JPH08502068A - イノシトール１，４，５‐トリスホスフェートを拮抗する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式 のオリゴマーは結合位置を競争的に占有することによるイノシトール1,4,5-トリホスフェート（IP₃）の競争的拮抗剤であることが実証された。IP₃の活性を競争的に抑制することにより、本発明のオリゴマーは細胞内カルシウムの放出を調節することが出来、生じる生理学的効果を引出す。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 イノシトール1,4,5-トリスホスフェートを拮抗する方法発明の背景 本出願は、一連のジアミノベンゼンジスルホン酸オリゴマー類に関するもので あり、これらはイノシトール1,4,5-トリホスフェート（IP₃）の受容体位置への 親和性を示し、従って特に細胞内カルシウム・イオン放出への影響について、IP₃ の生物活住を消すうえで有用である。先行技術の記載 本発明に従って、IP₃拮抗剤としての有用性を示しているジアミノベンゼンジ スルホン酸オリゴマー類は、公開番号第0467185 A2号の下で1992年1月22日に公 開された欧州特許出願に詳細に記載されている。その公報では、本発明のオリゴ マー類は、エイズ及びエイズ関連の複合疾患の診断及び／又は処置に有用性をも つものとして記載されている。発明のまとめ 本明細書で明らかにされている発明は、式 ［式中ｎは5〜20の範囲から選ばれる整数である］の化合物又は製薬上受入れら れるその塩類によって、イノシトール1,4,5-トリホスフェート（IP₃）に対して 特異的な受容体位置を占拠させることにより、イノシトール1,4,5-トリホスフェ ート（IP₃）の活性を抑制する方法に関する。発明の詳細な説明 イノシトール1,4,5-トリホスフェート（IP₃）は動物生理学の天然の活性成分 である。これは、酵素ホスホリパーゼＣに結合された細胞表面の受容体の活性化 によって、細胞内に形成される。十分な量で形成されたIP₃は、細胞内の貯蔵細 胞器官からのカルシウムイオンの放出を刺激するように働く。この役割で、IP₃ は「第二のメッセンジャー」として特長づけられる。細胞のタイプにもよるが、 IP₃によって放出されるカルシウムは、平滑筋収縮、ヒスタミン分泌、及び神経 細胞の過分極のような種々の生理学過程を刺激するように機能する。IP₃の機能 を促進するか、又はこれに干渉するような任意の化合物や薬剤は、カルシウムイ オンの発生を促進するか、又はそれに対して干渉し、それによって予測可能な薬 理学的効果を示す。 IP₃がカルシウムイオンを放出させるプロセスは、典型的には小胞体（endopla smic retuculum）上に位置する細胞内カルシウム貯蔵コンパートメント上にある 特異 的受容体タンパク質へのIP₃の結合から始まる。この受容体タンパク質はクロー ン化されており、IP₃に結合される時にユニークな構造的性質をもったカルシウ ム“チャンネル”を形成することが示された。従って、IP₃がその受容体と結合 する時は、カルシウム・チャンネルが開かれ、細胞の小胞体に蓄えられたカルシ ウムの放出を起こす。次に、放出されたカルシウムは適当な細胞応答を引出す。 これまで、唯一の立証された効力あるIP₃受容体拮抗剤はヘパリン、すなわち 複合体グリコサミノグリカンである。本発明のジアミノベンゼンジスルホン酸オ リゴマー類も、受容体位置に対して競合することにより、IP₃の効果に拮抗する と考えられる。ほとんどの場合、これらの化合物類はヘパリンより効力があり、 二次影響を示すことは、より少ない。他のIP₃受容体拮抗剤の治療有用性を評価 するうえで、実験“道具”としての有用性を提供するほか、本発明のオリゴマ− 類はIP₃に誘発されたカルシウム放出を調節するために投与され、過度に生産的 なIP₃第二メッセンジャー経路によって起こるか、又は悪化するような任意の数 の疾患に対して有益な効果をもっている。 〔実験〕 （IP₃結合の測定） スブラーグ・ドーリー種の雄ラットの小脳（200ｇ）を ポリトロン（設定９で10秒間）により、氷冷緩衝液Ａ（50mMトリス、1mMジチオ スレイトール、1mM EDTA、HClによりpH7.7）30容量中でホモジナイズした。次に 、組織を遠心分離（20,000xg、15分；Sorvall 28-S、SS-34ローター）によって ２回洗浄し、氷冷緩衝液Ａ30容量に再懸濁した。 結合検定のために、試験化合物（原液を水で10倍に薄めたもの）又は水を50μ ｌ、[3H]IP₃[17Ci/mmol；デュポン-NEN；通常、緩衝液中の25nM原液（10倍）］ を50μｌ、及び緩衝液Ｂ（緩衝液ＡをpH8.4に調整したもの）を350μｌ、氷上で １．５mlのエッペンドルフ管が含有した。非特異的結合用の管も、非放射性IP₃ （100μM原液、10倍、最終濃度10μM）50μｌを含有したが、緩衝液Ｂの容量を 適当に減らした。組織50μｌの添加によって反応を開始させて最終容量500μｌ とし、続いて渦流混合した。試料を氷上で10分培養し、ミクロ遠心分離（エッペ ンドルフ・モデル5415）中で５分の遠心分離（14,000xg）にかけ、続いて上澄み 分画の吸引を行なった。組織ペレットをプロトゾル（デュポン-NEN）100μｌ中 に一夜に溶解させた。可溶化後、化学発光を低下させるために氷酢放73μｌを加 え、混合物をシンチレーション・バイアルに移した。これらのバイアルにエコシ ント（Ecoscint）Ａ（ナショナル・ダイアグノスチクス）7mlを加え、放射能を 液体シンチレーションスペクトル分析によって測定 した。 特異的結合は、全結合（試験化合物と冷たいIP₃の非存在下における放射能） と非特異的結合（試験化合物の非存在下に、しかし冷たいIP₃の存在下における 放射能）との差として定義された。この数字は100％特異的結合として取られた 。試験化合物によって得られるデータポイントは、その抑制効力を決定するため に、コンピューター・ブログラム（グラフパッド-インプロット）に適合させた 。試験化合物の抑制効力は、特異的結合の50％抑制（IC₅₀値）を生ずる化合物濃 度として表わされた。 結合データを表１に示す。本発明の範囲内の化合物類が、ラット小脳膜の[3H] IP₃結合位置に対して効果的に競合することを結合データは立証している。NDL10 2,869と命名される化合物は、50nNのIC₅₀で結合に対する最も有力な競合者であ ったが、低分子量ヘバリン（分子量5100）は74nMのIC₅₀をもっていた。MDL 102, 869は、ｎ＝15の場合の請求された発明による化合物である。 結合効力は、IP₃で誘発されるカルシウムイオン放出に拮抗する能力とも相関 関係をもつと思われる。このように、NDL 102,869の1及び3μMは、それぞれ42％ と100％、カルシウムイオン放出を抑制した（図１を参照）。一方、ヘパリン10 μMは放出を90％抑制した。MDL 102,828は104nMのIC₅₀結合値をもつが、３ミク ロモルでIP₃誘発性のカルシウムイオン放出を72％抑制した。MDL 101, 828はｎ＝9の場合の請求された発明による化合物である。 図１のトレーシングは、表１の第三欄に挙げたIP₃抑制データを劇的に例示し ている。 ｙ軸は任意の単位での遊離カルシウムイオン濃度を表わす。トレーシングは、 0.1μM IP₃の２回連続添加が、小脳ミクロゾームからのカルシウムイオン放出の 同様な量を刺激したことを示す。1μMのMDL 102,869の添加は、少量のカルシウ ムイオン増加を刺激したが、理由は不明である。しかし、102,869の存在下に、0 .1μMのIP₃によって刺激されたカルシウムイオン放出は、42％抑制された。この 抑制は、1μMのIP₃の添加によって克服され、MDL 102,869による競合的拮抗と一 貫していた。

【手続補正書】特許法第１８４条の７第１項 【提出日】１９９４年１月１１日 【補正内容】 請求の範囲 １．イノシトール1,4,5-トリホスフェートに対して特異的な受容体位置を、式 ［式中、ｎは5-20の範囲内の整数］の化合物、又は製薬上受入れられるその塩類 で占拠させることにより、イノシトール1,4,5-トリホスフェートの活性を抑制す る方法。 ２．ｎが９である、請求項１に記載の方法。 ３．ｎが15である、請求項１に記載の方法。 【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年２月１６日 【補正内容】 請求の範囲 １．式 ［式中、ｎは5〜20の範囲内の整数］の化合物、又は製薬上受入れられるその塩 類で実施する、イノシトール1,4,5-トリホスフェートに対して特異的な受容体位 置を占拠させることによりイノシトール1,4,5-トリホスフェートの活性を抑制す る薬剤を製造する用途。 ２．ｎが９である、請求項１に記載の化合物の用途。 ３．ｎが１５である、請求項１に記載の化合物の用途。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．イノシトール1,4,5-トリホスフェートに対して特異的な受容体位置を、式 ［式中、ｎは5-20の範囲内の整数］の化合物、又は製薬上受入れられるその塩類 で占拠させることにより、イノシトール1,4,5-トリホスフェートの活性を抑制す る方法。 ２．ｎが９である、請求項１に記載のオリゴマー。 ３．ｎが１５である、請求項１に記載のオリゴマー。