JPH0838164A - 朝鮮ニンジンの組織培養方法 - Google Patents
朝鮮ニンジンの組織培養方法Info
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- JPH0838164A JPH0838164A JP6174344A JP17434494A JPH0838164A JP H0838164 A JPH0838164 A JP H0838164A JP 6174344 A JP6174344 A JP 6174344A JP 17434494 A JP17434494 A JP 17434494A JP H0838164 A JPH0838164 A JP H0838164A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 朝鮮ニンジンの組織培養を利用してサポニン
を能率よく生産するのに適した、朝鮮ニンジンのカルス
の培養方法を開発する。 【構成】 無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オ
ーキシン、ジベレリンおよびカイネチンの少なくとも１
つを含む液体培地で培養する。
を能率よく生産するのに適した、朝鮮ニンジンのカルス
の培養方法を開発する。 【構成】 無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オ
ーキシン、ジベレリンおよびカイネチンの少なくとも１
つを含む液体培地で培養する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、朝鮮ニンジンを組織培
養する方法に係り、特に朝鮮ニンジンの重要な二次代謝
産物であるサポニン類を生産するのに適した方法に関す
る。
養する方法に係り、特に朝鮮ニンジンの重要な二次代謝
産物であるサポニン類を生産するのに適した方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】朝鮮ニンジン（Panax ginseng C.A. Mey
er) は、ウコギ科の多年生草木であり、薬用植物として
著名である。一般に、その根茎中に含まれる薬効成分
は、コレステロールの代謝促進作用、タンパク質および
核酸の生合成促進作用、血糖効果作用、放射線防護作用
などの広範な薬効を示し、医薬品として利用されてい
る。このような薬効をもたらす成分は、ジンセノイドサ
ポニン(ginsenoside saponin) （以下、単にサポニンと
も称す）である。このような広範な薬効のために、朝鮮
ニンジン、さらにはジンセノイドサポニンに対する需要
は高い。
er) は、ウコギ科の多年生草木であり、薬用植物として
著名である。一般に、その根茎中に含まれる薬効成分
は、コレステロールの代謝促進作用、タンパク質および
核酸の生合成促進作用、血糖効果作用、放射線防護作用
などの広範な薬効を示し、医薬品として利用されてい
る。このような薬効をもたらす成分は、ジンセノイドサ
ポニン(ginsenoside saponin) （以下、単にサポニンと
も称す）である。このような広範な薬効のために、朝鮮
ニンジン、さらにはジンセノイドサポニンに対する需要
は高い。
【０００３】しかし、朝鮮ニンジンは、現在野生のもの
はほとんど存在せず、主として栽培によりその供給がな
されている。しかし、その栽培には、夏期冷涼で排水の
よい高地が必要であり、また日照などに特別な配慮を必
要とするために、栽培に適した場所は非常に限られてい
る。朝鮮ニンジンは一度栽培すると、同じ土地における
連作は２０〜５０年間不能となり、さらに収穫までに４
年〜７年を要し、また病害虫により害されやすいため、
生産性が非常に低い。さらに、栽培品は、産地・採取時
期・栽培年数などによって、ジンセノイドサポニンの含
量、その成分比などが著しく異なって安定しないという
問題がある。
はほとんど存在せず、主として栽培によりその供給がな
されている。しかし、その栽培には、夏期冷涼で排水の
よい高地が必要であり、また日照などに特別な配慮を必
要とするために、栽培に適した場所は非常に限られてい
る。朝鮮ニンジンは一度栽培すると、同じ土地における
連作は２０〜５０年間不能となり、さらに収穫までに４
年〜７年を要し、また病害虫により害されやすいため、
生産性が非常に低い。さらに、栽培品は、産地・採取時
期・栽培年数などによって、ジンセノイドサポニンの含
量、その成分比などが著しく異なって安定しないという
問題がある。
【０００４】そこで、ジンセノイドサポニンを大量に安
定して供給できる方法として朝鮮ニンジンの組織培養方
法が従来提案されており、この組織培養は、一般に、朝
鮮ニンジンの組織片をカルス化し、このカルスを適当な
培地中で培養することによって遂行されている。
定して供給できる方法として朝鮮ニンジンの組織培養方
法が従来提案されており、この組織培養は、一般に、朝
鮮ニンジンの組織片をカルス化し、このカルスを適当な
培地中で培養することによって遂行されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明では、朝鮮ニン
ジンの組織培養を利用してサポニンを能率よく生産する
のに適した、朝鮮ニンジンのカルスの培養方法を開発す
ることを目的としている。
ジンの組織培養を利用してサポニンを能率よく生産する
のに適した、朝鮮ニンジンのカルスの培養方法を開発す
ることを目的としている。
【０００６】本発明者は、種々の研究を重ねた結果、オ
ーキシン、ジベレリンおよびカイネチンの少なくとも１
つを含む液体培地を朝鮮ニンジンカルスの培養を行う
と、カルスの増殖が高まるとともに、カルス中のサポニ
ン含有率も高まること、およびカルスの培養を、途中で
培地を変えて、すなわち一次培養にオーキシンを含む液
体培地を使用し、そして二次培養にジベレリンを含む液
体培地を用いて行うと、サポニン生産量が増大すること
を見出した。
ーキシン、ジベレリンおよびカイネチンの少なくとも１
つを含む液体培地を朝鮮ニンジンカルスの培養を行う
と、カルスの増殖が高まるとともに、カルス中のサポニ
ン含有率も高まること、およびカルスの培養を、途中で
培地を変えて、すなわち一次培養にオーキシンを含む液
体培地を使用し、そして二次培養にジベレリンを含む液
体培地を用いて行うと、サポニン生産量が増大すること
を見出した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】従って、本発明は、無菌
状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オーキシン、ジベ
レリンおよびカイネチンの少なくとも１つを含む液体培
地で培養することを特徴とする、朝鮮ニンジンの培養方
法、および無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オ
ーキシンを含む液体培地で一次培養し次いでジベレリン
を含む液体培地で二次培養することを特徴とする、朝鮮
ニンジンのカルスの培養方法に係る。
状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オーキシン、ジベ
レリンおよびカイネチンの少なくとも１つを含む液体培
地で培養することを特徴とする、朝鮮ニンジンの培養方
法、および無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルスを、オ
ーキシンを含む液体培地で一次培養し次いでジベレリン
を含む液体培地で二次培養することを特徴とする、朝鮮
ニンジンのカルスの培養方法に係る。
【０００８】朝鮮ニンジンのカルスは、例えば、市販の
３〜５年生朝鮮ニンジン根を切断し、その切片を滅菌
し、ＭＳ寒天静地培地法により培養することにより得ら
れる。本発明において朝鮮ニンジンのカルスの培養に用
いられる培地は、液体培地である。液体培地でカルスを
培養すると、培地がカルスの一部にしか接しないため
に、部分的にカルスの増殖や老化が起こり、その結果均
質なカルスが得られないという寒天培地を用いた場合の
不都合が生じない。
３〜５年生朝鮮ニンジン根を切断し、その切片を滅菌
し、ＭＳ寒天静地培地法により培養することにより得ら
れる。本発明において朝鮮ニンジンのカルスの培養に用
いられる培地は、液体培地である。液体培地でカルスを
培養すると、培地がカルスの一部にしか接しないため
に、部分的にカルスの増殖や老化が起こり、その結果均
質なカルスが得られないという寒天培地を用いた場合の
不都合が生じない。
【０００９】本発明で使用されるオーキシンとしては、
例えば、ナフチルアセテートアミド（ＮＡＡ）、インド
ール−３−酪酸（ＩＡＡ）、イソブチル酢酸（ＩＢ
Ａ）、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）
が挙げらるが、この中、ＩＢＡ、ＩＡＡ、２，４−Ｄが
好ましく、特にＩＡＡが好ましい。
例えば、ナフチルアセテートアミド（ＮＡＡ）、インド
ール−３−酪酸（ＩＡＡ）、イソブチル酢酸（ＩＢ
Ａ）、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）
が挙げらるが、この中、ＩＢＡ、ＩＡＡ、２，４−Ｄが
好ましく、特にＩＡＡが好ましい。
【００１０】オーキシンまたはジベレリン（ＧＡ）は、
液体培地１リットルあたり、通常０．１〜２．０、好ま
しくは２ｐｐｍ含まれる。カイネチンは、液体培地１リ
ットルあたり、通常０．１〜０．５、好ましくは０．１
ｐｐｍ含まれる。
液体培地１リットルあたり、通常０．１〜２．０、好ま
しくは２ｐｐｍ含まれる。カイネチンは、液体培地１リ
ットルあたり、通常０．１〜０．５、好ましくは０．１
ｐｐｍ含まれる。
【００１１】液体培地としては、通常、植物組織培養で
使用される液体培地であればいずれの培地も使用でき
る。このような液体培地には、通常、炭素源の他に、Ｎ
ａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、ＰおよびＣなどの基本的無機成
分、微量の無機成分、窒素源、アミノ酸、ビタミンが含
まれるが、本発明で用いられる液体培地は窒素源として
のアンモニア態窒素を含んでいない。
使用される液体培地であればいずれの培地も使用でき
る。このような液体培地には、通常、炭素源の他に、Ｎ
ａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、ＰおよびＣなどの基本的無機成
分、微量の無機成分、窒素源、アミノ酸、ビタミンが含
まれるが、本発明で用いられる液体培地は窒素源として
のアンモニア態窒素を含んでいない。
【００１２】また、微量の無機成分とは、Ｆｅ塩、Ｍｎ
塩、Ｚｎ塩、Ｃｕ塩、Ｃｏ塩、Ｍｏ塩、Ｂ塩を意味し、
本発明の液体培地は、この微量の無機成分のうちＭｎ
塩、Ｚｎ塩およびＣｕ塩を従来の培地よりは比較的多量
に、具体的には、液体培地１リットルあたり８０〜１２
０ｍｇ、好ましくは１１１．５０ｍｇのＭｎＳＯ4 ・４
Ｈ2 Ｏ、６０〜１００ｍｇ、好ましくは８６．００ｍｇ
のＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏおよび０．１〜０．４ｍｇ、好
ましくは０．２５ｍｇのＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを含むの
が好ましい。
塩、Ｚｎ塩、Ｃｕ塩、Ｃｏ塩、Ｍｏ塩、Ｂ塩を意味し、
本発明の液体培地は、この微量の無機成分のうちＭｎ
塩、Ｚｎ塩およびＣｕ塩を従来の培地よりは比較的多量
に、具体的には、液体培地１リットルあたり８０〜１２
０ｍｇ、好ましくは１１１．５０ｍｇのＭｎＳＯ4 ・４
Ｈ2 Ｏ、６０〜１００ｍｇ、好ましくは８６．００ｍｇ
のＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏおよび０．１〜０．４ｍｇ、好
ましくは０．２５ｍｇのＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏを含むの
が好ましい。
【００１３】本発明において朝鮮ニンジンのカルスを培
養する際に特に好ましく使用される液体培地は、炭素源
の他に、液体培地１リットルあたり、２０００〜３００
０、好ましくは２５００ｍｇのＫＮＯ3 、１５０〜２０
０、好ましくは１７０ｍｇのＫＨ2 ＰＯ4 、４００〜５
００、好ましくは４４０ｍｇのＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ、
３００〜４００、好ましくは３７０ｍｇのＭｇＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ、３５〜４０、好ましくは３７．３０ｍｇのＮ
ａ2 −ＥＤＴＡ、２５〜３０、好ましくは２７．８０ｍ
ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、８０〜１２０、好ましくは
１１１．５ｍｇのＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ、６０〜１０
０、好ましくは８６．００ｍｇのＺｎＳＯ 4 ・７Ｈ
2 Ｏ、５〜７、好ましくは６．２０ｍｇのＨ3 ＢＯ4 、
０．５〜１．０、好ましくは０．８３ｍｇのＫＩ、０．
１〜０．４、好ましくは０．２５ｍｇのＮａ2 ＭｏＯ4
・２Ｈ2 Ｏ、０．０１〜０．０４、好ましくは０．０２
５ｍｇのＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ、０．１〜０．４、好ま
しくは０．２５ｍｇのＣｕＳＯ4・５Ｈ2 Ｏ、０．０５
〜０．２、好ましくは０．１ｍｇのチアミン塩酸塩、
０．３〜０．７、好ましくは０．５ｍｇのニコチン酸、
０．３〜０．７、好ましくは０．５ｍｇのピリドキシン
塩酸塩、８０〜１２０、好ましくは１００ｍｇのミオイ
ノシトールおよび１．０〜３．０、好ましくは２．０ｍ
ｇのグリシンを含むが、但し、アンモニア態窒素を含ま
ないものである。
養する際に特に好ましく使用される液体培地は、炭素源
の他に、液体培地１リットルあたり、２０００〜３００
０、好ましくは２５００ｍｇのＫＮＯ3 、１５０〜２０
０、好ましくは１７０ｍｇのＫＨ2 ＰＯ4 、４００〜５
００、好ましくは４４０ｍｇのＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ、
３００〜４００、好ましくは３７０ｍｇのＭｇＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ、３５〜４０、好ましくは３７．３０ｍｇのＮ
ａ2 −ＥＤＴＡ、２５〜３０、好ましくは２７．８０ｍ
ｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、８０〜１２０、好ましくは
１１１．５ｍｇのＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ、６０〜１０
０、好ましくは８６．００ｍｇのＺｎＳＯ 4 ・７Ｈ
2 Ｏ、５〜７、好ましくは６．２０ｍｇのＨ3 ＢＯ4 、
０．５〜１．０、好ましくは０．８３ｍｇのＫＩ、０．
１〜０．４、好ましくは０．２５ｍｇのＮａ2 ＭｏＯ4
・２Ｈ2 Ｏ、０．０１〜０．０４、好ましくは０．０２
５ｍｇのＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ、０．１〜０．４、好ま
しくは０．２５ｍｇのＣｕＳＯ4・５Ｈ2 Ｏ、０．０５
〜０．２、好ましくは０．１ｍｇのチアミン塩酸塩、
０．３〜０．７、好ましくは０．５ｍｇのニコチン酸、
０．３〜０．７、好ましくは０．５ｍｇのピリドキシン
塩酸塩、８０〜１２０、好ましくは１００ｍｇのミオイ
ノシトールおよび１．０〜３．０、好ましくは２．０ｍ
ｇのグリシンを含むが、但し、アンモニア態窒素を含ま
ないものである。
【００１４】炭素源としては、蔗糖およびグルコース
を、好ましくは、蔗糖は２．０重量％の濃度で、また、
グルコースは０．５重量％の濃度で含むのが好ましい。
本発明の朝鮮ニンジンのカルスの培養においては、培養
を無菌状態で行うことができれば、通常植物組織の液体
培養に用いられるいかなる装置も使用でき、例えば、三
角フラスコ、ジャーファーメンターまたはタンクが挙げ
られる。
を、好ましくは、蔗糖は２．０重量％の濃度で、また、
グルコースは０．５重量％の濃度で含むのが好ましい。
本発明の朝鮮ニンジンのカルスの培養においては、培養
を無菌状態で行うことができれば、通常植物組織の液体
培養に用いられるいかなる装置も使用でき、例えば、三
角フラスコ、ジャーファーメンターまたはタンクが挙げ
られる。
【００１５】さらに、培養は回分培養でも連続培養でも
よい。オーキシンを含む液体培地で一次培養し次いでジ
ベレリンを含む液体培地で二次培養を行う場合、いずれ
の培地も、さらにカイネチンを含むことができる。
よい。オーキシンを含む液体培地で一次培養し次いでジ
ベレリンを含む液体培地で二次培養を行う場合、いずれ
の培地も、さらにカイネチンを含むことができる。
【００１６】カルスを一次培養から二次培養に移す方法
としては、カルスを一次培養のための培地から取り出し
て余分な液体培地を充分に取り除いた後、二次培養のた
めの培地に入れる（植え換える）か、または、カルスを
一次培養した後に、ジベレリンを添加する方法が挙げら
れるが、前者の植え換える方法の方が、オーキシンの悪
影響を減らすことができるので好ましい。
としては、カルスを一次培養のための培地から取り出し
て余分な液体培地を充分に取り除いた後、二次培養のた
めの培地に入れる（植え換える）か、または、カルスを
一次培養した後に、ジベレリンを添加する方法が挙げら
れるが、前者の植え換える方法の方が、オーキシンの悪
影響を減らすことができるので好ましい。
【００１７】カルスを一次培養から二次培養に移す時期
は、カルス増殖が最大値を示した時期である。
は、カルス増殖が最大値を示した時期である。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例を用いてさらに詳細に
説明する。 実施例１ 市販の朝鮮ニンジンの根（長さ約２ｃｍ、直径約５ｍ
ｍ）を、約２００倍に希釈したオスバン液に２〜３分浸
漬し、その後約５倍に希釈した次亜塩素酸ナトリウム溶
液に１０分間浸漬した。これを滅菌水でで滅菌後クリー
ンベンチ内に入れて、滅菌水で繰り返し洗浄した。これ
を予め滅菌しておいた濾紙上に置き、コルクボーラーで
内側をくり抜いて取り出しメスで両端を切断した後、５
ｍｍ程の厚さに切って培地に置床した。
説明する。 実施例１ 市販の朝鮮ニンジンの根（長さ約２ｃｍ、直径約５ｍ
ｍ）を、約２００倍に希釈したオスバン液に２〜３分浸
漬し、その後約５倍に希釈した次亜塩素酸ナトリウム溶
液に１０分間浸漬した。これを滅菌水でで滅菌後クリー
ンベンチ内に入れて、滅菌水で繰り返し洗浄した。これ
を予め滅菌しておいた濾紙上に置き、コルクボーラーで
内側をくり抜いて取り出しメスで両端を切断した後、５
ｍｍ程の厚さに切って培地に置床した。
【００１９】培地は、ムラシゲ＆スクーグ培地（ＭＳ培
地）を基本培地とし、それに炭素源として蔗糖２重量％
およびグルコース０．５重量％を、また、２，４−Ｄ２
ｐｐｍおよびカイネチン０．１ｐｐｍを含み、さらに寒
天０．９重量％を含むものであり、滅菌シャーレに２０
ｍｌずつ分注して用いた。
地）を基本培地とし、それに炭素源として蔗糖２重量％
およびグルコース０．５重量％を、また、２，４−Ｄ２
ｐｐｍおよびカイネチン０．１ｐｐｍを含み、さらに寒
天０．９重量％を含むものであり、滅菌シャーレに２０
ｍｌずつ分注して用いた。
【００２０】２５℃、暗所で静置培養すると、４〜５週
間後にカルス化した。これを新しい培地に継代し、以
後、１ヵ月毎に継代した。 実施例２ 表１に示す組成の培地を基本培地とし、さらに炭素源と
して蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、表２
に示す濃度でオーキシン（ＩＡＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡまた
は２，４−Ｄ）、ジベレリン（ＧＡ）および／またはカ
イネチン（Ｋ）を含む培地３０ｍｌを１００ｍｌ容の三
角フラスコに入れ、それを１２０℃、１．２気圧のオー
トクレーブ(YAMATO S-52) で２０分間滅菌し、冷却した
後、この培地に実施例１で得られたカルス２．０ｇを移
植し、回転振とう培養機上で回転数８０ｒｐｍ、２５
℃、暗所で３週間培養した。
間後にカルス化した。これを新しい培地に継代し、以
後、１ヵ月毎に継代した。 実施例２ 表１に示す組成の培地を基本培地とし、さらに炭素源と
して蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、表２
に示す濃度でオーキシン（ＩＡＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡまた
は２，４−Ｄ）、ジベレリン（ＧＡ）および／またはカ
イネチン（Ｋ）を含む培地３０ｍｌを１００ｍｌ容の三
角フラスコに入れ、それを１２０℃、１．２気圧のオー
トクレーブ(YAMATO S-52) で２０分間滅菌し、冷却した
後、この培地に実施例１で得られたカルス２．０ｇを移
植し、回転振とう培養機上で回転数８０ｒｐｍ、２５
℃、暗所で３週間培養した。
【００２１】 表１ 組成 ｍｇ／リットル ＮＨ4 ＮＯ3 ０ ＨＮＯ3 ２５００．０ ＫＨ2 ＰＯ4 １７０．０ ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ４４０．０ ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ３７０．０ Ｎａ2 −ＥＤＴＡ ３７．３０ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ２７．８０ ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ １１１．５０ Ｈ3 ＢＯ4 ８６．０ ＫＩ ６．２０ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ０．８３ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ０．２５ ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ ０．２５ 塩酸チアミン ０．１ ニコチン酸 ０．５ 塩酸ピリドキシン ０．５ ミオイノシット １００．０ グリシン ２．０ 続いて、クリーンベンチ内で、カルスを培地から取り出
して余分な液体培地を吸引ろ過によって充分に取り除い
た後、カルスの重量を測定した。その後、カルスを凍結
乾燥機(Yamato)で凍結乾燥してその乾燥重量を測定し
た。また、凍結乾燥したカルスの中に含まれているサポ
ニンの量を測定した。
して余分な液体培地を吸引ろ過によって充分に取り除い
た後、カルスの重量を測定した。その後、カルスを凍結
乾燥機(Yamato)で凍結乾燥してその乾燥重量を測定し
た。また、凍結乾燥したカルスの中に含まれているサポ
ニンの量を測定した。
【００２２】また、コントロールとして、上記基本培地
に、炭素源として蔗糖２重量％およびグルコース０．５
重量％を含む培地を用いて同一の条件でカルスの培養を
行った。
に、炭素源として蔗糖２重量％およびグルコース０．５
重量％を含む培地を用いて同一の条件でカルスの培養を
行った。
【００２３】結果を表２に示す。
【００２４】
【表１】
【００２５】上記結果から、オーキシン、ジベレリンお
よび／またはカイネチンを含む液体培地で朝鮮ニンジン
のカルスを培養すると、増殖率が高まると共にその中に
含まれるサポニンの含有率も高まることがわかる。
よび／またはカイネチンを含む液体培地で朝鮮ニンジン
のカルスを培養すると、増殖率が高まると共にその中に
含まれるサポニンの含有率も高まることがわかる。
【００２６】実施例３ 表１に示す組成の培地を基本培地とし、さらに炭素源と
して蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、オー
キシンとしてナフチルアセテアートアミド２ｐｐｍを含
む培地（一次培地）３０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラ
スコに入れ、それを１２０℃、１．２気圧のオートクレ
ーブ(YAMATO S-52) で２０分間滅菌し、冷却した後、一
次培地に実施例１で得られたカルス２．０ｇを移植し、
回転振とう培養機上で回転数８０ｒｐｍ、25℃、暗所で
３週間培養した（一次培養）。
して蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、オー
キシンとしてナフチルアセテアートアミド２ｐｐｍを含
む培地（一次培地）３０ｍｌを１００ｍｌ容の三角フラ
スコに入れ、それを１２０℃、１．２気圧のオートクレ
ーブ(YAMATO S-52) で２０分間滅菌し、冷却した後、一
次培地に実施例１で得られたカルス２．０ｇを移植し、
回転振とう培養機上で回転数８０ｒｐｍ、25℃、暗所で
３週間培養した（一次培養）。
【００２７】続いて、クリーンベンチ内でカルスを一次
培地から取り出して余分な液体培地を吸引ろ過によって
充分に取り除いた後、その重量および乾燥重量を測定し
た。また、その中に含まれるサポニン含量も測定した。
培地から取り出して余分な液体培地を吸引ろ過によって
充分に取り除いた後、その重量および乾燥重量を測定し
た。また、その中に含まれるサポニン含量も測定した。
【００２８】その後、上記基本培地にさらに炭素源とし
て蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、ジベレ
リン２ｐｐｍを含む培地（二次培地）３０ｍｌに、取り
出したカルスの一部（２．０ｇ）を入れて、一次培養と
同様の条件下で３週間培養した（二次培養）後、増殖し
たカルスを培地から取り出して、その重量およびサポニ
ン含量を測定した。
て蔗糖２重量％およびグルコース０．５重量％、ジベレ
リン２ｐｐｍを含む培地（二次培地）３０ｍｌに、取り
出したカルスの一部（２．０ｇ）を入れて、一次培養と
同様の条件下で３週間培養した（二次培養）後、増殖し
たカルスを培地から取り出して、その重量およびサポニ
ン含量を測定した。
【００２９】結果を表３に示す。 表３ 初期 最終 乾燥 増殖 サポニン 乾燥重量あたりの 重量 重量 重量 率 生産量 サポニン含量 (g) (g) (g) (%) (mg) (mg/乾燥重量) コントロール 2.0 5.39 0.17 269.3 0.51 3.02 一次培養 2.0 5.41 0.37 270.7 2.13 5.75 二次培養 2.0 4.41 0.31 220.5 3.03 9.78 上記結果から、朝鮮ニンジンのカルスの培養を、上記の
ように二段階に分けて行うと、カルス中のサポニン含有
率が著しく高まることがわかる。
ように二段階に分けて行うと、カルス中のサポニン含有
率が著しく高まることがわかる。
【００３０】実施例４ 表１の基本培地、ＭＳ培地およびＭＳ培地からアンモニ
ア態窒素であるNH4NO3を除いた培地に、それらの培地が
各々炭素源として蔗糖２重量％およびブドウ糖０．５重
量％、および３−インドール酪酸１．０ｐｐｍおよびカ
イネチン０．１ｐｐｍを含むように、各物質を添加し、
さらに０．０１Ｎ Ｈ2 ＳＯ4 を添加してｐＨを５．８
に調整した。これらの培地３０ｍｌを、それぞれ１００
ｍｌ容の三角フラスコに入れて、１２０℃、１．２気圧
のオートクレーブ(Yamato SP-52)内で２０分間滅菌した
後、そこに、それぞれ２．０ｇの実施例１で得られたカ
ルスを移植した。培養を回転振とう培養機上で、８０ｒ
ｐｍの回転数で２５℃で暗所で３週間行った（反復数は
５とする）。
ア態窒素であるNH4NO3を除いた培地に、それらの培地が
各々炭素源として蔗糖２重量％およびブドウ糖０．５重
量％、および３−インドール酪酸１．０ｐｐｍおよびカ
イネチン０．１ｐｐｍを含むように、各物質を添加し、
さらに０．０１Ｎ Ｈ2 ＳＯ4 を添加してｐＨを５．８
に調整した。これらの培地３０ｍｌを、それぞれ１００
ｍｌ容の三角フラスコに入れて、１２０℃、１．２気圧
のオートクレーブ(Yamato SP-52)内で２０分間滅菌した
後、そこに、それぞれ２．０ｇの実施例１で得られたカ
ルスを移植した。培養を回転振とう培養機上で、８０ｒ
ｐｍの回転数で２５℃で暗所で３週間行った（反復数は
５とする）。
【００３１】３週間後のカルスの重量とサポニン含量を
測定した。結果を表４に示す。 表４ 初期 最終 乾燥 増殖 サポニン 乾燥重量あたりの 重量 重量 重量 率 生産量 サポニン含量 (g) (g) (g) (%) (mg) (mg/乾燥重量) 表１の基本培地 2.0 3.88 0.21 194.6 1.22 5.31 ＭＳ培地 2.0 1.67 0.09 83.5 0.36 3.99 NH4NO3を除いた ＭＳ培地 2.0 2.88 0.19 144.1 0.96 5.06 上記結果から、朝鮮ニンジンのカルスを培養する際に、
窒素源としてアンモニア態窒素を使用しないと、朝鮮ニ
ンジンのカルスの増殖率が高まると共に、その中のサポ
ニン含有率も高まることがわかる。
測定した。結果を表４に示す。 表４ 初期 最終 乾燥 増殖 サポニン 乾燥重量あたりの 重量 重量 重量 率 生産量 サポニン含量 (g) (g) (g) (%) (mg) (mg/乾燥重量) 表１の基本培地 2.0 3.88 0.21 194.6 1.22 5.31 ＭＳ培地 2.0 1.67 0.09 83.5 0.36 3.99 NH4NO3を除いた ＭＳ培地 2.0 2.88 0.19 144.1 0.96 5.06 上記結果から、朝鮮ニンジンのカルスを培養する際に、
窒素源としてアンモニア態窒素を使用しないと、朝鮮ニ
ンジンのカルスの増殖率が高まると共に、その中のサポ
ニン含有率も高まることがわかる。
【００３２】
【発明の効果】本発明によれば、朝鮮ニンジンの薬効の
主成分であるサポニンを効率よく生産できる。
主成分であるサポニンを効率よく生産できる。
Claims (6)
- 【請求項１】 無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルス
を、オーキシン、ジベレリンおよびカイネチンの少なく
とも１つを含む液体培地で培養することを特徴とする、
朝鮮ニンジンのカルスの培養方法。 - 【請求項２】 無菌状態下で、朝鮮ニンジンのカルス
を、オーキシンを含む液体培地で一次培養し次いでジベ
レリンを含む液体培地で二次培養することを特徴とす
る、朝鮮ニンジンのカルスの培養方法。 - 【請求項３】 液体培地が、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｐ
およびＣを含む基本的無機成分、微量の無機成分、炭素
源、窒素源、アミノ酸、ビタミンを含み、その際、窒素
源としてアンモニア態窒素を含まない、請求項１または
２記載の方法。 - 【請求項４】 オーキシンが、ナフチルアセテートアミ
ドである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項５】 １リットルあたり、２０００〜３０００
ｍｇのＫＮＯ3 、１５０〜２００ｍｇのＫＨ2 ＰＯ4 、
４００〜５００ｍｇのＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ、３００〜
４００ｍｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、３５〜４０ｍｇの
Ｎａ2 −ＥＤＴＡ、２５〜３０ｍｇのＦｅＳＯ4 ・７Ｈ
2 Ｏ、８０〜１２０ｍｇのＭｎＳＯ4・４Ｈ2 Ｏ、６０
〜１００ｍｇのＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ、５〜７ｍｇのＨ
3 ＢＯ 4 、０．５〜１．０ｍｇのＫＩ、０．１〜０．４
ｍｇのＮａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2Ｏ、０．０１〜０．０４
ｍｇのＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ、０．１〜０．４ｍｇのＣ
ｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ、０．０５〜０．２ｍｇのチアミン
塩酸塩、０．３〜０．７ｍｇのニコチン酸、０．３〜
０．７ｍｇのピリドキシン塩酸塩、８０〜１２０ｍｇの
ミオイノシトールおよび１．０〜３．０のグリシンを含
むが、但し、アンモニア態窒素を含まない、朝鮮ニンジ
ンのカルスを培養をするための液体培地。 - 【請求項６】 炭素源として、０．１〜０．５重量％の
グルコースおよび１．０〜２．０重量％の蔗糖を含む、
請求項５記載の培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6174344A JP2889904B2 (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | 朝鮮ニンジンの組織培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6174344A JP2889904B2 (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | 朝鮮ニンジンの組織培養方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0838164A true JPH0838164A (ja) | 1996-02-13 |
| JP2889904B2 JP2889904B2 (ja) | 1999-05-10 |
Family
ID=15977005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6174344A Expired - Fee Related JP2889904B2 (ja) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | 朝鮮ニンジンの組織培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2889904B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104026019A (zh) * | 2013-02-04 | 2014-09-10 | 南京工业大学大丰海洋产业研究院 | 通过组织培养持续获得人参毛状根次生代谢产物的方法 |
-
1994
- 1994-07-26 JP JP6174344A patent/JP2889904B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104026019A (zh) * | 2013-02-04 | 2014-09-10 | 南京工业大学大丰海洋产业研究院 | 通过组织培养持续获得人参毛状根次生代谢产物的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2889904B2 (ja) | 1999-05-10 |
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