ペプチド合成のための常法手段に従っ
て、保護基の脱着、縮合反応を繰り返すことにより行わ
れる。即ち、本ペプチド〔１〕の原料ならびにすべての
中間体の製造において使用される各種の保護基は、ペプ
チド合成において既知なもの、例えば、加水分解、酸分
解、還元、アミツリシス、ヒドラジツリシスなどのよう
な既知手段によって容易に脱離することのできる保護基
が用いられる。このような保護基はペプチド合成化学の
分野の文献ならびに参考書に記載されている。

本発明においては、α−アミノ基の保護にｔブチルオキ
シカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル基を用い、側鎖のアミ
ノ基、即ちリジンのε−アミノ基の保護にベンジルオキ
シカルボニル基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル
基を用い、α−カルボキシル基の保護にメチルエステル
基、ベンジルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル基
、即ちアスパラギン酸の側鎖カルボキシル基の保護にベ
ンジルエステル基を用い、セリンおよびスレオニンの水
酸基の保護にベンジル基を用い、アルギニンのグアニジ
ノ基中のアミノ基の保護にメシチレン−２−スルホニル
基またはトシル基ヲ用い、システィンおよびβ−メルカ
プトプロピン酸のメルカプト基の保護基にｐ−メトキシ
ペンシル基、４−メチルベンジル基またはアセトアミド
メチル基を用いるのが好ましい。

本ペプチド〔１〕の合成においては、個々のアミノ酸お
よび（または）低級ペプチドの縮合は、例えば、保護さ
れたα−アミノ酸および活性化末端カルボキシル基をも
つアミノ酸または低級ペプチドと遊離のα−アミノ基お
よび保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸また
は低級ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化α−
アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつア
ミノ酸または低級ペプチドと遊離の末端カルボキシル基
をもつアミノ酸または低級ペプチドとを反応させること
により実施することができる。

この場合、カルボキシル基は、例えば、酸アジド、酸無
水物、酸イミダゾリドまたは活性エステル、例えば、シ
アノメチルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ
−ヒドロキシコハク酸イミドエステルなどに変換するこ
とによって活性化することができる。また、カルボジイ
ミド、例えばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシル−カルボジイ
ミド（ＤＣＣ）　、Ｎ−エチル−Ｎｏ　−３−ジメチル
アミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ、Ｎ“　−カルボ
ニル−ジイミダゾールなどの縮合剤を使用して反応させ
ることによって活性化することができる。

本発明において好ましい縮合方法は、アジド法、活性エ
ステル法、混合酸無水物法およびカルボジイミド法であ
る。縮合の各段階ではラセミ化が起こらない方法または
ラセミ化が最小になる方法を用いるのが望ましく、好ま
しくはアジド法、活性エステル法、Ｗｕｎｓｃｈ法〔Ｚ
、Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ、、２１ｂ、４２６　（１９
６６）またはＧｅｉｇｅｒ法（Ｃｈｅｍ、Ｂｅｒ、、１
０３．７８８　　（１９７０））などを用いる。

縮合順序は式〔１〕で示されるアミノ酸順序であれば、
如何なる順序からも縮合反応をなし得るが、Ｃ末端側か
ら順次アミノ酸および（または）低級ペプチドを連結さ
せるのが好ましい。

かくして得られる鎖状保護ペプチドから目的のペプチド
〔１〕を得るには、先ず上記鎖状保護ペプチド、即ち保
護されたω−アミノ基、側鎖カルボキシル基、水酸基、
グアニジノ基およびメルカプト基を有するペプチドアミ
ドの保護基が脱離される。これらの保護基は、好ましく
は、酸分解、例えばトリフルオロメタンスルホン酸、無
水弗化水素などによる方法によって一段階で脱離され、
遊離メルカプト基を有するペプチドアミドが得られる。

次いで、このペプチドアミドは酸化により分子内ジスル
フィド橋が形成され、目的のペプチド〔１〕が得られる
のであるが、このジスルフィド橋の形成は通常、水中の
大気酸素、有機溶媒中のショートエタン、氷酢酸中の沃
素、水溶液中のフェリシアン化カリウムなどで酸化する
ことによって行われる。

本発明においては、上記の液相法によるペプチド合成法
の他に、固相法によるペプチド合成法を一部または全部
利用してペプチド〔１〕を合成することができる。

例えば、３７番目のアミノ酸から順次固相法により合成
し保護されたペプチド結合樹脂が得られる。これらの保
護基および樹脂は、公知の方法、例えば、トリフルオロ
メタンスルホン酸、無水弗化水素などによる方法によっ
て一段階で脱離され、遊離メルカプト基を有するペプチ
ドアミドが得られる。このペプチドアミドは前記の液相
法で述べたと同じ方法で分子内ジスルフィド橋を形成す
ることにより目的のペプチド〔１〕が得られる。

上記の固相法で用いられる樹脂としては、固相法で通常
用いられる樹脂、例えばベンズヒドリルアミン樹脂、ｐ
−メチルベンズヒドリルアミン樹脂などが挙げられる。

この樹脂は官能基当量や架橋度の違いによって所望の性
状を有する樹脂が入手可能であり、市販品を購入するこ
ともできる。

上記の固相法においては、樹脂に式〔１〕で示されるア
ミノ酸順序にＣ−末端のアミノ酸から順次−つずつ縮合
させる。アミノ酸の官能基は公知の方法により保護基で
保護される。上記の保護基の例としては、前記で述べた
通りである。

上記の固相反応に際しては、樹脂を反応器に入れ、ジク
ロロメタン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベ
ンゼン、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン
または樹脂を膨潤せる溶媒を樹脂１ｇに対し、溶媒２〜
２０ｍ１の割合で添加する。これに、予め別の反応器で
、樹脂中のアミノ基１当量に対し１〜６当量のＢＯＣ−
アミノ酸とＤＣＣを反応させ、得られた対称酸無水物を
副生じたジシクロヘキシル尿素（Ｄ　ＣＵ）より分離し
て、上記樹脂の入った反応器に加える。縮合剤（Ｄ　Ｃ
Ｃ）の使用量はＢＯＣ−アミノ酸１当量に対し、０，５
から３当量を用いる。反応は通常５〜６０分行われる。

各工程で得られたＢｏｃ−アミノ酸−樹脂またはＢＯＣ
−ペプチド−樹脂の一部を採取し、常法（Ｔ、Ｆａｉｒ
ｗｅｌｌ、ｅｔ　　ａｌ、、Ｅ３ｉ。

ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２２．２６９１　　（１９８３）
〕に従い反応したＢｏｃ−アミノ酸量を測定してカンプ
リング量を求めればよい。

次に、α−アミン基の保護基であるＢｏｃをトリフルオ
ロ酢酸の如き酸で脱離して、順次自合反応を遂行すれば
よい。上記の固相法によるペプチド合成は自動固相合成
機を用いるが、手動法で遂行してもよい。これらの操作
は全て窒素ガス気流下で行うのが望ましい。

このようにして得られた保護されたペプチド結合樹脂は
上記で述べた通り、無水弗化水素などにより一段階で保
護基と樹脂が脱離され、遊離メルカプト基を有するペプ
チドアミドが得られる。

前記遊離メルカプト基を有するペプチドアミドは前記の
通り分子内ジスルフィド橋を形成することにより目的の
ペプチド（１）が得られる。

このようにして得られたペプチド〔１〕は、ペプチドま
たは蛋白質を精製する公知の手段によって分離精製する
ことができる。例えば、セファデックスＧ−２５、セフ
ァデックスＧ−５０，セフアデツクスＬＨ−２０などの
ゲル濾過剤を用いるゲル濾過法、カルボキシメチルセル
ロース、その他のイオン交換樹脂などを用いるカラムク
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどに
より行うことができる。

本発明により得られるペプチド〔１〕の例としては、Ｘ
＝Ｈ−Ａ　１　ａ−ＮＨ−であるペプチド〔Ｉ〕、即ち
（４−Ｆ−Ｐｈｅ”〕ｃ−ＣＯＲＰ　（１−３７）（以
下、単にペプチド〔１ａ〕と称することがある）、Ｘ＝
Ｈであるペプチド〔１〕、即ちデス−１−アラニル−デ
ス−α−アミノ　〔４Ｆ−Ｐｈｅ”）ｃ−ＣＧＲＰ　（
１−３７＞（以下、車にペプチド〔１ｂ〕と称すること
がある）が挙げられる。

本発明の新規ペプチド〔１〕は、その方法の条件により
塩基またはその塩の形で得られる。例えば、酢酸などの
公知の有機酸との塩を形成することができる。

本ペプチドＣＩ〕をラット（体重２００〜２５０ｇ）に
４００μｇ／ｋｇを静脈内投与しても死に至らなかった
。本ペプチド〔１〕は動脈閉塞症、末梢血行障害、脳血
行障害などの治療に利用できる。その投与量は目的とす
る治療効果、投与方法、治療期間、年令、体重などによ
り決められるが、通常１．働者においては１回当たり１
〜１００μｇを１日１回〜数回投与すればよい。投与方
法としては、静脈内、点滴静脈内投与などの非経口投与
が好ましい。

尚、本明細書中に記載の略記号は、次の意味を有する。

Ａｓｎ；Ｌ−アスパラギン Ｔｈｒ；Ｌ−スレオニン Ｃｙｓ；Ｌ−システィン Ｖａ　１　；Ｌ−バリン Ｈｉ　ｓ　；Ｌ−ヒスチジン Ａｒｇ；Ｌ−アルギニン １、ｅｕ；Ｌ−ロイシン Ａｓｐ；Ｌ−アスパラギン酸 Ｐｈｅ；Ｌ−フェニルアラニン ３ｅｒ；Ｌ−セリン Ｇｌｙ；グリシン Ｌｙｓ；Ｌ−リジン Ｐｒｏ；Ｌ−プロリン ＡＩａ　；Ｌ−アラニン １３ｏｃ；ｔ−ブチルオキシカルボニルＣＩ−Ｚ；ｐ−
クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｚｌ；ベンジル ＭＢｚｌ；ｐ−メトキシベンジル Ｔｏｓ；）シル ０Ｂｚｌ；ベンジルエステル ＴＦＡ；　トリフルオロ酢酸 ＤＭＦ、Ｎ、Ｎ’　　−ジメチルホルムアミドＤＣＭ；
ジクロロメタン ＤＣＣ，Ｎ、Ｎ”　−ジシクロへキシル−カルボジイミ
ド ＤＩＥＡ；ジイソプロピルエチルアミンＨＯＢ　ｔ　；
　１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＭＢＨＡ樹脂；ｐ
−メチルベンズヒドリルアミン樹脂 〔発明の効果〕 血圧低下作用 〈活性測定法〉 １２週令のＷ　ｉ　ｓ　ｔ　ａ　ｒラットの左大腿動脈
と右頚静脈にカテーテルを挿入し、ストレインゲージト
ランデューサーを介し、血圧を測定した。本発明のペプ
チド〔１ａ〕、ペプチド〔１ｂ〕および公知のｈ−ＣＧ
ＲＰ（対照品〕は、０．１％牛血清アルブミン含有クエ
ン酸緩衝液（ｐＨ６，５）〔以下、単に溶解液と称する
〕に溶し、１群５６匹にそれぞれ２．５．５．１０ｇｇ
／ｋｇになるようカテーテルから投与した。なお、対照
群には溶解液のみを投与した。

〈測定結果〉 投与後の血圧低下作用は第１図に示す通りである。

図面に示す通り、対照群（−Ｘ−）は血圧に何ら影響を
与えないが、本発明品であるペプチド〔１ａ〕　（−・
−）、ペプチド（ｌｂ）（−ム−）を投与した場合、強
く低下させた。この活性の強さはｈ−ＣＯＲＰ　（−■
−）を投与した時より有意に強かった。

上記の通り、本発明のペプチド〔１〕は既知物質のｈ−
ＣＧＲＰよりも血圧低下作用が極めて強いため、心臓病
の治療薬または脳循環改善薬などとして有用である。

実施例 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に説明する
。

実施例　１ （４−Ｆ−Ｐｈｅ”）ｃ−ＣＯＲＰ　（１３１）の製造 保護−（４−Ｆ−Ｐｈｅ３７）　　ｃ−ＣＧＲＰ−ＭＢ
ＨＡ樹脂、即ちＨ−Ａｌａ−Ｃｙｓ　　（４−ＭｅＢｚ
　１）−Ａｓｎ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）−ＡｌａＴｈｒ
　（Ｂｚ　Ｉ）−Ｃｙｓ　　（４−ＭｅＢｚ　Ｉ）Ｖａ
　１−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　Ｉ）−Ｈｉｓ−Ａｒｇ　（Ｔｏ
ｓ）−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ　（ＯＢｚ　　Ｉ）Ｐｈ
ｅ−Ｌｅｕ−３ｅｒ　（Ｂｚ　１）−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ
）−３ｅｒ　（Ｂｚ　１）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−
Ｇａｙ−Ｌｙｓ　　（ｃＩ！−Ｚ）−Ａｓｎ−Ａｓｎ−
Ｐｈｅ−Ｖａ　１−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　］）−
Ａｓｎ−Ｖａ　］−Ｇｌｙ−５ｅｒ　（Ｂｚ　］）Ｌｙ
ｓ　（ｃｊ！−Ｚ）−Ａｌａ−４−Ｆ−ＰｈｅＭＢＨＡ
樹脂１．７４ｇにアニソール２ｍｌ、ジメチルスルフィ
ド２　ｍ　！！、エタンジチオール０．４ｍｊ！を加え
、これに無水弗化水素２０ｍ！！を加え、０℃で１時間
攪拌した。反応後、無水弗化水素を減圧上留去後、残渣
をエーテルで洗浄し、これに２０％酢酸５０　ｍ　ｊ２
を加え、ペプチドを抽出した。抽出液をＤｏｗｅｘ　　
ＷＧＲのカラム（２，５Ｘ１５ｃｍ）に通し、ＩＭ酢酸
１２０ｍｊ！で溶出した。得られた溶出液を凍結乾燥し
、６２０ｍｇの粉末を得た。この粉末を８Ｍ尿素、５ｍ
Ｍジチオスライトールを含む５０　ｍ　Ｍ　Ｎ　ａ　ｔ
　ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，５＞３０ｍ１に溶解し、室
温で１時間攪拌した。その後、５０　ｍＭＮ　ａ　ｔ　
ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，５）１６００ｍｊ！で希釈し
、２０ｍＭＫ、Ｆｅ　（ＣＮ）ｂ水溶液を黄色が消失し
な（なるまで加えた。この溶液をＣＨＰ−２０Ｐ（三菱
化成工業社製）のカラム（５，ＯＸ１７ｃｍ）にチャー
ジし、５％アセトニトリル含有ＩＭ＃酸７２０ｍｌ〜５
０％アセトニトリル含有ＩＭ酢酸７２　ＱｍＩ！の直線
型濃度勾配によるグラジェント溶出を行った。溶出液を
１８ｍｌづつ分画し、その１００μｌを使用してフォリ
ン・ローリ−法により発色させ、７５０ｎｍで測定し、
フラグ９５フ４９〜フ４番目を集め、凍結乾燥して白色
粉末４３８ｍｇを得た。得られた粉末を０１Ｍ酢酸に溶
解し、５ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−２５Ｆｉｎｅのカラム
（２，６Ｘ９５ｃｍ）にチャージし、０．１Ｍ酢酸で溶
出した。溶出液をＩＱ　ｍ　ｌづつ分画し、ワラクシ３
２２６〜３４番目を集め、凍結乾燥して白色粉末２９６
ｍｇを得た。

これを下記の条件による逆相高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ’）により精製し、〔４〜Ｆ−Ｐｈｅ
”）ｃ−ＣＯＲＰ　（１−３７）の粗製品３１ｍｇを得
た。

カラム；Ｓｅｎ　　５ｈｕｐａｋ　　０ＤＳ−Ｈ−５２
５１（２０ｍｍｌＤＸ２５０ｍｍ）溶出液；０．１％Ｔ
ＦＡ−アセトニトリル（アセトニトリルを３０分間に２
７〜３５％に変化させるグラジェント溶出） 流速　；　９　ｍ　１７分 分取　；約２４分に溶出されるピークを分取した。

アミノ酸分析値（６Ｎ塩酸加水分解） Ａｓｐ５．０５　（５）　、Ｔｈｒ３．５７　（４）、
５ｅｔ２．　６６　　（３）　　、Ｐｒｏｌ、　　０９
　　（１）　　、Ｇ１ｙ４．　０２　　（４）　　、Ａ
］ａ４．　００　　（４）　　、Ｖａ　　１３．　９６
　　（４）　　、Ｃｙｓｔ、　　７５　　（１）　　、
Ｌｅｕｌ、　　９８　　（２）、Ｐｈｅｌ、　　９５　
　（２）　　、Ｌｙｓ２．　　Ｏｆ　　（２）、Ｈｉｓ
ｏ、　　９６　　（１）　　、Ａｒｇｌ、　　９８　　
（２）　　、４−Ｆ−ＰｈｅＯ，９（トリプシン、アミ
ノペプチダーゼＭによる酵素分解） Ａｓｐｌ、１７　（１）、Ａｓｎ４．４８　（４）、Ｔ
ｈｒ３．６５　（４）　、５ｅｔ３．１６　（３）、Ｐ
ｒｏｌ、２５　（１）　、Ｇｌ）’４．２４　（４）、
ＡＩａ４．００　（４）　、Ｖａ１３．９３　（４）、
Ｃｙｓｔ、８２　（１）　、Ｌｅｕ２．３５　（２）、
Ｐｈｅｌ、、８６　（２）　、Ｌｙｓ２．１８　（２）
、Ｈ４５０，９３（１）、Ａｒｇ２．０１　　（２）、
４−Ｆ−ＰｈｅＯ，９１（１） 上記の保護ペプチド樹脂は次の方法により得た。

固相合成装置としてＡｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔ
ｅｍｓ社製４３０Ａペプチドシンセサイザーを用いて合
成を行った。固体支持体として４メチルベンズヒドリル
アミン塩酸塩（ＭＢＨＡ）樹脂（Ａｐｐｌｉｅｄ　　Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製０．４８ｍモル／ｇ）Ｉｇを使
用した。

カンプリング中各アミノ酸のα−アミノ基を保護するた
めＢＯＣ基を用いた。側鎖官能基の保護は次の通りであ
る。ｆａｔリジンのアミノ基はＣ１２基、（ｂｌアスパ
ラギン酸のカルボキシル基、セリン、トレオニンの水酸
基はＢｚｌ基、（Ｃ）アルギニンのグアニジノ基はＴＯ
３基、（ｄｌシスティンのＳＨ基は４−ＭｅＢｚ１基で
保護した。アミノ酸はすべてＡｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ社より入手した。

ペプチド−樹脂の合成はＡｐｐｌｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ社の詳細なプロトコール、ｓｙｓｔｅｍ　　
ｓｏｆｔｗａｒｅ　　ｖｅｒｓｉｏｎｌ、４０　５ｔａ
ｎｄａｒｄを用いて行った。アミノ酸の縮合は対称酸無
水物法を用い、Ａｓｎ、ＡｒｇのみＨＯＢＴエステル法
により行った。

用いた保護アミノ酸は次の通りである。

アミノ酸　　保護アミノ酸　　　　　使用量順序　　　
　　　　　　　　　　　ｍモル３７　　Ｂｏｃ−４−Ｆ
−Ｐｈｅ　　　　２３６　　Ｂｏｃ−Ａｌａ　　　　　
　　　２３５　　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（ＣＩ−Ｚ）　　２
３４　　Ｂｏｃ−３ｅｔ　（Ｂｚｌ）　　　２３３　　
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　　　　　２３２　　Ｂｏｃ−Ｖ
ａｌ　　　　　　　　２３１　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　
　　　　２Ｘ２３０　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚ　１）
　　　２２９　　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　　　　　２２
８　　Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　　　　　２２７　　Ｂｏ
ｃ−Ｐｈｅ　　　　　　　　２２６　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ
　　　　　　　２Ｘ２２５　　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　
　　　２Ｘ２２４　　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（ＣＩ−Ｚ）　
　２２３　　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　　　　’２２２　
　Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　　　　　２２１　　Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ　　　　　　　　２２０　　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　
　　　　　　２Ｂｏｃ−３ｅｒ　　（Ｂｚｌ） Ｂｏｃ−Ａｒｇ　　（Ｔｏｓ） Ｂｏｃ−３ｅｒ　　（Ｂｚｌ） Ｂｏｃ−Ｌｅｕ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ Ｂｏｃ−Ａｓｐ　　（ＯＢｚ　　ｌ） Ｂｏｃ−Ａｌａ Ｂｏｃ−Ｌｅｕ Ｂｏｃ−Ａｒｇ　　（Ｔｏｓ） Ｂｏｃ−Ｈｉｓ　　（Ｔｏｓ） Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　　１） Ｂｏｃ−Ｖａｌ Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　　（ＭＢｚ　　１） Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ） Ｂｏｃ−Ａｌａ Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　　１） Ｂｏｃ−Ａｓｎ Ｂｏｃ−Ｃｙｓ　　（ＭＢｚ　　Ｉ） Ｂｏｃ−Ａｌａ 実施例　２ デス−１−アラニル−デス−α−アミノ　〔４Ｆ−Ｐｈ
ｅ”）ｃ−ＣＯＲＰ　（１３７）の製造 保護−デスー１−アラニル−デス−α−アミノ（４−Ｆ
−Ｐｈｅ”）ｃ−ＣＧＲＰ−ＭＢＨＡ樹脂、即ちＭＢｚ
ｌ　　Ｓ　　（ＣＨ２）ｚ　　ＣＯＡｓｎ−Ｔｈｒ　　
（Ｂｚ　１）−Ａｌ　ａ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）−Ｃｙ
ｓ　　（４−ＭｅＢｚ　１）−Ｖａ　１−Ｔｈｒ　　（
Ｂｚ　１）−Ｈｉ　ｓ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）−３ｅｒ　
　（Ｂｚ　１）　−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｖａ　１−Ｇ
ｌ　ｙＬｙｓ　　（ｃｊ！−Ｚ）−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐ
ｈｅＶａ　１−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ　１）−Ａｓ
ｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−３ｅｒ　　（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ　
　（ｃｌ−Ｚ）　−Ａｌ　ａ−４−Ｆ−Ｐｈｅ−ＭＢＨ
Ａ樹脂０．６３ｇにアニソールｌ　ｍ　ｌ、ジメチルス
ルフィド１ｍｆ、エタンジチオールＱ、２ｍｆを加え、
これに無水弗化水素１０ｍ１を加え、０℃で１時間攪拌
した。反応後、無水弗化水素を減圧上留去後、残渣をエ
ーテルで洗浄し、これに２０％酢酸３０ｍ１を加え、ペ
プチドを抽出した。抽出液をＤｏｗｅｘ　　ＷＧＲのカ
ラム（２，５Ｘ１５ｃｍ）に通し、ＩＭ酢酸１００ｍ１
で溶出した。

得られた溶出液を凍結乾燥し、２６２ｍｇの粉末を得た
。この粉末を８Ｍ尿素、５ｍＭジチオスライトールを含
む５０ｍＭＮａ、ＨＰＯ，緩衝液（ｐＨ７，５）１５ｍ
ｊ２に溶解し、室温で１時間攪拌した。その後、５０ｍ
ＭＮａｚ　ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，５）１０００ｍｌ
で希釈し、２０ｍＭＫ　３Ｆ　ｅ　（ＣＮ　）　ｂ水溶
液を黄色が消失しなくなるまで加えた。この溶液をＣＨ
Ｐ−２０Ｐのカラム（２，６Ｘ３２ｃｍ）にチャージし
、５％アセトニトリルを含む１Ｍ酢酸１２００ｍｌ〜５
０％アセトニトリルを含むＩＭ酢ＩＩＩ　１２００　ｍ
　７！の直線濃度勾配によるグラジェント溶出を行った
。溶出液を１６ｍ１づつ分画し、フォリン・ローリ−法
により発色させ、７５０ｎｍで測定し、フラクション５
２〜１００番目を集め、凍結乾燥して白色粉末１１３ｍ
ｇを得た。得られた粉末を０．　１Ｍ酢酸に溶解し、５
ｅｐｈａｄｅｘ　　Ｇ−２５ＦｉｎｅＯカラム（２，６
Ｘ　９５　ｃｍ）にチャージし、０．１Ｍ酢酸で溶出し
た。溶出液を１０ｍ１づつ分画し、フラクション２５〜
３３番目を集め、凍結乾燥して白色粉末９８ｍｇを得た
。これを下記の条件による逆相高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）により精製し、デス−１−アラニ
ル−デス−α−アミノ　（４Ｆ−Ｐｈｅ”）　ｃＣＧＲ
Ｐの精製品１３ｍｇを得た。

カラム；ＹＭＣＯＤＳ　　Ｓ５−５Ａ型（２０ｍｍ　Ｉ
　Ｄｘ　２５０ｍｍ） 溶出液；０．１％ＴＦＡ−アセトニトリル（アセトニト
リルを２５分間に３１〜 ３６％に変化させるグラジェント溶 出） 流速　；　９　ｍ　ｌ　７分 分取　；約１２分に溶出されるピークを分取アミノ酸分
析値（６Ｎ塩酸加水分解） Ａｓｐ５．１１　　（５）　、Ｔｈｒ３．９４　（４）
、５ｅｒ２．６７　（３）　、Ｇ］ｙ４．０７　（４）
、Ａ１ａ３．００　（３）　、Ｖａ　１４．０３　（４
）、Ｌｅｕｌ、　　９６　　（２）　　、Ｐｈｅｌ、　
　９８　　（２）　　、Ｌｙｓ２．　０３　　（２）　
　、Ｈｉｓｓ、　　９６　　（１）　　、Ａｒｇ２．　
００　　（２）　　、４−Ｆ−Ｐｈｅｌ、　　０２　　
（１）　　、Ｃｙｓｔ、　　３５　　（０，５）上記の
保護ペプチド樹脂は実施例１の場合と同様にして保護（
４−Ｆ−Ｐｈｅ”）　　ｃ−ＣＣ；ＲＰ（３−３７）−
ＭＢＨＡ−樹脂とし最後に５−（ｐ−メトキシベンジル
）プロピオニル化して目的とする保護ペプチド樹脂を得
た。

用いた保護アミノ酸は実施例１に記載のアミノ酸順序３
７番から３番までの保護アミノ酸を用いた。最後の５−
（ｐ−メトキシベンジル）プロピオニル化は、５−（ｐ
−メトキシベンジル）プロピオン酸をＤＣＣにより該プ
ロピオン酸の対称無水物に変換し、３位のアスパラギン
酸の保護基であるＢｏｃ基を脱離した後に、上記無水物
をＤＭＦ中で反応させることによって行った。

【図面の簡単な説明】

第１図はラットの血圧に対するｈ−ＣＯＲＰ。 本発明のＣ４−Ｆ−Ｐｈｅ”）ｃ−ＣＯＲＰ　（１３７
）、デス−１−アラニル−デス−α／　　　（４−Ｆ−
Ｐｈｅ”）　　　ｃ−ＣＯＲＰ　　　（１）の効果を表
す曲線を示す。 アミ ΔＭＢＰ （ｍｍＨｇ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）、式 ▲数式、化学式、表等があります▼− Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａ
   ｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌ
   ｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ
   −Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−
   Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−４−Ｆ−Ｐｈｅ−Ｎ
   Ｈ＿２ （式中、ＸはＨまたはＨ−Ａｌａ−ＮＨを示し、４−Ｆ
   −Ｐｈｅは４−フルオロフェニルアラニンを示す）で表
   されるペプチドまたはその塩。