JPH08208687A - グリセリルオリゴヌクレオチド - Google Patents
グリセリルオリゴヌクレオチドInfo
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- JPH08208687A JPH08208687A JP30102095A JP30102095A JPH08208687A JP H08208687 A JPH08208687 A JP H08208687A JP 30102095 A JP30102095 A JP 30102095A JP 30102095 A JP30102095 A JP 30102095A JP H08208687 A JPH08208687 A JP H08208687A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は、優れた抗ＨＩＶ活性を有し、しか
も、優れた安定性も有する抗ＨＩＶ剤を提供することを
目的とする。 【解決手段】一般式 【化１】 ［式中、ＤＢＢは３、４−（ジベンジルオキシ）ベンジ
ル基；Ｒ1 はグアニル又はアデニル基；Ｒ2 はアデニ
ル、グアニル、シトシル、チミニル又はウラシリル基；
ｍは０又は１乃至６；ｎは１乃至６。但し、ｍ及びｎの
和は２乃至１０］で表される化合物及びその塩。
も、優れた安定性も有する抗ＨＩＶ剤を提供することを
目的とする。 【解決手段】一般式 【化１】 ［式中、ＤＢＢは３、４−（ジベンジルオキシ）ベンジ
ル基；Ｒ1 はグアニル又はアデニル基；Ｒ2 はアデニ
ル、グアニル、シトシル、チミニル又はウラシリル基；
ｍは０又は１乃至６；ｎは１乃至６。但し、ｍ及びｎの
和は２乃至１０］で表される化合物及びその塩。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗ＨＩＶ活性を有
するオリゴデオキシリボヌクレオチド誘導体で、一部の
デオキシリボースをグリセロールに置き換え、血中安定
性を向上させた、グリセリルオリゴヌクレオチド誘導体
に関する。
するオリゴデオキシリボヌクレオチド誘導体で、一部の
デオキシリボースをグリセロールに置き換え、血中安定
性を向上させた、グリセリルオリゴヌクレオチド誘導体
に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、オリゴヌクレオチド誘導体が、種
々の生物活性を示すことがわかってきた。例えば、Cala
brettaらは、慢性骨髄性白血病に対する１８量体のアン
チセンスオリゴヌクレオチドを報告した（B.Calabretta
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88,2351-2355(1991)
）。また、Griffin らは、１５量体のオリゴヌクレオ
チドがトロンビン阻害剤として作用することを報告した
(L.C.Griffin et al, Gene, 137,25-31(1994))。しか
し、これらのオリゴヌクレオチド誘導体は天然型の構造
であり、天然型のオリゴヌクレオチドは、血中での分解
が非常に早いことが知られている(S. Akhtar et al, Li
fe Sciences, 49,1793-1801(1991))。
々の生物活性を示すことがわかってきた。例えば、Cala
brettaらは、慢性骨髄性白血病に対する１８量体のアン
チセンスオリゴヌクレオチドを報告した（B.Calabretta
et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88,2351-2355(1991)
）。また、Griffin らは、１５量体のオリゴヌクレオ
チドがトロンビン阻害剤として作用することを報告した
(L.C.Griffin et al, Gene, 137,25-31(1994))。しか
し、これらのオリゴヌクレオチド誘導体は天然型の構造
であり、天然型のオリゴヌクレオチドは、血中での分解
が非常に早いことが知られている(S. Akhtar et al, Li
fe Sciences, 49,1793-1801(1991))。
【０００３】オリゴヌクレオチドの安定性を向上させる
手段として、リン酸ジエステル結合をチオエートに変換
する方法が知られている。例えば、Agrawal らは、抗Ｈ
ＩＶ−１活性を有するホスホロチオエート型の２５量体
のオリゴヌクレオチドを報告した(A. Agrawal et al,Cl
in. Res.,42,282A(1994)) 。しかし、ホスホロチオエー
ト型のオリゴヌクレオチドは非常に多くのジアステレオ
マーの混合物となり、単一の化合物を得ることが困難で
あった。
手段として、リン酸ジエステル結合をチオエートに変換
する方法が知られている。例えば、Agrawal らは、抗Ｈ
ＩＶ−１活性を有するホスホロチオエート型の２５量体
のオリゴヌクレオチドを報告した(A. Agrawal et al,Cl
in. Res.,42,282A(1994)) 。しかし、ホスホロチオエー
ト型のオリゴヌクレオチドは非常に多くのジアステレオ
マーの混合物となり、単一の化合物を得ることが困難で
あった。
【０００４】一方、本発明者らは、５’−末端が修飾さ
れた短鎖のオリゴヌクレオチドが、抗ＨＩＶ−１活性を
示すことを報告した（特開平５−１３８５１７号）。
れた短鎖のオリゴヌクレオチドが、抗ＨＩＶ−１活性を
示すことを報告した（特開平５−１３８５１７号）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】生理活性を有するオリ
ゴヌクレオチド誘導体として、オリゴヌクレオチド部分
が天然型の化合物は、血中安定性が低いことが知られて
いる。また、血中安定性を向上させるために、オリゴヌ
クレオチド部分をホスホロチオエート型にした化合物は
非常に多くのジアステレオマーの混合物になってしま
う。従って、オリゴヌクレオチド部分がジアステレオマ
ーの混合物とならない形で修飾することにより、血中安
定性が向上するような、生理活性を有するオリゴヌクレ
オチド誘導体の開発が望まれている。
ゴヌクレオチド誘導体として、オリゴヌクレオチド部分
が天然型の化合物は、血中安定性が低いことが知られて
いる。また、血中安定性を向上させるために、オリゴヌ
クレオチド部分をホスホロチオエート型にした化合物は
非常に多くのジアステレオマーの混合物になってしま
う。従って、オリゴヌクレオチド部分がジアステレオマ
ーの混合物とならない形で修飾することにより、血中安
定性が向上するような、生理活性を有するオリゴヌクレ
オチド誘導体の開発が望まれている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決すべく鋭意研究の結果、抗ＨＩＶ−１活性を有
するオリゴヌクレオチド誘導体のリボース部分をグリセ
ロールに置き換えた化合物が血中のヌクレアーゼによる
分解に対して非常に安定で、ジアステレオマーの混合物
とならず、強い抗ＨＩＶ−１活性を有することを見出し
た。また、これらのオリゴヌクレオチド誘導体の合成に
あたっては、グリセリルヌクレオシドホスホロアミダイ
ト中間体が有用であることを見出した。
題を解決すべく鋭意研究の結果、抗ＨＩＶ−１活性を有
するオリゴヌクレオチド誘導体のリボース部分をグリセ
ロールに置き換えた化合物が血中のヌクレアーゼによる
分解に対して非常に安定で、ジアステレオマーの混合物
とならず、強い抗ＨＩＶ−１活性を有することを見出し
た。また、これらのオリゴヌクレオチド誘導体の合成に
あたっては、グリセリルヌクレオシドホスホロアミダイ
ト中間体が有用であることを見出した。
【０００７】本発明のグリセリルオリゴヌクレオチド
は、一般式
は、一般式
【０００８】
【化２】
【０００９】［式中、ＤＢＢは３、４−（ジベンジルオ
キシ）ベンジル基を示し、Ｒ1 はグアニン−９−イル又
はアデニン−９−イル基を示し、Ｒ2 はアデニン−９−
イル、グアニン−９−イル、シトシン−１−イル、チミ
ン−１−イル又はウラシル−１−イル基を示し、ｍは０
又は１乃至６の整数を示し、ｎは１乃至６の整数を示
す。但し、ｍ及びｎの和は２乃至１０である。］で表さ
れる化合物及びその塩である。
キシ）ベンジル基を示し、Ｒ1 はグアニン−９−イル又
はアデニン−９−イル基を示し、Ｒ2 はアデニン−９−
イル、グアニン−９−イル、シトシン−１−イル、チミ
ン−１−イル又はウラシル−１−イル基を示し、ｍは０
又は１乃至６の整数を示し、ｎは１乃至６の整数を示
す。但し、ｍ及びｎの和は２乃至１０である。］で表さ
れる化合物及びその塩である。
【００１０】一般式（１）において、Ｒ2 は好適にはグ
アニン−９−イル基であり、ｍ及びｎの和は好適には
５、６又は７であり、さらに好適には５又は６である。
アニン−９−イル基であり、ｍ及びｎの和は好適には
５、６又は７であり、さらに好適には５又は６である。
【００１１】また、Ｒ3 の「イミド基に保護基を有して
いてもよいチミン−１−イル若しくはウラシル−１−イ
ル基」の保護基としては、アシル型の保護基であれば特
に限定はないが、好適にはベンゾイル基又はアニソイル
基である。
いてもよいチミン−１−イル若しくはウラシル−１−イ
ル基」の保護基としては、アシル型の保護基であれば特
に限定はないが、好適にはベンゾイル基又はアニソイル
基である。
【００１２】一般式（１）の化合物のうち、好適な化合
物としては、下記の［Ａ群］に示す塩基配列をもつ化合
物があげられ、さらに好適には［Ｂ群］に示す塩基配列
をもつ化合物があげられる。なお、Ｔはチミン残基を、
Ｇはグアニン残基を、Ａはアデニン残基を示す。
物としては、下記の［Ａ群］に示す塩基配列をもつ化合
物があげられ、さらに好適には［Ｂ群］に示す塩基配列
をもつ化合物があげられる。なお、Ｔはチミン残基を、
Ｇはグアニン残基を、Ａはアデニン残基を示す。
【００１３】［Ａ群］ＴＧＧＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧ、Ｔ
ＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＡＧ、ＴＧ
ＧＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＣＧ、ＴＧ
ＧＧＧＵＧ、ＴＧＧＧＡＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＴＧ、Ｔ
ＧＧＧＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＴＴ
ＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＧＡＡＧＧ、ＴＧＧ
ＧＧＴＴＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＴＴＧＧＧＧ。 ［Ｂ群］ＴＧＧＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡＧ
Ｇ。
ＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＡＧ、ＴＧ
ＧＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＣＧ、ＴＧ
ＧＧＧＵＧ、ＴＧＧＧＡＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＴＧ、Ｔ
ＧＧＧＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＴＧＧＧ、ＴＧＧＧＧＴＴ
ＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧＧ、ＴＧＧＧＧＡＡＧＧ、ＴＧＧ
ＧＧＴＴＧＧＴＧ、ＴＧＧＧＧＴＴＧＧＧＧ。 ［Ｂ群］ＴＧＧＧＧＧ、ＴＧＧＧＡＧ、ＴＧＧＧＡＧ
Ｇ。
【００１４】
（製造方法）次に本発明のグリセリルオリゴヌクレオシ
チドの製造方法について説明する。
チドの製造方法について説明する。
【００１５】
【化３】
【００１６】
【化４】
【００１７】
【化５】
【００１８】工程表中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 、ｍ及びｎは
前述のものを示し、Ｒ4 は２−アミノ−６−クロロプリ
ン−９−イル基を示し、Ｒ5 はアデニン−９−イル、シ
トシン−１−イル、チミン−１−イル又はウラシル−１
−イル基を示し、Ｍｓはメタンスルホニル基を示し、ｉ
Ｐｒはイソプロピル基を示し、ＤＭＴは４、４’−ジメ
トキシトリチル基を示し、ＣＰＧはコントロ−ルドポア
グラスを示す。
前述のものを示し、Ｒ4 は２−アミノ−６−クロロプリ
ン−９−イル基を示し、Ｒ5 はアデニン−９−イル、シ
トシン−１−イル、チミン−１−イル又はウラシル−１
−イル基を示し、Ｍｓはメタンスルホニル基を示し、ｉ
Ｐｒはイソプロピル基を示し、ＤＭＴは４、４’−ジメ
トキシトリチル基を示し、ＣＰＧはコントロ−ルドポア
グラスを示す。
【００１９】以下に、各工程について、詳しく説明す
る。
る。
【００２０】（第１工程）メシル化 本工程は、不活性溶剤中、化合物（３）に、塩基の存在
下、メタンスルホニルクロリドを反応させて、化合物
（４）を得る工程である。
下、メタンスルホニルクロリドを反応させて、化合物
（４）を得る工程である。
【００２１】使用される溶剤としては、反応を阻害せ
ず、原料化合物をある程度溶解するものであれば特に限
定はないが、好適には、メチレンクロリド、クロロホル
ム、ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類（特
にメチレンクロリド）である。使用される塩基として
は、トリエチルアミン、ピリジン等の有機アミン（特に
トリエチルアミン）があげられる。
ず、原料化合物をある程度溶解するものであれば特に限
定はないが、好適には、メチレンクロリド、クロロホル
ム、ジクロロエタンのようなハロゲン化炭化水素類（特
にメチレンクロリド）である。使用される塩基として
は、トリエチルアミン、ピリジン等の有機アミン（特に
トリエチルアミン）があげられる。
【００２２】反応温度及び反応時間は、原料、試薬によ
り異なるが、０乃至４０℃で、３０分乃至５時間であ
る。
り異なるが、０乃至４０℃で、３０分乃至５時間であ
る。
【００２３】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００２４】例えば、氷冷下、水を加えて攪拌し、有機
層を分離し、飽和重曹水続いて水で洗浄し、無水硫酸マ
グネシウムで乾燥する。乾燥剤を濾去し、減圧下、溶剤
を留去することにより得ることができる。
層を分離し、飽和重曹水続いて水で洗浄し、無水硫酸マ
グネシウムで乾燥する。乾燥剤を濾去し、減圧下、溶剤
を留去することにより得ることができる。
【００２５】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
【００２６】（第２工程）２−アミノ−６−クロロプリ
ンの導入 本工程は、不活性溶剤中、化合物（４）に、塩基の存在
下、２ーアミノ−６−クロロプリンを反応させて、化合
物（５）を得る工程である。
ンの導入 本工程は、不活性溶剤中、化合物（４）に、塩基の存在
下、２ーアミノ−６−クロロプリンを反応させて、化合
物（５）を得る工程である。
【００２７】使用される溶剤としては、反応を阻害せ
ず、原料化合物をある程度溶解するものであれば特に限
定はないが、好適には、ジメチルホルムアミドである。
ず、原料化合物をある程度溶解するものであれば特に限
定はないが、好適には、ジメチルホルムアミドである。
【００２８】使用される塩基は、好適には、炭酸ナトリ
ウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩であ
る。
ウム、炭酸カリウムのようなアルカリ金属炭酸塩であ
る。
【００２９】反応温度及び反応時間は、原料、試薬によ
り異なるが、５０乃至１５０℃で、１０乃至４８時間で
ある。
り異なるが、５０乃至１５０℃で、１０乃至４８時間で
ある。
【００３０】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００３１】例えば、溶剤を減圧下留去し、残渣に酢酸
エチルを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫酸
マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することによ
り得ることができる。
エチルを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫酸
マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することによ
り得ることができる。
【００３２】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
【００３３】（第３工程）クロルの加水分解、アミノ基
の保護、ジメトキシトリチル化 本工程は、連続する３工程からなる。 ３ａ ）不活性溶剤中、化合物（５）に、希塩酸等の無機
酸を加え、８０乃至１５０℃で、３０分乃至２時間、反
応させる。終了後、氷冷下、水酸化ナトリウム水溶液で
中和し、溶剤を減圧下留去する。残渣をピリジンを用い
て、３回共沸して乾燥させ、そのまま、次工程に用い
る。
の保護、ジメトキシトリチル化 本工程は、連続する３工程からなる。 ３ａ ）不活性溶剤中、化合物（５）に、希塩酸等の無機
酸を加え、８０乃至１５０℃で、３０分乃至２時間、反
応させる。終了後、氷冷下、水酸化ナトリウム水溶液で
中和し、溶剤を減圧下留去する。残渣をピリジンを用い
て、３回共沸して乾燥させ、そのまま、次工程に用い
る。
【００３４】３ｂ）３ａで得られる化合物を無水ピリジ
ンに懸濁させて、−２０乃至５℃で攪拌しながら、トリ
メチルシリルクロリド（ＴＭＳＣｌ）を滴下する。滴下
が終了してから３０分後に無水イソブチリル酸を加え、
１０乃至４０℃で、３０分乃至４時間攪拌する。その
後、−２０乃至５℃で、水を加え、さらに１０乃至３０
分間攪拌し、濃アンモニア水を加えて３０分乃至２時間
攪拌する。
ンに懸濁させて、−２０乃至５℃で攪拌しながら、トリ
メチルシリルクロリド（ＴＭＳＣｌ）を滴下する。滴下
が終了してから３０分後に無水イソブチリル酸を加え、
１０乃至４０℃で、３０分乃至４時間攪拌する。その
後、−２０乃至５℃で、水を加え、さらに１０乃至３０
分間攪拌し、濃アンモニア水を加えて３０分乃至２時間
攪拌する。
【００３５】反応終了後、溶剤を減圧下に留去し、水を
加えて溶解後、エーテル等の水と混和しない溶剤で洗浄
する。水を減圧下に留去し、ピリジンを用いて共沸によ
り乾燥して、目的化合物を得ることができる。
加えて溶解後、エーテル等の水と混和しない溶剤で洗浄
する。水を減圧下に留去し、ピリジンを用いて共沸によ
り乾燥して、目的化合物を得ることができる。
【００３６】通常、目的化合物は、精製せずに次の工程
に用いる。
に用いる。
【００３７】３ｃ）３ｂで得られる化合物を無水ピリジ
ンに溶解し、４、４’−ジメトキシトリチルクロリドを
加え、１０乃至４０℃で、１乃至１０時間攪拌する。反
応終了後、塩化メチレンで希釈し、飽和重曹水で洗浄す
る。有機層を乾燥剤で乾燥後、溶剤を留去し、残渣をク
ロマトグラフィ−にて精製して、目的化合物を得ること
ができる。
ンに溶解し、４、４’−ジメトキシトリチルクロリドを
加え、１０乃至４０℃で、１乃至１０時間攪拌する。反
応終了後、塩化メチレンで希釈し、飽和重曹水で洗浄す
る。有機層を乾燥剤で乾燥後、溶剤を留去し、残渣をク
ロマトグラフィ−にて精製して、目的化合物を得ること
ができる。
【００３８】（第４工程）ＴＭＳ化、ベンゾイル化、加
水分解 本工程は、化合物（９）を原料として、化合物（１０）
を得る工程である。
水分解 本工程は、化合物（９）を原料として、化合物（１０）
を得る工程である。
【００３９】本工程は、連続した３工程からなる。
【００４０】４ａ）ピリジン中、化合物（９）に、トリ
メチルシリルクロリドを反応させ，１０乃至４０℃で、
３０分乃至２時間攪拌する。
メチルシリルクロリドを反応させ，１０乃至４０℃で、
３０分乃至２時間攪拌する。
【００４１】４ｂ）終了後、反応液へ、ベンゾイルクロ
リドを加え、１０乃至４０℃で、３０分乃至５時間攪拌
する。
リドを加え、１０乃至４０℃で、３０分乃至５時間攪拌
する。
【００４２】４ｃ）終了後、反応液へ水を加え、１０乃
至４０℃で、５分乃至２時間攪拌する。
至４０℃で、５分乃至２時間攪拌する。
【００４３】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００４４】例えば、溶剤を減圧下留去し、残渣に塩化
メチレンを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することに
より得ることができる。
メチレンを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することに
より得ることができる。
【００４５】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
【００４６】（第５工程）ジメトキシトリチル化 本工程は、ピリジン中、化合物（１０）に、ジメトキシ
トリチルクロリドを反応させて、化合物（６）を得る工
程である。
トリチルクロリドを反応させて、化合物（６）を得る工
程である。
【００４７】反応温度及び反応時間は、原料、試薬によ
り異なるが、１０乃至４０℃で、３乃至１２時間であ
る。
り異なるが、１０乃至４０℃で、３乃至１２時間であ
る。
【００４８】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００４９】例えば、溶剤を減圧下留去し、残渣に塩化
メチレンを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することに
より得ることができる。
メチレンを加えて溶解し、飽和重曹水で洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥し、溶剤を減圧下留去することに
より得ることができる。
【００５０】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
【００５１】（第６工程）３価のリンの導入 本工程は、塩化メチレン中、化合物（６）に、１Ｈ−テ
トラゾールジイソプロピルアミン塩の存在下、２−シア
ノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホ
スホロジアミダイトを反応させて、本発明の目的中間体
（２）を得る工程である。
トラゾールジイソプロピルアミン塩の存在下、２−シア
ノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホ
スホロジアミダイトを反応させて、本発明の目的中間体
（２）を得る工程である。
【００５２】反応温度及び反応時間は、原料により異な
るが、０乃至４０℃で、１０分乃至４８時間である。
るが、０乃至４０℃で、１０分乃至４８時間である。
【００５３】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００５４】例えば、溶媒を減圧下留去し、水と混和し
ない溶剤、例えば酢酸エチルを加え、残さを溶解し、氷
冷した炭酸ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、減
圧下、溶剤を留去することにより得ることができる。
ない溶剤、例えば酢酸エチルを加え、残さを溶解し、氷
冷した炭酸ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、減
圧下、溶剤を留去することにより得ることができる。
【００５５】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶、再沈殿又はクロマトグラフィー等によっ
て更に精製できる。
【００５６】（第７工程）コハク酸残基の導入 本工程は、ピリジン中、化合物（６）に、ジメチルアミ
ノピリジンの存在下、無水コハク酸を反応させて、化合
物（７）を得る工程である。
ノピリジンの存在下、無水コハク酸を反応させて、化合
物（７）を得る工程である。
【００５７】反応温度及び反応時間は、原料により異な
るが、０乃至４０℃で、１０乃至４８時間である。
るが、０乃至４０℃で、１０乃至４８時間である。
【００５８】反応終了後、目的化合物は、常法に従い、
反応混合物から採取される。
反応混合物から採取される。
【００５９】例えば、溶媒を減圧下留去し、水と混和し
ない溶剤、例えば酢酸エチルを加え、残さを溶解し、１
０％クエン酸水溶液及び水で洗浄し、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、減圧下、溶剤を留去
することにより得ることができる。
ない溶剤、例えば酢酸エチルを加え、残さを溶解し、１
０％クエン酸水溶液及び水で洗浄し、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。乾燥剤を濾去し、減圧下、溶剤を留去
することにより得ることができる。
【００６０】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えば再結晶（特にアセトニトリルを用いて）等によっ
て更に精製できる。
例えば再結晶（特にアセトニトリルを用いて）等によっ
て更に精製できる。
【００６１】（第８工程）ＣＰＧとの結合 本工程は、化合物（７）を原料として、化合物（８）を
得る工程である。
得る工程である。
【００６２】本工程は、連続した３工程からなる。
【００６３】８ａ）化合物（７）を、テトラヒドロフラ
ンとピリジンに溶解し、ペンタクロロフェノール及びジ
シクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を加え、−２
０乃至５℃で３０分乃至２時間攪拌した後に、１０乃至
４０℃で１２乃至２４時間攪拌する。反応終了後、不溶
物を濾過して除き、溶剤を減圧下に留去する。
ンとピリジンに溶解し、ペンタクロロフェノール及びジ
シクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を加え、−２
０乃至５℃で３０分乃至２時間攪拌した後に、１０乃至
４０℃で１２乃至２４時間攪拌する。反応終了後、不溶
物を濾過して除き、溶剤を減圧下に留去する。
【００６４】得られた目的化合物は必要ならば、常法、
例えばクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
例えばクロマトグラフィー等によって更に精製できる。
【００６５】８ｂ）８ａで得られたら化合物を、ピリジ
ンを用いて共沸して乾燥させた後に、ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）に溶解し、アミノプロピルＣＰＧ（ＣＰ
ＧＩＮＣ．；ＡＭＰ００５００Ｂ；５２１Ａ；１２０／
２００；８５．７μｍｏｌ／ｇ）及びトリエチルアミン
を加え、１０乃至４０℃で１０乃至２４時間放置する。
得られる不溶物を濾過して集め、ＤＭＦ及び塩化メチレ
ンで洗浄する。
ンを用いて共沸して乾燥させた後に、ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）に溶解し、アミノプロピルＣＰＧ（ＣＰ
ＧＩＮＣ．；ＡＭＰ００５００Ｂ；５２１Ａ；１２０／
２００；８５．７μｍｏｌ／ｇ）及びトリエチルアミン
を加え、１０乃至４０℃で１０乃至２４時間放置する。
得られる不溶物を濾過して集め、ＤＭＦ及び塩化メチレ
ンで洗浄する。
【００６６】８ｃ）８ｂで得られる化合物に無水酢酸と
ピリジンを加え、ジメチルアミノピリジンを加え、１０
乃至４０℃で１時間放置する。得られる不溶物を濾過し
て集め、ピリジンと塩化メチレンで洗浄し、乾燥させる
ことにより、目的化合物（８）を得ることができる。
ピリジンを加え、ジメチルアミノピリジンを加え、１０
乃至４０℃で１時間放置する。得られる不溶物を濾過し
て集め、ピリジンと塩化メチレンで洗浄し、乾燥させる
ことにより、目的化合物（８）を得ることができる。
【００６７】（第９工程）伸長反応、脱保護、脱ＣＰＧ 本工程は、通常のＤＮＡ合成機を用いた通常のオリゴデ
オキシヌクレオチドの合成に準じて行うことができる。
オキシヌクレオチドの合成に準じて行うことができる。
【００６８】例えば、バイオサーチ（日本ミリポア・リ
ミテッド）のＣｙｃｌｏｎｅTM Ｐｌｕｓ ＤＮＡ／Ｒ
ＮＡシンセサイザーに、プログラムとしてアミダイトカ
ートリッジを用いて伸長反応を行っていく。
ミテッド）のＣｙｃｌｏｎｅTM Ｐｌｕｓ ＤＮＡ／Ｒ
ＮＡシンセサイザーに、プログラムとしてアミダイトカ
ートリッジを用いて伸長反応を行っていく。
【００６９】この際、所望に応じ使用する各ユニット試
薬としては、通常のアデニン及びグアニンに対応するβ
−シアノエチルアミダイト溶液（３５ｍＭアセトニトリ
ル溶液）、５′−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベン
ジル）チミジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（穂戸田ら、
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ，１３，１３７５−１３９５（１９９４））のアセト
ニトリル溶液（３５ｍＭ）、所望の化合物（２）のアセ
トニトリル溶液（３５ｍＭ）である。
薬としては、通常のアデニン及びグアニンに対応するβ
−シアノエチルアミダイト溶液（３５ｍＭアセトニトリ
ル溶液）、５′−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベン
ジル）チミジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（穂戸田ら、
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ，１３，１３７５−１３９５（１９９４））のアセト
ニトリル溶液（３５ｍＭ）、所望の化合物（２）のアセ
トニトリル溶液（３５ｍＭ）である。
【００７０】固相担体としては、５μmol の化合物
（８）を用いる。
（８）を用いる。
【００７１】最後のユニットを縮合した後には酸処理を
行なわない設定にしておき、コントロールドポアグラス
（ＣＰＧ）上に、保護されたオリゴヌクレオチドが構築
された誘導体を得ることができる。これを減圧下乾燥
し、カラムからとり出し、濃アンモニア水にひたして密
閉し、１０乃至４０℃で２日間反応する。切断されたＣ
ＰＧを濾過により除き、水で洗浄し、ろ液と洗浄液を合
わせて、ジエチルエーテルで洗浄し、減圧下にアンモニ
アとジエチルエーテルを除いた後、水溶液を濃縮する。
これをミリポアフィルターで濾過した後に、逆相ＨＰＬ
Ｃ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−ＯＤＳ，２０×２５
０ｍｍ；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡ
Ａ），ｐＨ７；２５→５５％ ＣＨ3 ＣＮ／３０ｍｉ
ｎ，ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ；７ｍＬ／ｍｉ
ｎ；２５４ｎｍ）にアプライし、１６．９分に溶出する
画分を集める。減圧下、アセトニトリルを留去し、凍結
乾燥することにより本発明の目的化合物（１）を得るこ
とができる。
行なわない設定にしておき、コントロールドポアグラス
（ＣＰＧ）上に、保護されたオリゴヌクレオチドが構築
された誘導体を得ることができる。これを減圧下乾燥
し、カラムからとり出し、濃アンモニア水にひたして密
閉し、１０乃至４０℃で２日間反応する。切断されたＣ
ＰＧを濾過により除き、水で洗浄し、ろ液と洗浄液を合
わせて、ジエチルエーテルで洗浄し、減圧下にアンモニ
アとジエチルエーテルを除いた後、水溶液を濃縮する。
これをミリポアフィルターで濾過した後に、逆相ＨＰＬ
Ｃ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−ＯＤＳ，２０×２５
０ｍｍ；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡ
Ａ），ｐＨ７；２５→５５％ ＣＨ3 ＣＮ／３０ｍｉ
ｎ，ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ；７ｍＬ／ｍｉ
ｎ；２５４ｎｍ）にアプライし、１６．９分に溶出する
画分を集める。減圧下、アセトニトリルを留去し、凍結
乾燥することにより本発明の目的化合物（１）を得るこ
とができる。
【００７２】化合物（３）又は（９）の光学活性体を用
いることにより、所望の逆配位の本発明の化合物（１）
を同様にして製造することができる。化合物（３）の光
学活性体は、市販のものを用いることができる。化合物
（９）の光学活性体は、公知の方法により製造すること
ができる（A.Holy, Collection Czechoslov.Chem.Commu
n.,40,187(1975).）。
いることにより、所望の逆配位の本発明の化合物（１）
を同様にして製造することができる。化合物（３）の光
学活性体は、市販のものを用いることができる。化合物
（９）の光学活性体は、公知の方法により製造すること
ができる（A.Holy, Collection Czechoslov.Chem.Commu
n.,40,187(1975).）。
【００７３】
（実施例１）
【００７４】
【化６】
【００７５】（１ａ）（Ｒ）−（２，２−ジメチル−
１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル メタンスル
ホネート １．３２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−（＋）−（２，
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタ
ノール（高野ら、有機合成協会誌，４５，１１５７（１
９８７））を、アルミナで乾燥した１００ｍＬの塩化メ
チレンに溶解し、０℃にて攪拌した。ここに、２．１２
ｍＬ（１５．２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、
０．８５４ｍＬ（１１ｍｍｏｌ）のメシルクロリドを滴
下して加えた。１時間後に５０ｍＬの水を加え、さらに
１０分間攪拌した。有機層を分取し、５０ｍＬづつの飽
和重曹水と水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し
た。溶媒を減圧下留去して、２．１３ｇ（１００％）の
標記目的化合物（ｏｉｌ）を得た。
１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル メタンスル
ホネート １．３２ｇ（１０ｍｍｏｌ）の（Ｓ）−（＋）−（２，
２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタ
ノール（高野ら、有機合成協会誌，４５，１１５７（１
９８７））を、アルミナで乾燥した１００ｍＬの塩化メ
チレンに溶解し、０℃にて攪拌した。ここに、２．１２
ｍＬ（１５．２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、
０．８５４ｍＬ（１１ｍｍｏｌ）のメシルクロリドを滴
下して加えた。１時間後に５０ｍＬの水を加え、さらに
１０分間攪拌した。有機層を分取し、５０ｍＬづつの飽
和重曹水と水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し
た。溶媒を減圧下留去して、２．１３ｇ（１００％）の
標記目的化合物（ｏｉｌ）を得た。
【００７６】1Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δppm ： 4.38
(m,1H); 4.22(d,2H,J=5.28Hz); 4.11 (dd,1H,J=6.60,8.
58Hz); 3.83(dd,1H,J=5.94,8.58Hz); 3.06(s,3H); 1.45
(s,3H); 1.37(s,3H). （１ｂ）２−アミノ−６−クロロ−９−［（２，２−ジ
メチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］プ
リン （１ａ）で得られた化合物１．０５１ｇ（５ｍｍｏｌ）
を９０ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶か
し、１．０５９ｇ（６．２５ｍｍｏｌ）の２−アミノ−
６−クロロプリンと０．８８８ｇ（６．４３ｍｍｏｌ）
のＫ2 ＣＯ3 を加え、９０℃にて一夜攪拌した。溶媒を
減圧下留去した後に、１００ｍＬの酢酸エチルに溶解
し、１００ｍＬの飽和重曹水で洗浄した。水層を１００
ｍＬの酢酸エチルで２回抽出し、前の有機層と合わせて
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し
た後に、１００ｇ（２３０−４００ｍｅｓｈ）のシリカ
ゲルカラムにアプライし、２乃至３％メタノール−塩化
メチレンで溶出して、０．９６２２ｇ（６８％）の標記
目的化合物を得た。
(m,1H); 4.22(d,2H,J=5.28Hz); 4.11 (dd,1H,J=6.60,8.
58Hz); 3.83(dd,1H,J=5.94,8.58Hz); 3.06(s,3H); 1.45
(s,3H); 1.37(s,3H). （１ｂ）２−アミノ−６−クロロ−９−［（２，２−ジ
メチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メチル］プ
リン （１ａ）で得られた化合物１．０５１ｇ（５ｍｍｏｌ）
を９０ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶か
し、１．０５９ｇ（６．２５ｍｍｏｌ）の２−アミノ−
６−クロロプリンと０．８８８ｇ（６．４３ｍｍｏｌ）
のＫ2 ＣＯ3 を加え、９０℃にて一夜攪拌した。溶媒を
減圧下留去した後に、１００ｍＬの酢酸エチルに溶解
し、１００ｍＬの飽和重曹水で洗浄した。水層を１００
ｍＬの酢酸エチルで２回抽出し、前の有機層と合わせて
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し
た後に、１００ｇ（２３０−４００ｍｅｓｈ）のシリカ
ゲルカラムにアプライし、２乃至３％メタノール−塩化
メチレンで溶出して、０．９６２２ｇ（６８％）の標記
目的化合物を得た。
【００７７】1Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,DMSO-d6)δppm ： 8.
08(s,1H); 6.92(s,2H); 4.52-4.43(m,1H); 4.20-4.10
(m,2H); 4.01(dd,1H,J=6.60,8.57Hz); 3.77(dd,1H,J=5.
28,8.57Hz); 1.29(s,3H); 1.24(s,3H). ＭＡＳＳ： 283 ＩＲ(KBr,cm-1):3430,3312,3186,2984,2941,2860,1642,
1616,1560,1517,1429. ＵＶ(MeOH)ε：223(22300),248(4800),310(6000). （１ｃ）
08(s,1H); 6.92(s,2H); 4.52-4.43(m,1H); 4.20-4.10
(m,2H); 4.01(dd,1H,J=6.60,8.57Hz); 3.77(dd,1H,J=5.
28,8.57Hz); 1.29(s,3H); 1.24(s,3H). ＭＡＳＳ： 283 ＩＲ(KBr,cm-1):3430,3312,3186,2984,2941,2860,1642,
1616,1560,1517,1429. ＵＶ(MeOH)ε：223(22300),248(4800),310(6000). （１ｃ）
【００７８】
【化７】
【００７９】（１ｂ）で得られた化合物９２５ｍｇ
（３．２６ｍｍｏｌ）に２．７５ｍＬの水と０．５５ｍ
Ｌの１２Ｎ−ＨＣｌを加え、７５分間加熱還流した。反
応容器を氷水浴にて冷却しながら、約２．６ｍＬの２．
５Ｎ−ＮａＯＨにて中和した。溶媒を減圧下留去した後
に、ピリジンで３回共沸して乾燥させた。３３ｍＬの乾
燥ピリジンに懸濁させて、反応容器を氷水浴にて冷却し
ながら攪拌し、２．１ｍＬのＴＭＳＣｌを滴下して加え
た。３０分後に２．８ｍＬの無水イソブチリル酸を加
え、室温にもどして２時間攪拌した。反応容器を氷水浴
にて冷却しながら、６．５ｍＬの水を加えて１５分間攪
拌し、さらに６．５ｍＬの濃アンモニア水を加えて１時
間攪拌した。溶媒を減圧下に留去し、１００ｍＬの水に
溶かした後に、１００ｍＬのエーテルで洗浄した。溶媒
を減圧下に留去した後に、ピリジンで２回共沸して乾燥
させた。３３ｍＬの乾燥ピリジンに溶かし、１．２６７
ｇ（３．２６ｍｍｏｌ）のジメトキシトリチルクロリド
を加えて攪拌した。３時間後に２００ｍｇのジメトキシ
トリチルクロリドを追加し、さらに２時間攪拌した。２
００ｍＬの塩化メチレンで希釈して、１００ｍＬの飽和
重曹水で３回洗浄した後に、無水硫酸マグネシウムにて
乾燥させた。溶媒を留去した後に、１００ｇ（７０−２
３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、１−
４％メタノールを含む塩化メチレンにて溶出し、標記目
的化合物を９２４．７ｍｇ（４７％）得た。1 Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δppm:11.81(s,1H); 8.55
(s,1H); 7.54(s,1H); 7.47-6.81(m,13H); 4.90(brs,1
H); 4.40-3.98(m,3H); 3.79(s,6H); 3.35-3.20(m,2H);
2.70-2.55(m,1H); 1.27-1.22(m,6H). （１ｄ）
（３．２６ｍｍｏｌ）に２．７５ｍＬの水と０．５５ｍ
Ｌの１２Ｎ−ＨＣｌを加え、７５分間加熱還流した。反
応容器を氷水浴にて冷却しながら、約２．６ｍＬの２．
５Ｎ−ＮａＯＨにて中和した。溶媒を減圧下留去した後
に、ピリジンで３回共沸して乾燥させた。３３ｍＬの乾
燥ピリジンに懸濁させて、反応容器を氷水浴にて冷却し
ながら攪拌し、２．１ｍＬのＴＭＳＣｌを滴下して加え
た。３０分後に２．８ｍＬの無水イソブチリル酸を加
え、室温にもどして２時間攪拌した。反応容器を氷水浴
にて冷却しながら、６．５ｍＬの水を加えて１５分間攪
拌し、さらに６．５ｍＬの濃アンモニア水を加えて１時
間攪拌した。溶媒を減圧下に留去し、１００ｍＬの水に
溶かした後に、１００ｍＬのエーテルで洗浄した。溶媒
を減圧下に留去した後に、ピリジンで２回共沸して乾燥
させた。３３ｍＬの乾燥ピリジンに溶かし、１．２６７
ｇ（３．２６ｍｍｏｌ）のジメトキシトリチルクロリド
を加えて攪拌した。３時間後に２００ｍｇのジメトキシ
トリチルクロリドを追加し、さらに２時間攪拌した。２
００ｍＬの塩化メチレンで希釈して、１００ｍＬの飽和
重曹水で３回洗浄した後に、無水硫酸マグネシウムにて
乾燥させた。溶媒を留去した後に、１００ｇ（７０−２
３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、１−
４％メタノールを含む塩化メチレンにて溶出し、標記目
的化合物を９２４．７ｍｇ（４７％）得た。1 Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δppm:11.81(s,1H); 8.55
(s,1H); 7.54(s,1H); 7.47-6.81(m,13H); 4.90(brs,1
H); 4.40-3.98(m,3H); 3.79(s,6H); 3.35-3.20(m,2H);
2.70-2.55(m,1H); 1.27-1.22(m,6H). （１ｄ）
【００８０】
【化８】
【００８１】（１ｃ）で得られた化合物６９０ｍｇ
（１．１５ｍｍｏｌ）をピリジンで１回共沸して乾燥さ
せた後に６ｍＬの塩化メチレンに溶かし、９８．８ｍｇ
（０．５７７ｍｍｏｌ）の１Ｈ−テトラゾールジイソプ
ロピルアミン塩と４０４μＬ（１．２７ｍｍｏｌ）の２
−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトライソプロ
ピルホスホロジアミダイトを加え、室温で７時間２０分
攪拌した。１００μＬの２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ′，Ｎ′−テトライソプロピルホスホロジアミダイト
と１０ｍｇの１Ｈ−テトラゾールジイソプロピルアミン
塩を追加して、さらに室温で１４時間攪拌した。溶媒を
留去した後に、５０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、５０ｍ
Ｌの氷冷した１０％炭酸ナトリウム水で２回洗浄し、５
０ｍＬの飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで
乾燥後溶媒を留去し、４０ｇ（７０−２３０ｍｅｓｈ）
のシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチルで溶出し
て標記目的化合物を８０６．５ｍｇ（８８％）得た。
（１．１５ｍｍｏｌ）をピリジンで１回共沸して乾燥さ
せた後に６ｍＬの塩化メチレンに溶かし、９８．８ｍｇ
（０．５７７ｍｍｏｌ）の１Ｈ−テトラゾールジイソプ
ロピルアミン塩と４０４μＬ（１．２７ｍｍｏｌ）の２
−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトライソプロ
ピルホスホロジアミダイトを加え、室温で７時間２０分
攪拌した。１００μＬの２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ′，Ｎ′−テトライソプロピルホスホロジアミダイト
と１０ｍｇの１Ｈ−テトラゾールジイソプロピルアミン
塩を追加して、さらに室温で１４時間攪拌した。溶媒を
留去した後に、５０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、５０ｍ
Ｌの氷冷した１０％炭酸ナトリウム水で２回洗浄し、５
０ｍＬの飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで
乾燥後溶媒を留去し、４０ｇ（７０−２３０ｍｅｓｈ）
のシリカゲルカラムにアプライし、酢酸エチルで溶出し
て標記目的化合物を８０６．５ｍｇ（８８％）得た。
【００８２】1Ｈ−ＮＭＲ (270MHz,CDCl3,mixture of d
iastereomers)δppm: 11.90,11.85(2s,1H); 8.65,8.31
(2s,1H); 7.54,7.49(2s,1H); 7.45-6.79(m,13H); 4.50
(brs,1H); 4.33 (d,2H,J=5.93Hz); 3.79(s,6H); 3.70-
3.40(m,4H); 3.20-3.00(m,2H);2.65-2.55(m,1H); 2.53-
2.45(m,2H); 1.30-1.10(m,18H). （１ｅ）
iastereomers)δppm: 11.90,11.85(2s,1H); 8.65,8.31
(2s,1H); 7.54,7.49(2s,1H); 7.45-6.79(m,13H); 4.50
(brs,1H); 4.33 (d,2H,J=5.93Hz); 3.79(s,6H); 3.70-
3.40(m,4H); 3.20-3.00(m,2H);2.65-2.55(m,1H); 2.53-
2.45(m,2H); 1.30-1.10(m,18H). （１ｅ）
【００８３】
【化９】
【００８４】（１ｄ）で得られた化合物１７９ｍｇ
（０．３ｍｍｏｌ）をピリジンで１回共沸して乾燥させ
た後に、４．５ｍＬの乾燥ピリジンに溶かし、１２ｍｇ
（０．１ｍｍｏｌ）のジメチルアミノピリジン（ＤＭＡ
Ｐ）と３０ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）の無水コハク酸を加
え、室温で攪拌した。３時間後に１２ｍｇのＤＭＡＰを
追加し、さらに１５時間３０分後に４１μＬ（０．３ｍ
ｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。さらに９０分後
に３０ｍｇの無水コハク酸を加え、さらに２時間３０分
後に６０ｍｇの無水コハク酸を加え、さらに２時間後に
６０ｍｇの無水コハク酸を加えて、さらに１６時間３０
分攪拌した。溶媒を減圧下に留去して、２０ｍＬの酢酸
エチルに溶かし、２０ｍＬの１０％クエン酸水溶液で２
回洗浄し、２０ｍＬの水で１回洗浄した。無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥させた後に、溶媒を減圧下に留去して、
アセトニトリルから再結晶して、若干無水コハク酸を含
む標記目的化合物を１５１．８ｍｇ（７２．５％）得
た。
（０．３ｍｍｏｌ）をピリジンで１回共沸して乾燥させ
た後に、４．５ｍＬの乾燥ピリジンに溶かし、１２ｍｇ
（０．１ｍｍｏｌ）のジメチルアミノピリジン（ＤＭＡ
Ｐ）と３０ｍｇ（０．３ｍｍｏｌ）の無水コハク酸を加
え、室温で攪拌した。３時間後に１２ｍｇのＤＭＡＰを
追加し、さらに１５時間３０分後に４１μＬ（０．３ｍ
ｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。さらに９０分後
に３０ｍｇの無水コハク酸を加え、さらに２時間３０分
後に６０ｍｇの無水コハク酸を加え、さらに２時間後に
６０ｍｇの無水コハク酸を加えて、さらに１６時間３０
分攪拌した。溶媒を減圧下に留去して、２０ｍＬの酢酸
エチルに溶かし、２０ｍＬの１０％クエン酸水溶液で２
回洗浄し、２０ｍＬの水で１回洗浄した。無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥させた後に、溶媒を減圧下に留去して、
アセトニトリルから再結晶して、若干無水コハク酸を含
む標記目的化合物を１５１．８ｍｇ（７２．５％）得
た。
【００８５】1Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δ: 9.49(s,1
H); 7.56(s,1H); 5.22(brs,1H); 4.52-4.30(m,2H); 3.7
9(s,6H); 3.27-2.40(m,7H); 1.17(d,6H,J=7.26Hz). （１ｆ）
H); 7.56(s,1H); 5.22(brs,1H); 4.52-4.30(m,2H); 3.7
9(s,6H); 3.27-2.40(m,7H); 1.17(d,6H,J=7.26Hz). （１ｆ）
【００８６】
【化１０】
【００８７】（１ｅ）で得られた化合物１５１．８ｍｇ
（０．２１７ｍｍｏｌ）をピリジンで２回共沸して乾燥
させた後に、２ｍＬのテトラヒドロフランと５０μＬの
ピリジンに溶かし、５８ｍｇ（０．２１７ｍｍｏｌ）の
ペンタクロロフェノールと１１３ｍｇ（０．５５ｍｍｏ
ｌ）のＤＣＣを加え、氷水浴中で攪拌した。１時間後に
室温にもどし、さらに１６時間攪拌した。不溶物を濾過
して除き、溶媒を減圧下に留去し、１０ｇ（７０−２３
０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、３％メ
タノールを含む塩化メチレンで溶出することにより２３
９．４ｍｇの若干ジシクロヘキシルウレアを含む活性エ
ステル誘導体を得た。これをピリジンで２回共沸して乾
燥させた後に、１．２ｇのアミノプロピルＣＰＧ（ＣＰ
ＧＩＮＣ．；ＡＭＰ００５００Ｂ；５２１Ａ；１２０／
２００；８５．７μｍｏｌ／ｇ）と５ｍＬのＤＭＦと２
８μＬ（０．２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、
室温で放置した。１９時間後に不溶物を濾過して集め、
ＤＭＦと塩化メチレンで洗浄した。９ｍＬのピリジンと
１ｍＬの無水酢酸と１２２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のジメチ
ルアミノピリジンを加え、室温で放置した。１時間後に
不溶物を濾過して集め、ピリジンと塩化メチレンで洗浄
し、乾燥させて、目的とする標記目的化合物を得た。グ
リセリルグアニン導入量をジメトキシトリチル基で定量
したところ、４６．７μｍｏｌ／ｇであった。
（０．２１７ｍｍｏｌ）をピリジンで２回共沸して乾燥
させた後に、２ｍＬのテトラヒドロフランと５０μＬの
ピリジンに溶かし、５８ｍｇ（０．２１７ｍｍｏｌ）の
ペンタクロロフェノールと１１３ｍｇ（０．５５ｍｍｏ
ｌ）のＤＣＣを加え、氷水浴中で攪拌した。１時間後に
室温にもどし、さらに１６時間攪拌した。不溶物を濾過
して除き、溶媒を減圧下に留去し、１０ｇ（７０−２３
０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、３％メ
タノールを含む塩化メチレンで溶出することにより２３
９．４ｍｇの若干ジシクロヘキシルウレアを含む活性エ
ステル誘導体を得た。これをピリジンで２回共沸して乾
燥させた後に、１．２ｇのアミノプロピルＣＰＧ（ＣＰ
ＧＩＮＣ．；ＡＭＰ００５００Ｂ；５２１Ａ；１２０／
２００；８５．７μｍｏｌ／ｇ）と５ｍＬのＤＭＦと２
８μＬ（０．２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、
室温で放置した。１９時間後に不溶物を濾過して集め、
ＤＭＦと塩化メチレンで洗浄した。９ｍＬのピリジンと
１ｍＬの無水酢酸と１２２ｍｇ（１ｍｍｏｌ）のジメチ
ルアミノピリジンを加え、室温で放置した。１時間後に
不溶物を濾過して集め、ピリジンと塩化メチレンで洗浄
し、乾燥させて、目的とする標記目的化合物を得た。グ
リセリルグアニン導入量をジメトキシトリチル基で定量
したところ、４６．７μｍｏｌ／ｇであった。
【００８８】（１ｇ）
【００８９】
【化１１】
【００９０】ミリジェン／バイオサーチ（日本ミリポア
・リミテッド）のＣｙｃｌｏｎｅTMＰｌｕｓ ＤＮＡ／
ＲＮＡシンセサイザーに、付属する合成用試薬類と、プ
ログラムとして１５．０μｍｏｌｅアミダイトカートリ
ッジを接続した。ただしこのとき、チミジンに対応する
β−シアノエチルアミダイト溶液のかわりに、３５ｍＭ
に調製した５′−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベン
ジル）チミジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（穂戸田ら、
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ，１３，１３７５−１３９５（１９９４））のアセト
ニトリル溶液を用いた。また、シチジンに対応するβ−
シアノエチルアミダイト溶液のかわりに、３５ｍＭに調
製した（１ｄ）で得られた化合物のアセトニトリル溶液
を用いた。固相担体として５μｍｏｌ分のグリセリルグ
アニン誘導体が結合した、（１ｆ）で得られた化合物を
用い、プログラムにＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列を入
力し、最後のＴを縮合した後には酸処理を行なわない設
定のプログラムを作動させることにより、コントロール
ドポアグラス（ＣＰＧ）上に、保護されたオリゴヌクレ
オチドが構築された誘導体を得た。これを減圧下乾燥し
たのちにカラムからとり出し、１０ｍＬの濃アンモニア
水にひたして密閉し、室温で２日間反応した。ＣＰＧを
濾過により除き、１０ｍＬの水で２回洗浄した。ろ液と
洗浄液を合わせて、３０ｍＬづつのジエチルエーテルで
３回洗浄し、減圧下にアンモニアとジエチルエーテルを
除き、水溶液を約３ｍＬまで濃縮した。これを０．４５
ミクロンのミリポアフィルターで濾過した後に、逆相Ｈ
ＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−ＯＤＳ，２０×
２５０ｍｍ；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（Ｔ
ＥＡＡ），ｐＨ７；２５→５５％ ＣＨ3 ＣＮ／３０ｍ
ｉｎ，ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ；７ｍＬ／ｍｉ
ｎ；２５４ｎｍ）に、３回に分けてアプライし、１６．
９分に溶出する画分を集めた。減圧下にアセトニトリル
を留去したのちに凍結乾燥し、５０ｍＬの水にとかして
から再度凍結乾燥して、アモルファス状の標記目的化合
物を８５ｕｎｉｔｓ（Ａ260 ）得た。
・リミテッド）のＣｙｃｌｏｎｅTMＰｌｕｓ ＤＮＡ／
ＲＮＡシンセサイザーに、付属する合成用試薬類と、プ
ログラムとして１５．０μｍｏｌｅアミダイトカートリ
ッジを接続した。ただしこのとき、チミジンに対応する
β−シアノエチルアミダイト溶液のかわりに、３５ｍＭ
に調製した５′−Ｏ−（３，４−ジベンジルオキシベン
ジル）チミジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル Ｎ，
Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（穂戸田ら、
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓ，１３，１３７５−１３９５（１９９４））のアセト
ニトリル溶液を用いた。また、シチジンに対応するβ−
シアノエチルアミダイト溶液のかわりに、３５ｍＭに調
製した（１ｄ）で得られた化合物のアセトニトリル溶液
を用いた。固相担体として５μｍｏｌ分のグリセリルグ
アニン誘導体が結合した、（１ｆ）で得られた化合物を
用い、プログラムにＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列を入
力し、最後のＴを縮合した後には酸処理を行なわない設
定のプログラムを作動させることにより、コントロール
ドポアグラス（ＣＰＧ）上に、保護されたオリゴヌクレ
オチドが構築された誘導体を得た。これを減圧下乾燥し
たのちにカラムからとり出し、１０ｍＬの濃アンモニア
水にひたして密閉し、室温で２日間反応した。ＣＰＧを
濾過により除き、１０ｍＬの水で２回洗浄した。ろ液と
洗浄液を合わせて、３０ｍＬづつのジエチルエーテルで
３回洗浄し、減圧下にアンモニアとジエチルエーテルを
除き、水溶液を約３ｍＬまで濃縮した。これを０．４５
ミクロンのミリポアフィルターで濾過した後に、逆相Ｈ
ＰＬＣ（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＰＲＥＰ−ＯＤＳ，２０×
２５０ｍｍ；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（Ｔ
ＥＡＡ），ｐＨ７；２５→５５％ ＣＨ3 ＣＮ／３０ｍ
ｉｎ，ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ；７ｍＬ／ｍｉ
ｎ；２５４ｎｍ）に、３回に分けてアプライし、１６．
９分に溶出する画分を集めた。減圧下にアセトニトリル
を留去したのちに凍結乾燥し、５０ｍＬの水にとかして
から再度凍結乾燥して、アモルファス状の標記目的化合
物を８５ｕｎｉｔｓ（Ａ260 ）得た。
【００９１】ＵＶｍａｘ：２５４ｎｍ （実施例２）
【００９２】
【化１２】
【００９３】実施例１と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＡＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を１２４ｕｎｉｔｓ
（Ａ260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＡＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を１２４ｕｎｉｔｓ
（Ａ260 ）得た。
【００９４】ＵＶｍａｘ：２５５ｎｍ （実施例３）
【００９５】
【化１３】
【００９６】実施例１と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【００９７】ＵＶｍａｘ：２５３ｎｍ （実施例４）
【００９８】
【化１４】
【００９９】実施例１と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を７４ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を７４ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１００】ＵＶｍａｘ：２５３ｎｍ （実施例５）
【０１０１】
【化１５】
【０１０２】実施例１と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を１０７ｕｎｉｔｓ
（Ａ260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を１０７ｕｎｉｔｓ
（Ａ260 ）得た。
【０１０３】ＵＶｍａｘ：２５３ｎｍ （実施例６）
【０１０４】
【化１６】
【０１０５】実施例１と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＣＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を７５ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＣＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を７５ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１０６】ＵＶｍａｘ：２５３ｎｍ （実施例７）
【０１０７】
【化１７】
【０１０８】（７ａ）
【０１０９】
【化１８】
【０１１０】（Ｒ）−（−）−（２，２−ジメチル−
１，３−ジオキソラン−４−イル）メタン（和光純薬）
を用いて、実施例１（１ａ）と同様にして合成した。
１，３−ジオキソラン−４−イル）メタン（和光純薬）
を用いて、実施例１（１ａ）と同様にして合成した。
【０１１１】（７ｂ）
【０１１２】
【化１９】
【０１１３】７ａで得られた化合物を用いて、実施例１
（１ｂ）と同様にして合成した。
（１ｂ）と同様にして合成した。
【０１１４】（７ｃ）
【０１１５】
【化２０】
【０１１６】７ｂで得られた化合物を用いて、実施例１
（１ｃ）と同様にして合成した。
（１ｃ）と同様にして合成した。
【０１１７】（７ｄ）
【０１１８】
【化２１】
【０１１９】７ｃで得られた化合物を用いて、実施例１
（１ｄ）と同様にして合成した。
（１ｄ）と同様にして合成した。
【０１２０】（７ｅ）
【０１２１】
【化２２】
【０１２２】７ｃで得られた化合物を用いて、実施例１
（１ｅ）と同様にして合成した。
（１ｅ）と同様にして合成した。
【０１２３】（７ｆ）
【０１２４】
【化２３】
【０１２５】７ｅで得られた化合物を用いて、実施例１
（１ｆ）と同様にして合成した。
（１ｆ）と同様にして合成した。
【０１２６】（７ｇ）
【０１２７】
【化２４】
【０１２８】（７ｄ）で得られた化合物及び（７ｆ）で
得られた化合物を、（１ｄ）で得られた化合物及び（１
ｆ）で得られた化合物のかわりに用いて、実施例１（１
ｇ）と同様にして合成し、アモルファス状の標記目的化
合物を６４ｕｎｉｔｓ（Ａ260 ）得た。
得られた化合物を、（１ｄ）で得られた化合物及び（１
ｆ）で得られた化合物のかわりに用いて、実施例１（１
ｇ）と同様にして合成し、アモルファス状の標記目的化
合物を６４ｕｎｉｔｓ（Ａ260 ）得た。
【０１２９】ＵＶｍａｘ：２５３ｎｍ （実施例８）
【０１３０】
【化２５】
【０１３１】実施例７と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＡＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を６８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＡＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を６８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１３２】ＵＶｍａｘ：２５５ｎｍ （実施例９）
【０１３３】
【化２６】
【０１３４】実施例７と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を５４ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＧＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を５４ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１３５】ＵＶｍａｘ：２５２ｎｍ （実施例１０）
【０１３６】
【化２７】
【０１３７】実施例７と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＧＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４８ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１３８】ＵＶｍａｘ：２５２ｎｍ （実施例１１）
【０１３９】
【化２８】
【０１４０】実施例７と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４６ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＧＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を４６ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１４１】ＵＶｍａｘ：２５２ｎｍ （実施例１２）
【０１４２】
【化２９】
【０１４３】実施例７と同様にして合成した。ただし、
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＣＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を８３ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
プログラムにはＴＧＧＧＡＧＣという塩基配列のかわり
にＴＣＣＣＣＣという塩基配列を入力した。その結果、
アモルファス状の標記目的化合物を８３ｕｎｉｔｓ（Ａ
260 ）得た。
【０１４４】ＵＶｍａｘ：２５２ｎｍ （実施例１３）
【０１４５】
【化３０】
【０１４６】（１３ａ）
【０１４７】
【化３１】
【０１４８】９−（Ｒ）−（２，３−ジヒドロキシプロ
ピル）アデニン（A.Holy, Collection Czechoslov.Che
m.Commun.,40,187(1975).）４９６ｍｇ（２．３７ｍｍ
ｏｌ）をピリジンで共沸して乾燥させた後に、２５ｍＬ
のピリジンに溶解した。１．６ｍＬのトリメチルシリル
クロリドを加えて室温で３０分間攪拌した後に、１．５
ｍＬの塩化ベンゾイルを加え、室温で一夜攪拌した。反
応容器を氷水浴中で冷却しながら５ｍＬの水を加えて１
５分間攪拌した後に、５ｍＬの２９％アンモニア水を加
えて１時間攪拌した。溶媒を減圧下に留去した後に、残
渣を２５ｍＬのＨ2 Ｏに溶かし、２０ｍＬのジエチルエ
ーテルで洗浄した。洗浄液を２０ｍＬのＨ2 Ｏで抽出
し、全水層を合わせて減圧下に溶媒を留去した。残渣を
塩化メチレンでトリチュレートし、２．５４５ｇの粗結
晶を得た。これをピリジンで共沸して乾燥させた後に、
５０ｍＬのピリジンに溶かし、４，４’−ジメトキシト
リチルクロリド８１３ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を加えて
室温で１８時間攪拌した。８１３ｍｇの４，４’−ジメ
トキシトリチルクロリドを追加した後に、さらに６時間
攪拌した。１ｍＬのＨ2 Ｏを加えて反応を停止させ、２
００ｍＬのクロロホルムで希釈した後に、２００ｍＬづ
つの５％ＮａＨＣＯ3 水で２回洗浄した。有機層をＮａ
2 ＳＯ4 で乾燥した後に溶媒を減圧下留去し、残渣を１
００ｇ（７０−２３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムに
アプライし、０〜３％メタノール−塩化メチレンで溶出
することにより、９８０．３ｍｇ（６７％）の目的物を
得た。
ピル）アデニン（A.Holy, Collection Czechoslov.Che
m.Commun.,40,187(1975).）４９６ｍｇ（２．３７ｍｍ
ｏｌ）をピリジンで共沸して乾燥させた後に、２５ｍＬ
のピリジンに溶解した。１．６ｍＬのトリメチルシリル
クロリドを加えて室温で３０分間攪拌した後に、１．５
ｍＬの塩化ベンゾイルを加え、室温で一夜攪拌した。反
応容器を氷水浴中で冷却しながら５ｍＬの水を加えて１
５分間攪拌した後に、５ｍＬの２９％アンモニア水を加
えて１時間攪拌した。溶媒を減圧下に留去した後に、残
渣を２５ｍＬのＨ2 Ｏに溶かし、２０ｍＬのジエチルエ
ーテルで洗浄した。洗浄液を２０ｍＬのＨ2 Ｏで抽出
し、全水層を合わせて減圧下に溶媒を留去した。残渣を
塩化メチレンでトリチュレートし、２．５４５ｇの粗結
晶を得た。これをピリジンで共沸して乾燥させた後に、
５０ｍＬのピリジンに溶かし、４，４’−ジメトキシト
リチルクロリド８１３ｍｇ（２．４ｍｍｏｌ）を加えて
室温で１８時間攪拌した。８１３ｍｇの４，４’−ジメ
トキシトリチルクロリドを追加した後に、さらに６時間
攪拌した。１ｍＬのＨ2 Ｏを加えて反応を停止させ、２
００ｍＬのクロロホルムで希釈した後に、２００ｍＬづ
つの５％ＮａＨＣＯ3 水で２回洗浄した。有機層をＮａ
2 ＳＯ4 で乾燥した後に溶媒を減圧下留去し、残渣を１
００ｇ（７０−２３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムに
アプライし、０〜３％メタノール−塩化メチレンで溶出
することにより、９８０．３ｍｇ（６７％）の目的物を
得た。
【０１４９】1Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δ: 9.14(s,1
H); 8.74(s,1H); 8.06-6.80(m,19H); 4.52-4.15(m,3H);
3.78(s,6H); 3.25-3.12(m,2H). （１３ｂ）
H); 8.74(s,1H); 8.06-6.80(m,19H); 4.52-4.15(m,3H);
3.78(s,6H); 3.25-3.12(m,2H). （１３ｂ）
【０１５０】
【化３２】
【０１５１】（１３ａ）で得られた化合物１２３ｍｇ
（０．２ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸して乾燥させた後
に、１ｍＬのテトラヒドロフランに溶かし、ジイソプロ
ピルエチルアミン１４０μＬと２−シアノエチルＮ，Ｎ
−ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト７０μＬを
加え、室温で攪拌した。１時間後に溶媒を留去し、残渣
を５０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、５０ｍＬづつの１０
％Ｎａ2 ＣＯ3 水で２回洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥し
た。減圧下に溶媒を留去した後に、残渣を４０ｇ（７０
−２３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、
酢酸エチルで溶出することにより、１３７．６ｍｇ（８
４％）の目的物のジアステレオマーの混合物を得た。
（０．２ｍｍｏｌ）をピリジンで共沸して乾燥させた後
に、１ｍＬのテトラヒドロフランに溶かし、ジイソプロ
ピルエチルアミン１４０μＬと２−シアノエチルＮ，Ｎ
−ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト７０μＬを
加え、室温で攪拌した。１時間後に溶媒を留去し、残渣
を５０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、５０ｍＬづつの１０
％Ｎａ2 ＣＯ3 水で２回洗浄し、Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥し
た。減圧下に溶媒を留去した後に、残渣を４０ｇ（７０
−２３０ｍｅｓｈ）のシリカゲルカラムにアプライし、
酢酸エチルで溶出することにより、１３７．６ｍｇ（８
４％）の目的物のジアステレオマーの混合物を得た。
【０１５２】1Ｈ−ＮＭＲ(270MHz,CDCl3)δ:9.07,9.06
(2s,1H); 8.80,8.79(2s,1H); 8.08-6.79(m,19H); 4.63-
4.30(m,3H); 3.79(s,3H); 3.78(s,3H); 3.72-3.40(m,4
H); 3.33-3.12(m,2H); 2.51-2.36(m,2H); 1.12-0.97(m,
12H).
(2s,1H); 8.80,8.79(2s,1H); 8.08-6.79(m,19H); 4.63-
4.30(m,3H); 3.79(s,3H); 3.78(s,3H); 3.72-3.40(m,4
H); 3.33-3.12(m,2H); 2.51-2.36(m,2H); 1.12-0.97(m,
12H).
【０１５３】
（製剤例１）（ハ−ドカプセル剤） 標準二分式ハ−ドゼラチンカプセルの各々に、100 mgの
粉末状の実施例化合物１、150 mgのラクト−ス、50 mg
のセルロ−ス及び6 mgのステアリン酸マグネシウムを充
填することにより、単位カプセルを製造し、洗浄後、乾
燥する。
粉末状の実施例化合物１、150 mgのラクト−ス、50 mg
のセルロ−ス及び6 mgのステアリン酸マグネシウムを充
填することにより、単位カプセルを製造し、洗浄後、乾
燥する。
【０１５４】（製剤例２）（ソフトカプセル剤） 消化性油状物、例えば、大豆油、綿実油又はオリ−ブ油
中に入れた、実施例化合物１の混合物を調製し、正置換
ポンプでゼラチン中に注入して、100 mgの活性成分を含
有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥する。
中に入れた、実施例化合物１の混合物を調製し、正置換
ポンプでゼラチン中に注入して、100 mgの活性成分を含
有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥する。
【０１５５】（製剤例３）（錠剤） 常法に従って、100 mgの実施例化合物１、0.2 mgのコロ
イド性二酸化珪素、5mgのステアリン酸マグネシウム、2
75 mgの微結晶性セルロ−ス、11 mg のデンプン及び98.
8 mg のラクト−スを用いて製造する。
イド性二酸化珪素、5mgのステアリン酸マグネシウム、2
75 mgの微結晶性セルロ−ス、11 mg のデンプン及び98.
8 mg のラクト−スを用いて製造する。
【０１５６】尚、所望により、剤皮を塗布する。
【０１５７】（製剤例４）（注射剤） 1.5 重量% の実施例化合物１、10容量% のプロピレング
リコ−ル中で撹拌し、次いで、注射用水で一定容量にし
た後、滅菌して製造する。
リコ−ル中で撹拌し、次いで、注射用水で一定容量にし
た後、滅菌して製造する。
【０１５８】（製剤例５）（懸濁剤） 5 ml中に、100 mgの微粉化した実施例化合物１、100 mg
のナトリウムカルボキシメチルセルロ−ス、5 mgの安息
香酸ナトリウム、1.0 g のソルビト−ル溶液 (日本薬局
方) 及び0.025 mlのバニリンを含有するように製造す
る。
のナトリウムカルボキシメチルセルロ−ス、5 mgの安息
香酸ナトリウム、1.0 g のソルビト−ル溶液 (日本薬局
方) 及び0.025 mlのバニリンを含有するように製造す
る。
【０１５９】
（試験例１） 安定性試験 血液は、へパリン存在下、ＳＤ系雄性ラット腹部大動脈
より採取した。採取後、速やかに４℃、3,000 rpm 、１
５分間遠心分離して血漿を得た。得られた血漿１．４ｍ
Ｌ添加し、３７℃で４分間プレインキュベートした後、
濃度３００μｇ／ｍＬの各基質を１００μＬ添加し、３
７℃でインキュベートしながら経時的に１００μＬをサ
ンプリングした。この時、１サンプル当たりの血漿及び
基質濃度は、それぞれ９３．３％及び２０μｇ／ｍＬと
なっている。
より採取した。採取後、速やかに４℃、3,000 rpm 、１
５分間遠心分離して血漿を得た。得られた血漿１．４ｍ
Ｌ添加し、３７℃で４分間プレインキュベートした後、
濃度３００μｇ／ｍＬの各基質を１００μＬ添加し、３
７℃でインキュベートしながら経時的に１００μＬをサ
ンプリングした。この時、１サンプル当たりの血漿及び
基質濃度は、それぞれ９３．３％及び２０μｇ／ｍＬと
なっている。
【０１６０】得られたサンプル１００μＬに、ライシス
バッファー１００μＬ，等張リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．
４、ＰＢＳ）７０μＬ、２００ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８）１０μＬ、プロテイネースＫ（２５ｍｇ／ｍ
Ｌ）１０μＬ、液クロ定量のための内部標準物質（下記
化３５に示す、２００μｇ／ｍＬ）１０μＬを添加し、
６０℃、３０分間加温した。室温まで冷却した後、フェ
ノール／クロロホルム／イソアミルアルコール混液（２
５／２４／１）３００μＬで２回抽出した。さらに上清
の水層にクロロホルム３００μＬを添加し、余分なフェ
ノールを除去した。上清の水層をＨＰＬＣにて分析し
た。
バッファー１００μＬ，等張リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．
４、ＰＢＳ）７０μＬ、２００ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ８）１０μＬ、プロテイネースＫ（２５ｍｇ／ｍ
Ｌ）１０μＬ、液クロ定量のための内部標準物質（下記
化３５に示す、２００μｇ／ｍＬ）１０μＬを添加し、
６０℃、３０分間加温した。室温まで冷却した後、フェ
ノール／クロロホルム／イソアミルアルコール混液（２
５／２４／１）３００μＬで２回抽出した。さらに上清
の水層にクロロホルム３００μＬを添加し、余分なフェ
ノールを除去した。上清の水層をＨＰＬＣにて分析し
た。
【０１６１】
【化３３】
【０１６２】なお、対照化合物として、下記に示す化合
物ａ（特願平６−９７７２号）を用いた。
物ａ（特願平６−９７７２号）を用いた。
【０１６３】
【化３４】
【０１６４】ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。
【０１６５】装置： 島津ＬＣ−１０Ａ カラム：Ｗａｋｏｐａｋ−ＷＳ−ＤＮＡ（４．６ｘ１５
０ｍｍ） 流速：１ｍＬ／ｍｉｎ 検出波長：２６０ｎｍ 溶媒：０．１Ｍトリエチルアミン−酢酸塩緩衝液（ｐＨ
７）：アセトニトリル＝ ７４：２６ 感度：０．００５〜０．０１ＡＵＦＳ 注入量：１０〜２０μＬ 結果を表１に示した。
０ｍｍ） 流速：１ｍＬ／ｍｉｎ 検出波長：２６０ｎｍ 溶媒：０．１Ｍトリエチルアミン−酢酸塩緩衝液（ｐＨ
７）：アセトニトリル＝ ７４：２６ 感度：０．００５〜０．０１ＡＵＦＳ 注入量：１０〜２０μＬ 結果を表１に示した。
【０１６６】
【表１】 ─────────────────────────────────── 溶液中の残存量（０分を１００とした相対比） 実施例 ５分 ３０分 １時間 ─────────────────────────────────── ２ 92.89±1.26* 80.96±1.83 79.19±2.64 ３ 99.41±2.54 97.57±1.58 129.11±26.41 ６ 98.16±1.24 92.92±9.37 109.66±15.63 ８ 96.75±2.84 83.33±1.68 73.91±1.94 ９ 99.16±7.91 103.60±6.49 127.24±28.87 １２ 100.45±2.70 102.72±6.67 102.90±17.17 ─────────────────────────────────── 化合物ａ 52.29±3.24 5.79±1.77 2.93±1.52 ─────────────────────────────────── ＊ｎ＝３ 本発明の化合物は、血漿中での高い安定性を示した。
【０１６７】（試験例２）修飾オリゴデオキシリボヌク
レオチドの抗HIV-1 活性の測定 抗HIV-1 活性はパウエルらの方法によって測定した（R.
Pauel et al., J. Virological Methods 20, 309-321(1
988)) 。すなわち, 対数増殖期にあるＭＴ−４細胞を15
0 × gで5 分間遠心し，得られた細胞沈澱を培地にて懸
濁したのちHIV-1 (IIIB 型) を10 CCID50 の濃度で37℃
で1 時間感染させた。その後, 牛胎児血清10% を含むRP
MI-1640 培地( 以下「血清培地」と称する) で遠心し、
洗浄することによりHIV-1 感染ＭＴー４細胞を得た。
レオチドの抗HIV-1 活性の測定 抗HIV-1 活性はパウエルらの方法によって測定した（R.
Pauel et al., J. Virological Methods 20, 309-321(1
988)) 。すなわち, 対数増殖期にあるＭＴ−４細胞を15
0 × gで5 分間遠心し，得られた細胞沈澱を培地にて懸
濁したのちHIV-1 (IIIB 型) を10 CCID50 の濃度で37℃
で1 時間感染させた。その後, 牛胎児血清10% を含むRP
MI-1640 培地( 以下「血清培地」と称する) で遠心し、
洗浄することによりHIV-1 感染ＭＴー４細胞を得た。
【０１６８】HIV-1 感染MT-4細胞およびHIV-1 非感染MT
-4細胞をそれぞれ4 ×105 細胞/ mlになるように血清培
地に懸濁した。96穴プラスチックマイクロタイタープレ
ート中にあらかじめ段階希釈した検体化合物溶液( 血清
培地に溶解したもの) を各穴に100 μl づつ入れ, 次い
でこの各穴に上記細胞懸濁液を各々100 μl づつ添加
し, 5%の炭酸ガス存在下で6 日間静置培養した。
-4細胞をそれぞれ4 ×105 細胞/ mlになるように血清培
地に懸濁した。96穴プラスチックマイクロタイタープレ
ート中にあらかじめ段階希釈した検体化合物溶液( 血清
培地に溶解したもの) を各穴に100 μl づつ入れ, 次い
でこの各穴に上記細胞懸濁液を各々100 μl づつ添加
し, 5%の炭酸ガス存在下で6 日間静置培養した。
【０１６９】同様に, 検体化合物添加のHIV-1 感染MT-4
細胞および検体化合物無添加のHIV-1 非感染MT-4細胞を
培養した。
細胞および検体化合物無添加のHIV-1 非感染MT-4細胞を
培養した。
【０１７０】培養終了後，MTT(3-(4,5-dimethylthiazol
e-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)法に基づき,
生細胞数を測定し(L.M.Green et al., J. Immunol. Me
thods, 70, 257-268(1984)), HIV-1 による細胞障害活
性を求めた。検体化合物無添加のHIV-1 感染MT-4細胞の
細胞障害活性を100%とし、検体化合物無添加のHIV-1(II
IB 型) 非感染ＭＴー４細胞の細胞障害活性を０％とし
て、HIV-1 感染ＭＴー４細胞の細胞障害活性を５０％抑
制しうる検体の濃度（ＩＣ50) を求めた。また、検体化
合物の細胞毒性活性として、HIV-1 非感染ＭＴー４細胞
の増殖を５０％抑制する濃度（ＣＣ50）を求めた。これ
らの測定結果を表２に示す。
e-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)法に基づき,
生細胞数を測定し(L.M.Green et al., J. Immunol. Me
thods, 70, 257-268(1984)), HIV-1 による細胞障害活
性を求めた。検体化合物無添加のHIV-1 感染MT-4細胞の
細胞障害活性を100%とし、検体化合物無添加のHIV-1(II
IB 型) 非感染ＭＴー４細胞の細胞障害活性を０％とし
て、HIV-1 感染ＭＴー４細胞の細胞障害活性を５０％抑
制しうる検体の濃度（ＩＣ50) を求めた。また、検体化
合物の細胞毒性活性として、HIV-1 非感染ＭＴー４細胞
の増殖を５０％抑制する濃度（ＣＣ50）を求めた。これ
らの測定結果を表２に示す。
【０１７１】
【表２】 その結果、表２にあげた修飾オリゴデオキシリボヌクレ
オチドはいずれも，特に高い抗HIV-1 活性を有すること
が明らかとなった。
オチドはいずれも，特に高い抗HIV-1 活性を有すること
が明らかとなった。
【０１７２】これらの化合物はいずれも１０μｇ／ｍｌ
以下の濃度で抗HIV-1 活性を示した。
以下の濃度で抗HIV-1 活性を示した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 古川 秀比古 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 西垣 隆 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 安部 康司 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 金子 正勝 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内
Claims (4)
- 【請求項１】一般式 【化１】 ［式中、ＤＢＢは３、４−（ジベンジルオキシ）ベンジ
ル基を示し、Ｒ1 はそれぞれ独立にグアニン−９−イル
又はアデニン−９−イル基を示し、Ｒ2 はそれぞれ独立
にアデニン−９−イル、グアニン−９−イル、シトシン
−１−イル、チミン−１−イル又はウラシル−１−イル
基を示し、ｍは０又は１乃至６の整数を示し、ｎは１乃
至６の整数を示す。但し、ｍ及びｎの和は２乃至１０で
ある。］で表される化合物及びその塩。 - 【請求項２】請求項１において、Ｒ2 がグアニン−１−
イル基である化合物及びその塩。 - 【請求項３】請求項１において、ｍ及びｎの和が５であ
り、塩基配列がＴＧＧＧＧＧ又はＴＧＧＧＡＧである化
合物及びその塩。 - 【請求項４】請求項１において、ｍ及びｎの和が６であ
り、塩基配列がＴＧＧＧＡＧＧである化合物及びその
塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30102095A JPH08208687A (ja) | 1994-11-25 | 1995-11-20 | グリセリルオリゴヌクレオチド |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-291207 | 1994-11-25 | ||
| JP29120794 | 1994-11-25 | ||
| JP30102095A JPH08208687A (ja) | 1994-11-25 | 1995-11-20 | グリセリルオリゴヌクレオチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08208687A true JPH08208687A (ja) | 1996-08-13 |
Family
ID=26558446
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30102095A Pending JPH08208687A (ja) | 1994-11-25 | 1995-11-20 | グリセリルオリゴヌクレオチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08208687A (ja) |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7129244B2 (en) | 2003-09-18 | 2006-10-31 | Conforma Therapeutics Corporation | Triazolopyrimidines and related analogs as HSP90-inhibitors |
| US7176304B2 (en) | 2002-02-20 | 2007-02-13 | Mcswiggen James | RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
| US7241890B2 (en) | 2001-10-30 | 2007-07-10 | Conforma Therapeutics Corporation | Purine analogs having HSP90-inhibiting activity |
| US7544672B2 (en) | 2005-03-30 | 2009-06-09 | Conforma Therapeutics Corporation | Alkynyl pyrrolo[2,3-d]pyrimidines and related analogs as HSP90-inhibitors |
| US7858769B2 (en) | 2004-02-10 | 2010-12-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using multifunctional short interfering nucleic acid (multifunctional siNA) |
| US7858625B2 (en) | 2001-05-18 | 2010-12-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
| US7923547B2 (en) | 2002-09-05 | 2011-04-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US7989612B2 (en) | 2002-02-20 | 2011-08-02 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US8273866B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-09-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA) |
| US9260471B2 (en) | 2010-10-29 | 2016-02-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (siNA) |
| US9657294B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-05-23 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US9771588B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-09-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US9994853B2 (en) | 2001-05-18 | 2018-06-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
| US10508277B2 (en) | 2004-05-24 | 2019-12-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference |
| CN117430635A (zh) * | 2023-12-22 | 2024-01-23 | 苏州诺维康生物科技有限公司 | 一种N2-Ac-G-(S)-GNA亚磷酰胺及其制备方法 |
-
1995
- 1995-11-20 JP JP30102095A patent/JPH08208687A/ja active Pending
Cited By (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| US10000754B2 (en) | 2002-02-20 | 2018-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US10351852B2 (en) | 2002-02-20 | 2019-07-16 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
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| US10889815B2 (en) | 2002-02-20 | 2021-01-12 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US9732344B2 (en) | 2002-02-20 | 2017-08-15 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
| US10662428B2 (en) | 2002-02-20 | 2020-05-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
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| US9957517B2 (en) | 2002-02-20 | 2018-05-01 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA) |
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| US11932854B2 (en) | 2010-10-29 | 2024-03-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acids (siNA) |
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