JPH0838187A - 水溶性メラニン色素の製法 - Google Patents
水溶性メラニン色素の製法Info
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- JPH0838187A JPH0838187A JP20151394A JP20151394A JPH0838187A JP H0838187 A JPH0838187 A JP H0838187A JP 20151394 A JP20151394 A JP 20151394A JP 20151394 A JP20151394 A JP 20151394A JP H0838187 A JPH0838187 A JP H0838187A
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- water
- polysaccharide fraction
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色素
を合成する際に、多糖を添加することにより、水溶性メ
ラニン色素を製造する。 【構成】 チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色素
を合成する際に、多糖を添加することにより水溶性メラ
ニン色素の製造が可能となる。用いる多糖としては、イ
カ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、フコイダ
ン、アルギン酸、ペクチン、グリコーゲン及びこれら多
糖より生成し得る塩である。また、イカ墨汁からの多糖
画分は、イカ墨汁を脱脂乾燥後、タンパク質分解酵素に
より消化し、エタノール沈殿により得られたものをイオ
ン交換クロマトグラフィ等を用いて分離精製したもので
ある。
を合成する際に、多糖を添加することにより、水溶性メ
ラニン色素を製造する。 【構成】 チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色素
を合成する際に、多糖を添加することにより水溶性メラ
ニン色素の製造が可能となる。用いる多糖としては、イ
カ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、フコイダ
ン、アルギン酸、ペクチン、グリコーゲン及びこれら多
糖より生成し得る塩である。また、イカ墨汁からの多糖
画分は、イカ墨汁を脱脂乾燥後、タンパク質分解酵素に
より消化し、エタノール沈殿により得られたものをイオ
ン交換クロマトグラフィ等を用いて分離精製したもので
ある。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、医薬及び試薬として有
用な水溶性メラニン色素の製法に関するものである。
用な水溶性メラニン色素の製法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年オゾン層の破壊により、地上にふり
そそぐ紫外線量が増大しつつあると言われている。現在
紫外線を吸収、反射する物質を利用した化粧品などが注
目を集めているが、生物はメラニン色素による天然の防
護機構をもっている。たとえば白人に皮膚癌が多く黒人
には少ないといわれているが、その原因はメラニン色素
の多少によるとされている。しかし、このメラニン色素
を産業的に利用する時に大きな障壁となっているのが可
溶化の問題である。メラニン色素は主に動物の皮膚等に
存在する黒色色素でヘテロなポリマーであり、中性また
は酸性の水溶液やほとんどの有機溶剤には全く溶解しな
い。メラニン色素は自然界において極めて重要な役割を
はたしているにも拘わらず産業界への利用は著しく制限
されている理由はここに起因する。そのため、目下、メ
ラニン色素を可溶化する研究が盛んに行われている。
そそぐ紫外線量が増大しつつあると言われている。現在
紫外線を吸収、反射する物質を利用した化粧品などが注
目を集めているが、生物はメラニン色素による天然の防
護機構をもっている。たとえば白人に皮膚癌が多く黒人
には少ないといわれているが、その原因はメラニン色素
の多少によるとされている。しかし、このメラニン色素
を産業的に利用する時に大きな障壁となっているのが可
溶化の問題である。メラニン色素は主に動物の皮膚等に
存在する黒色色素でヘテロなポリマーであり、中性また
は酸性の水溶液やほとんどの有機溶剤には全く溶解しな
い。メラニン色素は自然界において極めて重要な役割を
はたしているにも拘わらず産業界への利用は著しく制限
されている理由はここに起因する。そのため、目下、メ
ラニン色素を可溶化する研究が盛んに行われている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明の目的
は前記の欠点を除き、チロシンあるいは３，４−ジヒド
ロキシフェニルアラニンを基質としてチロシナーゼを用
いて酵素的にメラニン色素を合成する際に、多糖を添加
することにより、水溶性のメラニン色素を合成すること
にある。即ち、本来水に対して不溶性のメラニン色素を
合成後に可溶化するのではなく、酵素的に合成する段階
で多糖を添加した溶液を用いることにより、水溶性のメ
ラニン色素を合成するものである。
は前記の欠点を除き、チロシンあるいは３，４−ジヒド
ロキシフェニルアラニンを基質としてチロシナーゼを用
いて酵素的にメラニン色素を合成する際に、多糖を添加
することにより、水溶性のメラニン色素を合成すること
にある。即ち、本来水に対して不溶性のメラニン色素を
合成後に可溶化するのではなく、酵素的に合成する段階
で多糖を添加した溶液を用いることにより、水溶性のメ
ラニン色素を合成するものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】細菌、真菌、植物、動物
の生成する黒褐色の色素を総称してメラニン色素と呼ぶ
が、生体内においてメラニン色素は、メラニン生成酵素
であるチロシナーゼが、基質であるチロシンあるいは
３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンの酸化を触媒
し、ドーパキノンを経て重合し生合成される。このメラ
ニン色素は動植物中に広く分布し、皮膚や髪その他組織
内に小粒となって存在しており、水に不溶で、熱濃硫酸
や強アルカリに可溶の高分子化合物でその組成はまだ明
かになっていない現状にある。
の生成する黒褐色の色素を総称してメラニン色素と呼ぶ
が、生体内においてメラニン色素は、メラニン生成酵素
であるチロシナーゼが、基質であるチロシンあるいは
３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンの酸化を触媒
し、ドーパキノンを経て重合し生合成される。このメラ
ニン色素は動植物中に広く分布し、皮膚や髪その他組織
内に小粒となって存在しており、水に不溶で、熱濃硫酸
や強アルカリに可溶の高分子化合物でその組成はまだ明
かになっていない現状にある。
【０００５】しかし、メラニン色素及びチロシナーゼに
関する研究は多く行われており、植物性チロシナーゼと
してはキノコ（マッシュルームなど）から精製された標
品が市販されており、動物のチロシナーゼ標品として
は、マウスまたはハムスターの移殖性黒色腫から分離さ
れたメラノソームまたは溶性チロシナーゼがある。これ
らのチロシナーゼを用いて、チロシンあるいは３，４−
ジヒドロキシフェニルアラニンを基質にメラニン色素を
合成した場合、得られたメラニン色素は水に不溶であ
り、すみやかに沈殿する。また、人工的にはチロシンを
過酸化水素中において酸化させる方法にて合成されてい
るが、この方法により得られたメラニン色素も同様に水
に対して不溶である。
関する研究は多く行われており、植物性チロシナーゼと
してはキノコ（マッシュルームなど）から精製された標
品が市販されており、動物のチロシナーゼ標品として
は、マウスまたはハムスターの移殖性黒色腫から分離さ
れたメラノソームまたは溶性チロシナーゼがある。これ
らのチロシナーゼを用いて、チロシンあるいは３，４−
ジヒドロキシフェニルアラニンを基質にメラニン色素を
合成した場合、得られたメラニン色素は水に不溶であ
り、すみやかに沈殿する。また、人工的にはチロシンを
過酸化水素中において酸化させる方法にて合成されてい
るが、この方法により得られたメラニン色素も同様に水
に対して不溶である。
【０００６】このように通常、植物性及び動物性いずれ
のチロシナーゼを用いても、あるいは人工的にであって
も、合成されたメラニン色素は水に対して不溶である
が、本発明者は、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニ
ンを基質に、チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色
素を合成する際に、多糖を添加することにより水溶性メ
ラニン色素を製造することに成功した。添加する多糖と
しては、イカ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、
フコイダン、アルギン酸、ペクチン、グリコーゲンが有
効であったが、多糖の添加濃度を変化させて比較検討し
た結果、イカ墨汁中の多糖画分が最も低濃度で高い活性
を示した。ここで使用するチロシナーゼについては、イ
カ墨汁由来あるいはマッシュルーム由来など、いずれの
チロシナーゼを用いても、多糖を添加することにより得
られたメラニン色素は水溶性を示し、本法においてはチ
ロシナーゼの起源を問わないのが特徴である。
のチロシナーゼを用いても、あるいは人工的にであって
も、合成されたメラニン色素は水に対して不溶である
が、本発明者は、３，４−ジヒドロキシフェニルアラニ
ンを基質に、チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色
素を合成する際に、多糖を添加することにより水溶性メ
ラニン色素を製造することに成功した。添加する多糖と
しては、イカ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、
フコイダン、アルギン酸、ペクチン、グリコーゲンが有
効であったが、多糖の添加濃度を変化させて比較検討し
た結果、イカ墨汁中の多糖画分が最も低濃度で高い活性
を示した。ここで使用するチロシナーゼについては、イ
カ墨汁由来あるいはマッシュルーム由来など、いずれの
チロシナーゼを用いても、多糖を添加することにより得
られたメラニン色素は水溶性を示し、本法においてはチ
ロシナーゼの起源を問わないのが特徴である。
【０００７】本発明において、添加する多糖の中で最も
高い活性を示したイカ墨汁から抽出された多糖画分は、
以下の方法により得られた。即ち、新鮮なイカ（あるい
は冷凍したイカでもよい）から墨汁を採取し、−３０℃
程度に冷却されたアセトン等の親水性有機溶剤と共に攪
拌あるいはホモジナイズし、ロ過後、減圧乾燥により脱
脂乾燥粉末を得ることができる。上記処理を施した試料
を、次に行う酵素反応に最適な緩衝液に分散させ、トリ
プシンなどのタンパク質分解酵素によりタンパク質を分
解した後、エタノール沈殿により、多糖画分が得られ
る。さらに、多糖画分は陰イオン交換カラムクロマトグ
ラフィ及びゲルロ過等により精製することができる。
高い活性を示したイカ墨汁から抽出された多糖画分は、
以下の方法により得られた。即ち、新鮮なイカ（あるい
は冷凍したイカでもよい）から墨汁を採取し、−３０℃
程度に冷却されたアセトン等の親水性有機溶剤と共に攪
拌あるいはホモジナイズし、ロ過後、減圧乾燥により脱
脂乾燥粉末を得ることができる。上記処理を施した試料
を、次に行う酵素反応に最適な緩衝液に分散させ、トリ
プシンなどのタンパク質分解酵素によりタンパク質を分
解した後、エタノール沈殿により、多糖画分が得られ
る。さらに、多糖画分は陰イオン交換カラムクロマトグ
ラフィ及びゲルロ過等により精製することができる。
【０００８】チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン色
素を合成する際に、イカ墨汁から抽出された多糖画分を
はじめとする多糖を添加することによって、合成された
メラニン色素は水溶性を示す。多糖の添加濃度は、基質
となる３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンの
濃度にも依存し、多糖の種類によっても異なるが、最も
低濃度で高い効果を示したイカ墨汁から抽出された多糖
画分においては、０．１％３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−
フェニルアラニン溶液に、多糖画分をわずかに０．０１
％になるように添加するだけで合成されたメラニン色素
は十分な水溶性を示す。
素を合成する際に、イカ墨汁から抽出された多糖画分を
はじめとする多糖を添加することによって、合成された
メラニン色素は水溶性を示す。多糖の添加濃度は、基質
となる３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンの
濃度にも依存し、多糖の種類によっても異なるが、最も
低濃度で高い効果を示したイカ墨汁から抽出された多糖
画分においては、０．１％３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−
フェニルアラニン溶液に、多糖画分をわずかに０．０１
％になるように添加するだけで合成されたメラニン色素
は十分な水溶性を示す。
【０００９】本発明の方法によって低濃度で最も効果の
高かったイカ墨汁から抽出された多糖画分の性質は次の
とおりである。
高かったイカ墨汁から抽出された多糖画分の性質は次の
とおりである。
【００１０】「イオン交換カラムクロマトグラフィによ
る分離精製」多糖画分をＤＥＡＥセファデックスＡ−５
０ゲル（商品名、ファルマシア社製）を用いたイオン交
換カラムクロマトグラフィにより精製を行ったところ、
食塩濃度０．２５Ｍの位置に対称なピークとして溶出さ
れた（図１）。
る分離精製」多糖画分をＤＥＡＥセファデックスＡ−５
０ゲル（商品名、ファルマシア社製）を用いたイオン交
換カラムクロマトグラフィにより精製を行ったところ、
食塩濃度０．２５Ｍの位置に対称なピークとして溶出さ
れた（図１）。
【００１１】「組成分析」イカ墨汁から抽出された多糖
画分の組成分析を行ったところ、グルクロン酸１モルに
対してＮ−アセチルガラクトサミン及びフコースが等モ
ルずつ存在しており、また、ペプチドを２１％含有して
いた。結果を表１に示した。
画分の組成分析を行ったところ、グルクロン酸１モルに
対してＮ−アセチルガラクトサミン及びフコースが等モ
ルずつ存在しており、また、ペプチドを２１％含有して
いた。結果を表１に示した。
【００１２】
【表１】
【００１３】「プロトンＮＭＲ」図１で得られたイカ墨
汁から抽出された多糖画分の、２７０ＭＨｚ、重水中、
７０℃の条件下でのプロトンＮＭＲスペクトルを測定し
たところ、グルクロン酸、Ｎ−アセチルガラクトサミン
及びフコースの３つの糖に由来するアノメリックプロト
ンのシグナルが４．５４０ｐｐｍ、５．１９７ｐｐｍ及
び５．２６０ｐｐｍに観測され、また、Ｎ−アセチルガ
ラクトサミンのアセチル基のプロトンが２．０４３ｐｐ
ｍに、フコースのメチル基のプロトンが１．２９６ｐｐ
ｍに観測された（図２）。
汁から抽出された多糖画分の、２７０ＭＨｚ、重水中、
７０℃の条件下でのプロトンＮＭＲスペクトルを測定し
たところ、グルクロン酸、Ｎ−アセチルガラクトサミン
及びフコースの３つの糖に由来するアノメリックプロト
ンのシグナルが４．５４０ｐｐｍ、５．１９７ｐｐｍ及
び５．２６０ｐｐｍに観測され、また、Ｎ−アセチルガ
ラクトサミンのアセチル基のプロトンが２．０４３ｐｐ
ｍに、フコースのメチル基のプロトンが１．２９６ｐｐ
ｍに観測された（図２）。
【００１４】本発明の方法によって合成された水溶性メ
ラニン色素の性質は次のとおりである。
ラニン色素の性質は次のとおりである。
【００１５】「水溶性メラニン色素の溶解性」添加する
多糖にはイカ墨汁から抽出した多糖画分と、ムコ多糖と
してコンドロイチン４硫酸（生化学工業社製）及びコン
ドロイチン６硫酸（生化学工業社製）、フコイダン（Ｓ
ＩＧＭＡ社製）、アルギン酸ナトリウム（和光純薬社
製）、ペクチン（ＳＩＧＭＡ社製）、グリコーゲン（ホ
タテ由来、青森県産業技術開発センターにて調製）につ
いて検討した。０．１％３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−フ
ェニルアラニンを含む１００ｍMリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）１ｍｌに、これらの多糖を、０．１％、０．０
１％及び０．００１％になるように添加しておき、マッ
シュルームチロシナーゼ（ＳＩＧＭＡ社製）溶液を１０
μｌ（０．０１ユニット）加え、３７℃、２４時間放置
後、１０００×ｇで１０分間遠心し、光路長１ｃｍのセ
ルを用いて上清の４２０ｎｍにおける吸光度を測定し
た。０．１％添加区分においては、いずれの糖について
も効果がみられたが、コンドロイチン４硫酸及びコンド
ロイチン６硫酸の活性は低かった。０．０１％添加区分
においてはイカ墨汁から抽出された多糖画分、フコイダ
ン、ペクチンを添加した区分に高い水溶性が見られ、
０．００１％添加区分ではイカ墨汁から抽出された多糖
画分を添加したものが最も良好な結果を示した（表
２）。ここで酵素量を示すユニットは、０．１％３，4
−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンを含む１００ｍ
Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）３ｍｌにチロシナーゼ
溶液１０μｌ加え、３７℃保温下、光路長１ｃｍのセル
を用いた４２０ｎｍの吸光度の測定において、吸光度を
１分間に１増加させる活性を１ユニットとした。
多糖にはイカ墨汁から抽出した多糖画分と、ムコ多糖と
してコンドロイチン４硫酸（生化学工業社製）及びコン
ドロイチン６硫酸（生化学工業社製）、フコイダン（Ｓ
ＩＧＭＡ社製）、アルギン酸ナトリウム（和光純薬社
製）、ペクチン（ＳＩＧＭＡ社製）、グリコーゲン（ホ
タテ由来、青森県産業技術開発センターにて調製）につ
いて検討した。０．１％３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−フ
ェニルアラニンを含む１００ｍMリン酸緩衝液（ｐＨ
６．８）１ｍｌに、これらの多糖を、０．１％、０．０
１％及び０．００１％になるように添加しておき、マッ
シュルームチロシナーゼ（ＳＩＧＭＡ社製）溶液を１０
μｌ（０．０１ユニット）加え、３７℃、２４時間放置
後、１０００×ｇで１０分間遠心し、光路長１ｃｍのセ
ルを用いて上清の４２０ｎｍにおける吸光度を測定し
た。０．１％添加区分においては、いずれの糖について
も効果がみられたが、コンドロイチン４硫酸及びコンド
ロイチン６硫酸の活性は低かった。０．０１％添加区分
においてはイカ墨汁から抽出された多糖画分、フコイダ
ン、ペクチンを添加した区分に高い水溶性が見られ、
０．００１％添加区分ではイカ墨汁から抽出された多糖
画分を添加したものが最も良好な結果を示した（表
２）。ここで酵素量を示すユニットは、０．１％３，4
−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニンを含む１００ｍ
Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ６．８）３ｍｌにチロシナーゼ
溶液１０μｌ加え、３７℃保温下、光路長１ｃｍのセル
を用いた４２０ｎｍの吸光度の測定において、吸光度を
１分間に１増加させる活性を１ユニットとした。
【００１６】
【表２】
【００１７】以下に本発明において行った水溶性メラニ
ン色素の合成に用いた多糖の中で最も低濃度で効果があ
ったイカ墨汁から抽出された多糖画分の調製例、及び水
溶性メラニン色素の製法例を更に詳しく説明する。
ン色素の合成に用いた多糖の中で最も低濃度で効果があ
ったイカ墨汁から抽出された多糖画分の調製例、及び水
溶性メラニン色素の製法例を更に詳しく説明する。
【００１８】
【実施例１】（イカ墨汁からの多糖画分の抽出） 新鮮なイカから墨汁を採取し、−３０℃のアセトンを加
えホモジナイザーにより処理し、ガラスフィルターで濾
過し、減圧下で乾燥させる。得られたイカ墨汁の脱脂乾
燥粉末１００ｇに５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．８）を１０００ｍｌ加え、トリプシン（和光純薬社
製）を１ｇ添加し、３７℃で２４時間攪拌し、さらにト
リプシンを１ｇ追加し、３７℃で２４時間攪拌後、沸騰
水中１０分間加熱し酵素を失活させてから、１００００
×ｇで３０分間遠心分離することにより不溶物を除去す
る。得られた上清に酢酸カルシウムが５％、酢酸が０．
５Ｎになるように加えた後、２倍量のエタノールを加
え、４℃、１２時間攪拌後、１００００×ｇで３０分間
遠心分離することにより沈殿部に多糖画分を１．１ｇ得
た。
えホモジナイザーにより処理し、ガラスフィルターで濾
過し、減圧下で乾燥させる。得られたイカ墨汁の脱脂乾
燥粉末１００ｇに５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．８）を１０００ｍｌ加え、トリプシン（和光純薬社
製）を１ｇ添加し、３７℃で２４時間攪拌し、さらにト
リプシンを１ｇ追加し、３７℃で２４時間攪拌後、沸騰
水中１０分間加熱し酵素を失活させてから、１００００
×ｇで３０分間遠心分離することにより不溶物を除去す
る。得られた上清に酢酸カルシウムが５％、酢酸が０．
５Ｎになるように加えた後、２倍量のエタノールを加
え、４℃、１２時間攪拌後、１００００×ｇで３０分間
遠心分離することにより沈殿部に多糖画分を１．１ｇ得
た。
【００１９】
【実施例２】（イカ墨汁から抽出された多糖画分の分離
精製） 実施例１により得られた多糖画分を５０ｍＭトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ８．７）で平衡化したＤＥＡＥ セファ
デックス Ａ−５０（商品名、ファルマシア社製）イオ
ン交換カラムクロマトグラフィで分離精製する。溶出は
５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．７）を用いて０
Ｍから０．５Ｍの食塩による直線濃度勾配で行った。そ
の結果、食塩濃度０．２５Ｍに多糖画分が対称なピーク
として溶出された（図１）。
精製） 実施例１により得られた多糖画分を５０ｍＭトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ８．７）で平衡化したＤＥＡＥ セファ
デックス Ａ−５０（商品名、ファルマシア社製）イオ
ン交換カラムクロマトグラフィで分離精製する。溶出は
５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．７）を用いて０
Ｍから０．５Ｍの食塩による直線濃度勾配で行った。そ
の結果、食塩濃度０．２５Ｍに多糖画分が対称なピーク
として溶出された（図１）。
【００２０】
【実施例３】（水溶性メラニン色素の製造） ０．１％３，4−ジヒドロキシ−Ｌ−フェニルアラニン
を基質とし、マッシュルームチロシナーゼ（ＳＩＧＭＡ
社製）によりメラニン色素を合成する過程において、多
糖（イカ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、フコ
イダン、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、グリコーゲ
ン）を含む１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌにチロシナーゼ溶液を１０μｌ（０．０１ユニット）
加え、３７℃、１５時間放置後、１０００×ｇで１０分
間遠心し、光路長１ｃｍのセルを用いて上清の４２０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した。その結果、多糖濃度０．
１％ではイカ墨汁から抽出された多糖画分、フコイダ
ン、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、グリコーゲンに
効果が見られ、０．０１％ではイカ墨汁から抽出された
多糖画分、フコイダン、ペクチンの添加区分が水溶性を
示した。さらに低濃度の０．００１％添加ではイカ墨汁
から抽出された多糖画分が最も強い効果を示した。この
ことから、イカ墨汁から抽出した多糖画分を添加するこ
とにより最も効率よく水溶性メラニン色素を合成するこ
とが可能となる。
を基質とし、マッシュルームチロシナーゼ（ＳＩＧＭＡ
社製）によりメラニン色素を合成する過程において、多
糖（イカ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、フコ
イダン、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、グリコーゲ
ン）を含む１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）１ｍ
ｌにチロシナーゼ溶液を１０μｌ（０．０１ユニット）
加え、３７℃、１５時間放置後、１０００×ｇで１０分
間遠心し、光路長１ｃｍのセルを用いて上清の４２０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した。その結果、多糖濃度０．
１％ではイカ墨汁から抽出された多糖画分、フコイダ
ン、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、グリコーゲンに
効果が見られ、０．０１％ではイカ墨汁から抽出された
多糖画分、フコイダン、ペクチンの添加区分が水溶性を
示した。さらに低濃度の０．００１％添加ではイカ墨汁
から抽出された多糖画分が最も強い効果を示した。この
ことから、イカ墨汁から抽出した多糖画分を添加するこ
とにより最も効率よく水溶性メラニン色素を合成するこ
とが可能となる。
【図１】イカ墨汁から抽出した多糖画分を５０ｍＭトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．７）で平衡化したＤＥＡＥ
セファデックスＡ−５０イオン交換カラムクロマトグラ
フィを用いて、溶出は５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．７）の食塩濃度０Ｍから０．５Ｍの直線濃度勾配
で行った結果、多糖画分が食塩濃度０．２５Ｍに多糖が
対称なピークとして溶出されたことを示す図である。な
お検出は、ウロン酸の比色に用いられるカルバゾール−
硫酸法により行った。
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．７）で平衡化したＤＥＡＥ
セファデックスＡ−５０イオン交換カラムクロマトグラ
フィを用いて、溶出は５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ８．７）の食塩濃度０Ｍから０．５Ｍの直線濃度勾配
で行った結果、多糖画分が食塩濃度０．２５Ｍに多糖が
対称なピークとして溶出されたことを示す図である。な
お検出は、ウロン酸の比色に用いられるカルバゾール−
硫酸法により行った。
【図２】図１におけるイカ墨汁から抽出された多糖画分
の、２７０ＭＨｚ、重水中、７０℃の条件下でのプロト
ンＮＭＲスペクトルを表す図である。
の、２７０ＭＨｚ、重水中、７０℃の条件下でのプロト
ンＮＭＲスペクトルを表す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 阿部 馨 青森県青森市大字八ッ役字芦谷202番地４ 青森県産業技術開発センター内 (72)発明者 山口 信哉 青森県青森市大字八ッ役字芦谷202番地４ 青森県産業技術開発センター内 (72)発明者 市田 淳治 青森県青森市大字八ッ役字芦谷202番地４ 青森県産業技術開発センター内 (72)発明者 松江 一 青森県青森市大字八ッ役字芦谷202番地４ 青森県産業技術開発センター内
Claims (3)
- 【請求項１】 チロシナーゼを用いて酵素的にメラニン
色素を合成する際に、多糖を添加することを特徴とす
る、水溶性メラニン色素の製法 - 【請求項２】 請求項１において用いる多糖としては、
イカ墨汁から抽出された多糖画分、ムコ多糖、フコイダ
ン、アルギン酸、ペクチン、グリコーゲン及びこれら多
糖より生成し得る塩であることを特徴とする - 【請求項３】 請求項２におけるイカ墨汁から抽出され
た多糖画分の調製法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20151394A JPH0838187A (ja) | 1994-08-03 | 1994-08-03 | 水溶性メラニン色素の製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20151394A JPH0838187A (ja) | 1994-08-03 | 1994-08-03 | 水溶性メラニン色素の製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0838187A true JPH0838187A (ja) | 1996-02-13 |
Family
ID=16442295
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20151394A Pending JPH0838187A (ja) | 1994-08-03 | 1994-08-03 | 水溶性メラニン色素の製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0838187A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009046621A (ja) * | 2007-08-22 | 2009-03-05 | Hakodate Chiiki Sangyo Shinko Zaidan | イカ墨色素粒子の製造方法及び有機顔料又は染料並びにこれらを用いた複写機用トナー、水性インク、油性インク又は頭髪用染料 |
| CN103408964A (zh) * | 2013-08-15 | 2013-11-27 | 宜兴市红豆杉生态科技有限公司 | 一种利用多酚氧化酶和茶多酚提高乌饭树中黑色素提取得率的方法 |
-
1994
- 1994-08-03 JP JP20151394A patent/JPH0838187A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009046621A (ja) * | 2007-08-22 | 2009-03-05 | Hakodate Chiiki Sangyo Shinko Zaidan | イカ墨色素粒子の製造方法及び有機顔料又は染料並びにこれらを用いた複写機用トナー、水性インク、油性インク又は頭髪用染料 |
| CN103408964A (zh) * | 2013-08-15 | 2013-11-27 | 宜兴市红豆杉生态科技有限公司 | 一种利用多酚氧化酶和茶多酚提高乌饭树中黑色素提取得率的方法 |
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