JPH08325291A - ハンタウィルス抗原蛋白質およびモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 ハンタウイルス核蛋白のポリペプチドにおけ
るアミノ酸番号で、Ｎ末端側より第１番目から第１０３
番目までのペプチドに相当する抗原蛋白質。ハンタウイ
ルス核蛋白のポリペプチドにおけるアミノ酸番号で、Ｎ
末端側より第１６６番目から第１７５番目までのペプチ
ドを含むハンタウイルスの増殖を抑制する抗体と反応性
のある抗原ペプチド。ハンタウイルス抗原ポリペプチド
と反応性のあるモノクロール抗体。 【効果】 本発明により抗ハンタウイルス抗体とのみ特
異的に反応する、診断上有用な抗原蛋白質が得られる。
本発明により、ハンタウイルスの増殖を抑制する抗体と
反応する抗原ペプチドが得られる。この抗原ペプチド
は、ハンタウイルスの各血清型間で、広い交差反応性が
あることが特徴である。本抗原ペプチドは 抗ハンタウ
イルス抗体と反応し、診断用抗原として利用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はハンタウイルス抗体を検
出するために有用な、診断用の抗原蛋白質、および抗原
ペプチドを提供する。更に診断上有用であり、またハン
タウイルスの増殖を抑制する機能を有するモノクローナ
ル抗体を提供する。

【０００２】ハンタウイルスは伝染性のウイルスであ
り、このウイルスに感染した場合に、ヒト体内の免疫反
応が進行し、ハンタウイルスと特異的に反応する抗体が
できる。本発明の抗原蛋白質、および抗原ペプチドは、
ハンタウイルスに感染したヒト血液中の抗ハンタウイル
ス抗体と特異的に反応するため、ハンタウイルスに感染
しているかどうかを診断するための、診断用抗原として
利用できる。また本発明の抗原ペプチドと反応するモノ
クローナル抗体は、受身投与によりハンタウイルス感染
症の治療に有用なものとなる。また当該モノクローナル
抗体はハンタウイルスに強く結合するため、抗原測定用
の診断用抗体としても利用できる。

【０００３】

【従来の技術】ハンタウイルスの抗原調製の報告は、不
活化ウイルス粒子抗原を用いる李らの方法（公開特許公
報、平２−２４２６７４）と、遺伝子組換え抗原を用い
る方法がある。しかしながら、不活化ウイルス粒子抗原
を生産するためには、感染性のあるウイルスの大量培養
を行う必要があり、大きな危険を伴う。

【０００４】近年、遺伝子操作技術が普及し、危険なウ
イルス培養を行うことなく、ウイルス抗原を遺伝子組換
え技術で生産することが可能になった。例えばロシら
は、ハンタウイルスのＳゲノムを単離し、そこにコード
されている核蛋白を遺伝子組換え技術によって生産し
た。そして当該核蛋白に抗原性があることを、１９９０
年に報告している（Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．，１９９
０，Ｓｕｐｐｌ．１．ｐｐ１９−２８）。またニコルら
は、国際特許ＷＯ−９５／００６４８で、同様の技術を
開示している。しかしながら、これまでの報告では、抗
原性のある特定の核蛋白領域は明らかにされておらず、
診断用抗原蛋白質としては、まだ満足できるものではな
い。

【０００５】一般的に診断上、真に有用な抗原蛋白質と
は、目的とする抗ハンタウイルス抗体とのみ特異的に結
合する抗原蛋白質である。この場合、できるだけ限り不
要な蛋白質領域は省く必要があり、余分な蛋白質領域を
削れば削るほど良質の診断用抗原蛋白質が得られる。一
般に、診断用抗原蛋白質として必須となる領域以外の、
不要な蛋白質領域があると、目的とする抗体以外の、他
の抗体と非特異的に反応する割合が高くなり、診断の正
確性を低下させてしまう恐れがあるとされている。

【０００６】また遺伝子操作によらず、合成ペプチドを
抗原として利用することも可能であるが、これまで、良
好な抗原ペプチドは知られていない。更にまた、ハンタ
ウイルスの増殖を抑制する抗原については、ほとんど研
究されていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】我々はハンタウイルス
由来の蛋白質の研究を長年行ってきた。特に、抗ハンタ
ウイルス抗体と結合する抗原蛋白質について、真に診断
上有用な抗原蛋白質を得るため、鋭意研究を続けてき
た。その結果、核蛋白のなかの、ある特定の領域のもの
が、抗ハンタウイルス抗体と、高率にしかも特異的に反
応することを見いだし、本発明を完成するに至った。

【０００８】更に我々は、長年にわたってハンタウイル
スの増殖を抑制する抗原ペプチドの研究を続けており、
ウイルス培養や、遺伝子組換え技術を必要としない、合
成ペプチドを用いるハンタウイルスの増殖抑制機能を追
求してきた。そして、核蛋白の中のある特定の領域が、
ハンタウイルスの増殖を抑制する抗体と反応性があるこ
とをつきとめ、本発明を完成するに至った。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、配列番号１〜
１１のいずれかのアミノ酸配列を有するハンタウイルス
核蛋白における、Ｎ末端側より第１番目から第１０３番
目までのペプチド、または該ペプチドにおいて１または
複数のアミノ酸が置換、挿入、付加したものであって、
且つハンタウイルス抗原活性を有するペプチドを含む抗
原蛋白質である。

【００１０】更に、本発明は、配列番号１〜１３のいず
れかのアミノ酸配列を有するハンタウイルス核蛋白にお
ける、Ｎ末端側より第１６６番目から第１７５番目まで
のアミノ酸配列を含むハンタウイルスの増殖を抑制する
抗体と反応性のある抗原ペプチドである。

【００１１】更に、本発明は、ＥＤＶＮＧＩＲＫＰＫお
よびＥＤＩＮＧＩＲＲＰＫから選ばれる、ハンタウイル
スの増殖を抑制する抗体と反応性のある抗原ペプチドで
ある。更に、本発明は、ハンタウイルス抗原蛋白質と反
応性のあるモノクロナール抗体である。

【００１２】以下、本発明を詳細に説明する。本発明で
いうハンタウイルスとは、ブンヤウイルス科（Bunyavir
us）のハンタウイルス（Hantavirus）の総称であり、遺
伝子は一本鎖ＲＮＡウイルス型として知られ、その中に
は、血清型およびＲＮＡ３’末端の塩基配列から、ハン
タン型（Hantaan）、ソウル型（Seoul）、プーマラ型
（Puumala）、プロスペクトヒル型（Prospect Hill）な
どの株があることが知られている。これらの株の中で、
プロスペクトヒル型以外の株は、ヒトに対して病原性を
有する。一般にハンタン型（Hantaan）、ソウル型（Seo
ul）、プーマラ型（Puumala）の株は腎症候性出血熱
（ＨＦＲＳ）を引き起こすことで知られているが、それ
以外にも肝炎などを引き起こすとの報告もなされてい
る。また最近になって、フォーコーナー型（Four Corne
rs）と呼ばれる株が、米国を中心に分布していることが
知られる様になったが、現状では米国のみの特殊な型で
あり、遺伝子の相同性も上記３種類の株と比べて低いこ
と、また症状としてもＨＦＲＳを引き起こさず、急性で
死亡率の高い肺炎を引き起こすことなどから、本発明の
ハンタウイルスの中では、やや特殊な分類学的位置に属
するものである。

【００１３】ハンタウイルスのＲＮＡゲノムには、Ｌゲ
ノム、Ｍゲノム、Ｓゲノムの３本があり、ＬゲノムはＲ
ＮＡポリメラーゼを、Ｍゲノムはウイルス表面の糖蛋白
抗原を、ＳゲノムはＲＮＡと結合する核蛋白をコードす
ることが知られている。Ｓゲノムでコードされる遺伝子
から生産されるハンタウイルスの核蛋白質について、そ
のアミノ酸配列を配列番号１〜配列番号１３に、そして
それらを比較したものを表１に示す。ここに示すよう
に、分離された株毎に、アミノ酸が少しずつ変異してい
るが、一般にＲＮＡウイルスは遺伝子の変異が早く、そ
れに伴いウイルスを構成するアミノ酸も変異する傾向が
強いことが知られている。

【００１４】本発明でいう核蛋白のＮ末端より第１番目
から第１０３番目までアミノ酸配列を有するペプチドと
は、配列番号１〜配列番号１３に示す番号で規定される
ものであり、ウイルス株によっては、実際のＮ末端を１
とする番号とは若干のずれが生じる場合がある。なお、
基準に用いた番号は、ハンタン７６−１１８株の番号に
基づくものである。また、ウイルスのＲＮＡ遺伝子が変
異しやすい実情から容易に理解できるが、本発明でいう
抗原蛋白質とは、配列表に例示するアミノ酸配列だけに
限定されるものではない。これらの配列から、１または
複数のアミノ酸が置換、挿入、付加したものであって、
且つハンタウイルス抗原活性を有するペプチドを含む抗
原蛋白質は総て含まれる。ここで、アミノ酸の置換、挿
入又は付加は、既に周知技術である部位特異変異誘導
（例えば、Nucleic Acid Reserch,Vol. 10, No. 20, P.
6487 〜6500, 1982 参照) により実施することができ
る。アミノ酸の置換、挿入又は付加に関して、１または
複数のアミノ酸とは、部位特異変異誘導により置換、挿
入又は付加できる程度のアミノ酸を意味する。抗原とし
て好適に利用できる例として配列番号１４に示すアミノ
酸配列を有するペプチドが挙げられる。

【００１５】本発明でいうアミノ酸残基の番号は、全て
表１により規定されるものであり、実際のＮ末端からの
数字とは異なる場合がある。即ち、本発明でいう核蛋白
のＮ末端より第１番目から第１０３番目までのアミノ酸
配列を有するペプチド（ただし、P-HTVC1-1 及びP-HTVC
1-2 株については第２番目から第１０４番目までのアミ
ノ酸配列を有するペプチド）とは、表１に示す番号で規
定されるものである。ハンタウイルスは、他のＲＮＡウ
イルスがそうであるように、ウイルス株によっては、ア
ミノ酸配列中に、アミノ酸の欠落、挿入が見られる。こ
うした場合に、ある株の塩基配列を基準に番号付けを行
い、他の株については、ギャップ（配列中に−で示し、
この部分はアミノ酸が欠落していることを示す）を挿入
すことにより、基準配列と相同性が高くなるように配列
しなおし、統一番号で示す方法がとられる。本発明で
は、他の多くの文献がそうであるようにハンタウイルス
７６−１１８株のアミノ酸配列を基準に番号付けを行っ
た。このため各株については、実際のＮ末端を１とする
番号とは若干のずれが生じる場合がある。配列番号１か
ら配列番号１３のアミノ酸残基数が各株毎に異なるのは
このためである。

【００１６】また、ウイルスのＲＮＡ遺伝子が変異しや
すい実情から容易に理解できるが、本発明でいう抗原蛋
白質とは、配列表に例示するアミノ酸配列だけに限定さ
れるものではない。これらの配列から、１または複数の
アミノ酸が置換、挿入及び付加したものであって、且つ
ハンタウイルス抗原活性を有するペプチドを含む抗原蛋
白質は総て含まれる。ここで配列番号１４に示すアミノ
酸配列は、抗原として好適に利用できる。

【００１７】

【表１】 表１ 配列番号１〜配列番号１３のハンタウイルスの核蛋白のアミノ酸配 列比較表 ─────────────────────────────────── 配列比較番号 1 20 40 : : : : : 01/P-HTN 76-118 -MATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRTLTDREG 02/P-HTN Cl-1 MMATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRALTNREG 03/P-HTN Cl-2 MMATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRALTNREG 04/P-PHV -MSQLRETQEEITRHEQQLVIARQKLKEAERTVEVDPDDVNKSTLQSRRS 05/P-PUU CG1820 -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKSTLQARQQ 06/P-PUU Evo/12Cg -MSDLTDIQEDITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ 07/P-PUU P360 -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVYPDDVNKNTLQARQQ 08/P-PUU Sotkamo -MSDLTDIQEDITRHEQQLIVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ 12/P-RM-97 mexico -MSNLKELQDNITAHEQQLVTARQKLKDAEKAVEVDPDDVNKSTLQSRRA 09/P-SR11 -MATMEEIQREISAHEGQLVIARQKVKDAEKQYEKDPDDLNKRALHDRES 10/P-Tula 76M -MSQLKEIQEEITRHEQQIVIARQKLKDAEKTVEADPDDVNKNTLQSRRA 11/P-PUU master -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ 13/NP-HPS -MSTLKEVQDNITLHEQQLVTARQKLKDAERAVELDPDDVNKSTLQSRRA 配列比較番号 60 80 : : : : : P-HTN 76-118 VAVSIQAKIDELKRQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG P-HTN Cl-1 VAVSIQAKIDELKMQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG P-HTN Cl-2 VAVSIQAKIDELKMQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG P-PHV AVSTLEDKLAEFKRQLADVISRQKMDEKPVDPTGIELDDHLKERSSLQYG P-PUU CG1820 TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG P-PUU Evo/12Cg TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG P-PUU P360 TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG P-PUU Sotkamo TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG P-RM-97 mexico AVSALETKLGELKRQLADFVTSQKLASKPVDPTGLEPDDHLKEKSSLRYG P-SR11 VAASIQSKIDELKRQLADRLQQGRTSGQDRDPTGVEPGDHLKERSALSYG P-Tula 76M AVSALEDKLAEFKRQLADLVSSQKMGEKPVDPTGIEPDDHLKERSSLRYG P-PUU master TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NP-HPS AVSALETKLGELKRELADLIAAQKLASKPVDPTGIEPDDHLKEKSSLRYG 配列比較番号 100 120 140 : : : : : P-HTN 76-118 NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT P-HTN Cl-1 NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT P-HTN Cl-2 NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT P-PHV NVLDVNSIDIEEPSGQTADWLKIGSYIIEFALPIILKALHMLSTRGRQTV P-PUU CG1820 NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV P-PUU Evo/12Cg NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV P-PUU P360 NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV P-PUU Sotkamo NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTLPIILKALYMLSTRGRQTV P-RM-97 mexico NVLDVNSIDLEEPSGQTADWKSIGLYILSFTLPIVLKALYMLSTRGRQTV P-SR11 NTLDLNSLDIDEPTGQTADWLTIIVYLTSFVVPIILKALYMLTTRGRQTS P-Tula 76M NVLDVNAIDIDEPSGQTADWFAIGQYIIGFALAIVLKALYMLSTRGRQTI P-PUU master NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV NP-HPS NVLDVNSIDLEEPSGQTADWKSIGLYILSFALPIILKALYMLSTRGRQTI 配列比較番号 160 180 : : : : : P-HTN 76-118 KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR P-HTN Cl-1 KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR P-HTN Cl-2 KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR P-PHV KENKGTRIRFKDDSSYEDVNGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR P-PUU CG1820 KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR P-PUU Evo/12Cg KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR P-PUU P360 KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR P-PUU Sotkamo KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR P-RM-97 mexico QENKGTRIRFKDDTSYEEVNGIRKPKHLYVSLPTAQSTMKADEITPGRFR P-SR11 KDNKGMRIRFKDDSSYEDVNGIRKPKHLYVSMPNAQSSMKAEEITPGRFR P-Tula 76M KENKGTRIRFKDDSSFEEINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKADELTPGRFR P-PUU master KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR NP-HPS KENKGTRIRFKDDSSYEEVNGIRKPRHLYVSMPTAQSTMKADEITPGRFR 配列比較番号 200 220 240 : : : : : P-HTN 76-118 TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- P-HTN Cl-1 TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- P-HTN Cl-2 TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- P-PHV TIVCGLFPAQIMARNIISPVMGVIGFAFFVKDWADKVKAFLDQKCPFLKA P-PUU CG1820 TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPEKIREFMEKECPFIKP P-PUU Evo/12Cg TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPERIREFMEKECPFIKP P-PUU P360 TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPEKIREFMEKECPFIKP P-PUU Sotkamo TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWSERIREFMEKECPFIKP P-RM-97 mexico TITCGLFPAQVKARNIISPVMGVIGFSFFVKDWTEKIDGFLNSDCPF--- P-SR11 TAVCGLYPAQIKARNMVSPVMSVVGFLALAKDWTSRIEEWLGAPC---K- P-Tula 76M TIVCGLFPAQIMHRNIISPVMGVIGFSFFVKDWPEKIEEFLIKPCPFLK- P-PUU master TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPERIRDFMEKECPFIKP NP-HPS TIACGLFPAQVKARNIISPVMGVIGFSFFVKDWMERIDDFLAARCPF--- 配列比較番号 260 280 : : : : : P-HTN 76-118 LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM P-HTN Cl-1 LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM P-HTN Cl-2 LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM P-PHV EPRPGQPAGEAEFLSSIRAYLMNRQAVLDETHLPDIDALVELAASGDPTL P-PUU CG1820 EVKPGTPAQEVEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS P-PUU Evo/12Cg EIKPGTPAQEMEMLKRNKIYFMQRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS P-PUU P360 EVKPGTPAQEVEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS P-PUU Sotkamo EVKPGTPAQEIEMLKRNKIYFMQRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS P-RM-97 mexico --LPKVQGAGEKLLQTIRAYFITRQDQVMQSMLPDITDLMADAQAQGATL P-SR11 FMAESLIAGSLSGNPVNRDYIRQRQGALAGMEPKEFQALRQHSKDAGCTL P-Tula 76M --KQGSPGKEEEFLVSNDAYLIGREKALRESHLAEIDDLVDLAASGDPTP P-PUU master EVKPGTPAQEIEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS NP-HPS --LPEQKDPRDAALATNRAYFITRQLQVDESKVSDIEDLIADARAESATI 配列比較番号 300 320 340 : : : : : P-HTN 76-118 IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-HTN Cl-1 IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-HTN Cl-2 IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-PHV PDSLENPHAAWVFACAPDRCPPTCIYIAGMAELGAFFAILQDMRNTIMAS P-PUU CG1820 PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-PUU Evo/12Cg PDNIDSPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-PUU P360 PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-PUU Sotkamo PDNIDSPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-RM-97 mexico FSDITSPHSVWVFSCAPDRCPPTALYVAGLPELGAFFSILQDMRNTIMAS P-SR11 VEHIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFVGGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-Tula 76M PDSIKSPQAPWVFACAPDRCPPTCIYIAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS P-PUU master PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVVGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS NP-HPS FADIATPHSVWVFACAPDRCPPTALYVAGMPELGAFFAILQDMRNTIMAS 配列比較番号 360 380 : : : : : P-HTN 76-118 KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLGQRIIVLFMVAWGKEAVDN P-HTN Cl-1 KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVLFMVAWGKEAVDN P-HTN Cl-2 KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVLFMVAWGKEAVDN P-PHV KTVGTAEEKLKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILMYMIEWGNEVVNH P-PUU CG1820 KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGREMVDH P-PUU Evo/12Cg KTVGTAEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMLEWGKEMVDH P-PUU P360 KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGKEMVDH P-PUU Sotkamo KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMLEWGKEMVDH P-RM-97 mexico KAVGTAEEKMKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIIMYMSHWGKEIVNH P-SR11 KTVGTADEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVMFMVAWGKEAVDN P-Tula 76M KTVGTAEEKLEKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMMEWGSDIVNH P-PUU master KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGKEMVDH NP-HPS KSVGTSEEKLKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQKIIILYMSHWGREAVNH 配列比較番号 400 420 : : : P-HTN 76-118 FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL P-HTN Cl-1 FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL P-HTN Cl-2 FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL P-PHV FHLGDDMDPELRQLAQALIDQKVKEISNQEPLKI P-PUU CG1820 FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI P-PUU Evo/12Cg FHLGDDMDPELRGLAQALIDQKVKEISNQEPLKI P-PUU P360 FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI P-PUU Sotkamo FHLGDDMDPELRGLAQALIDQKVKEISNQEPLKI P-RM-97 mexico FHLGDDMDPELRQLAQALVDTKVKEISNQELLKL P-SR11 FHLGDDMDPELRSLAQILIDQKVKEISNQEPMKL P-Tula 76M FHLGDDMDPELRTLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI P-PUU master FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI NP-HPS FHLGDDMDPELRELAQTLVDIKVREISNQEPLKL ───────────────────────────────────

【００１８】表中の略号は米国ロスアラモスのＧｅｎＢ
ａｎｋに登録されている株の名称であり、Ｐ−ＨＴＮは
ハンタン型、Ｐ−ＰＵＵはプーマラ型、Ｐ−ＳＲ１１は
ソウル型、P-RM-97 mexicoとNP-HPSはフォーコーナー
型、Ｐ−Ｔｕｌａはプーマラタイプの株である。

【００１９】本発明でいうハンタウイルス抗原活性を有
するペプチドとは、ハンタウイルス核蛋白の第１番目か
ら第１０３番目までの領域と相同性があり、ハンタウイ
ルス核蛋白の第１番目から第１０３番目までの領域のア
ミノ酸配列からなるペプチドで誘導された抗体が、実質
的に、結合することのできるペプチドをさす。

【００２０】本発明の抗原蛋白質は抗体産生を誘導しや
すいものであり、更に誘導された抗体は、本発明の抗原
蛋白質との反応性が強い。そのため、ハンタウイルスに
感染したヒトの血清中にも当然のことながら、当該抗体
が多く存在しており、実際にハンタウイルス感染者の血
清と本発明の抗原蛋白質を反応させると、特異的に強く
反応するため、当該抗原蛋白質は診断上、特に有用なも
のとなる。

【００２１】なお本発明のハンタウイルス核蛋白のアミ
ノ酸配列におけるＮ末端側より第１番目から第１０３番
目までに相当する抗原蛋白質を生産することのできる発
現プラスミドを含む大腸菌ＪＭ１０９（ｐＩＶ１５）
は、平成７年５月２６日付けで、通産省工業技術院生命
工学工業技術研究所に寄託され、その寄託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１４９４８である。

【００２２】また、本発明でいう第１６６番から第１７
５番までのアミノ酸配列を有する抗原ペプチドとは、表
１に示す番号で規定したものであり、ウイルス株によっ
ては、実際のＮ末端を１とする番号とは若干のずれが生
じる場合がある。なお、基準に用いた番号は、ハンタン
７６−１１８株の番号に基づくものである。

【００２３】本発明の抗原ペプチドに対する抗体は、当
該抗原ペプチドとの反応性が強い。そのため、ハンタウ
イルスに感染したヒトの血清中にも、当然のことなが
ら、当該抗体の存在が予測され、実際に、ハンタウイル
ス感染者の血清と本発明の抗原ペプチドを反応させる
と、特異的に強く反応する。この様に、当該抗原ペプチ
ドは、診断上でも有用である。

【００２４】また本発明でいうモノクローナル抗体と
は、ハンタウイルス核蛋白における、Ｎ末端側より第１
６６番目から第１７５番目までのアミノ酸配列を含む抗
原ペプチドと反応するモノクローナル抗体をいう。当該
モノクローナル抗体には、ハンタウイルスの増殖を抑制
する効果が認められ、当該モノクローナル抗体は、受身
投与により、ハンタウイルス感染症増殖を抑制するため
の治療剤として有用である。更にまた当該モノクローナ
ル抗体はハンタウイルスに強く結合するため、抗原測定
用の診断用抗体としても利用でき、ワクチンとしての利
用も期待できる。

【００２５】

【発明の効果】本発明により抗ハンタウイルス抗体との
み特異的に反応する、診断上有用な抗原蛋白質が得られ
る。本抗原蛋白質は、偽陽性反応が低く、ハンタウイル
スに感染した患者の血液中の抗ハンタウイルス抗体を特
異的に捕らえることができる。

【００２６】また、本発明により、ハンタウイルスの増
殖を抑制する抗体と反応する抗原ペプチドが得られる。
本発明の抗原ペプチドは、ハンタウイルスの各血清型間
で、広い交差反応性があることが特長であり、各種の株
を広く捉えるために、幅広いハンタウイルス感染症の抗
原として利用でき、また、今後ワクチンとしての利用も
期待できる。

【００２７】また、本発明の抗原ペプチドと反応するモ
ノクローナル抗体は、ハンタウイルスの増殖を抑制する
効果が認められている。当該モノクローナル抗体は受身
投与により、ハンタウイルス感染症増殖を抑制するため
の治療剤として有用である。更にまた当該モノクローナ
ル抗体はハンタウイルスに強く結合するため、抗原測定
用の診断用抗体としても利用でる。

【００２８】

【実施例】以下に、本発明を実施例により具体的に説明
する。ただし、本発明はこれらの実施例によりその技術
的範囲が制限されるものではない。 （実施例１） 大腸菌による遺伝子クローニングと遺伝
子発現 ハンタンウイルス７６−１１８株のＳゲノムのｃＤＮＡ
遺伝子を制限地図で表示すると図１の様である。このう
ち開始コドンＡＴＧはヌクレオチド番号で３７番目に、
終止コドンは１３２６番目に位置し、その間のオープン
リーディングフレームから予測すると、１２８７個のヌ
クレオチドが４２９個のアミノ酸をコードする構造とな
っている。

【００２９】ハンタウイルスの遺伝子クローニングには
ＰＣＲ法を用い、開始コドンを含むＨＴＮＮＰＡＴＧプ
ライマーと、逆のプライマーＨＴＮＮＰＥＮＤとを用い
て遺伝子増幅した。ＨＴＮＮＰＡＴＧプライマーの塩基
配列は、ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＡＴＧＧＡＧＧＡＡＴＴＡ
ＣＡＧであり、逆鎖（−鎖）用のＨＴＮＮＰＥＮＤプラ
イマーの塩基配列は、ＴＴＡＧＡＧＴＴＴＣＡＡＡＧＧ
ＣＴＣＴＴＧＧＴＴである。逆プライマーの最初の塩基
配列ＴＴＡは、＋鎖ではＴＡＡとなり終止コドンとな
る。増幅に用いたハンタウイルス遺伝子はＳｃｈｍａｌ
ｊｏｈｎらが塩基配列を報告しているハンタンウイルス
７６−１１８株のＳゲノム（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏ
ｌ．１５５，ｐｐ．６３３−６４３，１９８６）を使用
した。ＰＣＲ法は、宝酒造社ＲＴ−ＰＣＲキットに添付
されている試薬および方法で行った。

【００３０】増幅した遺伝子はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社
のプラスミドＴＡ−クローニングキットを用い、プラス
ミドベクターｐＣＲに組み込んだ。実施にあたっては、
キットに添付されている試薬を用い、キットに示されて
いる方法に従って行った。核蛋白質内の各種の領域の遺
伝子発現を行い、各種の核蛋白断片を得るために、ｐＣ
Ｒに組み込んだ遺伝子を制限酵素ＥｃｏＲＩで切断し、
アガロースゲル電気泳動後、分離精製した。次に分離し
た遺伝子を、ＤｒａＩで切断し、結果として、ＥｃｏＲ
Ｉ（開始コドンを含む）〜ＤｒａＩ（３４８）までの断
片を得た。

【００３１】得られた断片の末端は粘着末端（Ｃｏｈｅ
ｓｉｖｅ）末端となっており、これをＴ４ポリメラーゼ
で埋めて、ブラント（Ｂｌｕｎｔ）末端とした。次い
で、この遺伝子断片をプロメガ社から販売しているプラ
スミドベクターであるピンポイントｐＸａ−２に組み込
み、遺伝子の発現プラスミドｐＩＶ１５を作成し、塩基
配列が保持されてることを確認した。発現プラスミドｐ
ＩＶ１５はＥｃｏＲＩ（開始コドン）〜ＤｒａＩ（３４
８）までの断片を含む。この発現プラスミドｐＩＶ１５
から生産される抗原蛋白質のアミノ酸配列を、配列番号
１５に示す。この抗原蛋白質は、核蛋白の第１番目から
第１０３番目までのアミノ酸配列を含む。

【００３２】なお、得られたｐＩＶ１５の遺伝子構造
は、ｐＸａ−２のマルチクローニング部位のＰｖｕＩＩ
位に、配列番号１６の塩基配列の遺伝子が挿入されたも
のであり、挿入の方向は、ｐＸａ−２遺伝子上のｔａｑ
プロモーターの下流に、ハンタウイルス遺伝子が正方向
に直列につながったものである。また配列番号１６中の
１１番目のＡＴＧがハンタンウイルスの開始コドンに相
当するが、ｐＩＶ１５では、同じフレームの上流に存在
するピンポイント蛋白の開始コドンから、アミノ酸への
翻訳が連続しており、結果的にピンポイント蛋白の下流
に抗原蛋白が結合した、融合蛋白が得られる。

【００３３】次に、この発現プラスミドｐＩＶ１５を大
腸菌ＪＭ１０９に移入し、ＪＭ１０９を形質転換した大
腸菌ＪＭ１０９（ｐＩＶ１５）を作成した。ついで、当
該大腸菌を使用して、大腸菌体内でビオチン化されるペ
プチドを上流に持つ融合蛋白を大腸菌に生産させた。こ
の方法は、プロメガ社のマニュアルに従って行った。大
腸菌ＪＭ１０９（ｐＩＶ１５）（ＦＥＲＭ Ｐ−１４９
４８）を、５０ｍｌの培養液で培養後、遺伝子発現誘導
剤ＩＰＴＧを加え、追加培養後、集菌し、溶菌緩衝液
（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．２、１５０ｍ
ＭのＮａＣｌ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．０
３％のＳＤＳ）で溶菌した。さらに溶菌した懸濁液を氷
上に置き、超音波破砕を行った。更に不溶性画分を除去
し、可溶性画分に目的の抗原蛋白質があることを、ウエ
スタンブロッティング法で確認した。

【００３４】（実施例２） ＥＬＩＳＡ用抗原蛋白質感
作プレートの作成 ９６穴のマイクロプレートに５マイクログラム／ｍｌの
アビジン溶液を加えて４℃にて一晩置き、アビジンをコ
ートした。その後、プレートは３回洗浄を繰り返し、次
いでＢＳＡ溶液を加えてブロッキング操作を行い、更に
３回洗浄した。次に、実施例１で作成した発現プラスミ
ドを用いて作成した抗原蛋白質について、蛋白質濃度が
４０マイクログラム／ｍｌとなるように調製し、アビジ
ンコートしたプレートに加え、室温にて１時間、静置し
た。その後洗浄を繰り返すことにより、抗ハンタウイル
ス抗体の評価に使用するＥＬＩＳＡ用プレートを作成し
た。

【００３５】（実施例３） 抗原蛋白質の評価 ハンタウイルスに感染した５人の患者から採血した陽性
血清５種類（Ａ〜Ｅ）と、正常者５人から採血した正常
血清５種類（Ｆ〜Ｊ）を検定に使用した。これらの血清
を、実施例２で作成したＥＬＩＳＡプレートに、各１０
０マイクロリットルずつ加え、３７℃にて１時間静置し
た後洗浄し、ついで二次抗体としてパーオキシダーゼ標
識した羊由来の抗ヒトＩｇＧ抗体溶液を加え、３７℃で
１時間静置した。洗浄後、発色溶液ＡＢＴＳを加え、３
０分静置後、発色の度合を波長４０５ｎｍで測定した。
この結果を表２に示す。

【００３６】（比較例１）核蛋白質内の各種の領域の遺
伝子発現を行い、各種の核蛋白断片を得るために、ｐＣ
Ｒに組み込んだ遺伝子を制限酵素ＥｃｏＲＩで切断し、
アガロースゲル電気泳動後、分離精製した。次に分離し
た遺伝子を、制限酵素ＢａｍＨＩ，ＤｒａＩ，ＢａｎＩ
Ｉ，ＰｖｕＩＩを組み合わせて切断し、結果として、Ｅ
ｃｏＲＩ（開始コドンを含む）〜ＤｒａＩ（３４８）ま
での断片、ＢａｍＨＩ（１３８）〜ＢａｍＨＩ（１２４
２）までの断片、ＤｒａＩ（３４８）〜ＢａｎＩＩ（６
４６）までの断片、ＢａｎＩＩ（６４６）〜ＰｖｕＩＩ
（９１０）までの断片、ＢａｎＩＩ（６４６）〜Ｅｃｏ
ＲＩ（終止コドンを含む）までの断片、ＰｖｕＩＩ（９
１０）〜ＢａｍＨＩ（１２４２）までの断片を得た。

【００３７】次いで、これらの遺伝子断片をそれぞれ、
プロメガ社から販売しているプラスミドベクターである
ピンポイントｐＸａ−１，ｐＸａ−２，ｐＸａ−３に組
み込み、以下に示す各種の遺伝子発現プラスミドを作成
し、塩基配列が保持されてることを確認した。各種の発
現プラスミドは以下の通りである。

【００３８】発現プラスミド１ ＥｃｏＲＩ（開始コドン）〜ＥｃｏＲＩ（終止コドン）
までの断片を含む 発現プラスミド２ ＢａｍＨＩ（１３８）〜ＢａｍＨＩ（１２４２）までの
断片を含む 発現プラスミド３ ＤｒａＩ（３４８）〜ＢａｎＩＩ（６４６）までの断片
を含む 発現プラスミド４ ＢａｎＩＩ（６４６）〜ＰｖｕＩＩ（９１０）までの断
片を含む 発現プラスミド５ ＢａｎＩＩ（６４６）〜ＥｃｏＲＩ（終止コドン）まで
の断片を含む 発現プラスミド６ ＰｖｕＩＩ（９１０）〜ＢａｍＨＩ（１２４２）までの
断片を含む 発現プラスミドから生産される各種の比較抗原

【００３９】比較抗原１．発現プラスミド１から生産さ
れる抗原蛋白質で、核蛋白の第１番目から第４２９番目
までのアミノ酸配列を含む。 比較抗原２．発現プラスミド２から生産される抗原蛋白
質で、核蛋白の第３４番目から第４０３番目までのアミ
ノ酸配列を含む。 比較抗原３．発現プラスミド３から生産される抗原蛋白
質で、核蛋白の第１０４番目から第２０４番目までのア
ミノ酸配列を含む。 比較抗原４．発現プラスミド４から生産される抗原蛋白
質で、核蛋白の第２０５番目から第２９０番目までのア
ミノ酸配列を含む。 比較抗原５．発現プラスミド５から生産される抗原蛋白
質で、核蛋白の第２０５番目から第４２９番目までのア
ミノ酸配列を含む。 比較抗原６．発現プラスミド６から生産される抗原蛋白
質で、核蛋白の第２９１番目から第４０３番目までのア
ミノ酸配列を含む。

【００４０】次に、実施例１と同じ方法により、これら
のプラスミドで大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、大腸菌
体内でビオチン化されるペプチドを上流に持つ、融合蛋
白を大腸菌に生産させた。この方法は、プロメガ社のマ
ニュアルに従った。形質転換された大腸菌は、５０ｍｌ
の培養液で培養後、集菌し、溶菌緩衝液（１０ｍＭのＴ
ｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、
１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００、０．０３％のＳＤＳ）
で溶菌した後、懸濁液を氷上にて超音波破砕した。更に
不溶性画分を除去し、可溶性画分に目的の抗原蛋白質が
あることを、ウエスタンブロッティング法で確認した。

【００４１】（比較例２） ＥＬＩＳＡ用抗原蛋白質感
作プレートの作成 実施例１と同じ方法により、９６穴のマイクロプレート
に５マイクログラム／ｍｌのアビジン溶液を加えて４℃
にて一晩置き、アビジンをコートした。その後、プレー
トは３回洗浄を繰り返し、次いでＢＳＡ溶液を加えてブ
ロッキング操作を行い、更に３回洗浄した。次に、比較
例１で作成した発現プラスミドを用いて作成した６種類
の抗原蛋白質について、各種の抗原蛋白質の濃度がそれ
ぞれ４０マイクログラム／ｍｌとなるように調製し、ア
ビジンコートしたプレートに加え、室温にて１時間、静
置した。その後洗浄を繰り返すことにより、抗ハンタウ
イルス抗体の評価に使用するＥＬＩＳＡ用プレートを作
成した。抗ハンタウイルス抗体の確認に使用する二次抗
体としては、パーオキシダーゼを固定化した羊由来の抗
体を使用した。

【００４２】（比較例３） 抗原蛋白質の評価 実施例１と同じ方法により、ハンタウイルスに感染した
５人の患者から採血した陽性血清５種類（Ａ〜Ｅ）と、
正常者５人から採血した正常血清５種類（Ｆ〜Ｊ）を検
定用に使用した。これらの血清を、実施例２で作成した
ＥＬＩＳＡプレートに、各１００マイクロリットルずつ
加え、３７℃にて１時間静置した後洗浄し、洗浄後、パ
ーオキシダーゼ標識した羊由来の抗ヒトＩｇＧ抗体溶液
を加え、３７℃で１時間静置した。洗浄後、発色溶液Ａ
ＢＴＳを加え、３０分静置後、発色の度合を波長４０５
ｎｍで測定した。その結果を表２にまとめて示す。

【００４３】

【表２】 表２ 実施例３および比較例３の結果 ────────────────────────────── 個別陽性血清 個別正常血清 ────────────────────────────── Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ Ｇ Ｈ Ｉ Ｊ ────────────────────────────── 抗原蛋白質 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ − − − − − ────────────────────────────── 比較抗原１ ＋ ＋ ＋ +/- ＋ − − ＋ − − 比較抗原２ ＋ +/- +/- +/- − − − +/- − − 比較抗原３ − − − − − − − − − − 比較抗原４ − − − − − − − − − − 比較抗原５ − − − − − − − − − − 比較抗原６ − − − − − − − − − − ──────────────────────────────

【００４４】この表２における、実施例３と比較例３の
結果から、抗原蛋白質の抗原性と比較抗原１の抗原性が
ほぼ一致し、抗原部位がＮ末端から１０３番目までの位
置に存在していることが分かる。また抗原蛋白質が正常
血清とは全く反応しないのに対し、比較抗原１は正常者
との偽陽性反応が見られること、陽性検体について反応
性が低い場合があること等の欠点がみられた。この様
に、本発明の抗原蛋白質が診断用抗原として優れている
ことが分かる。

【００４５】（実施例４） 細胞融合によるモノクロー
ナル抗体生産株の作成 モノクローナル抗体生産株は、以下の様な手順で作成し
た。この実験は、通常の実験手順書に従って追試でき
る。まず、韓国ＫＴＣＣに登録されているハンタンウイ
ルス７６１１８株（ＡＴＣＣ ＶＲ．９８３）を、Ｖｅ
ｒｏ／Ｅ６株細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１５８６）に感染
させ、感染細胞中でウイルスを培養した。次に、感染細
胞が１０の７乗個／ｍｌの濃度になるようにし、１％Ｔ
ｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳで処理して、ウイルス粗
精製抗原を得た。次に、得られた粗精製抗原を用いて、
マウスに免疫した。次いで当該粗抗原をフロイドの完全
アジュバントと等量混合し、１００マイクロリットルを
ＢＡＬＢ／Ｃマウス後肢筋肉内に注射した。３回の追加
免疫は不完全アジュバントを用いて同様に行った。最後
に抗原液を、アジュバントを混合せずにマウスの腹腔内
に注射し、その３日後に脾細胞を回収した。ついで、当
該脾細胞をＡＴＣＣに登録されている骨髄腫細胞P3-X63
-Ag8-U1株と細胞融合させた。融合は実験手順書に従っ
て、ＰＥＧ１５００法を採用して行った。

【００４６】（実施例５） モノクローナル抗体生産株
の選択 実施例４では各種の細胞融合候補株が得られた。これら
の中から、まずモノクローナル抗体生産株を選択した。
この方法は、吉松らが既に報告している蛍光抗体法によ
るもので（Yoshimatsu, K., Arikawa, J. & Kariwa,
H., J. Vet. Med.Sci., Vol.55, pp.1047-1050, 199
3.）、抗体分泌株のスクリーニングを行う方法である。
ここで、蛍光抗体法に使用した二次抗体には、カペル社
のＦＩＴＣ結合羊由来抗マウスＩｇ（Ｇ＋Ａ＋Ｍ）抗体
を使用した。こうしてＥ５／Ｇ６株、ＫＡ０６株など、
１７株のモノクローナル抗体生産株が得られた。次にこ
れらの中から、ハンタウイルスの増殖を抑制する効果を
有するモノクローナル抗体を選択した。このスクリーニ
ング方法は、競争結合アッセイ法であり、ラフォンらの
方法に従って行った（Lafon, M. & Lafage, M., J. Ge
n. Virol.Vol.68, pp.3113-3123, 1987.）。

【００４７】まず１０の６乗個のＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を
２５平方センチのフラスコに入れて４８時間培養し、培
養終了後、培養細胞を５ｍｌのＥＭＥＭで２回洗浄し
た。ついで１７種類のモノクローナル抗体と、対照とな
るマウス抗体ＩｇＧを、各々、ＥＭＥＭで希釈し、６０
０マイクロリットルの溶液とした。ついで、当該抗体溶
液を培養細胞上に注いだ。引き続き、培養細胞をシリコ
ンゴムプレートではぎ取り、５％ＦＣＳを含む４ｍｌの
氷冷ＥＭＥＭで洗浄した。２回目の洗浄が終わると、モ
ノクローナル抗体が付加された培養細胞を、２７Ｇ針の
注射器で分散、懸濁させ、組織培養用のプレートに分注
した。そしてモノクローナル抗体が付加された培養細胞
を、一晩培養し、ついでハンタンウイルス７６１１８株
またはソウルウイルスＳＲ１１株を、各々ｍ．ｏ．ｉ．
が０．１となるように接種した。細胞は、０，１，４，
７日後に、アセトンで固定化した。培養細胞中で増殖し
たウイルス抗原の検出には、蛍光抗体法を利用した。こ
の結果を表３に示す。

【００４８】

【表３】 表３ ハンタウイルス増殖抑制効果の結果 実験Ａ 判定株：ハンタンウイルス７６−１１８株 ───────────────────────────────── 処理抗体抗体 １日 ４日 ７日× ───────────────────────────────── Ｅ５／Ｇ６株モノクローナル抗体 ＋ ＋＋ ＋＋ 対照（ＫＡ０６株モノクローナル抗体） ＋ ＋＋＋＋＋ ＋＋＋＋＋ 対照（マウス抗体ＩｇＧ） ＋ ＋＋＋＋＋ ＋＋＋＋＋ ───────────────────────────────── ＋２０％増殖、＋＋４０％増殖、＋＋＋６０％増殖、 ＋＋＋＋８０％増殖、＋＋＋＋＋１００％増殖

【００４９】 実験Ｂ 判定株：ソウルウイルスＳＲ１１株 ───────────────────────────────── 処理抗体 １日 ４日 ───────────────────────────────── Ｅ５／Ｇ６株モノクローナル抗体 ＋ ＋＋＋ 対照（ＫＡ０６株モノクローナル抗体） ＋ ＋＋＋＋ 対照（マウス抗体ＩｇＧ） ＋ ＋＋＋＋＋ ───────────────────────────────── ＋２０％増殖、＋＋４０％増殖、＋＋＋６０％増殖、 ＋＋＋＋８０％増殖、＋＋＋＋＋１００％増殖

【００５０】この表３から、Ｅ５／Ｇ６株から産生され
るモノクローナル抗体にのみ、ハンタウイルスの増殖を
抑制する効果が認められた。同時に行った、ＫＡ０６株
など、他の１６株には、この様な抑制効果は見られなか
った。また同時に、実験の対照として使用したマウス抗
体ＩｇＧには、全く抑制効果は見られなかった。このこ
とは、Ｅ５／Ｇ６モノクローナル抗体は受身投与によ
り、ハンタウイルス感染症増殖を抑制するための治療剤
として有用であることを示している。また本モノクロー
ナル抗体がハンタウイルスに強く結合することが判明し
たため、抗原測定用の診断用抗体として利用できること
も判明した。

【００５１】（実施例６） モノクローナル抗体の結合
部位の特定 実施例５で得られたＥ５／Ｇ６株モノクローナル抗体の
結合部位を特定するために、まず比較例１で作成した比
較抗原１〜比較抗原６の、６種類の抗原との反応性を調
べた。その結果、当該モノクローナル抗体が比較抗原
１、比較抗原３とのみ反応することが判明し、まず結合
部位がアミノ酸配列の第１０４番目から２０４番目まで
の間にあることが判明した。また更に、ＰＥＰＳＣＡＮ
アッセイを行い、詳しい結合部位の特定を行った。ＰＥ
ＰＳＣＡＮアッセイは、Lundkvistらの方法に従って行
った。（Lundkvist, A., Bjorsten, S., Niklasson, B.
& Ahlborg, N., Clinical Diagnostic Lab. Immunol.,
Vol.2, pp.82-86, 1995.）。ＰＥＰＳＣＡＮアッセイ
は、Ｎ末端（第１番目）〜Ｃ末端（第４２９番目）まで
の全領域について、１０残基の連続した合成ペプチド
を、５アミノ酸ずつずらして作成し、それらの抗原性を
評価するＥＬＩＳＡ法の一種であり、一次抗体にＥ５／
Ｇ６株モノクローナル抗体、二次抗体に羊由来パーオキ
シダーゼ標識抗マウス抗体を使用した。この結果を表４
に示す。

【００５２】

【表４】 表４ ＰＥＰＳＣＡＮアッセイの結果 ────────────────────────────────── 領域 発色強度 領域 発色強度 （アミノ酸残基番号） （アミノ酸残基番号） …………………………………… …………………………………… 1- 10 <0.01 216-225 <0.01 6- 15 <0.01 221-230 <0.01 11- 20 <0.01 226-235 <0.01 16- 25 <0.01 231-240 <0.01 21- 30 <0.01 236-245 <0.01 26- 35 <0.01 241-250 <0.01 31- 40 <0.01 246-255 <0.01 36- 45 <0.01 251-260 <0.01 41- 50 <0.01 256-265 <0.01 46- 55 <0.01 261-270 <0.01 51- 60 <0.01 266-275 <0.01 56- 65 <0.01 271-280 <0.01 61- 70 <0.01 276-285 <0.01 66- 75 <0.01 281-290 <0.01 71- 80 <0.01 286-295 <0.01 76- 85 <0.01 291-300 <0.01 81- 90 <0.01 296-305 <0.01 86- 95 <0.01 301-310 <0.01 91-100 <0.01 306-315 <0.01 96-105 <0.01 311-320 <0.01 101-110 <0.01 316-325 <0.01 106-115 <0.01 321-330 <0.01 111-120 <0.01 326-335 <0.01 116-125 <0.01 331-340 <0.01 121-130 <0.01 336-345 <0.01 126-135 <0.01 341-350 <0.01 131-140 <0.01 346-355 <0.01 136-145 <0.01 351-360 <0.01 141-150 0.04 356-365 <0.01 146-155 <0.01 361-370 <0.01 151-160 <0.01 366-375 <0.01 156-165 <0.01 371-380 <0.01 161-170 <0.01 376-385 <0.01 166-175 0.35 381-390 <0.01 171-180 0.03 386-395 <0.01 176-185 <0.01 391-400 <0.01 181-190 <0.01 396-405 <0.01 186-195 <0.01 401-410 <0.01 191-200 <0.01 406-415 <0.01 196-205 <0.01 411-420 <0.01 201-210 <0.01 416-425 <0.01 206-215 <0.01 421-429 <0.01 211-220 <0.01 ──────────────────────────────────

【００５３】この表４の実験結果から、Ｅ５／Ｇ６株が
産生するモノクローナル抗体は、ハンタウイルスのアミ
ノ酸配列で、第１６６番目から第１７５番目に相当す
る、連続する１０残基にあることが特定された。

【００５４】さらに合成ペプチドを用いて、競合阻害試
験を行い、エピトープの確定を行った。合成ペプチドは
ハンタンウイルスおよびソウルウイルスの第１６６番目
から第１７５番目に相当するＥＤＶＮＧＩＲＫＰＫ（抗
原ペプチドＡ）と、プーマラウイルスの第１６６番目か
ら第１７５番目に相当するＥＤＩＮＧＩＲＲＰＫ（抗原
ペプチドＢ）の２種を作成した。まずこれらの合成ペプ
チドの５ｍｇ／ｍｌの溶液を作成し、それを順次５倍ず
つ希釈した希釈系列を作成し、Ｅ５／Ｇ６株モノクロー
ナル抗体と混合し、４℃で一晩インキュベーションし
た。この混合液を、ハンタウイルス抗原をコートした９
６穴のプレートに加え、引続き二次抗体として羊由来標
識抗マウス抗体を使用して、ＥＬＩＳＡを行った。モノ
クローナル抗体が予め抗原ペプチドと反応していれば、
ＥＬＩＳＡでの発色は低くなり、阻害率は大きくなる。
この結果を、以下の式で表される阻害率で表示する。

【００５５】 この結果を表５に示す。

【００５６】

【表５】 表５ モノクローナル抗体と抗原ペプチドのプレインキュベーションによる ＥＬＩＳＡ反応の競合阻害実験結果 ─────────────────────────────── 阻害率（％） 抗原濃度(マイクロク゛ラム ／ml) ────────────────── 抗原ペプチドＡ 抗原ペプチドＢ ─────────────────────────────── ０ ０％ ０％ ８ １８ ４２ ４０ ２２ ５０ ２００ ４２ ８３ １０００ ７５ ９２ ５０００ ９５ ９５ ───────────────────────────────

【００５７】この様に、ハンタウイルスを抗原として用
いるＥＬＩＳＡにおいて、抗原ペプチドの濃度に依存す
る阻害がみられることが判明した。このことから、当該
領域が、Ｅ５／Ｇ６株モノクローナル抗体に対するエピ
トープであることが明らかになった。

【００５８】（実施例７） 抗原ペプチドの評価 実施例６で特定された、ハンタウイルスのアミノ酸配列
で第１６６番目から第１７５番目までの抗原ペプチドを
作成し、診断用抗原としての評価を行った。評価には９
６穴のマイクロプレートを使用し、ＥＬＩＳＡ作成キッ
トを用いて、抗原ペプチドをウェルに固定化した。用い
た抗原ペプチドは、ハンタンウイルスおよびソウルウイ
ルス核蛋白の第１６６番目から第１７５番目に相当する
ＥＤＶＮＧＩＲＫＰＫ（抗原ペプチドＡ）と、プーマラ
ウイルス核蛋白の第１６６番目から第１７５番目のペプ
チドに相当するＥＤＩＮＧＩＲＲＰＫ（抗原ペプチド
Ｂ）を含む抗原ペプチドの２種を用いて行った。まず、
通常の手順に従って、５種類の個別患者血清（１〜５）
と５種類の個別正常者血清（６〜１０）を用いて、抗原
の評価を行った。この結果を表６に示す。

【００５９】

【表６】 表６ 実施例７の抗原ペプチドの評価 ────────────────────────────── 個別陽性血清 個別正常血清 ────────────────────────────── １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ ────────────────────────────── 抗原ペプチドＡ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ − − − − − 抗原ペプチドＢ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ − − − − − ──────────────────────────────

【００６０】また、抗原ペプチドＡ、抗原ペプチドＢを
用いて、各種のハンタウイルス株に対する抗体との反応
性を調べたところ、これらの抗原ペプチドは、ともにハ
ンタンウイルス７６−１１８株、ソウルウイルスＳＲ１
１株、プロスペクトヒルウイルス、プーマラウイルスＳ
ｏｔｋａｍｏ株の抗体と、広く反応した。この様に、当
該抗原ペプチドは各種株に対し広い交差性を示すため、
広くハンタウイルス感染症を診断する診断用抗原として
も有用であることが判明した。

【００６１】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：４２９ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-HTN 76-118 配列： -MATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRTLTDREG VAVSIQAKIDELKRQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLGQRIIVLFMVAWGKEAVDN FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL

【００６２】配列番号：２ 配列の長さ：４３０ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-HTN Cl-1 配列： MMATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRALTNREG VAVSIQAKIDELKMQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVLFMVAWGKEAVDN FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL

【００６３】配列番号：３ 配列の長さ：４３０ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-HTN Cl-2 配列： MMATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRALTNREG VAVSIQAKIDELKMQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYG NVLDLNHLDIDEPTGQTADWLSIIVYLTSFVVPILLKALYMLTTRGRQTT KDNKGTRIRFKDDSSFEDVNGIRKPKHLYVSLPNAQSSMKAEEITPGRYR TAVCGLYPAQIKARQMISPVMSVIGFLALAKDWSDRIEQWLIEPC---K- LLPDTAAVSLLGGPATNRDYLRQRQVALGNMETKESKAIRQHAEAAGCSM IEDIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFIAGIAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTSEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVLFMVAWGKEAVDN FHLGDDMDPELRTLAQSLIDVKVKEISNQEPLKL

【００６４】配列番号：４ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PHV 配列： -MSQLRETQEEITRHEQQLVIARQKLKEAERTVEVDPDDVNKSTLQSRRS AVSTLEDKLAEFKRQLADVISRQKMDEKPVDPTGIELDDHLKERSSLQYG NVLDVNSIDIEEPSGQTADWLKIGSYIIEFALPIILKALHMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDSSYEDVNGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPAQIMARNIISPVMGVIGFAFFVKDWADKVKAFLDQKCPFLKA EPRPGQPAGEAEFLSSIRAYLMNRQAVLDETHLPDIDALVELAASGDPTL PDSLENPHAAWVFACAPDRCPPTCIYIAGMAELGAFFAILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILMYMIEWGNEVVNH FHLGDDMDPELRQLAQALIDQKVKEISNQEPLKI

【００６５】配列番号：５ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PUU CG1820 配列： -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKSTLQARQQ TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPEKIREFMEKECPFIKP EVKPGTPAQEVEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGREMVDH FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI

【００６６】配列番号：６ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PUU Evo/12Cg 配列： -MSDLTDIQEDITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPERIREFMEKECPFIKP EIKPGTPAQEMEMLKRNKIYFMQRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS PDNIDSPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMLEWGKEMVDH FHLGDDMDPELRGLAQALIDQKVKEISNQEPLKI

【００６７】配列番号：７ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PUU P360 配列： -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVYPDDVNKNTLQARQQ TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPEKIREFMEKECPFIKP EVKPGTPAQEVEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGKEMVDH FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI

【００６８】配列番号：８ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PUU Sotkamo 配列： -MSDLTDIQEDITRHEQQLIVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTLPIILKALYMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWSERIREFMEKECPFIKP EVKPGTPAQEIEMLKRNKIYFMQRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS PDNIDSPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMLEWGKEMVDH FHLGDDMDPELRGLAQALIDQKVKEISNQEPLKI

【００６９】配列番号：９ 配列の長さ：４２９ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-SR11 配列： -MATMEEIQREISAHEGQLVIARQKVKDAEKQYEKDPDDLNKRALHDRES VAASIQSKIDELKRQLADRLQQGRTSGQDRDPTGVEPGDHLKERSALSYG NTLDLNSLDIDEPTGQTADWLTIIVYLTSFVVPIILKALYMLTTRGRQTS KDNKGMRIRFKDDSSYEDVNGIRKPKHLYVSMPNAQSSMKAEEITPGRFR TAVCGLYPAQIKARNMVSPVMSVVGFLALAKDWTSRIEEWLGAPC---K- FMAESLIAGSLSGNPVNRDYIRQRQGALAGMEPKEFQALRQHSKDAGCTL VEHIESPSSIWVFAGAPDRCPPTCLFVGGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTADEKLRKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIVMFMVAWGKEAVDN FHLGDDMDPELRSLAQILIDQKVKEISNQEPMKL

【００７０】配列番号：１０ 配列の長さ：４３０ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-Tula 76M 配列： -MSQLKEIQEEITRHEQQIVIARQKLKDAEKTVEADPDDVNKNTLQSRRA AVSALEDKLAEFKRQLADLVSSQKMGEKPVDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIDEPSGQTADWFAIGQYIIGFALAIVLKALYMLSTRGRQTI KENKGTRIRFKDDSSFEEINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKADELTPGRFR TIVCGLFPAQIMHRNIISPVMGVIGFSFFVKDWPEKIEEFLIKPCPFLK- --KQGSPGKEEEFLVSNDAYLIGREKALRESHLAEIDDLVDLAASGDPTP PDSIKSPQAPWVFACAPDRCPPTCIYIAGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLEKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLFMMEWGSDIVNH FHLGDDMDPELRTLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI

【００７１】配列番号：１１ 配列の長さ：４３３ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-PUU master 配列： -MSDLTDIQEEITRHEQQLVVARQKLKDAERAVEVDPDDVNKNTLQARQQ TVSALEDKLADYKRRMADAVSRKKMDTKPTDPTGIEPDDHLKERSSLRYG NVLDVNAIDIEEPSGQTADWYTIGVYVIGFTIPIILKALYMLSTRGRQTV KENKGTRIRFKDDTSFEDINGIRRPKHLYVSMPTAQSTMKAEELTPGRFR TIVCGLFPTQIQVRNIMSPVMGVIGFSFFVKDWPERIRDFMEKECPFIKP EVKPGTPAQEIEFLKRNRVYFMTRQDVLDKNHVADIDKLIDYAASGDPTS PDDIESPNAPWVFACAPDRCPPTCIYVVGMAELGAFFSILQDMRNTIMAS KTVGTAEEKLKKKSSFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIILLYMLEWGKEMVDH FHLGDDMDPELRGLAQSLIDQKVKEISNQEPLKI

【００７２】配列番号：１２ 配列の長さ：４２８ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：P-RM-97 mexico 配列： -MSNLKELQDNITAHEQQLVTARQKLKDAEKAVEVDPDDVNKSTLQSRRA AVSALETKLGELKRQLADFVTSQKLASKPVDPTGLEPDDHLKEKSSLRYG NVLDVNSIDLEEPSGQTADWKSIGLYILSFTLPIVLKALYMLSTRGRQTV QENKGTRIRFKDDTSYEEVNGIRKPKHLYVSLPTAQSTMKADEITPGRFR TITCGLFPAQVKARNIISPVMGVIGFSFFVKDWTEKIDGFLNSDCPF--- --LPKVQGAGEKLLQTIRAYFITRQDQVMQSMLPDITDLMADAQAQGATL FSDITSPHSVWVFSCAPDRCPPTALYVAGLPELGAFFSILQDMRNTIMAS KAVGTAEEKMKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQRIIIMYMSHWGKEIVNH FHLGDDMDPELRQLAQALVDTKVKEISNQELLKL

【００７３】配列番号：１３ 配列の長さ：４２８ 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 配列の特徴：NP-HPS 配列： -MSTLKEVQDNITLHEQQLVTARQKLKDAERAVELDPDDVNKSTLQSRRA AVSALETKLGELKRELADLIAAQKLASKPVDPTGIEPDDHLKEKSSLRYG NVLDVNSIDLEEPSGQTADWKSIGLYILSFALPIILKALYMLSTRGRQTI KENKGTRIRFKDDSSYEEVNGIRKPRHLYVSMPTAQSTMKADEITPGRFR TIACGLFPAQVKARNIISPVMGVIGFSFFVKDWMERIDDFLAARCPF--- --LPEQKDPRDAALATNRAYFITRQLQVDESKVSDIEDLIADARAESATI FADIATPHSVWVFACAPDRCPPTALYVAGMPELGAFFAILQDMRNTIMAS KSVGTSEEKLKKKSAFYQSYLRRTQSMGIQLDQKIIILYMSHWGREAVNH FHLGDDMDPELRELAQTLVDIKVREISNQEPLKL

【００７４】配列番号：１４ 配列の長さ：１０３残基 配列の型 ：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 1 10 20 30 40 50 60 : : : : : : : MATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRTLTDREGVAVSIQAKIDE 70 80 90 100 : : : : LKRQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYGNVLD

【００７５】配列番号：１５ 配列の長さ：２１３残基 配列の型 ：アミノ酸配列 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 表記法 ：１文字表記法 1 10 20 30 40 50 60 : : : : : : : MKLKVTVNGTAYDVDVDVDKSHENPMGTILFGGGTGGAPAPAAGGAGAGKAGEGEIPAPL 61 70 80 90 100 110 120 : : : : : : : AGTVSKILVKEGDTVKAGQTVLVLEAMKMETEINAPTDGKVEKVLVKERDAVQGGQGLIK 130 140 150 160 170 180 190 : : : : : : : IGDLELIEGRESFRIRLMATMEELQREINAHEGQLVIARQKVRDAEKQYEKDPDELNKRT 200 210 220 230 240 250 260 : : : : : : : LTDREGVAVSIQAKIDELKRQLADRIATGKNLGKEQDPTGVEPGDHLKERSMLSYGNVLD 200 210 : : LGSGTDIRSPGAA

【００７６】配列番号：１６ 配列の長さ：３２１塩基 配列の型 ：塩基配列 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ＤＮＡ 1 10 20 30 40 50 60 . . . . . . . aattcggcttatggcaactatggaggaattacagagggaaatcaatgcccatgagggtca 70 80 90 100 110 120 . . . . . . attagtgatagccaggcagaaggtgagggatgcagaaaaacagtatgaaaaggatccaga 130 140 150 160 170 180 . . . . . . tgagttgaacaagagaacattaactgaccgagagggcgttgcagtatctatccaggcaaa 190 200 210 220 230 240 . . . . . . aattgatgagttaaaaaggcaactggcagataggattgcaactgggaaaaaccttgggaa 250 260 270 280 290 300 . . . . . . ggaacaagatccaacaggggtggagcctggagaccatctgaaagagaggtcaatgctcag 310 320 . . ttatggtaatgtgctggattt

【図面の簡単な説明】

【図１】ハンタウイルスのＳゲノムについて、遺伝子構
造と制限地図を示す図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ｃ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 1/21 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 15/02 9281−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｐ 21/02 9162−4Ｂ 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 吉松 組子 北海道札幌市北区北34条西６丁目２−６ グロウアイランド201 (72)発明者 有川 二郎 北海道札幌市豊平区平岡10条１丁目 26の 20 (72)発明者 橋本 信夫 北海道札幌市中央区宮の森３条12丁目５− １ (72)発明者 三谷 勝男 東京都日野市日野320番地の11 株式会社 エイアンドティー内

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１〜１１のいずれかのアミノ酸
   配列を有するハンタウイルス核蛋白における、Ｎ末端側
   より第１番目から第１０３番目までのペプチド、または
   該ペプチドにおいて１または複数のアミノ酸が置換、挿
   入、付加したものであって、且つハンタウイルス抗原活
   性を有するペプチドを含む抗原蛋白質。
2. 【請求項２】 抗原蛋白質が配列番号１４に示されるア
   ミノ酸配列を有するペプチドからなる請求項１に記載の
   抗原蛋白質。
3. 【請求項３】 配列番号１〜１３のいずれかのアミノ酸
   配列を有するハンタウイルス核蛋白における、Ｎ末端側
   より第１６６番目から第１７５番目までのアミノ酸配列
   を含むハンタウイルスの増殖を抑制する抗体と反応性の
   ある抗原ペプチド。
4. 【請求項４】 ＥＤＶＮＧＩＲＫＰＫおよびＥＤＩＮＧ
   ＩＲＲＰＫから選ばれる、ハンタウイルスの増殖を抑制
   する抗体と反応性のある抗原ペプチド。
5. 【請求項５】 請求項３ないし４に記載のハンタウイル
   ス抗原蛋白質と反応性のあるモノクロナール抗体。