JPH08266179A - 環境ストレス耐性植物及びその作出方法 - Google Patents
環境ストレス耐性植物及びその作出方法Info
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- JPH08266179A JPH08266179A JP7050315A JP5031595A JPH08266179A JP H08266179 A JPH08266179 A JP H08266179A JP 7050315 A JP7050315 A JP 7050315A JP 5031595 A JP5031595 A JP 5031595A JP H08266179 A JPH08266179 A JP H08266179A
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- Japan
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- choline
- plant
- cells
- gene
- glycine betaine
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 環境ストレスに対する耐性を有する植物の提
供。 【構成】 グリシンベタインの合成に関与するコリンデ
ヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロ
ゲナーゼ遺伝子を導入することにより環境ストレスに対
する耐性が増強された植物。
供。 【構成】 グリシンベタインの合成に関与するコリンデ
ヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロ
ゲナーゼ遺伝子を導入することにより環境ストレスに対
する耐性が増強された植物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、種々の環境ストレス、
例えば高浸透圧、低温、高温、乾燥等によるストレスに
対する耐性が増強された植物、及びその作出方法に関す
る。
例えば高浸透圧、低温、高温、乾燥等によるストレスに
対する耐性が増強された植物、及びその作出方法に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】自然界に存在する植物は塩ストレス、乾
燥ストレス、高温ストレス、低温ストレス等様々な環境
ストレスにさらされており、植物は進化の過程で、植物
が自生する地域の環境ストレスに対応できるような機構
を獲得し、進化してきた。一方、農業の発展と共に交配
等人工的手段によって品種改良が行われ、環境ストレス
に若干強くなった品種も作られている。しかしながら、
砂漠や塩害地ではまだ十分な対応ができていない。
燥ストレス、高温ストレス、低温ストレス等様々な環境
ストレスにさらされており、植物は進化の過程で、植物
が自生する地域の環境ストレスに対応できるような機構
を獲得し、進化してきた。一方、農業の発展と共に交配
等人工的手段によって品種改良が行われ、環境ストレス
に若干強くなった品種も作られている。しかしながら、
砂漠や塩害地ではまだ十分な対応ができていない。
【０００３】植物細胞における浸透圧調節には低分子有
機化合物の適合溶質の１種であるグリシンベタインが関
与することが知られている。グリシンベタインの生合成
においては、コリンがコリンデヒドロゲナーゼの関与の
もとにベタインアルデヒドに転換され、次にベタインア
ルデヒドがベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼの関与
のもとにグリシンベタインに転換されると考えられる。
機化合物の適合溶質の１種であるグリシンベタインが関
与することが知られている。グリシンベタインの生合成
においては、コリンがコリンデヒドロゲナーゼの関与の
もとにベタインアルデヒドに転換され、次にベタインア
ルデヒドがベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼの関与
のもとにグリシンベタインに転換されると考えられる。
【０００４】近年、遺伝子操作によって環境ストレスに
対する耐性を増強した植物を得ようとする研究が活発と
なっている。例えば、H.J.Bohnert ら、Science Vol.25
9, No.22, p508-510 (1993) は、タバコに大腸菌のマン
ニトール合成酵素を導入し、耐塩性を付与したことを報
告している。また、The Plant J.Vol.6, p749-758 (199
4)には、グリシンベタインの合成に関与する遺伝子であ
るベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の発現を
高め、植物の耐塩性を強化しようとした例が記載されて
いるが、実際にはコリンデヒドロゲナーゼの遺伝子を導
入していないので耐塩性の向上につながらなかった。
対する耐性を増強した植物を得ようとする研究が活発と
なっている。例えば、H.J.Bohnert ら、Science Vol.25
9, No.22, p508-510 (1993) は、タバコに大腸菌のマン
ニトール合成酵素を導入し、耐塩性を付与したことを報
告している。また、The Plant J.Vol.6, p749-758 (199
4)には、グリシンベタインの合成に関与する遺伝子であ
るベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子の発現を
高め、植物の耐塩性を強化しようとした例が記載されて
いるが、実際にはコリンデヒドロゲナーゼの遺伝子を導
入していないので耐塩性の向上につながらなかった。
【０００５】前記のごとく、グリシンベタインが植物の
環境ストレスの耐性に関与していることは知られている
が、いかなる遺伝子を導入すれば植物中のグリシンベタ
インを増加させることができるか、また外来性遺伝子を
人為的に導入することにより植物中のグリシンベタイン
を増加することにより該植物に環境ストレス耐性を付与
することができるか否かについては知られていない。
環境ストレスの耐性に関与していることは知られている
が、いかなる遺伝子を導入すれば植物中のグリシンベタ
インを増加させることができるか、また外来性遺伝子を
人為的に導入することにより植物中のグリシンベタイン
を増加することにより該植物に環境ストレス耐性を付与
することができるか否かについては知られていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明は、遺伝
子組換法により環境ストレス耐性を増強した植物、及び
その植物の作出方法を提供しようとするものである。
子組換法により環境ストレス耐性を増強した植物、及び
その植物の作出方法を提供しようとするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
を解決するため種々検討の結果、植物細胞の浸透圧調節
に関与すると考えられる低分子有機化合物性の適合溶質
の１種であるグリシンベタインの合成に関与するコリン
デヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒド
ロゲナーゼ遺伝子の両者を植物に導入することによりグ
リシンベタインの合成、又はその合成の増強を行うこと
ができ、それにより植物に環境ストレスに対する耐性を
付与することができることを見出し、本発明を完成し
た。
を解決するため種々検討の結果、植物細胞の浸透圧調節
に関与すると考えられる低分子有機化合物性の適合溶質
の１種であるグリシンベタインの合成に関与するコリン
デヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒド
ロゲナーゼ遺伝子の両者を植物に導入することによりグ
リシンベタインの合成、又はその合成の増強を行うこと
ができ、それにより植物に環境ストレスに対する耐性を
付与することができることを見出し、本発明を完成し
た。
【０００８】従って本発明は、グリシンベタインの合成
に関与するコリンデヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタイン
アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子を導入することによ
り環境ストレスに対する耐性が増強された植物を提供す
る。本発明はまた、上記植物の作出方法であって、植物
に、グリシンベタインの合成に関与するコリンデヒドロ
ゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロゲナー
ゼ遺伝子を導入することを特徴とする方法を提供する。
に関与するコリンデヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタイン
アルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子を導入することによ
り環境ストレスに対する耐性が増強された植物を提供す
る。本発明はまた、上記植物の作出方法であって、植物
に、グリシンベタインの合成に関与するコリンデヒドロ
ゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロゲナー
ゼ遺伝子を導入することを特徴とする方法を提供する。
【０００９】
【具体的な説明】本発明において使用するコリンデヒド
ロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロゲナ
ーゼ遺伝子の由来生物は特に限定せず、例えば生来的に
環境ストレス耐性の高い植物や微生物から得ることがで
きるが、微生物、特に細菌由来の遺伝子が好ましい。特
に、大腸菌由来の遺伝子はすでにクローニングされてお
り（Lamarkら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064, 199
1)、本発明においては具体例として大腸菌由来の遺伝子
を用いて本発明を具体的に説明する。
ロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒドロゲナ
ーゼ遺伝子の由来生物は特に限定せず、例えば生来的に
環境ストレス耐性の高い植物や微生物から得ることがで
きるが、微生物、特に細菌由来の遺伝子が好ましい。特
に、大腸菌由来の遺伝子はすでにクローニングされてお
り（Lamarkら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064, 199
1)、本発明においては具体例として大腸菌由来の遺伝子
を用いて本発明を具体的に説明する。
【００１０】しかしながら、本発明の遺伝子は植物細胞
内で発現すればよいから、大腸菌由来の遺伝子に限定さ
れない。大腸菌由来の遺伝子は、上記文献の記載に従っ
て、９kbp のＢａｍＨＩ断片として得ることができ、こ
の断片は、コリンデヒドロゲナーゼ遺伝子（ｂｅｔＡ）
及びベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子（ｂｅ
ｔＢ）を含んでいる。
内で発現すればよいから、大腸菌由来の遺伝子に限定さ
れない。大腸菌由来の遺伝子は、上記文献の記載に従っ
て、９kbp のＢａｍＨＩ断片として得ることができ、こ
の断片は、コリンデヒドロゲナーゼ遺伝子（ｂｅｔＡ）
及びベタインアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子（ｂｅ
ｔＢ）を含んでいる。
【００１１】本発明においては、植物として光合成能を
有する下等植物である淡水性らん藻シネココッカス属
（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）の１種を用いるが、グ
リシンベタインは下等植物であるらん藻類から高等植物
にわたって存在しており、植物の環境ストレスに対する
耐性に関与していると考えられるから、本発明は広くす
べての光合成植物に適用することができる。この様な植
物としては、例えば、タバコ、トウモロコシ、イネ、小
麦、大麦、トマト、ジャガイモ、大豆、ワタ等の草本植
物、さらにはユーカリ、アカシア等の木本植物等に広く
適用することが可能である。
有する下等植物である淡水性らん藻シネココッカス属
（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）の１種を用いるが、グ
リシンベタインは下等植物であるらん藻類から高等植物
にわたって存在しており、植物の環境ストレスに対する
耐性に関与していると考えられるから、本発明は広くす
べての光合成植物に適用することができる。この様な植
物としては、例えば、タバコ、トウモロコシ、イネ、小
麦、大麦、トマト、ジャガイモ、大豆、ワタ等の草本植
物、さらにはユーカリ、アカシア等の木本植物等に広く
適用することが可能である。
【００１２】前記の遺伝子を前記の植物に導入するに
は、外来遺伝子を植物細胞に導入するための常用の方
法、例えばアグロバクテリウム法、パーティクルガン法
等の方法を用いればよい。また外来遺伝子が導入された
植物細胞を植物に再生するためにも常用の組織培養によ
る方法を用いることができる。本発明の具体例において
は、大腸菌とらん藻細胞との両方において複製すること
ができるシャトルベクターに目的とする遺伝子を挿入
し、このベクターをらん藻細胞に導入する方法を用い
た。
は、外来遺伝子を植物細胞に導入するための常用の方
法、例えばアグロバクテリウム法、パーティクルガン法
等の方法を用いればよい。また外来遺伝子が導入された
植物細胞を植物に再生するためにも常用の組織培養によ
る方法を用いることができる。本発明の具体例において
は、大腸菌とらん藻細胞との両方において複製すること
ができるシャトルベクターに目的とする遺伝子を挿入
し、このベクターをらん藻細胞に導入する方法を用い
た。
【００１３】多くの植物は、グリシンベタインの生合成
能を生来的に有しており、本発明によればそれらの植物
においてグリシンベタインの生産能をさらに増強し、環
境ストレスに対する耐性を増強することができる。グリ
シンベタインの生合成能を実質的に有しない植物に本発
明を適用することができることは言うまでもない。多く
の植物は、グリシンベタインの生合成における中間原料
となるコリンの合成能を有しており、この様な植物に本
発明で用いる前記遺伝子を導入することによりコリンか
らグリシンベタインの合成を増強することができるが、
さらに、本発明で用いる遺伝子を植物細胞に導入するこ
とにより、コリンの取り込みが増加するという効果も得
られる。
能を生来的に有しており、本発明によればそれらの植物
においてグリシンベタインの生産能をさらに増強し、環
境ストレスに対する耐性を増強することができる。グリ
シンベタインの生合成能を実質的に有しない植物に本発
明を適用することができることは言うまでもない。多く
の植物は、グリシンベタインの生合成における中間原料
となるコリンの合成能を有しており、この様な植物に本
発明で用いる前記遺伝子を導入することによりコリンか
らグリシンベタインの合成を増強することができるが、
さらに、本発明で用いる遺伝子を植物細胞に導入するこ
とにより、コリンの取り込みが増加するという効果も得
られる。
【００１４】グリシンベタインは細胞等に存在し、酵素
や細胞の構造蛋白質の安定化に寄与すると考えられるか
ら、本発明の植物は、塩などによる浸透圧ストレスのみ
ならず、乾燥ストレス、低温ストレス、高温ストレス等
の多様な環境ストレスに対しても耐性を有する。
や細胞の構造蛋白質の安定化に寄与すると考えられるか
ら、本発明の植物は、塩などによる浸透圧ストレスのみ
ならず、乾燥ストレス、低温ストレス、高温ストレス等
の多様な環境ストレスに対しても耐性を有する。
【００１５】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。実施例１ シネココッカスｓｐ．ＰＣＣ７９４２への遺
伝子の導入 （１）遺伝子のクローニング 遺伝子のクローニングはAndresenら、J.Gen.Microbiol.
Vol.134, p1737-1764(1988)及びLamarkら、Mol.Microbi
ol.Vol.165, p1059-1062 (1991)に記載されている方法
に従って行った。この方法により９kb ＢａｍＨＩ Ｄ
ＮＡ断片を大腸菌（ＣＳＨ２６）から得た。
説明する。実施例１ シネココッカスｓｐ．ＰＣＣ７９４２への遺
伝子の導入 （１）遺伝子のクローニング 遺伝子のクローニングはAndresenら、J.Gen.Microbiol.
Vol.134, p1737-1764(1988)及びLamarkら、Mol.Microbi
ol.Vol.165, p1059-1062 (1991)に記載されている方法
に従って行った。この方法により９kb ＢａｍＨＩ Ｄ
ＮＡ断片を大腸菌（ＣＳＨ２６）から得た。
【００１６】このＤＮＡ断片は、図１に示すごとく、コ
リンデヒドロゲナーゼ遺伝子をコードするオープンリー
ディングフレーム（ｂｅｔＡ）、ベタインアルデヒドデ
ヒドロゲナーゼをコードするオープンリーディングフレ
ーム（ｂｅｔＢ）、及びコリンのエネルギー依存性輸送
系をコードするオープンリーディングフレーム（ｂｅｔ
Ｔ）を含有する。
リンデヒドロゲナーゼ遺伝子をコードするオープンリー
ディングフレーム（ｂｅｔＡ）、ベタインアルデヒドデ
ヒドロゲナーゼをコードするオープンリーディングフレ
ーム（ｂｅｔＢ）、及びコリンのエネルギー依存性輸送
系をコードするオープンリーディングフレーム（ｂｅｔ
Ｔ）を含有する。
【００１７】（２）発現シャトルベクターの作製 前記９kb ＢａｍＨＩ ＤＮＡ断片をプラスミドｐＵＣ
３０３−ＢｍのＢａｍＨＩ部位に挿入することによりプ
ラスミドｐＢＥＴを得た。プラスミドｐＵＣ３０３は大
腸菌／シネココッカスシャトルベクターとして市販され
ており、ｐＵＣ３０３−ＢｍはｐＵＣ３０３のＥｃｏＲ
Ｉ断片にＢａｍＨＩ断片を含む１２bpを導入したプラス
ミドである。このプラスミドｐＵＣ３０３−ＢｍのＢａ
ｍＨＩ部位に、前記プラスミドｐＢＥＴ中の９kb Ｂａ
ｍＨＩ部位を挿入することにより２０kbのプラスミドｐ
ＣＢＥＴを得た。なお、上記の遺伝子組換え操作は宿主
として大腸菌ＤＨ５αを用いて行った。
３０３−ＢｍのＢａｍＨＩ部位に挿入することによりプ
ラスミドｐＢＥＴを得た。プラスミドｐＵＣ３０３は大
腸菌／シネココッカスシャトルベクターとして市販され
ており、ｐＵＣ３０３−ＢｍはｐＵＣ３０３のＥｃｏＲ
Ｉ断片にＢａｍＨＩ断片を含む１２bpを導入したプラス
ミドである。このプラスミドｐＵＣ３０３−ＢｍのＢａ
ｍＨＩ部位に、前記プラスミドｐＢＥＴ中の９kb Ｂａ
ｍＨＩ部位を挿入することにより２０kbのプラスミドｐ
ＣＢＥＴを得た。なお、上記の遺伝子組換え操作は宿主
として大腸菌ＤＨ５αを用いて行った。
【００１８】（３）らん藻類の形質転換 らん藻の遺伝子操作で一般的に用いられているシネココ
ッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．ＰＣＣ７
９４２を２０mMのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ（pH８．０）を追
加したＢＧ１１液体培地（組成：ＮａＮＯ3 ；１．５ｇ
／ｌ，Ｋ2 ＨＰＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ；４０mg／ｌ，ＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ；７５mg／ｌ，ＣａＣｌ2・２Ｈ2 Ｏ；３
６mg／ｌ，Ｃｉｕｉｃ Ａｃｉｄ；６mg／ｌ，Ｆｅｒｒ
ｉｃ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ；６mg，ＥＤ
ＴＡ；１mg／ｌ，Ｎａ2 ＣＯ3 ；２０mg，ＭｎＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ；２．５mg，ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ；２２２μ
ｇ／ｌ，ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ；７９μｇ／ｌ，Ｈ3 Ｂ
Ｏ4 ；２．８６mg／ｌ，ＮａＭｏＯ4 ；２１μｇ／ｌ，
Ｃｏ（ＮＯ3 ）2 ・６Ｈ2 Ｏ；５００μｇ／ｌ）中で、
３０℃にて蛍光白色光の連続照射のもとで培養した。培
養したらん藻体とシャトルプラスミドｐＣＢＥＴとを混
合することにより形質転換し、ストレプトマイシン耐性
により選択した。１０μｇ／mlのストレプトマイシンの
存在下で増殖するらん藻を選択した。生成したコロニー
を、32Ｐ−標識した前記９kb ＤＮＡ断片（図１）をプ
ローブとして用いてＳｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼー
ションによりスクリーニングし、陽性クローンを選択し
た。
ッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐ．ＰＣＣ７
９４２を２０mMのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ（pH８．０）を追
加したＢＧ１１液体培地（組成：ＮａＮＯ3 ；１．５ｇ
／ｌ，Ｋ2 ＨＰＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ；４０mg／ｌ，ＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ；７５mg／ｌ，ＣａＣｌ2・２Ｈ2 Ｏ；３
６mg／ｌ，Ｃｉｕｉｃ Ａｃｉｄ；６mg／ｌ，Ｆｅｒｒ
ｉｃ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ；６mg，ＥＤ
ＴＡ；１mg／ｌ，Ｎａ2 ＣＯ3 ；２０mg，ＭｎＳＯ4 ・
７Ｈ2 Ｏ；２．５mg，ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ；２２２μ
ｇ／ｌ，ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏ；７９μｇ／ｌ，Ｈ3 Ｂ
Ｏ4 ；２．８６mg／ｌ，ＮａＭｏＯ4 ；２１μｇ／ｌ，
Ｃｏ（ＮＯ3 ）2 ・６Ｈ2 Ｏ；５００μｇ／ｌ）中で、
３０℃にて蛍光白色光の連続照射のもとで培養した。培
養したらん藻体とシャトルプラスミドｐＣＢＥＴとを混
合することにより形質転換し、ストレプトマイシン耐性
により選択した。１０μｇ／mlのストレプトマイシンの
存在下で増殖するらん藻を選択した。生成したコロニー
を、32Ｐ−標識した前記９kb ＤＮＡ断片（図１）をプ
ローブとして用いてＳｏｕｔｈｅｒｎハイブリダイゼー
ションによりスクリーニングし、陽性クローンを選択し
た。
【００１９】次に、目的とする遺伝子の発現を確認する
ため、培養したらん藻細胞から、H.Aibaら、J.Biol.Che
m.Vol.256, p11905-11910 (1981)に記載されている方法
により全ＲＮＡを抽出し、そしてYang H. ら、Nucleic
Acids Research vol.21, p3337-3338 (1993)に記載の方
法により、プローブとして32Ｐ−標識したＰｓｔＩ及び
ＢｇｌII断片（図１を参照のこと）を用いてＮｏｒｔｈ
ｅｒｎブロット分析により転写されたＲＮＡの検出を行
った。この試験においては、前記の選択された陽性クロ
ーンをＮａＣｌを含有しない培地で２日間培養し、さら
に２００mM ＮａＣｌを含有するＢＧ１１−コリン培地
で培養した後、検出を行った。
ため、培養したらん藻細胞から、H.Aibaら、J.Biol.Che
m.Vol.256, p11905-11910 (1981)に記載されている方法
により全ＲＮＡを抽出し、そしてYang H. ら、Nucleic
Acids Research vol.21, p3337-3338 (1993)に記載の方
法により、プローブとして32Ｐ−標識したＰｓｔＩ及び
ＢｇｌII断片（図１を参照のこと）を用いてＮｏｒｔｈ
ｅｒｎブロット分析により転写されたＲＮＡの検出を行
った。この試験においては、前記の選択された陽性クロ
ーンをＮａＣｌを含有しない培地で２日間培養し、さら
に２００mM ＮａＣｌを含有するＢＧ１１−コリン培地
で培養した後、検出を行った。
【００２０】図２のレーン２に示すように、本発明のら
ん藻については約９kbのＲＮＡ転写物が検出されたが、
遺伝子の挿入を行わなかったプラスミドベクターｐＵＣ
３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞については、図
２のレーン１に示すごとく、プローブとハイブリダイズ
するＲＮＡは転写されなかった。転写されたＲＮＡのサ
イズが約９kbであることから、挿入した９kb ＤＮＡ断
片が転写されたものと推定される。
ん藻については約９kbのＲＮＡ転写物が検出されたが、
遺伝子の挿入を行わなかったプラスミドベクターｐＵＣ
３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞については、図
２のレーン１に示すごとく、プローブとハイブリダイズ
するＲＮＡは転写されなかった。転写されたＲＮＡのサ
イズが約９kbであることから、挿入した９kb ＤＮＡ断
片が転写されたものと推定される。
【００２１】実施例２ 形質転換された植物の特性 （１）コリンの取り込み ベクタープラスミドｐＵＣ３０３−Ｂｍ又はプラスミド
ｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネココッカスの細胞
を、２００mM ＮａＣｌを含有するか又は含有しないＢ
Ｇ１１培地において対数増殖中期まで増殖せしめた。コ
リン輸送活性（コリンの取り込み）は２５℃にて、Lama
rkら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064 (1991)に記載
されている方法により、１０μＭ〔14Ｃ〕−コリン（５
８．５mCi ／mmol) を用いて行った。なお、コリンの非
存在下に増殖した藻体中には内因性コリンは検出されな
かった。この結果を図３に示す。
ｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネココッカスの細胞
を、２００mM ＮａＣｌを含有するか又は含有しないＢ
Ｇ１１培地において対数増殖中期まで増殖せしめた。コ
リン輸送活性（コリンの取り込み）は２５℃にて、Lama
rkら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064 (1991)に記載
されている方法により、１０μＭ〔14Ｃ〕−コリン（５
８．５mCi ／mmol) を用いて行った。なお、コリンの非
存在下に増殖した藻体中には内因性コリンは検出されな
かった。この結果を図３に示す。
【００２２】図３のＡに示すごとく、対象細胞（ｐＵＣ
３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞）及びｂｅｔ遺
伝子含有細胞（ｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞）
のいずれにおいても、非−ストレス条件下でコリンの取
込みが進行したが、初速度及び３０分後の細胞内コリン
含量はｐＣＢＥＴ担持細胞において約４０％高かった。
この差は、大腸菌中で活性なコリン輸送系（Lamark T.,
ら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064 (1991)) をコー
ドしている、ｐＣＢＥＴ中のｂｅｔＴ遺伝子が機能的に
発現した結果であろう。すべての場合において、カルボ
ニルシアニド−ｐ−トリフルオロメトキシフェニルヒド
ラゾン（ＦＣＣＰ）の５μＭの添加によりコリンの取り
込みが強く阻害され、シネココッカスにエネルギー依存
性コリン輸送系が存在することが示唆された。
３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞）及びｂｅｔ遺
伝子含有細胞（ｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞）
のいずれにおいても、非−ストレス条件下でコリンの取
込みが進行したが、初速度及び３０分後の細胞内コリン
含量はｐＣＢＥＴ担持細胞において約４０％高かった。
この差は、大腸菌中で活性なコリン輸送系（Lamark T.,
ら、Mol.Microbiol.Vol.5, p1049-1064 (1991)) をコー
ドしている、ｐＣＢＥＴ中のｂｅｔＴ遺伝子が機能的に
発現した結果であろう。すべての場合において、カルボ
ニルシアニド−ｐ−トリフルオロメトキシフェニルヒド
ラゾン（ＦＣＣＰ）の５μＭの添加によりコリンの取り
込みが強く阻害され、シネココッカスにエネルギー依存
性コリン輸送系が存在することが示唆された。
【００２３】なお、図３中で、中空円はｐＵＣ３０３−
Ｂｍで形質転換された細胞をＦＣＣＰの非存在下で培養
した場合の結果を示し、中空四角はｐＣＢＥＴにより形
質転換された細胞をＦＣＣＰの非存在下で培養した場合
の結果を示し、黒円はｐＵＣ３０３−Ｂｍで形質転換さ
れた細胞をＦＣＣＰの存在下で培養した場合の結果を示
し、そして黒四角はｐＣＢＥＴにより形質転換された細
胞をＦＣＣＰの存在下で培養した場合の結果を示す。
Ｂｍで形質転換された細胞をＦＣＣＰの非存在下で培養
した場合の結果を示し、中空四角はｐＣＢＥＴにより形
質転換された細胞をＦＣＣＰの非存在下で培養した場合
の結果を示し、黒円はｐＵＣ３０３−Ｂｍで形質転換さ
れた細胞をＦＣＣＰの存在下で培養した場合の結果を示
し、そして黒四角はｐＣＢＥＴにより形質転換された細
胞をＦＣＣＰの存在下で培養した場合の結果を示す。
【００２４】図３のＢに示すように、塩ストレス条件下
では、コリンはｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネコ
コッカスによってのみ取り込まれた。これは、シネココ
ッカスの原形質膜に存在するエネルギー依存性コリン輸
送系が培地中の高濃度の存在によって変化し、他方グリ
シンベタインの合成が膜を安定化し高温濃度条件下でコ
リンの輸送を可能にしたためと予想される。この場合、
グリシンベタイン合成におけるコリンの使用によって、
ｂｅｔ遺伝子含有細胞中での輸送系のコリンによるフィ
ードバック抑制が解除されたためかも知れない。
では、コリンはｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネコ
コッカスによってのみ取り込まれた。これは、シネココ
ッカスの原形質膜に存在するエネルギー依存性コリン輸
送系が培地中の高濃度の存在によって変化し、他方グリ
シンベタインの合成が膜を安定化し高温濃度条件下でコ
リンの輸送を可能にしたためと予想される。この場合、
グリシンベタイン合成におけるコリンの使用によって、
ｂｅｔ遺伝子含有細胞中での輸送系のコリンによるフィ
ードバック抑制が解除されたためかも知れない。
【００２５】（２）グリシンベタインの生産 形質転換されていないシネココッカスｓｐ．ＰＣＣ７９
４２中にはコリンデヒドロゲナーゼ及びベタインアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼの両酵素活性は検出されず、そし
て塩条件下でグリシンベタインは全く蓄積しなかった。
１mMより高濃度のコリンの添加によってシネココッカス
ｓｐ．ＰＣＣ７９４２細胞の増殖は非ストレス条件下及
びストレス条件下で阻害されたので、ｐＣＢＥＴで形質
転換された細胞でのグリシンベタインの生産のために１
００μＭのコリンを加えた。
４２中にはコリンデヒドロゲナーゼ及びベタインアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼの両酵素活性は検出されず、そし
て塩条件下でグリシンベタインは全く蓄積しなかった。
１mMより高濃度のコリンの添加によってシネココッカス
ｓｐ．ＰＣＣ７９４２細胞の増殖は非ストレス条件下及
びストレス条件下で阻害されたので、ｐＣＢＥＴで形質
転換された細胞でのグリシンベタインの生産のために１
００μＭのコリンを加えた。
【００２６】このレベルのコリンは、種々の条件下で対
象細胞の増殖に影響を与えなかった。１００μＭのコリ
ンを含有するＢＧ１１培地（ＢＧ１１−コリン培地）中
で２日間（対数期中期まで）増殖したシネココッカスの
細胞を、種々のＮａＣｌ濃度を有するＢＧ１１−コリン
培地に移した。３日間のインキュベーションの後、第四
アンモニウム化合物を１Ｎ Ｈ2 ＳＯ4 により細胞から
抽出し、そしてその過ヨウ素酸塩として沈澱させた（Wa
ll, JSら、Anal.Chem.Vol.32, p870-847 (1960) を参照
のこと）。ペレットを、内部標準としての６００μＬの
ｔ−ブタノール含有Ｄ2 Ｏに溶解した。
象細胞の増殖に影響を与えなかった。１００μＭのコリ
ンを含有するＢＧ１１培地（ＢＧ１１−コリン培地）中
で２日間（対数期中期まで）増殖したシネココッカスの
細胞を、種々のＮａＣｌ濃度を有するＢＧ１１−コリン
培地に移した。３日間のインキュベーションの後、第四
アンモニウム化合物を１Ｎ Ｈ2 ＳＯ4 により細胞から
抽出し、そしてその過ヨウ素酸塩として沈澱させた（Wa
ll, JSら、Anal.Chem.Vol.32, p870-847 (1960) を参照
のこと）。ペレットを、内部標準としての６００μＬの
ｔ−ブタノール含有Ｄ2 Ｏに溶解した。
【００２７】第四アンモニウム化合物の分析を、 1Ｈ
ＮＭＲスペクトル法によりＪＥＯＬＪＭＮ−５００フー
リエ交換ＮＭＲ計を用いて行った。細胞の体積はBlumwa
ldE. ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.80, p2599-2602
(1983)に記載されている方法により測定した。濃縮さ
れた細胞を、膜不透過性常磁性消去剤Ｎａ3 Ｆｅ（Ｃ
Ｎ）6 （２０mM）及びＮａ2 Ｍｎ ＥＤＴＡ（７５mM）
の存在下で１mMの自由に透過するニトロキサイドスピン
プローブＴＨＭＰＯＮＥ（２，２，６，６−テトラメチ
ルピペリドン−Ｎ−オキシル）により処理し、細胞内ス
ピンプローブのＥＳＲシグナルを励起した。細胞体積は
また、 3Ｈ2 Ｏ及び〔14Ｃ〕−ソルビトールを用いて、
Incharoensakidi A.ら、Plant Cell Physiol.Vol.29, p
1073-1075 (1988)の方法によっても測定した。
ＮＭＲスペクトル法によりＪＥＯＬＪＭＮ−５００フー
リエ交換ＮＭＲ計を用いて行った。細胞の体積はBlumwa
ldE. ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.80, p2599-2602
(1983)に記載されている方法により測定した。濃縮さ
れた細胞を、膜不透過性常磁性消去剤Ｎａ3 Ｆｅ（Ｃ
Ｎ）6 （２０mM）及びＮａ2 Ｍｎ ＥＤＴＡ（７５mM）
の存在下で１mMの自由に透過するニトロキサイドスピン
プローブＴＨＭＰＯＮＥ（２，２，６，６−テトラメチ
ルピペリドン−Ｎ−オキシル）により処理し、細胞内ス
ピンプローブのＥＳＲシグナルを励起した。細胞体積は
また、 3Ｈ2 Ｏ及び〔14Ｃ〕−ソルビトールを用いて、
Incharoensakidi A.ら、Plant Cell Physiol.Vol.29, p
1073-1075 (1988)の方法によっても測定した。
【００２８】結果を図４に示す。図４においてＡは対象
（ｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞）から
の四級アンモニウム化合物の 1Ｈ ＮＭＲスペクトルを
示し、βはｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞からの
それを示す。ピークｂ及びｃがそれぞれベタイン及びコ
リンを示す。図４から明らかなようにｐＣＢＥＴにより
形質転換された細胞のみがグリシンベタインを合成しそ
して蓄積した。
（ｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換された細胞）から
の四級アンモニウム化合物の 1Ｈ ＮＭＲスペクトルを
示し、βはｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞からの
それを示す。ピークｂ及びｃがそれぞれベタイン及びコ
リンを示す。図４から明らかなようにｐＣＢＥＴにより
形質転換された細胞のみがグリシンベタインを合成しそ
して蓄積した。
【００２９】これらの細胞中のグリシンベタインのレベ
ルは培地中の塩濃度により変化し、表１に示すように、
非ストレス条件下での約３mMから、ＮａＣｌ濃度３７５
mMでの４５mMにわたった。これらのレベルのグリシンベ
タインは種々の細胞機能に十分な保護効果を与える（Ge
rard H. ら、Plant Cell Physiol.Vol 29, p1073-1075
(1991)、及びRhodes D. ら、Annu.Rev.Plant Physiol.P
lant Mol.Biol.Vol.44, p357-384 (1993) を参照のこ
と）。
ルは培地中の塩濃度により変化し、表１に示すように、
非ストレス条件下での約３mMから、ＮａＣｌ濃度３７５
mMでの４５mMにわたった。これらのレベルのグリシンベ
タインは種々の細胞機能に十分な保護効果を与える（Ge
rard H. ら、Plant Cell Physiol.Vol 29, p1073-1075
(1991)、及びRhodes D. ら、Annu.Rev.Plant Physiol.P
lant Mol.Biol.Vol.44, p357-384 (1993) を参照のこ
と）。
【００３０】
【表１】
【００３１】（３）光合成活性 ＢＧ１１−コリン培地中で２日間（対数増殖期中期）増
殖した細胞を、２００mM ＮａＣｌを添加したＢＧ１１
−コリン培地に移し、そして４日間培養を続けた。これ
らの細胞の光合成活性は低かったので、ＮａＣｌを含有
しない新鮮なＢＧ１１−コリン培地に１日間移した後、
光合成による酸素の発生並びにＰＳＩ（光化学系Ｉ）及
びＰＳII（光化学系II）を、Ｃｌａｒｋ−タイプ酸素電
極中で測定した。
殖した細胞を、２００mM ＮａＣｌを添加したＢＧ１１
−コリン培地に移し、そして４日間培養を続けた。これ
らの細胞の光合成活性は低かったので、ＮａＣｌを含有
しない新鮮なＢＧ１１−コリン培地に１日間移した後、
光合成による酸素の発生並びにＰＳＩ（光化学系Ｉ）及
びＰＳII（光化学系II）を、Ｃｌａｒｋ−タイプ酸素電
極中で測定した。
【００３２】反応媒体は１００μＭのＤＣＭＵ（３−
（３，４−ジクロロフェニル）−ジメチル尿素）、１mM
のアスコルビン酸ナトリウム、５００μＭのＤＡＤ
（２，３，５，６−テトラメチル−β−フェニレンジア
ミン）、及びＰＳＩ電子輸送活性の測定のためには４０
０μＭのＭＶ（メチルビオローゲン）又はＰＳII電子輸
送活性の測定のためには１mMのＰＢＱ（フェニル−１，
４−ベンゾキノン）を含有していた。光合成活性はま
た、細胞を２００mM ＮａＣｌの存在下での浸透圧スト
レスにかけた直後にも測定した。
（３，４−ジクロロフェニル）−ジメチル尿素）、１mM
のアスコルビン酸ナトリウム、５００μＭのＤＡＤ
（２，３，５，６−テトラメチル−β−フェニレンジア
ミン）、及びＰＳＩ電子輸送活性の測定のためには４０
０μＭのＭＶ（メチルビオローゲン）又はＰＳII電子輸
送活性の測定のためには１mMのＰＢＱ（フェニル−１，
４−ベンゾキノン）を含有していた。光合成活性はま
た、細胞を２００mM ＮａＣｌの存在下での浸透圧スト
レスにかけた直後にも測定した。
【００３３】シネココッカスは４００mMという高濃度で
ＮａＣｌを含有する培地中で増殖することができるが、
３００mMのＮａＣｌの存在下で４日間の増殖の後細胞は
淡黄色に変色した。この効果はｐＣＢＥＴにより形質転
換された細胞においては観察されず、緑色のままであっ
た。この結果を白黒写真として図６に示す。図６におい
て、右側はｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネココッ
カスの培養物の写真であり、左側は対照培養物の写真で
ある。
ＮａＣｌを含有する培地中で増殖することができるが、
３００mMのＮａＣｌの存在下で４日間の増殖の後細胞は
淡黄色に変色した。この効果はｐＣＢＥＴにより形質転
換された細胞においては観察されず、緑色のままであっ
た。この結果を白黒写真として図６に示す。図６におい
て、右側はｐＣＢＥＴにより形質転換されたシネココッ
カスの培養物の写真であり、左側は対照培養物の写真で
ある。
【００３４】予想通り、ｐＣＢＥＴにより形質転換され
た細胞に比べてｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換され
た細胞において、吸収スペクトルは、フィコビリゾーム
（Ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｓｏｍｅ）〔Ｃ−フィコシアニン
（λ６２０−６３０nm）〕及びクロロフィル含量の劇的
な低下を示した（データーは示さず）。光合成によるＯ
2 の発生並びにＰＳＩ及びＰＳIIに関連する活性のいず
れもが、ｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換された対照
細胞に比べてｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞にお
いて高かった。この結果を表２に示す。なお、表２の値
は３回の測定値の平均であり、その標準誤差は５％以内
であった。
た細胞に比べてｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換され
た細胞において、吸収スペクトルは、フィコビリゾーム
（Ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｓｏｍｅ）〔Ｃ−フィコシアニン
（λ６２０−６３０nm）〕及びクロロフィル含量の劇的
な低下を示した（データーは示さず）。光合成によるＯ
2 の発生並びにＰＳＩ及びＰＳIIに関連する活性のいず
れもが、ｐＵＣ３０３−Ｂｍにより形質転換された対照
細胞に比べてｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞にお
いて高かった。この結果を表２に示す。なお、表２の値
は３回の測定値の平均であり、その標準誤差は５％以内
であった。
【００３５】
【表２】
【００３６】下記の表３は、非ストレス条件下で増殖し
た細胞を高塩濃度条件（２００mMＮａＣｌ）に移した後
に得られた光合成活性を示す。いずれの測定値も（特に
ＰＳＩのそれは）、対照細胞においては、塩ストレス非
存在下において得られた値に比べてほとんど瞬間的に低
下した。この低下は、ｐＣＢＥＴにより形質転換された
細胞においては顕著でなかった。なお表３の値は３回の
測定値の平均であり、その標準誤差は５％以内であっ
た。
た細胞を高塩濃度条件（２００mMＮａＣｌ）に移した後
に得られた光合成活性を示す。いずれの測定値も（特に
ＰＳＩのそれは）、対照細胞においては、塩ストレス非
存在下において得られた値に比べてほとんど瞬間的に低
下した。この低下は、ｐＣＢＥＴにより形質転換された
細胞においては顕著でなかった。なお表３の値は３回の
測定値の平均であり、その標準誤差は５％以内であっ
た。
【００３７】
【表３】
【００３８】これらの観察結果が示すところによれば、
グリシンベタインの生産が、塩ストレス条件下でフィコ
ビリゾーム及びＰＳ複合体に対して安定化効果をもたら
す。
グリシンベタインの生産が、塩ストレス条件下でフィコ
ビリゾーム及びＰＳ複合体に対して安定化効果をもたら
す。
【００３９】（４）塩ストレス条件下での増殖 ｐＵＣ３０３−Ｂｍで形質転換された細胞（対照）及び
ｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞をＢＧ１１−コリ
ン培地中で２日間増殖させた後、種々のＮａＣｌ濃度の
ＢＧ１１−コリン培地中で増殖せしめた。対照細胞及び
ｐＣＢＥＴで形質転換された細胞のいずれも０．３Ｍ
ＮａＣｌまでほとんど同じ増殖速度を示した。しかしな
がら、０．３Ｍより高いＮａＣｌ濃度において、ｐＣＢ
ＥＴで形質転換された細胞は対照細胞に比べて増殖速度
が高かった（図５のＢ及びＣ）。図５中、ＡはＮａＣｌ
濃度０．１Ｍ、Ｂは０．３７５Ｍ、Ｃは０．４Ｍの結果
を示す。総合的な結果が示すところによれば、プラスミ
ドｐＣＢＥＴ中に存在するｂｅｔ遺伝子はシネココッカ
ス細胞中で発現され、そして機能的蛋白質が生成した。
さらに、細胞により生産されたグリシンベタインは、塩
ストレス条件下でシネココッカス細胞に一般的に有利な
効果を生じさせた。
ｐＣＢＥＴにより形質転換された細胞をＢＧ１１−コリ
ン培地中で２日間増殖させた後、種々のＮａＣｌ濃度の
ＢＧ１１−コリン培地中で増殖せしめた。対照細胞及び
ｐＣＢＥＴで形質転換された細胞のいずれも０．３Ｍ
ＮａＣｌまでほとんど同じ増殖速度を示した。しかしな
がら、０．３Ｍより高いＮａＣｌ濃度において、ｐＣＢ
ＥＴで形質転換された細胞は対照細胞に比べて増殖速度
が高かった（図５のＢ及びＣ）。図５中、ＡはＮａＣｌ
濃度０．１Ｍ、Ｂは０．３７５Ｍ、Ｃは０．４Ｍの結果
を示す。総合的な結果が示すところによれば、プラスミ
ドｐＣＢＥＴ中に存在するｂｅｔ遺伝子はシネココッカ
ス細胞中で発現され、そして機能的蛋白質が生成した。
さらに、細胞により生産されたグリシンベタインは、塩
ストレス条件下でシネココッカス細胞に一般的に有利な
効果を生じさせた。
【図１】図１は本発明において用いる遺伝子群の配置を
示す図である。
示す図である。
【図２】図２は、シネココッカスに導入された遺伝子か
ら転写された約９kbのｍＲＮＡをＮｏｒｔｈｅｒｎブロ
ット法により検出した電気泳動図であって図面代用写真
である。
ら転写された約９kbのｍＲＮＡをＮｏｒｔｈｅｒｎブロ
ット法により検出した電気泳動図であって図面代用写真
である。
【図３】図３は、種々の条件でのコリンの取り込みを示
すグラフである。
すグラフである。
【図４】図４は、形質転換された細胞中にグリシンベタ
イン（ｂ）が生成したことを示すＮＭＲスペクトル図で
ある。
イン（ｂ）が生成したことを示すＮＭＲスペクトル図で
ある。
【図５】図５は種々のＮａＣｌ濃度でのシネココッカス
の増殖を示すグラフである。
の増殖を示すグラフである。
【図６】図６において、右側はｐＣＢＥＴにより形質転
換されたシネココッカスの培養物の写真であり、左側は
対照培養物の写真である。いずれも生物の形態を表わす
図面代用写真である。
換されたシネココッカスの培養物の写真であり、左側は
対照培養物の写真である。いずれも生物の形態を表わす
図面代用写真である。
Claims (2)
- 【請求項１】 グリシンベタインの合成に関与するコリ
ンデヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒ
ドロゲナーゼ遺伝子を導入することにより環境ストレス
に対する耐性が増強されている植物。 - 【請求項２】 請求項１に記載の植物の作出方法であっ
て、植物に、グリシンベタインの合成に関与するコリン
デヒドロゲナーゼ遺伝子及びベタインアルデヒドデヒド
ロゲナーゼ遺伝子を導入することを特徴とする方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05031595A JP3144260B2 (ja) | 1995-02-01 | 1995-02-16 | 環境ストレス耐性植物及びその作出方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3469495 | 1995-02-01 | ||
| JP7-34694 | 1995-02-01 | ||
| JP05031595A JP3144260B2 (ja) | 1995-02-01 | 1995-02-16 | 環境ストレス耐性植物及びその作出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08266179A true JPH08266179A (ja) | 1996-10-15 |
| JP3144260B2 JP3144260B2 (ja) | 2001-03-12 |
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ID=26373536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05031595A Expired - Fee Related JP3144260B2 (ja) | 1995-02-01 | 1995-02-16 | 環境ストレス耐性植物及びその作出方法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP3144260B2 (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997026365A3 (en) * | 1996-01-19 | 1997-09-12 | Dekalb Genetic Corp | Transgenic maize with increased mannitol content |
| WO1998026081A1 (en) * | 1996-12-09 | 1998-06-18 | Buelow Leif | Transgenic plants having increased freezing and choline tolerance |
| EP0891702A4 (ja) * | 1995-12-28 | 1999-02-10 | ||
| WO1999037786A3 (en) * | 1998-01-22 | 1999-10-28 | Ca Nat Research Council | Methods and compositions for modifying levels of secondary metabolic compounds in plants |
| WO2003097827A1 (fr) * | 2002-04-05 | 2003-11-27 | Institute Of Botany | Procede de culture de plans de tomates halophiles |
| CN1307312C (zh) * | 2004-05-25 | 2007-03-28 | 山东省林业科学研究院 | 四倍体刺槐转基因及组培快繁方法 |
| US7279619B2 (en) | 1998-01-22 | 2007-10-09 | National Research Council Of Canada | Methods and compositions for modifying levels of secondary metabolic compounds in plants |
| WO2011052169A1 (en) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene capable of imparting environmental stress resistance to plants and method for utilizing the same |
| JP2012029679A (ja) * | 2011-04-20 | 2012-02-16 | Asahi Kasei Chemicals Corp | 適合溶質の製造方法 |
| KR101325960B1 (ko) * | 2012-04-03 | 2013-11-07 | 강원대학교산학협력단 | 식물의 고온 스트레스 내성을 증가시키는 벼 유래의 ＯｓＨＣＩ１ 유전자 및 이의 용도 |
| US8822758B2 (en) | 2008-09-25 | 2014-09-02 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene capable of increasing the production of plant biomass and method for using the same |
| US9297020B2 (en) | 2008-11-11 | 2016-03-29 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene for increasing the production of plant biomass and method of use thereof |
-
1995
- 1995-02-16 JP JP05031595A patent/JP3144260B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0891702A4 (ja) * | 1995-12-28 | 1999-02-10 | ||
| WO1997026365A3 (en) * | 1996-01-19 | 1997-09-12 | Dekalb Genetic Corp | Transgenic maize with increased mannitol content |
| WO1998026081A1 (en) * | 1996-12-09 | 1998-06-18 | Buelow Leif | Transgenic plants having increased freezing and choline tolerance |
| US7279619B2 (en) | 1998-01-22 | 2007-10-09 | National Research Council Of Canada | Methods and compositions for modifying levels of secondary metabolic compounds in plants |
| WO1999037786A3 (en) * | 1998-01-22 | 1999-10-28 | Ca Nat Research Council | Methods and compositions for modifying levels of secondary metabolic compounds in plants |
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| WO2003097827A1 (fr) * | 2002-04-05 | 2003-11-27 | Institute Of Botany | Procede de culture de plans de tomates halophiles |
| CN1307312C (zh) * | 2004-05-25 | 2007-03-28 | 山东省林业科学研究院 | 四倍体刺槐转基因及组培快繁方法 |
| US8822758B2 (en) | 2008-09-25 | 2014-09-02 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene capable of increasing the production of plant biomass and method for using the same |
| US9297020B2 (en) | 2008-11-11 | 2016-03-29 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene for increasing the production of plant biomass and method of use thereof |
| WO2011052169A1 (en) | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Toyota Jidosha Kabushiki Kaisha | Gene capable of imparting environmental stress resistance to plants and method for utilizing the same |
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| JP2012029679A (ja) * | 2011-04-20 | 2012-02-16 | Asahi Kasei Chemicals Corp | 適合溶質の製造方法 |
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