JPH0823959A - 細菌検出器具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 試料中の細菌数を迅速、簡便に測定しうる細
菌検出器具を提供する。 【構成】 上部に開口１、底部に吸引手段との接続口２
及び、外周面に上下方向に伸びる突起部を有すると共
に、内部に吸水材４の置かれた略円筒状の基体部Ａと、
上下に貫通する複数の管状部５と、上面の周辺部が低く
形成されて丘状の隆起が複数設けられ、且少なくとも管
状部５の上面を覆うように疎水性フィルターを装着して
いる細菌捕集・検出部Ｂと、上面に複数のロート状の導
入孔８が円周状に設けられ、前記複数の導入孔８の隣り
の導入孔８との間に第２の導入孔８′が設けられ、裏面
の周辺部に前記丘状の隆起に対応する丘状の隆起が複数
設けられ、側面のスカート部１０の内面が順次厚肉部と
薄肉部に形成されており、導入孔８にプレフィルターが
装着されている細菌試料導入部Ｃとから構成される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、専門的な技術や知識を
必要とすることなく、試料中の細菌数を迅速、かつ、簡
便に測定しうる細菌検出器具に関する。本発明は、尿中
の細菌が問題となる診断分野をはじめ、金属加工分野、
腐敗が問題となる染料分野，食品分野、河川，温泉，冷
却水などの環境分野など、広汎な分野において有効に利
用することができる。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来よ
り、尿検査分野などでは、炎症の発見や病状を推定する
ために、尿等の試料中の細菌数等の測定が行なわれてい
る。例えば、尿中の細菌が増殖した場合、細菌尿症と診
断され、尿路感染症が暗示される。従って、早期治療や
薬投与のため、細菌数の測定を行なっている。このよう
な場合の細菌数の測定は、大部分の試料については平板
培養法により行なわれ、多くは市販キットを用いて実施
されている。より具体的には、例えば所定量の試料を寒
天平板培地などの上で３７℃程度で２４時間程度培養し
て、生成するコロニー数を求め、該コロニー数から細菌
数を測定することにより行なわれている。さらに、特に
重要と思われる尿細菌については、種々の市販のキット
を用いて病原菌の同定が行なわれているのが現状であ
る。しかしながら、これらの方法では、医者が患者の尿
を採取しても、検査結果が判るのは翌日である。したが
って、検査結果を待つことにより処置が遅れ、病状が悪
化したりするなど、病状に合わせた迅速、かつ、適切な
緊急処置ができないという問題がある。さらに、患者は
即日に治療が受けられず、時間的或いは経済的負担も大
きい。また、これらの方法では、特殊な技術や専門知識
が必要であり、培養設備のないところでは測定できない
などの問題点がある。

【０００３】また、尿中の細菌を迅速簡便に検出する方
法として、亜硝酸塩試験法、カタラーゼ試験法、微量尿
糖試験法（いずれも「尿検査マニュアル」、吉沢一太
著、医歯薬出版、１９９１年発行）が知られている。ま
ず亜硝酸塩試験法は、濾紙により細菌を検出するもので
あり、尿中の硝酸塩がある種の細菌により還元されて亜
硝酸塩になることを利用したものであって、この亜硝酸
塩をグリース反応により検出する方法である。しかしな
がら、亜硝酸塩試験法は、硝酸塩還元活性のない菌を検
出することができないという欠点がある。次に、カタラ
ーゼ試験法は試薬が不安定で、特異性が低いという問題
がある。さらに、微量尿糖試験法では、緑膿菌、変形菌
が反応しないなどの問題点がある。

【０００４】このため、負に帯電したフィルターを用い
て細菌を検出する方法が提案されている（特開平１−１
２４７６７号公報) 。この方法は、尿を希塩酸溶液等の
強酸で希釈した後、負に帯電したフィルターに（滴下）
吸着し、次いでサフラニンを滴下して染色し、染色後、
希塩酸溶液を滴下して一次洗浄し、次いで希塩酸溶液を
滴下して二次洗浄し、色の強弱により判定するものであ
る。しかしながら、この方法ではフィルターに微生物を
吸着させる際、ｐＨ１〜３の強酸による前処理操作が必
要であると共に、希塩酸等の強酸が測定者の皮膚に触れ
ないように注意する必要があり、さらに、過剰な自由色
素を除去するために、二次にわたる洗浄操作を必要とす
るなど、操作が極めて煩雑であるという欠点がある。な
お、この方法は、白血球などの動物細胞も吸着し、染色
されるので、細菌特有の検出法とは言えないものであ
る。

【０００５】さらに、尿などをＥＤＴＡ存在下で、正に
帯電した孔径０．６５μｍの半透膜のエポキシ−ガラス
繊維フィルターに吸着させ、次いでサフラニン染色し、
しかる後、ｐＨ２．７〜４．０の洗浄剤で洗浄し、フィ
ルターに吸着された細菌の色の強弱により微生物の生菌
数を測定する方法が提案されている（特公昭５６−３８
１９６号公報、米国特許第4,336,337 号明細書) 。しか
しながら、この方法の場合、染色にキレート剤の添加が
不可欠である。しかも、この方法の場合、過剰な色素の
除去に、真空ポンプまたは吸引する設備が必要であり、
装置が大掛かりとなると共に、使用する場所が限定され
てしまうという欠点があった。すなわち、この方法は、
設備の整った大病院でのみ実施が可能であり、我が国で
大多数を占める小規模な病院或いは診療所では、実際上
実施することが困難であった。なお、この方法も、白血
球などの動物細胞も吸着し、染色されるので、細菌特有
の検出法とは言えないものである。

【０００６】本出願人は、このような従来の欠点を解消
するものとして、微生物を疎水性フィルター上に捕集
し、次いで染色し、微生物の着色度から試料中の微生物
菌数を測定する方法を既に提案している（特開平４−２
１８３９２号公報) 。この方法によれば、熟練した技術
や専門的な知識、特別な設備などを必要とせず、しかも
迅速、かつ、簡便に試料中の微生物菌数を測定すること
が可能となった。しかし、実際使用してみると、若干着
色度が低く、判定に時間を要するという問題があった。
また、実際上、熟練した技術や専門的な知識、特別な設
備などを必要とせず、しかも迅速、かつ、簡便に試料中
の微生物菌数を測定しうる細菌検出器具自体が強く要望
されていた。

【０００７】本発明は、このような従来の欠点を解消
し、特別な設備や専門的な知識・技術を必要とせず、し
かも迅速（３０秒以内に）、かつ、簡便に、試料中の細
菌数を測定しうる細菌検出器具を提供することを目的と
するものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】すなわち本発明は、上部
に開口１を有し、底部に吸引手段との接続口２を有し、
かつ外周面に上下方向に伸びる複数の突起部３を有する
と共に、内部に吸水材４の置かれた略円筒状の基体部Ａ
と、上下に貫通する複数の管状部５を有すると共に、上
面の周辺部が一段低く形成されて丘状の隆起６が複数設
けられており、かつ少なくとも前記管状部５の上面を覆
うように疎水性フィルター７を装着している細菌捕集・
検出部Ｂと、上面に複数のロート状の導入孔８が円周状
に設けられていると共に、前記複数の導入孔８の隣りの
導入孔８との間の円周上の中間位置に、第２の導入孔
８’が設けられ、裏面の周辺部に前記丘状の隆起６に対
応する丘状の隆起９が複数設けられ、側面のスカート部
１０の内面が順次厚肉部１１と薄肉部１２に形成されて
おり、かつ前記導入孔８にプレフィルター１３が装着さ
れている細菌試料導入部Ｃとからなり、前記基体部Ａの
上に前記細菌捕集・検出部Ｂが、前記細菌捕集・検出部
Ｂの上に前記細菌試料導入部Ｃが順次結合しうるように
され、かつ前記管状部４と導入孔７とが上下方向に一直
線状となるように配置されていると共に、前記細菌試料
導入部Ｃが前記基体部Ａに対して左右方向に回転可能と
されていることを特徴とする細菌検出器具を提供するも
のである。

【０００９】以下、本発明の細菌検出器具を図面により
説明する。第１図は、本発明の細菌検出器具の一態様を
示す斜視図であり、この状態はプレフィルターを取り除
く前の状態を示しており、第２図は第１図の状態のもの
を右回りに６０度回してプレフィルターを取り除いた状
態を示す斜視図である。また、第３図は第１図に示す本
発明の細菌検出器具を分解した状態を示す斜視図であ
る。次に、第４図は第１図における基体部Ａの平面図で
あり、第５図はそのＩ−Ｉ線断面図である。また、第６
図は第１図における細菌捕集・検出部Ｂの平面図であ
り、第７図はそのＩＩ−ＩＩ線縦断面図である。さら
に、第８図は第１図における細菌試料導入部Ｃの表面平
面図であり、第９図は第１図における細菌試料導入部Ｃ
の裏面平面図であり、第１０図は第８図のＩＩＩ−ＩＩ
Ｉ線断面図である。次に、第１１図は第１図に示す本発
明の細菌検出器具の断面説明図であり、第１２図は第１
図の状態のものを左回りに６０度回してプレフィルター
を取り除いた状態を示す平面図であり、第２図と同様の
状態のものである。また、第１３図は、本発明の細菌検
出器具と組み合わせ得る支持部Ｄの一態様を示す平面図
であり、第１４図は第１３図の正面図である。最後に、
第１５図は本発明の細菌検出器具の裏面図である。

【００１０】本発明の細菌検出器具は、基本的に基体部
Ａと、細菌捕集・検出部Ｂと、細菌試料導入部Ｃとから
なるものである。

【００１１】まず基体部Ａは、第４図，第５図などに示
すように、上部に開口１を有し、底部に吸引手段との接
続口２を有し、かつ外周面に上下方向に伸びる複数の突
起部３を有すると共に、内部に吸水材４の置かれた略円
筒状のものである。突起部３は通常は、等間隔に数箇所
（図では３箇所）設けておくとよい。この突起部３は、
基体部Ａが、後述する細菌試料導入部Ｃの厚肉部１１と
これに隣合う薄肉部１２との間の角度の分だけ左右に回
転するときのストッパーの役割を果たしている。第１５
図から明らかなように、基体部Ａの外寸は、細菌試料導
入部Ｃの内寸より若干小さいものとされているが、この
突起部３の存在により左右に回転させた場合、両者の左
右への回転が抑えられることになる。

【００１２】また、接続口２は、必要に応じて別途用意
するパイプなどの接続部品１４を介して吸引手段（例え
ば吸引ポンプ、注射器など）と接続される。この接続口
２は第４図，第５図などに示すように、基体部Ａの底部
中央から上へ向かって直立するように設けられている。
その高さは特に制限はないが、通常は基体部Ａの高さの
半分程度の高さとする。なお、接続部品１４の内部自体
或いは接続部品１４の先に連結したミスト吸着材充填用
容器１５には、布，綿，ポリエチレン製のミスト吸着材
などからなるミスト吸着材１６を内装しておくことが、
細菌汚染を考慮した点で好ましい。第１１図や第１４図
では、接続部品１４の先にミスト吸着材充填用容器１５
を接続し、この末端に別途用意した吸引ポンプ等の吸引
手段を接続するものとしている。なお、吸水材４として
は、濾紙，ガーゼ，脱脂綿，不織布などを用いればよ
い。

【００１３】なお、基体部Ａの下部には、安定性を確保
したり、或いは後述する支持部Ｄと結合するために、底
面に支持部１７を設けておくことが好ましい。さらに、
複数の細菌検出器具（基体部Ａと細菌捕集・検出部Ｂと
細菌試料導入部とからなる狭義の意味の細菌検出器具）
を装着するために、支持部Ｄを組み合わせることが好ま
しい（この支持部Ｄを組み合わせたものを、広義の意味
の細菌検出器具と呼び、本発明においては、特に狭義の
細菌検出器具と説明しない限りは、この広義の意味のも
のを指す。）。支持部Ｄには、第１１図、第１３図、第
１４図に示すように、基体部Ａ底面（下側）の支持部１
７に嵌合する支持孔１８が設けられており、また接続部
品１４を介して基体部Ａ底部に穿設されている吸引手段
との接続口２に結合しうる接続孔１９が穿設されてい
る。これら支持孔１８と接続孔１９を複数個の細菌検出
器具（狭義の意味のもの）の分だけ設けることにより、
一度に２個以上の細菌検出器具（狭義の意味のもの）を
使用することが可能となる。なお、第１１図や第１４図
中において、符号２０は支持部Ｄの脚である。

【００１４】次に、細菌捕集・検出部Ｂは、第６図，第
７図などに示すように、上下に貫通する複数の管状部５
を有すると共に、上面の周辺部が一段低く形成されて丘
状の隆起６が複数設けられており、かつ少なくとも前記
管状部５の上面を覆うように疎水性フィルター７を装着
しているものである。この細菌捕集・検出部Ｂには、通
常、図示したように、前記基体部Ａに結合（通常は嵌
合）するための突起部２１が設けられている。従って、
この突起部２１に対応する切欠き２２を基体部Ａの上面
周辺部に設けておくとよい。図では２箇所に突起部２１
を設けたが、これに限られるものではない。また、後述
する細菌試料導入部Ｃから導入される色素液や洗浄液な
どの飛散を防ぐために、上下に貫通する管状部５の下端
は、基体部Ａに嵌合した際に、基体部Ａの高さの１／３
以上、好ましくは底面近くまで達するようにしておく。

【００１５】さらに、細菌捕集・検出部Ｂの上面は円形
で、かつ全体としては平坦とされており、この上面に、
少なくとも前記管状部５の上面を覆うように（図では円
形状の）疎水性フィルター７が装着されている。なお、
細菌捕集・検出部Ｂの疎水性フィルター７を装着する面
には、疎水性フィルター７を装着する位置を示す印を設
けておくと効率的である。また、管状部５の上部には、
疎水性フィルター７との間に、これを支持する疎水性フ
ィルター支持部材２３が設けられている。この疎水性フ
ィルター支持部材２３としては、通常、多数の通気孔を
有するプラスチック製部材（例えば、ポリエチレン製部
材）からなるものが用いられる。

【００１６】なお、細菌捕集・検出部Ｂの上面は円形
で、かつ全体としては平坦とされているが、上面の周辺
部が一段低く形成されて丘状の隆起６が複数、図では３
箇所設けられている。この丘状の隆起６は、通常、管状
部５の形成数と同じ数だけ、しかも管状部５の形成位置
と同じ角度にあたる周辺部の位置が一番高くなるように
形成されている。

【００１７】本発明において用いる疎水性フィルター７
は、極性が弱いか、或いは極性がなく、過剰の色素の除
去が容易であるため細菌捕集用のフィルターとして好適
である。一方、極性のあるフィルターは過剰の色素の除
去が容易ではないため、好ましくない。このような疎水
性フィルターとしては、例えばナイロン系、ポリテトラ
フルオロエチレン（四フッ化エチレン樹脂）等のフッ素
系、ポリプロピレンなどのポリオレフィン系、或いはガ
ラス系などの疎水性フィルターが挙げられる。これらの
フィルターの中でも特にポリテトラフルオロエチレンや
ポリプロピレンを材料とする疎水性フィルターが、過剰
の色素の除去が容易であるため好ましい。また、親水性
の材料、例えばニトロセルロース系フィルターを表面処
理により疎水性にすれば、疎水性フィルターとして使用
することができる。ここで表面処理としてはコーティン
グなどであり、コーティングに用いる材料として、前記
ナイロン系，フッ素系，ポリオレフィン系の材料などを
用いることができる。

【００１８】この細菌捕集用の疎水性フィルター７のろ
過孔径は、対象とする細菌の種類に応じて適宜選定すれ
ばよいが、通常は１〜４μｍ程度のものが用いられる。
捕集率やろ過性を考慮すると、２〜３μｍ程度のものが
好ましい。

【００１９】この細菌捕集用の疎水性フィルター７の吸
引ろ過面積（着色面積）の大きさは、見やすければ特に
制限はない。吸引ろ過される部分の形は特に問わない
が、見やすさの点で円形が望ましく、その口径（直径）
が２〜６ｍｍ程度の円形のものが好ましい。この細菌捕
集用の疎水性フィルター７全体の大きさは特に制限はな
い。また、この疎水性フィルター７全体の形状は見やす
さの点で円形が好ましく、その口径（直径）は１０〜２
５ｍｍ程度のものが好ましい。

【００２０】この細菌捕集用の疎水性フィルター７の色
としては、用いる色素を考慮して、判定容易な色を定め
ればよい。着色の程度を容易に判定するためには、白色
の疎水性フィルターが好ましい。また、透明，半透明の
疎水性フィルターも用いることができる。

【００２１】また、管状部５は、複数設けられており、
図示のものでは、後述する細菌試料導入部Ｃにおけるロ
ート状の導入孔８の設置数３に対応して３本設けられた
ものを示しているが、これに限られるものではなく、２
本、４本、５本、６本、というように設けることができ
るが、操作の便を考えると、通常、３本程度とするのが
良い。

【００２２】さらに、本発明の細菌検出器具における細
菌試料導入部Ｃは、第８〜１２図に示すように、上面に
複数のロート状の導入孔８が円周状に設けられていると
共に、前記複数の導入孔８の隣りの導入孔８との間の円
周上の中間位置に、第２の導入孔８’が設けられ、裏面
の周辺部に前記丘状の隆起６に対応する丘状の隆起９が
複数設けられ、側面のスカート部１０の内面が順次厚肉
部１１と薄肉部１２に形成されており、かつ前記導入孔
８にプレフィルター１３が装着されているものである。

【００２３】すなわち、まず本発明の細菌検出器具にお
ける細菌試料導入部Ｃは、全体の形状が略帽子状であ
り、その上面に複数（図では３つ）のロート状の導入孔
８が円周状に設けられている。そして、通常、このロー
ト状の導入孔８の下端にプレフィルター１３が装着され
ている。

【００２４】このプレフィルター１３は、試料中に細菌
より大型の動物細胞、例えば白血球などが共存する場合
に、そのような大型の動物細胞を予め捕集（前処理）し
ておくものであり、例えば、ろ過孔径が６〜８μｍ程度
のものが用いられる。このフィルターの全体の大きさは
特に制限がないが、その口径（直径）は５〜１５ｍｍ程
度のものが好ましい。このようなプレフィルター１３と
しては、極性が弱いか、或いは極性がなく、細菌の吸着
を妨げないことから、上記した如き疎水性のフィルター
を用いることが好ましい。

【００２５】細菌試料導入部Ｃにおいては、前記複数の
導入孔８の隣りの導入孔８との間の円周上の中間位置
に、第２の導入孔８’が設けられている（第８図では３
つ設けられている。）。また、裏面の周辺部に、細菌捕
集・検出部Ｂに設けられている丘状の隆起６に対応する
丘状の隆起９が複数設けられている。さらに、側面のス
カート部１０の内面が順次厚肉部１１と薄肉部１２に形
成されている。導入孔８と第２の導入孔８’とは、共に
少なくとも２以上設けられるが、その設置数により、後
に過剰色素の洗浄操作を行なう際の、回転角度が異なる
ことになる。例えば、第８図に示したように、３つの導
入孔８と、３つの第２の導入孔８’の合計６個の導入孔
を設けた場合には、後に過剰色素の洗浄操作を行なう際
の回転角度は６分の１回転（６０度）となる。

【００２６】また、細菌試料導入部Ｃには、必要に応じ
て、回転方向や角度などを示す絵表示などを設けておく
こともできる。さらに、細菌試料導入部Ｃの周囲には、
滑りを防止するために、所定間隔をおいて突起状物２４
を設けたり、或いはキザミ目などを設けておくこともで
きる。例えば、３つの第２の導入孔８’の合計６個の導
入孔を設けた場合には、６０度毎に突起状物２４を６箇
所設けておけば、回転角度を知る目安となる。

【００２７】本発明の細菌検出器具は、前記した如き基
体部Ａの上に、前記細菌捕集・検出部Ｂが、前記細菌捕
集・検出部Ｂの上に前記細菌試料導入部Ｃが順次結合し
うるようにされ、かつ前記管状部５と導入孔８とが上下
方向に一直線状となるように配置されていると共に、前
記細菌試料導入部Ｃが前記基体部Ａに対して左右方向に
回転可能とされている。

【００２８】結合手段は特に制限はなく、嵌合や螺合な
どにより行なうことができる。図面では、基体部Ａと細
菌捕集・検出部Ｂと細菌試料導入部Ｃとが全て嵌合せし
められたものを示しているが、これに限定されるもので
はない。要するに基体部Ａの底部に設けられた吸引手段
との接続口２を除いては、およその密閉状態となるよう
に（厳密には疎水性フィルター７を介して外気は流入す
るので完全密閉状態ではないため）結合しうるものであ
ればよい。

【００２９】前記管状部５と導入孔８とは、細菌試料導
入部Ｃを左右に回転させることにより、上下方向に一直
線状となるような位置関係に配置されているので、この
ように各部を結合させ、適宜、細菌試料導入部Ｃを左右
に回転させることにより、前記管状部５と導入孔８とが
上下方向に一直線状に並ぶようにする。この状態では細
菌捕集・検出部Ｂにおける管状部５の上面を覆うように
装着されている疎水性フィルター７と、細菌試料導入部
Ｃにおける導入孔８の下端に装着されているプレフィル
ター１３とが、ほぼ当接する位置に存在するようにな
る。

【００３０】また、本発明の細菌検出器具においては、
前記細菌試料導入部Ｃが、前記基体部Ａ及び細菌捕集・
検出部Ｂに対して左右方向に回転可能とされており、ま
た細菌捕集・検出部Ｂに設けられた丘状の隆起６に対応
する丘状の隆起９が、細菌試料導入部Ｃに複数設けら
れ、さらに細菌試料導入部Ｃには側面のスカート部１０
の内面が順次厚肉部１１と薄肉部１２に形成されている
ため、例えば細菌試料導入部Ｃを左へ回転（図では６０
度回転）させることにより、細菌試料導入部Ｃと細菌捕
集・検出部Ｂとは、第２の導入孔８’における状態が、
当接状態から隔離状態を経て再度当接状態へと変化す
る。

【００３１】本発明の細菌検出器具の大きさは特に制限
はないが、例えば一例を挙げると、細菌試料導入部Ｃの
形状を図示のような略帽子状とした場合、その直径が４
０〜５０ｍｍ程度、ロート状の導入孔７の上端の直径が
７ｍｍ程度、細菌捕集・検出部Ｂの直径が３５〜４５ｍ
ｍ程度、全体を結合したときの高さが４０〜５０ｍｍ程
度のものである。本発明の細菌検出器具の容量は、使用
する洗浄液等の液量に応じて選択すればよい。また、材
質についても特に制限はないが、製作のし易さやコスト
の面を考慮すると、通常はポリエチレン，ポリプロピレ
ン，ポリスチレン等の樹脂からなるものが用いられ、そ
の他、ガラス製のものなどが用いられる。

【００３２】本発明の細菌検出器具は、以上の如き構造
を有するものである。このような本発明の細菌検出器具
は、吸引手段，色素液，洗浄液，色の対照図と組合せら
れて、細菌数の検出に用いられる。以下、本発明の細菌
検出器具を用いて、細菌の検出を行なう方法について説
明する。この場合、全ての操作は吸引条件下で行なわれ
る。

【００３３】検出するに際し、まず基体部Ａの内部の低
い位置に吸水材４を入れ、次に、底部に設けられた吸引
手段との接続口２に接続部品１４を連結し、この接続部
品１４の内部か、或いは接続部品１４の先にミスト吸着
材充填用容器１５を連結し、その先に別途用意する吸引
手段を接続する。なお、吸引手段との接続は、次に述べ
る全体の結合後であってもよい。また、支台部Ｄを用い
る場合には、予め支台部Ｄに穿設されている接続孔１９
の中に接続部品１４を嵌め込み、この接続部品１４の内
部か、或いは接続部品１４の先にミスト吸着材充填用容
器１５を連結し、その先に別途用意する吸引手段を接続
する。同時に、基体部Ａの底面に設けられた支持部１７
を支台部Ｄに設けられている支持孔１８に嵌め込み固定
する。

【００３４】次に、この基体部Ａの上部に、細菌捕集・
検出部Ｂを結合し、さらに、この細菌捕集・検出部Ｂの
上部に細菌試料導入部Ｃとを被せ、左右に回転させて、
管状部５と導入孔８とが上下方向に一直線状に並ぶよう
にする。このように全体がおよその密閉状態となるよう
に結合して、検出の準備をする。以上のように、基体部
Ａと細菌捕集・検出部Ｂと細菌試料導入部Ｃとを、およ
その密閉状態となるように結合することにより、吸引可
能となる。この状態では、細菌捕集・検出部Ｂにおける
管状部５の上面を覆うように装着されている疎水性フィ
ルター７と、細菌試料導入部Ｃにおける導入孔８の下端
に装着されているプレフィルター１３とが、ほぼ当接す
る位置に存在するようになる。

【００３５】以上のようにして全体を結合した後、吸引
手段より吸引しながら、試料採取ピペットなどを用い
て、細菌を含んだ試料（例えば尿など）を細菌試料導入
部Ｃのロート状の導入孔８からプレフィルター１３に滴
下する。なお、検体（試料）の量は、２〜３滴程度で充
分であり、通常、５０〜５００μｌ、望ましくは１００
〜３００μｌである。

【００３６】本発明の細菌検出器具により細菌数を検出
することができる試料は、特に制限はなく、例えば尿を
初めとして、切削油，圧延油，熱処理油などの水溶性金
属加工油、液体調味料（例えば醤油，ソースなど），液
体飲食品（例えば発酵乳・乳酸菌飲料など），酒類（例
えばワイン，清酒など）などの液状食品、粉末や固形食
品（例えば野菜，魚肉など）の場合には洗浄した試料、
水溶性塗料等、さらには河川水，池水，水槽水，生活廃
水、温泉水，冷却水などの水等にも幅広く適用すること
ができる。なお、試料は必要に応じて、適宜、希釈した
り、或いは例えば固形食品などの場合には破砕した後
に、希釈したりするなどして測定用試料とするとよい。
本発明の細菌検出器具は、このような試料中に存在する
細菌、例えば大腸菌（ Escherichia Coli ），黄色ブド
ウ球菌（ Staphylococcus aureus )，緑膿菌（ Pseudom
onas aeruginosa ) などについて、その総数を迅速に測
定しようとするものである。

【００３７】このように吸引しながら、細菌を含んだ試
料をプレフィルター１３に滴下すると、細菌を含んだ試
料中に含まれる、細菌より大型の動物細胞、例えば白血
球などがプレフィルター１３上に残り、除去される。

【００３８】一方、プレフィルター１３を通過した、細
菌を含んだ試料は、次に細菌捕集・検出部Ｂにおける、
上下に貫通する管状部５の上面を覆うように装着されて
いる疎水性フィルター７に出会う（接触する）こととな
る。この結果、疎水性フィルター７に試料中の細菌が捕
集される。ここで本発明のような吸引濾過により行なう
手法は、加圧濾過の手法に比べ、吸引しながら一連の操
作で、捕集、染色、洗浄ができ、加圧濾過の手法のよう
なフィルターの差換えなどの操作がない点で好ましい。
また、疎水性フィルター７を通過した、残りの試料液
は、細菌捕集・検出部Ｂにおける、上下に貫通する管状
部５を通して、この管状部５の下側に置かれている吸水
材４に吸収される。

【００３９】次に、必要に応じて、プレフィルター８の
上から、洗浄液を滴下して洗浄を行なう。洗浄液は、後
述する色素の洗浄に用いる洗浄液と同様のものでよい。
この洗浄液は、２〜３滴程度で充分であり、通常、５０
〜５００μｌ、望ましくは１００〜３００μｌである。
なお、この洗浄も吸引条件下で行なう。この洗浄によ
り、感度が向上するとともに染色以降の濾過が容易にな
る。

【００４０】次いで、上記のように吸引ろ過により細菌
捕集用の疎水性フィルター７へ捕集され、かつ洗浄され
た試料（細菌）について、染色を行なう。ここで細菌の
染色は各種色素を用い、これを色素液とし、この色素液
を、吸引条件下に、細菌を捕集した後の細菌捕集用の疎
水性フィルター７に添加（通常は滴下）することにより
行なえばよい。染色に用いる色素としては、細菌の染色
に使用可能な色素であればよく、例えばフクシン，サフ
ラニン，クリスタルバイオレット，ビクトリアブルーな
どが挙げられ、特に過剰の色素の除去のし易さの点よ
り、フクシン，サフラニンが好ましい。

【００４１】上記色素は、水溶液（色素液）として使用
される。色素液とする際、必要に応じて、防腐剤、界面
活性剤等を添加することもできる。色素液の濃度は、通
常、0.0005〜2.0 ％（ｗ／ｖ）、好ましくは 0.002〜１
％（ｗ／ｖ）とする。ここで色素液の濃度が、0.0005％
未満であると着色が不充分となり、一方、色素液の濃度
が2.0 ％を超えると過剰の色素の除去が困難となるた
め、いずれも好ましくない。なお、必要に応じて、上記
の色素液に防腐剤としてエタノールを添加する場合には
１〜２０％（ｖ／ｖ）添加すればよく、また、界面活性
剤を添加する場合には、界面活性剤を0.0001〜１％（ｗ
／ｖ）の割合で添加すればよい。上記色素液の調製にあ
たっては、予め所定濃度の色素液を作製しておき、これ
を後述する如き洗浄液を用いて希釈して、所望する濃度
のものとしてもよい。また、色素液の添加量（滴下量）
は、２〜３滴で充分であり、通常、１００〜３００μｌ
である。さらに、試料液量当たりの色素液量比は、０．
２〜３．０、好ましくは０．５〜２．０とする。０．２
未満では着色不良となり、３．０を超えると色素液が無
駄になり、いずれも好ましくない。

【００４２】その後、本発明の細菌検出器具において
は、細菌試料導入部Ｃを取り外す必要はなく、細菌試料
導入部Ｃを、例えば左回りに所定角度回転させることに
より（図面では６分の１回転させることにより）、細菌
試料導入部Ｃを取り外したと同様の効果が図れる。すな
わち、細菌試料導入部Ｃを、例えば左回りに６分の１回
転させることにより、ある特定のロート状の導入孔８の
隣にある第２の導入孔８’が、従来のロート状の導入孔
８の位置に来るため、この第２の導入孔８’と前記管状
部５とが上下方向に一直線状となり、またロート状の導
入孔８の下端に装着されたプレフィルター１３がロート
状の導入孔８と一緒に回転し、結果的にプレフィルター
１３が除去されたと同様の結果となる。

【００４３】従って、この状態で、第２の導入孔８’か
ら洗浄液を滴下することにより、過剰の色素を除去する
ことができる。このようにして細菌捕集用の疎水性フィ
ルター７に捕集され、かつ、染色された試料（細菌）か
ら、過剰の色素を洗浄により除去する。具体的には、吸
引条件下に、洗浄液を細菌試料導入部Ｃに設けられた第
２の導入孔８’から滴下すると、洗浄液は第２の導入孔
８’からを通じて、細菌捕集・検出部Ｂの管状部５の上
面に装着された疎水性フィルター７の上に滴下すること
になり、この結果、洗浄が行なわれることになる。な
お、プレフィルター１３を取り除いてから、洗浄しても
よいし、或いは色素液を添加（滴下）して染色を行なっ
てもよい。

【００４４】ここで用いる洗浄液としては、水，各種緩
衝液（ｐＨ６〜８程度のもの）を使用することができ
る。さらに、必要に応じて、各種界面活性剤を添加した
ものを用いてもよい。界面活性剤は、0.0001〜1.0 ％
（ｗ／ｖ）の割合で添加すればよい。

【００４５】洗浄液の使用量は、疎水性フィルターの吸
引ろ過面積（動物細胞捕集面積、すなわち着色面積）に
依存するため、一義的に決定することは困難であるが、
２〜３滴で充分であり、通常は５０〜５００μ１、好ま
しくは１００〜２００μ１とする。この場合、洗浄液の
使用量が５０μ１未満であると洗浄が不充分であり、一
方、洗浄液の使用量が５００μ１を超えると、細菌から
色素が漏出する可能性がある。洗浄液の使用量は、色の
対照表や検量線を作成する際の使用量と、細菌数未知試
料を洗浄する使用量とを等量にすることが、誤差を抑え
る意味で好ましい。

【００４６】このように、本発明の細菌検出器具によれ
ば、細菌捕集用の疎水性フィルター７への捕集，染色及
び過剰の色素の洗浄除去を全て吸引条件下で行なうこと
ができるばかりか、プレフィルターを取り外すために細
菌試料導入部Ｃを取り外す必要がなく、バイオハザード
を除去することができると共に、複数の導入孔８から、
複数の検体（細菌試料）を同時に測定することができ
る。以上のようにして、本発明の細菌検出器具を用い、
複数の検体（細菌試料）を吸引ろ過しながら、各疎水性
フィルターに捕集し、染色し、次いで過剰の色素を洗浄
により除去し、各細菌の着色度から、それぞれの試料中
の細菌数を測定すればよい。

【００４７】なお、本発明においては、色の対照図は別
途用意しておくものとし、上記の如くして得られた各疎
水性フィルター７の着色度と、別途用意された色の対照
図とを目視により比較して、各試料中の細菌数を測定す
る。細菌捕集用の疎水性フィルター７上に存在する細菌
の着色度、即ち色の強度を、色の対照図と比較すること
により、試料中の細菌数の測定を行なえばよい。

【００４８】色の対照図は、細菌数が既知の試料を用
い、例えば特開平４−２１８３９２号公報や特願平５−
１２１９６３号明細書に記載した方法で染色，洗浄した
細菌捕集用の疎水性フィルターをカラー写真に撮ること
により、又は、この染色された細菌捕集用の疎水性フィ
ルターと同程度にろ紙等を着色したり、或いは同程度の
色を紙に印刷することにより、作成することができる。

【００４９】例えば、尿中の細菌数を測定する場合に
は、次のようにして色の対照図を作成する。すなわち、
尿中細菌は健常人の尿にも低濃度〔多い場合でも１ｍｌ
（ミリリットル）当り１万個程度〕存在する。１ｍｌ当
り１０万個以上の場合には有意と判断され、１ｍｌ当り
１００万個以上の場合には細菌感染（細菌尿症）が確定
的である。従って、通常、１万個／ｍｌ，１０万個／ｍ
ｌ，１００万個／ｍｌの３点の場合の標準色対照図を作
成すればよい。

【００５０】

【実施例】次に、本発明を実施例により詳しく説明す
る。 実施例１ 第１〜１５図に示す如き細菌検出器具を用い、細菌尿患
者（女性、５２才），健常人（男性、５５才）の放出
尿、２種の乳酸菌飲料〔商品名：ブルガリア、明治乳
業製造、商品名：カスタード、高梨乳業製造〕の合計
４種を試料として、細菌数の測定を行なった。なお、尿
試料はそのまま使用し、乳酸菌飲料は滅菌水で１千倍に
希釈した液について分析を行なった。

【００５１】ここで細菌検出器具は、３個のロート状の
導入孔８を有し、その大きさは細菌試料導入部Ｃの直径
が４５ｍｍ、各ロート状の導入孔８の上端の直径が８ｍ
ｍ、細菌捕集・検出部Ｂの直径が４０ｍｍ、全体を結合
したときの高さが３８ｍｍであった。また、プレフィル
ター１３としては、細菌以外の大型の細胞を除去するた
めに、直径１３ｍｍのポリプロピレン製のプレフィルタ
ー１３（ろ過孔径７μｍ）を用いた。さらに、細菌捕集
用の疎水性フィルター７としては、直径２５ｍｍのポリ
テトラフルオロエチレン製メンブレンフィルター（ろ過
孔径３μｍ、東洋濾紙製）を用いた。まず、基体部Ａの
内部の底面に吸水材（脱脂綿）４を入れ、次に、疎水性
フィルター７を貼付した細菌捕集・検出部Ｂを結合し
た。

【００５２】次に、プレフィルター１３を貼付した細菌
試料導入部Ｃを、細菌捕集・検出部Ｂの上から被せて、
上から押さえながら、右回りに回転させて、全体がおよ
その密閉状態となるように結合して、検出の準備をし
た。この際、管状部５と導入孔８とが上下方向に一直線
状に並ぶように細菌試料導入部Ｃを回転させた。なお、
吸引濾過される部分の口径は３ｍｍとなるように、細菌
捕集・検出部Ｂの上部が構成されており、細菌試料導入
部Ｃにおける各ロート状の導入孔８の下部（直径３ｍ
ｍ）と符号するように構成されている。細菌試料導入部
Ｃには、第２の導入孔８’（直径８ｍｍ）が３個設けら
れているが、後述するように、過剰色素の洗浄に使用さ
れる。なお、染色液を添加した後、細菌試料導入部Ｃを
左回りで６分の１回転させた際、細菌捕集用の疎水性フ
ィルター７の着色部分が、第２の導入孔８’の中心部分
に来るように構成されている。また、プレフィルター１
３は、細菌試料導入部Ｃの表面に、細菌捕集用の疎水性
フィルター７は、細菌捕集・検出部Ｂにの裏面にそれぞ
れ貼付されている。

【００５３】次に、ミスト吸着材充填用容器１５にミス
ト吸着材１６を入れて、接続部品１４に連結して、支台
部Ｄに結合した。ミスト吸着材充填用容器１５を吸引ポ
ンプに連結した。前述のようにして基体部Ａ、細菌捕集
・検出部Ｂ、細菌試料導入部Ｃを結合した後、支台部Ｄ
に上から押さえつけるようにして連結し、吸引ポンプよ
り吸引しながら、試料採取ピペットなどを用いて、細菌
を含んだ試料２滴（約１００μｌ）を細菌試料導入部Ｃ
のロート状の導入孔８からプレフィルター１３に滴下す
ることにより、細菌を含んだ試料中に含まれる、細菌よ
り大型の動物細胞をこのプレフィルター１３で除去する
と共に、細菌捕集用の疎水性フィルター７に細菌を捕集
した。ロート状の導入孔８は３個あるので、３個の分析
が可能である。次いで、吸引濾過しながら、プレフィル
ター１３の上から、洗浄液〔 0.05 %(W/V ）ツイーン２
０添加ＰＢＳ緩衝液，ｐＨ７．０〕１００μl を滴下し
て洗浄を行なった。その後、吸引濾過しながら、フクシ
ン染色液（濃度 0.005 % , W/V )を約１００μｌ滴下
し、細菌捕集用の疎水性フィルター７に捕集された細菌
を染色した。

【００５４】次いで、細菌試料導入部Ｃを左回りに６０
度回転させ、この細菌試料導入部Ｃのロート状の導入孔
８の下端に装着されたプレフィルター１３を移動させて
除いた。

【００５５】同様に吸引条件下で、洗浄液〔 0.05 %(W/
V ）ツイーン２０添加ＰＢＳ緩衝液，ｐＨ７．０〕１０
０μl を、第２の導入孔８’の上から細菌捕集用の疎水
性フィルター７の上に滴下することにより、洗浄を行な
い、過剰の色素を除去した。操作は、全て吸引条件下で
行なった。使用する試薬類は、使用に当たり、０．５μ
ｍのポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）製フィル
ター（東洋濾紙製）でろ過して、微粒子を除去した。こ
の細菌捕集用の疎水性フィルター７上に存在する細菌の
着色度( 直径３mmの円の着色度) を、別途用意した色の
対照図（後述する）と目視により比較観察した結果、下
記の第１表の通りであった。測定時間は３０秒であっ
た。なお、比較のために、寒天平板培養で測定した細菌
数も併せて示した。なお、尿試料ではＣＬＥＤ寒天平板
培地（日水製薬製）を用い、乳酸菌飲料では、ＢＣＰ添
加プレートカウント寒天培地（栄研化学製）を用いてそ
れぞれ培養し、コロニー数より細菌数を計数した。な
お、尿試料はそのまま使用し、発酵乳は滅菌水で１千倍
に希釈した液について分析を行なった。

【００５６】

【表１】

【００５７】なお、色の対照図は、下記の如くして作成
したものを用いた。種菌として、大腸菌（ Escherichia
coli )( ATCC 11303 ) 及び黄色ブドウ球菌（ Staphyl
ococcus aureus )( IFO 3183 )を用いて以下の試験を行
なった。肉汁ブイヨン培地に種菌を接種して、３７℃で
２４時間の静置培養を行ない、培養液を標準試料用菌懸
濁液とした。一方、健常人男子の放出尿を採取して、ろ
過孔径が０．５μｍのポリテトラフルオロエチレン製メ
ンブレンフィルター（東洋濾紙製）でろ過して、細菌希
釈用液を調製した。この標準試料用菌懸濁液に所定量の
前記細菌希釈用液を添加して、各細菌数が１０００個
／ｍｌ程度、１万個／ｍｌ程度、１０万個／ｍｌ程
度、１００万個／ｍｌ程度、１０００万個／ｍｌ程
度の濃度となるように、５種の標準試料を調製した。な
お、細菌数はＣＬＥＤ寒天平板培地で、３７℃、２４時
間培養した際のコロニー数により計数した。

【００５８】以下、上記した如き、細菌数の測定と同様
の手法にて、細菌の捕集と染色操作を行なった。細菌捕
集用の疎水性フィルター７上に存在する細菌の着色度(
直径３mmの円の着色度) を目視により観察した結果、下
記の第２表の通りであった。なお、尿の代わりに滅菌水
を希釈剤として用いた場合も同様の結果であった。これ
らの着色したフィルターを、標準サンプルとしてカラー
写真にとり、色の対照図とした。なお、大腸菌と黄色ブ
ドウ球菌との間で着色の程度に大差はなかった。

【表２】

【００５９】比較例１ 特開平４−２１８３９２号に記載された方法に従って、
尿中の細菌数を測定したところ、測定時間は３分であっ
た。

【００６０】

【発明の作用・効果】本発明の細菌検出器具によれば、
試料中の細菌を吸引ろ過しながら疎水性フィルターに捕
集し、その後に、染色，洗浄を行なえばよく、吸引ろ過
条件下で連続的に、細菌の捕集，染色，洗浄の一連の操
作ができ、操作工程が簡便である。従って、本発明の細
菌検出器具によれば、専門的な技術や知識を必要とせ
ず、しかも、迅速、かつ、簡便に試料中の細菌数を測定
することができる。本発明の細菌検出器具によれば、通
常、３０秒以内に判定可能である。しかも本発明の細菌
検出器具によれば、細菌の培養なしに、細菌の有無が分
かるので、病院の細菌検査の検体スクリーニングに活用
することができ、患者及び病院の経費軽減に貢献するこ
とができる。また、本発明の細菌検出器具は非常にシン
プルなものであって、吸引ポンプ等の吸引手段や色素
液、洗浄液等さえ用意すればよく、特別な機器を必要と
しないので、小規模な病院或いは診療所でも測定するこ
とができる。吸引ポンプや吸引設備がない場合には注射
器を用いて吸引すればよく、電源のない場所でも測定で
きるので、電源のない部屋や野外でも測定することがで
きる。さらに、本発明の細菌検出器具は、疎水性フィル
ターの濾過孔径を選択することにより、多くの細菌に適
用できるので、応用範囲も極めて広い。

【００６１】また、本発明の細菌検出器具は、極めて簡
単、かつ、安価なものであって、特別な機器を必要とし
ないので、どのような現場においても使用することがで
きるという利点がある。特に、本発明の細菌検出器具は
一般の素人も使用することができるため、簡単に河川，
温泉水，海，池などの身の回りの水質の検査などが可能
となり、環境保全にも貢献することができるという特質
がある。さらに、本発明の細菌検出器具によれば、プレ
フィルターを取り外すために細菌試料導入部Ｃを取り外
す必要がなく、バイオハザードを除去することができ
る。また、本発明の細菌検出器具によれば、複数の検体
（細菌試料）を同時に測定することができる。従って、
本発明は、尿検査分野（診断領域）をはじめ、各種検査
に広く利用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】第１図は、本発明の細菌検出器具の一態様を示
す斜視図であり、この状態はプレフィルターを取り除く
前の状態を示している。

【図２】第２図は第１図の状態のものを左回りに６０度
回してプレフィルターを取り除いた状態を示す斜視図で
ある。

【図３】第３図は第１図に示す本発明の細菌検出器具を
分解した状態を示す斜視図である。

【図４】第４図は第１図における基体部Ａの平面図であ
る。

【図５】第５図は第４図のＩ−Ｉ線断面図である。

【図６】第６図は第１図における細菌捕集・検出部Ｂの
平面図である。

【図７】第７図は第６図のＩＩ−ＩＩ線縦断面図であ
る。

【図８】第８図は第１図における細菌試料導入部Ｃの表
面平面図である。

【図９】第９図は第１図における細菌試料導入部Ｃの裏
面平面図である。

【図１０】第１０図は第８図のＩＩＩ−ＩＩＩ線断面図
である。

【図１１】第１１図は第１図に示す本発明の細菌検出器
具の断面説明図である。

【図１２】第１２図は第１図の状態のものを左回りに６
０度回してプレフィルターを取り除いた状態を示す平面
図である。

【図１３】第１３図は、本発明の細菌検出器具と組み合
わせ得る支持部Ｄの一態様を示す平面図である。

【図１４】第１４図は第１３図の正面図である。

【図１５】第１５図は本発明の細菌検出器具の裏面図で
ある。

【符号の説明】

Ａ 基体部 Ｂ 細菌捕集・検出部 Ｃ 細菌試料導入部 Ｄ 支台部 １ 開口 ２ 接続口 ３ 突起部 ４ 吸水材 ５ 管状部 ６ 丘状の隆起 ７ 疎水性フィルター ８ ロート状の導入孔 ８’第２の導入孔 ９ 丘状の隆起 １０ スカート部 １１ 厚肉部 １２ 薄肉部 １３ プレフィルター １４ 接続部品 １５ ミスト吸着材充填用容器 １６ ミスト吸着材 １７ 支持部 １８ 支持孔 １９ 接続孔 ２０ 脚 ２１ 突起部 ２２ 切欠き ２３ フィルター支持部材 ２４ 突起状物

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 上部に開口１を有し、底部に吸引手段と
   の接続口２を有し、かつ外周面に上下方向に伸びる複数
   の突起部３を有すると共に、内部に吸水材４の置かれた
   略円筒状の基体部Ａと、上下に貫通する複数の管状部５
   を有すると共に、上面の周辺部が一段低く形成されて丘
   状の隆起６が複数設けられており、かつ少なくとも前記
   管状部５の上面を覆うように疎水性フィルター７を装着
   している細菌捕集・検出部Ｂと、上面に複数のロート状
   の導入孔８が円周状に設けられていると共に、前記複数
   の導入孔８の隣りの導入孔８との間の円周上の中間位置
   に、第２の導入孔８’が設けられ、裏面の周辺部に前記
   丘状の隆起６に対応する丘状の隆起９が複数設けられ、
   側面のスカート部１０の内面が順次厚肉部１１と薄肉部
   １２に形成されており、かつ前記導入孔８にプレフィル
   ター１３が装着されている細菌試料導入部Ｃとからな
   り、前記基体部Ａの上に前記細菌捕集・検出部Ｂが、前
   記細菌捕集・検出部Ｂの上に前記細菌試料導入部Ｃが順
   次結合しうるようにされ、かつ前記管状部５と導入孔８
   とが上下方向に一直線状となるように配置されていると
   共に、前記細菌試料導入部Ｃが前記基体部Ａに対して左
   右方向に回転可能とされていることを特徴とする細菌検
   出器具。
2. 【請求項２】 上部に開口１を有し、底部に吸引手段と
   の接続口２を有し、かつ外周面に上下方向に伸びる複数
   の突起部３を有すると共に、内部に吸水材４の置かれた
   略円筒状の基体部Ａと、上下に貫通する複数の管状部５
   を有すると共に、上面の周辺部が一段低く形成されて丘
   状の隆起６が複数設けられており、かつ少なくとも前記
   管状部５の上面を覆うように疎水性フィルター７を装着
   している細菌捕集・検出部Ｂと、上面に複数のロート状
   の導入孔８が円周状に設けられていると共に、前記複数
   の導入孔８の隣りの導入孔８との間の円周上の中間位置
   に、第２の導入孔８’が設けられ、裏面の周辺部に前記
   丘状の隆起６に対応する丘状の隆起９が複数設けられ、
   側面のスカート部１０の内面が順次厚肉部１１と薄肉部
   １２に形成されており、かつ前記導入孔８にプレフィル
   ター１３が装着されている細菌試料導入部Ｃと、支持部
   Ｄからなり、前記支持部Ｄのうえに前記基体部Ａが、前
   記基体部Ａの上に前記細菌捕集・検出部Ｂが、前記細菌
   捕集・検出部Ｂの上に前記細菌試料導入部Ｃが順次結合
   しうるようにされ、かつ前記管状部５と導入孔８とが上
   下方向に一直線状となるように配置されていると共に、
   前記細菌試料導入部Ｃが前記基体部Ａに対して左右方向
   に回転可能とされていることを特徴とする細菌検出器
   具。